DE1950711A1 - New peptides and methods of making them - Google Patents

Description

CIBA AKTIENGESELLSCHAFT, BASEL (SCHWEIZ)CIBA AKTIENGESELLSCHAFT, BASEL (SWITZERLAND)

Case 6577/1-3Case 6577 / 1-3

Deutschland ^: ■ ■ 'Germany ^: ■ ■ '

Neue Peptide und Verfahren zu ihrer HerstellungNovel peptides and methods of making them

Gegenstand der Erfindung sind neue hypocalcämisch wirksame Peptide der Formel IThe invention relates to new hypocalcemic effective peptides of formula I.

i| 2 .3 5 5 5~t} 8 9 10 11 12 13 14i | 2 .3 5 5 5 ~ t} 8 9 10 11 12 13 14

H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-GIn-H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-GIn-

15 16 17 l8 19 20 21 22 23 24 25 26 27 '28 . Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-15 16 17 l8 19 20 21 22 23 24 25 26 27 '28. Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-

2Q ■ 30 31 322Q ■ 30 31 32

VaI-GIy-A la-Pro-NH₂, IVaI-GIy-A la-Pro-NH ₂ , I.

worin mindestens eine und höchstens l6' der Aminosäuren in den Stellungen 2, 8, 10, 11, 12, 13, 14, l6, l8, 21, 23,wherein at least one and at most 16 'of the amino acids in positions 2, 8, 10, 11, 12, 13, 14, l6, l8, 21, 23,

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24, 25, 26, 27, 29, 30 und 31 durch andere natürliche α-Aminosäuren oder deren Homologej insbesondere durch in den entsprechenden Stellungen des Schweine-Thyroealeitonins vorhandene Aminosäuren, ersetzt sind , ihre24, 25, 26, 27, 29, 30 and 31 by other natural α-amino acids or their homologuesj in particular by in The amino acids present in the corresponding positions of the porcine thyroealeitonin are replaced

Dimeren, insbesondere diejenigen in denen 2 gleiche Peptidsequenzen (l-32 und l'-32') in antiparalleler Anordnung via die Cysteinreste l,7^r und 7,I¹ mittels Disulfidbindung verbunden sind, und Derivate der monomeren oder dimeren Peptide sowie Säureadditionssalze und Komplexe der genannten mono- und dimeren Peptide und ihrer Derivate und Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen.Dimers, especially those in which 2 identical peptide sequences (l-32 and l'-32 ') are connected in an antiparallel arrangement via the cysteine residues l, 7 ^r and 7, I ¹ by means of a disulfide bond, and derivatives of the monomeric or dimeric peptides and acid addition salts and Complexes of the mono- and dimeric peptides mentioned and their derivatives and processes for the preparation of these compounds.

Besonders hervorzuheben sind Peptide der Formel'I, worin die Aminosäure in ■ 8-Stellung, Methionin, durch Valin, Norvalin, Leucin, Isoleucin, Norleuein oder a-Aminobuttersäure ersetzt ist, sowie diejenigen, die in 12- und/oder 18-Stellung Glycin enthalten, deren Dimere, Derivate, Säureadditionssalze und Komplexe.Particularly noteworthy are peptides of the Formula I, in which the amino acid in the 8-position, methionine, by valine, norvaline, leucine, isoleucine, norleuein or a-aminobutyric acid is replaced, as well as those which contain glycine in the 12- and / or 18-position, their dimers, Derivatives, acid addition salts and complexes.

Derivate der genannten Verbindungen sind vor allem solche, in denen die a-Aminogruppe acyliertDerivatives of the compounds mentioned are available especially those in which the α-amino group acylates

ist, sowie entsprechende Desamino -peptide.is, as well as corresponding desamino peptides.

Aeylgruppen für die Acylierung der Aminogruppen, insbesondere für die Acylierung der N -Aminogruppe, sind die Reste von Carbonsäuren wie aliphatischen, aromatischen, araliphatischen, heterocyclischen und heterocyclyl-Aeyl groups for the acylation of the amino groups, in particular for the acylation of the N -amino group the residues of carboxylic acids such as aliphatic, aromatic, araliphatic, heterocyclic and heterocyclyl

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aliphatischen Carbonsäuren, insbesondere von niederen ein- oder zweiwertigen Alkan- oder Alkensäuren wie Ameisensäure, -Essigsäure, Propionsäure, Butt er säuren, Acrylsäure, Bernsteinsäure, von alicyclischen Carbonsäuren wie Cycloalkylcarbonsäuren, von ein- oder zweiwertigen monocyclisehen aromatischen Carbonsäuren wie unsubstituierter und substituierter Benzoesäure oder Phthalsäure, von unsubstituierten und Aryl-substituierten-Aryl-niederalkyl- oder -alkenylcarbonsäuren wie Phenylessigsäure, von unsubstituierten oder substituierten ein- oder zweiwertigen 5-bis 6-gliedrigen heterocyclischen Säuren mit Stickstoff, Schwefel" und/oder Sauerstoff als Heteroatomen, wie Pyridincarbonsäuren, Thiophencarbonsäuren, oder von HeteroeyeIyI-niederalkansäuren wie Pyridylessigsäure, Imidazolylessigsäure, worin die Substituenten der Ringe z.B."Halogenatomen Nitrogruppen, Niederalkyl- oder Niederalkoxygruppen oder Niedercarbalkoxygruppen sind. Weiter sind als Acylreste vor allem Acylreste von Aminosäuren, besonders α-Aminosäuren, wie z.B. der Pyroglutainylrest zu nennen, ferner Acylreste, die sich von Kohlensäure oder Thiokohlensäure bzw. ihren Estern oder Amiden ableiten, 2.B. Niederalkyloxycarbonylgruppen wie Aethoxycarbonyl, tert.-Butyloxycarbonyl, ferner unsubstituiertes und wie oben angegeben substituiertes Benzyloxyearbonyl, Carbamoyl und Thiocarbamoyl sowiealiphatic carboxylic acids, in particular of lower mono- or dibasic alkanoic or alkenoic acids such as formic acid, -Acetic acid, propionic acid, buttersic acids, acrylic acid, Succinic acid, from alicyclic carboxylic acids such as cycloalkylcarboxylic acids, of mono- or divalent monocyclic acids aromatic carboxylic acids such as unsubstituted and substituted benzoic acid or phthalic acid, by unsubstituted ones and aryl substituted aryl lower alkyl or alkenyl carboxylic acids such as phenylacetic acid, of unsubstituted or substituted mono- or divalent 5- to 6-membered ones heterocyclic acids with nitrogen, sulfur "and / or Oxygen as heteroatoms, such as pyridinecarboxylic acids, Thiophene carboxylic acids, or of HeteroeyeIyI-lower alkanoic acids such as pyridylacetic acid, imidazolylacetic acid, wherein the substituents of the rings, for example, "halogen atoms, nitro groups, lower alkyl or lower alkoxy groups, or lower carbalkoxy groups." are. Acyl residues of amino acids, especially α-amino acids, such as e.g. to name the pyroglutainyl radical, also acyl radicals, the from carbonic acid or thiocarbonic acid or their esters or derive amides, 2.B. Lower alkyloxycarbonyl groups such as ethoxycarbonyl, tert-butyloxycarbonyl, also unsubstituted and substituted as indicated above Benzyloxyearbonyl, carbamoyl and thiocarbamoyl as well

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-■ 4 -- ■ 4 -

N-substituiertes Carbamoyl und Thiocarbamoyl, z.B. N-Niederalkylcarbamoyl, N-Phenylcarbamoyl, N-Phenyl-thiocärbamoyl.N-substituted carbamoyl and thiocarbamoyl, e.g. N-lower alkylcarbamoyl, N-phenylcarbamoyl, N-phenyl-thiocarbamoyl.

Als Säureadditionssalze -sind besonders Salze von therapeutisch anwendbaren Säuren wie Salzsäure* Essigsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und Sulfonsäuren, wie Niederalkansulfonsäuren, Benzol- oder Toluolsulfonsäure zu nennen. " . .Acid addition salts are salts of therapeutically applicable acids such as hydrochloric acid * acetic acid, sulfuric acid, phosphoric acid and sulfonic acids, such as lower alkanesulphonic acids, benzene or toluenesulphonic acid. "..

Unter Komplexen sind die in ihrer Struktur noch nicht abgeklärten Verbindungen zu verstehen, die beim Zusatz gewisser anorganischer oder organischer Stoffe zu langkettigen Peptiden entstehen und diesen eine verlängerte Wirkung verleihen. Solche Stoffe sind beispielsweise beschrieben für ACTH und andere adrenocorticotrop wirksame Peptide. Zu nennen sind z.B. anorganische Verbindungen, die sich von Metallen wie Calcium, Magnesium, Aluminium, Cobalt und insbesondere von Zink ableiten, vor allem schwerlösliche Salze wie Phosphate, Pyrophosphate und Polyphosphate sowie Hydroxyde dieser Metalle, ferner Alkalimetallpolyphosphate wie z.B. "Calgon N", "Calgon 322","Calgon l88" oder "Polyron B 12". Organische Stoffe, die eine Verlängerung der Wirkung hervorrufen, sind beispielsweise nicht antigene Gelatine, z.B. Polyoxygeiatine, Polyvinylpyrrolidon und 'Carboxymethylcellulose, ferner Sulfonsäure- oder Phosphorsäureester von Alginsäure, Dextran, PoIy-Among complexes are those in their structure Compounds that have not yet been clarified are understood to result in the addition of certain inorganic or organic substances long-chain peptides arise and give them a prolonged effect. Such substances are described, for example for ACTH and other adrenocorticotropic peptides. Examples include inorganic compounds that are derived from metals such as calcium, magnesium, aluminum, cobalt and especially zinc, especially those that are sparingly soluble Salts such as phosphates, pyrophosphates and polyphosphates and hydroxides of these metals, and also alkali metal polyphosphates such as "Calgon N", "Calgon 322", "Calgon l88" or "Polyron B 12". Organic substances that cause a prolongation of the effect are, for example non-antigenic gelatin, e.g. polyoxygeiatine, polyvinylpyrrolidone and 'carboxymethyl cellulose, also sulfonic acid or phosphoric acid esters of alginic acid, dextran, poly

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phenolen und Polyalkoholen, vor allem Polyphloretinphosphat und Phytinsäure, sowie Polymerisate und Copolymerisate von Aminosäuren, z.B. Protamin oder Polyglutaminsäure.phenols and polyalcohols, especially polyphloretin phosphate and phytic acid, as well as polymers and copolymers of amino acids, e.g. protamine or polyglutamic acid.

Die neuen Verbindungen, insbesondere diejenigen, die in 8-Stellung die oben erwähnten Austauschaminosäuren enthalten, weisen eine hypocalcämische. Wirkung auf. Sie senken den Plasma- Calcium- und -Phosphatgehalt des. Blutes von Säugetieren, wie durch Versuche an Wistar-Ratten nachgewiesen wurde.The new compounds, especially those in the 8-position of the above-mentioned exchange amino acids contain, indicate a hypocalcemic. Effect on. They lower the plasma calcium and phosphate content of the. Mammalian blood as demonstrated by experiments on Wistar rats.

Die Verbindungen senken auch am Menschen den Plasma-Calciumspiegel des Blutes bei-intravenöser Gabe von 0,01 bis 5 mg in 0,1-m. Acetatpuffer vom pH 4,6 und können dementsprechend bei Hypercalcämie verwendet werden.The compounds also lower the plasma calcium level of the blood in humans when administered intravenously from 0.01 to 5 mg in 0.1-m. Acetate buffer of pH 4.6 and can accordingly be used in hypercalcemia.

Das erfindungsgemässe Verfahren zur Herstellung der neuen mono- oder dimeren Peptide, ihrer Derivate, ihrer Säureadditionssalze und Komplexe ist dadurch gekenn-, zeichnet, dass "man ' 'The inventive method for production the new mono- or dimeric peptides, their derivatives, its acid addition salts and complexes is characterized by the fact that "one"

1. aus Verbindungen der Formel I1. from compounds of formula I.

ll 2 3 4 5 β 7j 8 9 10 Ii 12 13 i4ll 2 3 4 5 β 7j 8 9 10 Ii 12 13 i4

H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27

Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-29 30 31 32 ·Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-29 30 31 32

Val-Gly-Ala-Pro-NH * ·Val-Gly-Ala-Pro-NH *

v;orin mindestens eine und höchstens 16 der Aminosäuren in den Stellungen 2, 8, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 18, 21,. 23,v; orin at least one and at most 16 of the amino acids in positions 2, 8, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 18, 21 ,. 23,

00 9818/1907 ·00 9818/1907

24, 25, 26, 27, '29/ 30 und 31 durch andere natürliche α-Aminosäuren oder deren Homologe, ersetzt sind, oder entsprechenden Dimeren oder Derivaten dieser Peptide, in wejfheß·Verbindungen mindestens eine Aminogruppe oder eine Carboxylgruppe durch eine abspaltbare Schutzgruppe geschützt 'ist, die Schutzgruppe(n) abspaltet oder24, 25, 26, 27, '29 / 30 and 31 by other natural α-amino acids or their homologues, or corresponding dimers or derivatives of these peptides, in wejfheß · compounds at least one amino group or one Carboxyl group is protected by a removable protective group, the protective group (s) or

2. Verbindungen der Formel II2. Compounds of the formula II

' 1 2.3 4 5 6 7 8 9 10 Il 12 13'1 2.3 4 5 6 7 8 9 10 Il 12 13

H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-14 15 16 17 ΐδ 19 20 21 22 23 24 25 26H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-14 15 16 17 ΐδ 19 20 21 22 23 24 25 26

Gln-Äsp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-28 29 30 31 32Gln-Äsp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-28 29 30 31 32

GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ II,GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂ II,

worin mindestens eine und höchstens l6 der Aminosäuren in den Stellungen 2, 8, 10, 11, 12, 13,· 14, l6, 18, 21, 23, 24,wherein at least one and at most 16 of the amino acids in positions 2, 8, 10, 11, 12, 13, 14, l6, 18, 21, 23, 24,

25, 26, 27, 29, 30 und 31 durch andere natürliche25, 26, 27, 29, 30 and 31 by other natural

α-Aminosäuren oder deren Homologe ersetzt sind, oder die genannten Derivate, worin die Mercaptogruppen frei oder durch die Tritylgruppe geschützt sind, zu Disulfiden oxydiert oderα-amino acids or their homologues have been replaced, or the derivatives mentioned, in which the mercapto groups are free or protected by the trityl group, to disulfides oxidized or

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3. Verbindungen der Formel III oder IV3. Compounds of the formula III or IV

f ———1 :'■ tf ——— 1 : '■ t

J CH₂ J CH ₂

R-CH -CO-Y -Asn-Leu-Se.r-Thr-Cys-OH R-CH-CO-Y-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-AR-CH -CO-Y-Asn-Leu-Se.r-Thr-Cys-OH R-CH-CO-Y-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-A

III IVIII IV

worin Y für Glycyl oder L-Seryl steht, A 1 bis 21 der auf Cystein folgenden , gegebenenfalls in der angegebenen Weise ausgetauschten Aminosäurereste mit gegebenenfalls geschützter Seitenkettenaminogruppe und R Wasserstoff oder eine acylierte Aminogruppe darstellt, mit der restlichen C-terminalen Sequenz des Peptids mit gegebenenfalls geschützter Seitcnkettenaminoßruj:{.e (bis zum C-Terminus L-Prolinamid) nach in der Peptidisynthese bekannten Methoden kondensiertwherein Y stands for glycyl or L-seryl, A 1 to 21 of the Cysteine following, if appropriate, in the manner indicated exchanged amino acid residues with optionally protected side chain amino group and R is hydrogen or an acylated one Represents amino group, with the remaining C-terminal sequence of the peptide with optionally protected side chain amino group: {. E Condensed (up to the C-terminus L-prolinamide) according to methods known in peptide synthesis

und,wenn erwünscht, die erhaltenen monomeren Verbindungen in ihre Dimeren oder die freien mono- oder dimeren Peptide in ihre Derivate und/oder Säureadditionssalze, oder Komplexeand, if desired, the monomeric compounds obtained in their dimers or the free mono- or dimeric peptides into their derivatives and / or acid addition salts, or complexes

überführt.convicted.

Bei der Herstellung der Ausgangsstoffe für die 1. Variante des erfindungsgemässen Verfahrens wie auch aller in den 3 Verfahrensvarianten benötigten Zwischenprodukte kommen als Schutzgruppen besonders die von der Synthese langkettiger Peptide her bekanntenIn the manufacture of the raw materials for the 1st variant of the inventive method such as All of the intermediate products required in the 3 process variants are also used as protective groups, especially the known from the synthesis of long-chain peptides

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sowie einige neue Schutzgruppen in Betracht, die leicht abgespalten werden können, z.B. durch Hydrolyse, Reduktion, Aminolyse oder Hydrazinolyse.as well as some new protecting groups into consideration that easily can be split off, e.g. by hydrolysis, reduction, Aminolysis or hydrazinolysis.

So verwendet man z.B. als Schutzgruppen für Aminogruppen Acyl- oder Aralkylgruppen wie Formyl-, Trifluoracetyl-, Phthaloyl-, Benzolsulfonyl-, p-Toluolsulfönyl-, "o-Nitrophenylsuifenyl-, 2,4-Dinitrophenylsulfenylgruppen (diese SuIf enylgruppen können auch durch' Einwirkung nucleoph'iler Reagenzien, z.B. Sulfite, Thiosulfate, vgl. englisches Patent 1 104'271 abgespalten werden) gegebenenfalls substituierte, wie z.B. durch Niederalkoxygruppen, besonders o- oder p-Methoxygruppen substituierte Benzyl-, oder Diphenyl- oder Triphenylmethylgruppen oder von der Kohlensäure sich ableitende Gruppen wie gegebenenfalls in den aromatischen Ringen, z.B. durch Halogenatome wie Chlor oder Brom, Nitrogruppen, Niederalkyl- oder Niederalkoxygruppen oder farbgebende Gruppen, z.B. Azogruppen substituierte, Arylmethyloxycarbonylgruppen, in denen die · Methylengruppe durch einen weiteren Arylrest und/oder einen oder gegebenenfalls zwei niedere Alkylreste substituiert sein kann, wie Benzyl-, Benzhydryl- oder 2-Phenyl-isopropyl-oxycarbonylgruppen, z.B. Carbobenzoxy, p-Brom- oder ρ-Chlorcarbobenzoxy, p-Nltrocarbobenzoxy oder p-Methoxycarbobenzoxy, p-Phenylazo-benzyloxycarbonyl und p-Cp^Methoxy-phenylazoJ-benzyloxycarbonyl, 2-Tolyl- ^ isopropyloxycarbonyl und insbesondere 2-(p-Biphenylyl)-For example, acyl or aralkyl groups such as formyl, trifluoroacetyl, Phthaloyl, benzenesulfonyl, p-toluenesulfonyl, "o-nitrophenylsulfenyl, 2,4-dinitrophenylsulfenyl groups (These sulfenyl groups can also be made more nucleophilic by the action of Reagents, e.g. sulfites, thiosulfates, see English patent 1 104'271 are split off) optionally substituted, such as by lower alkoxy groups, especially o- or p-methoxy groups substituted benzyl, or Diphenyl or triphenylmethyl groups or groups derived from carbonic acid, such as, if appropriate, in the aromatic rings, e.g. by halogen atoms such as chlorine or bromine, nitro groups, lower alkyl or lower alkoxy groups or coloring groups, e.g. azo groups substituted arylmethyloxycarbonyl groups, in which the · Methylene group by a further aryl radical and / or one or optionally two lower alkyl radicals can be substituted, such as benzyl, benzhydryl or 2-phenyl-isopropyl-oxycarbonyl groups, e.g. carbobenzoxy, p-bromo- or ρ-chlorocarbobenzoxy, p-nitrocarbobenzoxy or p-methoxycarbobenzoxy, p-phenylazo-benzyloxycarbonyl and p-Cp ^ methoxy-phenylazoJ-benzyloxycarbonyl, 2-tolyl- ^ isopropyloxycarbonyl and especially 2- (p-biphenylyl) -

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■ . . . -9- .-■■. ■ - 1Ö50711■. . . -9- .- ■■. ■ - 1Ö50711

isopropyloxycarbonyl (vgl. französisches Patent Nr. 1 554 053), sowie aliphatisehe Oxycarbonylgruppen wie Adaraantyloxycarbonyl, Cyclopentyloxycarbonyl, Trichloräthyloxycarbonyl, tert. Amyloxycarbonyl oder vor allem tert.-Butyloxycarbonyl. .isopropyloxycarbonyl (cf. French Patent No. 1,554,053), and aliphatic oxycarbonyl groups such as Adaraantyloxycarbonyl, Cyclopentyloxycarbonyl, Trichloräthyloxycarbonyl, tert. Amyloxycarbonyl or especially tert-butyloxycarbonyl. .

Die Aminogruppen können auch durch Bildung von Enaminen, erhalten durch Reaktion der Aminogruppe mit 1,3-Diketonen, z.B. Benzoylaceton, Acetylaceton oder Dimedon, geschützt werden. .The amino groups can also be obtained by the formation of enamines by reaction of the amino group with 1,3-diketones, e.g. benzoylacetone, acetylacetone or Dimedon, be protected. .

• Carboxylgruppen werden beispielsweise durch Amid- oder Hydrazidbildung oder durch Veresterung geschützt. Die Amid- und Hydrazidgruppen können gegebenenfalls substituiert sein, die Amidgruppe z.B. durch die 3*4-Dimethoxybenzyl- oder bis-(p-Methoxyphenyl)-methylgruppe, die Hydrazidgruppe z.B. durch die Carbobenzoxygruppe, die Trichloräthyloxyearbonylgruppe, die Trifluoracetylgruppe, die Tritylgruppe, die tert.-Butyloxycarbonylgruppe oder die 2-(pJ.Bipheflyly'l'-i-lsoppopyloxycar"bonylgruppe, Zur Veresterung geeignet sind z.B. niedere gegebenenfalls substituierte Alkanole wie Methanol, Aethanol, Cyanmethylalkohol, Benzoylmethylalkohol oder insbesondere tert.-Butanol, ferner Aralkanole wie Arylniederalkanole, z.B. gegebenenfalls durch Niederalkyl- oder Niederalkoxygruppen oder Halogenatome substituierte Benzyl- oder Benzhydrylalkohole wie• Carboxyl groups are protected, for example, by amide or hydrazide formation or by esterification. The amide and hydrazide groups can optionally be substituted, the amide group e.g. by the 3 * 4-dimethoxybenzyl or bis- (p-methoxyphenyl) -methyl group, the hydrazide group for example through the carbobenzoxy group, the Trichloräthyloxyearbonylgruppe, the Trifluoroacetylgruppe, the trityl group, the tert-butyloxycarbonyl group or the 2- (pJ.Bipheflyly'l'-i-lsoppopyloxycar "bonyl group, for esterification e.g. lower, optionally substituted alkanols such as methanol, ethanol, cyanomethyl alcohol and benzoylmethyl alcohol are suitable or in particular tert-butanol, furthermore Aralkanols such as aryl-lower alkanols, e.g. optionally through lower alkyl or lower alkoxy groups or halogen atoms substituted benzyl or benzhydryl alcohols such as

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-ίο -;,· '■;; · ■■■ "i..g.5Ö711-ίο - ;, · '■ ;; · ■■■ "i..g.5Ö711

' p-MtrObenzylalkohol, p-Methoxybenzylalkohol oder 2,4,6-Trimethylbenzylalkohol, gegebenenfalls dureh elektronenanziehende Substituenten substituierte Phenole, und Thio-'p-Mtrobenzyl alcohol, p-methoxybenzyl alcohol or 2,4,6-trimethylbenzyl alcohol, possibly by electron-attracting Substituent substituted phenols, and thio

' phenole wie Thiophenole Thiokresol, ρ-Nitrothiophenole 2,4,5- und 2,4,6-Trichlorphenol, Pentachlorphenol, ρ-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenol, p-Cyanophenol, oder p-Methansulfonylphenol, weiter z.B. N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxyphthalimid, N-Hydroxypiperidin, 8-Hydroxychinolin.'phenols such as thiophenols, thiocresol, ρ-nitrothiophenols 2,4,5- and 2,4,6-trichlorophenol, pentachlorophenol, ρ-nitrophenol, 2,4-dinitrophenol, p-cyanophenol, or p-methanesulfonylphenol, further e.g. N-hydroxysuccinimide, N-hydroxyphthalimide, N-hydroxypiperidine, 8-hydroxyquinoline.

Die Hydroxygruppen der Serin-, Threonin-r und Tyrosinreste können z.B. durch Veresterung oder Verätherung geschützt werden. Als Acylreste bei der Veresterung sind z.B. Niederalkanoylreste wie Acetyl,-Aroylreste wie Benzoyl und vor allem von der Kohlensäure sich ableitende Reste wie Benzyloxycarbonyl oder Aethyloxycarbonyl geeignet. Zur Verätherung geeignete Gruppen sind z.B. Benzyl-, Tetrahydropyranyl- oder tert. Butylreste. Ferner eignen sich zum Schutz der Hydroxylgruppen die in Ber. 100 (1967), 3838 - 3849 beschriebenen 2,2,2-Trifluor-l-tert.-butyloxycarbonylamino- oder -l-benzyloxycarbonylaminoäthylgruppen (Weygand). Die Hydroxylgruppen brauchen aber nicht notwendig geschützt zu werden.The hydroxyl groups of the serine, threonine and tyrosine residues can be protected, for example, by esterification or etherification. Suitable acyl radicals in the esterification are, for example, lower alkanoyl radicals such as acetyl, aroyl radicals such as benzoyl and, above all, radicals derived from carbonic acid such as benzyloxycarbonyl or ethyloxycarbonyl. Groups suitable for etherification are, for example, benzyl, tetrahydropyranyl or tert. Butyl residues. Furthermore, the protection of the hydroxyl groups in Ber. 100 (1967), 3838-3849 described 2,2,2-trifluoro-l-tert-butyloxycarbonylamino or -l-benzyloxycarbonylaminoethyl groups (Weygand). However, the hydroxyl groups do not necessarily need to be protected.

Die Mercaptogruppen der Cysteinreste werden j z.B. durch Acylierung oder Alkylierung geschützt. Zur Acylierung geeignet ist z.B. der Acetyl- oder Benzoylrest,The mercapto groups of the cysteine residues are protected by j example acylation or alkylation. The acetyl or benzoyl radical, for example, is suitable for acylation,

QOSIiS/1907QOSIiS / 1907

der Aethylearbamoylrest oder der gegebenenfalls substituierte Carboben2oxyrest. Zur Alkylierung geeignet sind z.B. der tert.-Butyl- oder Benzylthiomethylrest oder gegebenenfalls substituierte Arylmethylgruppen wie Benzyl, p-Nitrobenzyl, Diphenylmethyl, Dimethoxybenzhydryl oder Trityl, ferner Phenylcyelohexyl, Thienyl(2)-cyclohexyl u.a., vgl. ^Ber· 1°1 (1968), 68l. Die Iminogruppe des Histidins braucht nicht unbedingt geschützt zu werden, jedoch kann es vorteilhaft sein, sie zu schützen, z.B. durch Benzyl, Trityl, Cärbobenzoxy, Adamantyloxycarbonyl oder die oben genannten Weygand¹sehen. Gruppen.the ethylearbamoyl radical or the optionally substituted carboben-oxy radical. The tert-butyl or benzylthiomethyl radical or optionally substituted arylmethyl groups such as benzyl, p-nitrobenzyl, diphenylmethyl, dimethoxybenzhydryl or trityl, and also phenylcyelohexyl, thienyl (2) -cyclohexyl and others, cf. ^Ber1 ° 1 (1968 ), 68l. The imino group of the histidine does not necessarily need to be protected, but it can be advantageous to protect it, for example by benzyl, trityl, cebobenzoxy, adamantyloxycarbonyl or the Weygand ¹ mentioned above. Groups.

Vorzugsweise verwendet man bei der 1» Variante des erfindungsgemässen Verfahrens zum Schutz der Carboxylgruppe der Seitenkette die tert.-Butylestergruppe, zum Schutz einer Aminogruppe der Sei benkette die ter«.-Butyloxycarbonylgruppe, für die Hydroxylgruppen der Serin-, Threonin- und Tyrosinreste, so'fera diese Überhaupt geschützt werden, die tert.-The 1 »variant of the process according to the invention is preferably used to protect the carboxyl group of the side chain the tert-butyl ester group, to protect a Amino group of the side chain the ter «.- butyloxycarbonyl group, for the hydroxyl groups of the serine, threonine and tyrosine residues, if these are protected at all, the tertiary

* I* I

Butyläthergruppe und_a wenn erwünscht, zum Schutz der Iminogruppe des Histidins die SjS^Sr-Trifluor-l-tert-butyloxycarbonylamitioäthylgruppe. Alle diese Schutzgruppen können, wenn erwünscht, in einer Stufe durch saure Hydrolyse, z.B. mittels Trifluoressigsäure odar Salzsäure, abgespalten werden. Beim Aufbau der bei der 1, VerfahrensVariante als Ausgangsmaterial verwendeten geschützten Dotriacontapeptide ^v Butyl ether group and _, if desired, the SjS ^ Sr-trifluoro-1-tert-butyloxycarbonylamitioethyl group to protect the imino group of the histidine. If desired, all of these protective groups can be split off in one step by acid hydrolysis, for example by means of trifluoroacetic acid or hydrochloric acid. When building the protected Dotriacontapeptide ^v

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.unter Verwendung von mit Trifluoressigsäure ·using trifluoroacetic acid

oder Salzsäure abspaltbaren Schutzgruppen werden die Mercaptogruppen vorzugsweise durch Benzyl oder Trityl geschützt.' Die S-Tritylgruppen können aus dem geschützten Peptid in organischer Lösung selektiv (unter Beibehaltung der mit Trifluoressigsäure abspaltbaren Gruppen) mit Mercuriacetat und Schwefelwasserstoff abgespalten werden. Die·S-Benzylgruppen können aus dem geschützten Peptid selektiv mit Natrium in flüssigem Ammoniak abgespalten werden. In beiden Fällen erhält man das geschützte Peptid mit freien Mercaptogruppen. Dieses kann zum' geschützten Disulfid, z.B. mit Jod in Eisessig, mit Dijodäthan in organischen Lösungsmitteln oder mit Luftsauerstoff in flüssigem Ammoniak oxydiert werden. · Besonders vorteilhaft ist es, die Mercaptogruppen durch Tritylgruppen zu schützen und diese aus dem geschützten Peptid unter gleichzeitiger Bildung der Disulfidbrücke mit Jod in Methanol zu entfernen, vgl. Kamber und Rittel, Helv.Chim.Acta ^1_ (1968) 206l. Die Bildung des Disulfidringes kann auf der Stufe einer die beiden Cysteinreste enthaltenden Teilsequenz, z.B. des Decapeptids 1-10, oder auf der Stufe des Dotriacontapeptids ausgeführt werden.or hydrochloric acid removable protective groups the mercapto groups are preferably protected by benzyl or trityl. The S-trityl groups can be derived from the Protected peptide selectively in organic solution (while retaining that which can be cleaved with trifluoroacetic acid Groups) split off with mercuric acetate and hydrogen sulfide will. The · S-benzyl groups can be selected from the protected Peptide can be split off selectively with sodium in liquid ammonia. In both cases you get that protected peptide with free mercapto groups. This can be converted into the protected disulfide, e.g. with iodine in glacial acetic acid, with diiodoethane in organic solvents or with Oxygen in the air can be oxidized in liquid ammonia. · It is particularly advantageous to carry through the mercapto groups Trityl groups and protect them from the protected Peptide with simultaneous formation of the disulfide bridge to be removed with iodine in methanol, see Kamber and Rittel, Helv.Chim.Acta ^ 1_ (1968) 206l. The formation of the disulfide ring can be at the stage of a partial sequence containing the two cysteine residues, for example the decapeptide 1-10, or be carried out at the stage of the Dotriacontapeptide.

Bei der 2. Verfahrensvariante des erfindungsgeniässen Verf ahrens kann das als Ausgangsmaterial verwendeteIn the 2nd variant of the process of the invention The process can be used as the starting material

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offenkettige Peptid vorzugsweise ebenfalls mit den für Variante l) genannten Schutzgruppen hergestellt werden. Die S-Tritylgruppen können mit Trifluoressigsäure entfernt und das freie offenkettige Peptid in bekannter Weise durch Kaliumferrieyanid in wässeriger Lösung oder durch Jod oder mit Luft in flüssigem Ammoniak oxydiert warden. Man kann aber auch die Tritylgruppen nach dem oben erwähnten Verfahren mit Jod und Methanol unter gleichzeitiger Disulfidbildung entfernen.open-chain peptide preferably also with the for Variant l) mentioned protecting groups are produced. The S-trityl groups can be removed with trifluoroacetic acid and the free open-chain peptide in a known manner by potassium ferricyanide in aqueous solution or by iodine or oxidized with air in liquid ammonia. But you can also use the trityl groups as mentioned above Process with iodine and methanol with simultaneous disulfide formation remove.

Bei der Herstellung der N-Acylderivate kann die Acylgruppe als Aminoschutzgruppe verwendet werden.In the preparation of the N-acyl derivatives can the acyl group can be used as an amino protecting group.

Die erhaltenen monomeren Peptide können in an sich bekannter Weise nachträglich in ihre Dimeren und umgekehrt und/oder die mono- oder dimeren Peptide in ihre Derivate, Säureadditionssalze und/oder Komplexe übergeführt werden. Die nachträglichen Umwandlungen können in zweckmässiger Reihenfolge, einzeln oder in Kombination durchgeführt werden.The monomeric peptides obtained can subsequently be converted into their dimers and vice versa in a manner known per se and / or the mono- or dimeric peptides converted into their derivatives, acid addition salts and / or complexes will. The subsequent conversions can be carried out in the appropriate order, individually or in combination be performed.

Die Ueberführung erhaltener monomerer in dimere Verbindungen erfolgt z.B. durch Behandlung mit Mercaptoverbindungen in neutralem oder schwach saurem Medium, beispielsweise durch Behandlung mit Cysteinhydroehlorid.. Die dimeren Verbindungen können unter basischen Bedingungen, z.B. mit verdünntem Ammoniak, in die monomeren Verbindungen umgewandelt werden. . ' \The conversion of monomeric obtained into dimeric Connections are made, for example, by treatment with mercapto compounds in a neutral or weakly acidic medium, for example by treatment with cysteine hydrochloride .. The dimeric compounds can under basic conditions, e.g. with dilute ammonia, are converted into the monomeric compounds. . '\

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Zur Herstellung von Acylderivaten kann man > das freie Peptid in üblicher Weise N-acylieren, z.B. durch Umsetzung mit einem den betreffenden Acylrest enthaltenden gemischten Anhydrid oder Säureazid oder vor allem einem aktivierten Ester wie Phenyl- öder substituierten Phenylester. Die Acylierung kann, wenn erwünscht, selektiv durchgeführt werden, so dass nur die a-Aminogruppe acyliert wird. ·To prepare acyl derivatives,> the free peptide can be N-acylated in the usual way, for example by reaction with a mixed anhydride or acid azide containing the acyl radical in question or, above all, an activated ester such as phenyl or substituted phenyl ester. The acylation can, if desired, be carried out selectively so that only the α-amino group is acylated. ·

Die Bildung von Säureadditionssalzen wird in bekannter Weise vorgenommen.The formation of acid addition salts is carried out in a known manner.

Auch die Bildung von Komplexen erfolgt nach bekannten oder diesen äquivalenten Methoden.The formation of complexes also takes place according to known or equivalent methods.

Komplexe mit anorganischen Stoffen wie schwerlöslichen Metall-, z.B. Aluminium- oder Zinkverbindungen werden vorzugsweise in analoger Weise wie für ACTH bekannt, z.B. durch Umsetzung mit einem löslichen Salz des betreffenden Metalls, z.B. Zinkchlorid oder Zinksulfat, und Ausfällung mit einem Alkalimetallphosphat und/oder -hydroxyd hergestellt. Komplexe mit organischen Verbindungen wie Polyoxygelatine, Carboxymethylcellulose, Polyvinylpyrrolidon, Polyphloretinphosphat, Polyglutaminsäure etc. werden durch Mischen dieser Substanzen mit dem Peptid in wässeriger Lösung erhalten. In gleicher Weise können auch unlösliche Verbindungen mit AlkalimetallpolyphosphatenComplexes with inorganic substances such as poorly soluble Metal, e.g. aluminum or zinc compounds are preferably used in a manner analogous to that known for ACTH, e.g. by reaction with a soluble salt of the metal in question, e.g. zinc chloride or zinc sulfate, and precipitation with an alkali metal phosphate and / or -hydroxyd produced. Complexes with organic compounds such as polyoxygelatin, carboxymethyl cellulose, polyvinylpyrrolidone, polyphloretin phosphate, polyglutamic acid etc. are made by mixing these substances with the peptide obtained in aqueous solution. In the same way you can also insoluble compounds with alkali metal polyphosphates

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hergestellt werden.getting produced.

Die Erfindung betrifft auch diejenigen Ausführungsformen des Verfahrens, bei denen man von einem auf irgendeiner Verfahrensstufe erhältlichen Zwischenprodukt .ausgeht und die fehlenden Schritte vornimmt oder das Verfahren auf irgendeiner Stufe abbricht und/oder einen · Ausgangsstoff in situ bildet und/oder in Form eines Salzes verwendet. -The invention also relates to those embodiments of the method in which one of a intermediate product obtainable at any stage of the process and carries out the missing steps or the process breaks off at any stage and / or a Forms starting material in situ and / or used in the form of a salt. -

Die als Ausgangsstoffe verwendeten PeptideThe peptides used as starting materials

werden erhalten, indem man die Aminosäuren, wenn erforderlich oder erwünscht unter Verwendung leicht abspaltbarer Schutzgruppen, in der erwähnten Reihenfolge einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten verknüpft, wobei gegebenenfalls auf einer geeigneten Stufe der Synthese die Disulfidbrücke gebildet wird. Man arbeitet zweckmässig nach den für die Herstellung langkettiger Peptide, unter Berücksichtigung der Disulfid-Brücke, geeigneten Verknüpfungsmethoden, wie sie aus der Literatur bekannt sind.are obtained by adding the amino acids when required or, if desired, using easily removable protective groups, linked individually or after previous formation of smaller peptide units in the order mentioned, the disulfide bridge being formed, if appropriate, at a suitable stage of the synthesis. One works appropriately according to the linking methods suitable for the production of long-chain peptides, taking into account the disulfide bridge, as they are known from literature.

Dip Verknüpfung der Aminosäure- und/oder Peptideinheiten erfolgt daher z.B. in der Weise, dass man eine Aminosäure oder ein Peptid mit geschützter a-Aminogruppe und aktivierter terminaler Carboxylgruppe mit einer Aminosäure oder einem Peptid mit freier a-Aminogrüppe und freierDip linkage of the amino acid and / or peptide units therefore takes place, for example, in such a way that an amino acid or a peptide with a protected α-amino group and activated terminal carboxyl group with an amino acid or a peptide with free α-amino group and free

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oder geschützter, z.B. veresterter oder amidierter- terminaler Carboxylgruppe umsetzt oder dass man eine Aminosäure oder ein Peptid mit aktivierter cc-Aminogruppe und geschlitzter terminaler Carboxylgruppe mit einer Aminosäure oder einem Peptid mit freier terminaler Carboxylgruppe und geschützter a-Aminogruppe umsetzt. Die Carboxylgruppe kann beispielsweise durch Ueberführung in ein Säureazid, -anhydrid, -imidazolid oder einen aktivierten Ester, wie Cyanmethylester, Thiophenylester, p-Nitrothiophenylester, Thiokresylester, p-Methansulfonylphenylester, p-Nitrophenylester..-·, 2,4-Dinitrophenylester, 2,4,5- oder 2,4,6-Trichlorphenylester, Pentachlorphenylester, N-Hydroxysuccinimidester, N-Hydroxyphthalimidester, δ-Hydroxychinolinester, N-Hydroxypiperidinester, oder durch Reaktion mittels eines Carbodiimids (gegebenenfalls unter Zusatz von N-Hydroxysuccinimid) oder N,N¹-Carbonyldiimidazols, oder Isoxaaoliumsalzes, z.B. Woodward Reagens, die Aminogruppe beispielsweise durch Reaktion mit einem Phosphit aktiviert werden. Als gebräuchlichste Methoden sind zu nennen die Carbodiimidmethode, die Methode nach Weygand-Wünsch (Carbodiimid in Gegenwart von N-Hydroxysuccinimid), die Azidmethode, die Methode der aktivierten Ester und die Anhydridmethode, ferner die Merrifield-Methode und die Methode der N-Carboxyanhydride oder N-Thiocarboxyanhydride.or protected, eg esterified or amidated terminal carboxyl group or that an amino acid or a peptide with activated cc-amino group and slotted terminal carboxyl group is reacted with an amino acid or a peptide with free terminal carboxyl group and protected a-amino group. The carboxyl group can be converted, for example, into an acid azide, anhydride, imidazolide or an activated ester, such as cyanomethyl ester, thiophenyl ester, p-nitrothiophenyl ester, thiocresyl ester, p-methanesulfonylphenyl ester, p-nitrophenyl ester ..- ·, 2,4-dinitrophenyl ester, 2 , 4,5- or 2,4,6-trichlorophenyl ester, pentachlorophenyl ester, N-hydroxysuccinimide ester, N-hydroxyphthalimide ester, δ-hydroxyquinoline ester, N-hydroxypiperidine ester, or by reaction using a carbodiimide (optionally with the addition of N-hydroxysuccinimide) or N, N ¹ -carbonyldiimidazole, or isoxaolium salt, for example Woodward reagent, the amino group can be activated, for example, by reaction with a phosphite. The most common methods are the carbodiimide method, the Weygand-Wünsch method (carbodiimide in the presence of N-hydroxysuccinimide), the azide method, the activated ester method and the anhydride method, and also the Merrifield method and the N-carboxyanhydride method N-thiocarboxy anhydrides.

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Neben der Herstellung der Endprodukte stellt auch die Herstellung*der Ausgangsstoffe, vor allem des die Disulfidbrücke enthaltenden Peptidbruchstückes und dessen Verknüpfung mit dem restlichen Teil des Peptide einen besonderen Erfindungsgegenstand dar. Wenn die Aminosäure in 10- oder 12-Stellung Glycin ist, ist es vorteilhaft, von einer Sequenz auszugehen, welche die ersten 10 bzw. 12 N-terminalen Aminosäuren umfasst und mit diesem N-Terminus die gesamte restliche Sequenz zu kondensieren.In addition to the manufacture of the end products, the manufacture * of the starting materials, especially the Disulfide bridge containing peptide fragments and its Linkage with the remaining part of the peptide is a special subject of the invention. When the amino acid is glycine in the 10- or 12-position, it is advantageous to to start from a sequence which comprises the first 10 or 12 N-terminal amino acids and with this N-terminus to condense the entire remaining sequence.

Man kann aber auch die genannte N-terminale Sequenz mit dem Fragment bis zur 28. Aminosäure (Glycin) mit freier C-terminaler Carboxylgruppe verknüpfen und das Octacosapeptid mit dem Tetrapeptidamid der Aminosäuren 29-32 kondensieren. Diese Kondensation wird beispielsweise nach der Weygand-Wünsch Methode durchgeführt. Falls die Kondensation der Sequenz 1-10 bzw. 1-12 mit der C-terminalen Sequenz 11-32 bzw. 13-32 ausgeführt wird, verwendet man vorzugsweise die Carbodiimidmethode oder die Methode nach Weygand-Wünsch.But you can also use the N-terminal sequence mentioned with the fragment up to the 28th amino acid (glycine) link with a free C-terminal carboxyl group and the octacosapeptide with the tetrapeptide amide of the amino acids Condense 29-32. This condensation is for example carried out according to the Weygand-Wünsch method. if the Condensation of the sequence 1-10 or 1-12 is carried out with the C-terminal sequence 11-32 or 13-32, one uses preferably the carbodiimide method or the Weygand-Wünsch method.

Im folgenden werden bevorzugte Ausführungsformen für die Herstellung des Peptids der Formel I, in welchem die achte Aminosäure, Methionin, durch Valin, Norvalin, Leucin, Isoleucin, Norleucin oder a-Aminobuttersäure ersetzt ist (diese achte Aminosäure wird inPreferred embodiments for the preparation of the peptide of the formula I, in which the eighth amino acid, methionine, by valine, norvaline, leucine, isoleucine, norleucine or α-aminobutyric acid is replaced (this eighth amino acid is in

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- ie - 19'5O711- ie - 19'5O711

den Figuren als X bezeichnet) erläutert. Die Schemata zeigen spezielle Arbeitsweisen, die selbstverständlich durch äquivalente Arbeitsweisen ersetzt werden können.denoted as X in the figures). The diagrams show special working methods, which of course equivalent working methods can be replaced.

In den Figuren und in den Beispielen bedeuten:In the figures and in the examples:

1) die Azidmethode1) the azide method

2) die Methode der gemischten Anhydride2) the mixed anhydride method

3) die Methode der aktivierten Ester, besonders p-Nitrophenylester (ONP) oder Hydroxysuccinimidester (OSU)3) the activated ester method, especially p-nitrophenyl ester (ONP) or hydroxysuccinimide ester (OSU)

4) die Carbodiimidmethode4) the carbodiimide method

5) die Methode nach Weygand-Wünsch BOC tert. Butyloxycarbonyl, DPC 2-(p-Biphenylyl)-isopropyloxycarbonyl, Z Carbobenzoxy TRI Trityl5) the method according to Weygand-Wünsch BOC tert. Butyloxycarbonyl, DPC 2- (p-biphenylyl) isopropyloxycarbonyl, Z carbobenzoxy TRI trityl

BzI BenzylBzI benzyl

OtBu tert.-Butylester OBzI Benzylester ONB p-Nitrobenzylester ONP p-Nitrophenylester OMe Methylester OEt AethylesterOtBu tert-butyl ester OBzI benzyl ester ONB p-nitrobenzyl ester ONP p-nitrophenyl ester OMe methyl ester OEt ethyl ester

QCP 2,4^5-Trichlorphenylester tBu tert.-ButylätherQCP 2,4 ^ 5-trichlorophenyl ester tBu tert-butyl ether

Ac AcetylAc acetyl

TFA Trifluoressigsäure Abu a-AminobuttersäureTFA trifluoroacetic acid Abu a-aminobutyric acid

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Das N-terminale Decapeptid (l-lO) mit X in der angegebenen Bedeutung als achter Aminosäure kann z.B. aus den Sequenzen 1-4 und 5-10 oder 1-5 und 6-10 oder 1-6 und 7-10 oder 1-7 und 8-10 aufgebaut werden, wie aus den Fig. 1-8 ersichtlich; man kann jedoch auch andere Bruchstücke zum Aufbau der Sequenz 1-10 verwenden. Als Schutzgruppe für die a-Aminogruppe am Cystein wird vorzugsweise die tert.-Butyloxycarbonylgruppe oder eine äquivalente, durch saure Hydrolyse abspaltbare Gruppe verwendet, oder wenn ein Na-acyliertes Dotriacontapeptid hergestellt werden soll, die entsprechende Acyl- z.B. Acetylgruppe. Daneben verwendet man zweckmässig als Mercaptoschutzgruppen solche, die selektiv gegen ^er der durch saure Hydrolyse abspaltbaren N -Aminoschutzgruppe (z.B. tert.-Butyloxycarbonylgruppe) abgespalten werden können, z.B. die Benzyl- oder Tritylgruppe. Die terminale Carboxylgruppe des Decapeptids braucht nicht notwendig geschützt zu werden, z.B. nicht, wenn Kondensationen nach der Azid- oder Anhydridmethode ausgeführt werden. Man kann diese Gruppe aber auch durch Veresterung, wie oben angegeben, schützen, z.B. durch Veresterung mit Methanol oder Aethanol (Abspaltung der Estergruppe mit verdünnter Natronlauge) oder mit Benzylalkohol oder Analogen (Abspaltung der Estergruppe z.B. mitThe N-terminal decapeptide (l-lO) with X in the given meaning as the eighth amino acid can e.g. from the sequences 1-4 and 5-10 or 1-5 and 6-10 or 1-6 and 7-10 or 1-7 and 8-10 can be constructed as shown in Figures 1-8; however, other fragments can also be used use to build sequence 1-10. The preferred protective group for the α-amino group on the cysteine is the tert-butyloxycarbonyl group or an equivalent group which can be split off by acid hydrolysis is used, or when preparing a Na-acylated dot-triacontapeptide should, the corresponding acyl e.g. acetyl group. In addition, it is expedient to use mercapto protecting groups those which can be split off selectively against those which can be split off by acid hydrolysis N -amino protecting group (e.g. tert-butyloxycarbonyl group) can be split off, e.g. the benzyl or trityl group. The terminal carboxyl group of the decapeptide does not need to be protected, e.g. not if condensation using the azide or anhydride method are executed. However, this group can also be protected by esterification, as indicated above, e.g. by Esterification with methanol or ethanol (splitting off of the Ester group with dilute sodium hydroxide solution) or with benzyl alcohol or analogues (cleavage of the ester group e.g. with

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Natrium in flüssigem Ammoniak). Der Schutz der Aminogruppen der Zwischenprodukte erfolgt mittels der üblichen Schutzgruppen, z.B. Carbobenzoxy, Trityl, tert.-Butyloxycarbonyl oder 2-para-Diphenyl-isopropyloxycarbonyl. Die Carboxylgruppen der Zwischenprodukte werden, wenn erforderlich, in der üblichen Weise verestert. Die Hydroxygruppen des Serin- und Threoninrestes können durch Verätherung, z.B. mit tert.-Butanol oder Aequivalenten geschützt werden.Sodium in liquid ammonia). Protection of the amino groups the intermediate products are carried out by means of the usual protective groups, e.g. carbobenzoxy, trityl, tert.-butyloxycarbonyl or 2-para-diphenyl-isopropyloxycarbonyl. The carboxyl groups of the intermediates are, if necessary, esterified in the usual way. The hydroxyl groups of the Serine and threonine residues can be protected by etherification, e.g. with tert-butanol or equivalents.

Die p-Nitrobenzylester- und Benzylestergruppen können mit Natrium in flüssigem Ammoniak oder durch Hydrogenolyse in Gegenwart von Palladiumkohle abgespalten werden, die Carbobenzoxygruppe ebenfalls durch Hydrogenolyse, die N-Tritylgruppe mit wässeriger Essigsäure, die tert.-Butyloxycarbonylgruppe mit Trifluoressigsäure, die 2-(p-Biphenylyl)-isopropyloxycarbonylgruppe mit wässeriger Essigsäure oder z.B. mit einem Gemisch von Eisessig, Ameisensäure (82,8#ig) und Wasser (7:1:2) wie im. französischen Patent Nr. 1 554 051 beschrieben. DerThe p-nitrobenzyl ester and benzyl ester groups can be mixed with sodium in liquid ammonia or by Hydrogenolysis is split off in the presence of palladium carbon, the carbobenzoxy group also by hydrogenolysis, the N-trityl group with aqueous acetic acid, the tert-butyloxycarbonyl group with trifluoroacetic acid, the 2- (p-biphenylyl) -isopropyloxycarbonyl group with aqueous Acetic acid or e.g. with a mixture of glacial acetic acid, formic acid (82.8 # ig) and water (7: 1: 2) as in. French U.S. Patent No. 1,554,051. Of the

p-Nitrobenzyl- oder Methylester kann mit Hydrazinhydrat in das Hydrazid übergeführt werden. Mit verdünnter Natronlauge wird die Methyl- oder Aethylestergruppe hydrolysiert. Der tert. Butylester wird mit Trifluoressigsäure gespalten, ebenso der tert.-Butyläther, Die S-Tritylgruppen werden mit Mercuriacetat und Schwefelwasserstoff entfernt, die S-Benzylgruppe mit Natrium in flüssigem Ammoniak, wobeip-nitrobenzyl or methyl ester can hydrazine hydrate be converted into the hydrazide. The methyl or ethyl ester group is hydrolyzed with dilute sodium hydroxide solution. The tert. Butyl ester is split with trifluoroacetic acid, as is the tert-butyl ether. The S-trityl groups are split with Mercuric acetate and hydrogen sulfide removed the S-benzyl group with sodium in liquid ammonia, being

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• · ♦ I• · ♦ I

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gegebenenfalls vorhandene Benzyl- oder p-Nitrobenzylestergruppen gleichzeitig abgespalten werden. Der Ringschluss zum Disulfid erfolgt z.B. durch Oxydation mit 1,2-Dijodäthan, derjenige der S-Trityl-geschützten Verbindungen mit Jod in Methanol.optionally present benzyl or p-nitrobenzyl ester groups be split off at the same time. The ring closure to the disulfide takes place e.g. by oxidation with 1,2-diiodoethane, that of the S-trityl protected compounds with iodine in methanol.

Die mit der N-terminalen Sequenz zu verbindende C-terminale Sequenz umfassend die 11. bis 32. bzw. 11. bis 28. Aminosäure wird beispielsweise aus den Sequenzen II-I6, 17-20, 21-28 und 29-32 zusammengesetzt, wie Fig. 9 zeigt.The C-terminal sequence to be connected to the N-terminal sequence comprising the 11th to 32nd or 11th to 28. Amino acid is, for example, from the sequences II-I6, 17-20, 21-28 and 29-32 assembled, as Fig. 9 shows.

In diesem Schema sind die Hydroxylgruppen der Threoninreste und des Tyrosinrestes geschützt, dies ist nicht unbedingt erforderlich. Es können auch andere Teilsequenzen miteinander vereinigt und andere Schutzgruppen verwendet werden.In this scheme the hydroxyl groups of the threonine residues and the tyrosine residue are protected, this is not necessarily required. Other partial sequences and other protective groups can also be combined with one another be used.

Fig. 10 zeigt den Aufbau des Hexapeptids (in Form des Hydrazids) der Aminosäuren II-I6. Es kann nach der Azidmethode mit der Sequenz 17-28 oder 17-32 verknüpft werden. *Fig. 10 shows the structure of the hexapeptide (in the form of the Hydrazides) of amino acids II-I6. It can be done by the azide method can be linked to the sequence 17-28 or 17-32. *

Die Sequenz 17-28 kann nach der Azidmethode aus den Fragmenten' 17-20 und 21-28 aufgebaut werden.The sequence 17-28 can be carried out by the azide method can be constructed from fragments' 17-20 and 21-28.

Fig. 11 zeigt die Synthese des Tetrapeptidhydrazids der Aminosäuren 17-20, Fig. 12 den Aufbau des Octapeptids 21-28. Nach der Verknüpfung der beiden Sequenzen wird die a-Aminoschutzgruppe abgespalten (dieFIG. 11 shows the synthesis of the tetrapeptide hydrazide of amino acids 17-20, FIG. 12 shows the structure of the Octapeptide 21-28. After the two sequences have been linked, the a-amino protective group is split off (the

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Carbobenzoxygruppe durch Hydrogenolyse in Gegenwart von Palladiumkohle) und das so erhaltene Dodecapeptid mit geschützten Seitenketten nach der Azidmetho'de mit dem Hexapeptidhydrazid 11-l6 (Fig.10) kondensiert.Carbobenzoxy group by hydrogenolysis in the presence of palladium carbon) and the dodecapeptide thus obtained with protected side chains after the Azidmetho'de with the hexapeptide hydrazide 11-16 (Fig.10) condensed.

Die so erhaltene Sequenz 11-28 kann mit dem Tetrapeptidamid der Aminosäuren 29-32, dessen Herstellung Fig. 13 zeigt, verbunden werden, z.B. nach der Methode von Weygand-Wünsch. Man erhält dann das geschützte Docosapeptidamid 11-32. Aus diesem kann man die a-Aminoschutzgruppe abspalten (Carbobenzoxy z.B. hydrogenolytisch, DPC mit 90#iger Essigsäure oder Eisessig-Ameisensäure (82,8#ig) - Wasser (7:1:2) und die so erhaltene Verbindung mit freier a-Aminogruppe nach Entfernung der Essigsäure mit dem N-terminalen Decapeptid (Fig·. 1-8) verknüpfen, beispielsweise nach der Methode der gemischten Anhydride, der aktivierten Ester (OSU) oder nach Weygand-Wünsch.The sequence 11-28 obtained in this way can be linked to the tetrapeptide amide of amino acids 29-32, its production Fig. 13 shows, for example, the method from Weygand-Wünsch. The protected docosapeptide amide 11-32 is then obtained. From this one can get the a-amino protecting group split off (carbobenzoxy e.g. hydrogenolytically, DPC with 90% acetic acid or glacial acetic-formic acid (82.8%) - water (7: 1: 2) and the compound obtained in this way link with free α-amino group after removal of acetic acid with the N-terminal decapeptide (Fig. 1-8), for example by the mixed anhydride method, the activated ester (OSU) or Weygand-Wünsch method.

Man kann aber auch die Sequenz 11-28 mit freier C-terminaler Carboxylgruppe nach Abspaltung der a-Aminoschutzgruppe in der genannten Weise, mit dem N-terminalen Decapeptid nach der Methode der gemischten Anhydride verknüpfen und das so erhaltene Produkt mit dem Tetrapeptidamid 29-32 kondensieren, z.B. nach'Weygand-Wünsch. But you can also use the sequence 11-28 with a free C-terminal carboxyl group after the cleavage a-amino protecting group in the manner mentioned, with the N-terminal decapeptide by the method of mixed Link anhydrides and condense the product thus obtained with the tetrapeptide amide 29-32, e.g. according to'Weygand-Wünsch.

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Eine weitere Möglichkeit, die C-terminäle Sequenz 11-32 aufzubauen, besteht z.B. darin, dass man sie aus den Teilsequenzen II-I9 und 20-32, die in Fig. 14 und 15 gezeigt sind, zusammensetzt, vorzugsweise nach der MethodeAnother possibility is the C-terminal sequence 11-32 To build it up consists, for example, in that it is made up of the partial sequences II-I9 and 20-32, which are shown in FIGS. 14 and 15 are shown, composed, preferably according to the method

der gemischten Anhydride oder nach Weygand-Wünsch.the mixed anhydrides or according to Weygand-Wünsch.

Aus dem geschützten Dotriacontapeptidamid werden die Schutzgruppen abgespalten, beispielsweise mit Trifluoressigsäure, oder mit konzentrierter Salzsäure.The protective groups are split off from the protected Dotriacontapeptidamid, for example with Trifluoroacetic acid, or with concentrated hydrochloric acid.

Das für das Verfahren gemäss Variante 2) zu verwendende Dotriacontapeptid mit freien bzw. Tritylgeschützten SH-Gruppen kann in analoger Weise wie das oben beschriebene geschützte Dotriacontapeptid hergestellt werden, mit dem Unterschied, dass die geschützten SH-Gruppen bis zum Schluss der Synthese beibehalten werden. ErstThe dotriacontapeptide with free or trityl-protected SH groups to be used for the method according to variant 2) can be prepared in a manner analogous to the protected dotriacontapeptide described above, with the difference that the protected SH groups are retained until the end of the synthesis. First

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nachdem alle übrigen Schutzgruppen aus dem geschützten Dotriacontapeptid entfernt worden sind, spaltet man die SH-Schutzgruppen bzw. oxydiert die Tritylgeschützte Verbindung direkt wie oben erwähnt.after all other protecting groups have been removed from the protected Dotriacontapeptide, cleavage SH protective groups or oxidizes the trityl-protected compound directly as mentioned above.

Die Synthese gemäss Variante 3) des Verfahrens eignet sich besonders für die Herstellung von End - . produkten . mit a'cylierten Aminogruppen oder vor allem auch für die Herstellung von a-Desamino- oder a-acylierten Peptiden, in welchen die Aminosäure l8, Lysin, gegen eine Aminosäure, die keine acylierbare Aminogruppe in der Seitenkette enthält, z.B. gegen Glycin oder gegen die Aminosäure l8 des Schweine-Thyrocalcitonins, Asparagin, ausgetauscht ist. Das N -acylierte Decapeptid kann z.B. nach Fig. 5 K hergestellt werden; man kann jedoch auch als Aminoschutzgruppe von Anfang an die beizubehaltende Acylgruppe wählen. Die Synthe&emethoden entsprechen den oben beschriebenen.The synthesis according to variant 3) of the process is particularly suitable for the production of end products. products. with acylated amino groups or especially for the preparation of a-deamino or a-acylated Peptides in which the amino acid 18, lysine, against an amino acid that does not have an acylatable amino group in the side chain contains, e.g. against glycine or against the amino acid l8 of pig thyrocalcitonin, asparagine, is exchanged. For example, the N -acylated decapeptide can be prepared according to Fig. 5K; but one can also as an amino protecting group, the one to be retained from the start Choose acyl group. The synthesis methods correspond to the described above.

Je nach der Arbeitsweise erhält man die neuen Verbindungen in Form von Basen oder ihren Salzen. Aus den Salzen können in an sich bekannter Weise die Basen gewonnen werden. Von letzteren wiederum lassen sich durch Umsetzung mit Säuren, die zur Bildung therapeutisch verwendbarer Salze geeignet sind, Salze gewinnen, wie z.B. solche mit anorganischen Säuren, wie Halogenwasserstoff-Depending on the method of operation, the new compounds are obtained in the form of bases or their salts. the end The bases can be obtained from the salts in a manner known per se. The latter, in turn, let through Reaction with acids which are suitable for the formation of therapeutically useful salts to obtain salts, e.g. those with inorganic acids, such as hydrogen halide

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säuren, beispielsweise Salzsäure oder Bromwasserstoffsäure, Perchlorsäure, Salpetersäure oder Thiocyansäure, Schwefel- oder Phosphorsäuren, oder organischen Säuren, wie Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Glykolsäure, Milchsäure, Brenztraubensäure, Oxalsäure, Malonsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Aepfelsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Ascorbinsäure, Hydroxymaleinsäure, Dihydroxymaleinsäure, Benzoesäure, Phenylessigsäure, 4-Aminobenzoesäure, 4-Hydroxybenzoesäure, Anthranilsäure, Zimtsäure, Mandelsäure, Salicylsäure, 4-Aminosalicylsäure, 2-Phenoxybenzoesäure, 2-Acetoxybenzoesäure, Methansulfonsäure, Aethansulfonsäure, Hydroxyäthansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Naphthalinsulfonsäure oder SuIfanilsäure.acids, for example hydrochloric acid or hydrobromic acid, Perchloric acid, nitric acid or thiocyanic acid, sulfuric or phosphoric acids, or organic acids, such as formic acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, lactic acid, pyruvic acid, oxalic acid, malonic acid, Succinic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, ascorbic acid, hydroxymaleic acid, Dihydroxymaleic acid, benzoic acid, phenylacetic acid, 4-aminobenzoic acid, 4-hydroxybenzoic acid, anthranilic acid, Cinnamic acid, mandelic acid, salicylic acid, 4-aminosalicylic acid, 2-phenoxybenzoic acid, 2-acetoxybenzoic acid, Methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, hydroxyethanesulfonic acid, Benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, naphthalenesulfonic acid or suIfanilic acid.

Die verfahrensgemäss erhaltenen Peptide können in Form von pharmazeutischen Präparaten Verwendung finden. Diese enthalten die Peptide in Mischung mit einem für die enterale oder parenterale Applikation geeigneten pharmazeutischen, organischen oder anorganischen Trägermaterial. Für dasselbe kommen solche Stoffe in Frage, die mit den Polypeptiden nicht reagieren, wie z.B. Gelatine, Milchzucker, Glukose, Kochsalz, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliche OeIe, Benzylalkohol, Gummi, Polyalkylenglykole, Vaseline, Cholesterin oder andere bekannte Arzneimittelträger. Die pharmazeutischen Präparate können z.B. als Lyophilisat oder in flüssiger Form als Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Gegebenenfalls sind sie sterilisiert und bzw. oder enthalten Hilfsstoffe, wie Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netz- oder Emulgier-The peptides obtained according to the method can be used in the form of pharmaceutical preparations. These contain the peptides in a mixture with one suitable for enteral or parenteral administration pharmaceutical, organic or inorganic carrier material. For the same, substances come into question that do not react with the polypeptides, such as gelatin, lactose, glucose, table salt, starch, magnesium stearate, Talc, vegetable oils, benzyl alcohol, rubber, polyalkylene glycols, Petroleum jelly, cholesterol, or other known excipients. The pharmaceutical preparations can e.g. as a lyophilisate or in liquid form as solutions, suspensions or emulsions. Possibly are they sterilized and / or contain auxiliary substances such as preservatives, stabilizers, wetting or emulsifying agents

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wertvollevaluable

mittel. Sie können auch noch andere therapeutisch wertvo] Stoffe enthalten. ·middle. They can also contain other therapeutically valuable substances. ·

Die Erfindung wird in den folgenden Beispielen beschrieben. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben. The invention is described in the following examples. The temperatures are given in degrees Celsius.

In der Dünnschichtchromatographie werden die folgenden Systeme verwendet: The following systems are used in thin layer chromatography:

tert.-Amylalkohol-Isopropanol-Wasser (lOO:40:10) tert.-Amylalkohol-Isopropanol-Wasser (51:21:28) see. Butanol-3#iges wässeriges Ammoniak (7°:30) n-Butanol-Eisessig-Wasser (75:7,5:21) n-Butanol-Eisessig-Wasser (67:10:23) n-Butanol-Pyridin-Wasser (34:33:33) Isopropanol-Eisessig-Wasser (77:4:19) Essigester-Aceton-Wasser (72:24:4)tert-amyl alcohol-isopropanol-water (100: 40: 10) tert-amyl alcohol-isopropanol-water (51:21:28) see. Butanol-3 # aqueous ammonia (7 °: 30) n-butanol-glacial acetic acid-water (75: 7.5: 21) n-butanol-glacial acetic acid-water (67:10:23) n-butanol-pyridine-water (34:33:33) Isopropanol-glacial acetic acid-water (77: 4: 19) Ethyl acetate-acetone-water (72: 24: 4)

Aethylaeetat-Pyridin-Eisessig-Wasser (62:21:6:11)Ethyl acetate-pyridine-glacial acetic acid-water (62: 21: 6: 11)

Essigester-Methyläthylketon-Eisessig-WasserEthyl acetate-methyl ethyl ketone-glacial acetic acid-water

(50:30:10:10)(50: 30: 10: 10)

Aethylacetat-Pyridin-Wasser (49:24:27)Ethyl acetate-pyridine-water (49:24:27)

Aethylacetat-Pyridin-Ameisensäure-WasserEthyl acetate-pyridine-formic acid-water

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Isopropanol-Ammoniak (26#ig)-Wasser (85:5'10) Benzol-Aethanol (80 : 20)
Benzol-Aethanol (90 : 10)Isopropanol-ammonia (26 # ig) -water (85: 5 '10) benzene-ethanol (80: 20)
Benzene-ethanol (90:10)

η-Amylalkohol-Ameisensäure-Wasser (70:20:10) n-Butanol-Essigsäure-Wasser (66,6:Ϊ6,7:l6,7) n-Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser (66,6:12,5 :4, n-Amylalkohol-Pyridin-Wasser (70:20:10) Chloroform-Methanol-Eisessig (87,4:9,7:2,9) Benzol-Aethanol (70:30)
Benzol-Aethanol (6θ:4θ)
Die Dünnschichtchromatographie'wird auf Silicagel oder Aluminiumoxid ("Alox" D-O der Firma Camag mit 8$ Gips) oder auf Cellulose ("Selecta 144O der Pa. Schleichter und Schuell) durchgeführt.η-Amyl alcohol-formic acid-water (70:20:10) n-butanol-acetic acid-water (66.6: Ϊ6.7: l6.7) n-butanol-pyridine-acetic acid-water (66.6: 12, 5: 4, n-amyl alcohol-pyridine-water (70:20:10) chloroform-methanol-glacial acetic acid (87.4: 9.7: 2.9) benzene-ethanol (70:30)
Benzene-ethanol (6θ: 4θ)
Thin-layer chromatography is carried out on silica gel or aluminum oxide ("Alox" DO from Camag with $ 8 plaster of paris) or on cellulose ("Selecta 144O from Pa. Schleicher and Schuell).

009818/1907009818/1907

Systemsystem 43A43A Systemsystem 43c43c Systemsystem 4545 Systemsystem 5252 Systemsystem 52A52A Systemsystem 7979 Systemsystem 8787 Systemsystem 8989 Systemsystem 100100 Systemsystem 102E102E Systemsystem IO7IO7 Systemsystem 115115 Systemsystem 12IA12IA Systemsystem 11 Systemsystem 22 Systemsystem 44th Systemsystem 55 Systemsystem 66th Systemsystem 77th Systemsystem 88th Systemsystem 99 Systemsystem 1010

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Beispiel 1example 1

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Val-Gly-Ala-Pro-NHp werden unter intensivem Rühren in 10 ml eiskalte, konzentrierte Salzsäure eingetragen. Nach 10 Minuten bei 0° werden 50 ml Wasser und 5 ml Eisessig zugegeben und die Lösung wird zur Entfernung von Chlor-Ionen über eine Säule von Merck-Ionenaustauscher Nr. II, schwach basisch, Acetatform, filtriert. Hierauf wird unter η-Octanol-Zusatz am Rotationsverdampfer zur Trockne verdampft, der Rückstand zur Entfernung von Octanol mit Pefcroläther mehrmals unter Dekantieren gewaschen, getrocknet, in 0,1 n. Ameisensäure gelöst und zur Reinigung an einer Säule (3,8 cm; 120 cm) von Bio-Gel P^ chromatographiert. Es werden Fraktionen von je 10 ml aufgefangen. Diese werden mittels Dünnschichtchromatographie auf Aluminiumoxyd (Systeme 52, 79 und 45) auf ihre Reinheit geprüft; die einheitlichen Fraktionen werden vereinigt und lyophilisiert.ini Dünnschichtchroroato-Val-Gly-Ala-Pro-NHp are introduced into 10 ml of ice-cold, concentrated hydrochloric acid with vigorous stirring. After 10 minutes at 0 °, 50 ml of water and 5 ml of glacial acetic acid are added and the solution is filtered through a column of Merck ion exchanger No. II, weakly basic, acetate form, to remove chlorine ions. It is then evaporated to dryness on a rotary evaporator with addition of η-octanol, the residue is washed several times with Pefcrol ether to remove octanol, while decanting, drying, dissolved in 0.1N formic acid and cleaning on a column (3.8 cm; 120 ° C) cm) chromatographed by Bio-Gel P ^. Fractions of 10 ml each are collected. These are checked for purity by means of thin-layer chromatography on aluminum oxide (systems 52, 79 and 45); the uniform fractions are combined and lyophilized. in thin-layer chroroato-

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gramm an Silicagel ist RfV = 0,44; an Aluminiumoxid ist Rf₅₂ = 0,55; Rf₇₉ = 0,64; Rf₄₅= 0,45.grams of silica gel is RfV = 0.44; on aluminum oxide, Rf ₅₂ = 0.55; Rf ₇₉ = 0.64; Rf ₄₅ = 0.45.

Das Ausgangsmaterial kann wie folgt hergestellt werden:The starting material can be produced as follows:

1. Z-Ala-Pro-OtBu1. Z-Ala-Pro-OtBu

68,85 g Z-AIa-OH werden in 55Ο ml Dimethylformamid gelöst und dann werden 43,3 ml Triäthylamin zugefügt. Bei -15 gibt man 30,8 ml Chlorameisensäureäthylester zu und steigert die Temperatur innert 10 Minuten auf -10°. Dann wird eine auf -10° gekühlte Lösung von 52,65 g H-Pro-OtBu in 105 ml Dimethylformamid zugefügt. Man rührt 30 Minuten bei -10° und 2,5 Stunden bei 20°, lässt über Nacht im Kühlschrank stehen und verdampft dann das Lösungsmittel im Vakuum bei 40°. Der Rückstand wird in wässrigem Essigester aufgenommen, die Lösung mit 0,1-n. Salzsäure, lO^iger Kochsalzlösung, 5#igem Natriumbicarbonat und wieder mit Kochsalzlösung gewaschen, über.Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Bei Dünnschichtchromatographie auf Silicagel ist Rf₂ = 0,6.68.85 g of Z-Ala-OH are dissolved in 55Ο ml of dimethylformamide and then 43.3 ml of triethylamine are added. At -15, 30.8 ml of ethyl chloroformate are added and the temperature is increased to -10 ° within 10 minutes. Then a solution, cooled to -10 °, of 52.65 g of H-Pro-OtBu in 105 ml of dimethylformamide is added. The mixture is stirred for 30 minutes at -10 ° and 2.5 hours at 20 °, left to stand overnight in the refrigerator and then the solvent is evaporated off in vacuo at 40 °. The residue is taken up in aqueous ethyl acetate, the solution with 0.1 n. Hydrochloric acid, 10 ^ strength sodium chloride solution, 5 # strength sodium bicarbonate and washed again with sodium chloride solution, dried over sodium sulfate and evaporated to dryness in vacuo. In thin layer chromatography on silica gel, Rf ₂ = 0.6.

2. H-AIa-Pro-OtBu, Acetat2. H-AIa-Pro-OtBu, acetate

i Man löst I09 g Z-Ala-Pro-OtBu in 649 ml Methanol und ji Dissolve 109 g of Z-Ala-Pro-OtBu in 649 ml of methanol and j

hydriert in Gegenwart von 4,1 ml Eisessig und 3*1 S Palladium-009818/ 1907hydrogenated in the presence of 4.1 ml of glacial acetic acid and 3 * 1 S palladium-009818 / 1907

. _ 44 -. _ 44 -

kohle (lO$). Nach Filtration und Eindampfen der Lösung zur Trockne zeigt das Produkt Rf „ =0,5.coal (lO $). After filtration and evaporation of the solution on dryness the product shows Rf = 0.5.

3. Z-GIy-Ala-Pro-OtBu3. Z-GIy-Ala-Pro-OtBu

Man löst 56,75 g Z-GIy-OH in 675 ml Tetrahydrofuran. Mit 47,5 ml Triäthylamin und 27 ml Chlorameisensäureäthylester wird das gemischte Anhydrid gebildet und dieses mit 74 g H-Ala-Pro-OtBu, Acetat wie unter 1. umgesetzt. Das erhaltene OeI wird mit Aether verrieben. Das Produkt schmilzt bei 87 - 89°; [aJ^⁰= -62,9 (c = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₀ = 0,50.56.75 g of Z-GIy-OH are dissolved in 675 ml of tetrahydrofuran. The mixed anhydride is formed with 47.5 ml of triethylamine and 27 ml of ethyl chloroformate and this is reacted with 74 g of H-Ala-Pro-OtBu, acetate as in 1.. The oil obtained is triturated with ether. The product melts at 87-89 °; [aJ ^ ⁰ = -62.9 (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₀ = 0.50.

4. H-Gly-Ala-Pro-OtBu4. H-Gly-Ala-Pro-OtBu

80 g Z-Gly-Ala-Pro-OtBu werden in 800 ml Methanol gelöst und wie unter 2. beschrieben, jedoch ohne Eisessig, hydriert. Das Produkt zeigt im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel Rf₅ =0,30.80 g of Z-Gly-Ala-Pro-OtBu are dissolved in 800 ml of methanol and hydrogenated as described under 2., but without glacial acetic acid. _{The product shows Rf 5} = 0.30 in a thin-layer chromatogram on silica gel.

5. Z-VaI-GIy-Ala-Pro-OtBu5. Z-VaI-GIy-Ala-Pro-OtBu

Man suspendiert 54,7 g H-Gly-Ala-Pro-OtBu in 722 ml Essigester, kühlt auf -10° und fügt 71,6 g Z-VaI-ONP hinzu. Die Mischung wird 1 Stunde bei -10°, 1 Stunde bei 10° und54.7 g of H-Gly-Ala-Pro-OtBu are suspended in 722 ml Ethyl acetate, cool to -10 ° and add 71.6 g of Z-VaI-ONP. The mixture is 1 hour at -10 °, 1 hour at 10 ° and

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20 Stunden bei 20 gerührt. Man wäscht die Reaktionsmischung mit 0,1-n. Salzsäure, Salzwasser., 20#igem Kaliumcarbonat und wieder mit Salzwasser. Die organische Schicht wird getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft. Der Rückstand (OeI) wird mit Essigester-Hexan gewaschen. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₂ =0,4.Stirred at 20 for 20 hours. The reaction mixture is washed with 0.1 n. Hydrochloric acid, salt water., 20 # potassium carbonate and again with salt water. The organic layer is dried and the solvent evaporated in vacuo. The residue (OeI) is washed with ethyl acetate-hexane. In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₂ = 0.4.

6. Z-VaI-GIy-Ala-Pro-OH '* *6. Z-VaI-GIy-Ala-Pro-OH '* *

Man löst 102 g Z-VaI-GIy-AIa-Pro-OtBu in 690 ml trockenem Essigester und lässt Ij5 Stunden Salzsäuregas durch die Lösung strömen. Das Lösungsmittel wird verdampft, der Rückstand wieder in Essigester gelöst, Hexan zugefügt und 1 Stunde bei -10° gerührt. Dann filtriert man. Das Produkt schmilzt bei 111° (Zers.). [cc3^° = -38,3° (c =2 in Dimethylformamid). Im Dünnschiehromatogramm an Silicagel ist Rf₇= 0,50.102 g of Z-VaI-GIy-Ala-Pro-OtBu are dissolved in 690 ml of dry ethyl acetate and hydrochloric acid gas is allowed to flow through the solution for 15 hours. The solvent is evaporated, the residue is redissolved in ethyl acetate, hexane is added and the mixture is stirred at -10 ° for 1 hour. Then it is filtered. The product melts at 111 ° (decomp.). [cc3 ^ ° = -38.3 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-film chromatogram on silica gel, Rf ₇ = 0.50.

7. Z-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ 7. Z-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂

Man löst 64,4 g Z-VaI-GIy-AIa-Pro-OH in 644 ml trockenem Tetrahydrofuran, bildet das gemischte Anhydrid mit l8,9 ml Triäthylamin und 13,5 ml Chlorameisensäureäthylester wie unter 1 beschrieben, gibt dann 25 ml flüssiges Ammoniak zu64.4 g of Z-VaI-GIy-Ala-Pro-OH are dissolved in 644 ml of dry material Tetrahydrofuran, forms the mixed anhydride with 18.9 ml of triethylamine and 13.5 ml of ethyl chloroformate such as described under 1, then add 25 ml of liquid ammonia

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- he - - hey -

■und arbeitet die Reaktionsmischung wie unter 1 auf. Das Produkt schmilzt die 208-211°. ta]ß⁰= -32,7° (c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf„ =0,7.■ and works up the reaction mixture as under 1. The product melts the 208-211 °. ta] β ⁰ = -32.7 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf "= 0.7.

8. H-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂, Sulfat8. H-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂ , sulfate

Man suspendiert 27,5 g Z-VaI-GIy-AIa-Pro-NHp in 550 ml Methanol und hydriert nach Zugabe von 3 ^ml 96$iger Schwefelsäure wie unter 2. beschrieben. Das Produkt zeigt im Dünnschi chtchromatogramm an Silicagel Rf,- =0,2.Is suspended 27.5 g of Z-Val-Gly-Ala-Pro-NHp in 550 ml methanol and hydrogenated after addition of 3 ^m l 96 $ sulfuric acid as described under 2.. In the thin-layer chromatogram on silica gel, the product shows Rf, - = 0.2.

9. Z-He-GIy-OMe .9. Z-He-GIy-OMe.

Man suspendiert 84,2 g H-GIy-OMe und 2^7 g Z-He-ONP in 2,4 Liter Dimethylformamid, kühlt auf -10° ab und gibt 99 ml Triäthylamin zu. Die Reaktionsmischung wird wie unter 5. beschrieben aufgearbeitet. Das Produkt kristallisiert aus Essigester-Hexan. P. 126 - 128°. [a]j~° = -27° (c = 3 in Methanol). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₂= 0*50.84.2 g of H-GIy-OMe and 2 ^ 7 g of Z-He-ONP are suspended in 2.4 liters of dimethylformamide, the mixture is cooled to -10 ° and 99 ml of triethylamine are added. The reaction mixture is worked up as described under 5. The product crystallizes from ethyl acetate-hexane. P. 126 - 128 °. [a] j ~ ° = -27 ° (c = 3 in methanol). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₂ = 0 * 50.

10. H-IIe-GIy-OMe, Sulfat10. H-IIe-GIy-OMe, sulfate

Man löst 193 g Z-He-GIy-OMe in 4860 ml Methanol und 30 ml 96#iger Schwefelsäure. Die Hydrierung wird wie unter 2 be-193 g of Z-He-GIy-OMe are dissolved in 4860 ml of methanol and 30 ml 96 # sulfuric acid. The hydrogenation is carried out as under 2

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schrieben ausgeführt. Das Produkt zeigt im Dünnschichtchromatogramm an Silieagel RfV =0,56.wrote executed. The product shows in the thin layer chromatogram on Silieagel RfV = 0.56.

11. Z-Ala-Ile-GIy-OMe11. Z-Ala-Ile-GIy-OMe

Man löst 125,3 g Z-AIa-OH in 1250 ml Dimethylformamid, bildet das gemischte Anhydrid mit 79,3 ml Triäthylamin und 55,7 ml Chlorameisensäureäthylester und setzt mit einer Lösung von 168 g H-IIe-GIy-OMe, Sulfat in 835 ml Dimethylformamid und 158,3 ml Triäthylamin wie unter 1 beschrieben um. Das Dimethylformamid wird im Vakuum entfernt bis auf 100 ml und die Lösung in 500 ml Wasser gegossen. Das Produkt125.3 g of Z-Ala-OH are dissolved in 1250 ml of dimethylformamide, forms the mixed anhydride with 79.3 ml of triethylamine and 55.7 ml of ethyl chloroformate and sets with a solution of 168 g of H-IIe-GIy-OMe, sulfate in 835 ml of dimethylformamide and 158.3 ml of triethylamine as described under 1 around. The dimethylformamide is removed in vacuo to 100 ml and the solution is poured into 500 ml of water. The product

5° ^⁰ 5 ° ^ ⁰

schmilzt bis 191,5 - 192,5°. ία]^⁰= -9,2 (c = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silieagel ist Rf. = 0,65.melts to 191.5 - 192.5 °. ία] ^ ⁰ = -9.2 (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf. = 0.65.

12. H-Ala-Ile-Gly-OMe, { H₂SO^12. H-Ala-Ile-Gly-OMe, { H ₂ SO ^

Man suspendiert 100 g Z-Ala-Ile-Gly-OMe in 824 ml Dimethylformamid und 6,66 ml 96#iger Schwefelsäure und hydriert wie unter 2 beschrieben» Das Produkt zeigt im Dünnschichtchromatogramm an Silieagel Rf ^ =0,5.100 g of Z-Ala-Ile-Gly-OMe are suspended in 824 ml Dimethylformamide and 6.66 ml of 96 # strength sulfuric acid and hydrogenated as described under 2 »The product shows in the thin layer chromatogram on silica gel Rf ^ = 0.5.

13. BOC-Thr-Ala-Ile-GIy-OMe13. BOC-Thr-Ala-Ile-GIy-OMe

Man löst 57,8 g BOC-Thr-NH-NH₃ in 340 ml Dimethylformamid und kühlt auf -20°. Zu der Lösung gibt man 250 ml57.8 g of BOC-Thr-NH-NH _{3 are dissolved} in 340 ml of dimethylformamide and the mixture is cooled to -20 °. 250 ml are added to the solution

009818/1907009818/1907

-^η· Salzsäure und dann 33*5 ml iso-Amylnitrit. Die Lösung wird 10 Minuten stark gerührt. Inzwischen gibt man zu einer auf -10 gekühlten Lösung von 79*1 S H-AIa-He-GIy-OMe in 1500 ml Dimethylformamid 105 ml Triäthylamin, kühlt diese Lösung auf -20° ab und fügt die obige Lösung von BOC-Thr-N, hinzu. Man lässt die^Mischung 70 Stunden bei 0 reagieren, dampft dann das Lösungsmittel im Vakuum bei 40 ab., nimmt den Rückstand in Essigester auf, wäscht die Lösung mit 0,1-n. Salzsäure, Wasse^ 5$igem "Natriumbicarbonat und Wasser und trocknet sie. Dann wird der Essigester im Vakuum entfernt und der Rückstand aus Essigester-Hexan kristallisiert. Das Produkt schmilzt bei I87 - I89⁰. Ea]^⁰ - -13,2°(c = 2 in Dimethylformamid ). Im Dünnschichtchromatogramm. an Silicagel ist Rf₁ = 0,68.- ^η · hydrochloric acid and then 33 * 5 ml iso-amyl nitrite. The solution is stirred vigorously for 10 minutes. In the meantime, 105 ml of triethylamine are added to a solution, cooled to -10, of 79 * 1 S H-Ala-He-GIy-OMe in 1500 ml of dimethylformamide, this solution is cooled to -20 ° and the above solution of BOC-Thr- N, add. The mixture is left to react at 0 for 70 hours, then the solvent is evaporated off in vacuo at 40, the residue is taken up in ethyl acetate, and the solution is washed with 0.1 n. Hydrochloric acid, wat ^ 5 $ strength "sodium bicarbonate and water and it dries Then the Essigester vacuum is removed and the residue is crystallized from Essigester-hexane The product melts at I87 -.. I89 ⁰ Ea] ^ ⁰ -. -13.2 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₁ = 0.68.

14. BOG-Thr-Ala-He-GIy-NH-NH₂ 14. BOG-Thr-Ala-He-GIy-NH-NH ₂

Man löst 87 g BOC-Tetrapeptidester in 870 ml Methanol, kühlt die Lösung auf 0 ab ,und gibt 37*6 ml Hydrazinhydrat hinzu. Man rührt l8 Stunden bei Raumtemperatur und 1 Stunde bei 0 und filtriert dann» Der Niederschlag wird zweimal aus Methanol umkristallisiert. F. 23I - 232,5°« [α3^°= -5,9° (c = 2 in Dimethylformamid). Im Dunnschichtgromatogramm an Silicagel ist Rf₇ =0,7.87 g of BOC tetrapeptide ester are dissolved in 870 ml of methanol, the solution is cooled to 0, and 37 * 6 ml of hydrazine hydrate are added. The mixture is stirred for 18 hours at room temperature and 1 hour at 0 and then filtered. The precipitate is recrystallized twice from methanol. F. 23I - 232.5 ° «[α3 ^ ° = -5.9 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₇ = 0.7.

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15. BOC-TiIr-AIa-IIe-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ 15. BOC-TiIr-AIa-IIe-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂

Man suspendiert 27,1 g BOC-Thr-Ala-lie-GIy-NH-NHg in 250 ml Dimethylformamid. Das Azid wird wie unter I3 beschrieben mit 59*9 ml 2,23-n. Salzsäure und 9,1 ml iso-Amylnitrit hergestellt. Die Lösung wird 15 Minuten gerührt. 24,2 g H-VaI-Gly-Ala-Pro-NHp, Sulfat werden in 120 ml Dimethylformamid gelöst, auf 0° gekühlt und dann 28 mj. Triäthylamin zugegeben. Nach Mischen mit der Azidlösung bringt man das pH auf 7» Man lässt die Mischung 70 Stunden reagieren. Das Peptid w.ird aus Essigester-Hexan kristallisiert. P. 226 - 227,5 . [α3_β = -25,6° ( c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromategramm an Silicagel ist Rf₁₇ = 0,7·27.1 g of BOC-Thr-Ala-lie-GIy-NH-NHg are suspended in 250 ml of dimethylformamide. The azide is as described under I3 with 59 * 9 ml 2.23-n. Hydrochloric acid and 9.1 ml iso-amyl nitrite. The solution is stirred for 15 minutes. 24.2 g of H-VaI-Gly-Ala-Pro-NHp, sulfate are dissolved in 120 ml of dimethylformamide, cooled to 0 ° and then 28 ml of triethylamine are added. After mixing with the azide solution, the pH is brought to 7 »The mixture is left to react for 70 hours. The peptide is crystallized from ethyl acetate-hexane. P. 226-227.5. [α3 _β = -25.6 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₁₇ = 0.7

16. H-Thr-Ala-lie-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂, Trifluoracetat16. H-Thr-Ala-lie-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂ , trifluoroacetate

Man löst 51 g BOC-Thr-Ala-He-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ in 153 ml 90$iger wässeriger Trifluoressigsäure, lässt die Lösung 1 Stunde stehen und fügt dann 1530 ml trockenen Aether hinzu. Der Niederschlag wird abfiltriert und 3mal mit Aether gewaschen. F. 221 - 223 . Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₇ = 0,5.51 g of BOC-Thr-Ala-He-GIy-VaI-GIy-Ala-PrO-NH _{2 are dissolved} in 153 ml of 90% aqueous trifluoroacetic acid, the solution is left to stand for 1 hour and then 1530 ml of dry ether are added. The precipitate is filtered off and washed 3 times with ether. F. 221-223. In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₇ = 0.5.

17. Z-Pro-GIn-NH-NH-BOC17. Z-Pro-GIn-NH-NH-BOC

Man löst 67,23 g Z-Pro-OH in 670 ml Dimethylformamid und bildet mittels 38,9 ml Triäthylamin und 26 ml Chloramei-67.23 g of Z-Pro-OH are dissolved in 670 ml of dimethylformamide and using 38.9 ml of triethylamine and 26 ml of chloramine

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sensäureäthylester das gemischte Anhydrid. Mit diesem lässt man 70,2 g H-GIn-NH-NH-BOC wie unter 1 beschrieben reagieren. Der Rückstand wird aus heissem Essigester kristallisiert. F. I69 - 171⁰. Ea]^⁰= -41,3° (c * 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf, = 0,45.ethyl acid ester the mixed anhydride. 70.2 g of H-GIn-NH-NH-BOC are allowed to react with this as described under 1. The residue is crystallized from hot ethyl acetate. F. I69 - 171 ⁰ . Ea] ^ ⁰ = -41.3 ° (c * 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf = 0.45.

18. · Η-Pro-GIn-NH-NH-BOC18. · Η-Pro-GIn-NH-NH-BOC

Man löst 94 g des unter I7 beschriebenen Derivates in 564 ml Dimethylformamid und hydriert wie unter 2 beschrieben, jedoch ohne Säure. Das Produkt"zeigt im Dünnschichtehromatogramm an Silieagel Rf₅ =0,3.94 g of the derivative described under I7 are dissolved in 564 ml of dimethylformamide and hydrogenated as described under 2, but without acid. _{The product "shows Rf 5} = 0.3 in the thin-layer chromatogram on silica gel.

19. Z-Phe-Pro-GIn-NH-NH-BOC '19. Z-Phe-Pro-GIn-NH-NH-BOC '

Man löst 80,4 g Z-Phe-ONP, 68 g Η-Pro-GIn-NH-NH-BOC und 9,4 ml Eisessig in 56O ml Dimethylformamid wie unter 5 beschrieben. Das Produkt schmilzt bei 107°. ta]_D°= -35*9° ( c = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₁ = 0,7.80.4 g of Z-Phe-ONP, 68 g of Η-Pro-GIn-NH-NH-BOC and 9.4 ml of glacial acetic acid are dissolved in 56O ml of dimethylformamide as described under 5. The product melts at 107 °. ta] _D ° = -35 * 9 ° (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₁ = 0.7.

20. H-Phe-Pro-GIn-NH-NH-BOC20. H-Phe-Pro-GIn-NH-NH-BOC

Man löst IO3 g Z-Phe-Pro-GIn-NH-NH-BOC in 618 ml Dimethylformamid und hydriert wie unter 2 beschrieben, jedoch ohne Säure. Das Produkt zeigt im DünnschichtchromatogrammDissolve IO3 g of Z-Phe-Pro-GIn-NH-NH-BOC in 618 ml Dimethylformamide and hydrogenated as described under 2, but without acid. The product shows in the thin layer chromatogram

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an Silicagel Rfg =0,5.on silica gel Rfg = 0.5.

21. Z-Thr-Phe-Pro-Gin-NH-NH-BOC21. Z-Thr-Phe-Pro-Gin-NH-NH-BOC

Man suspendiert 46,1 g Z-Thr-NH-NH_p in 550 ml Dimethylformamid und bildet das Azid wie unter I3 beschrieben mi.t 177 ml 1,958-nä Salzsäure in Tetrahydrofuran und 24 ml iso-Amylnitrit. Das Azid wird mit 8l,4 g H-Phe-Pro-Gin-NH-NH-BOC, gelöst in 1200 ml Dimethylformamid und 48,5 ml Triäthylamin, gekippelt. Nach Kristallisation aus Essigester-Hexan schmilzt46.1 g of Z-Thr-NH-NH _{p are} suspended in 550 ml of dimethylformamide and the azide is formed as described under I3 with 177 ml of 1.958-Na hydrochloric acid in tetrahydrofuran and 24 ml of iso-amyl nitrite. The azide is tipped with 81.4 g of H-Phe-Pro-Gin-NH-NH-BOC, dissolved in 1200 ml of dimethylformamide and 48.5 ml of triethylamine. Melts after crystallization from ethyl acetate-hexane

° ^⁰ ° ^ ⁰

das Produkt bei 12Q - 134°. [ct]^⁰=-- -34,8 (c = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf„=O,85-the product at 12Q - 134 °. [ct] ^ ⁰ = - -34.8 (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf "= 0.85-

22. H-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC22. H-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC

Man löst 23,6 g des unter 21 beschriebenen Produktes in l88 ml Dimethylformamid und hydriert wie unter 2 beschrieben, jedoch ohne Säure. Das Produkt zeigt im Dünnschichtchromato-23.6 g of the product described under 21 are dissolved in 188 ml of dimethylformamide and hydrogenated as described under 2, but without acid. The product shows in thin layer chromatography

gramm an Silicagel Rf„ =0,7·grams of silica gel Rf "= 0.7

23. Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC23. Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC

Man löst 9,eS g Z-His-NH-NHp in 100 ml Dimethylformamid. Das Azid wird mit 36,3 ^ml 2,67-n. Salzsäure in Tetrahydrofuran und 4,32 ml isc-Amylnitrit gebildet und mit IQ,32 g H-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC, gelöst in 3OO ml Dimethylformamid und 13,8 ml9.5 g of Z-His-NH-NHp are dissolved in 100 ml of dimethylformamide. The azide is 36.3 ^m l 2.67-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran and 4.32 ml of isc-amyl nitrite and with IQ, 32 g of H-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC, dissolved in 3OO ml of dimethylformamide and 13.8 ml

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Triäthylamin, wie unter I3 beschrieben gekuppe.lt. Das Reaktionsgemisch wird filtriert, das Piltrat im Vakuum auf 100 ml eingeengt und in 1100 ml Essigester gegossen. Das Produkt schmilzt bei 95 - 133 · I^m Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rfβ =0,7.Triethylamine, as described under I3 kuppe.lt. The reaction mixture is filtered, the piltrate is concentrated in vacuo to 100 ml and poured into 1100 ml of ethyl acetate. The product melts at 95-133 · I ^m thin-layer chromatogram on silica gel, Rf β = 0.7.

24. Z-His-Thr-Phe-Pro-GIn-NH-NH₀, HCl24. Z-His-Thr-Phe-Pro-GIn-NH-NH ₀ , HCl

Man löst 114 g Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC in 57 ml 90$iger Trifluoressigsäure, lässt die Lösung 1 Stunde stehen und gibt dann 9,8 ml 4-n. Salzsäure hinzu. Die Lösung wird in 570 ^ml trockenem Aether gegossen und der Rückstand im Vakuum über Kaiiumhydroxid getrocknet. Das Produkt zeigt im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel Rf „ = 0,25·114 g of Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC are dissolved in 57 ml of 90% trifluoroacetic acid, the solution is left to stand for 1 hour and then 9.8 ml of 4-n are added. Hydrochloric acid added. The solution is poured into 570 ^m l of dry ether and the residue dried in vacuo over Kaiiumhydroxid. The product shows in the thin-layer chromatogram on silica gel Rf "= 0.25 ·

25. Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ 25. Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂

Man löst 11 g des unter 24 beschriebenen Hydrazids in 47 ml Dimethylformamid und bildet das Azid mit 15.»6 ml 2,267-n. Salzsäure in Tetrahydrofuran und 1,57 ml Amylnitrit wie unter I3 beschrieben. Man lässt das Azid mit 6 g des unter 16 beschriebenen Octapeptidamids, gelöst in 70 ml Dimethylformamid und 5*5 wl Triäthylamin reagieren. Das pH ist 6,5· Nach 7 Tagen wird die Reaktionsmischung filtriert, das Filtrat in 710 ml Essigester gegossen und der Rückstand zweimal mit Essigester verrührt. Das Produkt schmilzt bei I86 unter Zersetzung. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₇= 0,6.11 g of the hydrazide described under 24 are dissolved in 47 ml of dimethylformamide and the azide is formed with 15.6 ml of 2,267-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran and 1.57 ml of amyl nitrite as described under I3. The azide is allowed to react with 6 g of the octapeptide amide described under 16, dissolved in 70 ml of dimethylformamide and 5 * 5 wl of triethylamine. The pH is 6.5. After 7 days, the reaction mixture is filtered, the filtrate is poured into 710 ml of ethyl acetate and the residue is stirred twice with ethyl acetate. The product melts at 186 with decomposition. In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₇ = 0.6.

00 98 18/190700 98 18/1907

26. Z-Lys(BOC)-Phe-OBzI26. Z-Lys (BOC) -Phe-OBzI

Man suspendiert 26l,6 g Z-Lys(BOC)-OH, Dicyclohexylammoniumsalz in 6,4 1 Acetonitril, gibt 137,6 g H-Phe-OBzl, HCl hinzu und rührt die Suspension 30 Minuten. Nach Abkühlen auf -5 werden 96 g Dicyclohexylcarbodiimid zugefügt. Man rührt die Suspension 20 Stunden bei Zimmertemperatur, filtriert und wäscht den Rückstand mit Acetonitril. Das Piltrat wird im Vakuum eingedampft, der Rückstand in Essigester aufgenommen, die Lösung mit 0,1-n. Salzsäure, Wasser, 5$igem Natriumbicarbonat und Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft. Der Rückstand kristallisiert aus Essigester-Hexan. P. 101 - 103°. ta]^⁰= -12,5° (c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₂ = 0,55.26 l, 6 g of Z-Lys (BOC) -OH, dicyclohexylammonium salt are suspended in 6.4 l of acetonitrile, 137.6 g of H-Phe-OBzl, HCl are added and the suspension is stirred for 30 minutes. After cooling to -5, 96 g of dicyclohexylcarbodiimide are added. The suspension is stirred for 20 hours at room temperature, filtered and the residue is washed with acetonitrile. The piltrate is evaporated in vacuo, the residue is taken up in ethyl acetate, the solution with 0.1-n. Washed hydrochloric acid, water, 5% sodium bicarbonate and water, dried and evaporated. The residue crystallizes from ethyl acetate-hexane. P. 101-103 °. ta] ^ ⁰ = -12.5 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₂ = 0.55.

27. H-Lys(BOC)-Phe-OH, HCl27. H-Lys (BOC) -Phe-OH, HCl

Man löst 105,4 g des obigen Dipeptidesters in 63O ml Dimethylformamid und hydriert wie unter 2 beschrieben, jedoch wird kein Eisessig zugefügt, sondern nach 2 /2 Stunden 150 ml 1,15-n. Salzsäure in Tetyahyrofuran. Die Hydrierung dauert 20 Stunden. Das Produkt zeigt im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel Rf^, =0,7· 105.4 g of the above dipeptide ester are dissolved in 63O ml Dimethylformamide and hydrogenated as described under 2, but no glacial acetic acid is added, but after 2/2 hours 150 ml 1.15-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran. The hydrogenation takes 20 hours. In the thin-layer chromatogram on silica gel, the product shows Rf ^, = 0.7

009818/1307009818/1307

28. Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH28. Z-Asn-Lys (BOC) -Phe-OH

Man löst 76,2 g Z-Asn-ONP und 73,6 g H-Lys(BOC)-Phe-OH, HCl in 850 ml Dimethylformamid und 15O ml Tetrahydrofuran, kühlt auf -10° ab und gibt 47,8 ml Triäthylamin zu wie unter 5 beschrieben. Nach 20 Stunden bei 20° engt man auf 320 ml ein und giesst das Konzentrat in 1435 ml Essigester und 359 nil 0,1-n. Salzsäure. Der Niederschlag wird mit Wasser und Aether gewaschen. P. I67 - I68 . [a!L =-11,7 (c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschiehtehromatogramm an Silicagel ist Rf₇ =0,7.76.2 g of Z-Asn-ONP and 73.6 g of H-Lys (BOC) -Phe-OH, HCl are dissolved in 850 ml of dimethylformamide and 150 ml of tetrahydrofuran, the mixture is cooled to -10 ° and 47.8 ml of triethylamine are added as described under 5. After 20 hours at 20 °, the mixture is concentrated to 320 ml and the concentrate is poured into 1435 ml of ethyl acetate and 359 ml of 0.1 nil. Hydrochloric acid. The precipitate is washed with water and ether. P. I67 - I68. [a! L = -11.7 (c = 2 in dimethylformamide). In the thin layer chromatogram on silica gel, Rf ₇ = 0.7.

29. H-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH, HCI29. H-Asn-Lys (BOC) -Phe-OH, HCI

Man löst 34 S des obigen Produktes in 240 ml Methanol und hydriert wie unter 27 besehrieben, jedoch unter Zufügen von 13j3 ^ml 2-n. Salzsäure in Tetrahydrofuran nach 2 /2 Stunden und von weiteren 13.» 3 ^ffll 2-n. Salzsäure in Tetrahydrofuran nach 20 Stunden. Die Lösung wird direkt weiterverarbeitet. Das Produkt zeigt im Dünnsehiehtchromatogramm an Silicagel Rf₇ =0,6.Dissolve 34 S of the above product in 240 ml of methanol and hydrogenated as besehrieben below 27, but with the addition of 13j3 ^m l of 2-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran after 2/2 hours and from another 13. » 3 ^ffl l 2-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran after 20 hours. The solution is processed further directly. In the thin-view chromatogram on silica gel, the product shows Rf ₇ = 0.6.

30. Z-Asp(OtBu)-Phe-OMe30. Z-Asp (OtBu) -Phe-OMe

Man löst 100,84 g Z-Asp(OtBu)-OH, Dieyelohexylammoniumsalz in 880 ml Methylenehlorid, gibt 43,l6 g H-Phe-OMe, HCl hinzu und rührt noch 10 Minuten weiter. Dann kühlt man die100.84 g of Z-Asp (OtBu) -OH, dieyelohexylammonium salt are dissolved in 880 ml of methylene chloride, gives 43.16 g of H-Phe-OMe, HCl and stir for another 10 minutes. Then you cool them

008818/1907008818/1907

Suspension auf -5 ab, fügt 4l,2 g Dicyclohexylcarbodiimid in 120 ml Methylenchlorid zu und arbeitet auf wie unter 26 beschrieben. Der Rückstand wird mit Methylenchlorid gewaschen. Das Produkt zeigt im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel Rf₁ = 0,9. ·Suspension to -5, adds 4l, 2 g of dicyclohexylcarbodiimide in 120 ml of methylene chloride and works on as described under 26. The residue is washed with methylene chloride. _{The product shows Rf 1} = 0.9 in a thin-layer chromatogram on silica gel. ·

31. Z-Asp(OtBu)-Phe-NH-NH₀ 31. Z-Asp (OtBu) -Phe-NH-NH ₀

Man löst 79j2 g des obigen Dipeptidesters in 1320 ml Methanol, kühlt die Lösung auf 0° ab und gibt 21,1 ml Hydrazinhydrat wie unter 14 beschrieben zu, lässt jedoch 3 Tage reagieren. Der Rückstand wird zweimal mit Wasser gewaschen. P. 143-1^5°. [a]^° = -22,2° (c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf, = 0,65·79j2 g of the above dipeptide ester are dissolved in 1320 ml Methanol, the solution cools to 0 ° and gives 21.1 ml of hydrazine hydrate as described under 14, but allows 3 days to react. The residue is washed twice with water. P. 143-1 ^ 5 °. [a] ^ ° = -22.2 ° (c = 2 in dimethylformamide). in the Thin-layer chromatogram on silica gel is Rf, = 0.65

32. Z-Asp(OtBu) -PIiC-A:=n-Lys (BOG) -Phe-OH32. Z-Asp (OtBu) -PIiC-A: = n-Lys (BOG) -Phe-OH

Man löst 54,4 g Z-Asp(OtBu)-PhG-NH-NH₃ in 325 ml Dimethylformamid und stellt das Azid wie unter I3 beschrieben mit 111 ml l,oS-n. Salzsäure in Tetrahydrofuran und 14 ml iso-Amylnitrit her. Man löst 53,4 g H-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH, HCl in 280 ml Dimethylformamid und 50 ml Triäthylamin, kühlt auf -10 ab und rügt die Azidlösung hinzu. Das Pentapeptidderivat wird durch Vermischen des Rückstandes mit Essigester auegefällt54.4 g of Z-Asp (OtBu) -PhG-NH-NH _{3 are dissolved} in 325 ml of dimethylformamide and the azide is prepared as described under I3 with 111 ml of l, oS-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran and 14 ml iso-amyl nitrite. 53.4 g of H-Asn-Lys (BOC) -Phe-OH, HCl are dissolved in 280 ml of dimethylformamide and 50 ml of triethylamine, the mixture is cooled to -10 and the azide solution is added. The pentapeptide derivative is precipitated by mixing the residue with ethyl acetate

00981 8/190700981 8/1907

- 5β -- 5β -

und der Niederschlag mit Wasser-Aethanol (15:1) gewaschen. P. 189 - I9O⁰. ta]!; = -21,8° (c = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf^- = OjJJ. and the precipitate washed with water-ethanol (15: 1). P. 189 - I9O ⁰ . ta] !; = -21.8 ° (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ^ - = OjJJ.

33. H-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH33. H-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-OH

Man löst 9,6.g des unter 32 erhaltenen geschützten PentaPeptids in I92 ml Dimethylformamid und hydriert wie unter 27 beschrieben, jedoch mit 4,43 ^rnl 2,3~n. Salzsäure in Tetrahydrofuran. Das Produkt zeigt im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel Rf,- = 0,8.9,6.g dissolving the obtained below 32 protected pentapeptide in I92 ml of dimethylformamide and hydrogenated as described in 27, but with 4.43 l ^rn ~ n 2.3. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran. In the thin-layer chromatogram on silica gel, the product shows Rf, - = 0.8.

34. BOC-Tyr-Thr-ONB34. BOC-Tyr-Thr-ONB

Man suspendiert 69,68 g H-Thr-ONB, HCl in 480 ml Acetonitril, fügt 32,84 ml.Triäthylamin hinzu, kühlt auf -5° ab und gibt 67,52 BOC-Tyr-OH und 96O ml kaltes Acetonitril und dann 49,44 g Dicyclohexylcarbodiimid hinzu. Die Suspension wird 1 Stunde bei 3 gerührt und wie unter 26 beschrieben aufgearbeitet. Das Dipeptidderivat wird als OeI isoliert. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf, = 0,60.69.68 g of H-Thr-ONB, HCl are suspended in 480 ml of acetonitrile, adds 32.84 ml.triethylamine, cools to -5 ° and gives 67.52 BOC-Tyr-OH and 96O ml of cold acetonitrile and then 49.44 g of dicyclohexylcarbodiimide are added. The suspension is stirred for 1 hour at 3 and as described under 26 worked up. The dipeptide derivative is isolated as an OeI. in the Thin-layer chromatogram on silica gel is Rf = 0.60.

35. H-Tyr-Thr-ONB, HCl35. H-Tyr-Thr-ONB, HCl

Man löst 121 g BOC-Tyr-Thr-ONB in I537 ml Methylenchlorid und 384 ml Mitromethan und verfährt weiter wie unter 6 beschrieben. Nach 45 Minuten Durchleiten von HCl-Gas wird die Suspension 1 Stunde gerührt und dann filtriert. Das121 g of BOC-Tyr-Thr-ONB are dissolved in 1537 ml of methylene chloride and 384 ml of mitromethane and proceed as below 6 described. After 45 minutes of passing through HCl gas the suspension was stirred for 1 hour and then filtered. That

009818/1907009818/1907

Produkt schmilzt bei 226 - 227 · Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf-. = 0,35.Product melts at 226 - 227 · In a thin layer chromatogram on silica gel is Rf-. = 0.35.

36. Z-Thr-Tyr-Thr-ONB36. Z-Thr-Tyr-Thr-ONB

Man suspendiert 57,4 g Z-Thr-NH-NH₂ in 320 ml Dimethylformamid und bildet das Azid mit 220 ml 1,953-n. Salzsäure in Tetrahydrofuran und 29 ml iso-Amylnitrit wie unter I3 beschrieben. Die Azidlösung wird zu einer Lösung von 98 g.H-Tyr-Thr-ONB, HCl in 760 ^ffll Dimethylformamid und 9I ^ml Triäthylamin gegeben. Das Tripeptidderivat kristallisiert aus Essigester-Hexan. P. 111 - 118°. [a]p°= -4,4°. (c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf-. =0,6.57.4 g of Z-Thr-NH-NH _{2 are} suspended in 320 ml of dimethylformamide and the azide is formed with 220 ml of 1.953-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran and 29 ml iso-amyl nitrite as described under I3. The azide solution is added to a solution of 98 g H-Tyr-Thr-ONB, HCl in 760 l of dimethylformamide and 9I ^{ffl m} l of triethylamine. The tripeptide derivative crystallizes from ethyl acetate-hexane. P. 111-118 °. [a] p ° = -4.4 °. (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf-. = 0.6.

37. Z-Thr-Tyr-Thr_rNH-37. Z-Thr-Tyr-Thr _r NH-

Man löst 114,2 g des obigen Tripeptidesters in 480 ml Methanol und fügt wie unter 14 beschrieben 48 ml Hydrazinhydrat hinzu. Nach 4 Stunden gibt man l44O ml Essigester zu und nach weiteren 1 /2 Stunden filtriert man die Suspension. Der Rückstand wird 20 Stun"den mit 1 Liter Essigester gerührt. Das Produkt schmilzt bei 219 - 221°. [α]^° = -6,6° ( c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel . ist Rf₆ =0,85.114.2 g of the above tripeptide ester are dissolved in 480 ml of methanol and 48 ml of hydrazine hydrate are added as described under 14. After 4 hours, 1,440 ml of ethyl acetate are added and, after a further 1/2 hour, the suspension is filtered. The residue is stirred for 20 hours with 1 liter of ethyl acetate. The product melts at 219-221 °. [Α] ^ ° = -6.6 ° (c = 2 in dimethylformamide). In a thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₆ = 0.85.

009818/1907009818/1907

38. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-NH-NH-BOC38. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-NH-NH-BOC

Man suspendiert 89 g Z-Thr-Tyr-Thr-GIn-NH-NH in 89O ml Dimethylformamid und bildet das Azid wie unter 13 beschrieben· mit 197 ml 2,02-n. Salzsäure in Tetrahydrofuran und 26,8 ml iso-Amylnitrit. Die Azidlösung wird zu einer auf -10° gekühlten Lösung von 39,3 g H-GIn-NH-NH-BOC und 56,2 ml Triäthylamin in 75O ml Dimethylformamid gegeben. Nach 4 Tagen werden 720 ml Methanol und. 720 ml Aether zur Reaktionsmischung gefügt und die Suspension 2 Stunden gerührt. Dann filtriert man die Kristalle ab und rührt sie mit 400 ml 0,05-n. Salzsäure (2x). Das Produkt schmilzt bei 2l6-2l8°. [a]^° = -8,3° ( c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₁ = 0,8. 89 g of Z-Thr-Tyr-Thr-GIn-NH-NH are suspended in 890 ml of dimethylformamide and the azide is formed as described under 13 with 197 ml of 2.02-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran and 26.8 ml iso-amyl nitrite. The azide solution is added to a solution, cooled to -10 °, of 39.3 g of H-GIn-NH-NH-BOC and 56.2 ml of triethylamine in 750 ml of dimethylformamide. After 4 days, 720 ml of methanol and. 720 ml of ether were added to the reaction mixture and the suspension was stirred for 2 hours. The crystals are then filtered off and stirred with 400 ml of 0.05-n. Hydrochloric acid (2x). The product melts at 26-218 °. [a] ^ ° = -8.3 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₁ = 0.8.

39. Z-Thr-Tyr-Thr-Gin-NH-NH₂ 39. Z-Thr-Tyr-Thr-Gin-NH-NH ₂

Man löst 53j5 g des unter 38 beschriebenen Derivates in 110 ml 90$iger Trifluoressigsaure, rührt 1 /2 Stunden und gibt dann 880 ml Aether zu wie unter l6 beschrieben. Der Niederschlag wird mit 200 ml Methanol-Aether (l:4) gerührt(2x). : Das Produkt schmilzt bei 200-203°. Ca]^⁰= -4,6° (c= 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₅ = 0,75.53.5 g of the derivative described under 38 are dissolved in 110 ml of 90% trifluoroacetic acid, stirred for 1/2 hour and then 880 ml of ether are added as described under 16. The precipitate is stirred (2x) with 200 ml of methanol-ether (1: 4). : The product melts at 200-203 °. Ca] ^ ⁰ = -4.6 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₅ = 0.75.

40. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH40. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-OH

S ——————————S ——————————

: Man suspendiert 9,5 g Z-Thr-Tyr-Thr-Glη-NH-NHp in: 9.5 g of Z-Thr-Tyr-Thr-Glη-NH-NHp are suspended in

95 ml Dimethylformamid und bildet das Azid wie unter I3 be-95 ml of dimethylformamide and forms the azide as described under I3

009818/1907009818/1907

schrieben mit 11,94 ml 2,122-η. Salzsäure in Tetrahydrofuran und 2,28 ml iso-Amylnitrit. 8,6 g Η-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH werden in 21o ml Dimethylformamid und 7*5 ml Triäthylamin gelöst. Diese Lösung wird auf -10 gekühlt und zu der Äzidlösung gegeben. Man lässt 3 Tage bei 0 reagieren_e Dann filtriert man, dampft das Filtrat ein und verrührt den Rückstand mit 300 ml 0,1-n. Salzsäure. Das Produkt kristallisiert aus Dimethylformamid 0,1-n. Salzsäure (1:3j5)· Es schmilzt bei 206°. M^⁰ = -19,3° (c = 1 in Dimethylformamid) Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₁- = 0,87·wrote 2.122-η with 11.94 ml. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran and 2.28 ml iso-amyl nitrite. 8.6 g of Η-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-OH are dissolved in 21o ml of dimethylformamide and 7 * 5 ml of triethylamine. This solution is cooled to -10 and added to the azide solution. The mixture is left to react for 3 days at 0 _e then is filtered, the filtrate is evaporated and the residue is stirred with 300 ml of 0.1-n. Hydrochloric acid. The product crystallizes from dimethylformamide 0.1-n. Hydrochloric acid (1: 3j5) · It melts at 206 °. M ^ ⁰ = -19.3 ° (c = 1 in dimethylformamide) In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₁ - = 0.87

41. HrHis-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg41. HrHis-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg

Man löst 32 g des unter 25 beschriebenen BOC-Tridecapeptidamids in 1200 ml Dimethylformamid und 12 ml 4-n. Salzsäure und hydriert wie unter 2 beschrieben während 20 Stunden. Das Filtrat wird auf 250 ml eingeengt und mit 1500 ml trockenem Aether verrührt. Das Rohprodukt wird durch Gegenstromverteilung nach Craig im System n-Butanol-Eisessig-Wasser (4:1:5) gereinigt. K = 0,11.*Das Produkt weist [aJ^⁰= -39,4°(c = 1 in Dimethylformamid) auf. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₆ =0,2.32 g of the BOC tridecapeptide amide described under 25 are dissolved in 1200 ml of dimethylformamide and 12 ml of 4-n. Hydrochloric acid and hydrogenated as described under 2 for 20 hours. The filtrate is concentrated to 250 ml and stirred with 1500 ml of dry ether. The crude product is purified by countercurrent distribution according to Craig in the n-butanol-glacial acetic acid-water system (4: 1: 5). K = 0.11. * The product has [aJ ^ ⁰ = -39.4 ° (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₆ = 0.2.

42. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(EOC)-Phe-His-TJIr-PhC-PrO-GIn-TlIr-AIa-IIe-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NII₀ 42. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (EOC) -Phe-His-TJIr-PhC-PrO-GIn-TlIr-AIa-IIe-GIy-VaI-GIy- AIa-PrO-NII ₀

Man löst 7>3 S des unter ^l\0 beschriebenen geschütztenSolve 7> 3 S of the protected one described ^{under l} \ 0

Nonapeptids in 75 ml Dimethylformamid, gibt 1,33 ü N-Hydroxy-Nonapeptids in 75 ml of dimethylformamide, gives 1.33 ü N-Hydroxy-

009818/19 0 7009818/19 0 7

■ ο■ ο

succinimid zu und kühlt die Lösung auf -22 . Eine ebenso abgekühlte Lösung von 1,195 g Dicyclohexylcarbodiimid in 15 ml Dimethylformamid wird hinzugefügt (Lösung A). Nachdem man eine Stunde bei -22° und 5 Stunden bei +4° gerührt hat, kühlt man die Suspension wieder auf -22 ab. Man gibt nun zur Lösung A eine mit Triäthylamin auf pH 6,7 bis 7 gebrachte und gekühlte Lösung von 6,9 g des unter 41 beschriebenen Tridecapeptidamids in 80 ml Dimethylformamid. Nach einer Reaktionszeit von 14 Tagen wird die Suspension zu einer neuen Lösung A, hergestellt aus 0,73 g des unter 40 beschriebenen Nonapeptids gegeben. Man lässt weitere 7 Tage bei 0 reagieren., filtriert dann die Suspension und dampft das Piltrat im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird durch Säulenchromatographie an Silicagel im System n-Butanol-Eisessig-Wasser (4:1:5) gereinigt. Das Produkt weist im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel Rf₁- = 0,32 auf.succinimide and cools the solution to -22. A likewise cooled solution of 1.195 g of dicyclohexylcarbodiimide in 15 ml of dimethylformamide is added (solution A). After stirring for one hour at -22 ° and 5 hours at + 4 °, the suspension is cooled down again to -22. A cooled solution, brought to pH 6.7 to 7 with triethylamine, of 6.9 g of the tridecapeptide amide described under 41 in 80 ml of dimethylformamide is then added to solution A. After a reaction time of 14 days, the suspension is added to a new solution A, prepared from 0.73 g of the nonapeptide described under 40. The mixture is left to react for a further 7 days at 0. The suspension is then filtered and the piltrate is evaporated to dryness in vacuo. The residue is purified by column chromatography on silica gel in the system n-butanol-glacial acetic acid-water (4: 1: 5). In the thin-layer chromatogram on silica gel, the product has Rf ₁ - = 0.32.

43. H-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(0t3u)-Phe-Asn-Lys-(B0C)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg 43. H-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp (0t3u) -Phe-Asn-Lys- (B0C) -Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly -Ala-Pro-NHg

Man löst 2 g des unter 42 beschriebenen Produkts in I50 ml Dimethylformamid und hydriert. Nach 2 /2 Stunden werden 0,3 ml 4,844-n. Salzsäure zugefügt. Nach 21 Stunden filtriert man und dampft das Piltrat ein. Dsn Rückstand löst man in 25 ml Dimethylformamid., gibt 0,73 ml 1,0-η. Salzsäure zu, vermischt mit 40 ml Ensigester und kühlt auf 0°. Nach Abfiltrieren des Nieder-Dissolve 2 g of the product described under 42 in 150 ml Dimethylformamide and hydrogenated. After 2/2 hours, 0.3 ml of 4,844-n. Hydrochloric acid added. After 21 hours, it is filtered and the Piltrat evaporates. The residue is dissolved in 25 ml of dimethylformamide., gives 0.73 ml of 1.0-η. Hydrochloric acid, mixed with 40 ml Ensigester and cool to 0 °. After filtering off the low

0 0 9 8 18/19070 0 9 8 18/1907

- βι -- βι -

schlags nimmt man Ihn iri tert.Butanol-Wasser auf land lyophilisiert, Das Produkt zeigt [α]_β = -25,2° ( c = 2 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf/- = 0,32.At the same time, you take it lyophilized in tert-butanol water on land, the product shows [α] _β = -25.2 ° (c = 2 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf / - = 0.32.

H. BOG-S er-Thr-OBzI H. BOG-S er-Thr-OBzI

Man gibt zu einer Lösung von 73,8 g BOC-Ser-OH^Dicyclohexylammoniumsalz in 500 ml Methylenchlorid ¹W,0 g H-Thr-OBzl, HCl in 300 ml Methylenchlorid, rührt 10 Minuten bei Raumtemperatur und kühlt dann auf -5 . Bei dieser Temperatur tropft man eine Lösung von 40,1 g Dicyclohexylcarbodiimid in 90 ml Methylenchlorid zu. Man rührt 3 Stunden bei -5° und die ganze Nacht bei Raumtemperatur. Nach Abfiltrieren des Dicyclohexylharnstoffs und Dicyclohexylamin-Hydrochloride wird die Lösung ausgeschüttelt, und zwar dreimal mit 0,1-n. Salzsäure, zweimal mit 20#iger Kochsalzlösung, einmal mit lO^iger Natriumbicarbonatlösung und zweimal mit 20$iger Kochsalzlösung und über Natriumsulfat getrocknet. Die'Lösung wird auf ca. 600 ml eingeengt, auf 5° gekühlt und von weiterem Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Nach Eindampfen zur Trockne wird der Rückstand zur Reinigung aus Essigester-Hexan kristallisiert. ' P. 110-111°; [cc]_D --8,5° (c = 2 in Dimethylformamid);It is added to a solution of 73.8 g of BOC-Ser-OH ^ dicyclohexylammonium salt in 500 ml of methylene chloride ¹ W, 0 g of H-Thr-OBzl, HCl in 300 ml of methylene chloride, stirred for 10 minutes at room temperature and then cooled to -5. At this temperature, a solution of 40.1 g of dicyclohexylcarbodiimide in 90 ml of methylene chloride is added dropwise. The mixture is stirred for 3 hours at -5 ° and all night at room temperature. After filtering off the dicyclohexylurea and dicyclohexylamine hydrochloride, the solution is shaken out, three times with 0.1-n. Hydrochloric acid, twice with 20% sodium chloride solution, once with 10% sodium bicarbonate solution and twice with 20% sodium chloride solution and dried over sodium sulfate. Die'Lösung is concentrated to approx. 600 ml, cooled to 5 ° and further dicyclohexylurea is filtered off. After evaporation to dryness, the residue is crystallized from ethyl acetate-hexane for purification. 'P. 110-111 °; [cc] _D -8.5 ° (c = 2 in dimethylformamide);

009818/1907009818/1907

45. H-Scr-Thr-OBzl, TFA 45. H-Scr-Thr-OBzl, TFA

65,7 S BOC-Ser-Thr-OBzl werden gelöst in 100 ml 9O#iger Trifluoressigsäure und die Lösung eine Stunde -bei 20° belassen. Hierauf wird sie unter Rühren in 1000 ml trockenen Aether eingetropft, eine Stunde gerührt und über Nacht bei -10 stehen gelassen. Die entstandene Fällung wird abfiltriert und dreimal· mit trockenem Aether gewaschen und im Vakuum über Aetznatron getrocknet; F. 128-129°; Rf„ = 0,65; Rfψ = 0,50 (an Silicagel).65.7 S BOC-Ser-Thr-OBzl are dissolved in 100 ml 90 # iger Trifluoroacetic acid and the solution left at 20 ° for one hour. It is then dried in 1000 ml with stirring Aether was added dropwise, stirred for an hour and left to stand overnight at -10. The resulting precipitation will filtered off and washed three times with dry ether and dried in vacuo over caustic soda; 128-129 °; Rf "= 0.65; Rfψ = 0.50 (on silica gel).

^' BOC-Leu-Ser-Thr-OBzl ^ ' BOC-Leu-Ser-Thr-OBzl

52j 5 g H-Ser-Thr-OBzl, TFA werden in 145 ml Dimethylformamid gelöst und bei 0 mit einer Lösung von 48,0 g BOC-Leu-ÖNP versetzt. Man.gibt alsdann "21 ml Triäthylamin und 0,75 ml Eisessig zu. Das Reaktionsgemisch wird 3 Stunden bei 0 und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach Zugabe von 2,1 Liter Essigester wird die Lösung ausgeschüttelt, und zwar-zweimal mit V/asser, zweimal mit 0,1-n. Salzsäure, zweimal mit lO^iger Kochsalzlösung, achtmal mit 20$iger Kaliumcarbonatlösung, zweimal mit lO^iger und einmal mit Kochsalzlösung. Nach dem Trocknen über Natriumsulfat wird die Lösung auf ca. 1,4 Liter eingeengt. Ueber Nacht im Eisschrank kristallisiert das -geschützte Tripeptid52j 5 g of H-Ser-Thr-OBzl, TFA are dissolved in 145 ml of dimethylformamide and at 0 with a solution of 48.0 g BOC-Leu-ÖNP moved. Then give "21 ml of triethylamine and 0.75 ml of glacial acetic acid. The reaction mixture is 3 hours stirred at 0 and overnight at room temperature. To Adding 2.1 liters of ethyl acetate, the solution is shaken out, namely-twice with V / water, twice with 0.1-n. Hydrochloric acid, twice with 10% saline, eight times with 20% Potassium carbonate solution, twice with 10 ^ iger and once with Saline solution. After drying over sodium sulfate, the solution is concentrated to approx. 1.4 liters. Overnight The protected tripeptide crystallizes in the refrigerator

vom F. 114-116°; [α]_β = -l4° (c = 2 in Dimethylformamid); Rf₂ = 0,25 (an Silicagol).of 114-116 °; [α] _β = -14 ° (c = 2 in dimethylformamide); Rf ₂ = 0.25 (on silica gel).

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¹H. Ή-Leu-Se r -Thr -ORzI,TFA ¹ H. Ή-Leu-Se r -Thr -ORzI, TFA

46,1 g DOC-^eu-Scr-Thr-OBzI werden in 92,5 ml QOjSi46.1 g of DOC- ^ eu-Scr-Thr-OBzI are in 92.5 ml of QOjSi

Trifluoressigsäure gelöst und 1 Stunde bei 20 belassen. Darauf wird unter Rühren trockener Aether (925 rcl) zugegeben, eine Stunde bei 0 gerührt und über Nacht bei -10 stehen gelassen. Die entstandene Fällung wird abfiltriert, dreimal mit trockenem Aether gewaschen und im Vakuum über Aetznatrcn getrocknet. F. 168-171°; Rf₇ = 0,80 (an Silicagel).Trifluoroacetic acid dissolved and left at 20 for 1 hour. Dry ether (925 rcl) is then added with stirring, the mixture is stirred at 0 for one hour and left to stand at -10 overnight. The resulting precipitate is filtered off, washed three times with dry ether and dried over caustic in a vacuum. 168-171 °; Rf ₇ = 0.80 (on silica gel).

£°^g-^A£ri-Ieu-Ser-Thr-OBzl £ ° ^g - ^{A £ r} i- Ieu-Ser-Thr-OBzl

20,8 g BOC-Asn-OH werden in 208 ml Acetonitril aufgeschlämmt, mit 22,7 g Woodward's Reagenz K versetzt und ■ 30 Minuten bei 20° gerührt. Dann lässt man unter Rühren 12,6 ml Triethylamin so zutropfen, dass die Innentemperatur +32 nicht übersteigt, kühlt auf 20 , und rührt bei dieser Temperatur noch 50 Minuten. Die fast klare Lösung wird auf 0° gekühlt und mit einer ebenfalls auf 0° gekühlten20.8 g of BOC-Asn-OH are slurried in 208 ml of acetonitrile, 22.7 g of Woodward's reagent K are added and the mixture is stirred at 20 ° for 30 minutes. Then leave with stirring 12.6 ml of triethylamine are added dropwise so that the internal temperature +32 does not exceed, cool to 20, and stir at this Temperature another 50 minutes. The almost clear solution will be cooled to 0 ° and with a likewise cooled to 0 °

Lösung von 39,1 g H-Leu-Ser-Thr-OBzI,TFA und 10,5 ml Trjäthylamin in 257 ml Dimethylformamid versetzt. Man rührt das bald erstarrende Reaktionsgemisch über Nacht bei Zirr.T.ortei:iporatur, kühlt auf -10° ab und rührt noch 2 Stunden bei -10°. Hierauf nutscht man die kristalline Fällung ab und wäscht das Tctrapeptidderivat einmal mit kaltem Acetonitril, einmal mit Essigoöter und dreimal mit V/asser bis es Chlorid-frei ist. Das erhaltene ProduktSolution of 39.1 g of H-Leu-Ser-Thr-OBzI, TFA and 10.5 ml Triethylamine is added to 257 ml of dimethylformamide. Man The reaction mixture, which soon solidifies, stirs overnight at Zirr.T.ortei: iporatur, cools to -10 ° and continues to stir 2 hours at -10 °. Then one sucks the crystalline one Precipitation and washes the trapeptide derivative once with it cold acetonitrile, once with Essigoöter and three times with water until it is chloride-free. The product obtained

009818/ 1 907009818/1 907

wird kristallisiert aus 370 ml Dimethylformamid, 3,7 ml Eisessig und 370 ml Acetonitril. F. 225-226°; [a]_ß = -.36° (c = 2 in Dimethylformamid); Rfg = 0,85 (an Silicagel).is crystallized from 370 ml of dimethylformamide, 3.7 ml of glacial acetic acid and 370 ml of acetonitrile. 225-226 °; [ _{α] β} = -36 ° (c = 2 in dimethylformamide); Rfg = 0.85 (on silica gel).

49. H-A sn-Leu-Ser-Thr-OBzl,TPA 49. HA sn-Leu-Ser-Thr-OBzl, TPA

32 g BOC-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl werden in 192 ml 90#iger Trifluorcssigsäure gelöst und 45 Minuten bei 20 belassen. Darauf wird die Lösung auf ca. 40 ml eingeengt, unter Rühren mit 400 ml Aether versetzt und 20 Minuten bei unter Rückfluss gerührt. Alsdann kühlt, man die Kristallsuspension auf -10 ab und lässt über Nacht bei -10 stehen. Die Fällung wird abfiltriert, dreimal mit Aether gewaschen und in Vakuum über Aetznatron getrocknet. F. 125-127 J ^Rf2i ⁼ °'33 (^an Silicagel).32 g of BOC-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl are dissolved in 192 ml of 90% trifluoroacetic acid and left at 20 for 45 minutes. The solution is then concentrated to approx. 40 ml, 400 ml of ether are added while stirring and the mixture is stirred under reflux for 20 minutes. The crystal suspension is then cooled to -10 and left to stand at -10 overnight. The precipitate is filtered off, washed three times with ether and dried in vacuo over caustic soda. M.p. 125-127 J ^Rf 2i ⁼ ° '33 ( ^on silica gel).

50. BOC-GIy-Asn-Leu-Scr-Thr-OBzl .50. BOC-GIy-Asn-Leu-Scr-Thr-OBzl .

26,3 g H-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzI,TFA werden- in 100 ml Dimethylformamid gelöst, gekühlt auf 0°, nacheinander mit 7,5 ml Triäthylamin, 0,54 ml Eisessig und einer Lösung von l4,4gBOC-GIy-OMP in 100 ml Dimethylformamid versetzt, bei Raumtemperatur gerührt, bis die Mischung erstarrt, und zwei' Tage stehen gelassen. Alsdann gibt man unter Rühren 3OO rnl Essigcüter zu und lässt über Nacht bei -10° stehen. Die Fällung'"wird abfiltriert, zweimal mit Essigester und zweimal "mit Aether ge'v/aschen, eine halbe Stunde mit 200 ml26.3 g of H-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzI, TFA are in 100 ml Dissolved dimethylformamide, cooled to 0 °, successively with 7.5 ml of triethylamine, 0.54 ml of glacial acetic acid and a solution of 14.4gBOC-GIy-OMP added to 100 ml of dimethylformamide, stirred at room temperature until the mixture solidifies, and left for two days. Then add with stirring Add 3OO rnl of vinegar and leave to stand overnight at -10 °. The precipitate '"is filtered off, twice with ethyl acetate and washed twice with ether, half an hour with 200 ml

QQ 98 18/1907QQ 98 18/1907

Wasser verrührt, abfiltriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. F. 227-228°; [α]_β = -23° (c =2 in Dimethylformamid); Rfg = 0,50 (an Silicagel).Stirred water, filtered off, washed with water and dried in vacuo. M.p. 227-228 °; [α] _β = -23 ° (c = 2 in dimethylformamide); Rfg = 0.50 (on silica gel).

51. BOC-GIy-Asn-Leu-Ser-Thr-OH 51. BOC-GIy-Asn-Leu-Ser-Thr-OH

17,0 g BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl werden in 3*10 ml Dimethylformamid unter Erwärmen gelöst. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur gibt man 3Λ & 10$ige Palladium-Kohle zu und hydriert. Die Reduktion ist nach h Stunden vollendet. Nach Abfiltrieren des Katalysators wird die Lösung am Hochvakuum eingeengt. Dreimaliges Verreiben mit Aether liefert ein laut Dünnschichtchromatogramm einheitliches Pentapeptid. F. 181-I83⁰; [a]_D = -l6,5°(c =2 in Dimethylformamid); Rf = 0,65 (an Silicagel).17.0 g of BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl are dissolved in 3 * 10 ml of dimethylformamide with heating. After cooling to room temperature, 3Λ & 10% palladium-carbon is added and the mixture is hydrogenated. The reduction is complete after h hours. After filtering off the catalyst, the solution is concentrated in a high vacuum. Trituration three times with ether yields a pentapeptide which is uniform according to the thin-layer chromatogram. M.p. 181-183 ⁰ ; [a] _D = -16.5 ° (c = 2 in dimethylformamide); Rf = 0.65 (on silica gel).

52. BOC-GIy-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-N₃H₃-Z52. BOC-GIy-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl) -N ₃ H ₃ -Z

9,2 g H-Cys(Bzl)-N₂H₃-Z,HCl v/erden in 3O.O ml frisch destilliertem Dimethylformamid gelöst, mit 12,2 g BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-0H versetzt und bei Raumtemperatur bis zur Lösung gerührt. Sodann kühlt man die Lösung auf 0° ab, gibt 3,28 ml Triethylamin und 4,.88 g N-Hydroxysuccinimid in 100 ml Dimethylformamid zu, kühlt weiter auf -22° ab und gibt 4,36 g Dieyclohexylcarbodiimid in ^O ml Dimethylformamid zu. Man rührt eine Stunde bei -22°, lässt alsdann die Innentemperatur allmählich, steigen, und rührt noch 3 Tage bei Zimmertemperatur, filtriert von ausgefallenem Dicyclo-9.2 g of H-Cys (Bzl) -N ₂ H ₃ -Z, HCl v / earth dissolved in 3O.O ml of freshly distilled dimethylformamide, with 12.2 g of BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-OH added and stirred at room temperature until dissolved. The solution is then cooled to 0 °, 3.28 ml of triethylamine and 4.88 g of N-hydroxysuccinimide in 100 ml of dimethylformamide are added, the temperature is further reduced to -22 ° and 4.36 g of dieyclohexylcarbodiimide in ^ O ml of dimethylformamide are added to. The mixture is stirred for one hour at -22 °, then the internal temperature is gradually increased, and stirred for a further 3 days at room temperature, the precipitated dicyclo-

009818/1907009818/1907

hexylharnstoff ab und dampft am Hochvakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird verrührt mit einer Mischung von Essigester und 5#iger Zitronensäurelösung, die Fällung abfiltriert, mit Wasser gewaschen, im Vakuum getrocknet, mit trockenem Aether verrührt, filtriert und im Hochvakuum getrocknet. F.-173-178° [a]_D = -25,5° (c = 2 in Dimethylformamidh Rf = 0,21 (an Silicagel).hexylurea and evaporated to dryness in a high vacuum. The residue is stirred with a mixture of ethyl acetate and 5% citric acid solution, the precipitate is filtered off, washed with water, dried in vacuo, stirred with dry ether, filtered and dried in a high vacuum. Mp-173-178 ° [a] _D = -25.5 ° (c = 2 in dimethylformamideh Rf = 0.21 (on silica gel).

53- K-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-N₀H₃-Z,TFA53- K-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl) -N ₀ H ₃ -Z, TFA

C.C.

13 g BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(BzI)-NgH -Z werden13 g of BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (BzI) -NgH -Z become

gelöst in I30 ml 90/^iS^er Trifluoressigsaure und die Lösunf wird 2 Stunden bei 22 stehen gelassen. Darauf wird die Lösung eingeengt und der Rückstand dreimal mit Aether verrührt und im. Vakuum über Aetznatron getrocknet. F. I59-I6I⁰. Rf₆ = 0,63 (an Silicagel).dissolved in I30 ml of 90 / ^ iS ^it is trifluoroacetic acid and the Lösunf 2 hours at 22 allowed to stand. The solution is then concentrated and the residue is stirred three times with ether and im. Vacuum dried over caustic soda. F. I59-I6I ⁰ . Rf ₆ = 0.63 (on silica gel).

54. BOC-Cys(BzI)-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-MgHg-Z54. BOC-Cys (BzI) -Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl) -MgHg-Z

6,69 g BOC-Cys(Bzl)-OSU und 12,2 g H-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl)-NgHg-Z, 1,22 TFA v/erden in 100 ml Dimethylformamid gelöst. Aus einer Lösung von I50 mMol Triethylamin in 100 ml Dimethylformamid wird unter Rühren sovi-el Triethylamin zugetropft, bis das Reaktionsgemisch auf feuchtem Indikatorpapier einen pH-Wert von 6,k zeigt. Die Lösung wird 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt, darauf6.69 g of BOC-Cys (Bzl) -OSU and 12.2 g of H-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl) -NgHg-Z, 1.22 TFA v / earth dissolved in 100 ml of dimethylformamide . From a solution of I50 mmol of triethylamine in 100 ml of dimethylformamide is added dropwise with stirring Sovi-el triethylamine, to the reaction mixture on moistened indicator paper shows a pH of 6, k. The solution is stirred for 3 days at room temperature, then

009818/1907009818/1907

am Hochvakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand .wird zweimal mit 3OO ml Essigester verrührt, anschließend dreimal mit einer Mischung.von I50 ml Essigester und 30 ml fjfuiger Zitronensäurelösung, abfiltriert, im Vakuum getrocknet und aus Dimethylformamid-Essigester kristallisiert. F. 191 -193°; [a]_ß = -31,5° (c = 2 Dimethylformamid);. Rf5 = 0,35 (an Silicage).).evaporated to dryness in a high vacuum. The residue is stirred twice with 300 ml of ethyl acetate, then three times with a mixture of 150 ml of ethyl acetate and 30 ml of liquid citric acid solution, filtered off, dried in vacuo and crystallized from dimethylformamide-ethyl acetate. 191-193 °; [ _{α] β} = -31.5 ° (c = 2 dimethylformamide) ;. Rf5 = 0.35 (on silica).).

55. DOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-NpH^55. DOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-NpH ^

6 g BOC-Cys(Bzl)-Gly-A"sn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-NgHg-Z werden bei -HO in 700 ml trockenem flüssigem Ammoniak gelöst, Unter Rühren werden beim Siedepunkt des Ammoniaks 973 mg Natrium in solcher V/eise zugegeben, dass die Farbe des Reaktionsgeiiiisches nur hellblau wird. Mach 25 Minuten ist die Reduktion vollendet. Man rührt noch 10 Minuten unter Beibehaltjen der Blaufärbung, gibt alsdann 2,k ml Eisessig zu und dampft am Hochvakuum (ca. 1 mm) zur Trockne ein. Der Rückstand ftird mit 12 ml Wasser, 3>2 ml Eisessig und 20" ml"Essigester während einer Stunde bei 0 verrührt, die Fällung abfiltriert, zweimal mit 10 ml l£iger Essigsäurelösung und einmal mit 10 ml Essigester gewaschen und im Hochvakuum getrocknet.
Rf *=O,65 (an Silicägel).6 g of BOC-Cys (Bzl) -Gly-A "sn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl) -NgHg-Z are dissolved in 700 ml of dry liquid ammonia at -HO. 973 mg of the ammonia boiling point are obtained with stirring sodium else added in such V /, that the color of Reaktionsgeiiiisches only light blue. Mach 25 minutes, the reduction is complete. the mixture is stirred for 10 minutes under Beibehaltjen of the blue coloration, is then 2, k ml of glacial acetic acid and evaporated under high vacuum (ca. 1 mm) to dryness. The residue is stirred with 12 ml of water, 3> 2 ml of glacial acetic acid and 20 "ml" of ethyl acetate for one hour at 0, the precipitate is filtered off, twice with 10 ml of aqueous acetic acid solution and once with 10 ml Washed ethyl acetate and dried in a high vacuum.
Rf * = 0.65 (on silica gel).

OG9 8 18/1907OG9 8 18/1907

• J . y • J. y

5o · BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-lOi,5o · BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-lOi,

1,0 g BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-N H wird gelöst in 100 ml Dimethylformamid und 5OO ml V/asser, das 1,23 mAeq. Chlorwasserstoff enthält. Mit 3,7 ml einer 0,43-n. Kaliumhydroxydlösung wird der pH-Wert der Lösung auf 6,8 eingestellt. Unter Beibehalten dieses pH-Wertes werden innerhalb 9° Minuten unter Rühren gleichzeitig zugetropft 2.¹YJ ml einer 0,01-m. Kaliumferricyanidlösung und 4,9 ml einer 0,43-n. Käliumhydroxylösung. Man rührt noch 9° Minuten bei Raumtemperatur, bringt alsdann mit 0,7 ml Eisessig den pH-Wert der Lösung auf 4,0. Darauf wird die Lösung mit 50 ml Dowex-2-X8, Acetatform, anschliessend mit 13 ml Dowex-50W-X8, H⁺-Form, gerührt, filtriert und zur-Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in 50#igem t-Butanol gelöst, lyophilisiert und im Hochvakuum getrocknet. Das Produkt enthält ca. 15^ Kaliumacetat. Es ist einheitlich in Dünnschichtchromatogramm an Silicagel: Rf₅ = 0,63; Rf₆ = 0,70; Rf'= 0,75-1.0 g of BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-N H is dissolved in 100 ml of dimethylformamide and 500 ml of V / water, the 1.23 mAeq. Contains hydrogen chloride. With 3.7 ml of a 0.43 n. Potassium hydroxide solution, the pH of the solution is adjusted to 6.8. While maintaining this pH value, 2. ¹ YJ ml of a 0.01-m. Potassium ferricyanide solution and 4.9 ml of a 0.43-n. Potassium hydroxide solution. The mixture is stirred for a further 9 minutes at room temperature, then the pH of the solution is brought to 4.0 with 0.7 ml of glacial acetic acid. The solution is then stirred with 50 ml of Dowex-2-X8, acetate form, then with 13 ml of Dowex-50W-X8, H ⁺ form, filtered and evaporated to dryness. The residue is dissolved in 50 # strength t-butanol, lyophilized and dried in a high vacuum. The product contains approx. 15 ^ potassium acetate. It is uniform in thin-layer chromatograms on silica gel: Rf ₅ = 0.63; Rf ₆ = 0.70; Rf '= 0.75-

57. H-Lcu-Gly-OEt,HCl 57. H-Lcu-Gly-OEt, HCl

Man löst 14 g Z-Leu-Gly-OEt [dargestellt nach J.R. Vaughan & R.L> Osato, J.Am.Chem.Soc. 7J3, 5553 (l95l) ] in 150 ml absolutem Aethanol, versetzt mit 11,5 ml einer 6,9-n. Chlorwasserstofflösung in Aethanol und hydriert in14 g of Z-Leu-Gly-OEt [shown according to J.R. Vaughan & R.L> Osato, J.Am.Chem.Soc. 7J3, 5553 (1951)] in 150 ml of absolute ethanol, mixed with 11.5 ml of a 6,9-n. Hydrogen chloride solution in ethanol and hydrogenated in

009818/19 07009818/19 07

- 6q -- 6q -

Gegenwart von 2,8 g Palladium-Kohle (10* Pd). Nach 1 Stunde wird vom Katalysator abgenutscht und im Vakuum bei.hQ° Dadtemperatur eingedampft. Der Rückstand ist ein OeI und wird direkt weiter verarbeitet. Rf₁ = 0,50 (an Silicagel).Presence of 2.8 g palladium-carbon (10 * Pd). After 1 hour, the catalyst is suctioned off and in vacuo at. hQ ° Dadt temperature evaporated. The residue is an OeI and is processed further directly. Rf ₁ = 0.50 (on silica gel).

58. BOC-Nle-Leu-Gly-OEt58. BOC-Nle-Leu-Gly-OEt

Aus 4,63 g BOC-NIe-OH, 2,82 ml Triäthylamin und 1,9 ml Chlorameisensäureäthylester in 50 ml Tetrahydrofuran stellt man das gemischte Anhydrid her wie unter 1 beschrieben und · kuppelt es mit 5*05 g H-Leu-Gly-OEt, HCl in 50 ml Tetrahydrofuran. Der Rückstand wird aus Essigester-Petroläther (4O:6O) kristallisiert. P* 126 - 127°. [a]jj° = -28,3° (c = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtehromatogramm an Silicagel ist Rf₁ = OjJ. The mixed anhydride is prepared as described under 1 from 4.63 g of BOC-NIe-OH, 2.82 ml of triethylamine and 1.9 ml of ethyl chloroformate in 50 ml of tetrahydrofuran and it is coupled with 5 * 05 g of H-Leu-Gly -OEt, HCl in 50 ml of tetrahydrofuran. The residue is crystallized from ethyl acetate-petroleum ether (4O: 6O). P * 126-127 °. [a] jj ° = -28.3 ° (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₁ = OjJ.

59. BOC-Nie-Leu-GIy-OH59. BOC-Nie-Leu-GIy-OH

Äan löst 3*25 g des unter 58 beschriebenen Esters in 100 ml Methanol und gibt 21 ml 0,53~n· Natriumhydroxid zu. Nach 1 /2-stündigem Rühren säuert man die Lösung an und dampft sie im Vakuum ein. Der Rückstand wird in Wasser gelöst und mit Essigester extrahiert. Die organische Schicht wird getrocknet und eingedampft. Das Produkt schmilzt bei 7I-72⁰. [α]ίΐ = -28,4 (c = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₇ =0,75.Äan dissolves 3 × 25 g of the ester described under 58 in 100 ml of methanol and adds 21 ml of 0.53N sodium hydroxide. After stirring for 1/2 hour, the solution is acidified and evaporated in vacuo. The residue is dissolved in water and extracted with ethyl acetate. The organic layer is dried and evaporated. The product melts at 7I-72 ^0th [α] ίΐ = -28.4 (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₇ = 0.75.

009818/1907009818/1907

6O. H-NIe-Leu-Gly-OH6O. H-NIe-Leu-Gly-OH

Man löst 2,42 g BOC-Nie-Leu-Gly-OH in 24-ml 90#iger Trifluoressigsäure wie unter 16 besehrieben. Nach einer Stunde wird die Lösung eingedampft. Das Produkt schmilzt bei 94-96 . Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₇ =0,56.2.42 g of BOC-Nie-Leu-Gly-OH are dissolved in 24 ml of 90 # trifluoroacetic acid as described under 16. After one hour the solution is evaporated. The product melts at 94-96. In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₇ = 0.56.

T Ί T Ί

6l. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nie-GIy-OH6l. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nie-GIy-OH

Man löst 1 g des unter 56 beschriebenen Hydrazids in 35 Dimethylformamid und bildet das Azid wie unter I3 besehrieben mit 0,85 ml 3,64-n. Salzsäure in Tetrahydrofuran und 0,155 ml1 g of the hydrazide described under 56 is dissolved in 35 Dimethylformamide and forms the azide as described under I3 with 0.85 ml 3.64-n. Hydrochloric acid in tetrahydrofuran and 0.155 ml

iso-Amylnitrit. Die Azidlösung gibt man zu einer Lösung von 0,955 g H-NIe-Leu-Gly-OH und 0,324 g Triäthylamin in 25 ml Dimethylformamid. Die Reaktionsmischung wird eingedampft und zweimal mit Essigester-Zitronensäurelösung verrührt. Das Produkt weist im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel Rf = 0,71 auf.iso-amyl nitrite. The azide solution is added to a solution of 0.955 g of H-NIe-Leu-Gly-OH and 0.324 g of triethylamine in 25 ml Dimethylformamide. The reaction mixture is evaporated and stirred twice with ethyl acetate-citric acid solution. That In the thin-layer chromatogram on silica gel, the product shows Rf = 0.71.

f If I

62. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nie-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-He-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ 62.BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nie-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-His- Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-He-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂

Man löst 440 mg des unter 6l beschriebenen BOC-Decapeptids und IO9 mg N-Hydroxysuceinimid in 35 ml Dimethylformamid,440 mg of the BOC decapeptide described under 6l are dissolved and 10 9 mg of N-hydroxysuceinimide in 35 ml of dimethylformamide,

009818/1907009818/1907

kühlt die Lösung auf -22°, "fügt 98 mg Dicyclohexylcarbodiimid hinzu und rührt noch I¹/^ Stunden bei -22° und 3V2 Stunden bei O . Dann kühlt man wieder auf -22° und gibt 850 mg des unter 43 beschriebenen Docosapeptidamids hinzu und stellt das pH mit Triäthylamin auf 6,6. Nach 7 Tagen beithe solution is cooled to -22 °, "added 98 mg of dicyclohexylcarbodiimide are added and stirred for a further I ¹ / ^ h at -22 ° and 3V2 hours at O. It is then cooled again to -22 ° and are added 850 mg of Docosapeptidamids described below 43 and adjusts the pH to 6.6 with triethylamine, after 7 days

0 und 5 Ta-gen bei 22° wird die Lösung im Vakuum zu Trockne eingedampft und der Rückstand über Silicagel im System n-Butanol-Eisessig-Wasser (4:1:5) chromatographiert. Das Produkt zeigt im Dunnschichtchromatogranm an Silicagel Rf₅ = 0,29.For 0 and 5 days at 22 °, the solution is evaporated to dryness in vacuo and the residue is chromatographed over silica gel in the n-butanol-glacial acetic acid-water system (4: 1: 5). In thin-layer chromatography on silica gel, the product shows Rf ₅ = 0.29.

00 9818/190700 9818/1907

Beispiel 2Example 2

H-Cys -GIy-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-VaI-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg (VaI -Calcitonin M). 'H-Cys -GIy-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-VaI-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln- Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg (VaI -calcitonin M). '

70 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr_rGln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-GIn-Thr-Ala-lie-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ werden in 3 ml eiskalter, 95#iger Trifluoressigsäure gelöst und die Lösung wird auf 25° erwärmt. Nach 1 Stunde bei 25° wird in 70 ml eiskalten Aether eingegossen und die erhaltene Fällung abgenutscht. Sie wird mehrmals mit Aether gewaschen, getrocknet und dann in 5^iger Essigsäure gelöst. Dann wird zur Entfernung von Trifluoracetat-Ionen über eine Säule von Merck-Ionenaustauscher Nr. II (schwach basisch, Acetatform) filtriert. Das Eluat wird lyophilisiert. Das so70 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr _r Gln-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-His- Thr-Phe-Pro-GIn-Thr-Ala-lie-GIy-VaI-GIy-Ala-PrO-NH ₂ are dissolved in 3 ml of ice-cold, 95% trifluoroacetic acid and the solution is warmed to 25 °. After 1 hour at 25 °, it is poured into 70 ml of ice-cold ether and the precipitate obtained is suction filtered. It is washed several times with ether, dried and then dissolved in 5% acetic acid. Then, to remove trifluoroacetate ions, it is filtered through a column of Merck ion exchanger No. II (weakly basic, acetate form). The eluate is lyophilized. That so

erhaltene Dotriacontapeptid ist dünnschichtchromatographisch (Aluminiumoxydplatten, Systeme 52 und 45) nicht ganz ein-_: heitlich. Es kann durch Gegenstromverteilung im System n-Butanol-Essigsäure-Wasser (4:1:5) gereinigt werden.-Dotriacontapeptid obtained (52 and 45 Aluminiumoxydplatten, systems) not quite one thin layer _{chromatography:} uniformly. It can be cleaned by countercurrent distribution in the system n-butanol-acetic acid-water (4: 1: 5).

0 09818/19070 09818/1907

Im Dünnschichtehromatogramm an Silicagel ist Rf^= 0,45; an Aluminiumoxid ist RfVp ⁼ °>53; .^45 = 0,42.In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ^ = 0.45; on aluminum oxide, RfVp ⁼ °>53; . ^ 45 = 0.42.

Das Ausgangsmaterial kann wie folgt hergestellt werden: .
1. BOC-Val-Leu-Gly-OEtThe starting material can be produced as follows:.
1. BOC-Val-Leu-Gly-OEt

Man löst 4,35 g BOC-VaI-OH in 50 ml· Tetrahydrofuran und bildet das gemischte Anhydrid wie im Beispiel 1 unter 58 beschrieben und kuppelt es mit 5>O6 g H-Leu-Gly-OEt (Beispiel 1, 57) Das Produkt schmilzt bei 112 - II3⁰. Ea]^⁰ = -27,3° (c = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtehromatogramm an Silicagel ist Rf-, =0,7.4.35 g of BOC-VaI-OH are dissolved in 50 ml of tetrahydrofuran and the mixed anhydride is formed as described in Example 1 under 58 and coupled with 5> O6 g of H-Leu-Gly-OEt (Example 1, 57) Das Product melts at 112 - II3 ⁰ . Ea] ^ ⁰ = -27.3 ° (c = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf- = 0.7.

2. BOC-Val-Leu-Gly-OH2. BOC-Val-Leu-Gly-OH

Man verseift BOC-Val-Leu-Gly-OEt in gleicher Weise wie in Beispiel 1 unter 59 beschrieben. Das Produkt schmilzt bei 78⁰. La]^⁰ = -24,7° (e = 1 in Dimethylformamid). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf = 0,71·BOC-Val-Leu-Gly-OEt is saponified in the same way as described in Example 1 under 59. The product melts at 78 ⁰ . La] ^ ⁰ = -24.7 ° (e = 1 in dimethylformamide). In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf = 0.71

3. H-Val-Leu-Gly-OH3. H-Val-Leu-Gly-OH

Man löst 2,9 g BOC-Val-Leu-Gly-OH in 24 ml 90#iger Trifluoressigsäure wie im Beispiel 1 unter 60 beschrieben. Das Produkt schmilzt bei 75 · Im Dünnschichtchromatogramm an SiIicagel ist Rf„ =0,5·2.9 g of BOC-Val-Leu-Gly-OH are dissolved in 24 ml of 90 # strength trifluoroacetic acid as described in example 1 under 60. The product melts at 75 in a thin-layer chromatogram on silica gel is Rf "= 0.5

009818/1907009818/1907

h. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-OH H. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-OH

1 g des im Beispiel 1 unter 56 beschriebenen Hydrazids wird wie in Beispiel 1 unter 6l beschrieben in das Azid übergeführt und dieses mit 0,9333 g H-Val-Leu-Gly-OH kondensiert. Das •Produkt zeigt im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel Rf₅ = 0,71.1 g of the hydrazide described in Example 1 under 56 is converted into the azide as described in Example 1 under 6l and this is condensed with 0.9333 g of H-Val-Leu-Gly-OH. _{The product shows Rf 5} = 0.71 in the thin-layer chromatogram on silica gel.

5. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-GIn-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHp 5. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-His- Thr-Phe-Pro-GIn-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHp

44O mg des im Beispiel 1 unter 43 beschriebenen Docosapeptidamids werden in gleicher Weise wie im Beispiel 1 unter 62 beschrieben mit BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-OH kondensiert. Das Produkt weist im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel.Rfj- = 0,29 auf.440 mg of the docosapeptide amide described in Example 1 under 43 are described in the same way as in Example 1 under 62 with BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-OH condensed. In the thin-layer chromatogram on silica gel, the product shows.Rfj- = 0.29.

009818/1907009818/1907

Beispiel 3Example 3

i Ii I

H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Leu-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-GIn-Thr-AIa-I le-Glyr-H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Leu-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-GIn- Thr-AIa-I le-Glyr-

Val-Gly-Ala-Pro-NH (Leu -Calcitonin M).Val-Gly-Ala-Pro-NH (Leu-calcitonin M).

Man übergiesst 200 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-SeritBu)200 mg of BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-SeritBu are poured over

Thr(tBu)-Cys-Leu-Leu-Gly-ThrftBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp-(OtEu) -Phe-Aim -Lys(BOC) -Phe-IIis-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) A la-I le-G Iy-VaI-GIy-A la-Pro-NH₂ Thr (tBu) -Cys-Leu-Leu-Gly-ThrftBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -Gln-Asp- (OtEu) -Phe-Aim -Lys (BOC) -Phe-IIis-Thr (tBu ) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) A la-I le-G Iy-VaI-GIy-A la-Pro-NH ₂

rcit 3*5 rcl eiskalter, 95/^i£er TrifluoressigGäure, erwärmt die Mischung nach vollständiger Lösung des Peptidderivats auf 30° und lässt die Lösung 1 Stunde stehen. Dann wird sie in 200 ml eiskalten Aether gegossen. Die feine Fällung wird abgenutscht, nach Trocknen im Vakuum über Natriurn.-hydroxyd in verdünnter Essigsäure gelöst und zur Entfernungrcit 3 * 5 rcl ice-cold, 95% trifluoroacetic acid, warmed the mixture after complete dissolution of the peptide derivative to 30 ° and the solution is allowed to stand for 1 hour. Then it will be poured them into 200 ml of ice-cold ether. The fine precipitate is filtered off with suction, after drying in vacuo over sodium hydroxide dissolved in dilute acetic acid and removed for removal

von Trifluoracetat-Ionen über eine Säule von Merck-IonenaiK-tauseher Nr. II, schwach basisch, filtriert. Das Eluat wird lyophilisiert. Man erhält das essigsaureof trifluoroacetate ions via a column of Merck ionic thousands No. II, weakly basic, filtered. The eluate is lyophilized. Acetic acid is obtained

Salz des Leu -Calcitonin M .Salt of Leu -calcitonin M.

009818/1907009818/1907

Das Ausgangsmaterial· " - folgt hergestellt werden:The starting material · "- is prepared as follows will:

400 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Leu-Leu-GIy-OH, 600 mg H-Thr (tBu)'-Tyr (tBu) -Thr (tBu) -Gin-Asp(OtBu) Phe-Asn-Cys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg, 100 mg N-Hydroxysuccinimid, 120 mg Dicyclohexylcarb'odiimid und 6 ml Dimethylformamid werden 3 Stunden bei 45 gerührt. Dann giesst man die Mischung in 300 ml Aether und· filtriert den Niederschlag ab. Man reinigt das Rohprodukt durch Gegenstroniverteilung im System Methanol-Puffer-Chloroform-Tetrachlorkohlenstoff 11:3:6:7» '(Puffer, wie. in'Beispiel' 1); K = 0,7·-"400 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Leu-Leu-GIy-OH, 600 mg H-Thr (tBu) '- Tyr (tBu) -Thr (tBu) -Gin-Asp (OtBu) Phe-Asn-Cys (BOC) -Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln- Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg, 100 mg of N-hydroxysuccinimide, 120 mg of dicyclohexylcarb'odiimide and 6 ml of dimethylformamide are stirred at 45 for 3 hours. Then you pour them Mixture in 300 ml of ether and · filtered the precipitate away. The crude product is purified by countercurrent distribution in the methanol-buffer-chloroform-carbon tetrachloride system 11: 3: 6: 7 »'(buffer, as in' Example '1); K = 0.7 · - "

Das als Ausgangsmaterial verwendete Dekapeptid ' wird .viie in der Schweizer Anmeldung Ges. Nr. II671/69 (Case 6548/L-6O für das entsprechende Met - Dekapeptid beschrieben hergestellt. Man geht von H-Leu-Gly-OMe aus, setzt mit Z-Leucin-N-Hydroxysuccinimidester um, hydriert das erhaltene Z-Leu-Leu-Gly-OMe, kondensiert das H-Leu-Leu-Gly-OMe, HCl mit TRI-CyS(TRl)-OH wie unter 9) in Beispiel 1 der Schweizer Anmeldung Ges.Nr. ΙΙ67Ί/69 (Case 65²Ib/ 1-6) beschrieben und verfahrt mit dem erhaltenen Tetrcpeptidderivat analog wie in der genannten Anmeldung unter 10) bis l6) beschrieben.,The decapeptide used as the starting material is produced, as described in the Swiss application Ges Z-Leucine-N-hydroxysuccinimide ester is converted, the Z-Leu-Leu-Gly-OMe obtained is hydrogenated, the H-Leu-Leu-Gly-OMe, HCl is condensed with TRI-CyS (TRl) -OH as under 9) in example 1 of the Swiss registration Ges.Nr. ΙΙ67Ί / 69 (Case 65 ² Ib / 1-6) described and proceed with the obtained tetra-peptide derivative analogously as described in the application mentioned under 10) to l6).,

0098187 19070098187 1907

Beispiel 4Example 4

H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nva-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr~Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Xle-Gly- H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nva-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr ~ Phe-Pro-Gln- Thr-Ala-Xle-Gly-

Val-Gly-Ala-Pro-NH₂ (Nva -Calcitonin M),Val-Gly-Ala-Pro-NH ₂ (Nva -calcitonin M),

5 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Nva-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Glrt-Asp (OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHp werden mit 0^2 ml 957oiger Trifluoressigsäure versetzt und 1 Stunde bei 30° stehen gelassen. Hierauf gibt man 5 ml Aether zu, zentrifugiert die Fällung ab, wascht sie mit wenig Aether und trocknet sie. Das als trifluoressigsaures Salz erhaltene Dotriacontapeptidamid kann durch Ionenaustauscher in das Acetat übergeführt werden. '5 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Nva-Leu-Gly-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -Glrt-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHp with 0 ^ 2 ml of 957oiger trifluoroacetic acid added and left to stand at 30 ° for 1 hour. On that 5 ml of ether are added, the precipitate is centrifuged off, wash them with a little ether and dry them. That as Dotriacontapeptideamide obtained from trifluoroacetic acid salt can be converted into the acetate by ion exchangers will. '

Das Ausgangsmaterial kann wie folgt hergestellt werden:The starting material can be produced as follows:

1. Z-Nva-L eu-GIy-OMe: 1. Z-Nva-L eu-GIy-OMe:

Man versetzt 4,3 g Z-L-Nva-2,4_>5-trichlorphenylester (J. ehem. Soc. (c) 1968, 715) und 2,2 g H-Leu-Gly-OMe mit 15 ml Dimethylformamid und .rührt das Reaktionsgemisch 48 Stunden bei 35 · Dann verdünnt man mit viel Chloroform, kühlt in Eis und schüttelt dreimal mit 5$iger eiskalter4.3 g of ZL-Nva-2,4 _> 5-trichlorophenyl ester (J. former Soc. (C) 1968 , 715) and 2.2 g of H-Leu-Gly-OMe are mixed with 15 ml of dimethylformamide and stirred the reaction mixture for 48 hours at 35 · Then it is diluted with a lot of chloroform, cooled in ice and shaken three times with 5% ice-cold

009818/1907009818/1907

Kaliumcarbonatlosuns und dreimal mit Eis-Wasser. Die Chloroformlösung wird mit Natriumsulfat getrocknet und .dann zur Trockne eingedampft, zuletzt bei 0,1 mm Hg zur Entfernung des restlichen Diniethylformaids. Dann löst man den Rückstand in Chloroform und chromatographiert an einer in Chloroform bereiteten Säule von Silicagel, wobei man zur 'Elution einer linearen gradierten Chloroform-Chloroform + Methanol (l:l) (je 1 Liter) verwendet. Man sammelt Fraktionen a 100 ml, dampft zur Trockne ein und prüft die Reinheit des Rückstandes durch Dünnschichtchromatographie auf Silicagelplatten und vereinigt die reinen Fraktionen. Das Produkt weist in Toluol-Aceton (l:l) Rf = 0,4 auf.Potassium carbonate solution and three times with ice-water. The chloroform solution is dried with sodium sulfate and then evaporated to dryness, finally at 0.1 mm Hg to remove the remaining diniethylformamide. The residue is then dissolved in chloroform and chromatographed on a column of silica gel prepared in chloroform, using a linear, graded chloroform-chloroform + methanol (1: 1) (1 liter each) for the elution. 100 ml fractions are collected, evaporated to dryness and the purity of the residue is checked by thin-layer chromatography on silica gel plates and the pure fractions are combined. The product has Rf = 0.4 in toluene-acetone (1: 1).

2. H -Nva -Leu-G Iy-QHe i ■ ' -2. H -Nva -Leu-G Iy-QHe i ■ '-

1,7 g des obigen Tripeptids werden in Methanol gelöst und unter intensivem Rühren in Gegenwart von 400 mg Palladiumkohle (10$-Pd) hydriert. Nach Beendigung der Wasserstoffaufnahme.-filtriert man vom Katalysator ab und dampft das Eluat zur Trockne ein. Man erhält ein farbloses Harz, das direkt zur weiteren Umsetzung verwendet wird.1.7 g of the above tripeptide are dissolved in methanol and hydrogenated with vigorous stirring in the presence of 400 mg of palladium carbon (10 $ -Pd). After the Hydrogen uptake.-the catalyst is filtered off and the eluate evaporates to dryness. A colorless one is obtained Resin that is used directly for further conversion.

3. TRI-Cys(TRI)-Hva-Leu-GIy-OMe: _; < Man versetzt 2,5 g TRI-Cys(TRl)-OH und 1,1 g des obigen3. TRI-Cys (TRI) _{-Hva-Leu-Gly-OMe:;} <2.5 g of TRI-Cys (TRl) -OH and 1.1 g of the above are added

H-Nva-Leu-GIy-OMe mit 40 ml Acetonitril un^ gibt, dann .. unter Rühren 1,3 g Dicyelohexylcarbodiimid ,zu. NachH-Nva-Leu-GIy-OMe with 40 ml of acetonitrile and then .. 1.3 g of dicyelohexylcarbodiimide with stirring. To

00 9818/190700 9818/1907

20 Stunden Rühren bei 27° nutseht man von dem ausgeschiedenen Produkt ab und extrahiert dieses mit 1 Liter Chloroform. Dann dampft man das Eluat zur Trockne ein und zerreibt den. Rückstand mit Petroläther. Nach Abgiessen derPetroläther-'Lösung wird unlösliche Produkt getrocknet und zur Reinigung 3 ml aus Petroläther umgefällt. Man erhält das Tetrateptidderivat als amorphes, festes Pulver. Es zeigt bei Dünnschichtchrornatographie auf Silicagelplatten Rf = 0,62 in Chloroform-Methanol (98:2).Stirring at 27 ° for 20 hours is taken from the precipitated product and extracted with 1 liter of chloroform. The eluate is then evaporated to dryness and ground the. Residue with petroleum ether. After pouring off the petroleum ether solution insoluble product is dried and 3 ml of petroleum ether is reprecipitated for purification. The tetrateptide derivative is obtained as an amorphous, solid powder. In thin-layer chromatography on silica gel plates, it shows Rf = 0.62 in chloroform-methanol (98: 2).

M. H-Cys(TRI)-Nva-Leu-GIy-QMe; .M. H-Cys (TRI) -Nva-Leu-GIy-QMe; .

980 mg TRI-CyS(TRI)-NVa-LeU-GIy-OMe werden bei in 25 ml 75;j.iger Essigsäure gelöst und 1 Stunde stehen gelassen. Dann wird zur Troekne eingedampft und der Rückstand mehrmals mit Aether zerrieben. Das .in Aether, unlösliche Acetat von H-CyS(TRI)-IiVa-LeU-GIy-OMe wird im Vakuum bei 35 getrocknet und direkt weiterverarbeitet.980 mg TRI-CyS (TRI) -NVa-LeU-GIy-OMe are used in dissolved in 25 ml of 75% acetic acid and stand for 1 hour calmly. It is then evaporated to dryness and the residue is triturated several times with ether. That. In ether, insoluble Acetate of H-CyS (TRI) -IiVa-LeU-GIy-OMe is used in the Vacuum dried at 35 and processed directly.

5. DPC -Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys (TRI) -I?va -Leu-GIy-OMe Man löst 750 mg DPC-Ser(tBu)-Thr(tEu)-NHMHg in 6 ml Dimethylformamid, kühlt auf -20° und fügt 3,5 ml 1-n. Chlorwasserstoff in Essigester zu. Dann gibt man 0,l6 ml t-Butylnitrit zu und lässt das Reaktionsgemisch 15 Minuten bei -10° stehen. Hierauf wird die auf -10° gekühlte Lösung von^OO mg H-Cys(TRl)-Nva-Leü-Gly-OMe5. DPC -Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys (TRI) -I? Va -Leu-GIy-OMe Dissolve 750 mg DPC-Ser (tBu) -Thr (tEu) -NHMHg in 6 ml dimethylformamide, cools to -20 ° and adds 3.5 ml of 1-n. Hydrogen chloride in ethyl acetate. 0.16 ml of t-butyl nitrite are then added and the reaction mixture is left to stand at -10 ° for 15 minutes. The solution, cooled to -10 °, of ^ OO mg of H-Cys (TRl) -Nva-Leü-Gly-OMe

009818/1907009818/1907

- 8ο _- 8ο _

in 4 ml Dimethylformamid und 0,7 ml Triäthylamin zugegeben und 30 Minuten bei -10 und l8 Stunden bei 0° stehen gelassen. Dann dampft man im Hochvakuum bei 40 Badtemperatür auf ein Volumen von etwa 5 ml ein und fällt das Produkt durch Zugabe, von Eiswasser aus. Nach gründlichem Zerreiben nutscht man ab, wäscht mit Eiswasser nach und trocknet das rohe Hexapeptidderivat im Exsikkator über Calciumchlorid. Zur Reinigung fällt man dreimal aus Essigester-Cyclohexan um. Das Produkt zeigt bei DünnschichtChromatographie . auf Silicagelplatten Rf = 0,47 in Toluol-Aceton (7O).added in 4 ml of dimethylformamide and 0.7 ml of triethylamine and left to stand for 30 minutes at -10 and 18 hours at 0 °. Then you steam in a high vacuum at 40 bath temperature drops to a volume of about 5 ml and the product falls by adding, from ice water. After thorough trituration, it is filtered off with suction, washed with ice water and dried the crude hexapeptide derivative in the desiccator over calcium chloride. For purification, it is precipitated three times from ethyl acetate-cyclohexane around. The product shows on thin-layer chromatography. on silica gel plates Rf = 0.47 in toluene-acetone (7O).

6. H-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OH 6. H-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys (TRI) -Nva-Leu-Gly-OH

Man löst 430 mg DPC-Ser(tEu)-Thr(tBu)-Cys(TRl)-Nva-Leu-GIy-OMe in 10 ml So^ige Essigsäure, lässt 7 Stunden bei 28 stehen, dampft am Rotationsverdampfer bei 35° Badtemperatur zur Trockne ein, trocknet 3 Stunden bei 35 und 0,01 Torr, löst dann in 30 ml Methanol, gibt 3 ml 1,0-n. Natronlauge zu, rührt 1 Stunde bei 28°, gibt dann 2 ml Eisessig zu und dampft am Rotationsverdampfer bei 35° Badtemperatur zur Trockne ein. Man zerreibt den Rückstand mit Eiswasser, wobei man den pH-Wert auf 6-7 einstellt, nutscht ab und v/äs cht mit Eiswasser nach und und trocknet im Exsikkator über Calciumchlorid.430 mg of DPC-Ser (tEu) -Thr (tBu) -Cys (TRl) -Nva-Leu-GIy-OMe are dissolved in 10 ml of So ^ ige acetic acid, leaves 7 hours Stand 28, evaporate to dryness on a rotary evaporator at a bath temperature of 35 °, dry for 3 hours at 35 and 0.01 torr, then dissolve in 30 ml of methanol, give 3 ml 1.0-n. Sodium hydroxide solution, stirred for 1 hour at 28 °, then gives Add 2 ml of glacial acetic acid and evaporate to dryness on a rotary evaporator at a bath temperature of 35 °. One grinds that Residue with ice water, adjusting the pH to 6-7, sucks off and v / äs cht with ice water and and dries in the desiccator over calcium chloride.

009818/ 1907009818/1907

(TRI)-Nva-Leu-GIy-OH(TRI) -Nva-Leu-GIy-OH

Man versetzt 270 rag BOC-Cys(TRl)-G Iy-A sn-Leu-NH-NHg mit 4 ml Dimethylformamid, kühlt auf -20° ab und fügt 1,2 ml 1-n. Chlorwasserstoff in Essigester zu. Dann gibt man 0,044 ml t-Butylnitrit zu und lässt 15 Minuten bei -10° stehen. Hernach gibt man eine auf -10 gekühlte Lösung von 230 mg H-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Nva-Leu-GIy-OH in 4 ml Dimethylformamid, 1 ml Wasser und 0,25 ml Triethylamin zu. Man lässt l8 Stunden, bei 0 stehen, dampft dann bei 0,01 Torr, und 35 Badtemperatur auf ein kleines Volumen ein und fällt das Decapeptid durch Zugabe von Wasser aus. Man zerreibt die Fällung, nutscht ab und trocknet über Calciumchlorid im Exsikkator. Das · Pulver suspendiert man in 7 ml Methanol bei 0°, zerreibt gründlich und nutscht dann ab.270 pieces of BOC-Cys (TRl) -G Iy-A sn-Leu-NH-NHg are added with 4 ml of dimethylformamide, cools to -20 ° and adds 1.2 ml 1-n. Hydrogen chloride in ethyl acetate. Then there 0.044 ml of t-butyl nitrite are added and the mixture is left to stand at -10 ° for 15 minutes. Afterwards you give one that has been cooled to -10 Solution of 230 mg H-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys (TRI) -Nva-Leu-GIy-OH in 4 ml of dimethylformamide, 1 ml of water and 0.25 ml of triethylamine. Let stand at 0 for l8 hours, then evaporate to a small volume at 0.01 torr and bath temperature and the decapeptide is precipitated by addition from water. The precipitate is crushed, suction filtered and dried over calcium chloride in a desiccator. That · Powder is suspended in 7 ml of methanol at 0 ° and triturated thoroughly and then sucks off.

8. BOC-Cys-Giy-Asn-Leu-Ser(tBü)-Thr(tBu)-Cys-Nva-Leu-Gly-OHy8. BOC-Cys-Giy-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Nva-Leu-Gly-OH y

Man löst 105 mg des unter 7) erhaltenen Decapeptids in 20 ml Dimethylformamid und tropft diese Lösung im Verlauf von 1 Stunde in die heftig gerührte Lösung von 15Ο mg Jod in 100 ml Methanol. Man rührt 1 Stunde weiter, entfärbt dann bei 0 durch. Zugabe von 1-n. Natriumthiosulfatlösung, dampft hierauf am Rotationsverdampfer auf ein105 mg of the decapeptide obtained under 7) are dissolved in 20 ml of dimethylformamide and this solution is added dropwise in the course of 1 hour in the vigorously stirred solution of 15Ο mg Iodine in 100 ml of methanol. The mixture is stirred for a further 1 hour, then decolorized at 0. Addition of 1-n. Sodium thiosulfate solution, then evaporates on the rotary evaporator

009818/1907009818/1907

-88 --88 -

Volumen von ca. 20 ml ein und fällt durch Zugabe von 300 ml Aether aus. Man nutscht ab, trocknet im Vakuum bei 3O⁰ und zerreibt dann das Pulver mit Wasser. Man nutscht ab und trocknet im Exsikkator über Calciumchlorid.Volume of about 20 mL and precipitated by addition of 300 ml of ether from. It is suction filtered and dried in vacuo at 3O ^0, and then grinds the powder with water. It is filtered off with suction and dried over calcium chloride in a desiccator.

9. Z-Asp(OtBu)-Phe-OCH,9. Z-Asp (OtBu) -Phe-OCH,

30,3 g Z-Asp(OtBu)_rONP und 18,3 g H-Phe-OCH , HCl werden zusammen in 15O ml Dimethylformamid gelöst, und zu der klaren Lösung 11,8 ml Triathylamin zugetropft. Die entstandene Suspension wird 20 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt, wobei sie sich tiefgelb färbt. Anschliessend wird im Vakuum auf etwa 100 ml eingeengt und in 1 Liter Essigester/Chloroform (4; l) dreimal mit 5/^iger· Zitronensäure, 19 mal mit ca. 2-n. 'Natriumcarbonat und mit gesättigter Kochsalzlösung bis zur neutralen. Reaktion ausgeschüttelt. Das Rohprodukt, ein gelbes OeI, wird in Aether mit Aktivkohle behandelt und nach Animpfen aus 65O ml Aether/Hexan (l.:l) im Kühlschrank kristallisiert. Es bilden sich farblose Nadeln vom P. 74,5 - 76,5°. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist der Rf-Wert im System Chloroform^ethanol (95:5) = 0,74 in Chloroform-Aceton (75:25) = 0,65.30.3 g of Z-Asp (OtBu) _r ONP and 18.3 g of H-Phe-OCH, HCl are dissolved together in 150 ml of dimethylformamide, and 11.8 ml of triethylamine are added dropwise to the clear solution. The resulting suspension is stirred for 20 hours at room temperature, whereupon it turns deep yellow. It is then concentrated in vacuo to about 100 ml and dissolved in 1 liter of ethyl acetate / chloroform (4; l) three times with 5% citric acid, 19 times with approx. 'Sodium carbonate and with saturated saline solution until neutral. Reaction shaken out. The crude product, a yellow oil, is treated in ether with activated charcoal and, after inoculation, crystallized from 650 ml of ether / hexane (l.:l) in the refrigerator. Colorless needles from 74.5 ° to 76.5 ° are formed. In the thin-layer chromatogram on silica gel, the Rf value in the system chloroform ^ ethanol (95: 5) = 0.74 in chloroform-acetone (75:25) = 0.65.

009818/1907009818/1907

10. H-Asp(tBu)-Phe-OCH10. H-Asp (tBu) -Phe-OCH

48,6 g Z-Asp(OtBu)-Phe-OCH werden in 700 ml Methanoi nach Zusatz von 33*5 ml 3-η· Chlorwasserstoff in Dioxan und 5 S 10$igem Palladiumkatalysator auf Kohle in der Schüttelente bei Raumtemperatur decarbobenzoxyliert.48.6 g of Z-Asp (OtBu) -Phe-OCH are dissolved in 700 ml of methanoi after the addition of 33 * 5 ml of 3-η · hydrogen chloride in dioxane and 5 S 10 $ palladium catalyst on charcoal in the shaking duck is decarbobenzoxylated at room temperature.

Nach Beendigung der Wasserstoffaufnahme wird filtriert md eingedampft. Man erhält 3^*7 g eines weissen Schaums. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel in Chloroform-Methanol (9:1) ist Rf =0,60; in Chloroform-Aceton (l:l) *. nt Rf = 0,58} Rf₁₀PE ⁼ °'*^²· ^{Daä Produlit} -wird ohne weitere Reinigung zur nachfolgenden Kondensation eingesetzt.After the uptake of hydrogen has ended, it is filtered and evaporated. 3 ^ * 7 g of a white foam are obtained. In the thin-layer chromatogram on silica gel in chloroform-methanol (9: 1), Rf = 0.60; in chloroform-acetone (l: l) *. nt Rf = 0.58} Rf ₁₀ PE ⁼ ° '* ^ ² · ^{Daä Produlit} - is used for subsequent condensation without further purification.

11. Z-GIn-Asn(OtBu)-Phe-OCH, .11. Z-GIn-Asn (OtBu) -Phe-OCH,.

38,6 g des erhaltenen H-Asp(OtBu)-Phe-OCH , HCl werden mit h2,0 g Z-GIn-ONP in I70 ml Dimethylformamid zu einer klaren, leicht gelben Lösung gelöst und unter Rühren mit 13>9 ml Triäthylamin langsam versetzt. Es entsteht eine orange Suspension, die 2k Stunden bei 3°-35 Badtemperatur gerührt wird."Während dieser Zeit gibt man weitere HO ml D.imethy!formamid und ausserdem noch 1,39 ml Triethylamin zu.38.6 g of the H-Asp (OtBu) -Phe-OCH, HCl obtained are dissolved with h2.0 g of Z-GIn-ONP in 170 ml of dimethylformamide to give a clear, slightly yellow solution and, while stirring, with 13> 9 ml of triethylamine slowly shifted. An orange suspension is formed, which is stirred for 2k hours at 3 ° -35 bath temperature. "During this time, a further 1 O ml of dimethyl formamide and, in addition, 1.39 ml of triethylamine are added.

Zur Aufarbeitung wird der Ansatz in h Litern Chloroform gelöst und in einer 20-stufigen Gegenstromverteilapparatur (Phasenvolumen: untere Phase 400 ml, obere Phase 200 ml pro Gefäss) nacheinander mit 1 Liter 5$iger Zitronensäurelösunß, 400 ml gesättigter Kochsalzlösung, 6 LiterFor working up, the mixture is dissolved in h liters of chloroform and a 20-stage Gegenstromverteilapparatur (phase volume: lower phase 400 ml, upper phase 200 ml per vessel) with 1 liter of 5 $ successively acetic Zitronensäurelösunß, 400 ml of saturated sodium chloride solution, 6 liters

0 09818/ 190 70 09818/190 7

■ * - . -.■■■■ * -■ * -. -. ■■■■ * -

ca. 2-η. Soda und 2,8 Liter gesättigter Kochsalzlösung gewaschen. Nach dem Trocknen und Eindampfen kristallisiert das Tripeptidderivat aus 1,8 1 Aethanol im Kühlschrank ; langsam aus. Man erhält Z-GIn-Asp(OtBu)-Phe-OCH-. vomapprox. 2-η. Soda and 2.8 liters of saturated saline solution washed. After drying and evaporation, the tripeptide derivative crystallizes from 1.8 l of ethanol in the refrigerator; slowly out. Z-GIn-Asp (OtBu) -Phe-OCH- is obtained. from the

F. 186-I88⁰.,F. 186-188 ^0. ,

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel werden folgende Rf-Werte erhalten: · . *The following Rf values are obtained in the thin-layer chromatogram on silica gel: ·. *

in Chloroform-Methanol (9:1): Rf.= 0,39; in Chloroform-Aceton (ία): Rf = 0,24; Rf_102E = 0,69, Ri¹S₉ = o,46, Rf^ = 0,65in chloroform-methanol (9: 1): Rf. = 0.39; in chloroform-acetone (ία): Rf = 0.24; Rf _102E = 0.69, Ri ¹ S ₉ = 0.46, Rf ^ = 0.65

[a]^° = -2ß° + 1° (c = 1,3Ji in Dimethylformamid).[a] ^ ° = -2β ° + 1 ° (c = 1.3Ji in dimethylformamide).

12.. H-GIn-Asp(OtBu)-Phe-OCH12 .. H-GIn-Asp (OtBu) -Phe-OCH

7>55 g Z-Gln-Äsp(OtBu)-Pher-OCH, v/erden in .400 ml Methanol gelöst, mit 4,1 ml 3-n. Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt und in Gegenwart von 2 g Palladiumkohle (lö^ Pd) hydriert. Nach Abnutschen des Katalysators und Eindampfen erhält man H-GIn-Asp(OtBu)-Phe-OCH,, HGl in Form eines ■ farblosen Schaums. Im Dünnschichtchrornatogramm an Silicagel werden folgende Rf-V/erte erhalten: in Chloroform-Methanol "(9:1); Rf = 0,13; in Chloroform-Aceton (25:75): Rf■.= 0,l4; ^Rfl02E " °'²²·7> 55 g of Z-Gln-Äsp (OtBu) -Pher-OCH, dissolved in .400 ml of methanol, mixed with 4.1 ml of 3-n. Hydrogen chloride in dioxane is added and the mixture is hydrogenated in the presence of 2 g of palladium carbon (Lö ^ Pd). After filtering off the catalyst with suction and evaporation, H-GIn-Asp (OtBu) -Phe-OCH ,, HGl is obtained in the form of a colorless foam. The following Rf values are obtained in the thin-layer chromatogram on silica gel: in chloroform-methanol "(9: 1); Rf = 0.13; in chloroform-acetone (25:75): Rf = 0.14; ^Rf 102E "° ^'22 ·

0098 18/19070098 18/1907

- 85 - - ■ — .- 85 - - ■ -.

13- Z-Thr(tBu)-Gin-Asp(OtBu)-Phe-OCH13- Z-Thr (tBu) -Gin-Asp (OtBu) -Phe-OCH

Die gesamte Menge des Hydrochlorids von 12 wird zusammen mit 7A & Z-Thr(tBu)-OSU in 14 ml Dimethylformamid bei Zimmertemperatur gelöst, und zu dieser Lösung werden unter Kühlung im Eisbad 1,72 ml Triäthylamin getropft. Anschliessend wird die bräunliche Suspension 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach üblicher Aufarbeitung in viel Essigester (je dreimaliges Waschen mit 5Joigev Zitronensäure und ca. 2-n. Natriumcarbonat, Neutralwaschen mit gesättigter Kochsalzlösung., Trocknen über Natriumsulfat und Eindampfen im Vakuum bei 30-^° ) wird das Rohprodukt in Aethanol mit Aktivkohle behandelt.und aus 90 ml Aethanol· im Kühlschrank kristallisiert. F.The entire amount of the hydrochloride of 12 is dissolved together with 7A & Z-Thr (tBu) -OSU in 14 ml of dimethylformamide at room temperature, and 1.72 ml of triethylamine are added dropwise to this solution while cooling in an ice bath. The brownish suspension is then stirred for 20 hours at room temperature. After the usual work-up in a lot of ethyl acetate (washing three times each with 5Joigev citric acid and approx. 2N sodium carbonate, washing neutral with saturated sodium chloride solution, drying over sodium sulfate and evaporation in vacuo at 30- ^ °), the crude product is treated in ethanol with activated charcoal. and crystallized from 90 ml of ethanol · in the refrigerator. F.

Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel werden folgende Rf-Werte gefunden: in Chloroform-Methanol (9:1): Rf =0,52;The following Rf values are found in the thin-layer chromatogram on silica gel: in chloroform-methanol (9: 1): Rf = 0.52;

in Cyclohexan-Aceton (3:7): Rf = 0,48; Rfg = 0,48, Rf_12lA = 0,76 [a]p° = -4° + 0,5° (c = 2,3^ in Dimethylformamid). ·in cyclohexane-acetone (3: 7): Rf = 0.48; Rfg = 0.48, Rf _12lA = 0.76 [a] p ° = -4 ° + 0.5 ° (c = 2.3 ^ in dimethylformamide). ·

OQ98 18/ 190 7OQ98 18/190 7

ΐί. H-ThTCtBu)-GIn-ASp(OtBu)-PhG-OCHΐί. H-ThTCtBu) -GIn-ASp (OtBu) -PhG-OCH

4γδ rag Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)~Phe-OCH v/erden in 150 ml Methanol mit 100 mg Palladiumkohle (lO^ig) bei"
Raumtemperatur neutral hydriert. Man erhält 395 mg eines farblosen Schaums von H-Thr(tBu)-GIn-Asp(OtBu)-Phe-OCH , der ohne v/eitere Reinigung für die folgende Kondensation verv/endet wird. _ .4γδ rag Z-Thr (tBu) -Gln-Asp (OtBu) ~ Phe-OCH v / earth in 150 ml of methanol with 100 mg of palladium carbon (10 ^ ig) at "
Hydrogenated at room temperature. 395 mg of a colorless foam of H-Thr (tBu) -GIn-Asp (OtBu) -Phe-OCH are obtained, which is used for the subsequent condensation without further purification. _.

" Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel werden folgende Rf-Werte erhalten:"In the thin-layer chromatogram on silica gel, the following Get Rf values:

in Chloroform-Methanol (l:l): R'f = O„75j
in Chloroform-Methanol (9:l): Rf -'0,17; in Aceton Rf = 0,l8;in chloroform-methanol (1: 1): R'f = O "75j
in chloroform-methanol (9: 1): Rf -'0.17; in acetone Rf = 0.18;

^Rf102E ⁼°'^{23; Hf}89 ⁼ °'¹²·' ■ ' ^Rf 102E ⁼ ° ^{23; Hf} 89 ⁼ ° ^'12 ·' ■ '

15. Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH15. Z-Tyr (tBu) -Thr (tBu) -Gln-Asp (OtBu) -Phe-OCH

687 mg Z-Tyr (tBu)-OH "Dicyclohexylainmoniumsalz v/erden in Chloroform mit wässeriger Zitronensäure ausgeschüttelt, und die erhaltene freie Säure, ein klares OeI, wird in 6,5 nil Tetrahydrofuran mit 0,139 ml N-Methylraorpholin versetzt. Bei -22 gibt man 0,170 ml Chlorameisensäure-isobutylester zu und rührt eine halbe Stunde bei -22 bis -10 . Dann687 mg of Z-Tyr (tBu) -OH "dicyclohexylainmonium salt v / earth in chloroform, extracted with aqueous citric acid, and 0.139 ml of N-methylraorpholine is added to the free acid obtained, a clear oil, in 6.5 nil tetrahydrofuran. At -22 0.170 ml isobutyl chloroformate is added and the mixture is stirred for half an hour at -22 to -10

009818/1009818/1

lässt man das oben beschriebene H-Thr(tBu)-GIn-Asp(QtBu)-Phe-OCIL· in 15 ml Tetrahydrofuran gelöst und vorgekühlfc zutropfep und spült mit 5 ml desselben Lösungsmittels. Nach V2 Stunde bei -10° rührt man noch 15 Stunden bei Raumtemperatur. Nachher wird am Vakuum eingeengt und in Essigester wie üblich aufgearbeitet (vgl.13). Das Roh·*· produkt wird in 15 ml Essigester gelöst, mit 40 ml Aether gefällt und anschliessend aus Methanol im Kühlschrank kristallisiert. Kurze, dicke Nadeln, die beim Trocknen am Hochvakuum bei 50 verwittern.. P. 169-173 · Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel werden folgende Rf-Werte erhalten: in Chloroform-Methanol (9:l) Rf = 0,46; in Chloroform-Methanol (l:l) Rf = 0,95; in Chloroforrn-Aceton (ItI) Rf = 0,44; Rf₈₉ -0,61; Rf_Aceton = 0,68, nr_iQ2S =0,73- [α]^¹ « -54° + 0/5° (c = 2,0^ in Dimethylformamid).the above-described H-Thr (tBu) -GIn-Asp (QtBu) -Phe-OCIL is dissolved in 15 ml of tetrahydrofuran and precooled and rinsed with 5 ml of the same solvent. After two and a half hours at -10 °, the mixture is stirred for a further 15 hours at room temperature. It is then concentrated in vacuo and worked up in ethyl acetate as usual (see 13). The crude product is dissolved in 15 ml of ethyl acetate, precipitated with 40 ml of ether and then crystallized from methanol in a refrigerator. Short, thick needles that weather when dried in a high vacuum at 50 .. P. 169-173 · The following Rf values are obtained in thin-layer chromatograms on silica gel: in chloroform-methanol (9: 1) Rf = 0.46; in chloroform-methanol (1: 1) Rf = 0.95; in chloroform-acetone (ItI) Rf = 0.44; Rf ₈₉ -0.61; Rf _acetone = 0.68, nr _iQ2S = 0.73- [α] ^ ¹ «-54 ° + 0/5 ° (c = 2.0 ^ in dimethylformamide).

16 . H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-GIn-Asp(OtBu)-Phe-OCH16. H-Tyr (tBu) -Thr (tBu) -GIn-Asp (OtBu) -Phe-OCH

2,36 gZ-Tyr(tBu)-ThI^tBu)-GIn-ASp(OtBu)-PhC-OCH₃ werden In 450 ml Methanol mit 500 mg lO^iger Palladiumkohle wie üblich bei Zimmertemperatur hydriert. Man erhält einen farblosen Schaum, der dünnschichtchromatographisch einheitlich ist und als solcher weiterverwendet wird. Im Dünnschichtchroniatogramm an Silicagel v/erden folgende Rf-Werte erhalten: in Chloroform-Methanol (95:5) Rf = 0,22; Rf₈₉ =0,42. ; · s2.36 gZ-Tyr (tBu) -ThI ^ tBu) -GIn-ASp (OtBu) -PhC-OCH ₃ are hydrogenated in 450 ml of methanol with 500 mg of 10 ^ palladium carbon as usual at room temperature. A colorless foam is obtained which is uniform according to thin-layer chromatography and which is further used as such. The following Rf values are obtained in the thin-layer chroniatogram on silica gel: in chloroform-methanol (95: 5) Rf = 0.22; Rf ₈₉ = 0.42. ; · S

009818/1907009818/1907

" ^8Ö - " ^8Ö - 19 5G71119 5G711

17:. Z-Thr (tBu)-Tyr (tBu)-Thr (tBu)-Gin-Asp(OtBu)-Phe-OCH17 :. Z-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -Gin-Asp (OtBu) -Phe-OCH

Das Produkt von l6) wird zusammen mit 1,^8 g Z-Thr(tBu)-OSU in 3 ml Dimethylformamid gelöst und 21 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Nach Verdünnen der Reaktionslösung mit viel Essigester wird wie üblich aufgearbeitet (vgl.13). Das Rohprodukt, wird in JO ml Essigester-Methanol (9·ΐ) warm gelöst und nachfühlen im Eisbad mit 80 ml Aether gefällt. Man erhält das. Produkt als farbloses, amorphes Pulver vom F. 146-1^8°. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel werden folgende Rf-Werte erhalten: in Chloroform-Methanol (9:1),: Rf > 0,55; in Chloroform-Aceton (l:l): Rf = Ο,βΟ; Rf go = OAy, [a]^¹ = + 6 +0,5° (c =· 2,0 in Dimethylformamid).The product from l6) is dissolved together with 1.8 g of Z-Thr (tBu) -OSU in 3 ml of dimethylformamide and stirred for 21 hours at room temperature. After diluting the reaction solution with a lot of ethyl acetate, it is worked up as usual (see 13). The crude product is dissolved warm in JO ml of ethyl acetate-methanol (9 · ΐ) and precipitated in an ice bath with 80 ml of ether. The product is obtained as a colorless, amorphous powder with a melting point of 146-1 ^ 8 °. The following Rf values are obtained in the thin-layer chromatogram on silica gel: in chloroform-methanol (9: 1): Rf>0.55; in chloroform-acetone (l: l): Rf = Ο, βΟ; Rf go = OAy, [a] ^ ¹ = + 6 + 0.5 ° (c = x 2.0 in dimethylformamide).

l8. Z-Thr(tBu)-Tyr (tBu)-Thr (tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-NH-NIIpl8. Z-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -Gln-Asp (OtBu) -Phe-NH-NIIp

' 1,9IgZ-Thr (tBu) -Tyr (tBu) .Thr(tBu) -GIn-Asp (OtBu) -Phe-OCH werden in 80 ml Methanol gelöst und mit 8 ml Hydrazinhydrat vermischt. Nach 22 Stunden Stehenlassen bei Zimmertemperatur v/ird das ausgefallene Produkt isoliert und am Hochvakuum bei 60 getrocknet. Man erhält das mikrokristalline Hydrazid vom P. 226-229° (Zersetzung). Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel werden folgende Rf-Werte gefunden: In Chloroform-Methanol (9:l) Rf -0/32; in Cyclohexan-Aceton (3:7) Rf = 0,23; Rfgq = O₁3^. [a]p° = + 4° + 1° (c - 1,C in Dimethylformamid).1,9IgZ-Thr (tBu) -Tyr (tBu) .Thr (tBu) -GIn-Asp (OtBu) -Phe-OCH are dissolved in 80 ml of methanol and mixed with 8 ml of hydrazine hydrate. After standing at room temperature for 22 hours, the precipitated product is isolated and dried at 60 in a high vacuum. The microcrystalline hydrazide is obtained from P. 226-229 ° (decomposition). The following Rf values are found in the thin-layer chromatogram on silica gel: In chloroform-methanol (9: 1) Rf -0/32; in cyclohexane-acetone (3: 7) Rf = 0.23; Rfgq = O ₁ 3 ^. [a] p ° = + 4 ° + 1 ° (c - 1, C in dimethylformamide).

0 0 9818/19070 0 9818/1907

.89. · " 195.Q7-11.89. · "195.Q7-11

1'9· Z-Lys (BOC) -Phe-OMe '1'9 · Z-Lys (BOC) -Phe-OMe '

25,0 g Z-Lys(BOC)-ONP und 10,7 g H-Phe-OMe, HCl in 70 ml Dimethylformamid werden unter Rühren bei Raumtemperatur mit 6,9 ml Triäthylamin versetzt -und noch l8 Stunden gerührt. Nach Verdünnen mit Essigester wird mit Xaliumcarbonatlösung Nitropnenol-frei gewaschen, mit 0,1-m. Zitronensäure und Wasser ausgeschüttelt, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Aus Essigester-Hexan kristallisiert das geschützte Dipeptid vom P. 78.-80°.25.0 g Z-Lys (BOC) -ONP and 10.7 g H-Phe-OMe, HCl in 70 ml of dimethylformamide are mixed with 6.9 ml of triethylamine while stirring at room temperature - and a further 18 hours touched. After dilution with ethyl acetate, it is washed free of nitropnenol with potassium carbonate solution, with 0.1-m. Shaken out citric acid and water, dried over sodium sulfate and evaporated to dryness in vacuo. The protected dipeptide of P. 78.-80 ° crystallizes from ethyl acetate-hexane.

Rf = 0,^5 im Dünnschiehtchromatogramm auf Silicagel im "System'Chloroform-Aceton (8:2).Rf = 0, ^ 5 in the thin layer chromatogram on silica gel im "System 'chloroform-acetone (8: 2).

2.0. Z-Lys(BOC) -Phe-NII-:2.0. Z-Lys (BOC) -Phe-NII-:

27 g des obigen Dipeptidmethylesters werden in 135 ml . viarmem Methanol gelöst, bei Raumtemperatur mit 25 ml Hydrazinhydrat versetzt und 16 Stunden stehen gelassen. Das Kristallisat v.^rird mit I35 ml V/asser versetzt, abgenutscht und gut mit Wasser gewaschen. P. 173-174° nach Umkristallisieren aus Methanol-Wasser. Rf = 0,3 im Dünnschiehtchromatogramm auf Silicagel im System Chloroform-Methanol27 g of the above dipeptide methyl ester are in 135 ml. dissolved in varm methanol, treated with 25 ml of hydrazine hydrate at room temperature and left to stand for 16 hours. The crystallizate v. ^r ird / ater was added, filtered with suction and washed well with water with I35 ml V. P. 173-174 ° after recrystallization from methanol-water. Rf = 0.3 in the thin-layer chromatogram on silica gel in the chloroform-methanol system

009818/1907009818/1907

21. Z-Lye (BOC)-Phe-His-OMo 21. Z-Lye (BOC) -Phe-His -OMo

5,4 g Z-Lys(BOC)-Phe-NH-NH in ¹JO ml Dimethylformamid v/erden bei ~ΐβ mit 6,8 ml 3,66-n. HCl in Dioxan und dann mit 1,5 ml t-Eutylnitrit versetzt. Nach 10 Minuten bei -10° bis -15 werden 3,5 ml Triäthylamin-zugegeben. ~$,6h g H-His· OMe, 2 HCl werden fest zugesetzt, anschliessend H,2 ml Tri-5.4 g Z-Lys (BOC) -Phe-NH-NH in ¹ JO ml dimethylformamide v / earth at ~ ΐβ with 6.8 ml 3.66-n. HCl in dioxane and then mixed with 1.5 ml of t-eutyl nitrite. After 10 minutes at -10 ° to -15 3.5 ml of triethylamine are added. ~ $, 6h g of H- HisOMe, 2 HCl are firmly added, then H , 2 ml of tri

- ■- ■

äthylamin zugetropft. Man lässt innert 1 Stunde auf 0 erwärmen, wobei durch Zugabe von insgesamt 0,8 ml Triethylamin ein pH von ca. 7 eingestellt wird. Nach Rühren über Nacht bei 0 wird in 250 ml Wasser gegossen und das schmierige Produkt durch Zerreiben mit Wasser pulvrig gewonnen. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel in Chloroform-." Methanol (9:1) ist Rf = 0,*,ethylamine was added dropwise. It is allowed to warm to 0 within 1 hour, a pH of approx. 7 is set by adding a total of 0.8 ml of triethylamine. After stirring over Night at 0 is poured into 250 ml of water and the greasy product obtained in powder form by trituration with water. In the thin-layer chromatogram on silica gel in chloroform. "Methanol (9: 1) is Rf = 0, *,

2.2. H-Lys(BOC)-Phe-His-OMe2.2. H-Lys (BOC) -Phe-His-OMe

. 6,8 g Z-Lys(BOC)-Phe-His-OMe in ihO ml Methanol werden in Gegenwart von 1 g !Obiger Pd-Kohle hydriert. Nach be- endigter Hydrierung wird der Katalysator abfiltriert, das Filtrat zur Trockne eingedampft und der Rückstand sofort weiterverarbeitet. " ·. 6.8 g of Z-Lys (BOC) -Phe-His-OMe in 100 ml of methanol are hydrogenated in the presence of 1 g of the above Pd-charcoal. When the hydrogenation has ended, the catalyst is filtered off, the filtrate is evaporated to dryness and the residue is immediately processed further. "·

003818/1907003818/1907

23- Z-Asn-Lys (BOC)-Phe-Hls-OMe 23- Z-Asn-Lys (BOC) -Phe-Hls-OMe

5,4 g H-Lys(BOC)-Phe-His-OMe und 4,5 g Z-Asn-ONP werden" in 20 ml Dimethylformamid 20 Stunden bei. Raumtemperatur gerührt. Durch Zugabe von Essigester wird das Peptidderivat ausgefällt, abfiltriert und mit Aether gewaschen. Nach Umkristallisieren aus Methanol schmilzt das Produkt bei 182-I83 . Im Dünnschichtchromatogramm ist Rf₁₀₀ - 0,57 (an Silicagel). [a]^° = -28° (c = 1 in Dimethylformamid).5.4 g of H-Lys (BOC) -Phe-His-OMe and 4.5 g of Z-Asn-ONP are stirred in 20 ml of dimethylformamide for 20 hours at room temperature. The peptide derivative is precipitated by addition of ethyl acetate, filtered off and . washed with ether After recrystallization from methanol the product melts at 182-I83 in the thin layer chromatography Rf is ₁₀₀ -. 0.57 (on silica gel) [a] ^ ° = -28 ° (c = 1 in dimethylformamide)..

24. Z-A sn-Ly s (BOC)-Phe-H is-NH-NH₀ 24. ZA sn-Ly s (BOC) -Phe-H is-NH-NH ₀

3,97 S Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-OMe werden in 8 ml warmem Dimethylformamid und 12 ml Methanol gelöst. Zu der noch etwa 30° warmen Lösung werden 2,5 ml Hydrazinhydrat zugesetzt-und es wird während 20 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Durch Zugabe von V/asser wird das Peptidhydrazid ausgefällt, abfiltriert und mit V/asser Hydrazin-frei gewaschen. Das Produkt wird aus Aethanol umkristallisiert, F. =200-201°. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rfji-rr. =0,5·3.97 S Z-Asn-Lys (BOC) -Phe-His-OMe are in 8 ml dissolved warm dimethylformamide and 12 ml of methanol. 2.5 ml of hydrazine hydrate are added to the solution, which is still at about 30 ° added-and it is added for 20 hours at room temperature ditched. By adding water / water, the peptide hydrazide is precipitated, filtered off and washed with water / water Washed hydrazine-free. The product is recrystallized from ethanol, mp = 200-201 °. In the thin layer chromatogram on silica gel is Rfji-rr. = 0.5

25. H-Pho-Pro-OH 25. H-Pho-Pro-OH

Z-Phe-Pro-OH wird, durch katalytische Reduktion (Pd-Kohle) in Methanol-Wasser (4:l) in das freie DipeptidZ-Phe-Pro-OH becomes, through catalytic reduction (Pd-charcoal) in methanol-water (4: 1) into the free dipeptide

00 98 18/190700 98 18/1907

übergeführt. Dieses wird nach Einengen der vom Katalysator befreiten Hydrierlösung' auf ein kleines Volumen durch Zugabe von Aceton kristallisiert erhalten, und zwar als Dipeptid-Monohydrat vom P. 125-128.convicted. This is after the concentration of the catalyst freed hydrogenation solution 'obtained crystallized to a small volume by adding acetone, and as a dipeptide monohydrate from P. 125-128.

26. Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-OH 26. Z-Thr (tBu) -Phe-Pro-OH

20,2 g Z-Thr(tBu>-OSU, 13,3 g H-Phe-Pro-OH (Moriohydrat) und 6,5^ ml Triäthylamin v/erden in 80 ml Dimethylformamid gelöst, über Nacht bei ca. 20 stehen gelassen und dann im Hochvakuum bis zur Bildung einer klebrigen Masse konzentriert. Diese wird in 50° -ml Essigester gelöst und fünfmal mit je 100 ml 5$iger Weinsäurelösung und anschliessend bis zur Neutralität mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wird zur Trockne eingeengt und der zurückbleibende feste Schaum pulverisiert und im Hochvakuum bei 40° getrocknet. Durch zweimaliges Umfallen aus Essigester-Petroläther erhält man 13,3 S amorphes, chromatographisch reines Tripeptidderivat mit unscharfem Sehmelzbereich bei ca, 75-85°· Im Dünnschichtchromatogramm auf Silicagel ist Rf₁₁₁₅/= 0,68j20.2 g of Z-Thr (tBu> -OSU, 13.3 g of H-Phe-Pro-OH (morohydrate) and 6.5 ml of triethylamine dissolved in 80 ml of dimethylformamide, stand at about 20 overnight The organic phase is concentrated to dryness and the remaining solid foam pulverized and dried under high vacuum at 40 °. to 75-85 ° · twice reprecipitation from Essigester-petroleum ether obtained 13.3 S amorphous, chromatographically pure tripeptide derivative with blurred Sehmelzbereich at ca, thin layer chromatography on silica gel, Rf is ₁₁₁₅ / = 0.68j

00 98 18/190700 98 18/1907

27' Z-Ile-Gly-OMe 27 ' Z-Ile-Gly-OMe

2,23 g Z-Ile-OH-dicyclohexylammoniumsalz werden in Essigester suspendiert und mit 0,2-m. Zitronensäure angesäuert. Die erhaltene Essigester-Lösung wird neutral gewaschen, getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in 15 ml Acetonitril gelöst, zu der Lösung werden 75O mg H-GIy-OWe, HCl zugegeben und bei 0° unter Rühren 0,Qh ml Triäthylamin. Nach 10 Minuten gibt man 1,24 g Dicyclohexylcarbodlimid zu und-rührt über Nacht bei 0°. Die Fällung wird abfiltriert und das Filtrat wird zur Trockene eingedampft, der Rückstand in 30 ^ml Essigester aufgenommen und filtriert. Die Essigesterlösung wird mit 0,2-m. Zitronensäure und gesättigter Natriumbicarbonatlösung gewaschen, getrocknet und im Vakuum auf etwa 10 ml eingeengt. Nach Zugabe von 25 ml Hexan kristallisiert das geschützte Dipeptid aus, F. 120-122°. Rf = 0,53 im System Chloroform-Methanol (95:5) im Dünnschiohtchromatogramm auf Silicagel.2.23 g of Z-Ile-OH-dicyclohexylammonium salt are suspended in ethyl acetate and treated with 0.2-m. Citric acid acidified. The ethyl acetate solution obtained is washed neutral, dried and evaporated to dryness. The residue is dissolved in 15 ml of acetonitrile, 750 mg of H-GIy-OWe, HCl are added to the solution and 0.1 ml of triethylamine is added at 0 ° with stirring. After 10 minutes, 1.24 g of dicyclohexylcarbodlimide are added and the mixture is stirred overnight at 0 °. The precipitate is filtered off and the filtrate is evaporated to dryness, the residue taken up in 30 ^m l Essigester and filtered. The ethyl acetate solution is 0.2 m. Citric acid and saturated sodium bicarbonate solution, dried and concentrated in vacuo to about 10 ml. After adding 25 ml of hexane, the protected dipeptide crystallizes out, mp 120-122 °. Rf = 0.53 in the chloroform-methanol (95: 5) system in the thin-chromatogram on silica gel.

/2a H-Ile-Gly-OMe ■/ 2a H-Ile-Gly-OMe ■

3,36 g Z-Ile-GIy-OMe werden in 100 ml Methanol und 10 ml 1-n. Salzsäure gelöst und in Gegenwart von 0,5 g Pd-Kohle (10$) hydriert. Nach Abfiltrieren des Katalysators wird das Lösungsmittel vollständig verdampft. Der erhaltene Schaum ist im Dünnschiehtchromatogramm auf Silicagel ein-3.36 g of Z-Ile-GIy-OMe are in 100 ml of methanol and 10 ml 1-n. Dissolved hydrochloric acid and in the presence of 0.5 g Pd carbon ($ 10) hydrogenated. After filtering off the catalyst the solvent is completely evaporated. The foam obtained is in the thin layer chromatogram on silica gel

' heitlichj Rf = 0,26 in Chloroform-Methanol (95*·5)·'uniform Rf = 0.26 in chloroform-methanol (95 * 5)

0 0 9 818/19070 0 9 818/1907

29· Z-Ala-Ile-Gly-OMe '29 Z-Ala-Ile-Gly-OMe '

2,39 6 des obigen Dipeptidester-hydrochlorids und 3ί?8 g Z-AIa-ONP in 4θ ml Dimethylformamid werden unter Rühren mit 1,4 ml Triäthylamin versetzt und die entstandene Suspension wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach , Verdünnen mit Essigester wird mit verdünnter Kaliumcarbonatlösung Nitrophenol-fr.ei gewaschen, anschliessend noch mit Ο,ί-m. Zitronensäure und Wasser gewaschen. Ein Teil des Tripeptidderivats bleibt während des Ausschütteins ungelöst, es wird abfiltriert. Die Essigesterlösung wird nach dem Trocknen vollständig eingedampft. Der Rückstand besteht ebenfalls aus reinem Produkt". P. 19O-I91⁰, Rf = 0,5 im Dünnschichtchromatogramm auf Silicagel im System Chloroform-Methanol (95:5).2.39 6 of the above dipeptide ester hydrochloride and 3ίί8 g of Z-Ala-ONP in 4θ ml of dimethylformamide are mixed with 1.4 ml of triethylamine while stirring and the resulting suspension is stirred overnight at room temperature. After diluting with ethyl acetate, it is washed with dilute potassium carbonate solution nitrophenol-fr.ei, then with Ο, ί-m. Citric acid and water washed. Part of the tripeptide derivative remains undissolved during the pouring out; it is filtered off. The ethyl acetate solution is completely evaporated after drying. The residue also consists of pure product ". P. 19O-191 ⁰ , Rf = 0.5 in the thin-layer chromatogram on silica gel in the chloroform-methanol system (95: 5).

30. H-AIa-Ile-GIy-OMe · - 30.H-AIa-Ile-GIy-OMe -

. 2,0 g Z-AIa-Ile-Gly-OMe v;erden in 40 ml Methanol unter j.-" sehwachem Erwärmen gelöst, dann in Gegemirart von\ -JyQQ'mg Pd-Kohle (10^) hydriert. Nach beendigter Hydrierung wird der Katalysator äbfiltriert und das Plltrat vollständig zur Trockene eingedampft. Der im Dünnschichtchrornatogramm , einheitliche Rückstand wird sofort weiterverarbeitet *. 2.0 g of Z-Ala-Ile-Gly-OMe v; ground dissolved in 40 ml of methanol with slight warming, then hydrogenated in the countermeasure of \ -JyQQ 'mg of Pd-charcoal (10 ^). When the hydrogenation is complete the catalyst is filtered off and the filtrate is completely evaporated to dryness. The residue, which is uniform in the thin-layer chromatogram, is processed further immediately *

0098 18./ 190 70098 18./ 190 7

5L. Z-Thr (tBu) -AIa-Ile -GIy-OMe .5L. Z-Thr (tBu) -AIa-Ile -GIy-OMe .

1,36 g H-A la-I le-GIy-OMe und 2,5 g: 1.36 g HA la-I le-GIy-OMe and 2.5 g:

Z-Thr(tBu)-OSU werden in 3 ml Dimethylformamid während 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Totrapeptid-Z-Thr (tBu) -OSU are in 3 ml of dimethylformamide during Stirred for 20 hours at room temperature. The totrapeptide

derivat wird durch Aether ausgefällt, abfiltriert und mitderivative is precipitated by ether, filtered off and with

« ■ - ■«■ - ■

Aether gewaschen. Nach Umkristallisieren aus Aethanol istAether washed. After recrystallization from ethanol is

F. = 229--230⁰'.- [a]^° = -A.3⁰ (c = 1 in Methanol). Rf =» 0,55 im System Chloroform-Methanol (95:5) an Silicagel.F. = 229-230 ⁰ '.- [a] ^ ° = -A.3 ⁰ (c = 1 in methanol). Rf = »0.55 in the chloroform-methanol (95: 5) system on silica gel.

32. H-Thr (tBu) -AIa-Ile-Gly-OMe 32. H-Thr (tBu) -AIa-Ile-Gly-OMe

5,66 g der obigen Carbobenzoxyνerbindung werden in '100 rnl warmem Methanol gelöst und in Gegenwart von 1 g Pd-Kohle (l0#) hydriert. Nach Abfiltrieren des Katalysators wird das Methanol im Vakuum bei-10° verdampft. Der feste Rückstand wird sofort weiterverarbeitet. Rf.= 0,2 im System Chloroform-Methanol (95:5) an Silicagel.5.66 g of the above carbobenzoxy compound are dissolved in 100 ml of warm methanol and hydrogenated in the presence of 1 g of Pd-charcoal (10 #). After filtering off the catalyst, the methanol is evaporated in vacuo at -10 °. The solid residue is processed further immediately. Rf. = 0.2 in the chloroform-methanol (95: 5) system on silica gel.

009818/1907009818/1907

; - 96 - 1956711; - 96 - 1956711

• 33 · Z-Gln-Thr (tSu) -A la -He-GIy-OMe • 33 · Z-Gln-Thr (tSu) -A la -He-GIy-OMe

4,6 g des unter 32) beschriebenen H-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe in 30 ml Dimethylformamid werden mit 3,5 g Z-GIn-ONP versetzt und bei Raumtemperatur gerührt, bis das Gemisch fest wird. Nach Stehenlassen über Nacht wird mit Aether'verdünnt, die Fällung abfiltriert und mit Aether Nitrophenol-frei gewaschen. Das geschützte Pentapeptid zeigt dm Dünnschichtchrcmatogramm auf Silicagel Rf = 0,l4 im SystenfChloroform-MethahOl (95^5)· ^F°^:> 2504.6 g of the H-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-OMe described under 32) in 30 ml of dimethylformamide are mixed with 3.5 g of Z-GIn-ONP and stirred at room temperature until the mixture solidifies. After standing overnight, it is diluted with ether, the precipitate is filtered off and washed with ether to remove nitrophenol. The protected pentapeptide shows the thin-layer chromatogram on silica gel Rf = 0.14 in the system chloroform-methoxide (95 ^ 5) · ^F ° ^: > 250

34 . H-Gln-Thr(tBu)-AIa-IIe-GIy-OMe, HCl " .34. H-Gln-Thr ( tBu) -AIa-IIe-GIy-OMe, HCl ".

l4,4 g des unter 33) beschriebenen Pentapeptidderivats werden in δθθ ml SOf^igem Methanol suspendiert und einige Zeit auf 50° erv.'ärmt. Die Suspension wird auf Raumtemperatur gekühlt, mit 20,8 ml Salzsäure und 3 g Pd-Kchle (lO^ig) versetzt und hydriert, bis die Wasserstoff aufnahme beendet und das Ausgangsmaterial in Lösung14.4 g of the pentapeptide derivative described under 33) are suspended in δθθ ml SOf ^ igem methanol and warmed to 50 ° for some time. The suspension is on Chilled room temperature, with 20.8 ml of hydrochloric acid and 3 g Pd-Kchle (10 ^ ig) added and hydrogenated until the hydrogen recording ended and the starting material in solution

gegangen ist. Nach Abfiltrieren des Katalysators wird das Filtrat im Vakuum bei 40° eingedampft und der Rückstand durch-zweimaliges Eindampfen mit Dimethylformamid im Hochvakuum entwässert. Der Rückstand wird ohne weitere Reinigung verwendet. Rf _1Qq> 0,33 im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel. .has gone. After filtering off the catalyst, the filtrate is evaporated in vacuo at 40 ° and the residue is dehydrated by evaporation twice with dimethylformamide in a high vacuum. The residue is used without further purification. Rf _1Q q> 0.33 in the thin-layer chromatogram on silica gel. .

00 98 18/190700 98 18/1907

35 . Z -Thr (tBu) -Ph ο -Pro -G1 η -Thr (tBu) -A 1 a -11 e -G Iy -OMe 35. Z -Thr (tBu) -Ph ο -Pro -G 1 η -Thr (tBu) -A 1 a -11 e -G Iy -OMe

12,0 g des unter 3²O beschriebenen Pentapeptidmethylester-hydrochlorids werden in 80 ml Dimethylformamid gelöst. Nacheinander wei'den unter Rühren bei Raumtemperatur 13j3 S Z-Thr(tBu)-Phe~Pro~OH und 5,75 g N-Hydroxysuccinimid zugegeben, dann bei 0 2,76 ml Triathylamin und 6,2 g Dieyclohexylcarbodiimid. Man rührt bei 0 , bis die Mischung dick wird, dann wird über Nacht bei 0 stehen gelassen. Nach Einengen im Hochvakuum auf ca, 50 ml wird das Produkt mit 3OO ml Aether gefällt. Das isolierte Material wird mit 0,05-m. Zitronensäure und V/asser gewaschen und im · Hochvakuum bei 40 getrocknet. Gereinigt wird durch Umkristallisieren aus ca. 1 1 Isopropanol. Man erhält l8,2 g des geschützten Octapeptidderivats. Rfo_q = 0,27 im Dünnschi chtchromatogramm auf Silicagel.12.0 g of the ^{pentapeptide methyl ester hydrochloride described under 3 2} O are dissolved in 80 ml of dimethylformamide. One after the other, while stirring at room temperature, 13/3 S Z-Thr (tBu) -Phe ~ Pro ~ OH and 5.75 g of N-hydroxysuccinimide are added, then at 0 2.76 ml of triethylamine and 6.2 g of dieyclohexylcarbodiimide. Stir at 0 until the mixture becomes thick, then let stand at 0 overnight. After concentration in a high vacuum to approx. 50 ml, the product is precipitated with 300 ml of ether. The isolated material is 0.05-m. Citric acid and water washed and dried at 40 in a high vacuum. It is purified by recrystallization from approx. 1 liter of isopropanol. 18.2 g of the protected octapeptide derivative are obtained. Rfo _q = 0.27 in the thin-layer chromatogram on silica gel.

"36.. Z-Thr(tBu) -Phe-Pro-GIn-Thr(t3u) -AIa-Ile-GIy-OH "36 .. Z-Thr (tBu) -Phe-Pro-GIn-Thr (t3u) -AIa-Ile-GIy-OH

10,9 6 ^^es unter 35) beschriebenen Octapeptidmethylesters werden in 190 ml 90/^igem Methanol unter Erwärmen auf 70 gelöst. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur werden 30 ml 1-n. Natronlauge und 10 Minuten später I60 ml Wasserin kleinen Portionen zugefügt. Dann wird klar filtriert und aus dem Filtrat das Produkt durch Eingiessen in 600 ml 0,05-n. eiskalte Salzsäure gefällt. Der Miederschlag wird10.9 6 ^ ^es under 35) described octapeptide methyl esters are dissolved in 190 ml 90% methanol while warming to 70%. After cooling to room temperature, 30 ml of 1-n. Sodium hydroxide solution and 10 minutes later 160 ml of water were added in small portions. It is then filtered clear and the product is obtained from the filtrate by pouring it into 600 ml of 0.05-n. ice-cold hydrochloric acid precipitated. The bodice will

009818/1907009818/1907

abfiltriert· und mit Wasser neutral gewaschen. Das im Dünnschicht chromatografie auf Silicagel einheitliche Produkt (Rf ₀₀ - 0,^5) kann aus Methanol-Wasser umkristallisiert v/erden.filtered off and washed neutral with water. The thin-layer chromatography in uniform on silica gel product (Rf _00-0, ^ 5) can be recrystallized from methanol-water v / ground.

37. H-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH 37. H-Thr (tBu) -Phe-Pr o- Gln-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-OH

' 3,6 g des unter 36) erhaltenen Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-ÖH werden in 100 ml 80#iger Essigsäure gelöst und die Lösung wird in Gegenwart von 0,5 g Palladiumkohle (lO^ Pd) hydriert. Nach beendeter Wasserstoffaufnahme nutscht man vom Katalysator ab und dampft die Lösung zur Trockne· ein. Das als farbloser Firn erhaltene essigsaure Salz des Octapeptidderivats wird im Hochvakuum" getrocknet. Im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel ist Rf₁₀₀ =0,21.3.6 g of the Z-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-ÖH obtained under 36) are dissolved in 100 ml of 80 # acetic acid and the solution is in the presence hydrogenated by 0.5 g of palladium carbon (10 ^ Pd). When the uptake of hydrogen has ended, the catalyst is filtered off with suction and the solution is evaporated to dryness. The acetic acid salt of the octapeptide derivative obtained as a colorless varnish is dried in a high vacuum. In the thin-layer chromatogram on silica gel, Rf ₁₀₀ = 0.21.

38. Z-Asn-Lys (BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Glri-Thr(tBu)-38. Z-Asn-Lys (BOC) -Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Glri-Thr (tBu) -

11,25 g Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-hydrazid, gelöst in11.25 g of Z-Asn-Lys (BOC) -Phe-His-hydrazide, dissolved in

65 ml ■ Dimethylformamid., werden bei -20° bis -25° in 2 Minuten mit 8,4 ml 4,2-n.-Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt. Anschliessend fügt man bei -15° bis -20^° 2,1 ml ' tert.-Butylnitrit zu und lässt 15 Minuten bei -I5 stehen. Nach Abkühlen auf -20 v/erden 4,8 ml Triethylamin zugegeben, dann eine Lösung von 9>0 S des unter 37) beschriebenen65 ml ■ dimethylformamide., At -20 ° to -25 ° in 2 minutes with 8.4 ml of 4.2 normal hydrogen chloride in dioxane offset. Then add 2.1 ml 'at -15 ° to -20 ^ ° tert-butyl nitrite and left to stand for 15 minutes at -I5. After cooling to -20 v / earth, 4.8 ml of triethylamine were added, then a solution of 9> 0 S of the one described under 37)

. 009818/1907. 009818/1907

Produktes in 210 ml cO^igem Dimethylformamid. Durch kräftige Kühlung hält man die Innentemperatur auf -15 · Im Laufe einer Stunde wird auf 0° erwärmt, wobei durch gelegentliche Zugabe von Triethylamin das pH auf 7-8 gehalten wird. Insgesamt werden noch 3*5 nil Triäthylamin zugegeben. Nach Rühren über Nacht bei 0° wird in 3 1-Aether eingegossen, die flockige Fällung, abfiltriert und zweimal mit Aether und einmal mit Wasser gewaschen. Das Rohprodukt wird in 500 ml warmem Methanol gelöst und durch Eingiessen in 1,5 1 1/^ige Essigsäure wieder ausgefällt. Das abfiltr'ierte und zweimal mit Wasser gewaschene Produkt wird nochmals auf gleiche Weise umgefällt. Rf\₀₀ = O/33 (auf Silicagelplatten). Product in 210 ml of CO2 dimethylformamide. The internal temperature is kept at -15 by vigorous cooling. In the course of an hour, the mixture is warmed to 0 °, the pH being kept at 7-8 by the occasional addition of triethylamine. A total of 3 * 5 nil triethylamine are added. After stirring overnight at 0 °, it is poured into 3 liters of ether, and the flaky precipitate is filtered off and washed twice with ether and once with water. The crude product is dissolved in 500 ml of warm methanol and reprecipitated by pouring it into 1.5 liters of acetic acid. The product filtered off and washed twice with water is reprecipitated again in the same way. Rf \ ₀₀ = O / 33 (on silica gel plates).

39. H-Asn-Lys(EOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tDu)-AIa -I le -G Iy -OH 39. H-Asn-Lys (EOC) -Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tDu) -Ala -I le -G Iy -OH

Ij7 g des obigen geschützten Dodekapeptids werden in 100 ml Eo^iger Essigsäure gelöst und in Gegenwart von 0,5 g Palladiumkohle ,(1C^ Pd) wie üblich hydriert. Nach Ab-.filtrieren vom Katalysator wird im Hochvakuum bei 30 stark eingeengt und der Rückstand mit"tort. Butanol lyophilisiert. Das in quantitativer Ausbeute erhaltene, im Dünnschichtchroir.atogramm (R^-I₀₀ =0,1 auf Silicagel) einheitliche Produkt wird sofort weiterverarbeitet.17 g of the above protected dodecapeptide are dissolved in 100 ml of aqueous acetic acid and hydrogenated as usual in the presence of 0.5 g of palladium-carbon (1C ^ Pd). After the catalyst has been filtered off, it is concentrated strongly in a high vacuum at 30 and the residue is lyophilized with tort. Butanol. The _{product, which is obtained in quantitative yield and is uniform in the thin-layer chromatogram (R ^ -I 00} = 0.1 on silica gel), is processed immediately.

• 0 0 9 8 18/1907• 0 0 9 8 18/1907

-loo- ■ .-loo- ■.

>4O. · Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-ThI^tBu)-GIn-ASp(OtBu)-PhG-ASn- ' Lys(BOe)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-> 4O. Z-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -ThI ^ tBu) -GIn-ASp (OtBu) -PhG-ASn- ' Lys (BOe) -Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) -Ala-

I le-G Iy-OH .I le-G Iy-OH.

1^73 ß des unter i8 beschriebenen Peptidderivats werden bei $0 in 10 ml Dimethylformamid gelöst. Nach Abkühlen auf -20° werden 0,9 ml 4,2-n. Chlorwasserstoff in Dioxan zugetropfU 'Dann gibt man bei -15° 0,22 ml tert. Butylnitrit zu und lässt 15 Minuten bei -15° reagieren. Nun kühlt man wieder auf -20°-ab und lässt 0,53 ml Triäthylamin und dann eine Lösung von 1,6 g des unter 39) beschriebenen Peptidderiyats in 40 ml 90#igern Dimethylformamid zutropfen. Man erhöht die Temperatur innerhalb 1 Stunde auf 0 , wobei durch portionenweise Zugabe von \ Triäthylamin das pH auf 7-8 gehalten wird. Insgesamt werden 0,25 rnl Triäthylamin zugegeben. Nach v/eiteren 15 Stunden Rühren bei 0° wird das Produkt durch Eingiessen in Aether gefällt, die Fällung abfiltriert und mit Aether und .'V/asser gewaschen. Zur Reinigung wird einmal aus Dimethylformamid-Essigester und einmal aus Dimethylformamid -0,02 n. Salzsäure umgefällt. Das reine Material zeigt im Dünhschichtchromatogramm auf Silicagel1 ^ 73 p of the peptide derivative described under 18 are dissolved in 10 ml of dimethylformamide at $ 0. After cooling to -20 °, 0.9 ml of 4.2-n. Hydrogen chloride in dioxane is added dropwise 'Then 0.22 ml of tert is added at -15 °. Butyl nitrite and allowed to react for 15 minutes at -15 °. It is then cooled again to -20 ° and 0.53 ml of triethylamine and then a solution of 1.6 g of the peptide derivative described under 39) in 40 ml of 90% dimethylformamide are added dropwise. The temperature is increased to 0 within 1 hour, the pH being kept at 7-8 by adding triethylamine in portions. A total of 0.25 ml of triethylamine is added. After stirring for a further 15 hours at 0 °, the product is precipitated by pouring it into ether, the precipitate is filtered off and washed with ether and water. For purification, it is reprecipitated once from dimethylformamide / ethyl acetate and once from dimethylformamide -0.02 normal hydrochloric acid. The pure material shows in the thin-layer chromatogram on silica gel

0 0 9818/19070 0 9818/1907

2,28 g H-Pro-NHg und 7,57 g Z-AIa-ONP werden in 20 ml Dimethylformamid gelöst und die gelbe Lösung wird l8 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Dann wird im Hochvakuum zur Trockne eingedampft, der Rückstand mit Aether versetzt und das entstehende Pulver gründlich zerrieben. Nach Abnutsehen und Trocknen werden 5,5 g Z-Ala-Pro-NH₂ von-F. Ιβ7,5-ΐβ8,5° erhalten. [σ]^° = 74° (c = 1 in Methanol). ·'2.28 g of H-Pro-NHg and 7.57 g of Z-Ala-ONP are dissolved in 20 ml of dimethylformamide and the yellow solution is left to stand for 18 hours at room temperature. It is then evaporated to dryness in a high vacuum, ether is added to the residue and the resulting powder is thoroughly triturated. After removal and drying, 5.5 g of Z-Ala-Pro-NH ₂ von-F. Ιβ7.5-ΐβ8.5 ° obtained. [σ] ^ ° = 74 ° (c = 1 in methanol). · '

42. Z-Gly-Ala-Pro-NHg ·42. Z-Gly-Ala-Pro-NHg

27j 1 g des obigen Dipeptidderivats werden in 425 ml Aethanol gelöst und nach Zugabe von 85 ml 1,0-τη. wässeriger Salzsäure in Gegenwart von'4,25 g Palladium-Kohle (lO# Pd) hydriert. Nach beendeter Hydrierung wird die Lösung bei 40-50 Badtemperatur im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird bei 40° in 40 ml Dimethylformamid gelöst und die Lösung auf 20° abgekühlt. Sodann werden 29,1 g Z-GIy-ONP zugegeben und nach Lösen innerhalb 45 Minuten 11,2 ml absolutes Triäthylamin unter Rühren zugetropft. Danach wird während 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Suspension wird bei 40° und 0,01 Torr eingedampft und der Rückstand zwischen 600 ml Wasser und 3OO ml Aether verteilt. Die wässerige Schicht wird zweimal mit je 3OO ml27j 1 g of the above dipeptide derivative are in 425 ml Dissolved ethanol and after adding 85 ml of 1,0-τη. waterier Hydrochloric acid in the presence of 4.25 g palladium-carbon (10 # Pd) hydrogenated. When the hydrogenation is complete, the solution is evaporated in vacuo at a bath temperature of 40-50. The residue is dissolved in 40 ml of dimethylformamide at 40 ° and the solution is cooled to 20 °. Then 29.1 g of Z-GIy-ONP added and after dissolving 11.2 ml within 45 minutes absolute triethylamine was added dropwise with stirring. The mixture is then stirred for 20 hours at room temperature. the The suspension is evaporated at 40 ° and 0.01 torr and the residue is between 600 ml of water and 3OO ml of ether distributed. The aqueous layer is added twice with 3OO ml each time

009818/1907009818/1907

Aether und die Aether-Schlcht zweimal mit je 3ÖO ml Wasser extrahiert. Die wässerigen Fraktionen v/erden gemeinsam im Vakuum bei 40-50 eingedampft und mehrmals durch Zugabe von Chloroform und Eindampfen von V/asser befreit. Der gut getrocknete Rückstand wird bei 40-5O⁰. in 5OO ml Essigester aufgenommen, unlösliches Triäthylamin-hydrochlorid abfiltriert und das Filtrat bei 30-40° mit 10 ml Aether versetzt, v/orauf Kristallisation eintritt. Nach ca. 20-s'tündigem Stehen bei +5 bis +10° werden die Kristalle isoliert, gewaschen und getrocknet. F.: 105-106°. Das Produkt enthält 3# Triäthylamin-hydrochlorid. Es kann in dieser Form weiter umgesetzt werden. Zur Reinigung werden 5,0 g des obigen Rohkristallisats in 10 ml Wasser gelöst und nach Zugabe von 20 ml Methylenchlorid mit I5 ml gesättigter Kaliumearbonatlösung versetzt. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit 10 ml gesättigter Kaliumcarbonatlösung extrahiert, die wasserige Schicht wird mit 15 ml Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten Methylenchloridlösungen werden mittels wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird aus 50 ml Essigester kristallisiert. Man .erhält 4.,ή· g Tripeptidderivat, F. 109-112°. Nach Kristallisation aus Acetori-Methanol-Aether (lö:4:6) werden Kristalle vomAether and the Aether-Schlcht extracted twice with 30 ml of water each time. The aqueous fractions are evaporated together in vacuo at 40-50 and freed from water several times by adding chloroform and evaporation. The well-dried residue is at 40-5O ⁰ . taken up in 500 ml of ethyl acetate, insoluble triethylamine hydrochloride was filtered off and the filtrate was treated with 10 ml of ether at 30-40 ° before crystallization occurred. After about 20 hours of standing at +5 to + 10 °, the crystals are isolated, washed and dried. F .: 105-106 °. The product contains 3 # triethylamine hydrochloride. It can be implemented further in this form. For purification, 5.0 g of the above crude crystals are dissolved in 10 ml of water and, after the addition of 20 ml of methylene chloride, 15 ml of saturated potassium carbonate solution are added. The organic layer is separated, extracted with 10 ml of saturated potassium carbonate solution, the aqueous layer is extracted with 15 ml of methylene chloride. The combined methylene chloride solutions are dried using anhydrous sodium sulfate and evaporated. The residue is crystallized from 50 ml of ethyl acetate. You get 4., ή · g tripeptide derivative, mp 109-112 °. After crystallization from Acetori-methanol-ether (Lö: 4: 6) crystals are from

009313/1907009313/1907

P. l^;l'1,5-1^5,5° erhalten (Kristallpolymorphie). Ια]ρ⁰= -93° (c = 1,0 in Methanol) Bei der DünnschichtchromatoGraphie auf 'Silicagel in Chloroform ι- Methanol (8:2) ist Rf = 0,38. P. l ^; l'1.5-1 ^ 5.5 ° preserved (crystal polymorphism). Ια] ρ ⁰ = -93 ° (c = 1.0 in methanol) In thin-layer chromatography on silica gel in chloroform ι- methanol (8: 2), Rf = 0.38.

•43. H-G Iy-A la-Pro-• 43. H-G Iy-A la-Pro-

l8,8 g .des unter ^2) erhaltenen rohen Tripeptidamidderivates werden in *IOO ml Dimethylformamid gelöst und in Gegenwart von 1,0 g Palladium-Kehle (l0£> Pd) hydriert. Nach beendeter Hydrierung wird filtriert und die Lösung nach- kurzem Entgasen in der nächsten Stufe eingesetzt.18.8 g of the crude tripeptide amide derivative obtained under ^ 2) are dissolved in * IOO ml of dimethylformamide and in the presence of 1.0 g of palladium throat (10 £> Pd) hydrogenated. After the hydrogenation has ended, it is filtered and the solution after a short degassing used in the next stage.

H. Z-VaI-G Iy-Ala-Pro-H. Z-VaI-G Iy-Ala-Pro-

Zu der unter Ό) erhaltenen Lösung des Tripeptide, amids (55Ο ml) gibt man 20,1 g Z-Val-p-Nitropher.ylester und lässt das Gemisch während l8 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Danach wird bei 5Ο-6Ο⁰ und 0,01 Torr zur Trockne eingedampft, der Rückstand mit 3QO ml Aether verrieben und filtriert. Der Filterrückstand wird getrocknet und in 210 ml absolutem Aethanol während 15 Minuten bei 7O_r8O° gerührt, auf 0° gekühlt und filtriert. Der Rückstand wird aus einem Gemisch von 170 ml absolutem Tetrahydrofuran, 25 ml Wasser und 110 ml Aether kristallisiert. P. = 209-211°. Rf-Wert auf Silicagelplatten = 0,42 in Chloroform-Methanol (8:2). ' . . ν20.1 g of Z-Val-p-Nitropher.ylester are added to the tripeptide amide solution (55Ο ml) obtained under Ό) and the mixture is left to stand for 18 hours at room temperature. It is then evaporated to dryness at 5Ο-6Ο ⁰ and 0.01 torr, the residue is triturated with 300 ml of ether and filtered. The filter residue is dried and stirred in 210 ml of absolute ethanol for 15 minutes at 7O _r 8O °, cooled to 0 ° and filtered. The residue is crystallized from a mixture of 170 ml of absolute tetrahydrofuran, 25 ml of water and 110 ml of ether. P. = 209-211 °. Rf on silica gel plates = 0.42 in chloroform-methanol (8: 2). '. . ν

.009818/1907.009818 / 1907

H-Val-Gly-Ala-Pro-NHgH-Val-Gly-Ala-Pro-NHg

1,1 β Z-Val-Gly-Ala-Pro-NHg werden in 50 ml 80#igem1.1 β Z-Val-Gly-Ala-Pro-NHg are in 50 ml of 80 # igem

Methanol gelöst und die Lösung wird in Gegenwart von 0,3 g Palladium-Kohle (lQj£ Pd) hydriert. Nach Beendigung der Wasserstoffaufnähme wird vom Katalysator abgenutscht, die Lösung eingedampft und der Rückstand im Hochvakuum bei 35 Badtemperatur getrocknet. Dabei wird das Tetrapeptid H-Val-Gly-Ala-Pro-NHp als farblose Substanz erhalten, Rf-Wert =0,20 (Silicagelplatten, System Chloroform-Methanol 1:1). -Dissolved methanol and the solution is hydrogenated in the presence of 0.3 g of palladium-carbon (lQj £ Pd). After completion of the hydrogen absorption, the solution is filtered off from the catalyst, evaporated and the residue under high vacuum at a bath temperature of 35 dried. The tetrapeptide H-Val-Gly-Ala-Pro-NHp is obtained as a colorless substance, Rf value = 0.20 (silica gel plates, system chloroform-methanol 1: 1). -

4;6. Z-Thr (tBu) -Tyr(tBu) -Thr(tBu) -G In-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-AIa- ^: He-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ 4; 6. Z-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -G In-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) -AIa- ^: He-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂

800 mg des unter 40) beschriebenen Peptidderivats, 500 mg H-VaI-GIy-AIa-PrO-IiH₂ und 170 mg N-Hydroxysuccinimid v/erden in 10 ml Dimethylformamid gelöst, im Hochvakuum800 mg of the peptide derivative described under 40), 500 mg of H-VaI-GIy-Ala-PrO-IiH ₂ and 170 mg of N-hydroxysuccinimide dissolved in 10 ml of dimethylformamide, in a high vacuum

auf etwa die Hälfte eingeengt und mit 250 mg Dicyclohexylcarbodiimld versetzt. Nach Rühren über Nacht bei Raumtemperatur wird mit Aether ausgefällt und das Material isoliert. Gereinigt wird,durch Craig-Verteilung im Gemisch Methanol-Puffer ( wie in Beispiel l)-Chloroform-Tetrachlorkohlenstoff (10:3:5;6) ,K = 0,29- Das aus der Verteilung isolierte reine Produkt zeigt im Diinnschichtchrcniatogranini Rf _n„ - 0,62 (auf Silicagclplatten).concentrated to about half and mixed with 250 mg of dicyclohexylcarbodiimld. After stirring overnight at room temperature, it is precipitated with ether and the material is isolated. It is purified by Craig distribution in a methanol-buffer mixture ( as in Example 1) -chloroform-carbon tetrachloride (10: 3: 5; 6), K = 0.29- The pure product isolated from the distribution shows Rf _{n in the thin-layer chromatography} - 0.62 (on silica gel plates).

009818/1907009818/1907

H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-GIn-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC) -Phe-His-ThrCtBu)-Phe-Pro-Gln-ThrCtBu) -AIa-XIe-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ H-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -GIn-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-His-ThrCtBu) -Phe-Pro-Gln-ThrCtBu) -AIa -XIe-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂

' 300 mg des obigen Peptidderivats v.'erden in 30 ml300 mg of the above peptide derivative v.'erden in 30 ml

Essigsäure gelöst und in Gegenwart von 100 mg Palladiumkohle (lOj£ PdJ hydriert. Nach vollständiger Decarbobenzoxylierung wird der Katalysator abfiltriert, das Piltrat im Hochvakuum bei 3O⁰ stark eingeengt und der Rückstand aus tert. Butanol lyophilisiert. Der Rückstand wird in 10 ml.Methanol "gelöst, durch Zugabe von 1-n.-Natriumbicarbonat schwach alkalisch gemacht und durch Eintropfen in 0,1-n. Natriumcarbonat ausgefällt. Das isolierte Produkt, wird nochmals gleich umgefällt. Im Dünnschiehtchromatogramm auf Silicagel istAcetic acid and hydrogenated in the presence of 100 mg palladium on carbon (loj £ PDJ. After complete decarbobenzoxylating the catalyst is filtered off, the Piltrat under high vacuum at 3O ⁰ heavily concentrated and the residue crystallized from tert. Butanol lyophilized. The residue is dissolved in 10 ml.Methanol " dissolved, made weakly alkaline by adding 1N sodium bicarbonate and precipitated by dripping into 0.1N sodium carbonate. The isolated product is again immediately reprecipitated

48. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Nva-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-GIn-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-AIa-IIe-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ 48. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Nva-Leu-Gly-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -GIn-Asp (OtBu ) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) -AIa-IIe-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂

23 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Nva-Leu-GIy-OH, 35 mg H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-GIn-23 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Nva-Leu-GIy-OH, 35 mg H-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -GIn-

0Q9818/19Q70Q9818 / 19Q7

Asp (OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-His-Phe-Thr (tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH₂, 7 mg N-Hydroxysuccinimid, 8 mg Dicyclohexylearbodiimid und 0,5 ml Dimethylformamid werden 4 Stunden bei 45° gerührt. Dann ' gibt man 15 ml Aether zu und nutseht die feine Fällung ab. Zur Reinigung verteilt man das Rohprodukt multiplikativAsp (OtBu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -His-Phe-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH ₂ , 7 mg of N-hydroxysuccinimide, 8 mg of dicyclohexylearbodiimide and 0.5 ml of dimethylformamide are stirred at 45 ° for 4 hours. Then 15 ml of ether are added and the fine precipitate is removed. For purification, the crude product is distributed multiplicatively

\ über 35 Stufen im Lösungsmittelsystem Methanol-Puffer- \ over 35 stages in the solvent system methanol buffer

\ Chloroform-Tetrachlorkohlenstoff (11:3^6:7; Puffer wie in \ Chloroform carbon tetrachloride (11: 3 ^ 6: 7; buffer as in

fc ' ■ - ' -■■"■" ;fc '■ -' - ■■ "■";

^ψ Beispiel I)." ^ψ Example I). "

Beispiel 5Example 5

\ ^r —ι \ ^r - ι

H-CysxGly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Abu-Leu-Gly-Thr-Tyr -Thr -GIn-A sp -Phe -A sn -Ly s -Phe -Hi s -Thr-Phe -Pro -GIn-Thr -A la -I le -GIy-H-CysxGly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Abu-Leu-Gly-Thr-Tyr -Thr -GIn-A sp -Phe -A sn -Ly s -Phe -Hi s -Thr-Phe -Pro -GIn-Thr -A la -I le -GIy-

VaI-GIy-Ala-Pro-NHg (Abu -CaIcitonin M) . ■ Man trägt 1,8 g fein pulverisiertesVaI-GIy-Ala-Pro-NHg (Abu -Calitonin M). ■ One carries 1.8 g of finely powdered

BOC -Cys -Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Abu -Leu -GIy-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -GIn-Asp (OtBu) -Phe -A sn-Lys (BOC) Phe-His-Thr(tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly- , Ala-Pro-NHp in 50 ml eiskalte, konzentrierte Salzsäure ein, rührt .10 "Minuten bei 0°, fügt dann 300 ml eiskalte, lO^ige Essigsäure zu und filtriert über eine Säule von Merck-Ionenaustauscher Nr. II,-Acetatform. Dann dampft man dieBOC -Cys -Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Abu -Leu -GIy-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -GIn-Asp (OtBu) - Phe -A sn-Lys (BOC) Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly- , Ala-Pro-NHp in 50 ml ice-cold, concentrated hydrochloric acid, stir for 10 "minutes at 0 °, then add 300 ml of ice-cold, 10 ^ strength acetic acid and filter through a column of Merck ion exchanger No. II, acetate form. Then the

009818/1907009818/1907

Lösung am Rotationsverdampfer bei 40° Badtemperatur unter Zusatz von n-Octanol ein, wäscht den Eindampfrückstand zur Entfernung von n-Octanol mit Petroläther, trocknet bei 40°, löst in-Wasser und lyophilisiert. Man erhält das •Dotriacontapeptidamid als fast farbloses, leichtes Pulver. Das Ausgangsmaterial stellt man wie folgt dar:Solution on a rotary evaporator at 40 ° bath temperature below Addition of n-octanol washes the evaporation residue to remove n-octanol with petroleum ether, dries at 40 °, dissolves in water and lyophilized. You get that • Dotriacontapeptide amide as an almost colorless, light powder. The starting material is represented as follows:

2,0 g BOC-Cys^Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Abu-Leu-GIy-OH, 3,2 g H-Thr(tBu)-Tyr(tEu)-Thr(tBu)-Gln-Asp-(OtEu) -Phe-Asn-Lys(BOC) -Phe-Kis-Thr(tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr(tBu) ■ Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg und 500 mg N-Hydroxysuccinimid werden mit 35 ml Dimethylformamid versetzt. Dann fügt man unter Rühren eine Lösung von 600 mg Dicyclohexylcarbodiimld in 5 ml Dimethylformamid zu und rührt weitere 4 Stunden bei 45°. Hierauf kühlt man auf 0° ab und trägt die Reaktionsmasse in 600 ml Aether ein. Man lässt 3 Stunden bei 0° stehen, nutscht dann ab und trocknet das Rohprodukt im Vakuum bei 35°. Zur Reinigung versetzt man es mit Methanol, filtriert in etwas Dieyclohexylharnstoff ab und chromatographiert an einer in Methanol bereiteten Säule von Sephadex LH-20 (4,8 cm; 120 cm). Man fängt Fraktionen a 20 ml auf, dampft zur Trockne ein und evaluiert die Reinheit der Fraktionen durch Dünnschichtchromatographie auf Silicageipiaccen im System 52A und 100. Die reinen2.0 g BOC-Cys ^ Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Abu-Leu-GIy-OH, 3.2 g H-Thr (tBu) -Tyr (tEu) -Thr (tBu) -Gln-Asp- (OtEu) -Phe-Asn-Lys (BOC) -Phe-Kis-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) ■ Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg and 500 mg of N-hydroxysuccinimide 35 ml of dimethylformamide are added. then a solution of 600 mg of dicyclohexylcarbodiimld is added with stirring in 5 ml of dimethylformamide and stirs more 4 hours at 45 °. It is then cooled to 0 ° and the reaction mass is introduced into 600 ml of ether. Leave for 3 hours stand at 0 °, then sucks off and dries the crude product in a vacuum at 35 °. To clean it, it is mixed with methanol and filtered off in a little Dieyclohexylurea and chromatographed on a column prepared in methanol of Sephadex LH-20 (4.8 cm; 120 cm). Fractions of 20 ml are collected, evaporated to dryness and evaluated Purity of the fractions by thin layer chromatography on silica gelatin in system 52A and 100. The pure

009818/1907009818/1907

Fraktionen werden vereinigt.Fractions are merged.

Das als Ausgangsmaterial verwendete Dekapeptidderivat wird z.B. wie folgt dargestellt: ^ Man kondensiert Z-¹AbU-OH nach der gemischten Anhydridmethode (gemischtes Anhydrid mit Pivaloylchlorid) mit H-Leu-Gly-OMe, hydriert das nach Chromatographie an Silicagel gereinigte Tripeptidderivat Z-Abu-Leu-Gly-OMe zu .H-Abu-Leu-GIy-OMe und verfährt dann analog wie für H-Met-Leu-GIy-OMe in der Schweizer Anmeldung Ges. Nr. 15147/68 (Case 6548/1-4) in Beispiel 1 unter 9) bis l8) beschrieben.The decapeptide derivative used as the starting material is represented as follows, for example: Z- ¹ AbU-OH is condensed using the mixed anhydride method (mixed anhydride with pivaloyl chloride) with H-Leu-Gly-OMe, the tripeptide derivative Z-Abu, which has been purified after chromatography on silica gel, is hydrogenated -Leu-Gly-OMe to .H-Abu-Leu-GIy-OMe and then proceeds analogously as for H-Met-Leu-GIy-OMe in the Swiss application Ges. No. 15147/68 (Case 6548 / 1-4 ) described in example 1 under 9) to l8).

Beispiel 6Example 6

H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Gly-Thr-Gln-A sp-Phe-A sn-GIy-Phe-Hi s-Thr-Phe-Pro-GIn-Thr-AIa-11e-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ (GIy¹²'¹ - Calcitonin M).H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Gly-Thr-Gln-A sp-Phe-A sn-GIy-Phe-Hi s-Thr-Phe-Pro -GIn-Thr-AIa-11e-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂ (GIy ¹² ' ¹ - calcitonin M).

Man löst 500 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Met-Leu-Gly-Thr(tBu)-Gly-Thr(tBu)-GIn-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Gly-Phe-His.-Thr (tBu) -Phe-Pro-G In-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Äla-Pro-NHpin 7 ml eiskalter, 95^iger Trifluoressigsäure, erwärmt auf 3O⁰ und lässt 1 Stunde stehen. Dann giesst manDissolve 500 mg of BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Met-Leu-Gly-Thr (tBu) -Gly-Thr (tBu) -GIn-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Gly-Phe-His.-Thr (tBu) -Phe-Pro-G In-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Äla-Pro-NHpin 7 ml ice cold, 95 ^ iger trifluoroacetic acid, warmed to 3O ⁰ and left to stand for 1 hour. Then you pour

0098 18/ 19070098 18/1907

in 1 Liter eiskalten Aether und nutseht den feinen Niederschlag ab. Zur Ueberführung in das essigsaure Salz löst man das Trifluoracetat des Dotriacontapeptidamids in lO^iger Essigsäure und filtriert über eine Säule von Merck-Ionenaustauscher Nr. II (Acetatform). Man lyophilisiert das Eluat. .in 1 liter of ice-cold ether and remove the fine precipitate away. Dissolve to transfer it into the acetic acid salt one the trifluoroacetate of Dotriacontapeptidamids in 10 ^ iger Acetic acid and filtered through a column of Merck ion exchangers No. II (acetate form). The eluate is lyophilized. .

Das Ausgangsmaterial erhält man, indem man 620 mg des in der Schweizer Anmeldung Ges. Nr. 15147/68 (Case 6548/1-4) beschriebenen DekapeptidderivatesThe starting material is obtained by adding 620 mg of the in Swiss application Ges. No. 15147/68 (Case 6548 / 1-4) described decapeptide derivatives

BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu) -Thr(tBu) -Cys-Met-Leu-GIy, 1130 mg H-Thr(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Gly-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-VaI-GIy-Ala-Pro-NHp I6O mg N-Hydroxysuccinimide 20 ml Dimethylformamid und 320 mg Dicyclohexylcarbodiimid 4 Stunden unter intensivem Rühren auf 45 erwärmt. Dann giesst man in 350 ml peroxydfreien Aether, nutscht den feinen Niederschlag ab und trocknet ihn bei 35 · Man reinigt durch Gegenstromverteilung im Lösungsmittelsystem Methanol-Puffer-Chloroform-Tetrachlorkohlenstoff (l0:3:.5:4; Puffer: wie in Beispiel l). - ' BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys-Met-Leu-GIy, 1130 mg H-Thr (tBu) -Gly-Thr (tBu) -Gln-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Gly-Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln-Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-VaI-GIy-Ala-Pro-NHp 160 mg N-hydroxysuccinimide 20 ml dimethylformamide and 320 mg of dicyclohexylcarbodiimide heated to 45 for 4 hours with vigorous stirring. Then it is poured into 350 ml of peroxide-free ether, the fine precipitate is filtered off with suction and dried at 35. It is purified by countercurrent distribution in the solvent system methanol-buffer-chloroform-carbon tetrachloride (10: 3: .5: 4; buffer: as in example 1) . - '

Das als Ausgangsmaterial verwendete geschützte Diglycyl-Docosapeptidamid (II-32) stellt man in analoger Weise dar wie für das entsprechende geschützte Docosapeptidamid (11-32) in der oben genannten Schweizer Anmeldung Ges.Nr. 15147/68 (Case 6548/1-4) im Beispiel 1 unter ll) bis.The protected one used as the starting material Diglycyl-docosapeptide amide (II-32) is prepared in an analogous manner Way as for the corresponding protected docosapeptide amide (11-32) in the above-mentioned Swiss application Ges.Nr. 15147/68 (Case 6548 / 1-4) in example 1 under ll) to.

009818/1907009818/1907

t *t *

- 110 -- 110 -

1212th

56) beschrieben, indem man an Stelle "des Tyrosin - und56) by replacing "the tyrosine - and

ι ftι ft

Lysin -derivates die entsprechenden Glycinderivate verwendet, Lysine derivative uses the corresponding glycine derivatives,

0 0 9818/Τ9Ό70 0 9818 / Τ9Ό7

Claims (1)

-¹¹¹ - " 19507Λ1- ¹¹¹ - "19507-1 PatentansprücheClaims 1. Verf^{aliretl zur} Herstellung neuer Peptide, dadurch gekennzeichnet, dass man Dotriacontapeptide der Formel I1. Verf ^{aliretl for the} production of new peptides, characterized in that one Dotriacontapeptide of the formula I. Il 23 4 5 6 71 9 9 10 11 12 13 1*1Il 23 4 5 6 71 9 9 10 11 12 13 1 * 1 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-GlnH-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gin-Thr-Ala-Ile-GIy-15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gin-Thr-Ala-Ile-GIy- 29 30 31 32
Val-Gly-Ala-Pro-NH , t 29 30 31 32
Val-Gly-Ala-Pro-NH, t worin mindestens eine und höchstens 16 der Aminosäuren in den Stellungen 2, 8, 10,11,1^13, l4, 16, iS, 21, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 30 und 31 durch andere natürliche α-Aminosäuren oder deren Homologe ersetzt sind, ihre Dimeren und Derivate der monomeren oder dimeren Peptide sowie Säureadditionssalze und Komplexe der genannten mono- oder dimeren Peptide oder ihrer Derivate nach an sich bekannten Methoden herstellt*. wherein at least one and at most 16 of the amino acids in the positions 2, 8, 10,11,1 ^ 13, l4, 16, iS, 21, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 30 and 31 are replaced by other natural α-amino acids or their homologues, their dimers and Derivatives of the monomeric or dimeric peptides and acid addition salts and complexes of said mono- or dimeric peptides or their derivatives according to methods known per se *. 2» Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Verbindungen der Formel I2 »Method according to claim 1, characterized in that that the compounds of formula I ! 2 '3 4 5 6 ij 8 9 10 11 12 13 i4! 2 '3 4 5 6 ij 8 9 10 11 12 13 i4 . H-Cys-Gly-Asn-Leur-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-. H-Cys-Gly-Asn-Leur-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln- 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly- 29 30 31 32
VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂, ' I29 30 31 32
VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂ , 'I worin mindestens eine und höchstens 16 der Aminosäuren inwherein at least one and at most 16 of the amino acids in 009818/1907009818/1907 den Stellungen 2, 8, 10,11,12,13* l4, 1υ, 16, 21/ 23, · 24, 25, 26, 27, 29, 30 und 31 durch andere natürliche a-Äminosäuren oder deren Homologe ersetzt sind, ihre Dirneren und Derivate der monomeren oder dimeren Peptide sowie Säureadditionssalze und Komplexe der genannten mono- oder · dimeren Peptide oder ihrer Derivate dadurch herstellt, dass man ^: positions 2, 8, 10,11,12,13 * l4, 1υ, 16, 21/23, 24, 25, 26, 27, 29, 30 and 31 have been replaced by other natural α-amino acids or their homologues, Their dirneres and derivatives of the monomeric or dimeric peptides and acid addition salts and complexes of the mono- or dimeric peptides mentioned or their derivatives are prepared by ^: (1) aus Verbindungen der Formel I .(1) from compounds of formula I. l| 2 5 T 5 6 ^ .8 9 10 11 12 13l | 2 5 T 5 6 ^. 8 9 10 11 12 13 H»Cys-Gly-Asn-Leu■-Ser-Thr.-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-T^H »Cys-Gly-Asn-Leu ■ -Ser-Thr.-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-T ^ 15 16 17 l8 19 20 21 22 23 2k 2$ 26. 2715 16 17 l8 19 20 21 22 23 2k 2 $ 26. 27 Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-Mis^Thr-Phe-Prö-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-Mis ^ Thr-Phe-Prö-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly- 29 30 31 32 '29 30 31 32 ' VaI-Ö Iy-AIa-PrO-MHg, I. " 'VaI-Ö Iy-AIa-PrO-MHg, I. "' worin mindestens eine und höchstens 16'der Aminosäuren in den Stellungen 2, 8, 10^1*12^13, l4, I6i l8, 21, 23, 24, 25» 26, 27., 29, 30 und 31 durch andere natürliche ct-Aminösäuren oder deren Homologe ersetzt sind, oder entspreöhenden Dimeren oder Derivaten dieser Peptide, in Vielehen Verbindungen mindestens eine Aminogruppe oder eine Carboxylgruppe durch eine abspaltbare Schutzgruppe geschützt isfe, die Schutzgruppe"(n) abspaltet oderin which at least one and at most 16 'of the amino acids in the positions 2, 8, 10 ^ 1 * 12 ^ 13, 14, 16, 18, 21, 23, 24, 25 »26, 27, 29, 30 and 31 by other natural ct-amino acids or their homologues have been replaced, or corresponding dimers or derivatives of these peptides, in many compounds at least one amino group or one carboxyl group is protected by a removable protective group, the protective group (s) or 0 0 9 8 18/19070 0 9 8 18/1907 (2) Verbindungen der Formel-II ·(2) Compounds of the formula II 1 2 3 4 5.6 7 89 IO" 11 12 . 131 2 3 4 5.6 7 89 IO "11 12. 13 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met^Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met ^ Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr- l4 15 16 17 l8 19 20 21 22 23 24 25 26 27l4 15 16 17 l8 19 20 21 22 23 24 25 26 27 Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile- 28 29 30 31 32
GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ II ,28 29 30 31 32
GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂ II, worin mindestens eine und höchstens l6 der Aminosäuren in den Stellungen 2, 8, 10*, 11,32,13, 14, l6, l8, 21, 23, 24, 25,.26, 27> 29, 30 und 31 durch andere natürliche α-Amino säuren oder deren Homologe ersetzt sind,oder die genannten Derivate, worin die Mercaptogruppen frei oder durch die Tritylgruppe geschützt sind, zu Disulfiden oxydiert oderwherein at least one and at most 16 of the amino acids in the positions 2, 8, 10 *, 11, 32, 13, 14, 16, 18, 21, 23, 24, 25, .26, 27> 29, 30 and 31 by others natural α-amino acids or their homologues have been replaced, or the derivatives mentioned, in which the mercapto groups are free or protected by the trityl group, are oxidized to disulfides or (3) Verbindungen der Formel III oder IV -(3) Compounds of the formula III or IV - CHCH R-CH-CO-Y-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-OH R-CH-CO-Y-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-AR-CH-CO-Y-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-OH R-CH-CO-Y-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-A in iv ■■"'■·in iv ■■ "'■ · worin Y für Glycyl oder L-Seryl steht, A 1 bis 21 der aufwherein Y stands for glycyl or L-seryl, A 1 to 21 of the 7
Cystein folgenden Aminosäurereste und R.Wasserstoff oder eine acylierte Aminogruppe darstellt, mit der restlichen amidierten C-terminalen Sequenz des Peptids mit gegebenenfalls geschützter Seitenkettenaminogruppe nach in der Peptidsynthese bekannten Methoden kondensiert und, wenn erwünscht, die erhaltenen Verbindungen in ihre Derivate und/oder Säureadditionssalze oder Komplexe überführt.7th
Cysteine represents the following amino acid residues and R. hydrogen or an acylated amino group, condensed with the remaining amidated C-terminal sequence of the peptide with optionally protected side chain amino group according to methods known in peptide synthesis and, if desired, the compounds obtained into their derivatives and / or acid addition salts or Complex transferred. 009819/1907009819/1907 1§507111§50711 3. Verfahren nach einem.der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass man Verbindungen der Formel I, worin mindestens eine und höchstens 16 der Aminosäuren 2, 8, 10, 11, 12> 13, 14, 16, l8, 21, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 30 oder JyL durch in den entsprechenden Stellungen des Schweine-Thyroealcitonins vorhandene Aminosäuren ersetzt sind, oder Derivate oder Säureadditionssalze oder Komplexe dieser Verbindungen herstellt.3. The method according to one.der claims 1 or 2, characterized in that compounds of the formula I in which at least one and at most 16 of the amino acids 2, 8, 10, 11, 12> 13, 14, 16, 18, 21, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 30 or JyL are replaced by amino acids present in the corresponding positions of the porcine thyroealcitonin, or derivatives or acid addition salts or complexes of these compounds are produced. 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Dotriacontapeptid der Formel I4. The method according to any one of claims 1 or 2, characterized in that a Dotriacontapeptide of the formula I H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-.ßln-Thr-Ala-Ile-Gly-I Val-Gly-Ala-Pro-OH worin X für den Valin-, Norvalin-, Leucin-, Isoleucin-, Norleucin- oder a-Aminobuttersäurerest steht oder Derivate oder Säureadditionssälze oder Komplexe dieser Verbindungen herstellt.H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-.ßln -Thr-Ala-Ile-Gly-I Val-Gly-Ala-Pro-OH where X stands for the valine, norvaline, Leucine, isoleucine, norleucine or α-aminobutyric acid residue or prepares derivatives or acid addition salts or complexes of these compounds. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4 zur Herstellung neuer Peptide nach den in der Beschreibung _λ hervorgehobenen Verfahren. .5. The method according to any one of claims 1-4 for the production of new peptides according to the method highlighted _{in the description λ.} . 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-5, ^dadurch gekennzeichnet, dass man von ^erbindungen ausgeht, in welchen die Carboxylgruppen durch die terfc.- Butylestergruppe geschützt6. The method according to any one of claims 1-5, ^ thereby marked that one starts out from ties, in which the carboxyl groups through the terfc.- butyl ester group protected 7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-6, dadurch gekennzeichnet, dass man von Verbindungen ausgeht, in welchen· die Aminogruppen durch die tert.-Butyloxycarbonylgruppe geschützt sind.7. The method according to any one of claims 1-6, characterized in that one starts from compounds in which · the amino groups through the tert-butyloxycarbonyl group are protected. 8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1*7* dadurch8. The method according to any one of claims 1 * 7 * thereby " I"I. gekennzeichnet, dass man von Verbindungen ausgeht, in ^N welchen die Hydroxylgruppen in den Seitenketten durch die tert.-BuJtyläthergruppe geschützt sind.in that one starts from compounds, ^N in which the hydroxyl groups are protected in the side chains by tert-BuJtyläthergruppe. 9. Verfahren zur Hersteilung neuer Peptide wie in den schematischen Darstellungen gezeigt oder in den Beispielen beschrieben.9. Process for producing new peptides such as shown in the schematic representations or in the Examples described. 10. Peptide der^ Formel I10. Peptides of the formula I. • -• - 1 23456 78 9 10 11 12 131 23456 78 9 10 11 12 13 H-Cys-Oly-Asn-Leu-Ser^Thr-Gys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-H-Cys-Oly-Asn-Leu-Ser ^ Thr-Gys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln- 15 16 17 l8 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Asp-Phe^Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-15 16 17 l8 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Asp-Phe ^ Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly- 29 3O¹ 31 32 ,29 3O ¹ 31 32, VaI-GIy-Ala-Pro-ΝΗ_δ $ ' . ϊVaI-GIy-Ala-Pro-ΝΗ _δ $ ' . ϊ worin mindestens eine und höchstens l6 der Aminosäuren in den Stellungen 2, 8, 10,11,1^13* 14, 16, ΐ8_Λ 21, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 30 und 31 durch andere natürliche α-Aminosäuren oder deren Homologe ersetzt sinä_# ihre Dimeren und Derivate der mono« oder alitieren Peptide sowie Säureadditionssalze und Komplexe der genannten mono»- oder dimeren Peptide oder Ihrer Derivate«wherein at least one and at most 16 of the amino acids in the positions 2, 8, 10,11,1 ^ 13 * 14, 16, ΐ8 _Λ 21, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 30 and 31 by other natural α replaced amino acids or their homologs sinä _# their dimers and derivatives of the mono "or aluminizing peptides and acid addition salts and complexes of these mono" - or dimeric peptides or your derivatives " 009818/190?009818/190? . 11". . Peptide der Formel I wie in Anspruch 10, worin'min ■' destens eine und höchstens ΐβ der Aminosäuren 2, 8,10,11,12,1-3,-1 16, l8', 21, 23, 2h, 25, 26, 27, 29, 30 oder 31 durch in den entsprechenden Stellungen des-Schweine-Thyrocalcitonins vorhandene Aminosäuren ersetzt sind und Derivate sowie Säureadditionssalze und Komplexe dieser* Verbindungen.. 11 ".. Peptides of the formula I as in claim 10, wherein'min ■ 'at least one and at most ΐβ of the amino acids 2, 8,10,11,12,1-3, -1 16, 18', 21, 23, 2h, 25, 26, 27, 29, 30 or 31 are replaced by amino acids present in the corresponding positions of porcine thyrocalcitonin and derivatives as well as acid addition salts and complexes of these * compounds. 12. Dotriacontapeptidamide der Formel12. Dotriacontapeptide amides of the formula H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-VaI-GIy-AIa-PrO-NH₂ . ' . 'H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln- Thr-Ala-Ile-Gly-VaI-GIy-AIa-PrO-NH ₂ . '. ' worin X für den Valin-, Norvalin-, Leucin-, Isoleucin-^ Norleucin oder a-Aminobuttersäureres,t steht und Derivatewhere X for the valine, norvaline, leucine, isoleucine ^ Norleucine or a-aminobutyric acid, t stands and derivatives sowie Säureadditionssalze und Komplexe dieser Verbindungen. 13, Das Dotriacontapeptidamid der Formelas well as acid addition salts and complexes of these compounds. 13, The dotriacontapeptide amide of the formula H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nle-Leu-Gly-Thr-rTyr-Thr-GIn-A sp-Phe-A sn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr -Ala-Ile-H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nle-Leu-Gly-Thr-rTyr-Thr-GIn-A sp-Phe-A sn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr -Ala-Ile- Gly-Val-GIy-Ala-Pro-NHg · "Gly-Val-GIy-Ala-Pro-NHg " und seine Säureadditionssalze und Komplexe.and its acid addition salts and complexes. 14. Das Dotriacontapeptidamid der Formel14. The dotriacontapeptide amide of the formula - -.r——-—— —-——ι. . ■■-■'.- -.r ——-—— —-—— ι. . ■■ - ■ '. H-Cys-GIy-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-GIy-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Prö-Gln-Thr-Ala-Ile- GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-Ml₂ H-Cys-GIy-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-GIy-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Prö-Gln- Thr-Ala-Ile-GIy-VaI-GIy-AIa-PrO-Ml ₂ und' seine Säureadditionssalze und Komplexe.and 'its acid addition salts and complexes. 0 0 9818/19070 0 9818/1907 15. I^-Acyl-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-15. I ^ -Acyl-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu- G Iy-Thr-Tyr-Thr-G In-Asp-Phe-A sn-Ly s-Phe-Hi s-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala^ G Iy-Thr-Tyr-Thr-G In-Asp-Phe-A sn-Ly s-Phe-Hi s-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala ^ PrO-NIi₂ . ·PrO-NIi ₂ . · worin X für den Valin-, Norvalin-, Leucin-, Isoleucin-, Norleucin- oder a-Aminobuttersäurerest steht und ihre Derivate, Säureadditionssalze und Komplexe.where X stands for the valine, norvaline, leucine, isoleucine, Norleucine or α-aminobutyric acid radical and their derivatives, acid addition salts and complexes. 16. Das Dotriacontapeptid der Formel .16. The dotriacontapeptide of formula. lj 2 3 4 5 6 789 10 11 12 13 lh lj 2 3 4 5 6 789 10 11 12 13 lh H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Gly-Thr-öln-H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Gly-Thr-oil- 15 16 17 l8 19 20 21 22 23 2h 25 26- 27 28 Asp-Phe-Asn-Gly-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-29 30 31 3215 16 17 18 19 20 21 22 23 2h 25 26-27 28 Asp-Phe-Asn-Gly-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-29 30 31 32 VaI-GIy-A Ia-PrO-NH₂ ' ■". 'VaI-GIy-A Ia-PrO-NH ₂ '■ ".' und seine Derivate, Säureadditionssalze und Komplexe.and its derivatives, acid addition salts and complexes. 17. Die in den Beispielen beschriebenen Peptide.17. The peptides described in the examples. l8. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr-(tBu)-Cys-X-l8. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr- (tBu) -Cys-X- Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gin-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys<BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH_g worin X für den Valin-, Norvalin-, Leucin-, IsOleucin-, Norleucin- oder a-Aminobuttersäurerest steht. . ...Leu-Gly-Thr (tBu) -Tyr (tBu) -Thr (tBu) -Gin-Asp (OtBu) -Phe-Asn-Lys <BOC) -Phe-His-Thr (tBu) -Phe-Pro-Gln- Thr (tBu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH _g where X stands for the valine, norvaline, leucine, isoleucine, norleucine or α-aminobutyric acid residue. . ... 009813/1307009813/1307 19· BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-L·eu-01y-19 · BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-L · eu-01y- Thr-Tyr-Thr-Gin-Asp(OtBu)-Phe-Ash-Lys(BOC)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala^le-Gly-Val-GIy-Ala-Pro-NH₂ Thr-Tyr-Thr-Gin-Asp (OtBu) -Phe-Ash-Lys (BOC) -Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala ^ le-Gly-Val-GIy-Ala-Pro- NH ₂ worin X für den Valin-, Norvalin-, Leucin-, Isoleucin-, Norleucin- oder a-Aminobuttersäurerest steht.wherein X stands for the valine, norvaline, leucine, isoleucine, norleucine or α-aminobutyric acid residue. 20. BQC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-20. BQC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) -Cys- X-Leu-Gly-OH ■ "X-Leu-Gly-OH ■ " v/orin X für den Valin-, Norvalin-, Leucin-, Isoleucin-* Norleucin- oder a-Aminobuttersäurerest steht. ·v / orin X for the valine, norvaline, leucine, isoleucine * Norleucine or α-aminobutyric acid residue. · ι ιι ι BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-OHBOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-OH worin X für den Valin-, Norvalin-, Leucin-, Isoleucin-, Norleucin- oder a-Aminobuttersäurerest steht.where X stands for the valine, norvaline, leucine, isoleucine, Norleucine or α-aminobutyric acid residue. H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-OHH-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-OH worin X für den Valin-, Norvalin-, Leucin- Isoleucin-, Norleucin- oder a-Aminobuttersäurerest steht, und seine Derivate, in Vielehen die Amino-, und/oder Carboxylgruppe und/oder Hydroxylgruppen geschützt sind.where X stands for valine, norvaline, leucine isoleucine, Norleucine or α-aminobutyric acid residue, and its derivatives, the amino and / or carboxyl group in many ways and / or hydroxyl groups are protected. 23. H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-OH worin X -für den.Valin-,'Norvalin-, Leucin-, Isoleucin-, Norleucin- oder a-Aminobuttersäurerest steht, und seine Derivate, in welchen die Amino- und/oder Carboxylgruppe und/oder Mercaptogruppen und/oder Hydroxylgruppen geschützt sind. 0 098^8/190723. H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-OH where X -for den.valine-, 'norvaline-, leucine-, isoleucine-, Norleucine or a-aminobutyric acid residue, and its derivatives, in which the amino and / or carboxyl group and / or mercapto groups and / or hydroxyl groups are protected. 0 098 ^ 8/1907 24. ^. 30C-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-24. ^. 30C-Cys (TRI) -Gly-Asn-Leu-Ser (tBu) -Thr (tBu) - Cys (TRI) -X-Leu -GIy-OHCys (TRI) -X-Leu -GIy-OH ■·.-.-■ worin X für den Valin-, Norvalin-/ Leucin-, Isoleucin-,■ ·.-.- ■ where X stands for valine, norvaline / leucine, isoleucine, Norleucin- oder a-Aminobtittersäurerest steht»Norleucine or a-aminobtitter acid residue is » •25. Komplexe von Peptiden gemäss den Ansprüchen 10-17 mit Zinkphosphat, Zinkpyrophosphat und/oder Zinkhydroxyd.• 25. Complexes of peptides according to claims 10-17 with zinc phosphate, zinc pyrophosphate and / or zinc hydroxide. 26. Komplexe von Peptiden gemäss den Ansprüchen 10-17 mit Gelatine, Polyphloretinphosphat oder Polyglutaminsäure.26. Complexes of peptides according to claims 10-17 with gelatin, polyphloretin phosphate or polyglutamic acid. 27. ■ Pharmazeutische Präparate enthaltend Verbindungen gemäss den Ansprüchen IO-17, 25 oder 26V27. ■ Pharmaceutical preparations containing compounds according to claims IO-17, 25 or 26V 00 9818/190700 9818/1907