DE2033600B2 - L-pyroglutamyl-l-histidyl-l-prolinamid-derivate sowie verfahren zu deren herstellung - Google Patents

Description

Ac—NH- CH-COOH
CH₂
CH, (1)

CO

NHR₄

in der R₄ Wasserstoff, den 4,4'-Dimethoxybenzhydrylrest (Mbh) oder den 2,4-Dimethoxybenzyl-, 2,4,6-Trimethoxybenzyl- oder Xanthylrest und Ac den tert.-Butyloxycarbonyl-, den Benzyloxycarbonyl-. den Adamantyloxycarbonyl- oder den Iso-

40 bornyloxycarbony'rest bedeutet, nach den in der Peptidchemie üblichen Methoden mit der Verbindung der Formel II

NH,-CH-CO —N

CH₁ I c—

CH

-N

Il

CH

CH₁-CH₁

CH-CH₂

CO —NH-Mbh

N
H

oder

b) die Verbindung der Formel UI. in der Ac die obengenannte Bedeutung hat,

Ac —NH-CH-CO —NH- CH- COOH

ί j

CH₁ CH₂

I " I

CH₂ C N

I I! !!

CO CH CH

NH-Mbh

N
H

nach den in der Peptidchemie üblichen Methoden mit L-Prulinamid oder L-Prolin-4.4'-dimethoxy benzhydrylamid umsetzt und die erhaltenen Verbindungen der Formel IV

CH₂-CH₂

Ac —NH-CH-CO —NH-CH-CO —N |

I I \ I

CH₁ CH₁ CH-CH₂

I " i " I

CH₂ C N CO-NH-R₅

CO CH

NH-R₄ N

(IV)

Il

CH

in der R₅ die Bedeutung H oder Mbh hat. wobei jedoch R₄ und R^ nicht gleichzeitig Wasserstoff bedeuten können, mit anisol- oder phenolhaltigev Trifiuoressigsäure am Rückfluß erhitzt und gegebenenfalls (bei Ac = Bcnzyloxycarbonylrestl die erhaltenen Verbindungen vor der Behandlung mit Trifhiorcssiusäure Anisol katalytisch hydriert.

Peptide der Pyroglutaminsäure sind oft schwer in i-im-r l-'orm zu erhalten. Das trifft besonders für das L- Pyroglulamyl-L-histidyl-L-prolin-amid zu. das nach Biochem. und Biophys. Res. Cmnmun. 37. 705 (1969» mit dem Thyreotropin Releasing Factor (TRF) identisch ist. Die Synthese dieses Tripcptidamids nach gebräuchlichen Methoden der Peptidchemie (s. HeIv (him. Acta 53. 63 [ !97O]) stößt auf Schwierigkeiten, weil alle Zwischenprodukte, ausgehend von Prolinamid und Pyroglutaminsäure, wasserlöslich und deshalb schwer zu handhaben und zu reinigen sind.

Fs wurde nun überraschenderweise gefunden, daß sich Pyroglutamylpeptide aus Glutaminpeptiden beim Behandeln mit kocher.der Trifluoressiiisaure in sein

•Uten Ausbtuten bilden. Blockiert man zuvor die jvmidgruppen des Glutamins und/oder des Prolinamids^Dmit Schutzgruppen, die wie z. B. der 4,4'-Dimethoxybenzhydrylrest, der 2,4-Dimethoxybenzyl-, 2,4,6-Tnmethoxybenzyl- oder Xanthylrest durch Tnl'uoressigsäure leicht abspaitbar sind, so kommt man tu schwer wasserlöslichen und zum Teil sogar essigesterlöslichen Zwischenprodukten, die sich gut reinigen lassen.

Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Herstellung von L-Pyroglutamyl-L-histidylt-prolin-amid. das dadurch gekennzeichnet ist, daß man entweder

a) eine Verbindung der Formel I

Ac —NH-CH-COOH

CH₂

CH₂ (Ii

CO

NHR₄

in der R Wasserstoff, den 4,4'-Dimethoxybenzhydrylrest (Mbh) oder den 2,4-Dimethoxybenzyl-. 2,4,6-Tri-(nethoxybenzyl- oder Xanthylrest und Ac den tert.-Butyloxycarbonyl-, den Benzyloxycarbonyl-. den Adamantyloxycarbonyi- oder den Isobornyloxycarbonylrcst bedeutet, nach den in der Peptidchemie üblichen Methoden mit der Verbindung der Formel II
CH₂-CH₂

NH,-CH-CO —N

CH,

C-

CH

-N
CH

CH-CH₂

CO —NH-Mbh

N
H
oder

b) die Verbindung der Formel III, in der Ac die obengenannte Bedeutung hat,

Ac—NH-CH — CO —NH-CH — COOH

CH2	CH, I	N H	-N	llll
CH,	ι		H CH
CO ι
NH-Mbh	CH
\

nach den in der Peptidchemie üblichen Methoden mit L-Prolinamid oder L-Prolin-4,4'-dimethoxybenzhvdrylamid umsetzt und die erhaltenen Verbindungen der Formel IV

	-■ co	-NH-CH CH,	-co —	-N	CH	-CH2
Ac —NH-CH i CH, j		! c — Il		CH	n' \ XCH	— C
CH, j		I! CH			CO	:h2
CO I	-R4		N H		-NH-R5
NH

uv

in der R₄ die Bedeutung H oder Mbh hat. wobei jedoch R₄ und R₅ nicht gleichzeitig Wasserstoff bedeuten können, mit anisol- oder phenolhaltiger Trifluorcssigsäure am Rückfluß erhitzt und gegebenenfalls • bei Ac = Benzyloxycarbonylrest) die erhaltenen Verbindungen vor der Behandlung mit Trifluorcssigsäurc Anisol katalytisch hydriert.

Das gemäß der L rfindung hergestellte L-Pyroglutamyl-L-histid\i-piolinamid ist ohne weitere Reinigung ehroniaiographiseh rein und besitzt hohe TRF-Aktivitiit.

Das \'erl'ahren /ur Herstellung von L.-P\ioglulamylt-histidyl-l.-prolinamid ist besonders vorteilhaft, da Stets schwer wasserlösliche Zwischenprodukte enl-Itehen. die die Isolierung und Reinigung erheblich erleichtern.

Als Zwischenprodukt für die Verfahrensweise nach Ii ist von besonderer Bedeutung das l-IIistid\l~ L-piolin-4.4'-diniethoxybcn/hvdrylanii(l der Formel II. das durch katalylische Hydrierung aus dem tut /u reinigenden Ben/yloxycarbonyl-L-hislidyl-L-prolin-4,4'-dimethoxybcnzhydrylamid herstellbar ist. Diese Verbindung kann man mit den L-Glutaniinderivaten der allgemeinen Formel I zu den Tripcptidderivaten der allgemeinen Formel IV (R₄. R₅ = Mbh oder R₄ = H. R₅ = Mbh) umsetzen. Besonders günstig ist die Verwendung von Derivaten der allgemeinen Formel I. in der R den Mbh-Rest bedeutet, da bei diesen durch den Schutz der Amidfunktion auch beliebige andere Peptidsynthesemethoden. beispielsweise die Anhydrid- oder Inaminmethode oder die Synthese mit Woodward« Reagens K. \etwendet weiden können, ohne daß. wie es bei aniidungeschüt/tcn Cilutamitiderivaten oft der Fall ist. die Amidgruppe /in (yanogruppe dehydratisieit wird oder daß 1-Amino-glularimid-dcrivatc entstehen.

N¹ - Ben/yloxycarhonyl - N' - 4.4' - dimethoxyben/-hydryl-I. -glutamin wird /.B. nach Proc. ¹Mh ί mop. Peptide S\mp.. North Holland Publishing Comp.. Amderslam (l%8). Seite S'). durch I ^;msel/en von Men/yloxycarbony 11. -glutamin 11111 -l.4'-l)imetho\\- ben/hvdrol in F'isessiu unter 11,S')_rKaial\se her-

gestellt. Spaltet man von dieser Verbindung die Benzyloxycarbonylgruppe hydrogenolytisch ab und acyliert das Reaktionsprodukt mit tert.-Butyloxycarbonylazid, Adamantyloxycarbonylchlorid oder lsobornyloxycarbonylchlorid, so erhält man weitere Acyl-derivate der allgemeiner. Formel I (R₄ = Mbh).

Bei der Umsetzung von Substanzen der allgemeinen Formel I (R₄ = h] mit L-Histidyl-L-prolin-4.4'-dimethoxybenzhydryiamid zur Synthese dei Verbindungen oer allgemeinen Formel IV (R₄ = H: R₅ = Mbh) setzt man diese vorteilhaft in Form ihrer aktivierten Ester, wie z. B. p-Nitrophenylester. ein. Auch mit Woodwards Reagens K oder mit Dicyclohexylcarbodiimid in Anwesenheit von 1-Hydroxybenzotriazol (Chem. Ber. 103 [1970], Seite 788) oder 3-Hydroxy-4-oxo-3.4-dihydro-l,2,3-benzotriazin lassen sich die Substanzen der allgemeinen Formel I (R₄ = H) mit L-Histidyl-L-prolin-4.4'-dimethoxybenzhydrylamid ru Verbindungen der allgemeinen Formel JV(R₄ = H: R₅ = Mbh) umsetzen. Als Lösungsmittel dienen bevorzugt Dimethylformamid und Dimethylacetamid.

Bei dem Weg b) zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel IV werden die Verbindungen der allgemeinen Formel III eingesetzt. Das in Wasser und organischen Lösungsmitteln schwer lösliche Zwitterion NP - Benzyloxycarbonyl - N' - 4,4' - dimelhoxyben/hydryl-L-glutaminyl-L-histidin wird durch Verseifen des entsprechenden Methylesters hergestellt. Substanzen der allgemeinen Formel Hl werden mit L-Prolinamid zu Verbindungen der alleemeinen Im-■nclIV (R₄ = Mbh; R₅ = H). mit L->rolin-4,4'-diinethoxybenzhydrylamid zu Verbindungen der For-HeI IV, in der R, und R₂ Mbh bedeuten, umgesetzt. Die Peptidknüpfung erfolgt mit Hilfe von Dicyclohexylcarbodiimid in Anwesenheit von 1-Hydroxybenzotriazol. N-Hydroxysuccinimid oder 3-Hydroxy-4-oxo-3.4-dihydro-1.2.3-benzotriazin. Die Kondensationsreaktionen beginnt man vorteilhaft bei - 10 bis 0 C und Rihrt sie bei Raumtemperatur zu Ende. Als Lösungsmittel dienen wiederum bevorzugt Dimethylformamid und Dimethylacetamid.

Zur Abspaltung der Schutzgruppen und gleichzeitiger Cyclisierung des Glutaminylrcstes kocht man die Verbindungen der allgemeinen Formel IV 30 bis 9" Minuten in Trifluorcssigsüure, die etwa 10% Anisol CKJer Phenol enthält. Man dampft sodann im Vakuum lur Trockne ein und filtriert /ur Beseitigung anhaftender Trifluoressigsaurc über einen basischen Ionenaustauscher, wie z. B. Amberlite IR-45. 1RA-400 oder Serdolit blau Das Filtral wird im Vakuum eingeengt oder lyophyiisicrt.

Das nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellte L-Pyroglutamyl-L-histidyl-L-prolinamid ist fein und dient in der Medizin zur Hypophysen-Funktionsprüfung und zur Behandlung von Hypothyreoscn.

Beispiele

I.-Pyroglulamyl-L-histidji-l.-prolin-amid (IV)
nach Weg b):

1. Aus Z Gln(Mbh) His- Pro NH₂
IIV. R₁ = Mbh; R< = H; Z = Benzyloxycarbonyl)

U)Z (iln(Mbh) His

16.5g Z GIn(MHh! OH (I. R = Mbh). 7.85 g H His OMe 2 HCI. «.Kg I-Hydroxybenzotriazol Und 9.0 ml Triethylamin werden in 220 ml ( hloroform «elöst. Bei 0 C gibt man 7.2 g Dicyclohexylcarbodiimid in 12 ml Chloroform zu und rührt noch 3 Stunden bei Raumtemperatur. Man destilliert dann ungeachtet des Niederschlags das Chloroform ab und nimmt den Rückstand in 60 ml warmem Dimethylformamid auf. Nun filtriert man vom umgelösten Dicyclohexylharnstoff ab und gießt die Lösung J_n 400 ml Wasser ein. Der gallertige Niederschlag wird abgesaugt, mit Wasser und Äther gewaschen und an der" Luff getrocknet. Ausbeute: 21.3 g.

b) Z —GlnlMbh)—His —OH (IH)

Man löst 20.5g Z—Gln(Mbh)—-His —OMe in einem Gemisch aus JO ml Methanoi. 65 ml Wasser und 160 ml Diox.ir· und verseift bei pH 12.7 unter Zutropfen von 1 n-NaOH und pH-Kontrolle im Autotitralor. Verbrauch 45,2 ml 1 n-NaOH. Nun versetzt man mit 45.2 ml 1 ;.-HCl. engt im Vakuum auf ein kleines Volumen ein und versetzt mit reichlich Wasser. Der Niederschlag wird zweimal mit Äthanol ausgekocht. Ausbeute: 11.5g. Schmelzpunkt 186 his 189V.

c) Z —Gln(Mbh)-- His- Pro NII-iIVi
Zu einer Lösung von 96.5 g

Z GlnlMbh)- His OH

in 1 Liier Dimethylformamid gibt man 22.6 g H-- Pro — NH₂ ■ HCl,40.5 g l-Hydroxy-benzotriazoi. 19,2 ml N-Äthylmorpholin und bei 0 C eine kalte Lösunii von 31 g Dicyclohexylcarbodiimid in 150 ml Dimethylformamid. Man läßt 1 Stunde bei 0 C und über Nacht bei Raumtemperatur rühren. Der ausgefallene Niederschlag wird anderntags abgesaugt und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in 1,5 Liter F.ssigcster, dem wenig Wasser und Alkohol zugesetzt wurde, gelöst und mn gesättigte'. Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen. über NaSO₄ wird getrocknet, und im Vakuum wird die Fssigestcrlösung eingeengt. Der Rückstand wird mit Äther verrieben und abgesaugt. Rohausbeute: Ή.2 g Die Rohausheute wurde zur Reiniguni: zweimal mit Fsvücm.t ausgekocht. Ausbeute: "¹^;'

C„] ' 23.1 u -- 1. in Wpr."·· l^;^-,_:.::::;■,..

dt L-Pyroglulamyl-i..-hisl^;dyl-!.-p!-oli:i-.imid

51,8g Z - GlnlMbh) His Pro NII- weiden in 52OmI 90proz. Essigsäure gelöst und mil l\i-kaialv- -^ator 3 Stunden hydriert. Der Katahsatri wnd abgesaugt und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mehrmals mit Äther uTiichen und in 5(X) ml Trifiuoiessigsäurc Anisol (9: 1) 90 Minuten am Rückfluß gekocht Die TrifhioresMiisiiun· wird dim Vakuum abdesliliicrt. Der Rückstand wn·: nut Äther verrieben und abgesaugt. Die Substanz «: i in 120ml Wasser gelost und über eine Säule \on -U- 'ml Amberlite IR-45 gegeben. Mit Wasser wiul elr .·π Das F.lual wird auf ein kleines Volumen em.üce.i'.-i. (mit wenig Aktivkohle erwärmt, über ein klaiM.huhtfilter abgesaiiiil und lyophilisiert. Ausbeule: !7.Ot; (67%).

j'il, ■= --63 (c ■ I. in Wasser).

2. Aus 7.-CiIn(MbIi) His Pro Nil Mbh (IV. R₄. R₅ = Mbh)

nach Weg a) und b|:
al Z- Pro NH Mbh

Zu einer Lösung von 25 g (0.1 Moll Z - Pro NH₂ und 24 g(0,l Mol)4.4'-Dimcthoxybcnzhydrol in 200ml Eisessig gibt man 1 ml konzentrierte H₂SO₄ und läßt 2 Tage bei Raumtemperatur stehen. Mit 800 ml Wasser wird ein öl ausgefällt, das bald kristallisiert. Der Niederschlag wird abgesaugt, mit Wasser gewaschen und in Essigester gelost. Die F.ssigcsterlösung wird mit NaHCOj-Lösung und Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mit Äther verrieben und abgesaugt. Ausbeule: 38,1 g (80%). Schmelzpunkt 12? bis 126 C. Dünnschichtchromatographisch konnte noch wenig Z—Pro — NH₂ nachgewiesen werden. Zur Reinigung wird aus Äthanol Wasser gefällt. Ausbeute: 36.65^(77%). Schmelzpunkt 119 -122 C.

[„].. = -S,l ■ (c = 1. Dimethylacetamid).

C_2HH,,,N₂O₅ (474.6):

Berechnet . . . C 7O.S8. H 6.34. N 5.92:
gefunden .... C 70.8. H 6.1. N 5.9.

b| H

⁵ro NH--Mbh

Durch die Lösung von 29.2 g (61.6 mMol) Z--Pro— NH —Mbh in 200 ml Methanol, der man etwas Pd(OH)₂ BaSO₄-Kalalysator zugesetzt hat. leitet man Wasserstoff, wobei durch Zutropfen von 1-n methanolischem Chlorwasserstoff mit Hilfe eines Autolitrators pH 4.5 gehalten wird. Nach der Hydrierung wird über ein Kicselgelfilter abgesaugt, das Filtrat eingeengt und der Rückstand /wischen 60 ml 2 n-Sodalösung und 150 ml Essigesler verteilt. Die F.ssigcsterlösung wird über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand kristallisiert beim Verreiben mit Petrolathcr. Ausbeute: 18.8 g (90%), Schmelzpunkt 93 98 C.

[„] = -30.7 lc-= I. Dimethylacetamid).

Qf₁H₂₄N₂O, (340.4):

Berechnet ... C 70.57. H 7.10. N 8.23;
gefunden .... C" 70.0. H 7,0. N 8.6.

O Z—His—Pro—NH-Mbh(ll)

Zu einer auf - 5 C abgekühlten Lösung von 13. (45 mMol) Z — His — NHNH₂ in 110 mil n-HCl gibt man 75 ml Essigester und läßt unter Rühren eine eiskalte Lösung von 3,15 g NaNO₂ in wenig V/asser zutropfen. Nach 5 Minuten gibt man eine auf 0 C abgekühlte gesättigte Sodalösung zu. bis die Reaktionsmischung alkalisch reagiert. Im einem vorgekühlten Scheidetrichter wird die Essigesterphase abgetrennt und die wäßrige Phase noch einmal mit kaltem Essigester extrahiert. Die vereinigten Essigesterphasen werden bei -5 C über Natriumsulfat getrocknet und bei -OC mit 6,8g (2OmMoI) H— Pro—NH-Mbh versetzt. Man läßt über Nacht im Eisschrank stehen und fällt anderntags mit Petroläther. Das Lösungsmittelgemisch wird von der schmierig ausfallenden Substanz abdekantiert. Mit Äther wird zu einer amorphen Substanz verrieben. Zur Reinigung wird die Substanz in Tetrahydrofuran über etwa 40 g basisches Al₂O, (Woe Im, Aktivstufe 1) Chromatographien. Ausbeute: 10.5 g (86%). [κ]· -= -31.6 (c- = 1. Dimethvlacetamid).

C₁₄H^N₅O₁,

Berechnet
uefunden .

H₂O (629.7):

. C64.X8, H 6.25. N 11,12: . C" 65.0. H 6.3. N 11.2.

d) Ζ —Gln(Mhh)—His—Pro- NH-Mbh (IV. R₄, R₅ = Mbh)

nach Weg a):

is «) Durch die Lösuni: von 6.30 u (10 mMol) Z—His—Pro —NH-Mbh · IH₂O (11) in 100 ml Methanol, der man etwas Pd(OH₂) BaS0₄-Katalysator zugesetzt hat, leitet man Wasserstoff, wobei durch Zutropfen von 1-n methanolischem Chlorwasserstoff mit Hilfe eines Autotitrators pH 4.5 gehalten wird. Nach beendeter Hydrierung waren 12,7 ml 1-n methanolischer Chlorwasserstoff aufgenommen worden. Der Katalysator wird abgesaugt und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wird in 20 ml Dimethylform-

:s amid gelöst. Dazu gibt man 1,63 ml N-Äthylmorpholin (1.27 mMol), 2.7 u (20 mMol) 1-Hydroxybenzotria/ol und 5.05 g (10 mMol) Z-GIn(MbIi)-OH (I. R = Mbh). Man kühlt auf 0 C und gibt dann eine Lösung von 2.1 g DCC in 5 ml Dimethylformamid /u.

läßt 1 Stunde bei 0 C und 1 Stunde bei Raumtemperatur rühren, saugt den gebildeten Niederschlag ab und engt das Filtrat ein. Der Rückstand wird zwischen Essigester und 2 n-Sodalösung \ erteilt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingeengt. Der Rückstand

.'5 wird mil Äther verrieben und abgesaugt. Es entsteht eine amorphe Substanz. Ausbeute: H.25 g (87%|. Zur Reinigung wird in Tetrahydrofuran über etwa 25 g basisches Al₂O, (Woe Im. Aktivsiufe 1) Chromatographien. Ausbeule: 6.35 g (67%).

■40 [,ι). = -21.4 (c- = 1. Dimethylacetamid).

C₅₃H₅₇N-O₁,, ■
Berechnet ..
uefunden . . .

H₂O (970.1):

C 65.60. H 6.13. N 10.12:

C 66.1. H 6.3. N 10.0.

nach Wee b):

ti] Zu einer Lösung von 3.4 a (10 mMol H—Pro —NH -Mbh und 2.7g (2OmMoI) 1-Hy-

so droxybenzotriazol in 40 ml Dimethylformamid siibi man6.45g(10mMol)Z—Gln(Mbh)— His— OH(IU und bei 0 C eine kalte Lösung von 2.2 g DDC ir Dimethylformamid. Man läßt 1 Stunde bei 0 C rühren. Es bildet sich dabei ein feiner gallertige

ss Niederschlag, der sich auf erneute Zugabe von ca 20 ml Dimethylformamid bei Raumtemperatur inner halb einer Stunde wieder löst. Vom Unlöslichen wir« filtriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt. De Rückstand wird in Essigester aufgenommen, und di Essigesterlösung zweimal mit 2 n-Sodalösung uni einmal mit gesättigter NaCl-Lösung ausgeschüttet mit NaSO₄ getrocknet und eingeengt. Dc Rückstan wird mit Äther verrieben. Es entsteht η 9 g eine amorphen Substanz (94.5%). Zur Reinigung wird i

f'5 Tetrahydrofuran über basisches Al₂O, (Wocln Aktivstufe 1) chromatocraphiert. Ausbeute: 7.4 (78%).

Γ-Ί = -22.0 (c = 1. Dimethylacctamidl.

609 542/-!

Ο L-Py rogluia my I-L-hi st idyl-L-Prolinamid
2.04 μ (2,1 niMol)

Z Gln(Mbh) His I'm Nil Mbh

werden mil ImI Anisol 1.5 2 Stunden in Html Trifluorcssigsäure am Rückfluß gekocht. Anschließend wird eingeengt und der Rückstand mit Äther verrieben und abgesaugt. Die etwas hygroskopische Substanz wird in Wasser gelöst. Die wäßrige Lösung wird mit wenig Aktivkohle geklärt, über einen basischen Austauscher (/. B. Serdolit blaul geschickt und gefriergetrocknet. Ausbeute: 6X3 mg (SH"< >) amorphe Substanz.

[-<]. = -58.5 ic - 1. H₂Ol.

C₁₁₁H₂₂N₁₁O₄ ■ 1 H₂O (3X0.41:

Berechnet ... C 50.5. H 6.35. N 22.1:
gefunden C 50.0. H 6.0. N 21.S.

3. Aus Z-GIn- His Pro NH
(IV. R₄ = H: R₅ = Mbh ι

nach Weg al:

Mbh

al Z Gin His Pro-NH -Mbh

Durch die Lösunu von 6.30 ti (IO mMol)

Z-His- Pro NH Mbh - IH₂O (III in 100 ml

Methanol, der man etwas Pd(OH₂I BaSO₄-Kalalysator zugesetzt hat. leitet man Wasserstoff, wobei durch Zulropfen "on 0.93-n methanolischem Chlorwasser- _w stoff mit Hilfe eines Autotitrators pll 4.0 gehalten wird. Nach beendeter Hydrierung waren 17 ml 0.93-n methanolischer Chlorwasserstoff aufgenommen worden. Der Katalysator wird abgesaugt und das Filtral eingeengt. Der Rückstand wird in 30 ml Dimethyl- -,-, formamid gelöst. Dazu gibt man 2.04 ml (15.SmMoIi N-Äthylmorpholin. 2.7 g (20 mMol) l-Hydroxybenzotriazofund 2.Sg(IOmMoIiZ Gin — OH(LR = Hl. Man küh t auf 0 C und gibt dann eine Lösung von 2.1g DDC in 5 ml Dimethylformamid zu. läßt ₄c> 1 Stunde bei 0 C und 1 Stunde bei Raumtemperatur rühren, saugt den gebildeten Niederschlag ab und engt das Filtrat ein. Der Rückstand wird zwischen Fssigester. dem etwas Dimethylformamid zugesetzt wird, und 2 n-Sodalösung verteilt. Die Lssigesterphase wird dann noch mit NaCl-Lösung ausgeschüttelt, mit Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird mit Äther verrieben und aus Tetrahydrofuran Äther umgefallt. Ls entstehen 4.15 g (56%) Ausbeute. so

[./] = -33,5-(C= 1. Dimethylacetamidl.

(\,„H₄₅N_rO._s ■ 0,5H₂O (748.8):

Berechnet ... C 62.52. H 6.19. N 13.1:
gefunden .... C 62.6. H 6.2. N 12.9.

hi 1 -P\roglulam\l-1 -histidy l-l.-prolinamid

I g(l.34mMoliZ Gin I Ils Pro Ml MIv werden mit 0.5 ml .Anisol 1.5 2 Stunden m 5 ir I rifluoressigsäure am Rückfluß gekocht. Ai.-chlie ßend wird wie üblich aufgearbeitet. Ausbeute: 3(>ό m (72"ti). Dünnschichtchromatographisch mit l.-Pyrn glutamyl-L-Iiist idyl-L-prolinamid identisch.

4. Aus Hoc Gin His Pro - NH ■- Mbh (Boc -- tert.-Billy lo\ycarbon\ I)

nach Weg al: a) Boc -(JIn His- Pro NH Mbh

Durch eine Lösung von 5.75 g (9.13 mMol Z — His -Pro -NH- Mbh · ΙΗ,ο'ιΙΙ) in 100 m Methanol, der man etwas Pd(OH-TBaSO₄-KaIaUSa to r zusetzt, leitet man Wasserstoff, wobei du rc! Zutroplen von 0.93-n methanolischem Chlorwasser stoff mit Hilfe eines Autotilrators pH 4 gehaltet wird. Nach beendeter Hydrierung waren 15.5 ni (14.4 mMoli 0.93-n methanolischer' Chlorwa.ssersiol aufgenommen worden. Der Katalysator wird ahüe saugt und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand win in 20 ml Dimethylformamid gelöst. Dazu »ibt mat 1.85 ml (14.4 mMol) N-Äthylmorpholin und 3.5; Boc — CiIn-ONp und läßt 3 Tage bei Raumtempe ratur stehen. Das Dimethylformamid wird im Hoch vakuum abdesiilliert und" der Rückstand zwisehei Essigester und 2 n-Sodalösung verteilt. Die Essieesicr phase wird noch einmal mit 2 n-Sodalösung um zweimal mit Wasser ausgeschüttelt, mit Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wire mit Äther vc-rieben. Ausbeute: 5.55 ti (86⁰Ol. Zui Reinigung kann in Tetrahydrofuran über basische-AI₂O, Chromatographien werden. [«] = -36.9 ir = i. Dimethylacetamidl.

bi L-Pyrogluiamyl-L-histidyl-L-prolinamid 563.6 mg (0.799 mMol)

Boc — CiIn —His —Pro - NH-Mbh

werden mit 0.5 ml Anisol 1 Stunde in 5 ml Trifiuor· essigsäure am Rückfluß iiekocht. Anschließend wire wip ubhch aufgearbeitet. Ausbeute: 225 mg (74%) Dünnschichtchromatographisch mit L-Pyroelutamyl-L-histidyi-L-prolinamid identisch.

Claims (6)

1. Patentansprüche:
   1. Tripeptidderivate C.ct allgemeinen Formel

   R—Gin — His — Pro— NH-R₃

   worin R Z oder Boc bedeutet und, wenn R für Z steht, R₂ und R₃ Wasserstoff oder den 4,4'-Dimethyl-benzhydrylrest (Mbh), jedoch nicht gleichzeitig Wasserstoff, bedeuten und, falls R für Boc steht, Rt Wasserstoff und R₃ Mbh bedeutet.
2. 2. Z—Gln(Mbh)—His—Pro—NH-Mbh.
3. 3. Z—Gln(Mbh)—His—Pro—NH₂.
4. 4. Z—Gin—His—Pro—NH-Mbh.
5. 5. Boc—Gin —His—Pro—NH-Mbh.
6. 6. Verfahren zur Herstellung von L-Pyroglutamyl-L-histidyl-L-prolin-amid, dadurch gekenn-Eeichnet, daß man entweder

   a) eine Verbindung der Formel I