DE19516673A1 - Vaccines against human, pref. mucin expressing, tumours - Google Patents

Vaccines against human, pref. mucin expressing, tumours

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Abstract

Novel vaccines against human tumours, comprise irradiated EBV-immortalised autologous human B-cells that have been: (a) transfected with a vector contg. segments of the human mucin gene MUC1; and (b) treated with a glycosylation inhibitor so that they express tumour-associated epitopes. Also claimed is the prodn. of a vaccine as above by isolating B-cells from the peripheral blood of a patient, immortalising the B-cells with EBV (produced from a cell line), transfecting the cells with pRep4MUC1 by electroporation, incubating the cells for 24-48 hr. in a culture medium, contg. 5 mM of a glycosylation inhibitor, and irradiating the cells with at least 10000 rad.

Description

Die Erfindung betrifft eine zelluläre Vakzine gegen Tumorerkrankungen und ihre Verwendung. Anwendungsgebiete sind die Medizin und die Gentechnik.The invention relates to a cellular vaccine against Tumor diseases and their use. Areas of application are medicine and genetic engineering.

Zelluläre Vakzinen gegen Tumorerkrankungen sind seit längerem bekannt. Die klassische und vielfach klinisch eingesetzte zelluläre Vakzine besteht aus einem Gemisch von bestrahlten Tumorzellen und Adjuvantien wie beispielsweise Lysate von Bacillus Calmette-Guerin (BCG) oder Corynebacterium Parvum. Nach zwei Jahrzehnten klinischer Erprobung läßt sich zusammenfassen, daß diese Vakzine keine ausreichende Wirkung zeigt (siehe Übersichtsartikel: Oettgen, H. und Old, L., The History of Cancer Immunotherapy, in: Biological Therapy of Cancer, Eds. V. deVita, S. Hellman and S. Rosenberg, J.B. Lippincott Company 1991, S. 87-119).Cellular vaccines against tumor diseases have been around for a long time known. The classic and widely used clinically cellular vaccine consists of a mixture of irradiated Tumor cells and adjuvants such as lysates from Bacillus Calmette-Guerin (BCG) or Corynebacterium Parvum. To two decades of clinical trials can be summarized that this vaccine is not sufficiently effective (see Review article: Oettgen, H. and Old, L., The History of Cancer Immunotherapy, in: Biological Therapy of Cancer, Eds. V. deVita, S. Hellman and S. Rosenberg, J.B. Lippincott Company 1991, pp. 87-119).

In jüngerer Zeit wurden Versuche unternommen, Tumorzellen genetisch zu modifizieren, mit dem Ziel, eine Immunantwort gegen den Tumor auszulösen. Verwendet werden dazu vor allem Gene für Zytokine oder kostimulierende Moleküle allein oder in Kombination. Der Nachteil dieser Vakzine besteht darin, daß zu ihrer Herstellung Tumorzellen verwendet werden müssen. Diese stellen ein Potential für eine mögliche Metastasenbildung dar, und somit stellt diese Vakzine bei ihrer Anwendung ein Risiko für den Patienten dar. Außerdem ist nicht klar definiert, gegen welche immunogenen Strukturen auf den Tumorzellen eine Immunantwort ausgelöst wird. Erfolgt z. B. eine Reaktion gegen Autoantigene (immunogene Strukturen, die nicht nur auf Tumorzellen, sondern auch auf gesunden Zellen vorhanden sind), ist es möglich, daß Autoimmunreaktionen durch diese Art von Vakzine ausgelöst werden.More recently, attempts have been made to tumor cells genetically modify, with the aim of an immune response against trigger the tumor. Genes are primarily used for this Cytokines or costimulatory molecules alone or in Combination. The disadvantage of this vaccine is that too tumor cells must be used in their production. These represent a potential for possible metastasis formation, and thus this vaccine poses a risk when used for the patient. It is also not clearly defined against which immunogenic structures on the tumor cells Immune response is triggered. Is z. B. a reaction against Autoantigens (immunogenic structures not only based on Tumor cells, but also on healthy cells), it is possible that autoimmune reactions can be caused by this type of Vaccine will be triggered.

Deshalb wurde in letzter Zeit darauf fokussiert, tumorspezifische Antigene zu finden. Ein solches Antigen ist das Muzinmolekül. That’s why there’s been a lot of focus lately to find tumor-specific antigens. Such is an antigen the mucin molecule.  

Das Glykoprotein Muzin, kodiert durch das Gen MUC1, ist sowohl auf der Oberfläche von Pankreas-, Mamma-, Kolon-, Parotis- und Ovarialkarzinomen als auch auf den entsprechenden gesunden Zellen exprimiert. Die Besonderheit von MUC1 liegt darin, daß es 20 bis 100 "Tandem repeats" enthält. Ein "Tandem repeat" besteht aus 60 Nukleotiden, die ein Polypeptid von 20 Aminosäuren kodieren (s. Abb. 1).The glycoprotein mucin, encoded by the MUC1 gene, is expressed on the surface of pancreatic, breast, colon, parotid and ovarian carcinomas as well as on the corresponding healthy cells. The specialty of MUC1 is that it contains 20 to 100 "tandem repeats". A "tandem repeat" consists of 60 nucleotides that encode a polypeptide of 20 amino acids (see Fig. 1).

Infolge einer unvollständigen Muzin-Glykosylierung im Fall der malignen Entartung liegen auf Tumorzellen jedoch Muzin-Peptid- Epitope frei, die vom Immunsystem, insbesondere von T-Zellen, als fremd erkannt werden können (diese Peptid-Epitope sind auf gesunden Zellen von Kohlenhydraten "verdeckt" und lösen deshalb bei normalen Zellen keine Immunreaktion aus). Diese Muzin- Epitope sind für eine Stimulierung des Immunsystems geeignet.As a result of incomplete mucin glycosylation in the case of malignant degeneration lie on tumor cells, however, mucin peptide Epitopes free from the immune system, especially from T cells, can be recognized as foreign (these peptide epitopes are on healthy cells are "hidden" by carbohydrates and therefore dissolve no immune response from normal cells). This muzin Epitopes are suitable for stimulating the immune system.

Es hat bereits Versuche gegeben, Muzin-Epitope mittels Gentransfer in humanen Zellen für in vitro Studien zur Expression zu bringen. Der Vektor pDKOF/MUC1, der dazu verwendet wurde (Jerome K.R., D. Bu, and O.J. Finn. 1992. Expression of tumor-associated epitopes on Epstein-Barr Virus-immortalized B-cells and Burkitts lymphomas transfected with epithelial mucin complementary DNA. Canc. Res. 52: 5985-5990) führt jedoch in humanen Zellen nicht zu einer effizienten und stabilen Muzin- Epitop-Expression und ist somit für die Verwendung in einer Vakzine nicht geeignet.Attempts have been made to use mucin epitopes Gene transfer in human cells for in vitro studies on Bring expression. The vector pDKOF / MUC1 used for this (Jerome K.R., D. Bu, and O.J. Finn. 1992. Expression of tumor-associated epitopes on Epstein-Barr Virus-immortalized B-cells and Burkitts lymphomas transfected with epithelial mucin complementary DNA. Canc. Res. 52: 5985-5990), however, leads to human cells fail to become an efficient and stable muzin Epitope expression and is therefore for use in one Vaccine not suitable.

Die Erfindung hat das Ziel, die Nachteile der bekannten zellulären Vakzinen zu beseitigen. Es soll gentechnisch eine Vakzine entwickelt werden, die das Immunsystem gegen bereits in Körper vorhandene Tumorzellen spezifisch stimuliert und zur Verkleinerung bzw. Beseitigung des Tumors führen soll.The invention aims to overcome the disadvantages of the known eliminate cellular vaccines. It is said to be genetically engineered Vaccines are being developed that are already against the immune system Existing tumor cells specifically stimulated and Shrinking or eliminating the tumor.

Dieses Ziel wird durch eine Vakzine gemäß Anspruch 1 realisiert, die Unteransprüche sind Vorzugsvarianten.This goal is achieved by a vaccine according to claim 1, the subclaims are preferred variants.

Die Vakzine besteht aus bestrahlten humanen autologen, EBV- immortalisierten B-Zellen, die mit Abschnitten des MUC1-Gens per Elektroporation (unter Verwendung des Plasmides pRep/MUC1) transfiziert werden und mit dem Glykosylierungsinhibitor Phenyl N-Acetyl-α-D-Galactosaminide (Phenyl-GalNac) behandelt werden.The vaccine consists of irradiated human autologous, EBV immortalized B cells that are linked to sections of the MUC1 gene per Electroporation (using plasmid pRep / MUC1)  be transfected and with the glycosylation inhibitor phenyl N-acetyl-α-D-galactosaminides (Phenyl-GalNac) are treated.

EBV-immortalisierte B-Zellen stellen, anders als Tumorzellen, für den Patienten kein Risiko dar, weil ca. 90% aller Patienten eine starke Immunreaktion gegen EBV aufweisen und nur solche Patienten nach entsprechender Vorprüfung einer Therapie zugeführt werden.Unlike tumor cells, EBV-immortalized B cells represent no risk for the patient because approx. 90% of all patients have a strong immune response to EBV and only such Patients after appropriate pre-examination of therapy be fed.

Die Wirksamkeit der Vakzine beruht auf folgendem Prinzip: Infolge der unvollständigen Glykosylierung des Glykoproteins Muzin im Fall der malignen Entartung liegen auf Tumorzellen Peptid-Epitope frei, die vom Immunsystem als fremd erkannt werden können. Die dadurch ausgelöste Aktivierung des Immunsystems reicht bei Tumorpatienten nicht aus, um den Tumor zu beseitigen, weil keine Costimulation erfolgt. Mit der hier beanspruchten Vakzine wird eine effiziente, tumorspezifische Immunantwort, die auf der Aktivierung Muzinepitop-spezifischer, zytotoxischer T-Zellen beruht und dadurch zur Verkleinerung bzw. zur Beseitigung des Tumors führt, in Tumorpatienten ausgelöst. EBV immortalisierte B-Zellen exprimieren, im Gegensatz zu Tumorzellen, die für eine optimale T-Zellaktivierung notwendigen kostimulierenden Moleküle, wie z. B. B7.1 und B7.2 sowie ICAM1 und LFA3. Darüber hinaus produzieren sie Interleukin-12 und haben einen Adjuvant-Effekt. Werden EBV immortalisierte B- Zellen mit MUC1 (22 Kopien der "Tamdem repeat"-Sequenz von MUC1 kloniert in den Plasmidvektor pRep4) transfiziert und mit dem Glykosylierungsinhibator Phenyl-GalNac behandelt, exprimieren diese die tumorassoziierten Epitope. Die auf diesem Wege erreichte Kombination von Bereitstellung von kostimulierenden Molekülen und einer genügenden Anzahl von tumorassoziierten Epitopen führt in vivo zu einem Anstieg der Muzinepitop­ spezifischen T-Zellen, die für eine Tumorabstoßung erforderlich sind. Die Vakzine ist für die Therapie bei Patienten mit Muzin (MUC1) exprimierenden Tumoren einsetzbar. Die Anwendung dieser Vakzine kann ebenfalls bei Gesunden zur Vorbeugung eines Muzin (MUC1) exprimierenden Tumors erfolgen. Der besondere Vorteil der erfindungsgemäßen Vakzine gegenüber bisher verwendeten zellulären Vakzinen besteht darin, daß keine Tumorzellen eingesetzt werden, sondern nur ein klar definiertes Antigen.The effectiveness of the vaccine is based on the following principle: As a result of the incomplete glycosylation of the glycoprotein Mucin in the case of malignant degeneration lie on tumor cells Free peptide epitopes recognized by the immune system as foreign can be. The activation of the Immune system in tumor patients is not enough to the tumor to be eliminated because there is no cost simulation. With this one claimed vaccine becomes an efficient, tumor-specific Immune response based on the activation of mucine epitope-specific, is based on cytotoxic T cells and thus for reduction or leads to the elimination of the tumor, triggered in tumor patients. In contrast, express EBV immortalized B cells Tumor cells necessary for optimal T cell activation costimulatory molecules, such as B. B7.1 and B7.2 and ICAM1 and LFA3. They also produce Interleukin-12 and have an adjuvant effect. Are EBV immortalized B- Cells with MUC1 (22 copies of the "Tamdem repeat" sequence of MUC1 cloned into the plasmid vector pRep4) and transfected with the Glycosylation inhibitor treated phenyl-GalNac, express these are the tumor-associated epitopes. That way achieved combination of providing costimulating Molecules and a sufficient number of tumor-associated Epitopes lead to an increase in mucine epitope in vivo specific T cells required for tumor rejection are. The vaccine is for therapy in patients with mucin (MUC1) expressing tumors. The application of this Vaccine can also be used to prevent mucin in healthy people (MUC1) expressing tumor. The special advantage of  Vaccine according to the invention compared to previously used Cellular vaccines consist of no tumor cells are used, but only a clearly defined antigen.

Die Erkennung dieser Muzin-Peptid-Epitope durch zytotoxische T- Zellen folgt nicht der bekannten klassischen Weg der Erkennung von kurzen Peptid-Epitopen in Verbindung mit dem HLA-Komplex. Die Muzin-Peptid-Epitope werden ohne "Hilfe" des HLA-Komplexes von den T-Zellen erkannt. Diese Besonderheit bei der Erkennung der tumorassoziierten Muzin-Epitope erklärt sich aus der oben genannten besonderen "Tandem repeat"-Struktur des Moleküls sowie der hohen Dichte des Antigens auf der präsentierenden Zelle. Die mehrfache Wiederholung des immunogenen Peptid-Epitop-Motivs führt zu einer Aktivierung der T-Zellen durch ein "Crosslinking" der T-Zell-Rezeptoren, ohne daß der HLA-Komplex beteiligt sein muß. Das ermöglicht den Einsatz der Vakzine, die die entsprechenden Muzin-Epitope enthält, bei jedem Patienten, unabhängig vom HLA-Typ. Das bedeutet einen Vorteil gegenüber Vakzinen, die nur bei Patienten mit dem jeweiligen für die Präsentation des Epitopes passenden HLA-Typ verabreicht werden können.Detection of these mucin peptide epitopes by cytotoxic T- Cells do not follow the well-known classic way of recognition of short peptide epitopes in connection with the HLA complex. The mucin peptide epitopes are created without "help" from the HLA complex recognized by the T cells. This peculiarity in the detection the tumor-associated mucin epitope can be explained from the above mentioned special "tandem repeat" structure of the molecule as well the high density of the antigen on the presenting cell. The repeated repetition of the immunogenic peptide epitope motif leads to an activation of the T cells by "crosslinking" of the T cell receptors without the HLA complex being involved got to. This enables the use of the vaccine, which the contains corresponding mucin epitopes in each patient, regardless of the HLA type. That means an advantage over Vaccines that are only available to patients with the respective for the Presentation of the epitope appropriate HLA type can be administered can.

Die Verwendung des Gens für Muzin bzw. von 15-30 "Tandem repeats" in der Vakzine ermöglicht die Expression einer hohen Anzahl der Epitope und somit ihr Funktionieren auf dem Prinzip des "Crosslinkings" der T-Zell-Rezeptoren.The use of the gene for mucin or from 15-30 "tandem repeats "in the vaccine enables expression of a high Number of epitopes and thus their functioning on the principle the "crosslinking" of the T cell receptors.

Die mit pRep4/MUC1 transfizierten Zellen werden mit dem Glykolysierungsinhibitor Phenyl-N-Acetyl-α-D-Galactosaminide für 24 bis 48 Stunden behandelt, damit die immunogenen, tumorassoziierten Muzin-Epitope exprimiert werden. Die Expression kann durch eine FACS-Analyse mittels Muzin-Epitop­ spezifischer Antikörper überprüft werden. Die so hergestellten Zellen werden bestrahlt (mindestens mit 10 000 rad). Auch nach Bestrahlung (bis zu 20 000 rad) exprimieren die Zellen die relevanten Epitope.The cells transfected with pRep4 / MUC1 are treated with the Glycolysis inhibitor phenyl-N-acetyl-α-D-galactosaminide treated for 24 to 48 hours so that the immunogenic, tumor-associated mucin epitopes are expressed. The Expression can be determined by FACS analysis using a mucin epitope specific antibodies are checked. The so produced Cells are irradiated (at least with 10,000 rad). Even after Irradiation (up to 20,000 rad) express the cells relevant epitopes.

Bevorzugt ist die Behandlung von Mamma-, Pankreas-, Ovarial-, Colon-, Parotis- und Lungentumoren. Die Behandlung erfolgt gewöhnlich mittels subkutaner Applikation der Vakzine in einer Konzentration von 5 × 10⁷ Zellen im Abstand von 3 Wochen bei einer Gesamtbehandlungszeit von 4 Monaten.Treatment of breast, pancreas, ovarian,  Colon, parotid and lung tumors. The treatment is done usually by subcutaneous application of the vaccine in one Concentration of 5 × 10⁷ cells every 3 weeks a total treatment time of 4 months.

Gegenstand der Erfindung ist auch der Vektor zur Transfektion der EBV-immortalisierten B-Zellen, der aus folgenden wesentlichen Bestandteilen besteht:The invention also relates to the vector for transfection of the EBV immortalized B cells, from the following essential components are:

  • - Promotor RSV-LTR für Muzin (MUC1)-Genabschnitte- RSV-LTR promoter for mucin (MUC1) gene segments
  • - Hygromycin-Resistenzgen unter dem Promotor TK- Hygromycin resistance gene under the TK promoter
  • - EBNA-1-Gen- EBNA-1 gene
  • - Abschnitte des MUC1-Gens- Sections of the MUC1 gene

(vgl. Abb. 1).(see Fig. 1).

Die Erfindung soll nachstehend durch ein Ausführungsbeispiel näher erläutert werden.The invention is intended to be illustrated below using an exemplary embodiment are explained in more detail.

AusführungsbeispielEmbodiment Herstellung und Verwendung der VakzineProduction and use of the vaccine

Aus humanem peripherem Blut werden Lymphozyten per Ficoll- Gradienten-Zentrifugation gewonnen. Die B-Lymphozyten werden mittels EBV, produziert von einer Zellinie (z. B. B-95 oder MCU- V5), immortalisiert. In die so entstandenen EBV immortalisierten B-Zellen wird das Plasmid pRep4/MUC1 (das 22 Kopien der "Tandem repeat"-Sequenz von MUC1 enthält, s. Abb. 1 und 2) per Elektroporation transfiziert. Das Plasmid besitzt das Hygromycin-Resistenzgen, so daß die transfizierten Zellen in Hygromycin-haltigem Medium selektiert werden. Die MUC1- Expression wird mittels Western-Blot-Verfahren sowie FACS- Analyse mittels monoklonaler Muzin-Antikörper überprüft. In das Kulturmedium der transfizierten Zellen wird Phenyl-N-Acetyl-α- D-Galactosaminide (Konzentration: 5 mM ) für 36 Stunden gegeben. Die Zellen werden sofort nach Ablauf dieser Zeit bestrahlt (10 000 rad). Die Expression der durch den Glykosylierungsinhibitor erzeugten, tumorassoziierten immunogenen Muzin-Peptid-Epitope hält nun für 24 Stunden an (Überprüfung mittels monoklonaler Muzin-Peptid-Antikörper in FACS-Analyse). In dieser Zeit wird die Vakzine (=bestrahlte, humane autologe EBV immortalisierte B-Zellen transfiziert mit MUC1 und mit Phenyl-N-Acetyl-α-D-Galactosaminide behandelt) appliziert (subkutane Injektion).Lymphocytes are obtained from human peripheral blood by Ficoll gradient centrifugation. The B lymphocytes are immortalized using EBV produced by a cell line (e.g. B-95 or MCU-V5). The plasmid pRep4 / MUC1 (which contains 22 copies of the "tandem repeat" sequence of MUC1, see FIGS. 1 and 2) is transfected into the resulting EBV immortalized B cells by electroporation. The plasmid has the hygromycin resistance gene, so that the transfected cells are selected in hygromycin-containing medium. The MUC1 expression is checked by means of Western blot methods and FACS analysis by means of monoclonal mucin antibodies. Phenyl-N-acetyl-α-D-galactosaminide (concentration: 5 mM) is added to the culture medium of the transfected cells for 36 hours. The cells are irradiated immediately after this time (10,000 rad). Expression of the tumor-associated immunogenic mucin peptide epitopes generated by the glycosylation inhibitor now continues for 24 hours (check using monoclonal mucin peptide antibodies in FACS analysis). During this time, the vaccine (= irradiated, human autologous EBV immortalized B cells transfected with MUC1 and treated with phenyl-N-acetyl-α-D-galactosaminide) is applied (subcutaneous injection).

Claims (10)

1. Vakzine gegen humane Tumorerkrankungen, bestehend aus bestrahlten humanen autologen EBV-immortalisierten B-Zellen, die mit Abschnitten des humanen Muzin-Gens MUC1 mittels eines MUC1- Genabschnitte enthaltenden Vektors transfiziert sind und die durch Behandlung mit einem Glykosylierungsinhibitor tumor­ assoziierte Epitope exprimieren.1. Vaccine against human tumor diseases consisting of irradiated human autologous EBV immortalized B cells with sections of the human mucin gene MUC1 using a MUC1- Vector containing gene segments are transfected and the by treatment with a glycosylation inhibitor tumor express associated epitopes. 2. Vakzine nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Abschnitte des humanen Muzin-Gens MUC1 mit dem Vektor pRep4 mit folgenden wesentlichen Bestandteilen
  • - Promotor RSV-LTR für Muzin (MUC1)-Genabschnitte
  • - Hygromycin-Resistenzgen unter dem Promotor TK
  • - EBNA-1-Gen
  • - Abschnitte des MUC1-Gens
2. Vaccine according to claim 1, characterized in that the sections of the human mucin gene MUC1 with the vector pRep4 with the following essential components
  • - RSV-LTR promoter for mucin (MUC1) gene segments
  • - Hygromycin resistance gene under the TK promoter
  • - EBNA-1 gene
  • - Sections of the MUC1 gene
gemäß Abb. 1 transfiziert worden sind.have been transfected according to Fig. 1. 3. Vakzine nach Anspruch 1-2, dadurch gekennzeichnet, daß die Abschnitte des MUC1-Gens im Vektor 15-30 "Tandem Nukleotid­ repeats" enthalten, wobei ein repeat die Nukleotid-Sequenz gemäß Abb. 2 aufweist.3. Vaccine according to claim 1-2, characterized in that the sections of the MUC1 gene in the vector contain 15-30 "tandem nucleotide repeats", with a repeat having the nucleotide sequence according to Fig. 2. 4. Vakzine nach Anspruch 1-3, dadurch gekennzeichnet, daß die Abschnitte des MUC1-Gens im Vektor 22 "Tandem Nukleotid­ repeats" enthalten.4. Vaccine according to claims 1-3, characterized in that the Sections of the MUC1 gene in the vector 22 "tandem nucleotide repeats "included. 5. Vakzine nach Anspruch 1-4, dadurch gekennzeichnet, daß als Glykosylierungsinhibitor Phenyl-N-Acetyl-α-D-Galactosaminide eingesetzt wird.5. Vaccine according to claims 1-4, characterized in that as Glycosylation inhibitor phenyl-N-acetyl-α-D-galactosaminide is used. 6. Vakzine nach Anspruch 1-5, dadurch gekennzeichnet, daß die Transfektion durch Elektroporation erfolgt. 6. Vaccine according to claims 1-5, characterized in that the Transfection is done by electroporation.   7. Vakzine nach Anspruch 1-6, dadurch gekennzeichnet, daß eine letale Bestrahlung mit mindestens 10 000 rad erfolgt.7. Vaccine according to claims 1-6, characterized in that a lethal radiation with at least 10,000 rad. 8. Verfahren zur Herstellung der Vakzine nach Anspruch 1-7, dadurch gekennzeichnet, daß aus humanem peripheren Blut B- Lymphozyten mittels EBV, produziert von einer Zellinie, immortalisiert werden, diese autologen EBV-immortalisierten B- Lymphozyten bzw. spontan wachsende B-Zellen des peripheren Blutes des Probanden mit dem Vektor gemäß Abb. 1 per Elektroporation transfiziert werden, die erhaltenen transfizierten Zellen im Kulturmedium 24-48 Stunden mit 5 mM des Glykosylierungsinhibitors behandelt werden und anschließend mit mindestens 10 000 rad bestrahlt werden.8. A process for the preparation of the vaccine according to claims 1-7, characterized in that from human peripheral blood B lymphocytes are immortalized by means of EBV, produced by a cell line, these autologous EBV immortalized B lymphocytes or spontaneously growing B cells of the subject's peripheral blood are transfected with the vector according to FIG. 1 by electroporation, the transfected cells obtained are treated with 5 mM of the glycosylation inhibitor in the culture medium for 24-48 hours and then irradiated with at least 10,000 rad. 9. Verwendung der Vakzine nach Anspruch 1-7 zur Behandlung von Muzin exprimierenden Tumoren, wie z. B. Mamma-, Pankreas-, Ovarial-, Colon-, Parotis- und Lungentumoren.9. Use of the vaccine according to claims 1-7 for the treatment of Mucin-expressing tumors such as B. breast, pancreas, Ovarian, Colon, Parotid and Lung Tumors.
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