DE2047952B2 - PROCESS FOR THE PHOTOMETRIC EVALUATION OF THE ZONES ARISING FROM THE SEPARATION OF SUBSTANCE MIXTURES IN THIN LAYERS OF LIGHT DIFFUSING MATERIAL - Google Patents
PROCESS FOR THE PHOTOMETRIC EVALUATION OF THE ZONES ARISING FROM THE SEPARATION OF SUBSTANCE MIXTURES IN THIN LAYERS OF LIGHT DIFFUSING MATERIALInfo
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Description
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auszuwertenden Kurve ergeben, welche es in man- reflektierte Meßlicht nur in einem begrenzten Raumchen Fällen schwierig oder sogar unmöglich macht, winkel erfaßtcurve to be evaluated, which is reflected in measuring light only in a limited space Makes it difficult or even impossible to capture angles
eindeutig zu entscheiden, ob es sich um einen zu Durch diese Maßnahmen erreicht man, daß sichto decide clearly whether it is one
messenden oder einen Stör-Effekt handelt die von der Trennschicht herrührenden Schwankun-measuring or a disturbance effect is the fluctuation resulting from the interface
Es ist schon vorgeschlagen worden, zur Erhöhung 5 gen der Basislinie nur noch in GrößenordnungenIt has already been proposed to increase the baseline by only orders of magnitude
der Meßempfindlichkeit vor dem Aufbringen der zu der eigenen elektronischen Instabilität des gesamtenthe measurement sensitivity before applying the to one's own electronic instability of the whole
untersuchenden Substanz die Basislinie der Absorp- Systems bewegen.the substance being examined move the baseline of the Absorp system.
tions-Orts-Kurve aufzunehmen und bei der eigentli- Die Vorrichtung zur Durchführung des neuen Verchen Auswertung die so ermittelten Werte von der fahrens ist vorteilhaft so ausgebildet, daß die Meß-Meßkurve abzuziehen. Dies ist möglich, da die io strahlung senkrecht auf die Oberfläche des auszuwer-Struktur der Trennschicht bei vorsichtigem Arbeiten tenden Objekts auftrifft, daß oberhalb dieser Obererhalten bleibt. fläche ein erster und unterhalb des Objekts ein zwei-recording location-location curve and at the actual The device for carrying out the new Verchen Evaluation of the values determined in this way from the driving is advantageously designed in such a way that the measurement measurement curve deduct. This is possible because the io radiation is perpendicular to the surface of the evaluating structure If the separating layer hits the object with careful work, that is above it remain. area a first and below the object a two-
Die Ausführung dieses Vorschlages ist jedoch um- ter photoelektrischer Empfänger angeordnet ist undThe implementation of this proposal is, however, arranged around the photoelectric receiver and
ständlich und erfordert ein sehr genaues Arbeiten. daß beide Empfänger mit einer Anordnung zur Ad-of course and requires very precise work. that both receivers with an arrangement for ad-
Es ist nun die Aufgabe der vorliegenden Erfin- 15 dition der Signale verbunden sind. Diese AnordnungIt is now the task of the present invention to define the signals are connected. This arrangement
dung, ein Verfahren zur photometrischen Auswer- steht ihrerseits zweckmäßig mit einem Schreiber indung, a method for photometric evaluation is in turn expedient with a scribe in
rung der sich bei der Auftrennung von Substanzgemi- Verbindung, welcher die resultierende Absorptions-tion of the separation of substance mixture compound, which the resulting absorption
schen in dünnen Schichten aus lichtstreuendem Ma- Orts-Kurve aufzeichnet.is recorded in thin layers from a light-scattering Ma-Ort curve.
terial ergebenden Zonen zu schaffen, das gegenüber Es ist vorteilhaft, die photoelektrischen EmpfängerTo create material resulting zones, the opposite It is advantageous to the photoelectric receiver
den üblichen Verfahren die Meßgenauigkeit und die 20 über unabhängig voneinander regelbare Verstärkerthe usual method the measurement accuracy and the 20 via independently controllable amplifiers
Nachweisgrenze wesentlich verbessert und das trotz- mit der Additions-Anordnung zu verbinden,Detection limit significantly improved and despite this to be combined with the addition arrangement,
dem eine schnelle Auswertung ermöglicht. Zweckmäßig ist es zur Erfassung des remittiertenwhich enables a quick evaluation. It is useful for recording the remitted
Das Verfahren nach der Erfindung zeichnet sich und des transmittierten Lichtes, PhotometerkugelnThe method according to the invention is characterized and the transmitted light, photometer spheres
dadurch aus, daß an der gleichen Stelle des aus- oder faseroptische Einrichtungen vorzusehen,characterized in that at the same point of the optical or fiber optic facilities are to be provided,
zuwertenden Objektes simultan die diffus reflektierte 25 Die Erfindung wird im folgenden an Hand derto be assessed object simultaneously the diffusely reflected 25 The invention is described below with reference to the
und die durchgelassene Strahlung gemessen werden F i g. 1 bis 6 der Zeichnung näher erläutert. Im ein-and the transmitted radiation are measured F i g. 1 to 6 of the drawing explained in more detail. In one
und daß zur Auswertung die so erhaltenen beiden Si- zelnen zeigtand that shows the two items thus obtained for evaluation
gnale addiert werden. Das Summensignal wird dann F i g. 1 eine durch Messung der remittierten Strah-gnals are added. The sum signal then becomes F i g. 1 a measurement of the remitted radiation
zwsckmäßig mittels eines Schreibers registriert. lung aufgenommene Absorptions-Orts-Kurve einesproperly registered by means of a scribe. treatment recorded absorption-location curve of a
Wie im Zusammenhang mit der Erfindung durch- 30 Dünnschicht-Chromatogramms sowie die zugehörigeAs in connection with the invention by thin-layer chromatogram and the associated
geführte Untersuchungen zeigen, besteht zwischen Basislinie,guided examinations show exists between baseline,
der Transmissions- und der Remissions-Basislinie auf F i g. 2 die durch Messung der transmittiertenthe transmission and remission baseline on FIG. 2 by measuring the transmitted
substanzfreiem lichtstreuendem Untergrund ein enger Strahlung aufgenommene Absorptions-Orts-KurveSubstance-free, light-scattering background a narrow radiation-recorded absorption-location curve
Zusammenhang. Eine streuungsbedingte Änderung desselben Dünnschicht-Chromatogramms sowie dieConnection. A change in the same thin-layer chromatogram due to scattering as well as the
des Remissionsgrades hat eine ebenfalls streuungsbe- 35 zugehörige Basislinie,the degree of remission has a baseline that is also related to the variance,
dingte Änderung des Transmissionsgrades zur Folge, F i g. 3 eine mit Hilfe des neuen Verfahrens aufge-conditional change in the transmittance result, F i g. 3 a recorded with the help of the new procedure
und beide Effekte sind in guter Näherung spiegel- nommene Absorptions-Orts-Kurve sowie die zugehö-and both effects are, to a good approximation, the mirrored absorption-location curve as well as the associated
bildlich zueinander. Bei der erfindungsgemäßen Ad- rige Basislinie,figuratively to each other. In the case of the vein baseline according to the invention,
dition des Remissions- und des Transmissionssignals F i g. 4 den schematischen Aufbau einer Vorrich-dition of the remission and transmission signals F i g. 4 the schematic structure of a device
kompensieren sich daher die streuungsbedingten Si- 40 tung zur Durchführung des neuen Verfahrens,therefore, the variance-related situation for carrying out the new procedure compensates each other,
gnalkomponenten, d. h. die Basislinie der Meßkurve F i g. 5 ein Ausführungsbeispiel einer Vorrichtung,gnal components, d. H. the baseline of the measurement curve F i g. 5 an embodiment of a device,
wird begradigt. bei welchem zur integralen Erfassung der Strahlungis straightened. in which for the integral detection of the radiation
Ist auf der lichtstreuenden Unterlage eine absor- Photometerkugeln vorgesehen sind,
bierende Substanz aufgetragen, so wird dadurch so- F i g. 6 ein weiteres Ausführungsbeispiel der Vorwohl
der Remissions- als auch der Transmissions- 45 richtung, bei welchem faseroptische Einrichtungen
grad vermindert. Die substanzspezifische Absorption zur Zuführung des Meßlichtes sowie zur Erfassung
beeinflußt also Remissions- und Transmissionssignal der remittierten und der transmittierten Strahlung
im gleichen Sinne, so daß durch Addition dieser Si- vorgesehen sind,
gnale der zu messende Effekt verstärkt wird. In F i g. 1 ist mit 1 eine Absorptions-Orts-KurveIf an absorber photometer sphere is provided on the light-scattering surface,
applied to the bating substance, it is thus so- F i g. 6 a further exemplary embodiment of the advance of the remission and also of the transmission direction, in which fiber-optic devices are reduced. The substance-specific absorption for the supply of the measuring light as well as for the detection thus influences the reflectance and transmission signals of the reflected and the transmitted radiation in the same sense, so that by adding these Si,
gnale the effect to be measured is amplified. In Fig. 1 is with 1 an absorption-location curve
Wie ohne weiteres zu sehen ist, bringt das neue 50 bezeichnet, die durch Registrierung der remittierten Verfahren bei der Auswertung von Dünnschicht- Strahlung bei der Auswertung eines Dünnschicht-Chromatogrammen den Vorteil mit sich, daß die Chromatogramms erhalten wurde. Wie man erkennt, streuungsbedingte, d.h. substanzunspezifische Ab- ist dem zu messenden Effekt eine in Abhängigkeit hängigkeit der Lichtstreuung vom Ort der Trenn- vom Ort an der Trennschicht unterschiedliche Lichtschicht automatisch während der Messung beseitigt 55 streuung überlagert.As can be seen without further ado, the new 50 brings referred to that by registering the remitted Procedure for the evaluation of thin-layer radiation when evaluating a thin-layer chromatogram with the advantage that the chromatogram was obtained. How to see Scatter-related, i.e. substance-unspecific, is a function of the effect to be measured Dependence of light scattering on the location of the separating layer of light that is different from the location on the separating layer automatically eliminated during the measurement 55 superimposed scatter.
wird, während das eigentliche substanzspezifische Die zur Kurve 1 gehörende Basislinie ist mit 2 be-is, while the actual substance-specific The baseline belonging to curve 1 is with 2
Meßsignal gleichzeitig verstärkt wird. zeichnet. Diese Basislinie ist sehr ungleichmäßig, undMeasurement signal is amplified at the same time. draws. This baseline is very uneven, and
Um zu erreichen, daß die streuungsbedingten Re- es macht bei der Auswertung große Schwierigkeiten,In order to ensure that the scattering-related remedy makes great difficulties in the evaluation,
missions- und Transmissionssignale sich bei der Ad- die schraffierte eingezeichnete Fläche mit genügenderMission and transmission signals are shown in the Ad- the hatched area with sufficient
dition möglichst vollständig kompensieren, ist es not- 60 Genauigkeit zu bestimmten.To compensate for the dition as completely as possible, it is necessary to determine 60 accuracy.
wendig, die Amplituden beider Signale vor der Addi- Wertet man dasselbe Dünnschicht-Chromato-agile, the amplitudes of both signals before the addi-
tion auf gleiche Höhe zu bringen. Dies geschieht vor- gramm dessen durch Remissionsmessung gewon-tion on the same level. This is done in advance of this by measuring the reflectance.
teilhaft dadurch, daß man die Empfindlichkeit eines nene Absorptions-Orts-Kurve in F i g. 1 darge-part in that one has the sensitivity of a new absorption-location curve in F i g. 1 shown
Empfängers gegenüber dem anderen herabsetzt. Im stellt ist in Transmission aus, so erhält man die in allgemeinen wird die Empfindlichkeit des Transmis- 65 F i g. 2 mit Γ bezeichnete Absorptions-Orts-Kurve. sionsempfängers herabgesetzt, da dieser die vom Ob- Die zugehörige Basislinie ist mit 2' bezeichnet,The receiver compared to the other. Im exhibits is in transmission, so you get the in in general, the sensitivity of the transmis 65 F i g. 2 absorption-location curve labeled Γ. sion receiver reduced, since this is the ob- The associated baseline is denoted by 2 ',
jekt durchgelassene Meßstrahlung nahezu vollständig Wie eine vergleichende Betrachung der F i g. 1 und erfaßt, während der Remissionsempfänger das diffus 2 zeigt, sind die auf nichtsubstanzbedingte Effekteprojected measuring radiation almost completely Like a comparative observation of the FIG. 1 and recorded while the remission receiver shows the diffuse 2, the effects are not related to the substance
zurückgehenden Basislinien 2 und 2' in etwa spiegelbildlich zueinander. Die substanzspezifische Absorption dagegen beeinflußt die Kurven 1 und 1' im gleichen Sinne.receding baselines 2 and 2 'are roughly mirror images of one another. The substance-specific absorption on the other hand, it affects curves 1 and 1 'in the same way.
Gemäß der Erfindung wird nun zur Bestimmung der Absorptions-Orts-Kurve eine Vorrichtung verwendet, wie sie schematisch in F i g. 4 dargestellt ist. Das von einer Lichtquelle 3 ausgehende Licht wird im Monochromator 4 monochromatisiert und fällt über den Umlenkspiegel 5 auf das mit 6 bezeichnete Dünnschicht-Chromatogramm. Das Meßlicht trifft unter einem Winkel von 0 ° zur Flächennormale auf die Trennschicht des Chromatogramms 6 auf. Mittels des photoelektrischen Empfängers 7 wird die diffus remittierte Strahlung gemessen, während gleichzeitig der Empfängers die transmittierte Strahlung mißt. Das vom Empfänger? erzeugte Signal wird im Verstärker 9 verstärkt und einer Addierstufe 11 zugeführt. Dieser wird auch das Signal des Empfängers 8 nach Verstärkung im Verstärker 10 zugeführt. Die beiden Verstärker 9 und 10 sind vorzugsweise unabhängig voneinander regelbar, so daß die Amplituden der substanzunspezifischen Signale auf gleiche Höhe gebracht werden können. Das in der Anordnung 11 erzeugte Additionssignal gelangt zum Schreiber 12.According to the invention, a device is now used to determine the absorption-location curve, as shown schematically in FIG. 4 is shown. The light emanating from a light source 3 is monochromatized in the monochromator 4 and falls over the deflecting mirror 5 onto the one labeled 6 Thin-layer chromatogram. The measuring light hits at an angle of 0 ° to the surface normal the separating layer of the chromatogram 6. By means of the photoelectric receiver 7, the becomes diffuse remitted radiation measured while the receiver measures the transmitted radiation at the same time. That from the recipient? The generated signal is amplified in the amplifier 9 and fed to an adder 11. This also becomes the signal of the receiver 8 supplied after amplification in amplifier 10. The two amplifiers 9 and 10 are preferably independent controllable from one another, so that the amplitudes of the substance-unspecific signals are at the same level can be brought. The addition signal generated in the arrangement 11 reaches the writer 12.
Die vom Schreiber 12 registrierte Absorptions-Orts-Kurve 13 ist in Fig.3 dargestellt. Die zu dieser Kurve gehörende Basislinie ist ebenfalls in F i g. 3 dargestellt und ist dort mit 14 bezeichnet. Wie man erkennt, ist jetzt die Basislinie so weit eingeebnet, daß die von Ungleichmäßigkeiten der Trennschicht herrührenden Schwankungen nur noch in der Größenordnung der eigenen elektronischen Instabilität des gesamten Systems liegen. Die Auswertung der Kurve 13 ist jetzt verhältnismäßig einfach und kann vor allem mit großer Genauigkeit vorgenommen werden. The absorption location curve 13 registered by the recorder 12 is shown in FIG. The to this The baseline belonging to the curve is also shown in FIG. 3 and is denoted by 14 there. How one recognizes, the baseline is now leveled so far that that of irregularities in the separating layer resulting fluctuations only in the order of magnitude of one's own electronic instability of the entire system. The evaluation of curve 13 is now relatively simple and can above all, be made with great accuracy.
Wie ohne weiteres einzusehen ist, läßt sich mit J neuen venalsrcn audi die riäCuVtcisgreiizc vci-As can be seen without further ado, the riäCuVtcisgreiizc vci-
bessern, da die Ausschläge der Meßkurve, soweit sie für eine Auswertung in Betracht kommen, nur noch auf substanzspezifische Effekte zurückzuführen sind. Bei dem in F i g. 5 dargestellten Ausführungsbeispiel ist oberhalb der Chromatogrammplatte 6 eine Photometerkugel 15 angeordnet, welche eine öffnung 16 zum Durchtritt der Meßstrahlung 17 enthält. Die von der Trennschicht der Platte 6 diffus reflektierte Strahlung gelangt gegebenenfalls nach mehrfacher Reflexion an der Photometerkugel 15 zum photoelektrischen Empfänger 18. Unterhalb der Platte 6 ist eine weitere Photometerkugel 19 angeordnet, welche den photoelektrischen Empfänger 20 enthält. Die durch die Trennschicht der Chromatogrammplatte 6 tretende Strahlung gelangt gegebenenfallsbetter, since the deflections of the measurement curve, as far as they come into consideration for an evaluation, only can be attributed to substance-specific effects. In the case of the FIG. 5 illustrated embodiment a photometer sphere 15 is arranged above the chromatogram plate 6 and has an opening 16 for the passage of the measuring radiation 17 contains. The diffusely reflected from the separating layer of the plate 6 If necessary, after multiple reflections at the photometer sphere 15, radiation arrives at the photoelectric Receiver 18. Below the plate 6, another photometer sphere 19 is arranged, which contains the photoelectric receiver 20. The through the separating layer of the chromatogram plate 6 penetrating radiation may get there
ίο nach mehrfacher Reflexion an der Photometerkugel 19 zum Empfänger 20.ίο after multiple reflections on the photometer sphere 19 to recipient 20.
Bei dem in F i g. 5 gezeigten Ausführungsbeispiel gelingt es sowohl die remittierte als auch die transmittierte Strahlung weitgehend integral zu erfassen.In the case of the FIG. The embodiment shown in FIG. 5 succeeds in both the remitted and the transmitted To capture radiation largely integrally.
Dadurch wird die Meßgenauigkeit gegenüber einer einfachen Vorrichtung noch erhöht.This increases the accuracy of measurement compared to a simple device.
In Fig. 6 ist mit 6 wiederum eine Chromatogrammplatte bezeichnet. Die Meßstrahlung 17 wird über ein Glasfaserbündel 21 zu der auszuwertenden Stelle der Platte 6 geleitet. Das Bündel 21 ist an dieser Stelle geteilt, und das Teilbündel 21' leitet das diffus remittierte Licht zu der mit 22 bezeichneten photoelektrischen Zelle. Unterhalb der Auftreffstelle des Meßlichtes 17 ist ein weiteres Glasfaserbündel 23 anas geordnet, welches die transmittierte Strahlung erfaßi und zum photoelektrischen Empfänger 24 leitet. Es ist auch möglich, die hier dargestellte Vorrichtung so abzuwandeln, daß nur meßseitig Glasfaserbündel zur Lichtleitung vorgesehen sind.In Fig. 6, 6 is again a chromatogram plate designated. The measuring radiation 17 is to be evaluated via a glass fiber bundle 21 Place of the plate 6 passed. The bundle 21 is divided at this point, and the partial bundle 21 'conducts this diffusely remitted light to the photoelectric cell labeled 22. Below the point of impact of the Measuring light 17, another glass fiber bundle 23 is arranged anas, which detects the transmitted radiation and to the photoelectric receiver 24. It is also possible to use the device shown here to modify that only on the measuring side glass fiber bundles are provided for light guidance.
Bei dem in Fig.4 dargestellten Ausführungsbeispiel ist es auch möglich, auf die beiden Verstärker 9 und 10 zu verzichten. In diesem Fall wird die Empfindlichkeit des Transmissionsempfängers 8 so weit herabgesetzt, daß die von den beiden Empfängern 7 und 8 gelieferten substanzunspezifischen Signale gleiche Amplituden aufweisen. Die Verstärkung der Signale kann in diesem Fall nach erfolgter Addition vorgenommen werden.In the embodiment shown in Figure 4 it is also possible to do without the two amplifiers 9 and 10. In this case, the sensitivity of the transmission receiver 8 reduced so far that the two receivers 7 and 8 non-substance-specific signals supplied have the same amplitudes. The reinforcement of the In this case, signals can be made after addition.
Bei dciVi neuen Verfahren ergeben sich Eichkurven, die zumindest im Bereich geringer Substanzmengen nahezu linear sind. Das neue Verfahren findet deshalb besonders zweckmäßig Anwendung zur Auswertung von Dünnschicht-Chromatogrammen, bei denen nur sehr geringe Substanzmengen zur Verfiigung stehen.With dciVi new procedures, calibration curves result, which are almost linear, at least in the range of small amounts of substance. The new process takes place therefore particularly useful for evaluating thin-layer chromatograms to which only very small amounts of substance are available.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen1 sheet of drawings
Claims (7)
fläche des auszuwertenden Objektes (6) auftrifft, Es üt auch bekannt, Dünnschicht-Chromatodaß oberhalb dieser Oberfläche ein erster (7) und 25 gramme direkt auszuwerten. Dazu mißt man die bei unterhalb des Objektes ein zweiter photoelektri- Abtastung des Chromatogramms mit einem Lichtscher Empfänger (8) angeordnet ist und daß bündel konstanter Intensität auftretende unterschiedbeide Empfänger mit einer Anordnung (11) zur liehe Absorption des Lichtes oder bei fluoreszieren-Addition der Signale verbunden sind. den Substanzen die Emission der Substanzzone.4. Apparatus for carrying out the ve- hicle to be determined. This evaluation method is quite rens according to claim 1, characterized in that it is cumbersome and not always to be used, since the measurement radiation perpendicular to the upper recovery loss cannot be avoided.
surface of the object to be evaluated (6) hits, it is also known to evaluate thin-layer chromatodass directly above this surface a first (7) and 25 grams. To do this, one measures the under the object a second photoelectri- scanning of the chromatogram with a light shear receiver (8) and that bundles of constant intensity occurring different two receivers with an arrangement (11) for the absorption of the light or fluorescent addition of the signals are connected. the substances the emission of the substance zone.
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