DE19834683A1 - New lipopolyamines, their presentation and application - Google Patents

New lipopolyamines, their presentation and application

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DE19834683A1
DE19834683A1 DE19834683A DE19834683A DE19834683A1 DE 19834683 A1 DE19834683 A1 DE 19834683A1 DE 19834683 A DE19834683 A DE 19834683A DE 19834683 A DE19834683 A DE 19834683A DE 19834683 A1 DE19834683 A1 DE 19834683A1
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Description

Positiv geladene Lipide (J. P. Behr, Bioconjugate Chem. 5, 382-389, 1994) werden in Form von Liposomen, Micellen oder als solche zur Einschleusung von biologisch aktiven Substanzen wie Peptiden, Peptoiden, Proteinen, PNA, antiviralen Wirkstoffen insbesondere aber DNA, RNA, Antisense-DNA/RNA oder Ribozymen in eukariotische Zellen (zum Beispiel Säuger-, Pflanzen- oder Insektenzellen) eingesetzt. Lipopolyamine sind eine spezielle Klasse von kationischen Lipiden, die vergleichsweise hervorragende Transfektionseigenschaften zeigen. Unter Transfektion versteht man die Einschleusung von Erbmaterial in eukariotische Zellen.Positively charged lipids (J.P. Behr, Bioconjugate Chem. 5, 382-389, 1994) are in the form of liposomes, micelles or as such for the introduction of biologically active substances such as peptides, peptoids, proteins, PNA, antiviral active ingredients, but especially DNA, RNA, antisense DNA / RNA or ribozymes in eukaryotic cells (for example mammalian, Plant or insect cells). Lipopolyamines are a special class of cationic lipids, which show comparatively excellent transfection properties. Transfection is the introduction of genetic material into eukaryotic cells.

Die Notwendigkeit DNA (zum Beispiel Plasmide, Cosmide, einzelsträngig oder doppelsträngig), RNA oder verwandte Stoffklassen, wie Antisense-DNA/RNA oder Ribozyme in eukariotische Zellen einzuführen, um beispielsweise erfolgreich Gentherapie betreiben zu können, führte zur Entwicklung einer Vielzahl von Transfektionsmethoden. Zur Einführung von Nukleinsäuren in eukariotische und insbesondere in Säugerzellen ist eine Vielzahl von Verfahren, wie zum Beispiel die CaPO4-Präzipitationsmethode, die DEAE-Dextran-Methode, synthetische Polyamine (Polyethylenimin, Polylysin, PAMAM-Dendrimere), Methoden, welche die rezeptorvermittelte Endocytose nutzen, Elektroporation, Mikrobombardement, Mikroinjektion und Verfahren, die virale Capside als DNA-Carrier benutzen, bekannt. Eine weitere Methode wird Lipofektion (P. L. Felgner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 7413 1987) genannt. Diese nützt die Tatsache, daß synthetische kationische Lipide in Form von Liposomen, Micellen oder als solche mit der negativ geladenen DNA Komplexe bilden. Stellt man die Mengenverhältnisse von DNA und kationischem Lipid so ein, daß die resultierenden Komplexe eine positive Nettoladung tragen, so besitzen sie eine hohe Affinität zu der negativ geladenen Membranoberfläche eukariotischer Zellen. Treffen solche DNA/Lipid-Komplexe auf Zellen, so kommt es zu einer Einschleusung des genetischen Materials in die Zelle. Der genaue Mechanismus, wie die DNA in die Zellen gelangt, ist noch weitgehend unbekannt, man vermutet jedoch, daß es entweder zu einer Fusionierung der kationischen Lipide mit der anionischen Zellmembran bei gleichzeitiger Ausschüttung der DNA in das Zellinnere kommt, oder daß die DNA/Lipid-Komplexe als ganzes über einen natürlichen Transportmechanismus der Zellen, die sogenannte Endozytose, in die Zelle gelangen und danach die DNA freigesetzt wird. The need to introduce DNA (for example plasmids, cosmids, single-stranded or double-stranded), RNA or related classes of substances such as antisense-DNA / RNA or ribozymes into eukariotic cells in order to be able to successfully operate gene therapy, for example, has led to the development of a large number of transfection methods. For the introduction of nucleic acids in eukaryotic and in particular in mammalian cells, there is a multitude of methods, such as, for example, the CaPO 4 precipitation method, the DEAE dextran method, synthetic polyamines (polyethyleneimine, polylysine, PAMAM dendrimers), methods which use receptor-mediated endocytosis use, electroporation, microbombardment, microinjection and methods using viral capsids as DNA carriers are known. Another method is called lipofection (P.L. Felgner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 7413 1987). This takes advantage of the fact that synthetic cationic lipids in the form of liposomes, micelles or as such form complexes with the negatively charged DNA. If the proportions of DNA and cationic lipid are adjusted so that the resulting complexes have a positive net charge, they have a high affinity for the negatively charged membrane surface of eukaryotic cells. If such DNA / lipid complexes meet cells, the genetic material is introduced into the cell. The exact mechanism by which the DNA gets into the cells is still largely unknown, but it is suspected that either the cationic lipids fuse with the anionic cell membrane and the DNA is simultaneously released into the cell interior, or that the DNA / lipid -Complexes as a whole enter the cell via a natural transport mechanism of the cells, the so-called endocytosis, and the DNA is then released.

Liposomen sind in der Regel kugelartige Anordnungen von Lipiden in wäßrigen Lösungen mit "Bilayer-Struktur" und werden typischerweise in drei Klassifikationen eingeteilt (siehe N. Y. Academy Sciences Meeting: "Liposomes and their use in Biology and Medicine" von Dezember 1977): Multilamellare Vesikel (MLV, bis zu 10 000 nm), kleine unilamellare Vesikel (SUV, 20-50 nm) und große unilamellare Vesikel (LUV, 600-30 000 nm). Eine Reihe von Herstellungsmethoden für Liposomen ist bekannt und in "Liposome Technology" (Gregoriadis, CFC Press, N. Y. 1984), in "Liposomes" (Ostro, Marcel Dekker, N. Y. 1987) oder in Übersichtsartikeln von Lichtenberg et al. (Methods Biochem. Anal. 33, 337-462, 1988), Pagano und Weinstein (Ann. Rev. Biophysic. Bioeng. 7, 435-68, 1978), oder Szoka und Papahadjopoulos (Ann. Rev. Biophysic. Bioeng. 9, 467-508, 1980) beschrieben. Bekannte Methoden sind beispielsweise die "reverse-phase evaporation"-Methode und die Extrusionsmethode, bei der eine Lipidlösung durch eine mikroporöse Membran gepreßt wird.Liposomes are usually spherical arrangements of lipids in aqueous solutions with "Bilayer structure" and are typically divided into three classifications (see N. Y. Academy Sciences Meeting: "Liposomes and their use in Biology and Medicine" by December 1977): Multilamellar vesicles (MLV, up to 10,000 nm), small unilamellar vesicles (SUV, 20-50 nm) and large unilamellar vesicles (LUV, 600-30,000 nm). A row of Manufacturing methods for liposomes is known and in "Liposome Technology" (Gregoriadis, CFC Press, N.Y. 1984), in "Liposomes" (Ostro, Marcel Dekker, N.Y. 1987) or in Review articles by Lichtenberg et al. (Methods Biochem. Anal. 33, 337-462, 1988), Pagano and Weinstein (Ann. Rev. Biophysic. Bioeng. 7, 435-68, 1978), or Szoka and Papahadjopoulos (Ann. Rev. Biophysic. Bioeng. 9, 467-508, 1980). Known Methods are, for example, the "reverse phase evaporation" method and the Extrusion method in which a lipid solution is pressed through a microporous membrane.

Liposomen werden typischerweise auch auf folgendem Weg hergestellt: Die Lipide werden in einem organischen Lösungsmittel aufgenommen. Durch Verdampfen des Lösungsmittels unter einem Strom von Stickstoff wird an der Glasgefäßwand ein dünner Lipidfilm erzeugt. Zugabe von Wasser oder wäßriger Pufferlösung hydratisiert diesen Film. Die erhaltene Lösung wird zuletzt mit Ultraschall behandelt.Liposomes are typically also produced in the following way: The lipids are made in an organic solvent added. By evaporating the solvent under a stream of nitrogen creates a thin lipid film on the glass vessel wall. Encore water or aqueous buffer solution hydrates this film. The solution obtained is last treated with ultrasound.

Kationische Lipide gewinnen zunehmende Bedeutung in der Gentherapie. Dabei werden in vivo mit verschiedenen Verfahren Körperzellen transfektiert, indem Komplexe aus Carrier und DNA intradermal, intramuskulär, intraperitoneal, intravenös, subkutan, intranasal, in Liquorräume oder direkt in Tumore verabreicht werden oder Körperzellen entnommen, transfektiert und wieder reimplantiert werden. Eine in diesem Zusammenhang favorisierte Methode war bis vor einiger Zeit die Einbringung des genetischen Materials durch virale Carrier. Diese Methode besitzt jedoch die Gefahr der Rückmutation zu einem pathogenen Virus. Des weiteren wird die eingeschleuste DNA stabil in das Erbgut eingebaut, so daß eine Steuerung der Therapie oder eine Rückführung der Zellen in ihren ursprünglichen Zustand nicht mehr möglich ist. Zudem besitzen virale Carrier Restriktionen bezüglich der Größe der einzuschleusenden DNA. Modifizierte DNA oder RNA wird durch Viren nicht übertragen. Außerdem können nur sich teilende Zellen auf diesem Wege transfektiert werden.Cationic lipids are becoming increasingly important in gene therapy. In vivo Transfected with different body cells by complexes from carrier and DNA intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, intranasal, in cerebrospinal fluid spaces or administered directly into tumors or taken from body cells, transfected and be reimplanted again. A preferred method in this context was until now some time the introduction of the genetic material by viral carriers. This method however, there is a risk of back mutation to a pathogenic virus. Furthermore, the inserted DNA stably built into the genome, so that a control of the therapy or a return of the cells to their original state is no longer possible. In addition have viral carriers restrictions on the size of the DNA to be introduced. Modified DNA or RNA is not transmitted by viruses. Besides, only you can dividing cells can be transfected in this way.

Weitere Gefahren, die bei der Anwendung von viralen Carriersystemen zu berücksichtigen sind, sind die mögliche Aktivierung von Oncogenen und eine Immunreaktion des behandelten Organismus. Other dangers that need to be considered when using viral carrier systems are the possible activation of oncogenes and an immune response of the treated Organism.  

Die Transfektion mit kationischen Lipiden ist diesen Restriktionen hingegen nicht unterworfen. Die Transfektion verläuft in der Regel transient, das heißt die transfektierte DNA oder RNA wird nur für eine bestimmte Zeit exprimiert, da sie nicht in das Erbgut eingebaut wird und durch Nukleasen mit der Zeit abgebaut wird. Auf diese Weise kann Gentherapie dosiert und reversibel gemacht werden. Restriktionen bezüglich der Größe der DNA bestehen nicht und auch modifizierte DNA oder RNA (z. B. Antisense-DNA/RNA oder durch Einbau modifizierter Nukleotide stabilisierte Ribozyme) kann mittels kationischer Lipide in Zellen eingeschleust werden. Auch sich nicht teilende Zellen, wie zum Beispiel Nervenzellen, können durch kationische Lipide transfektiert werden. Des weiteren wurde bisher kein immunogenes Verhalten von kationischen Lipiden bei in vivo Versuchen gefunden.Transfection with cationic lipids, however, is not subject to these restrictions. The transfection is usually transient, that is, the transfected DNA or RNA is only expressed for a certain time because it is not built into the genome and is degraded over time by nucleases. In this way, gene therapy can be dosed and be made reversible. There are no restrictions on the size of the DNA and also modified DNA or RNA (e.g. antisense DNA / RNA or by incorporating modified Nucleotides stabilized ribozymes) can be introduced into cells by means of cationic lipids become. Non-dividing cells, such as nerve cells, can also pass through cationic lipids can be transfected. Furthermore, no immunogenic behavior has so far been observed of cationic lipids found in in vivo experiments.

Während die in vivo-Anwendung von Mikroinjektion und Elektroporation aus Verfahrensgründen nicht möglich erscheint, besitzen die CaPO4- und DEAE-Dextran- Methoden verglichen mit der Lipofektion eine schlechtere Transfektionseffizienz.While the in vivo use of microinjection and electroporation does not appear to be possible for procedural reasons, the CaPO 4 and DEAE dextran methods have a poorer transfection efficiency compared to lipofection.

Unter den kationischen Lipiden gibt es eine Klasse, die die bekannt hohe Affinität zwischen Polyaminen (z. B. Spermin, Spermidin) und DNA zur Transfektion ausnützen, sogenannte Lipopolyamide. Die Polyamine sind dabei linear oder verzweigt aufgebaut und enthalten Ethylen-; Propylen-; oder Butylengruppen zwischen den Aminofunktionen. Die Polyamine sind auf unterschiedlichste Weise mit einem lipophilen Rest verbunden.Among the cationic lipids there is a class that is known to have high affinity between Use polyamines (e.g. spermine, spermidine) and DNA for transfection, so-called Lipopolyamides. The polyamines are linear or branched and contain Ethylene; Propylene; or butylene groups between the amino functions. The polyamines are connected in various ways with a lipophilic residue.

Beispielsweise wird das bei physiologischem pH-Wert positiv geladene Spermin mit einem hydrophilen Rest, in manchen Fällen über einen Spacer, verknüpft. Spermin bildet stabile Komplexe mit DNA und ähnlichen Verbindungen, indem es über Wasserstoffbrückenbindung in der Furche der DNA gebunden wird.For example, the spermine positively charged at a physiological pH value is combined with a hydrophilic residue, in some cases linked by a spacer. Spermine forms stable Complexes with DNA and related compounds by using hydrogen bonding is bound in the groove of the DNA.

Die ersten solchen Liposperminderivate wurden von Behr, J. P. et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 6982-6986; 1989; EP 0394111) synthetisiert. Dabei verknüpften sie Carboxyspermin über einen Spacer mit zwei unterschiedlichen hydrophilen Resten. Die Struktur des dabei erhaltenen 5-Carboxyspermylglycindioctadecylamid (DOGS) ist:
The first such lipospermine derivatives were developed by Behr, J.P. et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 6982-6986; 1989; EP 0394111). They linked carboxyspermine to two different hydrophilic residues via a spacer. The structure of the 5-carboxyspermylglycine dioctadecylamide (DOGS) obtained is:

DOGS ist als Transfectam™ (Promega) kommerziell erhältlich.DOGS is commercially available as Transfectam ™ (Promega).

Die zweite von Behr et al. entwickelte Verbindung ist Dipalmitoylphosphatidylethanolamin-5- carboxyspermylamid (DPPES):
The second by Behr et al. developed compound is dipalmitoylphosphatidylethanolamine-5-carboxyspermylamide (DPPES):

Ein weiteres Liposperminderivat wird von P. L. Felgner et al. in WO 9116024 unter der Bezeichnung L-Spermin-5-carboxyl-3-(DL-1,2-dioleoyldimethylaminopropyl-β-hydroxyethyl­ amin) beansprucht. In der Patentschrift beschrieben ist jedoch L-Spermin-5-carboxyl-3-(DL- 1,2-dipalmitoyl-dimethylaminopropyl-β-hydroxyethylamin):
Another lipospermine derivative is described by P.L. Felgner et al. in WO 9116024 under the name L-spermine-5-carboxyl-3- (DL-1,2-dioleoyldimethylaminopropyl-β-hydroxyethyl amine). However, the patent describes L-spermine-5-carboxyl-3- (DL-1,2-dipalmitoyl-dimethylaminopropyl-β-hydroxyethylamine):

Gebeyehu, G. et al. beschreiben in WO 9405624 die Verbindung N-[N-(5- Carboxyspermyl)aminoethyl] N, N-dimethyl-2,3-bis (9-octadecenyloxy) 1-propanammonium tetra (trifluoracetat), welches kommerziell als Lipofectamin™ (Gibco-BRL: Life Technologies Inc.) erhältlich ist.
Gebeyehu, G. et al. in WO 9405624 describe the compound N- [N- (5-carboxyspermyl) aminoethyl] N, N-dimethyl-2,3-bis (9-octadecenyloxy) 1-propanammonium tetra (trifluoroacetate), which is commercially available as Lipofectamin ™ (Gibco- BRL: Life Technologies Inc.) is available.

Von Der Eltz et al. beschreiben in WO 9700241 die Verbindung 2-(6-Carboxy-spermyl)-1,3- dioleoyloxy-propylamid, die unter dem Namen DOSPER auf den Markt gebracht wurde (Boehringer Mannheim GmbH).
By Der Eltz et al. describe in WO 9700241 the compound 2- (6-carboxy-spermyl) -1,3-dioleoyloxypropylamide, which was put on the market under the name DOSPER (Boehringer Mannheim GmbH).

Die bisher genannten Verbindungen wurden alle über eine Amid- oder Esterverknüpfung eines linearen Polyamins, welches eine Carboxyfunktion als Seitenkette trägt, i. e. von Carboxyspermin zu einem lipophilen Rest hergestellt. Spätere Veröffentlichungen zeigen schließlich auch andere Verknüpfungsweisen von linearen Polyaminen zu den lipophilen Resten, z. B. durch eine Amid- oder Carbamatverknüpfung zu einer endständigen Aminofunktion (lineare Struktur) oder inneren Aminofunktion ("T-shape-structure") des linearen Polyamins. Beispiele finden sich in den Veröffentlichungen DE 19 63 189, WO 9640726, WO 9640725, WO 9618372, WO 9746223, WO 9802190 und WO 9802191. Auch verzweigte Polyamine wurden beschrieben (G. Byk et al, J. Med. Chem., 41, 224-235, 1998).The compounds mentioned so far have all been linked via an amide or ester linkage linear polyamine, which carries a carboxy function as a side chain, i. e. from Carboxyspermin made to a lipophilic residue. Show later publications and finally other ways of linking linear polyamines to the lipophilic ones Residues, e.g. B. by an amide or carbamate linkage to a terminal Amino function (linear structure) or internal amino function ("T-shape structure") of the linear polyamine. Examples can be found in the publications DE 19 63 189, WO 9640726, WO 9640725, WO 9618372, WO 9746223, WO 9802190 and WO 9802191. Branched polyamines have also been described (G. Byk et al, J. Med. Chem., 41, 224-235, 1998).

Trotz großer Fortschritte auf dem Gebiet der Transfektion mittels kationischer Lipide, verbleibt ein Bedarf an einer größeren Auswahl solcher Lipide. Der Grund dafür liegt darin, daß bis heute kein kationisches Lipid gefunden wurde, daß mit allen Zelltypen befriedigende Ergebnisse liefert. Da verschiedene Zelltypen sich in ihrer Membranzusammensetzung unterscheiden, ist es nicht verwunderlich, daß verschiedene Kompositionen von Lipiden und verschiedenartige Lipidtypen für eine effektive Transfektion unterschiedlicher Zellen benötigt werden.Despite great advances in the field of transfection using cationic lipids, remains a need for a wider range of such lipids. The reason for this is that until Today no cationic lipid has been found that gives satisfactory results with all cell types delivers. Because different cell types differ in their membrane composition, it is not surprising that different compositions of lipids and different types Lipid types are needed for an effective transfection of different cells.

Da über den eigentlichen Transfektionsschritt bis heute noch wenig bekannt ist, ist die Entwicklung von neuen kationischen Lipiden weitgehend empirisch. Wichtige zu beachtende Punkte für das Design solcher Lipide sollten daher ihre physikalische Eigenschaften bezüglich der Ausbildung von Liposomen oder Micellen, die Eigenschaften der gebildeten Liposomen oder Micellen, die Toxizität gegenüber den zu transfektierenden Zielzellen, des weiteren die Stabilität der Lipide, deren Metabolisierbarkeit und die Möglichkeit einer in vivo-Anwendung sein.Since little is known about the actual transfection step to date, this is Development of new cationic lipids largely empirically. Important to note Points for the design of such lipids should therefore relate to their physical properties the formation of liposomes or micelles, the properties of the liposomes formed or micelles, the toxicity to the target cells to be transfected, furthermore the  Stability of lipids, their metabolizability and the possibility of in vivo use be.

Die erfindungsgemäß zu lösende Aufgabe bestand also darin, neue kationische Lipide mit hoher Wirksamkeit und möglichst breitem Wirkungsspektrum in Kombination mit guter Stabilität zu finden. Bei der vorliegenden Erfindung wurde nun überraschenderweise gefunden, daß die Kombination von Polyaminen als Kopfgruppe mit einem speziellen lipophilen Rest zu besonders guten Eigenschaften in Hinblick auf Effizienz und Stabilität führt:
The object to be achieved according to the invention was therefore to find new cationic lipids with high effectiveness and the broadest possible spectrum of activity in combination with good stability. Surprisingly, it has now been found in the present invention that the combination of polyamines as a head group with a special lipophilic radical leads to particularly good properties with regard to efficiency and stability:

Die Reste R sind dabei gesättigte oder ungesättigte Alkylketten, vorzugsweise mit 10 bis 20 Kohlenstoffatomen.The radicals R are saturated or unsaturated alkyl chains, preferably with 10 to 20 Carbon atoms.

Als Erklärung mögen folgende Hypothesen dienen. Von besonderer Bedeutung für eine erfolgreiche Transfektion hat sich die Bildung eines sogenannten DNA-Lipid-Komplexes erwiesen. Beim Zusammentreffen von DNA und kationischen Lipiden, die als Liposomen- oder Micellenformulierungen eingesetzt werden, kommt es zu einer spontanen Kondensation der DNA unter Zusammenbruch der liposomalen oder micellenartigen Organisationsstruktur der kationischen Lipide. Es bildet sich ein DNA-Lipid-Komplex aus, in dem die DNA in einem multilamellaren Komplex mit "Bilayerstruktur" aus den besagten Lipiden eingebettet ist (J. O. Rädler et al. Science, 275, 810, 1997). Ist z. B. die Spermingruppe als DNA-affine Kopfgruppe erst einmal an die DNA gebunden, kommt somit der Flexibilität und Symmetrie des restlichen Molekülteils (lipophiler Rest) besondere Bedeutung zu, da die Alkylgruppen in der Lage sein müssen, sich möglichst parallel auszurichten, um über Van-der-Waals-Kräfte stabile "Bilayer- Strukturen" ausbilden zu können.The following hypotheses may serve as an explanation. Of particular importance for one Successful transfection has resulted in the formation of a so-called DNA-lipid complex proven. When DNA and cationic lipids come together as liposomes or Micelle formulations are used, there is a spontaneous condensation of the DNA collapsing the liposomal or micelle-like organizational structure of the cationic lipids. A DNA-lipid complex forms, in which the DNA is in one multilamellar complex with "bilayer structure" is embedded from the said lipids (J. O. Radler et al. Science, 275, 810, 1997). Is z. B. the sperm group as a DNA-affine head group once bound to the DNA comes the flexibility and symmetry of the rest Part of the molecule (lipophilic residue) is of particular importance because the alkyl groups are able to must align themselves as parallel as possible in order to achieve stable "bilayer-" via Van der Waals forces Structures ".

Die bisher vorgeschlagenen Verbindungen sind in der Regel wenig symmetrisch aufgebaut, was eine parallele Ausrichtung der Alkylreste erschwert, und beinhalten allesamt Ester, Ether oder Amidverknüpfungen zwischen den Alkylresten und einem Grundgerüst bzw. einem Spacer. Diese Verbindungen sind daher in ihrer Flexibilität auf Grund der festgelegten Bindungswinkel und im Falle von Amidverknüpfungen (z. B. bei Verbindungen aus G. Byk et al, J. Med. Chem., 41, 224-235, 1998, EP 0394111, WO 9618372, WO 9746223, WO 9802190 und WO 9802191) auf Grund vorhandener Resonanzstrukturen stark eingeschränkt.
The previously proposed compounds are generally not very symmetrical, which makes parallel alignment of the alkyl radicals more difficult, and all of them contain esters, ethers or amide linkages between the alkyl radicals and a basic structure or a spacer. These compounds are therefore flexible in terms of the specified bond angle and in the case of amide linkages (for example compounds from G. Byk et al, J. Med. Chem., 41, 224-235, 1998, EP 0394111, WO 9618372, WO 9746223, WO 9802190 and WO 9802191) due to the presence of resonance structures.

In der Resonanzstruktur für Amide trägt das O-Atom eine negative und das Amid-N-Atom eine positive Ladung. Es resultiert eine planare Anordnung der an der Amidbindung beteiligten Atome. Eine freie Rotation der Amidbindung zwischen Carbonyl-Kohlenstoff und dem Stickstoffatom ist nicht möglich. Diese Eigenschaft wirkt sich beispielsweise in ganz besonderer Weise auf die Struktur von Proteinen aus. (Sekundär-, Tertiär- und Quartärstruktur), deren Peptidbindungen nichts anderes als Amidverknüpfungen sind. Erst die starren, nichtflexiblen Amidverknüpfungen geben dem Protein seine biologisch notwendige Struktur.In the resonance structure for amides, the O atom carries a negative and the amide N atom carries one positive charge. The result is a planar arrangement of those involved in the amide bond Atoms. A free rotation of the amide bond between carbonyl carbon and the Nitrogen atom is not possible. This property has a very special effect, for example Point out the structure of proteins. (Secondary, tertiary and quaternary structure), their Peptide bonds are nothing more than amide linkages. First the rigid, inflexible Amide linkages give the protein its biologically necessary structure.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen (siehe auch unten) verknüpfen die Alkylreste über ein tertiäres Stickstoffatom (Amin). Damit ist eine hohe Symmetrie und durch die Möglichkeit des "Durchschwingens" des freien Elektronenpaares (Pseudorotation) am Stickstoffatom maximale Flexibilität gewährleistet. Somit besteht bei diesen Verbindungen die optimale Voraussetzung zur parallelen Ausrichtung der Alkylreste (trotz an der DNA fest verankerter Kopfgruppen) und somit zur Bildung stabiler DNA-Lipid-Komplexe, was eine möglichst große Überlappung der van der Waals-Regionen der Alkylgruppen voraussetzt.The compounds according to the invention (see also below) link the alkyl radicals via one tertiary nitrogen atom (amine). This ensures a high degree of symmetry and the possibility of Maximum "swinging" of the lone pair of electrons (pseudorotation) at the nitrogen atom Flexibility guaranteed. The ideal prerequisite for these connections for the parallel alignment of the alkyl residues (despite head groups firmly anchored to the DNA) and thus to form stable DNA-lipid complexes, which overlap as much as possible van der Waals regions of the alkyl groups.

Eine weitere Erklärungsmöglichkeit für die besonders guten Eigenschaften der beanspruchten Verbindungen besteht darin, daß diese Verbindungen auf Grund des nicht an der DNA-Komplexbildung beteiligten basischen Stickstoffatoms, welches die Alkylreste trägt, Pufferungsvermögen im physiologischen pH-Bereich besitzen. Diese Eigenschaft fördert auf dem Weg der Endocytose die osmotische Zerstörung der Endosomen, so daß die DNA um so besser in das Zytosol freigesetzt wird (J. P. Behr, Gene Therapy, 3, 1010-1017, 1996). Another explanation for the particularly good properties of the claimed Connections is that these connections are not due to the DNA complex formation involved basic nitrogen atom, which carries the alkyl residues, Have buffering capacity in the physiological pH range. This property encourages the way of endocytosis the osmotic destruction of the endosomes, so that the DNA all the more is better released into the cytosol (J.P. Behr, Gene Therapy, 3, 1010-1017, 1996).  

Die vorliegende Erfindung betrifft somit neue Lipopolyamine der allgemeinen Formel I, die in der Lage sind, biologisch aktive Moleküle in eukariotische Zellen zu transportieren:
Formel I:
The present invention thus relates to new lipopolyamines of the general formula I which are able to transport biologically active molecules into eukaryotic cells:
Formula I:

die bei Vorhandensein eines Asymmetriezentrums in der D-, L- oder DL-Form vorliegen, einschließlich ihrer Salze, wobei
R1 ein lipophiler Rest folgender allgemeinen Formel ist:
which are present in the presence of an asymmetry center in the D, L or DL form, including their salts, where
R 1 is a lipophilic radical of the following general formula:

in welcher R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl, Octadecenyl oder andere Alkylreste, die in allen möglichen Kombinationen gesättigt, ungesättigt, verzweigt, unverzweigt, fluoriert oder nicht fluoriert sein können, und aus 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 oder 30 Kohlenstoffatomen aufgebaut sind,
und X eine der folgenden Gruppierungen ist:
in which R 2 and R 3 independently of one another dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl, octadecenyl or other alkyl radicals which can be saturated, unsaturated, branched, unbranched, fluorinated or non-fluorinated in all possible combinations, and from 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 or 30 carbon atoms are built up,
and X is one of the following groupings:

ist,
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können,
oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können,
oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können,
oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 oder l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können,
oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können,
oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können.is
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r = 0, 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6,
or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r = 0, 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6,
or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r = 0, 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6,
or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r = 0, 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 or l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6,
or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r = 0, 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6,
or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r = 0, 1, 2 , 3, 4, 5 or 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6.

Von besonderem Interesse sind dabei Verbindungen und ihre Salze mit folgenden Strukturen:
Of particular interest are compounds and their salts with the following structures:

wobei h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und wobei g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein können, R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.where h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and where g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, R 2 and R 3 independently of one another dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, tetradecenyl , Hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl.

Von ganz besonderem Interesse ist dabei folgende Verbindung und ihre Salze:
The following compound and its salts are of particular interest:

Von weiterem besonderen Interesse sind Formulierungen die Liposomen oder Micellen enthalten, die diese Verbindungen kombiniert mit Colipiden oder ohne Colipide, wie z. B. Dioleoylphosphatidylethanolamin (DOPE), Dioleoylphosphatidylcholin, Cholesterol oder Cholesterylamin enthalten.Formulations of liposomes or micelles are of further particular interest contain these compounds combined with colipids or without colipids, such as. B. Dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE), Dioleoylphosphatidylcholine, Cholesterol or Contain cholesterylamine.

Von weiterem besonderen Interesse sind Verfahren zum Einbringen von biologisch wirksamen Verbindungen, wie DNA, RNA, Ribozymen, Antisense-DNA, PNA, Peptiden, Peptoiden und Proteinen in eukariotische Zellen, wobei die genannten Verbindungen oder Formulierungen mit den einzubringenden Verbindungen komplexieren und die entstandenen Komplexe mit eukariotischen Zellen in vivo oder in vitro in Kontakt gebracht werden.Of particular interest are methods for introducing biologically active Compounds such as DNA, RNA, ribozymes, antisense DNA, PNA, peptides, peptoids and Proteins in eukaryotic cells, the compounds or formulations mentioned having complex the compounds to be introduced and the resulting complexes with Eukariotic cells are brought into contact in vivo or in vitro.

Von weiterem besonderen Interesse ist die Verwendung der genannten Verbindungen oder Formulierungen als Reagenz oder Medikament oder als Bestandteil von einem Reagenz oder Medikament zum Einbringen von biologisch wirksamen Verbindungen, wie DNA, RNA, Ribozymen, Antisense-DNA, PNA, Peptiden, Peptoiden und Proteinen in eukariotische Zellen in vivo oder in vitro.The use of the compounds mentioned or is of further particular interest Formulations as a reagent or medicament or as part of a reagent or Medicament for introducing biologically active compounds, such as DNA, RNA,  Ribozymes, antisense DNA, PNA, peptides, peptoids and proteins in eukariotic cells in vivo or in vitro.

Von weiterem besonderen Interesse ist die Verwendung der genannten Verbindungen oder Formulierung als Reagenz oder Medikament oder als Bestandteil von einem Reagenz oder Medikament zum Einbringen von biologisch wirksamen Verbindungen, wie DNA, RNA, Ribozymen, Antisense-DNA, PNA, Peptiden, Peptoiden und Proteinen in eukariotische Zellen in vivo oder in vitro in Kombination mit sogenannten "Enhancern", die deren Wirkung verstärken.The use of the compounds mentioned or is of further particular interest Formulation as a reagent or medicament or as part of a reagent or Medicament for introducing biologically active compounds, such as DNA, RNA, Ribozymes, antisense DNA, PNA, peptides, peptoids and proteins in eukariotic cells in vivo or in vitro in combination with so-called "enhancers", the effect reinforce.

Die erfindungsgemäßen Lipide enthalten also Polyamine als DNA-affine Kopfgruppen, die über einen Spacer an einen speziellen lipophilen Rest gebunden sind. Ein besonderer Wert der erfindungsgemäßen Lipide liegt in ihrer Stabilität in Lösung, bei gleichzeitiger geringer Toxizität für die Zelle in Kombination mit außergewöhnlich guten Transfektionseigenschaften.The lipids according to the invention thus contain polyamines as DNA-affine head groups which a spacer is bound to a special lipophilic residue. A particular value of the lipids according to the invention lies in their stability in solution simultaneous low toxicity for the cell in combination with exceptionally good Transfection properties.

So konnte gezeigt werden, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen, im Vergleich mit Lipofectamin™ (Gibco-BRL: Life Technologies Inc.), dem bis dato in der Fachwelt anerkannt wirksamsten Transfektionsreagenz aus der Gruppe der Lipopolyamine, bessere Transfektionseigenschaften besitzen, wenn sie die gleiche Kopfgruppe tragen. Die Transfektionseffizienz ist dabei nicht nur jeweils im serumfreien und serumhaltigen Milieu höher, sondern es zeigt sich auch, daß ein hohes Niveau bezüglich Transfektionseffizienz über ein wesentlich breiteres DNA-Lipid-Verhältnis erreicht werden kann.It could be shown that the compounds according to the invention, in comparison with Lipofectamin ™ (Gibco-BRL: Life Technologies Inc.), which has so far been recognized by experts most effective transfection reagent from the group of lipopolyamines, better Have transfection properties if they have the same head group. The Transfection efficiency is not only in a serum-free and serum-containing environment higher, but it also shows that a high level of transfection efficiency is above a much broader DNA-lipid ratio can be achieved.

Nachstehend wird ein allgemeiner Syntheseweg am Beispiel einer der ganz besonders interessanten Verbindungen, von N-[2,5-Bis [(3-aminopropyl) amino]-1-oxopentyl]- N',N'- dioctadecylethylendiamin, erläutert.In the following, a general synthetic route is one of the most special using the example interesting compounds, from N- [2,5-bis [(3-aminopropyl) amino] -1-oxopentyl] - N ', N'- dioctadecylethylenediamine.

Dabei wird von N-tert.-Butyloxycarbonyl-geschütztem (BOC-geschütztem) Alkylendiamin ausgegangen. Die freie Aminogruppe wird durch Alkylbromide in Anwesenheit einer Base derivatisiert. Anschließend wird die zweite im Molekül vorhandene Aminofunktion deblockiert und an BOC-geschütztes Carboxypolyalkylamin (hier BOC-geschütztes Carboxyspermin) gekuppelt. Nach deblockieren dieser Kopfgruppe erhält man die gewünschten Verbindungen, je nach Aufarbeitung als freies Amin oder in Form ihrer Salze.
This is based on N-tert-butyloxycarbonyl-protected (BOC-protected) alkylenediamine. The free amino group is derivatized by alkyl bromides in the presence of a base. The second amino function present in the molecule is then unblocked and coupled to BOC-protected carboxypolyalkylamine (here BOC-protected carboxyspermine). After unblocking this head group, the desired compounds are obtained, depending on the workup, as a free amine or in the form of their salts.

Eine weitere bevorzugte Verbindung ist N,N-Bis-(3-aminopropyl)-N',N'- dioctadecylethylendiamin. Diese Verbindung wird ausgehend von N-tert.- Butyloxycarbonylethylendiamin (BOC-Ethylendiamin) durch umsetzen mit Acrylnitril, Alkylierung mit Alkylbromid und anschließender Hydrierung gewonnen. Die anschließenden Schritte dienen der Aufreinigung.
Another preferred compound is N, N-bis (3-aminopropyl) -N ', N'-dioctadecylethylenediamine. This compound is obtained starting from N-tert-butyloxycarbonylethylenediamine (BOC-ethylenediamine) by reaction with acrylonitrile, alkylation with alkyl bromide and subsequent hydrogenation. The subsequent steps are for purification.

Ein alternativer Weg zum gleichen Molekül ist die Alkylierung von N,N- Dioctadecylethylendiamin mit N-BOC-3-brompropylamin:
An alternative route to the same molecule is the alkylation of N, N-dioctadecylethylenediamine with N-BOC-3-bromopropylamine:

Nach folgendem altbekanntem Reaktionsschema, das im übrigen auch im vorigen Beispiel enthalten ist, können durch Wahl geeigneter Bedingungen, die Polyaminkopfgruppen verlängert, oder auch verzweigte Polyaminkopfgruppen erzeugt werden. Dabei besteht die Möglichkeit die Kopfgruppe einzeln zu erzeugen und anschließend an den lipophilen Rest zu kuppeln oder schon gekuppelte Kopfgruppen am Molekül zu erweitern.
According to the following well-known reaction scheme, which is also included in the previous example, by choosing suitable conditions, the polyamine head groups can be extended, or branched polyamine head groups can also be produced. It is possible to create the head group individually and then couple it to the lipophilic residue or to extend already coupled head groups to the molecule.

Als explizites Beispiel soll die Umsetzung von Ornithin mit Acrylnitril dienen. Über die Menge an Acrylnitril und der richtigen Wahl der Reaktionstemperatur kann das gewünschte Produkt als Hauptmenge erhalten werden. Die Hydrierung der Nitrile zu den Aminen und dessen Schutz durch die BOC-Schutzgruppe werden nach J. P. Behr et al. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86, pp. 6982-6986, 1989 analog der Synthese von Tetra-BOC-Carboxyspermin durchgeführt.
The reaction of ornithine with acrylonitrile is to serve as an explicit example. The desired product can be obtained as the main amount via the amount of acrylonitrile and the correct choice of the reaction temperature. The hydrogenation of the nitriles to the amines and its protection by the BOC protective group are described by J. P. Behr et al. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86, pp. 6982-6986, 1989 carried out analogously to the synthesis of tetra-BOC-carboxyspermine.

Eine weitere Möglichkeit zur Verlängerung und Verzweigung der Polyaminkopfgruppen besteht in der Alkylierung von Aminen durch N-(tert.-Butyloxycarbonyl)-3-brompropylamin:
Another possibility for extending and branching the polyamine head groups is to alkylate amines with N- (tert-butyloxycarbonyl) -3-bromopropylamine:

Allgemein können sämtliche aufgeführte Lipide mit den in den Beispielen aufgeführten Methoden (Blockieren und Deblockieren von Aminofunktionen mit der BOC-Schutzgruppe, Alkylierung von Aminofunktionen mit Alkylbromiden, Knüpfen von und Amidbindungen analog bekannter Peptidchemie, Cyanoethylierung von Aminofunktionen via Acrylnitril, Hydrierung von Cyanofunktionen zu Aminen) oder mit dem organischen Chemiker vertrauten, allgemein bekannten Methoden (Alkylierung von Alkoholen, Knüpfen von Esterbindungen, Reduktion von Estern zu Ethern bzw. von Amiden zu Aminen via Lithiumalanat) erzeugt werden.In general, all lipids listed can with those listed in the examples Methods (blocking and unblocking amino functions with the BOC protecting group, Alkylation of amino functions with alkyl bromides, formation of and amide bonds analogous to known peptide chemistry, cyanoethylation of amino functions via acrylonitrile, Hydrogenation of cyano functions to amines) or familiar with the organic chemist, generally known methods (alkylation of alcohols, formation of ester bonds, Reduction of esters to ethers or of amides to amines via lithium alanate) become.

Bezüglich der Verbindungen, die die zwei zuletzt beanspruchten Spacer enthalten, sei auf WO 9802191 verwiesen. Hier wird beschrieben, wie Ester und Amide mit Lithiumalanat zu Ethern und Aminen reduziert werden können, ohne die BOC-Schutzgruppe anzugreifen. Auf diesem Wege resultieren solche Verbindungen aus den entsprechenden Vorläufern.Regarding the compounds containing the last two spacers claimed, see WO 9802191. Here it is described how esters and amides with lithium alanate to form ethers and amines can be reduced without attacking the BOC protecting group. On this Such connections result from the corresponding precursors.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können als solche in wäßriger oder wäßriger Puffer- oder ethanolischer Lösung angewendet werden. Es können jedoch auch Liposomen (oder Micellen) mit oben genannten Lipiden allein, oder in Kombination mit anderen Lipiden wie zum Beispiel Cholesterol, Cholesterylamin, Dioleoylphosphatidylethanolamin (DOPE) oder Dioleoylphosphatidylcholin (DOPC) formuliert werden.As such, the compounds according to the invention can be used in aqueous or aqueous buffer or ethanolic solution. However, liposomes (or Micelles) with the above lipids alone, or in combination with other lipids such as for example cholesterol, cholesterylamine, dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE) or Dioleoylphosphatidylcholine (DOPC) can be formulated.

Um die Transfektionseffizienz der erfindungsgemäßen Lipide zu steigern, besteht die Möglichkeit, Zellen in Gegenwart von Substanzen zu transfektieren, die die enzymatische Aktivität in den Lysosomen inhibieren, sogenannte lysosomatotrope Substanzen, wie zum Beispiel Chloroquin oder von Viren abgeleitete lysosomatropisch wirkende Proteine.In order to increase the transfection efficiency of the lipids according to the invention, there is Possibility to transfect cells in the presence of substances that are enzymatic Inhibit activity in the lysosomes, so-called lysosomatotropic substances, such as Example chloroquine or lysosomatropically acting proteins derived from viruses.

Weiter besteht die Möglichkeit sogenannte Enhancer in Kombination mit den kationischen Lipiden einzusetzen. Enhancer verstärken die Wirkung der kationischen Lipide. Dabei gibt es Enhancer, die selbst keine transfizierenden Eigenschaften besitzen und solche die auch ohne kationische Lipide zur Transfektion verwendet werden können. Im ersten Fall kommt es zu einer einfachen Verstärkung (Amplifikation) der Transfektionseffizienz der kationischen Lipide. In letzterem Fall zeigt sich in kombinierter Anwendung eine Transfektionseffizienz die größer ist als bei Einzelanwendung. Die Kombinationswirkung kommt daher durch einen Synergieeffekt zustande. Enhancer entfalten ihre Wirkung in der Regel durch eine Vorkondensation der zu transfizierenden DNA oder sie Erhöhen die Permeabilisierbarkeit der zu durchdringenden Zellmembran. Beispiele für Enhancer sind Polyethylenimin, Transferrin, Protaminsulfat, Polyhistone, fusogene Peptide, Virushüllen, virale Oberflächenpeptide, replikationsdefiziente Viren usw. There is also the option of so-called enhancers in combination with the cationic ones Use lipids. Enhancers enhance the effects of the cationic lipids. There is Enhancers that have no transfecting properties themselves and those that do not cationic lipids can be used for transfection. In the first case it happens simple amplification of the transfection efficiency of the cationic lipids. In the latter case, the combined efficiency shows a greater transfection efficiency is than for single use. The combination effect comes from one Synergy effect. Enhancers usually work through a Pre-condensation of the DNA to be transfected or they increase the permeabilizability of the to penetrating cell membrane. Examples of enhancers are polyethyleneimine, transferrin, Protamine sulfate, polyhistones, fusogenic peptides, virus envelopes, viral surface peptides, replication-deficient viruses, etc.  

Die erfindungsgemäßen Lipopolyamine sind bei physiologischem pH positiv geladen und können daher mit negativ geladenen Makromolekülen, insbesondere mit DNA und verwandten Stoffklassen stabile Aggregate Bilden. Die mit den Lipopolyaminen bemäntelten und positivierten Makromoleküle wechselwirken mit der negativ geladenen Zellmembran auf eine Weise, die zu einer Einschleusung der Makromoleküle in die Zelle führt. Dabei sind in vitro als auch in vivo Anwendungen möglich.The lipopolyamines according to the invention are positively charged and at physiological pH can therefore with negatively charged macromolecules, especially with DNA and related Forming stable classes of aggregates. Those covered with lipopolyamines and Positive macromolecules interact with the negatively charged cell membrane on one This leads to the macromolecules being introduced into the cell. Here are in vitro as also possible in vivo applications.

Im Vergleich zur zielgerichteten rezeptorvermittelten Endocytose (Wu et al., J. Chem. 262, 4429-4432, 1987), in denen Polykationen, welche auch DNA-Binder genannt werden (zum Beispiel Polylysin etc.) an sogenannte Internalisierungsfaktoren (zum Beispiel bestimmte Glykoproteine) gebunden sind, die zielgerichtet an Oberflächenrezeptoren bestimmter Zellen binden, besitzen die erfindungsgemäßen Lipide, bzw. deren Liposomenformulierungen keine Zellspezifität. Eine zielgerichtete Lieferung durch die erfindungsgemäßen Lipide bzw. deren Liposomenformulierungen kann dadurch erreicht werden, daß die Ladungen von Lipiden und den zu transportierenden Biomolekülen ausgeglichen werden und zusätzlich an das Aggregat zwischen Biomolekül und Lipiden Internalisierungsfaktoren angebracht werden. Dies kann zum Beispiel durch Liposomenformulierung mit Colipiden erreicht werden, falls die Colipide als Kopfgruppe solche Internalisierungsfaktoren tragen. Eine andere Möglichkeit ist ein auf Ladungsneutralität abgestimmtes Aggregat aus Biomolekül, Lipiden und Internalisierungs­ faktoren. Sogenannte Internalisierungsfaktoren sind Transferrin, Galactose, Mannose, Mannose-6-phosphat, Asialglycoprotein, Conalbumin, Lectine, Transcobalamin, α-2- Makroglobulin, Biotin, Folat, mannosylierte Glycoproteine. Weitere sind in EP 0535576, EP 0544292, WO 9421808 zu entnehmen, die hierin unter Bezugnahme aufgenommen werden. Analog wie Internalisierungsfaktoren, können auch zellspezifische Antikörper eingesetzt werden.Compared to targeted receptor-mediated endocytosis (Wu et al., J. Chem. 262, 4429-4432, 1987), in which polycations, which are also called DNA binders (for Example polylysine etc.) to so-called internalization factors (for example certain Glycoproteins) are bound to specific surface receptors of certain cells bind, the lipids according to the invention or their liposome formulations do not have any Cell specificity. A targeted delivery by the lipids according to the invention or their Liposome formulations can be achieved in that the charges of lipids and the biomolecules to be transported are balanced and additionally to the aggregate internalization factors between the biomolecule and lipids. This can lead to Example can be achieved by liposome formulation with colipids if the colipids are considered Head group carry such internalization factors. Another option is an on Charge neutrality coordinated aggregate of biomolecule, lipids and internalization factors. So-called internalization factors are transferrin, galactose, mannose, Mannose-6-phosphate, asialglycoprotein, conalbumin, lectins, transcobalamin, α-2- Macroglobulin, biotin, folate, mannosylated glycoproteins. More are in EP 0535576, EP 0544292, WO 9421808, which are incorporated herein by reference. Analogous to internalization factors, cell-specific antibodies can also be used become.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können zu Therapiezwecken eingesetzt werden. Insbesondere können solche Verbindungen für die Gentherapie von zum Beispiel Cystischer Fibrose, Muskeldystrophie, Phenylketonurie, Ahornsirupkrankheit, Propionazidämie, Methylmalonazidämie, Adenosindeaminasemangel, Hypercholesterinämie, Hämophilie und β-Thalassämie genutzt werden. Gentherapeutische Behandlungsmethoden sind weiters interessant, wenn Hormone, Wachstumsfaktoren, Cytotoxine oder immunomodulierend wirkende Proteine im Organismus synthetisiert werden sollen. Für die oben genannten Zwecke können DNA- Fragmente mittels dieser Lipide in Zellen gebracht werden, in denen diese DNA die gewünschte Wirkung entfaltet. Die gewünschte Wirkung kann der Ersatz fehlender oder defekter DNA- Bereiche oder die Inhibition von DNA-Bereichen (zum Beispiel Antisense-DNA/RNA), die die Erkrankung auslösen, im erkrankten Zelltyp sein. Auf diese Weise können tumorunterdrückende Gene in der Krebs-Therapie eingesetzt werden oder durch die Einführung cholesterolregulierender Gene ein Beitrag zur Vorbeugung von Herz- und Blutgefäßkrankheiten leisten. Weiter kann DNA, welche Ribozyme kodiert, oder Ribozyme selbst in erkrankte Zellen eingeschleust werden. Die Translation jener DNA erzeugt aktive Ribozyme, die an spezifischen Stellen m-RNA katalytisch spalten und auf diese Weise die Transkription verhindern. Auf diese Weise kann zum Beispiel virale m-RNA spezifisch gespalten werden, ohne eine andere zelluläre m-RNA in Mitleidenschaft zu ziehen. Der Vermehrungszyklus von Viren (z. B. HIV, Herpes, Hepatitis) kann auf diesem Wege unterbrochen werden.The compounds according to the invention can be used for therapeutic purposes. In particular, such compounds can be used for gene therapy by, for example, cystic Fibrosis, muscular dystrophy, phenylketonuria, maple syrup disease, propionic acidemia, Methylmalonic acidemia, adenosine deaminase deficiency, hypercholesterolaemia, hemophilia and β-thalassemia can be used. Gene therapy methods of treatment are also interesting, if hormones, growth factors, cytotoxins or immunomodulating proteins should be synthesized in the organism. For the purposes mentioned above, DNA Fragments by means of these lipids are brought into cells in which this DNA is the desired one Effect. The desired effect can be the replacement of missing or defective DNA  Areas or the inhibition of DNA areas (for example antisense DNA / RNA) that trigger the disease, be in the diseased cell type. That way you can tumor suppressing genes are used in cancer therapy or by Introduction of cholesterol regulating genes contributes to the prevention of cardiac and Perform blood vessel diseases. DNA encoding ribozymes or ribozymes can also be used even be infiltrated into diseased cells. The translation of that DNA creates active ones Ribozymes that catalytically cleave m-RNA at specific sites and in this way the Prevent transcription. In this way, for example, viral m-RNA can be specific can be cleaved without affecting another cellular m-RNA. Of the Multiplication cycle of viruses (e.g. HIV, herpes, hepatitis) can be done in this way to be interrupted.

Auch in der Krebstherapie spielt Transfektion zur Herstellung von Krebsvakzinen eine immer größer werdende Rolle. Damit ist dieses Feld auch mögliches Anwendungsgebiet für die erfindungsgemäßen Verbindungen.Transfection for the production of cancer vaccines also always plays a role in cancer therapy growing role. This field is also a possible area of application for the compounds of the invention.

Eine weitere Anwendung können solche Lipide zum Beispiel in Impfverfahren finden, die auf der Basis der Expression von DNA, welche immunogene Peptide kodiert, im Körper von Mensch und Tier funktionieren. Dazu werden Lipid/DNA-Komplexe als Impfstoffe benutzt. Die Einschleusung der DNA in die Körperzellen führt zur Expression des immunogenen Peptids und löst somit die Immunantwort aus.Such lipids can also be used, for example, in vaccination methods based on the basis of the expression of DNA encoding immunogenic peptides in the body of Humans and animals work. For this, lipid / DNA complexes are used as vaccines. The introduction of the DNA into the body cells leads to the expression of the immunogenic Peptide and thus triggers the immune response.

Abgesehen von DNA können auch andere Makromoleküle, wie zum Beispiel PNA, Peptide, Peptoide oder Proteine, in Zellen eingeschleust werden. Zu diesem Zweck können sie mit den erfindungsgemäßen Lipopolyaminen als solche bemäntelt werden oder in Liposomen, welche als Komponente die erfindungsgemäßen Lipopolyamine enthalten, eingeschlossen oder an deren Oberfläche adsorbiert werden, falls eine negative Nettoladung vorhanden ist. Bringt man derartige Aggregate mit Zellen in Kontakt, so findet ein Transport dieser Moleküle durch die Zellwand statt. Therapeutische Peptide haben einen günstigen Einfluß auf zahlreiche Erkrankungen. Solche Peptide oder Proteine sind zum Beispiel Lymphokine, Interleukine, Tumore Nekrose Faktoren oder Interferone, weiterhin Wachstumsfaktoren, Gewebeplasminogenaktivator, Faktor-VIII:c, Granulocyten-Makrophagen-Kolonie- stimulierender Faktor, Erythropoietin, Insulin, Calcitonin, Thymidinkinase und andere. Auch toxische Peptide wie Ricin, Diphteriatoxin und andere können therapeutisch auf diese Weise gewinnbringend eingesetzt werden. Peptoide können erfolgreich als Peptidanaloga zur Verhinderung eines schnellen enzymatischen Abbaus im Körper eingesetzt werden. In addition to DNA, other macromolecules, such as PNA, peptides, Peptoids, or proteins, are introduced into cells. For this purpose you can use the lipopolyamines according to the invention are coated as such or in liposomes which contain as a component the lipopolyamines according to the invention, included or on the surface of which is adsorbed if there is a negative net charge. You bring it such aggregates in contact with cells, a transport of these molecules takes place through the Cell wall instead. Therapeutic peptides have a beneficial influence on numerous Diseases. Such peptides or proteins are, for example, lymphokines, interleukins, Tumors necrosis factors or interferons, further growth factors, Tissue plasminogen activator, factor VIII: c, granulocyte macrophage colony stimulating factor, erythropoietin, insulin, calcitonin, thymidine kinase and others. Also Toxic peptides such as ricin, diphtheria toxin and others can be used therapeutically in this way profitably used. Peptoids can be used successfully as peptide analogues Prevention of rapid enzymatic breakdown can be used in the body.  

Die erfindungsgemäßen Lipide werden auf Grund ihrer positiven Ladung vorwiegend dazu eingesetzt, negativ geladene Moleküle wegen ihrer negativen Ladung zu komplexieren und in Zellen einzuschleusen. Durch sogenannte "self assembling systems" können jedoch auch positiv geladene Moleküle transportiert werden, in dem zunächst negativ geladene Liposomen mit diesem positiv geladenen Molekülen komplexiert werden. Wählt man die Verhältnisse so, daß eine negative Nettoladung verbleibt, können diese Komplexe mit diesen erfindungsgemäßen Lipopolyaminen als solche oder in Form von Liposomen positiviert werden, in dem die gegensätzlich geladenen Komponenten in Kontakt gebracht werden. Die resultierenden positiv geladenen Gesamtkomplexe werden von den Zellen aufgenommen.The lipids according to the invention are mainly used because of their positive charge used to complex and negatively charged molecules because of their negative charge Inject cells. Through so-called "self assembling systems" can also be positive charged molecules are transported in the initially negatively charged liposomes this positively charged molecules are complexed. If you choose the conditions so that a negative net charge remains, these complexes with these invention Lipopolyamines as such or in the form of liposomes are positive, in which the oppositely charged components are brought into contact. The resulting positive charged total complexes are taken up by the cells.

Weitere Anwendungsmöglichkeiten für kationische Lipide sind den Veröffentlichungen WO 9011092, WO 9116024, WO 9303768, Science 258, 744-746, 1992 zu entnehmen, die hierin unter Bezugnahme aufgenommen werden.Other possible uses for cationic lipids are the publications WO 9011092, WO 9116024, WO 9303768, Science 258, 744-746, 1992, which herein be included with reference.

Beispiele für derzeit als therapeutisch aussichtsreich anzunehmende Sequenzen genetischen Materials sind in der Übersicht von F. W. Anderson, Science 256, 808, 1992 entnehmbar, die ebenfalls hierin unter Bezugnahme aufgenommen werden.Examples of genetic sequences currently to be assumed to be therapeutically promising Materials can be found in the review by F. W. Anderson, Science 256, 808, 1992, which also be incorporated herein by reference.

BeispieleExamples

Bezugsquellen:
1. Plasmide: pCMV<Sport<β-Gal; Gibco BRL, Life Technologies
2. β-Galaktosidase-Assay-Kit, Stratagene
3. Tetra-BOC-Carboxyspermin wurde nach J.-P. Behr et al. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86, pp. 6982-6986, (1989) synthetisiert.
4. Lipofectamin™; Gibco-BRL: Life Technologies Inc.
5. N-tert.-Butyloxycarbonylethylendiamin, Aldrich.
6. O-(tert.-Butoxycarbonyl)-phenylglyoxyl-säurenitriloxim (BOC-ON); Aldrich.
7. N'-(3-Dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimid Methojodid (EDC), Aldrich.
8. 1-Hydroxy-1H-benzotriazol (HOBT), Aldrich.
9. 4-Methylmorpholin, Diisopropylethylamin (DIPEA), Triethylamin, Aldrich.
10. Trifluoressigsäure (TFA), Aldrich.
11. Dulbecco's modified Eagels Medium (DMEM), Gibco-BRL: Life Technologies Inc.
12. Fötales Kälberserum (FCS), Biochrom.
13. Penicillin, Streptomycin, SIGMA. Sources of supply:
1. Plasmids: pCMV <sport <β-gal; Gibco BRL, Life Technologies
2. β-galactosidase assay kit, Stratagene
3. Tetra-BOC-carboxyspermine was made according to J.-P. Behr et al. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86, pp. 6982-6986, (1989).
4. Lipofectamin ™; Gibco-BRL: Life Technologies Inc.
5. N-tert-butyloxycarbonylethylene diamine, Aldrich.
6. O- (tert-butoxycarbonyl) phenylglyoxylic acid nitrile oxime (BOC-ON); Aldrich.
7. N '- (3-dimethylaminopropyl) -N-ethylcarbodiimide methoiodide (EDC), Aldrich.
8. 1-Hydroxy-1H-benzotriazole (HOBT), Aldrich.
9. 4-methylmorpholine, diisopropylethylamine (DIPEA), triethylamine, Aldrich.
10. Trifluoroacetic acid (TFA), Aldrich.
11. Dulbecco's modified Eagels Medium (DMEM), Gibco-BRL: Life Technologies Inc.
12. Fetal calf serum (FCS), biochrom.
13. Penicillin, streptomycin, SIGMA.

Beispiel 1example 1 Transfektionsreagenz 1Transfection reagent 1 Synthese von N-tert.-Butyloxycarbonyl-N',N'-dioctadecylethylendiaminSynthesis of N-tert-butyloxycarbonyl-N ', N'-dioctadecylethylenediamine

646 mg (1.94 mmol, MG 333.4) Octadecylbromid, 135 mg (0.84 mmol, Mg 160.22) N-tert.- Butyloxycarbonylethylendiamin (BOC-ethylendiamin) und 332 µl (1.94 mmol, MG 129.25, d 0.755) Diisopropylethylamin (DIPEA) werden in 10 ml Acetonitril gelöst und über Nacht unter Rückfluß gekocht. Nach Zugabe von 100 ml Ether wird mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wird mit Magnesiumsulfat getrocknet und die Lösungsmittel abgezogen. Das schon relativ saubere Produkt wird durch Flashchromatographie gereinigt.
C43H88O2N2
MG 664.12
Rf = 0.44 (9 : 1 v/v Chloroform/Methanol)
MS (FAB): 665.7 (M + 1)
1H-NMR (CDCl3):
0.88 (tr, 6 H, CH3); 1.26 ("s", 60 H, CH2); 1.40 (m, 4 H, N-CH2CH 2); 1.44 (s, 9 H, CH3BOC); 2.40 (tr, 4 H, N-CH2); 2.50 (tr, 2 H, N-CH2); 3.15 (m, 2 H, OCO-N-CH2).
13C-NMR (CDCl3):
13.1 (CH3); 22.7, 27.0, 25.5 (CH2); 28.5 (CH3BOC); 29.4, 29.6 29.7, 29.7 (CH2); 53.2 (N- CH2); 54.0 (N-CH2); 78.9 (CqBOC); 156.1 (OCO).
Ausbeute: 390 mg (69%)646 mg (1.94 mmol, MW 333.4) octadecyl bromide, 135 mg (0.84 mmol, Mg 160.22) N-tert-butyloxycarbonylethylenediamine (BOC-ethylenediamine) and 332 µl (1.94 mmol, MG 129.25, d 0.755) diisopropylethylamine (DIPEA) are added 10 ml of acetonitrile dissolved and refluxed overnight. After adding 100 ml of ether, it is washed with water. The organic phase is dried with magnesium sulfate and the solvents are stripped off. The already relatively clean product is purified by flash chromatography.
C 43 H 88 O 2 N 2
MG 664.12
R f = 0.44 (9: 1 v / v chloroform / methanol)
MS (FAB): 665.7 (M + 1)
1 H NMR (CDCl 3 ):
0.88 (tr, 6 H, CH3); 1.26 ( "s", 60H, CH 2); 1:40 (m, 4 H, N-CH 2 C H 2); 1.44 (s, 9H, CH3BOC ); 2:40 (tr, 4H, N-CH2); 2:50 (tr, 2 H, N-CH 2); 3.15 (m, 2 H, OCO-N-CH 2).
13 C-NMR (CDCl 3 ):
13.1 (CH 3 ); 22.7, 27.0, 25.5 (CH2); 28.5 (CH 3BOC ); 29.4, 29.6 29.7, 29.7 (CH2); 53.2 (N-CH 2 ); 54.0 (N-CH2); 78.9 (C qBOC ); 156.1 (OCO).
Yield: 390 mg (69%)

Synthese von N-[Tetra-tert.-butyloxycarbonyl-[(2,5-bis(3-aminopropyl)amino)-1-oxopentyl]]- N',N'-dioctadecylethylendiaminSynthesis of N- [tetra-tert-butyloxycarbonyl - [(2,5-bis (3-aminopropyl) amino) -1-oxopentyl]] - N ', N'-dioctadecylethylenediamine

157 mg (0.236 mmol, MG 665.12) N-tert.-Butyloxycarbonyl-N',N'-Dioctadecylethylendiamin werden in 4 ml eines 1 : 3 v/v Gemisches aus Trifluoressigsäure (TFA) und Methylenchlorid aufgenommen. Nach 2-3 h wird abrotriert und 0.5 h am Hochvakuum getrocknet. Anschließend wird in 6 ml eines 1 : 1 v/v Gemisches aus DMF und Methylenchlorid aufgenommen und mit 300 µl 4-Methylmorpholin versetzt. Anschließend werden 152.6 mg (0.236 mmol, MG 646.8) Tetra-BOC-Carboxyspermin in 2 ml eines 1 : 1 v/v Gemisches aus Dimethylformamid (DMF) und Methylenchlorid gelöst und zugegeben. Weiterhin werden 45 mg (0.330 mmol) 1-Hydroxy-1H-benzotriazol (HOBT) und 98 mg (0.330 mmol) N'-(3- Dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimid Methojodid (EDC) zugegeben und 50 h bei RT gerührt. Die Lösungsmittel werden abrotiert und der Rückstand in Methylenchlorid aufgenommen. Danach wird mit Wasser gewaschen, die organische Phase mit Natriumsulfat getrocknet und abrotiert. Das Rohprodukt wird über Flashchromatographie gereinigt.
C51H136N6O9
MG 997,65
Rf = 0.40 (9 : 1 v/v Methylenchlorid/Methanol)
1H-NMR (CDCl3):
0.88 (tr, 6 H, Ch3); 1.25 ("s", 64 H, CH2); 1.44 (m, 36 H, CH3BOC); 1.67 (m, 8 H, Spermin: CH2CH 2CH2); 236 (mr, 4 H, Stearyl: N-CH2); 2.51 (m, 2 H, Ethylendiamin: N-CH2); 3.1-3.25 (m, 10 H, OC-N-CH2).
Ausbeute: 135 mg (59%)157 mg (0.236 mmol, MW 665.12) of N-tert-butyloxycarbonyl-N ', N'-dioctadecylethylenediamine are taken up in 4 ml of a 1: 3 v / v mixture of trifluoroacetic acid (TFA) and methylene chloride. After 2-3 h, the mixture is spun off and dried under high vacuum for 0.5 h. It is then taken up in 6 ml of a 1: 1 v / v mixture of DMF and methylene chloride and 300 μl of 4-methylmorpholine are added. Then 152.6 mg (0.236 mmol, MW 646.8) tetra-BOC-carboxyspermine are dissolved in 2 ml of a 1: 1 v / v mixture of dimethylformamide (DMF) and methylene chloride and added. 45 mg (0.330 mmol) of 1-hydroxy-1H-benzotriazole (HOBT) and 98 mg (0.330 mmol) of N '- (3-dimethylaminopropyl) -N-ethylcarbodiimide methoiodide (EDC) are further added and the mixture is stirred at RT for 50 h. The solvents are spun off and the residue is taken up in methylene chloride. Then it is washed with water, the organic phase is dried with sodium sulfate and spun off. The crude product is purified via flash chromatography.
C 51 H 136 N 6 O 9
MG 997.65
R f = 0.40 (9: 1 v / v methylene chloride / methanol)
1 H NMR (CDCl 3 ):
0.88 (tr, 6 H, CH3); 1.25 ( "s", 64 H, CH 2); 1.44 (m, 36H, CH3BOC ); 1.67 (m, 8 H, spermine: CH 2 C H 2 CH 2 ); 236 (mr, 4 H, Stearyl: N-CH 2); 2:51 (m, 2 H, ethylenediamine: N-CH 2); 3.1-3.25 (m, 10H, OC-N-CH 2).
Yield: 135 mg (59%)

Synthese von N-[2,5-Bis((3-aminopropyl)amino)-1-oxopentyl]-N',N'-dioctadecylethylen­ diamin (TFA-Salz)Synthesis of N- [2,5-bis ((3-aminopropyl) amino) -1-oxopentyl] -N ', N'-dioctadecylethylene diamine (TFA salt)

70 mg N-[Tetra-tert.-butyloxycarbonyl-[(2,5-bis(3-aminopropyl)amino)-1-oxopentyl]]- N',N'- dioctadecylethylendiamin werden in 2 ml eines Gemisches aus Methylenchlorid und Trifluoressigsäure (3 : 1 v/v) gelöst und 1.5 h bei RT gerührt. Danach wird abrotiert, in 10 ml eines Gemisches aus Wasser/tert.-Butanol (1 : 1 v/v) aufgenommen und lyophilisiert.
C53H104ON6 (× 4 CF3COOH)
MG 793.52 (+ 4 × 114 = 1249.52)
Ausbeute: 100%70 mg of N- [tetra-tert-butyloxycarbonyl - [(2,5-bis (3-aminopropyl) amino) -1-oxopentyl]] - N ', N'-dioctadecylethylenediamine are dissolved in 2 ml of a mixture of methylene chloride and trifluoroacetic acid (3: 1 v / v) dissolved and stirred at RT for 1.5 h. It is then spun off, taken up in 10 ml of a mixture of water / tert-butanol (1: 1 v / v) and lyophilized.
C 53 H 104 ON 6 (× 4 CF 3 COOH)
MG 793.52 (+ 4 × 114 = 1249.52)
Yield: 100%

Beispiel 2Example 2 Transfektionsreagenz 2Transfection reagent 2 Synthese von N',N'-Bis-(2-cyanoethyl)-N-tert.-butyloxycarbonylethylendiaminSynthesis of N ', N'-bis (2-cyanoethyl) -N-tert-butyloxycarbonylethylenediamine

500 mg (3.12 mmol, MG 160.22) N-tert.-Butyloxycarbonylethylendiamin werden in 5 ml Wasser gelöst und 0.65 ml (9.8 mmol, MG 53.06) Acrylnitril zugegeben. Danach wird 7 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird mit Essigester überschichtet, ausgeschüttelt und die organische Phase abgetrennt. Nach Trocknen über Natriumsulfat wird abrotiert.
C13H22O2N4
MG 266.34
Rf = 0.69 (9 : 1 v/v Chloroform/Ethanol)
Ausbeute: 660 mg (80%)500 mg (3.12 mmol, MW 160.22) of N-tert-butyloxycarbonylethylenediamine are dissolved in 5 ml of water and 0.65 ml (9.8 mmol, MW 53.06) of acrylonitrile are added. The mixture is then stirred at room temperature for 7 days. It is then covered with a layer of ethyl acetate, shaken out and the organic phase is separated off. After drying over sodium sulfate is spun off.
C 13 H 22 O 2 N 4
MG 266.34
R f = 0.69 (9: 1 v / v chloroform / ethanol)
Yield: 660 mg (80%)

Synthese von N',N'-Bis-(2-cyanoethyl)-N,N-dioctadecylethylendiaminSynthesis of N ', N'-bis (2-cyanoethyl) -N, N-dioctadecylethylenediamine

660 mg (2.48 mmol, MG 266.34) N',N'-Bis-(2-cyanoethyl)-N-tert.-butyloxycarbonylethylen­ diamin werden in 10 ml eines 1 : 3 v/v Gemisches aus Trifluoressigsäure und Methylenchlorid aufgenommen. Nach 2-3 h wird abrotriert und 0.5 h am Hochvakuum getrocknet. Danach wird aus Butanol/Wasser (1 : 1 v/v) lyophilisiert. Das erhaltene Trifluoracetat wird in 40 ml trockenen Acetonitril zusammen mit 2.43 g (7.28 mmol, MG 333.4) Octadecylbromid und 2.23 ml (1.68 g, 13.02 ml, MG 129.25, d 0.755) Diisopropylethylamin (DIPEA) gelöst und 24 Stunden unter Rückfluß gekocht. Das Rohprodukt wird über Flashchromatographie gereinigt.
C44H86N4
MG 671.16
Rf = 0.42 (9 : 1 v/v Methylenchlorid/Methanol)
1H-NMR (CDCL3):
0.88 (tr, 6 H, CH3); 1.26 ("s", 60 H, CH2); 1.42 (m, 4 H, N-CH2CH 2) 2.42 (m, 4 H, N-CH2); 2.48 (tr, 4 H, CH2-CN); 2.50 (m, 2 H, N-CH2); 2.50 (m, 2 H, N-CH2); 2.92 (tr, 4 H, N-CH2).
Ausbeute: 330 mg (20%) 660 mg (2.48 mmol, MW 266.34) N ', N'-bis- (2-cyanoethyl) -N-tert-butyloxycarbonylethylene diamine are taken up in 10 ml of a 1: 3 v / v mixture of trifluoroacetic acid and methylene chloride. After 2-3 h, the mixture is spun off and dried under high vacuum for 0.5 h. It is then lyophilized from butanol / water (1: 1 v / v). The trifluoroacetate obtained is dissolved in 40 ml of dry acetonitrile together with 2.43 g (7.28 mmol, MW 333.4) octadecyl bromide and 2.23 ml (1.68 g, 13.02 ml, MW 129.25, d 0.755) diisopropylethylamine (DIPEA) and boiled under reflux for 24 hours. The crude product is purified via flash chromatography.
C 44 H 86 N 4
MG 671.16
R f = 0.42 (9: 1 v / v methylene chloride / methanol)
1 H NMR (CDCL 3 ):
0.88 (tr, 6 H, CH3); 1.26 ( "s", 60H, CH 2); 1:42 (m, 4 H, N-CH 2 C H 2) 2:42 (m, 4 H, N-CH 2); 2:48 (tr, 4H, CH 2 -CN); 2:50 (m, 2 H, N-CH 2); 2:50 (m, 2 H, N-CH 2); 2.92 (tr, 4H, N-CH2).
Yield: 330 mg (20%)

Synthese von N',N'-Bis-(3-aminopropyl)-N,N-dioctadecylethylendiamin (TFA-Salz)Synthesis of N ', N'-bis (3-aminopropyl) -N, N-dioctadecylethylenediamine (TFA salt)

2.5 g Raney-Nickel werden zu 50 ml Wasser gegeben. Dazu wird unter Rühren 4.5 g Natriumhydroxid so schnell zugegeben, daß das Wasser gerade nicht überkocht und anschließend eine halbe Stunde gerührt. 320 mg (0.48 mmol, MG 671.2) N',N'-Bis-(2- cyanoethyl)-N,N-dioctadecylethylendiamin werden in 500 ml 0.5 M Kaliumhydroxidlösung (in EtOH/Wasser 95 : 5 v/v) aufgenommen. Das aktivierte Raney-Nickel wird vom Überstand durch abdekantieren getrennt und zur Eduktlösung gegeben. Danach wird 24 Stunden an einer Hydrieranlage hydriert. Nach Einrotieren des Lösungsmittels wird der Rückstand in 5 ml Methylenchlorid gelöst. Dazu werden 500 mg (2.02 mmol, MG 246.27) O-(tert.- Butoxycarbonyl)-phenylglyoxyl-säurenitriloxim (BOC-ON) gegeben und bei Raumtemperatur 24 Stunden gerührt. Danach wird einrotiert. Das Rohprodukt wird über Flashchromatographie gereinigt. Danach wird das Produkt in 10 ml eines 1 : 3 v/v Gemisches aus Trifluoressigsäure und Methylenchlorid aufgenommen. Nach 2-3 h wird abrotriert und 0.5 h am Hochvakuum getrocknet. Zuletzt wird aus Butanol/Wasser (1 : 1 v/v) lyophilisiert.
C44H94N4 × 4 CF3COOH
MG 679.21 (+4 × 114 = 1135.21)
MS (ESI): 680.2
Ausbeute: 250 mg (58% bezogen auf Nitril)2.5 g of Raney nickel are added to 50 ml of water. For this purpose, 4.5 g of sodium hydroxide are added so quickly that the water does not boil over and is then stirred for half an hour. 320 mg (0.48 mmol, MW 671.2) of N ', N'-bis (2-cyanoethyl) -N, N-dioctadecylethylenediamine are taken up in 500 ml of 0.5 M potassium hydroxide solution (in EtOH / water 95: 5 v / v). The activated Raney nickel is separated from the supernatant by decanting and added to the educt solution. The mixture is then hydrogenated in a hydrogenation system for 24 hours. After the solvent has been spun in, the residue is dissolved in 5 ml of methylene chloride. 500 mg (2.02 mmol, MW 246.27) of O- (tert.-butoxycarbonyl) -phenylglyoxylic acid nitrile oxime (BOC-ON) are added and the mixture is stirred at room temperature for 24 hours. Then it is spun in. The crude product is purified via flash chromatography. The product is then taken up in 10 ml of a 1: 3 v / v mixture of trifluoroacetic acid and methylene chloride. After 2-3 h, the mixture is spun off and dried under high vacuum for 0.5 h. Finally it is lyophilized from butanol / water (1: 1 v / v).
C 44 H 94 N 4 × 4 CF 3 COOH
MG 679.21 (+4 × 114 = 1135.21)
MS (ESI): 680.2
Yield: 250 mg (58% based on nitrile)

Beispiel 3Example 3 Verzweigte KopfgruppenBranched head groups Synthese von N-(tert.-Butyloxycarbonyl)-3-brompropylaminSynthesis of N- (tert-butyloxycarbonyl) -3-bromopropylamine

500 mg (2.28 mmol; MG 218.94) 3-Brom-1-propylamin Hydrobromid (Aldrich) werden zusammen mit 1.13 (4.59 mmol; MG 246.27) O-(tert.-Butoxycarbonyl)-phenylglyoxyl­ säurenitriloxim (BOC-ON) und 0.65 ml (0.46 g; 4.6 mmol) Triethylamin in einem Gemisch aus Aceton und Wasser (1 : 1, v/v) gelöst. Nach 2 Stunden Rühren wird eingeengt und in Methylenchlorid aufgenommen. Die organische Phase wird mit Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und einrotiert. Das Rohprodukt wird durch Flashchromatographie gereinigt.
C8H16O2NBr
MG 238.31
Rf = 0.84 (9 : 1 v/v Methylenchlorid/Methanol)
1H-NMR (CDCl3):
1.36 (br s, 9 H, CH3BOC); 1.98 (m, 2 H, C-CH2-C); 3.19 (M, 2 H, Br-CH 2); 3.38 (m, 2 H, N-CH2); 4.90 (br s, 1 H, N-H).
13C-NMR (CDCl3):
28.2 (CH3); 30.6, 32.6, 38.8 (CH2); 79.1 (Cq); 155.8 (C=O).
Ausbeute: 250 mg (46%)500 mg (2.28 mmol; MW 218.94) 3-bromo-1-propylamine hydrobromide (Aldrich) together with 1.13 (4.59 mmol; MW 246.27) O- (tert-butoxycarbonyl) -phenylglyoxylic acid nitrile oxime (BOC-ON) and 0.65 ml (0.46 g; 4.6 mmol) triethylamine dissolved in a mixture of acetone and water (1: 1, v / v). After stirring for 2 hours, the mixture is concentrated and taken up in methylene chloride. The organic phase is washed with water, dried with sodium sulfate and evaporated. The crude product is purified by flash chromatography.
C 8 H 16 O 2 NBr
MG 238.31
R f = 0.84 (9: 1 v / v methylene chloride / methanol)
1 H NMR (CDCl 3 ):
1.36 (br s, 9H, CH3BOC ); 1.98 (m, 2 H, C-CH 2 -C); 3.19 (M, 2 H, Br-C H 2); 3:38 (m, 2 H, N-CH 2); 4.90 (br s, 1H, NH).
13 C-NMR (CDCl 3 ):
28.2 (CH 3 ); 30.6, 32.6, 38.8 (CH 2 ); 79.1 (C q ); 155.8 (C = O).
Yield: 250 mg (46%)

Synthese von N',N'-Bis-(3-aminopropyl)-N,N-dioctadecylethylendiamin (TFA-Salz)Synthesis of N ', N'-bis (3-aminopropyl) -N, N-dioctadecylethylenediamine (TFA salt)

200 mg (0.3 mmol, MG 665.12) N-tert.-Butyloxycarbonyl-N',N'-dioctadecylethylendiamin werden in 2 ml eines Gemisches aus Trifluoressigsäure und Methylenchlorid (1 : 3 v/v) gelöst. Nach zwei Stunden wird abrotiert und 2 Stunden im Hochvakuum getrocknet. Danach wird in 20 ml Chloroform aufgenommen und 1 ml (920 mg, 4.5 mmol, MG 101.15, d = 0.92) 4-Methylmorpholin zugegeben. Anschließend werden 640 mg (2.68 mmol, MG 238.13) N-(tert.- Butyloxycarbonyl)-3-brompropylamin zugegeben. Nach 48 Stunden Kochen unter Rückfluß wird einrotiert und das BOC-geschützte Vorläuferprodukt durch Flashchromatographie gereinigt. Abschließend wird in 2 ml eines Gemisches aus Trifluoressigsäure und Methylenchlorid (1 : 3 v/v) gelöst, einrotiert und lyophilisiert.
C44H94N4 × 4 CF3COOH
MG 679.21 (+4 × 114 = 1135.21)
MS (ESI): 680.2
Ausbeute: 46 mg (13%)200 mg (0.3 mmol, MW 665.12) of N-tert-butyloxycarbonyl-N ', N'-dioctadecylethylenediamine are dissolved in 2 ml of a mixture of trifluoroacetic acid and methylene chloride (1: 3 v / v). After two hours, the mixture is spun off and dried in a high vacuum for 2 hours. Then it is taken up in 20 ml of chloroform and 1 ml (920 mg, 4.5 mmol, MW 101.15, d = 0.92) of 4-methylmorpholine is added. Then 640 mg (2.68 mmol, MW 238.13) of N- (tert-butyloxycarbonyl) -3-bromopropylamine are added. After refluxing for 48 hours, the mixture is concentrated using a rotary evaporator and the BOC-protected precursor product is purified by flash chromatography. Finally, it is dissolved in 2 ml of a mixture of trifluoroacetic acid and methylene chloride (1: 3 v / v), rotated in and lyophilized.
C 44 H 94 N 4 × 4 CF 3 COOH
MG 679.21 (+4 × 114 = 1135.21)
MS (ESI): 680.2
Yield: 46 mg (13%)

Synthese von N,N',N'-Tris(cyanoethyl)-ornithinSynthesis of N, N ', N'-tris (cyanoethyl) -ornithine

950 mg Natriumhydroxid werden in 20 ml Wasser gelöst. In der Natronlauge werden 2 g (11.86 mmol, MG 168.62) Ornithin Hydrochlorid gelöst. Danach werden 3 ml (45.57 mmol) Acrylnitril zugetropft und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Zugabe von 1.7 ml 25%iger Salzsäure fällt ein Feststoff aus. Dieser wird nach Kühlung abgenutscht.
C14H21O2H5 × HCl
MG 327.82
Rf = 0.71 (1 : 1 : 1 v/v/v Isopropanol/Ethanol/Wasser)
1H-NMR (D2O):
1.58 (m, 2 H, CH 2-CHOrn); 1.90 (m, 2 H, CH2Orn); 2.61 (m, 6 H, NC-CH 2); 2.86 (tr, 4 H, N-CH2); 2.98 (tr, 2 H, N-CH2-CH 2); 3.39 (tr, 2 H, N-CH2); 368 (tr, 1 H, CHOrn).
Ausbeute: 2.1 g (54%)950 mg of sodium hydroxide are dissolved in 20 ml of water. 2 g (11.86 mmol, MW 168.62) ornithine hydrochloride are dissolved in the sodium hydroxide solution. Then 3 ml (45.57 mmol) of acrylonitrile are added dropwise and the mixture is stirred at room temperature for 24 hours. After the addition of 1.7 ml of 25% hydrochloric acid, a solid precipitates out. This is sucked off after cooling.
C 14 H 21 O 2 H 5 × HCl
MG 327.82
R f = 0.71 (1: 1: 1 v / v / v isopropanol / ethanol / water)
1 H-NMR (D 2 O):
1:58 (m, 2 H, C H 2 -CH Orn); 1.90 (m, 2H, CH2Orn ); 2.61 (m, 6 H, NC-C H 2); 2.86 (tr, 4H, N-CH2); 2.98 (tr, 2 H, N-CH 2 -C H 2); 3:39 (tr, 2 H, N-CH 2); 368 (tr, 1H, CH Orn ).
Yield: 2.1 g (54%)

Synthese von N,N,N',N'-Tetra (cyanoethyl)-ornithinSynthesis of N, N, N ', N'-tetra (cyanoethyl) -ornithine

980 mg Natriumhydroxid werden in 20 ml Wasser gelöst. In der Natronlauge werden 2 g (11.86 mmol, MG 168.62) Ornithin Hydrochlorid gelöst. Danach werden 3.9 ml (59.3 mmol) Acrylnitril zugetropft und 8 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Danach werden nochmals 3 ml Acrylnitril zugetropft und weitere 6 Stunden gerührt. Nach der Zugabe von 1.7 ml 25%iger Salzsäure wird das Produkt 3 × mit Essigester ausgeschüttelt. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und einrotiert.
C17H24O2N6 × HCl
MG 344.4182
Rf = 0.84 (1 : 1 : 1 v/v/v Isopropanol/Ethanol/Wasser)
1H-NMR (D2O):
1.60 (m, 2 H, CH 2-CHOrn); 1.92 (m, 2 H, CH2Orn); 2.52 (m, 8 H, NC-CH 2); 2.61 (tr, 4 H, CH2Orn); 2.87 (tr, 4 H, N-CH2); 3.03 (tr, 4 H, N-CH2); 3.38 (m, 1 H, CHOrn).
Ausbeute: 2.4 g (59%)980 mg of sodium hydroxide are dissolved in 20 ml of water. 2 g (11.86 mmol, MW 168.62) ornithine hydrochloride are dissolved in the sodium hydroxide solution. Then 3.9 ml (59.3 mmol) of acrylonitrile are added dropwise and the mixture is stirred at room temperature for 8 days. Then another 3 ml of acrylonitrile are added dropwise and the mixture is stirred for a further 6 hours. After the addition of 1.7 ml of 25% hydrochloric acid, the product is shaken out three times with ethyl acetate. The organic phase is dried over sodium sulfate and evaporated.
C 17 H 24 O 2 N 6 × HCl
MG 344.4182
R f = 0.84 (1: 1: 1 v / v / v isopropanol / ethanol / water)
1 H-NMR (D 2 O):
1.60 (m, 2 H, C H 2 -CH Orn); 1.92 (m, 2H, CH2Orn ); 2:52 (m, 8 H, NC-C H 2); 2.61 (tr, 4H, CH2Orn ); 2.87 (tr, 4H, N-CH2); 3:03 (tr, 4H, N-CH2); 3.38 (m, 1H, CH Orn ).
Yield: 2.4 g (59%)

Beispiel 4Example 4 Liposomen/MicellenformulierungLiposomes / micelle formulation

Dioleoylphosphatidylethanolamin, Dioleoylphosphatidylcholin, Cholesterol oder Cholesteryl­ amin werden in einem organischen Lösungsmittel (z. B. Chloroform) gelöst. Das Lipid aus Beispiel 1 wird als solches in Form seines Salzes, zum Beispiel Trifluoracetat-Salzes in einem organischen Lösungsmittel (z. B. Chloroform) gelöst. Durch Kombination verschiedener Mengen der unterschiedlichen Lösungen werden verschiedene Kompositionen aus Colipiden und kat. Lipid hergestellt. In einem Glaskolben wird mit Hilfe eines Rotationsverdampfers ein dünner Lipidfilm erzeugt. Dieser wird im Hochvakuum von Lösungsmittelresten befreit. Der Film wird mit soviel Wasser oder wäßriger Pufferlösung hydratisiert, daß die Konzentration 2 mg Lipid pro ml Lösung beträgt. Danach wird unter Kühlung mit Ultraschall (3 × 15 min) behandelt. Die Formulierung wird durch einen Filter (Porenweite 0.2 µm) sterilfiltriert.Dioleoylphosphatidylethanolamine, dioleoylphosphatidylcholine, cholesterol or cholesteryl amine are dissolved in an organic solvent (e.g. chloroform). The lipid out Example 1 is used as such in the form of its salt, for example trifluoroacetate salt an organic solvent (e.g. chloroform). By combining different Different compositions from colipids become sets of the different solutions and cat. Lipid made. In a glass flask, use a rotary evaporator creates a thin lipid film. This is freed from solvent residues in a high vacuum. Of the Film is hydrated with so much water or aqueous buffer solution that the concentration Is 2 mg lipid per ml solution. Thereafter, cooling with ultrasound (3 × 15 min) treated. The formulation is sterile filtered through a filter (pore size 0.2 µm).

Beispiel 5Example 5 LipidlösungenLipid solutions

Die Lipide werden als solches und in Form ihrer TFA-Salze mit oder ohne Colipiden in Ethanol gelöst. Durch Mischen mit Wasser erhält man Lösungen unterschiedlicher Zusammensetzungen.The lipids as such and in the form of their TFA salts with or without colipids in ethanol solved. Mixing with water gives different solutions Compositions.

Beispiel 6Example 6 ZellkulturenCell cultures

Die Zelllinien CV-1, Hela S3 und NIH 3T3 werden in "Dulbecco's-modified Eagle's medium" (DMEM), das 10% fötales Kälberserum (FBS), 2 mM L-Glutamin (Gln), 0.1 mM nicht essentielle Aminosäuren (NEAA), 100 U/ml Penicillin und 100 µg/ml Streptomycin enthält, in einem Inkubator (5% CO2-Atmosphäre) kultiviert.The cell lines CV-1, Hela S3 and NIH 3T3 are in "Dulbecco's-modified Eagle's medium" (DMEM), the 10% fetal calf serum (FBS), 2 mM L-glutamine (Gln), 0.1 mM non-essential amino acids (NEAA) , Contains 100 U / ml penicillin and 100 µg / ml streptomycin, in an incubator (5% CO 2 atmosphere).

Beispiel 7Example 7 TransfektionTransfection

Die Zellen werden auf einer 12-Well-Mikrotiterplatte mit einer Dichte von 1-1.5 × 105 ausplattiert und über Nacht zu annähernd 60-80% Konfluenz inkubiert. Um die Zellen in einem "Well" zu transfizieren, werden 1.5 µg von pCMV<Sport<β-Gal in 50 µl serum- und antibiotikafreiem DMEM gelöst. Das kationische Lipid (z. B. 3, 6, 9, 12 µl) als ethanolische Lösung oder Liposomenformulierung wird ebenfalls in 50 µl serum- und antibiotikafreiem DMEM gelöst. Die beiden Lösungen werden in einem Polystyrolbehälter gemischt und für 10-15 min stehengelassen, um die Bildung des Lipid/DNA-Komplexes zu ermöglichen.The cells are plated on a 12-well microtiter plate with a density of 1-1.5 × 10 5 and incubated overnight at approximately 60-80% confluency. In order to transfect the cells in a "well", 1.5 µg of pCMV <Sport <β-Gal are dissolved in 50 µl serum and antibiotic-free DMEM. The cationic lipid (e.g. 3, 6, 9, 12 µl) as an ethanolic solution or liposome formulation is also dissolved in 50 µl serum and antibiotic-free DMEM. The two solutions are mixed in a polystyrene container and left for 10-15 minutes to allow the formation of the lipid / DNA complex.

Während dessen werden die Zellen einmal mit PBS (phosphate buffered saline) gewaschen. Je nach gewünschten Bedingungen (Transfektion im serumfreien oder serumhaltigen Milieu) werden 0.4 ml antibiotikafreies DMEM mit oder ohne Serum zu den Zellen gegeben. Der DNA/Lipid-Komplex wirkt direkt zu den Zellen gegeben und im Brutschrank 6 h inkubiert. Danach wird mit serum- und antibiotikahaltigem DMEM in der Weise auf 1 ml aufgefüllt, daß das Medium eine Endkonzentration von 10% Serum enthält. Die Zellen werden weitere 20 h kultiviert. Danach wird auf β-Galactosidase nach den Angaben des Herstellers des β-Galaktosidase-Assay-Kits getestet. Das entwickelte O-Nitrophenol wird photometrisch bei 405 nm vermessen.During this, the cells are washed once with PBS (phosphate buffered saline). Each according to the desired conditions (transfection in a serum-free or serum-containing environment) 0.4 ml of antibiotic-free DMEM are added to the cells with or without serum. Of the DNA / lipid complex acts directly on the cells and incubated in the incubator for 6 h. Then it is made up to 1 ml with DMEM containing serum and antibiotics in such a way that the medium contains a final concentration of 10% serum. The cells are left for a further 20 h cultured. Thereafter, on β-galactosidase according to the manufacturer's instructions β-galactosidase assay kits tested. The developed O-nitrophenol is photometric at 405 nm measured.

ResultateResults

Folgende Tabelle und folgendes Balkendiagramm zeigen Transfektionseffizienzen am Beispiel von Hela S3 Zellen im Vergleich.The following table and bar chart show transfection efficiencies using the example comparison of Hela S3 cells.

Transfektionsreagenz 1:
N-[2,5-Bis((3-aminopropyl)amino)-1-oxopentyl]-N',N'-dioctadecylethylen-diamin (TFA-Salz) wurde als Liposomenformulierung mit 25 Mol-% Dioleoylphosphatidylethanolamin in wäßriger steriler Lösung eingesetzt. Gesamtlipidmenge: 2 mg/ml.Transfection reagent 1:
N- [2,5-bis ((3-aminopropyl) amino) -1-oxopentyl] -N ', N'-dioctadecylethylenediamine (TFA salt) was used as a liposome formulation with 25 mol% dioleoylphosphatidylethanolamine in aqueous sterile solution . Total amount of lipid: 2 mg / ml.

Transfektionsreagenz 2:
N',N'-Bis-(3-aminopropyl)- N,N-dioctadecylethylendiamin (TFA-Salz) wurde als Liposomenformulierung mit 50 Mol-% Dioleoylphosphatidylethanolamin in wäßriger steriler Lösung eingesetzt. Gesamtlipidmenge: 2 mg/ml.Transfection reagent 2:
N ', N'-bis (3-aminopropyl) - N, N-dioctadecylethylenediamine (TFA salt) was used as a liposome formulation with 50 mol% dioleoylphosphatidylethanolamine in aqueous sterile solution. Total amount of lipid: 2 mg / ml.

Transfektionsreagenz 3:
Lipofectamin™ (Gibco-BRL: Life Technologies Inc.) wurde vom Hersteller erworben.Transfection reagent 3:
Lipofectamine ™ (Gibco-BRL: Life Technologies Inc.) was purchased from the manufacturer.

Absorbtionswerte bei 405 nm Absorbance values at 405 nm

Relative Transfektionseffizienzen Relative transfection efficiencies

Claims (16)

1. Verbindungen der allgemeinen Formel I:
Formel I:
die bei Vorhandensein eines Asymmetriezentrums in der D-, L- oder DL-Form vorliegen, einschließlich ihrer Salze, wobei
R1 ein lipophiler Rest folgender allgemeiner Formel ist:
in welcher R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl, Octadecenyl oder andere Alkylreste, die in allen möglichen Kombinationen gesättigt, ungesättigt, verzweigt, unverzweigt, fluoriert oder nicht fluoriert sein können, und aus 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 oder 30 Kohlenstoffatomen aufgebaut sind,
und X eine der folgenden Gruppierungen ist:
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für den Fall g = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 0 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 0 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 1 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 1 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können, oder
wobei m = 2 und n = 2 sind und für diesen Fall g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, e = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 sein können.
In allen vorstehenden Fällen soll b kleiner oder gleich 1 sein, wenn a = 0 ist und f kleiner oder gleich 1 sein, wenn e = 0 ist.1. Compounds of the general formula I:
Formula I:
which are present in the presence of an asymmetry center in the D, L or DL form, including their salts,
R 1 is a lipophilic radical of the following general formula:
in which R 2 and R 3 independently of one another dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl, octadecenyl or other alkyl radicals which can be saturated, unsaturated, branched, unbranched, fluorinated or non-fluorinated in all possible combinations, and from 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 or 30 carbon atoms are built up,
and X is one of the following groupings:
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and for the case g = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 0 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 0 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 1 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 1 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, or
where m = 2 and n = 2 and in this case g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8, a = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, b = 0 , 1, 2, 3, 4, 5 or 6, c = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, d = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6, e = 0, 1 , 2, 3, 4, 5 or 6, f = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6.
In all of the above cases, b should be less than or equal to 1 if a = 0 and f should be less than or equal to 1 if e = 0. 2. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein kann und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.2. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 can independently be dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl. 3. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein können und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.3. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where h = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 independently of one another dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, Tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl can be. 4. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein können und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.4. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where r = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 independently of one another dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, Tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl can be. 5. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein können und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.5. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 independently of one another dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, Tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl can be. 6. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein können und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.6. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where k = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 independently of one another dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, Tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl can be. 7. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein kann und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.7. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 can independently be dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl. 8. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein kann und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können. 8. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 can independently be dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl. 9. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 und g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein können und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.9. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 independently of one another dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, Tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl can be. 10. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein kann und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können. 10. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 can independently be dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl. 11. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
wobei g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 sein kann und R2 und R3 unabhängig voneinander Dodecyl, Dodecenyl, Tetradecyl, Tetradecenyl, Hexadecyl, Hexadecenyl, Octadecyl oder Octadecenyl sein können.11. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
where g = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 and R 2 and R 3 can independently be dodecyl, dodecenyl, tetradecyl, tetradecenyl, hexadecyl, hexadecenyl, octadecyl or octadecenyl. 12. Verbindungen und ihre Salze entsprechend Claim 1 mit folgenden Strukturen:
12. Compounds and their salts according to Claim 1 with the following structures:
13. Formulierungen, die Liposomen oder Micellen enthalten, die Verbindungen der Ansprüche 1-12 kombiniert mit Colipiden mit oder ohne Colipide, wie z. B. Dioleoylphosphatidylethanolamin (DOPE), Dioleoylphosphatidylcholin, Cholesterol oder Cholesterylamin enthalten.13. Formulations containing liposomes or micelles, the compounds of claims 1-12 combined with colipids with or without colipids, e.g. B. Dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE), Dioleoylphosphatidylcholine, Cholesterol or Contain cholesterylamine. 14. Verfahren zum Einbringen von biologisch wirksamen Verbindungen, wie DNA, RNA, Ribozymen, Antisense-DNA, PNA, Peptiden, Peptoiden und Proteinen in eukariotische Zellen, wobei Verbindungen oder Formulierungen nach einem der Ansprüche 1-13 mit den einzubringenden Verbindungen komplexieren und die entstandenen Komplexe mit eukariotischen Zellen in vivo oder in vitro in Kontakt gebracht werden.14. Process for introducing biologically active compounds, such as DNA, RNA, Ribozymes, antisense DNA, PNA, peptides, peptoids and proteins in eukariotic cells, wherein compounds or formulations according to any one of claims 1-13 with the Complex compounds to be introduced and the resulting complexes with Eukariotic cells are brought into contact in vivo or in vitro. 15. Verwendung der Verbindungen oder Formulierungen nach einem der Ansprüche 1-13 als Reagenz oder Medikament oder als Bestandteil von einem Reagenz oder Medikament zum Einbringen von biologisch wirksamen Verbindungen, wie DNA, RNA, Ribozymen, Antisense- DNA, PNA, Peptiden, Peptoiden und Proteinen in eukariotische Zellen in vivo oder in vitro.15. Use of the compounds or formulations according to any one of claims 1-13 as Reagent or drug or as part of a reagent or drug for Introduction of biologically active compounds, such as DNA, RNA, ribozymes, antisense DNA, PNA, peptides, peptoids and proteins in eukariotic cells in vivo or in vitro. 16. Verwendung der Verbindungen oder Formulierungen nach einem der Ansprüche 1-13 als Reagenz oder Medikament oder als Bestandteil von einem Reagenz oder Medikament zum Einbringen von biologisch wirksamen Verbindungen, wie DNA, RNA, Ribozymen, Antisense- DNA, PNA, Peptiden, Peptoiden und Proteinen in eukariotische Zellen in vivo oder in vitro in Kombination mit sogenannten Enhancern, die deren Wirkung verstärken.16. Use of the compounds or formulations according to any one of claims 1-13 as Reagent or drug or as part of a reagent or drug for Introduction of biologically active compounds, such as DNA, RNA, ribozymes, antisense DNA, PNA, peptides, peptoids and proteins in eukariotic cells in vivo or in vitro in Combination with so-called enhancers that enhance their effect.
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