DE19745668A1 - Coupling of bio-technological functional units - Google Patents

Coupling of bio-technological functional units

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Abstract

Method for coupling bio-technological functional units together or to surfaces comprises covalently bonding mutually complementary oligonucleotides to the components to be coupled and hybridising the oligonucleotides together.

Description

Die Erfindung betrifft die definierte Kopplung von biotechnologischen Funktionseinheiten untereinander oder an (bio)technologische Oberflächen. Anwendungsgebiet der Erfindung ist die Biotechnologie, Bioanalytik und Diagnostik, sowie die Sensorik.The invention relates to the defined coupling of biotechnological Functional units with each other or on (bio) technological surfaces. Field of application of the invention is biotechnology, bioanalytics and Diagnostics and sensors.

Das Problem der Kopplung von biotechologischen Funktionseinheiten untereinander und an Oberflächen besteht darin, daß diese Kopplung eine definierte, reproduzierbare und stabile Bindung darstellen soll. Die häufig eingeschränkte Lebensdauer biomolekularer und biotechnologischer Funktionseinheiten macht aber eine reversible Kopplung wünschenswert. Idealerweise ist also eine solche Kopplung nicht nur stabil und reproduzierbar (in Bezug auf die Herstellung) sondern sie läßt sich auch definiert lösen, ist also regenerierbar.The problem of coupling biotechological functional units among themselves and on surfaces is that this coupling is a should represent defined, reproducible and stable binding. The often limited lifespan of biomolecular and biotechnological Functional units make reversible coupling desirable. Ideally, such a coupling is not only stable and reproducible (in terms of manufacture) but it can also be solve in a defined manner, so it can be regenerated.

In der Literatur finden sich zahlreiche Ansätze und Vorschläge, die eine Kopplung von Funktionseinheiten an Oberflächen oder auch untereinander ermöglicht (z. B. Guillbault). Diese Kopplungen sind entweder durch Adsorption oder Einschluß bewerkstelligt oder werden durch kovalente Bindungen an aktivierte Oberflächen vermittelt. Diese Vorschläge beinhalten in der Regel nicht die Möglichkeit einer Regenerierung. Sie führen darüber hinaus meist zu statistisch verteilten Funktionseinheiten, die Kopplung selbst ist nicht variabel.There are numerous approaches and suggestions in the literature, some of them Coupling of functional units on surfaces or with each other enables (e.g. Guillbault). These couplings are through either Adsorption or inclusion is accomplished or are by covalent Connections to activated surfaces conveyed. These suggestions include usually not the possibility of regeneration. You run about it addition, mostly to statistically distributed functional units, the coupling itself is not variable.

Die Erfindung hat das Ziel, Kopplungen von biotechnologischen Funktionseinheiten untereinander oder an (bio)technologischen Oberflächen zu realisieren, die sowohl stabil als auch reproduzierbar sind. Darüberhinaus soll die Kopplung unter definierten Bedingungen lösbar sein, um die Funktionseinheiten und/oder die Oberfläche wieder vollständig für weitere Funktionalisierungen freizusetzen. The invention has the aim of coupling biotechnological Functional units with each other or on (bio) technological surfaces to realize that are both stable and reproducible. In addition, the coupling should be releasable under defined conditions, to completely restore the functional units and / or the surface for to release further functionalizations.  

Das Ziel der Erfindung wird gemäß Anspruch 1 gelöst, die Unteransprüche sind Vorzugsvarianten.The object of the invention is achieved according to claim 1, the subclaims are preferred variants.

Die erfindungsgemäße Kopplung erlaubt eine gerichtete Kopplung von Funktionseinheiten untereinander bzw. auf einer Oberfläche. Dadurch lassen sich definierte Schichten erzeugen.The coupling according to the invention allows a directional coupling of Functional units with each other or on a surface. Let it through create defined layers.

Ebenso ist es möglich, lateral zu strukturieren, indem z. B. durch Photoaktivierung bestimmte Bereiche mit unterschiedlichen Oligonukleotiden belegt werden. Dadurch entstehen funktionelle Arrays, deren Funktionalitäten einzeln abgefragt oder gezielt in Korrespondenz gebracht werden können. Hiermit ergibt sich die Möglichkeit, eine Vielzahl von Substanzen parallel zu untersuchen, z. B. aus einer Blutprobe oder einem Fermentationsextrakt, ohne daß eine Trennung oder eine Kompartimentierung notwendig wird (Diagnostischer Chip oder Screening).It is also possible to structure laterally by z. B. by Photoactivation specific areas with different oligonucleotides be occupied. This creates functional arrays whose Functionalities queried individually or brought into correspondence in a targeted manner can be. This creates the possibility of a variety of Investigate substances in parallel, e.g. B. from a blood sample or Fermentation extract without separation or compartmentalization becomes necessary (diagnostic chip or screening).

Die Kopplung kann durch die Wahl der Nucleotidzusammensetzung in der Stärke bestimmt werden, so daß gezielt Kopplungen früher oder später, d. h. nach Wahl der Bedingungen, gelöst werden können. Das Lösen der Kopplung kann durch basische Pufferlösungen, durch schwache Laugen oder durch Erhitzen über den Schmelzpunkt des Hybrids erreicht werden.The coupling can be done by the choice of nucleotide composition in strength be determined so that targeted couplings sooner or later, d. H. after Choice of conditions that can be solved. The coupling can be released by basic buffer solutions, by weak alkalis or by heating above the melting point of the hybrid.

Die Erfindung soll nachfolgend durch Ausführungsbeispiele näher erläutert werden.The invention is explained in more detail below by means of exemplary embodiments will.

AusführungsbeispieleEmbodiments 1. Reproduzierbarer Wechsel einer sensitiven Schicht für Immunoassays1. Reproducible change of a sensitive layer for immunoassays

Es wurden zwei kompetitive Assays für verschiedene Analyte auf derselben Oberfläche durchgeführt. Das Prinzip ist in der Abb. 1 wiedergegeben. Es wurde eine Sensoroberfläche (Tantaloxid-Lichtwellenleiter, Gitterkoppler) mit einem Oligonucleotid (DNA 35-mer, Template) durch kovalente Kopplung am 5'-Ende modifiziert. An das 3'-Ende wurde ein 14-mer (DNA) hybridisiert, das mit 2,4-Dichlorophenoxyessigsäure (2,4-D) am 5'- Ende modifiziert war. Hierdurch entsteht eine Oberfläche, die mit 2,4-D belegt ist. Auf dieser läßt sich mittels Monoklonaler Antikörper (MAk) ein kompetitiver Immunoassay durchführen. In der Abb. 2 sind Bindung eines MAk gegen 2,4-D (a) und unterdrückte Bindung (b) durch einen Überschuß an 2,4-D wiedergegeben. Zwischen allen Schritten wurde regeneriert, in dem der Doppelstrang durch NaOH gelöst wurde. Danach wurde die Oberfläche neu mit markiertem Oligomer durch Hybridisierung belegt. Anschließend wurden dieselben Schritte mit einem Atrazin-modifizierten Oligomer (14-mer mit derselben Basenzusammensetzung wie das 2,4-D markierte) wiederholt. (c) und (d) gibt die Bindung des Anti-Atrazin-Antikörpers in verschiedenen Konzentrationen wieder, (e) zeigt die Inhibition der Bindung in Gegenwart von Atrazin.Two competitive assays for different analytes were performed on the same surface. The principle is shown in Fig. 1. A sensor surface (tantalum oxide optical fiber, grating coupler) with an oligonucleotide (DNA 35-mer, template) was modified by covalent coupling at the 5 'end. A 14-mer (DNA) was hybridized to the 3'-end and modified with 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) at the 5'-end. This creates a surface that is covered with 2,4-D. A competitive immunoassay can be carried out on this using monoclonal antibodies (MAb). Fig. 2 shows binding of a MAb against 2,4-D (a) and suppressed binding (b) by an excess of 2,4-D. Regeneration between all steps was carried out by dissolving the double strand with NaOH. The surface was then newly coated with labeled oligomer by hybridization. The same steps were then repeated with an atrazine-modified oligomer (14-mer with the same base composition as the 2,4-D labeled). (c) and (d) represent the binding of the anti-atrazine antibody in different concentrations, (e) shows the inhibition of the binding in the presence of atrazine.

Unspezifische Bindung wurde nicht beobachtet, wenn eine kovalente Kopplung des Template-Oligomers durchgeführt wurde. Abb. 3 zeigt den vollständigen kompetitiven Assay am Beispiel Atrazin; der Assay war bzgl. Empfindlichkeit nicht optimiert.Unspecific binding was not observed when the template oligomer was covalently coupled. Fig. 3 shows the complete competitive assay using the example of atrazine; the assay was not optimized for sensitivity.

Abschließend wurden weitere Oligonucleotide, die überlappend komplementär waren, immobilisiert (f).In conclusion, other oligonucleotides that overlap were complementary were immobilized.

2. Kopplung von Enzymen an Elektroden2. Coupling of enzymes to electrodes

Ein Enzym (z. B. eine Oxidoreduktase) wird mit einem Oligonucleotid, vorzugsweise aus PNA, kovalent verknüpft, wobei das 5'-Ende (bzw. C- Terminus) am Enzym gekoppelt ist. Goldelektroden werden über 5'-Thiol- modifizierte Oligomere mit komplementärer Sequenz vorbereitet. Die modifizierten Enzyme binden spezifisch an die Goldelektrode mit der die Aktivität z. B. durch Substratumsatz nachgewiesen werden kann.An enzyme (e.g. an oxidoreductase) is mixed with an oligonucleotide, preferably from PNA, covalently linked, the 5 'end (or C- Terminus) is coupled to the enzyme. Gold electrodes are over 5'-thiol modified oligomers with complementary sequence prepared. The modified enzymes bind specifically to the gold electrode with which the Activity z. B. can be detected by substrate turnover.

3. Kopplung von Funktionseinheiten untereinander3. Coupling of functional units with each other

Die kovalente Anknüpfung eines Nucleotidstranges an ein Enzym (z. B. Peroxidase, alkalische Phosphatase oder Galaktosidase) und die kovalente Anknüpfung des dazu koplementären Stranges an einen Antikörper läßt Konjugate entstehen, die als Marker einsetzbar sind und durch Bedingungen, die den Doppelstrang lösen ohne die Proteine zu zerstören z. B., geringe Ionenstärke oder erhöhte Temperatur, wieder zerlegen.The covalent attachment of a nucleotide strand to an enzyme (e.g. Peroxidase, alkaline phosphatase or galactosidase) and the covalent Linking the complementary strand to an antibody Conjugates are created that can be used as markers and are subject to conditions, that solve the double strand without destroying the proteins z. B., low Ionic strength or elevated temperature, disassemble again.

Auf dieselbe Weise lassen sich Bi-Enzyme aus Oxidoreduktasen herstellen, die z. B. als Redox-Zyklus verstärkend aktiv sind. In the same way, bi-enzymes can be produced from oxidoreductases, the z. B. are active as a redox cycle.  

Erläuterung der AbbildungenExplanation of the pictures

Abb. 1 zeigt den prinzipiellen Verlauf des Experimentes zur Funktionalisierung mit 2,4-Dichlorophenoxyessigsäure (2,4-D) und Anbindung eines spezifischen Antikörpers gegen 2,4-D (oben), Regenerierung (mitte) und wiederholten Funktionalisierung mit neuer Funktionalität, nämlich Atrazin (Atrazinderivat: Aminohexylatrazin, AHA), sowie Anbindung eines spezifischen Antikörpers gegen Atrazin. Dies entspricht den Bindungssignalen (a) und (c) oder (d) der Abb. 2. Fig. 1 shows the basic course of the experiment for functionalization with 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and connection of a specific antibody against 2,4-D (top), regeneration (middle) and repeated functionalization with new functionality, namely atrazine (atrazine derivative: aminohexylatrazine, AHA), as well as binding of a specific antibody against atrazine. This corresponds to the binding signals (a) and (c) or (d) of Fig. 2.

Abb. 2. Meßsignal eines Gitterkoppler-Sensors, der effektive Brechzahländerungen an der Oberfläche hervorgerufen durch Anlagerung detektiert. Ein DNA-Oligomer (14-mer) wurde auf der Oberfläche immobilisiert. Komplementäre DNA Oligomere, die mit 2,4-D oder AHA modifiziert waren, hybridisieren an die Oberfläche. Fig. 2. Measurement signal from a grating coupler sensor that detects effective changes in refractive index on the surface caused by accumulation. A DNA oligomer (14-mer) was immobilized on the surface. Complementary DNA oligomers modified with 2,4-D or AHA hybridize to the surface.

(a) Hybridisierung des 2,4-D-Oligomer und anschließende Zugabe des 2,4-D- Antikörpers, (b) zusätzlich wurde 2,4-D dazugegeben und somit die Bindung des Antikörpers unterbunden. (c) Hybridisierung des AHA-Oligomer und anschließende Zugabe des Atrazin-Antikörpers, (d) dasselbe mit geringerer Antikörperkonzentration, (e) mit zusätzlicher Zugabe von Atrazin, (f) stufenweise Hybridisierung überlappender Oligomere zeigt, daß ein weiterer Aufbau der Schichten für neue Funktionalitäten möglich ist.(a) Hybridization of the 2,4-D-oligomer and subsequent addition of the 2,4-D- Antibody, (b) additional 2,4-D was added and thus the binding of the antibody prevented. (c) Hybridization of the AHA oligomer and then adding the atrazine antibody, (d) the same with less Antibody concentration, (e) with additional addition of atrazine, (f) gradual hybridization of overlapping oligomers shows that another Layers of layers for new functionalities is possible.

Abb. 3. Ein vollständiger kompetitiver Immunoassay für Atrazin auf der Basis einer Nucleinsäure-modifizierten Oberfläche, gemessen wie in Abb. 2. Fig. 3. A complete competitive atrazine immunoassay based on a nucleic acid modified surface, measured as in Fig. 2.

Claims (27)

1. Definierte Kopplung von biotechnologischen Funktionseinheiten untereinander oder an (bio)technologische Oberflächen, dadurch gekennzeichnet, daß die miteinander zu verbindenden Komponenten jeweils separat mit zueinander komplementären Oligonukleotid- oder Nucleinsäuresträngen (Linker) kovalent verbunden werden und nachfolgend die Kopplung durch Mischen der Komponenten unter Bildung von Hybriden erfolgt.1. Defined coupling of biotechnological functional units to one another or to (bio) technological surfaces, characterized in that the components to be connected to one another are each covalently connected separately with complementary oligonucleotide or nucleic acid strands (linkers) and subsequently the coupling by mixing the components with formation done by hybrids. 1a. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Oligonucleotide DNA, RNA oder Peptid-Nucleinsäuren (PNA) sind, oder Derivate davon, die zur Stabilisierung gegen Nucleasen modifiziert wurden.1a. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the Oligonucleotides are DNA, RNA or peptide nucleic acids (PNA), or Derivatives thereof that have been modified to stabilize against nucleases. 1b. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die gebildeten Hybride jede Art von Homo- und Heterohybriden, bevorzugt DNA/DNA, DNA/PNA, RNA/PNA oder modDNA/DNA, darstellen.1b. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the hybrids formed any type of homo- and heterohybrids, preferred DNA / DNA, DNA / PNA, RNA / PNA or modDNA / DNA. 2. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Enzyme oder Enzymkomplexe sind.2. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units are enzymes or enzyme complexes. 3. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Antikörper oder Antikörperfragmente oder Antigene sind.3. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units antibodies or antibody fragments or are antigens. 4. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Polysaccharide oder Lipide sind.4. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units are polysaccharides or lipids. 5. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Rezeptoren oder Lectine sind.5. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units are receptors or lectins. 6. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten eine Rezeptor-Transport-Enzym-Kaskade darstellen oder durch die Kopplung eine solche fixiert wird.6. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units a receptor transport enzyme cascade represent or is fixed by the coupling. 7. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Phagen, Mikroorganismen oder ganze (eukaryontische) Zellen sind. 7. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units phages, microorganisms or whole are (eukaryotic) cells.   8. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten funktionelle oder modifizierte funktionelle Nukleinsäuren, namentlich Ribozyme oder Aptamere, sind.8. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units functional or modified are functional nucleic acids, namely ribozymes or aptamers. 9. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Haptene, Hormone, Agonisten oder Antagonisten sind.9. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units haptens, hormones, agonists or Are antagonists. 10. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Peptide oder andere Leitstrukturen sind.10. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units peptides or other lead structures are. 11. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Enzymsubstrate oder -inhibitoren sind.11. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units enzyme substrates or inhibitors are. 12. Definierte Kopplung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die biotechnologischen Funktionseinheiten Marker oder Label sind, so z. B. Fluorochrome, Redoxlabel oder aber auch in diesem Sinne verwendete Enzyme, oder Spin-label (für NMR, ESR) sind.12. Defined coupling according to claim 1, characterized in that the biotechnological functional units are markers or labels, e.g. B. Fluorochromes, redox labels or also enzymes used in this sense, or spin-label (for NMR, ESR). 13. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-12, dadurch gekennzeichnet, daß die (bio)technologische Oberfläche durch einen festen oder löslichen anorganischen oder organischen polymeren Träger gegeben ist.13. Defined coupling according to claim 1-12, characterized in that the (bio) technological surface through a solid or soluble inorganic or organic polymeric carrier is given. 14. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-12, dadurch gekennzeichnet, daß die (bio)technologische Oberfläche durch einen Silizium-Wafer, eine Glasoberfläche oder Sol/Gelmaterialien gegeben ist.14. Defined coupling according to claim 1-12, characterized in that the (bio) technological surface through a silicon wafer, a Glass surface or sol / gel materials is given. 15. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-12, dadurch gekennzeichnet, daß die (bio)technologische Oberfläche durch Kunststoffe in Form von Titerplatten oder Reaktionsgefäßen, Durchflußreaktoren, bzw. darin enthaltenes Trägermaterial, oder Schläuchen gegeben ist.15. Defined coupling according to claim 1-12, characterized in that the (bio) technological surface through plastics in the form of titer plates or reaction vessels, flow reactors, or contained therein Carrier material, or hoses is given. 16. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-12, dadurch gekennzeichnet, daß die (bio)technologische Oberfläche aus Gold oder einem anderen Edelmetall, z. B. in Form von Goldpartikeln (für EM-Markierung), besteht. 16. Defined coupling according to claim 1-12, characterized in that the (bio) technological surface made of gold or another precious metal, e.g. B. in the form of gold particles (for EM marking).   17. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-12, dadurch gekennzeichnet, daß die (bio)technologische Oberfläche aus Latex oder Derivaten besteht, oder aus ggf. beschichteten oder aktivierten magnetische Partikeln, u. a. für chromatographische oder reinigende Zwecke.17. Defined coupling according to claim 1-12, characterized in that the (bio) technological surface consists of latex or derivatives, or of optionally coated or activated magnetic particles, u. a. For chromatographic or purifying purposes. 18. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-12, dadurch gekennzeichnet, daß die (bio)technologische Oberfläche die Ausformung eines Transducers hat; das sind Elektroden aller Art oder optische Sensoren, Lichtwellenleiter oder beschichtete Lichtwellenleiter, namentlich Gold und Silberbeschichtungen für SPR, Piezokristalle und Oberflächenschwinger.18. Defined coupling according to claim 1-12, characterized in that the (bio) technological surface has the shape of a transducer; the are electrodes of all kinds or optical sensors, optical fibers or coated optical fibers, namely gold and silver coatings for SPR, piezo crystals and surface vibrators. 19. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-12, dadurch gekennzeichnet, daß die (bio)technologische Oberfläche die Ausformung einer AFM-Spitze oder einer SNOM-Spitze oder einer SEM-Spitze (Scanning Electrochemical Microscopy) oder einer anderen Scanning Probe Microscopy-Spitze hat.19. Defined coupling according to claim 1-12, characterized in that the (bio) technological surface the formation of an AFM tip or a SNOM tip or a SEM tip (Scanning Electrochemical Microscopy) or other scanning probe microscopy tip. 20. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-19, dadurch gekennzeichnet, daß der Abstand mehrerer Funktionseinheiten durch die Länge mindestens eines Nukleotidstranges variiert wird.20. Defined coupling according to claim 1-19, characterized in that the Distance of several functional units due to the length of at least one Nucleotide strand is varied. 21. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-19, dadurch gekennzeichnet, daß der Abstand der Funktionseinheiten von einer Oberfläche durch die Länge mindestens eines Nukleotidstranges variiert wird.21. Defined coupling according to claim 1-19, characterized in that the Distance of the functional units from a surface by the length at least one nucleotide strand is varied. 22. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-21, dadurch gekennzeichnet, daß die verwendeten Nukleinsäuren gegen enzymatischen Abbau durch chemische Modifikation oder Änderung des Phosphorzuckerrückgrates oder Verwendung von enzymatisch nicht erkennbaren veränderten Nucleotidbausteinen stabilisiert sind.22. Defined coupling according to claim 1-21, characterized in that the used nucleic acids against enzymatic degradation by chemical Modification or modification of the phosphorus sugar backbone or use of Stabilized modified nucleotide building blocks not enzymatically stabilized are. 23. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-22, dadurch gekennzeichnet, daß die Stabilität der Kopplung durch die Anzahl und Position der komplementären Basen bestimmt wird.23. Defined coupling according to claim 1-22, characterized in that the Stability of coupling through the number and position of the complementary Bases is determined. 24. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-23, dadurch gekennzeichnet, daß durch die Koppler ein Array mit vorbestimmten unterschiedlichen Stabilitäten und damit abrufbaren Funktionseinheiten erzeugt wird. 24. Defined coupling according to claim 1-23, characterized in that through the coupler an array with predetermined different Stabilities and thus retrievable functional units is generated.   25. Definierte Kopplung nach Anspruch 1-24, dadurch gekennzeichnet, daß die Kopplung durch Mischung der mit einzelsträngigen Nucleinsäuren versehenen Funktionseinheiten bzw. Oberflächen unter mehr oder weniger stringenten Bedingungen durchgeführt wird, d. h. nur mehr oder weniger vollständig passende Basenpaarung stabile Hybride erzeugen.25. Defined coupling according to claim 1-24, characterized in that the Coupling by mixing the single-stranded nucleic acids Functional units or surfaces under more or less stringent Conditions is performed, d. H. just more or less complete Matching base pairing create stable hybrids.
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