DE19507166C1 - Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil aufweist - Google Patents
Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil aufweistInfo
- Publication number
- DE19507166C1 DE19507166C1 DE19507166A DE19507166A DE19507166C1 DE 19507166 C1 DE19507166 C1 DE 19507166C1 DE 19507166 A DE19507166 A DE 19507166A DE 19507166 A DE19507166 A DE 19507166A DE 19507166 C1 DE19507166 C1 DE 19507166C1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- histidine
- antibodies
- amino acid
- fusion polypeptide
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 33
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 31
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 30
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 30
- 230000004927 fusion Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYNRGZULARUZCC-UHFFFAOYSA-N [4-(4-azaniumyl-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylphenyl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 NYNRGZULARUZCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1054—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV gag-pol, e.g. p17, p24
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil aufweist,
Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung.
Es ist bekannt, ein Polypeptid in Form eines Histidin-Fusionspolypeptids zu ex
primieren. In einem solchen liegt ein Histidin-Anteil von z. B. 6-18 aufeinander
folgenden Histidinresten fusioniert am C- oder N-Terminus des Polypeptids vor.
Damit ist es möglich, das Histidin-Fusionspolypeptid mittels einer Nickel-Chelat-
Chromatographiesäule aus dem Überstand oder Zellysat der es exprimierenden
Zelle zu isolieren.
Vorstehende Säule ist aber teuer. Ferner bedeutet ihr Einsatz einen großen Zeitauf
wand. Daher eignet sie sich nicht zum schnellen Nachweis der Expression eines
Histidin-Fusionspolypeptids. Ein solcher Nachweis ist aber von Nöten, insbesonde
re, wenn er zum Screening vieler Zellen herangezogen werden soll.
Der vorliegenden Erfindung liegt somit die Aufgabe zugrunde, ein Mittel bereitzu
stellen, mit dem die Expression eines Histidin-Fusionspolypeptids schnell nach
gewiesen werden kann.
Erfindungsgemäß wird dies durch einen Antikörper erreicht, der gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das
einen Histidin-Anteil aufweist, gerichtet ist.
Ein solcher Antikörper kann ein polyklonaler oder monoklonaler Antikörper sein,
wobei ein monoklonaler Antikörper bevorzugt ist. Der Antikörper kann aus jegli
chem Tier oder dem Menschen erhalten sein, wobei für einen polyklonalen Antikör
per Kaninchen und für einen monoklonalen Mäuse bevorzugt sind.
Ferner kann der Antikörper synthetisch sein, wobei ihm ggfs. Teile, die für vor
stehende Erkennung nicht notwendig sind, ganz oder teilweise fehlen bzw. diese
Teile durch andere ersetzt sind, die dem Antikörper weitere günstige Eigenschaften
verleihen.
Der Ausdruck "Histidin-Anteil aufweisendes Fusionspolypeptid" umfaßt ein Po
lypeptid (Peptid) jeglicher Art und Länge, das einen Histidin-Anteil aufweist. Ein
solches Polypeptid kann von jeglichen Zellen, z. B. Bakterien, Hefen, Insekten-,
Pflanzen- und tierischen Zellen, sowie Organismen, z. B. transgenen Tieren, ex
primiert sein. Ein vorstehender Histidin-Anteil kann z. B. 6-18, vorzugsweise 6
aufeinander folgende Histidinreste umfassen und fusioniert am N und/oder C-
Terminus des Polypeptids vorliegen.
Ein bevorzugter Antikörper der vorliegenden Erfindung, nämlich ein monoklonaler
Maus-Antikörper mit vorstehender Erkennung, wurde bei der DSM unter der Num
mer ACC 2207 am 15. Febr. 1995 hinterlegt.
Erfindungsgemäße Antikörper können nach üblichen Verfahren hergestellt werden.
Sollen polyklonale bzw. monoklonale Antikörper hergestellt werden, ist es günstig,
Tiere, insbesondere Kaninchen für erstere und Mäuse für letztere Antikörper, mit
einem vorstehenden Histidin-Fusionspolypeptid, z. B. His p53 (vgl. deutsche
Patentanmeldung P 42 32 823.3) oder His hdm2 (vgl. deutsche Patentanmeldung
P 43 39 553.3), vorzugsweise einem Gemisch aus solchen zu immunisieren.
Weiteres Boostern der Tiere kann mit dem oder den gleichen Histidin-Fu
sionspolypeptiden erfolgen. Auch können andere Histidin-Fusionspolypeptide oder
eine Kombination aus diesen und dem oder den vorhergehenden Histidin-Fusions
polypeptiden zum Boostern verwendet werden. Die polyklonalen Antikörper können
dann aus dem Serum der Tiere erhalten werden. Für die monoklonalen Antikörper
werden Milzzellen der Tiere mit Myelomzellen fusioniert.
Zur Herstellung von synthetischen Antikörpern kann z. B. von vorstehend erhalte
nen, monoklonalen Antikörpern ausgegangen werden. Hierzu bietet sich an, die
Antigen-Bindungsregionen der monoklonalen Antikörper zu analysieren und die für
vorstehende Erkennung notwendigen und nicht notwendigen Teile zu identifizieren.
Die notwendigen Teile können dann modifiziert und die nicht notwendigen ganz
oder teilweise eliminiert bzw. durch Teile ersetzt werden, die den Antikörpern
weitere günstige Eigenschaften verleihen. Auch können Teile außerhalb der Bin
dungsregionen der Antikörper modifiziert, eliminiert oder ersetzt werden. Der Fach
mann weiß, daß sich für vorstehende Maßnahmen insbesondere die DNA-Rekom
binationstechnologie eignet. Diese ist ihm bestens vertraut.
Erfindungsgemäße Antikörper zeichnen sich dadurch aus, daß sie beliebige Fu
sionspolypeptide erkennen, die einen Histidin-Anteil aufweisen. Die Antikörper
eignen sich daher zum schnellen Nachweis der Expression solcher Fusionspolypep
tide. Dies kann in beliebigen Nachweisverfahren, insbesondere in einem Western
Blot, einem ELISA, einer Immunpräzipitation oder einer Immunfluoreszenz, erfol
gen. Hierzu können die erfindungsgemäßen Antikörper, wenn es angebracht ist,
markiert sein oder in Kombination mit markierten gegen sie gerichteten Antikörpern
eingesetzt werden.
Die vorliegende Erfindung wird durch die nachstehenden Beispiele erläutert.
Zur Immunisierung wurden Mäuse verwendet. Als Antigene wurden His hdm2
(Aminosäure 1-284), His hdm2 (Aminosäure 58-491) und His p53 (Aminosäure
66-393) (vgl. vorstehend) verwendet. Diese waren in einem Puffer aus 8 M
Harnstoff, 100 mM NaH₂PO₄, 10 mM Tris-Hcl gelöst.
Immunisierungs- und Boosterschema:
Tag 1:
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
50 µl PBS (Phosphat-gepufferte Saline)
150 µl Freund′s Adjuvans komplett
300 µl Mix
200µl des Mix wurden in eine Maus injiziert
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
50 µl PBS (Phosphat-gepufferte Saline)
150 µl Freund′s Adjuvans komplett
300 µl Mix
200µl des Mix wurden in eine Maus injiziert
Tag 30:
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
20 µl PBS
120 µl Freund′s Adjuvans inkomplett
240 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
20 µl PBS
120 µl Freund′s Adjuvans inkomplett
240 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
Tag 60:
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
85 µl PBS
115 µl Freund′s Adjuvans inkomplett
300 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
85 µl PBS
115 µl Freund′s Adjuvans inkomplett
300 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
Tag 90:
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
200 µl PBS
300 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
50 µl (= 10 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
200 µl PBS
300 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
Tag 180:
150 µl (= 20 µg) His p53 (Aminosäure 66-393)
150 µl Freund′s Adjuvans komplett
300 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
150 µl (= 20 µg) His p53 (Aminosäure 66-393)
150 µl Freund′s Adjuvans komplett
300 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
Tag 230:
75 µl (= 10 µg) His p53 (Aminosäure 66-393)
25 µl (= 5 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
25 µl (= 5 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
125 µl Freund′s Adjuvans inkomplett
250 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
75 µl (= 10 µg) His p53 (Aminosäure 66-393)
25 µl (= 5 µg) His hdm2 (Aminosäure 1-284)
25 µl (= 5 µg) His hdm2 (Aminosäure 58-491)
125 µl Freund′s Adjuvans inkomplett
250 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
Tag 260:
75 µl (= 10 µg) His ps3 (Aminosäure 66-393)
25 µl (= 5 µg) His hdm 2 (Aminosäure 1-284)
25 µl (= 5 µg) His hdm 2 (Aminosäure 58-491)
125 µl PBS
250 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
75 µl (= 10 µg) His ps3 (Aminosäure 66-393)
25 µl (= 5 µg) His hdm 2 (Aminosäure 1-284)
25 µl (= 5 µg) His hdm 2 (Aminosäure 58-491)
125 µl PBS
250 µl Mix
200 µl des Mix wurden in vorstehende Maus injiziert.
Am Tag 262 wurde die Maus getötet. Milzzellen wurden ihr entnommen und mit
Myelomzellen fusioniert. Es wurden monoklonale Antikörper erhalten. Einer dieser
wurde bei der DSM unter ACC 2207 am 15. Febr. 1995 hinterlegt.
Zur Immunisierung wurden Kaninchen verwendet. Es wurden die Antigene von
Beispiel 1 verwendet. Das Immunisierung- und Boosterschema war identisch mit
jenem von Beispiel 1 bis einschließlich Tag 90.
Tag 92:
Aus der Ohrvene des Kaninchens wurden 5 ml Blut entnommen und in einem ELISA bzw. Western-Blot auf Antikörper-Aktivität getestet.
Aus der Ohrvene des Kaninchens wurden 5 ml Blut entnommen und in einem ELISA bzw. Western-Blot auf Antikörper-Aktivität getestet.
Tag 93:
Nach positivem Test am Tag 92, wurden die Tiere getötet und die Antikörper aus dem Serum gewonnen.
Nach positivem Test am Tag 92, wurden die Tiere getötet und die Antikörper aus dem Serum gewonnen.
Histidin-Fusionspolypeptide, nämlich His hdm2 (Aminosäure 1-284), His hdm2
(Aminosäure 58-491) und His p53 (Aminosäure 66-393) von Beispiel 1, sowie die
Polypeptide hdm2 (Aminosäure 1-284), WAF 1 (=wildtyp aktivierender Faktor)
und t16 (= zell. regulierendes Protein) als Kontrolle wurden einer Polyacrylamid-
Gelelektrophorese unterzogen. Das Gel wurde über Nacht auf eine Nitrocellulosemembran
übertragen. Diese wurde dann mit vorstehendem, 1 : 10 bzw. 1 : 50
verdünnten Antikörper ACC 2207 1 Std. bei 37°C inkubiert. Nach mehreren
Waschschritten mit PBS (0,05% Tween 20) wurde ein käuflicher alkalischer
Phosphatase-gekoppelter Ziege-anti-Maus-Antikörper (Verdünnung nach Angabe
der Hersteller) zugegeben. Nach 30minütiger Inkubation bei 37°C folgten mehrere
Waschschritte mit PBS und anschließend die alkalische Phosphatase-Nachweisre
aktion mit alkalischer Phosphatase mit Entwicklerlösung (36µM 5′Bromo-4-chloro-
3-indolylphosphat, 400 µM Nitroblau-tetrazolium, 100 mM Tris-HCl, pH 9.5, 100
mM NaCl, 5 mM MgCl₂) bei Raumtemperatur bis Banden sichtbar waren.
Es zeigte sich, daß der erfindungsgemäße Antikörper ACC 2207 spezifisch Histi
din-Fusionspolypeptide, nicht aber Polypeptide ohne Histidin-Anteil erkennt.
In eine 96-Loch-Platte wurden pro Loch je 100 µl mit 20 ng bzw. 8 ng der Histidin-
Fusionspolypeptide bzw. der Kontrollen von (a) einpipettiert. Nach Inkubation über
Nacht bei 4°C schlossen sich 3 kurze Waschschritte mit PBS an. Anschließend
erfolgte die Blockierung freier Bindungsstellen des polymeren Trägers durch ein
stündige Inkubation mit 1% BSA in PBS bei 37°C. Der erfindungsgemäße, 1 : 10
bzw. 1 : 50 verdünnte Antikörper ACC 2207 wurde 1 Stunde bei 37°C auf der
Platte inkubiert. Nach 8 Waschschritten mit PBS wurde der Peroxidase-gekoppelte
Ziege-anti-Maus-Antikörper von (a) zugegeben. Nach 30minütiger Inkubation bei
37°C folgten 8 Waschschritte und anschließend die Peroxidase-Nachweisreaktion
mit Entwicklungslösung (50 mM Natriumacetat, 0,4 mM 3,3′, 5,5′-Tetramethyl
benzidin-dihydrochlorid, 4,4 mM H₂O₂) bei Raumtemperatur bis Banden sichtbar
waren.
Es zeigte sich, daß der erfindungsgemäße Antikörper ACC 2207 spezifisch Histi
din-Fusionspolypeptide, nicht aber ein Polypeptid ohne Histidin-Anteil erkennt.
Claims (8)
1. Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil
aufweist.
2. Antikörper nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er polyklonal ist.
3. Antikörper nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er monoklonal
ist.
4. Antikörper nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß er bei der DSM
unter ACC 2207 hinterlegt ist.
5. Verfahren zur Herstellung eines Antikörpers nach einem der Ansprüche 1-4,
dadurch gekennzeichnet, daß ein Tier mit einem Histidin-Fusionspolypeptid
immunisiert wird, und
- (a) polyklonale Antikörper aus dem Serum des Tieres erhalten werden, oder
- (b) monoklonale Antikörper nach Fusion von Milzzellen des Tieres mit Myelomzellen erhalten werden.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß ein Gemisch von
Histidin-Fusionspolypeptiden zur Immunisierung eingesetzt wird.
7. Verwendung eines Antikörpers nach einem der Ansprüche 1-4 in einem
Nachweisverfahren für ein, einen Histidin-Anteil aufweisendes Fusions
polypeptid.
8. Verwendung nach Anspruch 7, wobei das Nachweisverfahren ein Western-
Blot, ein ELISA, eine Immunfluoreszenz oder eine Immunpräzipitation ist.
Priority Applications (12)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19507166A DE19507166C1 (de) | 1995-03-01 | 1995-03-01 | Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil aufweist |
| US08/913,139 US6790940B1 (en) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antibodies active against a fusion polypeptide comprising a histidine portion |
| AT96904728T ATE207935T1 (de) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antikörper gegen ein, einen histidin-anteil aufweisendes fusionspolypeptid |
| EP96904728A EP0815141B2 (de) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antikörper gegen ein, einen histidin-anteil aufweisendes fusionspolypeptid |
| PCT/DE1996/000369 WO1996026963A1 (de) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antikörper gegen ein, einen histidin-anteil aufweisendes fusionspolypeptid |
| DK96904728T DK0815141T3 (da) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antistof mod et fusionspolypeptid omfattende en histidinandel |
| CA002217186A CA2217186A1 (en) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antibodies active against a fusion polypeptide comprising a histidine portion |
| JP52521896A JP3799059B2 (ja) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | ヒスチジン部分を有する融合ポリペプチドに作用する抗体 |
| DE59608073T DE59608073D1 (de) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antikörper gegen ein, einen histidin-anteil aufweisendes fusionspolypeptid |
| ES96904728T ES2166878T3 (es) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Anticuerpos contra un polipeptido de fusion que presenta una porcion de histidina. |
| US10/686,355 US20040105854A1 (en) | 1995-03-01 | 2003-10-14 | Antibodies active against a fusion polypeptide comprising a histidine portion |
| US12/465,855 US7713712B2 (en) | 1995-03-01 | 2009-05-14 | Antibodies active against a fusion polypeptide comprising a histidine portion |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19507166A DE19507166C1 (de) | 1995-03-01 | 1995-03-01 | Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil aufweist |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE19507166C1 true DE19507166C1 (de) | 1996-04-18 |
Family
ID=7755368
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19507166A Expired - Lifetime DE19507166C1 (de) | 1995-03-01 | 1995-03-01 | Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil aufweist |
| DE59608073T Expired - Fee Related DE59608073D1 (de) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antikörper gegen ein, einen histidin-anteil aufweisendes fusionspolypeptid |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE59608073T Expired - Fee Related DE59608073D1 (de) | 1995-03-01 | 1996-03-01 | Antikörper gegen ein, einen histidin-anteil aufweisendes fusionspolypeptid |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6790940B1 (de) |
| EP (1) | EP0815141B2 (de) |
| JP (1) | JP3799059B2 (de) |
| AT (1) | ATE207935T1 (de) |
| CA (1) | CA2217186A1 (de) |
| DE (2) | DE19507166C1 (de) |
| DK (1) | DK0815141T3 (de) |
| ES (1) | ES2166878T3 (de) |
| WO (1) | WO1996026963A1 (de) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996026963A1 (de) * | 1995-03-01 | 1996-09-06 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Antikörper gegen ein, einen histidin-anteil aufweisendes fusionspolypeptid |
| WO1999001475A2 (de) * | 1997-07-04 | 1999-01-14 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Humaner antikörper gegen ein fusions(poly)peptid bzw. -protein, das einen anteil von mindestens sechs histidinen aufweist |
| EP2290107A1 (de) | 2003-01-07 | 2011-03-02 | Dyax Corporation | Kunitzdomänenbibliothek |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1060395B1 (de) | 1998-02-04 | 2008-04-30 | Invitrogen Corporation | Microarrays und ihre verwendungen |
| JP2002513589A (ja) * | 1998-04-30 | 2002-05-14 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ | 再アレー化を伴う、発現ライブラリーのクローンを選択するための新規方法 |
| US7294504B1 (en) | 2001-12-27 | 2007-11-13 | Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for DNA mediated gene silencing |
| US20140072983A1 (en) | 2010-08-10 | 2014-03-13 | Amgen Inc. | Dual function in vitro target binding assay for the detection of neutralizing antibodies against target antibodies |
| JP5849275B2 (ja) * | 2011-07-11 | 2016-01-27 | 国立大学法人山口大学 | 抗ヒスチジンタグ抗体 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5130416A (en) | 1986-08-13 | 1992-07-14 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Recombinant DNA clone containing a genomic fragment of PfHRP-II gene from plasmodium falciparum |
| EP0614531A1 (de) | 1992-09-30 | 1994-09-14 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | NACHWEISVERFAHREN FÜR p53-SPEZIFISCHE ANTIKÖRPER |
| DE4339533C2 (de) * | 1993-11-19 | 1997-07-03 | Deutsches Krebsforsch | Nachweisverfahren für hdm-2 spezifische Antikörper |
| US5840834A (en) * | 1994-12-21 | 1998-11-24 | Virginia Commonwealth University | Technique for joining amino acid sequences and novel composition useful in immunoassays |
| DE19507166C1 (de) * | 1995-03-01 | 1996-04-18 | Deutsches Krebsforsch | Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil aufweist |
-
1995
- 1995-03-01 DE DE19507166A patent/DE19507166C1/de not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-03-01 JP JP52521896A patent/JP3799059B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-03-01 DK DK96904728T patent/DK0815141T3/da active
- 1996-03-01 DE DE59608073T patent/DE59608073D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-03-01 EP EP96904728A patent/EP0815141B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-03-01 ES ES96904728T patent/ES2166878T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-03-01 WO PCT/DE1996/000369 patent/WO1996026963A1/de active IP Right Grant
- 1996-03-01 CA CA002217186A patent/CA2217186A1/en not_active Abandoned
- 1996-03-01 AT AT96904728T patent/ATE207935T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-03-01 US US08/913,139 patent/US6790940B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-10-14 US US10/686,355 patent/US20040105854A1/en not_active Abandoned
-
2009
- 2009-05-14 US US12/465,855 patent/US7713712B2/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Referat aus STN 12: 95: 26 08 56 BIOSIS * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996026963A1 (de) * | 1995-03-01 | 1996-09-06 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Antikörper gegen ein, einen histidin-anteil aufweisendes fusionspolypeptid |
| US6790940B1 (en) | 1995-03-01 | 2004-09-14 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Offentlichen Rechts | Antibodies active against a fusion polypeptide comprising a histidine portion |
| US7713712B2 (en) | 1995-03-01 | 2010-05-11 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Offentlichen Rechts | Antibodies active against a fusion polypeptide comprising a histidine portion |
| WO1999001475A2 (de) * | 1997-07-04 | 1999-01-14 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Humaner antikörper gegen ein fusions(poly)peptid bzw. -protein, das einen anteil von mindestens sechs histidinen aufweist |
| DE19728697C1 (de) * | 1997-07-04 | 1999-03-25 | Deutsches Krebsforsch | Humaner Antikörper gegen ein Fusions(poly)peptid bzw. -protein, das einen Anteil von mindestens sechs Histidinen aufweist |
| WO1999001475A3 (de) * | 1997-07-04 | 1999-05-14 | Deutsches Krebsforsch | Humaner antikörper gegen ein fusions(poly)peptid bzw. -protein, das einen anteil von mindestens sechs histidinen aufweist |
| EP2290107A1 (de) | 2003-01-07 | 2011-03-02 | Dyax Corporation | Kunitzdomänenbibliothek |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3799059B2 (ja) | 2006-07-19 |
| JPH11510785A (ja) | 1999-09-21 |
| DE59608073D1 (de) | 2001-12-06 |
| CA2217186A1 (en) | 1996-09-06 |
| EP0815141B1 (de) | 2001-10-31 |
| EP0815141A1 (de) | 1998-01-07 |
| WO1996026963A1 (de) | 1996-09-06 |
| US7713712B2 (en) | 2010-05-11 |
| ES2166878T3 (es) | 2002-05-01 |
| EP0815141B2 (de) | 2009-02-25 |
| US20090221040A1 (en) | 2009-09-03 |
| ATE207935T1 (de) | 2001-11-15 |
| DK0815141T3 (da) | 2002-01-21 |
| US6790940B1 (en) | 2004-09-14 |
| US20040105854A1 (en) | 2004-06-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69432629T2 (de) | Antikörper gegen beta-amyloid oder derivative davon und seine verwendung | |
| DE19507166C1 (de) | Antikörper gegen ein Histidin-Fusionspolypeptid, das einen Histidin-Anteil aufweist | |
| DE60027542T2 (de) | Methoden zur herstellung immunologischer reagentien positionsspezifisch für phosphorylierungen | |
| EP0152612B1 (de) | Bestimmung von Fibrin mit Fibrin-spezifischen Antikörpern | |
| DE3439610A1 (de) | Immunogene, verfahren zu deren herstellung sowie damit gewonnene antikoerper gegen glykosiliertes haemoglobin | |
| WO1999014232A1 (de) | Peptid mit affinität zu gerinnungsfaktor viii | |
| DE4130786A1 (de) | Peptide zur herstellung von mitteln zur diagnose und therapie von systemischen lupus | |
| DE3014582C2 (de) | ||
| DE69928236T2 (de) | Peptid für die diagnose von schizophrenie | |
| DE4345249C2 (de) | hdm-2-Fragmente mit Bindungsregionen für hdm-2-spezifische Antikörper | |
| EP0420043B2 (de) | Antikörper gegen hochkonservierte Aminosäuresequenzen von immunogenen Substanzen, Verfahren zur Herstellung dieser Antikörper, sowie deren Verwendung in Immunoassays | |
| EP0820471B1 (de) | Antikörper gegen herzmuskel-actin | |
| DE19650758C1 (de) | PKD1-Fragmente mit Bindungsregionen für PKD1-spezifische Antikörper | |
| DE4339533C2 (de) | Nachweisverfahren für hdm-2 spezifische Antikörper | |
| EP0312645B1 (de) | Antigene Peptide des Komplementfaktors C3a, Verwendung der Peptide, Zell-Linien, Antikörper gegen die Peptide und Verwendung der Antikörper | |
| DE10230550A1 (de) | Carbohydrate Deficient Transferrin (CDT)-spezifische Antikörper, ihre Herstellung und Verwendung | |
| DE4236915C1 (de) | Herstellung eines mono- oder polyklonalen Antikörpers und seine Verwendung | |
| EP1268552A2 (de) | Verfahren zur identifizierung von substanzen, die säugetier-epitope nachahmen | |
| DE3840968C2 (de) | ||
| DE4007902A1 (de) | Synthetische peptide, die sequenzen aus faktor viia enthalten und deren verwendung | |
| Stein et al. | Elektrophoretische Darstellung von 19 S IgM in diskontinuierlichen Polyacrylamid-Säulen | |
| DE3639920A1 (de) | Homogenes schaf-t11ts als zwischenprodukt zur herstellung von menschlichem t11ts und dessen verwendung | |
| WO1998021245A1 (de) | eOCHAFFINE ANTIKÖRPER GEGEN HUMAN-BDNF, VERFAHREN ZU IHRER HERSTELLUNG UND VERWENDUNG | |
| DE4213497A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern gegen humanes Interferon-gamma | |
| DE19644501A1 (de) | GABA¶A¶-Rezeptoruntereinheit epsilon-verwandtes Protein |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8100 | Publication of patent without earlier publication of application | ||
| D1 | Grant (no unexamined application published) patent law 81 | ||
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| R071 | Expiry of right |