DE1919837B2 - Leupeptine, deren Salze und Verfahren zu ihrer Herstellung - Google Patents
Leupeptine, deren Salze und Verfahren zu ihrer HerstellungInfo
- Publication number
- DE1919837B2 DE1919837B2 DE1919837A DE1919837A DE1919837B2 DE 1919837 B2 DE1919837 B2 DE 1919837B2 DE 1919837 A DE1919837 A DE 1919837A DE 1919837 A DE1919837 A DE 1919837A DE 1919837 B2 DE1919837 B2 DE 1919837B2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- leupeptins
- leupeptin
- acid
- methanol
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- BMGMINKVTPDDRZ-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-n-[1-[[5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]-4-methylpentanamide;n-[1-[[5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]-4-methyl-2-(propanoylamino)pentanamide Chemical compound CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N.CCC(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N BMGMINKVTPDDRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 64
- 108010011078 Leupeptins Proteins 0.000 title description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 84
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 20
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 19
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 18
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 11
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 9
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 241000933146 Streptomyces roseus Species 0.000 description 7
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 6
- -1 Type A) Substances 0.000 description 6
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 6
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- 229940075930 picrate Drugs 0.000 description 6
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M picrate anion Chemical compound [O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 6
- GDBQQVLCIARPGH-BSOSBYQFSA-N (2s)-2-acetamido-n-[(2s)-1-[[5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]-4-methylpentanamide Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-BSOSBYQFSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 4
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 4
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 4
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 4
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 4
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 4
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 4
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 3
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FKMJXALNHKIDOD-LBPRGKRZSA-N TAMe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)OC)NS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 FKMJXALNHKIDOD-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N Tranexamic acid Chemical compound NCC1CCC(C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 3
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical class OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 229940108519 trasylol Drugs 0.000 description 3
- BFUKWVVFVGUARP-ULQDDVLXSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]-4-methyl-2-(propanoylamino)pentanamide Chemical compound CCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N BFUKWVVFVGUARP-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KNIUHBNRWZGIQQ-UHFFFAOYSA-N 7-diethoxyphosphinothioyloxy-4-methylchromen-2-one Chemical compound CC1=CC(=O)OC2=CC(OP(=S)(OCC)OCC)=CC=C21 KNIUHBNRWZGIQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 2
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 2
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 2
- IUPWNLFIRQEDJV-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Pr-LL Natural products CCCCC(NC(=O)CC)C(=O)NC(CCCC)C(=O)NC(CCCNC(=N)N)C=O IUPWNLFIRQEDJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- BFUKWVVFVGUARP-UHFFFAOYSA-N N-propionyl-L-leucyl-L-leucyl-DL-argininal Natural products CCC(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N BFUKWVVFVGUARP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 2
- OQQYPQNFLLAILR-UHFFFAOYSA-N [n'-[4-[[2-[(2-acetamido-4-methylpentanoyl)amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentyl]carbamimidoyl]azanium;chloride Chemical compound Cl.CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N OQQYPQNFLLAILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O HORQAOAYAYGIBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZFMOKQJFYMBGY-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-TEMPO Chemical compound CC1(C)CC(O)CC(C)(C)N1[O] UZFMOKQJFYMBGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 102000010631 Kininogens Human genes 0.000 description 1
- 108010077861 Kininogens Proteins 0.000 description 1
- 102000002397 Kinins Human genes 0.000 description 1
- 108010093008 Kinins Proteins 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- IYHLXDNAMYSWRL-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Ac-LL Natural products CCCCC(NC(=O)C)C(=O)NC(CCCC)C(=O)NC(CCCNC(=N)N)C=O IYHLXDNAMYSWRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000946849 Streptomyces noboritoensis Species 0.000 description 1
- 241000933143 Streptomyces thioluteus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxy-2-propan-2-ylsulfonylethanimidamide Chemical compound CC(C)S(=O)(=O)CC(N)=NO LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N n-butyl methyl ketone Natural products CCCCC(C)=O QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Substances OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- SSOLNOMRVKKSON-UHFFFAOYSA-N proguanil Chemical compound CC(C)\N=C(/N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 SSOLNOMRVKKSON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- ZVUUCUFDAHKLKT-UHFFFAOYSA-M sodium;2,4,6-trinitrophenolate Chemical compound [Na+].[O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O ZVUUCUFDAHKLKT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
- C07K5/06043—Leu-amino acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/8139—Cysteine protease (E.C. 3.4.22) inhibitors, e.g. cystatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
CH3
und
R3 die Substituenten CH3 — oder CH3 — CH2 —
bedeuten, "=?wie deren Säureadditionssalze.
2. Verfahren zur Herstellung der Leupeptine nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet,
daß einer der folgenden Streptomyces-Stämme: Streptcmyces roseus MA839-A1 (NIHJ
MC-9-42), Streptomyces roseus MB 262-M1 (NIHJ
MC-11-42) oder Streptomyces roseochromagenes MA 943-M1 (NIHJ MC-10-42), in einen? Medium
gezüchtet wird, das ein stickstoffhaltiges und kohlenstoffhaltiges Nährmittel enthält.
Die Erfindung betrifft Leupeptine der allgemeinen Formel
CHO
.NH
R3 — CO — NH — CH — CO — NH — CH — CO — NH — CH — (CH2), — NH — C '
(L)
NH5
worin R, und R2 den Substituenten
— CH, — CH :
CH3
CH1
und R3 die Substituenten CH3 — oder CH3 — CH2 —
bedeuten, sowie deren Säureadditionssalze.
Diese Verbindungen sind wertvolle Arzneistoffe.
Wie aus der allgemeinen Formel hervorgeht, sind die beanspruchten Leupeptine Acetyl-L-leucyl-L-leucyl-DL-argininal,
Propionyl-L-leucyl-L-leucyl-DL-argininal.
Die Erfindung umfaßt die therapeutisch geeigneten Substanzen sowie ihre Säureadditionssalze Leupeptine
eignen sich zur Inhibierung von enzymatischen Reaktionen von Trypsin, Papain, Kallikrein, Plasmin und
Thrombokinase sowie zur Inhibierung einer Fibrinolyse, einer Kininbildung aus Kininogen sowie einer
Blutkoagulierung. Leupeptine besitzen eine niedrige Toxizität und zeigen eine therapeutische Wirkung auf
eine durch Karragenin erzeugte Entzündung in Ratten. Sie eignen sich zur Behandlung von Pankreatitis und
Entzündungskrankheiten, insbesondere zur Behandlung von Entziindungskrankheiten der Haut, beispielsweise
Verbrennungen.
Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung
der vorgenannten Leupeptine, das dadurch gekennzeichnet ist, daß Streptomyces roseus MA
839-Al (NIHJ MC-9-42), Streptomyces roseus MB 262-M1 (NIHJ MC-Il-42) oder Streptomyces roseochromagenes
MA 943-M1 (NIHJ MC-10-42) in einem Medium gezüchtet wird, das stickstoffhaltiges und
kohlenstoffhaltiges Nährmittel enthält, und daß die entstandenen Leupeptine von der Nährbrühe abgetrennt
werden.
Die Züchtung wird submers unter aeroben Bedingungen so lange durchgeführt, bis eine merkliche Menge
des Leupeptins oder an Leupeptinen in der Lösung angereichert ist.
Wie die vorstehende allgemeine Formel zeigt, existieren zwei Gruppen von Leupeptinen, die danach
unterschieden werden, ob eine Acetyl- oder eine Propionylgruppe vorliegt. Im folgenden werden Leupeptine
mit einer Acetylgruppe als »Leupeptin Ac« und
Leupeptine mit einer Propionylgruppe als »Leupepiin
Pr« bezeichnet. Acetyl- oder Propionyl-L-leucyl-L-leucyl-DL-argininal
v/ird als Leupeptin Ac-ll bzw. Pr-Li. abgekürzt.
Die Erfindung ist nachstehend in Verbindung mit den Zeichnungen näher beschrieben. Es zeigt:
F i g. 1 das IR-Absorptionsspektrum von gereinigtem Leupeptin-Pr-LL-Hydrochlorid (KBr-Preßlinge)
und
F i g. 2 das IR-Absorptionsspektrum von gereinigtem Leupeptin-Aou.-Hydrochlorid (KBr-Preßlinge). Es hat sich gezeigt, daß Leupeptine von vielen Stämmen verschiedener Spezies von Streptomyces erzeugt werden. Zehn Stämme, von denen sichergestellt ist, daß sie Leupeptine erzeugen, sind nachstehend genannt: Streptomyces roseus, (2 Stämme; die Labornummern des Institute of Microbial Chemistry sind MA 839-Al, MB 2(32-Ml), Streptomyces roseochromogenes (3 Stämme, MA 943-M1, MB 456-AEl MB
F i g. 2 das IR-Absorptionsspektrum von gereinigtem Leupeptin-Aou.-Hydrochlorid (KBr-Preßlinge). Es hat sich gezeigt, daß Leupeptine von vielen Stämmen verschiedener Spezies von Streptomyces erzeugt werden. Zehn Stämme, von denen sichergestellt ist, daß sie Leupeptine erzeugen, sind nachstehend genannt: Streptomyces roseus, (2 Stämme; die Labornummern des Institute of Microbial Chemistry sind MA 839-Al, MB 2(32-Ml), Streptomyces roseochromogenes (3 Stämme, MA 943-M1, MB 456-AEl MB
26O-A2), Streptomyces charireusis (1 Stamm, MB 58-
IAQl), Streptomycesalbirsticuli (1 Stamm, MB26-A1)
Streptomyces thioluteus (1 Stamm, MB 321-Al), Streptomyces
lavendulao (1 Stamm, MB172-A2) und Streptomyces noboritoensis (1 Stamm, MB46-AG).
Die Eigenschaften dieser Spezies werden in »The Actinomycetes«, Band II (von S. A. W a k s m a n
The Williams & Wilkins Company, 1961) beschrieben. Darüber hinaus wurden andere, Leupeptine erzeugende
Stämme festgestellt, die in mehr als 11 Spezies eingeteilt werden müssen. Das Leupeptin-Erzeugungsvermögen
ist unter Streptomyces weit verbreitet. Unter Anwendung der erfindungsgemäßen Methoden zum
Testen der Aktivität sowie des Herstellungsvermögens ist es einfach, Stamm? von Streptomyces aufzufinden,
die sich zur Herstellung von Leupeptinen in Kulturen und natürlichen Quellen eignen.
Eine Gärungsbrühe, die Leupeptine enthält, wird in der Weise hergestellt, daß Sporen oder Myzeln von
Leupeptin erzeugenden Organismen auf ein geeignetes Medium aufgeimpft werden, worauf anschließend
unter aeroben Bedingungen gezüchtet wird. Die Temperatur kann innerhalb des breiten Bereiches von 23 bis
37° C schwanken, wobei innerhalb dieses Temperaturbereiches der Organismus wachsen kann. Temperaturen
von 27 bis 35° C werden jedoch bevorzugt. Bei dem submersen aeroben Züchten der Organismen zur
Herstellung von Leupeptinen enthält das Medium a's Kohlenstoffquelle ein im Handel erhältliches Glyceridöl
oder ein Kohlehydrat, wie beispielsweise Stärke, Glykose, Glyzerin, Maltose, Dextrin, Rohrzucker,
Laktose od. dgl., und zwar in reiner Form oder in Rohform, während als Stickstoffquelle ein anorganisches
Material eingesetzt wird, beispielsweise Pepton, Kaseinhydrolysat, Kasein, Hefeextrakt, Fleischextrakt,
Sojabohnenmehl, Erdnußmehl, Aminosäuren od. dgl. Gegebenenfalls können auch anorganische Stickstoffquellen
verwendet werden. Wenn auch Leupeptine in einem Medium erzeugt werden, welches diese stickstoffhaltigen
Materialien enthält, so werden dennoch Pepton und Kaseinhydrolysat vorzugsweise als Stickstoffquellen
zur Herstellung von Leupeptinen verwendet. Biosynthetische Untersuchungen ergeben, daß der
Leucin-, Isoleucin-, Valin- und Guanidin-Anteil von Arginin zur Herstellung von Leupeptinen verbraucht
wird. Daher sind ein Hydrolysat von Protein, wie beispielsweise Pepton, N-Z-Amin (Sheffield Chemical,
Typ A), Kaseinhydrolysat und Hefehydrolysat Stickstoffquellen, die sich zur Erzeugung von Leupeptinen
eignen.
Leupeptine sind bei neutralem und saurem pH stabil, jedoch relativ instabil bei alkalischem pH. Daher
ist es zweckmäßig, den pH der Kulturbrühe nicht oberhalb 7,5 während der Gärung zu halten. Wird ein Medium,
das 1,0% Glukose, 1,0% Stärke, 2,0% Pepton und 0,5% NaCl enthält, mit einem Leupeptin erzeugenden
Mikroorganismus beimpft und bei 27° C unter Schütteln gezüchtet, dann wird der pH während
einer Zeitspanne von 24 Stunden, 48 Stunden, 72 Stunden und 96 Stunden auf 6.0. 6,5, 7,5 bzw. 8,0 gehalten.
Es werden bereits nach 24 Stunden Leupeptine erzeugt. Die maximale Ausbeute wird während einer
Zeitspanne von 48 his 72 Stunden erhalten und nimmt danach ab. Die Dünnschichtchromatographie unter
Verwendung von Kieselsäure der Kulturfiltraie zeigt einige Ninhydrin-positive Flecken, wobei unler diese
Flecken diejenigen Flecken fallen, welche Leucin entsnrechen. Diese Flecken werden bis zum Verstreichen
einer Zeitspanne von 48 bis 72 Stunden beobachtet und verschwinden anschließend. Dies ist ein wertvoller Hinweis
auf die maximale Herstellungsperiode von Leupeptinen während der Gärung.
In einem Medium, das organische Materialien, wie beispielsweise Pepton, Kaseinhydrolysat od. dgl. enthält,
werden im allgemeinen verschiedene Leupeptine gleichzeitig erzeugt. Jedoch werden Myzeln Leupeptin
erzeugender Organismen bei einem Züchten in einem
ίο synthetischen Medium erzeugt, die Leucin, Leupeptin,
Pr-LL und Ac-ll enthalten.
Die Methode zum Testen der Antiplasminwirkung wird wie folgt durchgeführt: Die Mischung, welche
aus 0,5 ml einer Euglobulinlösung, die aus menschlichem Serum nach der von K 1 i η e (J. Biol. Chem.
204, 949, 1953) und N ο r m a η (J. Exptl. Med. 106, 423, 1957) beschriebenen Methode hergestellt wird,
0,4 ml eines 1/50 n-Phosphatpuffers (PBS) mit einem pH von 7,2 in einer physiologischen Kochsalzlösung,
die ein Testmaterial enthält, und 0,1 ml einer Streptokonase-Lösung (200 Einheiten/0,1 ml PBS) besteht,
wird bei 37° C 3 Minuten lang inkubiert, worauf 2,0 ml einer Fibrinogen-Lösung (2,0% in PBS) zugesetzt werden.
Dann wird 20 Minuten lang bei 37°C inkubiert.
Nach der Inkubation werden 1,5 ml einer 3,5 m-Perchlorsäure zugesetzt, worauf die Mischung bei Zimmertemperatur
während einer Zeitspanne von 1 Stunde stehengelassen wird. Dann wird zentrifugiert und die
Extinktion der überstehenden Flüssigkeit bei 280 ΐημ
bestimmt. Der Prozentsatz der Inhibierung wird in folgender Weise berechnet: (a—b)/b · 100, worin α die
Extinktion mit Leupeptin ist und b die Extinktion ohne Leupeptin darstellt.
Leupeptine sind bei neutralen und sauren pH-Werten stabil. Bei einem Erhitzen in einer 0,1 n-HCl-Lösung bei 95 bis 100° C während einer Zeitspanne von 30 Minuten erfolgt keine Zersetzung. Eine vollständige Zersetzung tritt allerdings dann auf, wenn 30 Minuten lang bei einer Temperatur von 95 bis 1000C in einer 0,ln-NaOH-I.ösung erhitzt wird. Werden Leupeptine in wäßrigen Lösungen mit einem pH von 9,0 bei 60° C während einer Zeitspanne von 30 Minuten behandelt, dann tritt mehr als eine 50 %ige Zersetzung auf. Daher ist es zweckmäßig, das Material während der Extraktion mit einem neutralen oder sauren Medium zu behandeln.
Leupeptine sind bei neutralen und sauren pH-Werten stabil. Bei einem Erhitzen in einer 0,1 n-HCl-Lösung bei 95 bis 100° C während einer Zeitspanne von 30 Minuten erfolgt keine Zersetzung. Eine vollständige Zersetzung tritt allerdings dann auf, wenn 30 Minuten lang bei einer Temperatur von 95 bis 1000C in einer 0,ln-NaOH-I.ösung erhitzt wird. Werden Leupeptine in wäßrigen Lösungen mit einem pH von 9,0 bei 60° C während einer Zeitspanne von 30 Minuten behandelt, dann tritt mehr als eine 50 %ige Zersetzung auf. Daher ist es zweckmäßig, das Material während der Extraktion mit einem neutralen oder sauren Medium zu behandeln.
In der Kulturbrühe Leupeptin erzeugender Stämme liegen die Leupeptine hauptsächlich in dem flüssigen
Teil vor Leupeptine sind stabil genug, um einer Verdampfung
der Brühe durch Destillation unter Vakuum zu widerstehen. Aus einer derartig konzentrierten
Lösung können Leupeptine durch Zugabe eines Lösungsmittels, in welchem Leupeptine praktisch unlöslich
sind, ausgefällt werden, Ein derartiges Lösungsmittel muß außerdem mit Wasser mischbar sein.
Beispielsweise sei Aceton erwähnt.
Allerdings ist ein Adsorptionsverfahren zur Extraktion von Leupeptin aus der Kuiturbrühe vorzuziehen.
Als Adsorptionsmittel können Aktivkohle, lonenaus-
fio lauscherharze, Aluminiiimoxyd, Kieselsäure od. dgl.
verwendet werden. Diese Materialien adsorbieren Leupeptine, wobei die Leupeptine erneut eluiert werden
können. Beispielsweise werden Leupepline an einer Aktivkohle adsorbiert und mit angesäuertem Wasser,
angesäuertem Methanol, einem angesäuerten wäßrigen Methanol oder einem angesäuerten wäßrigen Äthanol
eluiert. Wird eine schnelle Eluierung gewünscht, dann ist das saure Lösungsmittel zweckmäßiger als das
S 6
neutrale Lösungsmittel. Ein Anionenaustauscherharz dampft wird. Dabei werden gereinigte Mischungen der
ist ein geeigneteres Adsorptionsmittel zur Extraktion Hydrochloride von Leupeptinen erhalten.
von Leupeptinen. Ein poröses, schwachsaures Harz, Das am meisten gereinigte Leupeptin-Pr-Hydro-
beispielsweise Lewatit-CNP® (Farbenfabriken Bayer chlorid, das hauptsächlich Leupeptin-Pr-LL enthält,
AG) ist vorzuziehen. Das Kationenaustauscherharz 5 wie sich durch die Aminosäureanalyse ergibt (Leucin
kann in der H-, NH4-, Na- und Li-Form sowie in 1,00, Isoleucin 0,10 und Valin 0), besitzt folgende Eigen-
Mischungen aus diesen Formen verwendet werden. schäften: Weißes Pulver, das zwischen 110 und 14O0C
Wird ein Kationenaustauscherharz hi der Η-Form ver- schmilzt, [*]? — 56° (c = 1, Methanol), pKa' mehr
wendet, dann werden die adsorbierten Leupeptine lang- als 12.
sam mit verdünnter Salzsäure oder mittels eines io Analyse:
50 %igen wäßrigen Acetons eluiert. Jedoch ist ein saures CHON HCl-HO
organisches Lösungsmittel, beispielsweise eine 0,5n- "Berechnet .. C 502,95, H 8,76, O 16,16,
HCl in einem 50%igen wäßrigen Aceton oder eine N 16 98 Cl 7 16·
0,5n-HCl in einem 50-bis 80°/oigen wäßrigen Methanol gefunden ... C 51,'l3,' H 8,77,O 14,96,
für die Eluierung geeigneter. 15 N 1710* Cl 5 73
Zur weiteren Reinigung eignet sich eine Aktivkohle- ' '
Chromatographie, beispielsweise eine Adsorption der Es wird keine charakteristische UV-Absorption fest-
Leupeptine aus derwäßrigen Lösung und eineEluierung gestellt. Das IR-Spektrum zeigt eine Absorption, wel-
unter Verwendung von saurem wäßrigen Methanol. ehe Aldehyd entspricht (1720 bis 1730 cm"1), und
Eine Aluminiumoxyd-Chromatographie kann ebenfalls 20 starke Amidbenden (1650, 1540 cm-1). Das NMR-
für Reinigungszwecke verwendet werden. Die Alumi- Spektrum (100 MHz) in (CD3)8SO zeigt das Vorliegen
niumoxyd-Chromatographie wird mit Methanol, Ätha- einer N-Propionylgruppe in dem Molekül, und zwar
nol, Chloroform/Methanol, Äthylacetat/Methanol od. an Hand von Peaks bei δ 1,00 (Triplett, 3H) und bei
dgl. entwickelt. Werden Leupeptine in Methanol, Ätha- δ 2,12 (Quartett, 2 H).
nol oder in den Mischungen dieser Lösungsmittel mit 25 Das am meisten gereinigte Leupeptin-Ac-Hydro-
Wasser gelöst, dann durchlaufen die Leupeptine die chlorid, das hauptsächlich Leupeptin-Ac-LL enthält,
Aluminiumoxydsäule. Dieses Verfahren eignei sich wie .sich an Hand einer Aminosäureanalysc ergibt
zur Abtrennung von Leupeptinen von gefärbten Ver- (Leucin 1,00, Isoleucin 0,04 und Valin 0,01), besitzt
unreinigungen. Eine lonenaustausch-Chromatographie folgende Eigenschaften: Weißes Pulver, das bei 75 bis
eignet sich ebenfalls zur Reinigung von Leupeptinen, 30 110°C schmilzt, («]5— 52° (c = 1, Methanol), pKa'
beispielsweise läßt sich ein Kationenaustauscherharz mehr als 12.
in der gemischten H- und Na-Form verwenden, wobei l die Leupeptine mit 0,1 bis 0,2 n-HCl eluiert werden.
Eine Kieselsäure-Säulenchromatographie ist ebenfalls
zur Reinigung von Leupeptinen geeignet. Bei- 35 spielsweise werden Leupeptine in einer Mischung aus
Chloroform und Methanol (9:1) gelost, worauf das Chromatogramm mit Chloroform/Methanol (8:2) ent-
wickelt wird. p
Eine Gegenstromverteilung kann ebenfalls zur Ex- 40 spektrum festgestellt. Das IR-Spektrum ähnelt dem-
traktion oder Reinigung von Leupeptinen angewendet jenigen von Leupeptin-Pr-Hydrochlorid. Das NMR-
werden. Ein Vielstufenzentrifugalextraktor, wie bei- Spektrum (100 MHz) in (CD3)2SO (Peak bei δ 1,85
spielsweise der Polbielniak-Zentrifugalextraktor, kann (Singlett, 3 H) zeigt das Vorliegen einerN-Acetylgruppe.
für diesen Zweck verwendet werden. Der Verteilungs- Die Hydrochloride von Leupeptinen sind in Wasser,
koeffizient von Leupeptinen zwischen Butanol und 45 Methanol. Äthanol, Butanol, Essigsäure, Dimethyl-
einem Phosphatpuffer mit einem pH von 6,0 beträgt formamid und Dimethylsulfoxyd löslich und kaum
ungefähr 1. Die Extraktion von Leupeptinen mit Bu- löslich in Äthylacetat, Aceton, Chloroform, Tetra-
tanol eignet sich zur Reinigung von Leupeptinen. chlcrkohlenstoff, Äthyläther und n-Hexan.
Die Leupeptine lassen sich aus den wäßrigen Lösun- Leupeptine ergeben positive Rydon-Smith-, rote
gen als ihre Pikrate, Flavianate, Reineckate und 5-Me- 50 Tetrazolium-, 2,4-Dinitrophenylhydrazin-, Sakaguchi-
thyi-/?-naphthalinsulfonsäuresalze ausfällen. Diese Aus- Diacetyl- und Pentacyanoaquoferriat-Reaktionen unc
fällungsmethode eignet sich ebenfalls zur Herstellung negative Ninhydrin-, Jaffe-, Eisen(IIl)-chlorid-, An
von Leupeptinen. Diese Salze werden mit orga- thron-. Molisch- und Benzidin-Reaktionen.
nischen Lösungsmitteln behandelt, welche Chlor- Die Papierchromatographie von Leupeptinen nacl
wasserstoffsäure enthalten, und werden in Hydro- 55 der aufsteigenden Methode ergibt einen einzigei
Chloride von Leupeptinen umgewandelt. Nach- Flecken, der durch die Rydon-Smith-,rote Tetrazolium
stehend wird ein wirksames Verfahren zur Extraktion oder Sakaguchi-Reaktion entwickelt wird. Der Rf-Wer
und Reinigung von Leupeptinen aus einer Kultur- beträgt 0,9 bis 0,95, und zwar bei einer Entwicklun
brühe angegeben: Leupeptine werden unter Verwen- mit einer oberen Schicht aus Butanol/Essigsäure/Was
dung eines porösen Kationenaustauscherharzes mit 60 ser (4:1:5, bezogen auf das Volumen), 0,9 bis 0,9
Carbonsäuregruppen adsorbiert und mit Chlorwasser- unter Verwendung von n-Propanol/Wasser (7 : 3) un
stoffsäure/Methanol eluiert, worauf das Eluat unter 0,4 bis 0,6 bei Verwendung von Äthylacetat/Methano1
Vakuum konzentriert wird. Die konzentrierte wäßrige Wasser (4:1:1). Bei einer Hochspannungspapiei
Lösung wird einige Male mit Butanol extrahiert, wo- elektrophorese (350OV, 15 Minuten) unter Verwer
rauf der Butanolextrakt zur Trockne eingedampft 65 dung von Ameisensäure/ Essigsäure /Wassc
wird. Der Rückstand in der wäßrigen Lösung wird (25 : 75 : 900) findet man die Leupeptine in einer En
durch Durchleiten durch die Säule aus dem Anionen- fernung von 5 bis 6 cm vor dem Ausgangspunkt i
austauscherharz entfärbt, worauf der Abstrom einge- Richtung auf die Kathode. Bei einer Diinnschich
Analyse: | HCl- | H2O | H 8,59, | O 16,63, |
C20H38O4N6- | .. C | 49,93, | Cl 7,37 | |
Berechnet . | N | 17,47, | H 8,57, | O 16,42, |
.. C | 50,34, | Cl 5,27 | ||
gefunden . | N | 16,03, | charakteristisches | UV-Absorptions |
Es wird kein | ||||
Chromatographie unter Verwendung von Kieselgel G (Merck) ergeben Leupeptine einen einzelnen Flecken
bei einem Rf.-Wert von 0,6 bis 0,7 bei Verwendung von n-Propanol/Wasser (7 : 3), 0,2 bis 0,4 bei Verwendung
von Chloroform/Methanol (7 : 3), 0,2 bis 0,3 bei Verwendung von Aceton/Wasser (1:1) und 0,3 bis 0,4
bei Verwendung von Äthylacetat/Essigsäure/Wasser (60 : 17: 17). Leupeptine Pr und -Ac lassen sich nicht
durch Papier- und Dünnschicht-Chromatographie sowie durch Hochspannungspapier-Elektrophorese unter
den vorstehend angegebenen Bedingungen unterscheiden. Bei der Dünnschicht-Chromatographie an Kieselgel
G unter Verwendung von Butanol/Butylacetat/Essigsäure/Wasser
(4:2:1: 1, bezogen auf das Volumen) als Entwicklungsmittel werden die Leupeptine Pr und
-Ac getrennt. Jedes dieser Leupeptine ergibt zwei Flecken mit folgenden Rf.-Werten: 0,45 bis 0,50 und
0,35 bis 0,45 für Letipcptin Pr und 0,35 bis 0,45 und
0,30 bis 0,35 für Leupeptin Ac. Der Extrakt aus beiden Flecken läßt sich in Form von 2 Flecken bei Anwendung
der gleichen Dünnschicht-Chromatographie nachweisen.
Leupeptin Pr-LL-di-n-Butylacetalhydrochlorid ist
ein weißes Pulver, das bei 70 bis 900C schmilzt. [«]%-46o (c = 2, Methanol), pKa' mehr als 12.
Analyse:
C29H58O5N6
Berechnet
Berechnet
gefunden
HCl · H2O
.. C 55,70, H 9,83, O 15,35,
N 13,44, Cl 5,67;
.. C 55,73, H 9,68, 0 14,43,
N 13,56, Cl 5,86.
Die Molekülformel wird zu C29H58O5N6 ermittelt,
und zwar durch den Stammpeak m/e = 570 in dem
Massenspektrum.
Leupeptin Pr-LL-di-n-Butylacetalpikrat ist ein gelbes
kristallines Pulver mit einem Schmelzpunkt von 60 bis 900C.
Analyse:
C29H58O5N6 · C6H3O7N3
Berechnet ... C 52,55. H 7.69, O 24,00, N 15,76;
gefunden ... C 52,32, H 7,80, O 24,80, N 15,43.
Leupeptin Ac-LL-di-n-Butylacetalhydrochlorid ist
ein weißes Pulver. F. 70 bis 900C, [a]S'-43° (c = 2,
Methanol), pKa' mehr als 12.
Analyse:
C28H56O5N6 HCl-1/2H2O
Berechnet... C 55,84, H 9,71, O 14,61,
N 13.96, Cl 5,89:
gefunden ... C 56,03, H 9,67, O 14,77,
gefunden ... C 56,03, H 9,67, O 14,77,
N 13,68, Cl 6,16.
Die Molekülformel ergibt sich aus dem Hochauflösungsmassenspektrum
des Hydrochloride: Berechnetes Molekulargewicht für C28HseOsNe: 556,431; gefunden:
m\e 556,429 ± 0,003.
Leupeptin Ac-LL-di-n-Butylacetalpikrat ist ein gelbes
kristallines Pulver. F. 60 bis 1000C.
Analyse:
C28H58O5N9 · C6H3O7N3
Berechnet ... C 51,96, H 7,57, O 24,43, N 16,04; gefunden ... C 51,78, H 7,51, O 25,17, N 15,67.
Leupeptin-Pr- und -Ac-di-n-Butylacetalhydrochloride
besitzen keine charakteristische UV-Absorption.
Die IR-Spektren zeigen eine starke Absorption bei 1070 cm \ die dem Acetal zugeschrieben wird. Bei der
Durchführung einer Dünnschicht-Chromatographie unter Verwendung von Kieselgel G und Butanol/Butylacetal/Essigsüure/Wasser
(4:2:1:1) ergeben Leupeptin-Pr-di-n-Butylacetal
und -Ac-di-n-Butylacetal jeweils einen einzigen Flecken mit einem Rf.-Wert von
0,65 bzw. 0.60.
Die gereinigten Leupeptine besitzen eine Antiplasminakthität
und zeigen eine Inhibierung von Trypsin, Papain und Kallikrcin, jedoch nicht von Chymotrypsin.
Die 50%igen Inhibierungskonzentrationen von Leupeptinen werden in folgender Weise erhalten: Durch
proteolytisehi. Hydrolyse von Fibrin durch Plasmin, von Kasein durch Trypsin und Hämoglobin durch
Papain bei 6 meg ml, 2 mcg/ml und 0,15 mcg/ml Leupeptinen
und estcrolytische Hydrolyse von p-Toluolsulfonyl-L-argininmethylester
(TAME) und a-N-Benzoylargininäthylester (BAl F.) durch Plasmin, Trypsin
oder Kallikrein bei 65 bis 85 mcg/ml Leupeptinen. Die Art der Inhibierung von Leupeptinen verläuft in Konkurrenz
zu der Hydrolyse von TAME durch Trypsin und Hämoglobin durch Papain. Die Leupeptine
inhibieren eine Blutkoagulierung bei Menschen,
Kaninchen, Katzen und Rindern. Die Inhibierung einer Koagulierung des Blutes von Mäusen, Ratten
und Hunden ist sehr schwach. Diese Wirksamkeit von Leupeptinen wird mit Trasylol, Trypsin-Inhibitor,
trans - 4 - Aminomethylcyclohexancarbonsäure (t-AMCHA) und ε-Aminocapronsäure (ε-ACA) verglichen.
Leupeptine, Trypsin-Inhibitor und Trasylol haben sich als wirksame Inhibitoren gefsnüber Plasmin und
Trypsin erwiesen. Die inhibierende Wirkung von Leupeptinen ist um das lOOfache stärker als diejenige
von ε-ACA und um das 20fache kräftiger als diejenige von t-AMCHA auf das Piasminsystem. Leupeptine
sind wirksame Inhibitoren gegen eine Thrombokinasc, jedoch nicht gegen λ-Chymotrypsin. Trasylol
vermag nicht eine Thrombokinase zu inhibieren, ist jedoch ein wirksamer Inhibitor gegen Λ-Chymotrypsin.
Leupeptine zeigen ferner eine inhibierende Wirkung gegenüber einer Carrageenin-Entzündung in Ratten.
Eine intraperitoneale Injektion von mehr als 6,25 mg/kg von Leupeptinen oder eine orale Verabreichung von
mehr als 12,5 mg/kg an Ratten inhibiert eine Entzündung der Fußpolster, welche durch eine subkutane
Injektion von 0,05 ml einer l,0%igen Caarageenin-Lösung erzeugt worden ist. Leupeptine werden gut auf
oralem Wege absorbiert. Werden 1000 mg/kg auf oralem Wege an Ratten verabreicht, dann wird der
höchste Blutgehalt von ungefähr 200 mcg/ml in dem Serum nach 1,5 Stunden festgestellt, während
2400 mcg/ml in dem Urin nach 3 bis 5 Stunden ermittelt werden. Insgesamt ungefähr 40% der verabreichten
Leupeptine werden aus dem Urin wiedergewonnen. Die LD50 sind wie folgt: Mäuse 118 mg/kg
durch intravenöse Injektion, 1405 mg/kg durch subkutane Injektion, 1550 mg/kg auf oralem Wege; Ratten:
125 mg/kg durch intravenöse Injektion, > 4000 mg/kg durch subkutane Injektion,
> 4000mg/kg a'if oralem Wege; Kaninchen 35 mg/kg durch intravenöse
Injektion, 300 mg/kg durch subkutane Injektion, > 1500 mg/kg auf oralem Wege.
B e i s ρ i e 1 1
Streptomyces roseus MA 839-Al wird bei 27°C während
einer Zeitspanne von 71 Stunden in 85 Kolben (eingenommenes Volumen in einem Kolben: 125 ml)
509 504/403
gezüchtet, wobei die Kolben mittels einer sich hin- und herbewegenden Schüttelvorrichtung (130 Bewegungen/Minute)
geschüttelt werden. Das Medium enthält 1% Glukose, 1% Stärke, 2% Polypepton (Daigo
Eiyo Co.) und 0,5% Natriumchlorid und wird unter Verwendung von 2n-Natriumhydroxyd auf einen pH
von 7,0 eingestellt. Ein vegetatives Inokulum,das 2Tage lang in dem gleichen Medium gezüchtet worden war,
wird in einer Menge von 1 Volumenprozent verwendet. Die Kulturbrühe wird gesammelt (10 1, Antiplasminaktivität:
ID50 0,015 ml/ml) und zentrifugiert, und
zwar bei 3000 Upm während einer Zeitspanne von 10 Minuten. Der überstehenden Flüssigkeit (91,
pH 7,3) werden 135 g Kohle (Wako Pure Chem.) zugesetzt.
Nach einem 30 Minuten dauernden Rühren wird die Kohle durch Filtration abgetrennt und mit 6 1
Wasser gewaschen. Dann erfolgt eine Eluierung mit 1500 ml und 1200 ml eines sauren 80%igen Methanols
(pH 2, eingestellt unter Verwendung von 2n-Chlorwasserstoffsäure).
Das aktive Eluat wird mit »Amberlite®
IR 45« (OH-Form) neutralisiert und bis zur Trockne eingedampft. Dabei fallen 22 g eines bräunlichen
Pulvers an (Antiplasminaktivität: ID5095 mcg/ml,
Aktivitätsausbeute·. 38%). Das bräunliche Pulver wird in 500 ml Wasser (pH 7,0) gelöst und auf eine Kohlesäule
(Wako Pure Chem., 110 g) geschüttet. Die Säule wird mit 2 1 Wasser und 2 1 einer 0,02n-Salzsäure gewaschen
und mit einer O,O2n-Salzsäure in 80% Methanol eluiert. Das Eluat wird mit »Amberlite® IR 45«
(OH-Form) neutralisiert und zur Trockne eingedampft. Dabei werden 8,9 g eines gelblichen Pulvers (Antiplasminaktivität:
ID50 53 mcg/ml, Aktivitätsausbeute:
72%) erhalten. 7,5 g des gelblichen Pulvers werden in 50 ml Methanol gelöst und auf eine Aluminiumoxydsäule
(Woelm, sauer, 750 g) gegossen. Die Säule wird mit Methanol entwickelt. Das Eluat, das positive
Rydon-Smith-, Sakaguchi- und rote Tetrazolium-Reaktionen liefert, wird zur Trockne eingedampft.
Dabei werden 2,3 g Leupeptinhydrochioride erhalten (Antiplasminaktivität: ID50 12 mcg/ml, Gesamtaktivitätsausbeute:
24%).
Streptomyces rossus MA 839-Al wird in einem 20001-Gärgefäß (eingenommenes Volumen: 1500 1)
gezüchtet. Das Medium enthält 2% Glukose, 1% Stärke, 2% Pepton, 0.5% NaCl und 0,2% KH2PO,
und ist bei 110°C während einer Zeitspanne von 30 Minuten sterilisiert worden. Ein vegetatives Inokulum,
das 48 Stunden lang in dem gleichen Medium gezüchtet worden ist, wird in einer Menge von 0,13
Volumenprozent verwendet. Die Temperatur wird bei 27°C gehalten. Die Luftströmungsgeschwindigkeit
wird konstant auf 1500 1 pro Minute eingestellt, während mit einer Geschwindigkeit von 200 Upm gerührt
wird. Die Kulturbrühe (15001, pH 7,15, Antiplasminaktivität: ID50 0,015 ml/ml) wird nach 53.5 Stunden
gesammelt und unter Verwendung von 45 kg Dicalite® als Filterhilfsmittel filtriert. Das Filtrat wird durch
eine mit Lewatit® CNP-Harz (Farbenfabriken Bayer AG, pH 6,0 unter Verwendung von Natriumhydroxyd,
1801) gefüllte Säule geschickt. Die Säule wird mit Wasser gewaschen und mit 300 i 1 n-Chlorwasserstoffsäure
in 80% Methanol und 2001 einer 0,2 n-Chlorwasserstoffsäure in 80% Methanol eluiert. Das aktive
Eluat (565 1) wird auf einen pH von 5,2 unter Verwendung von 6n-Natriumhydroxyd eingestellt und auf 901
konzentriert Das Konzentrat wird mit 801 Butanol
extrahiert, worauf der Extrakt zur Trockne eingedampft wird. Dabei werden 979,1 g eines bräunlichen Pulvers
(Antiplasminaktivität: IDr10 13 mcg/ml, Aktivitätsausbeute:
75%) erhalten.
164 mg des bräunlichen Pulvers in 2 ml Wasser werden entfärbt und mittels Harzchromatographie
unter Verwendung von Dowex* 1 -2 100 bis 200 mesh,
Cl-Fonn, 10 ml), wobei mit Wasser entwickelt wird,
gereinigt. Das Eluat, das positive Rydon-Smith- und ίο Kasaguchi-Reaktionen ergibt, wird zur Trockne
eingedampft, wobei 126 mg eines weißen Pulvers aus Leupeptinhydrochloriden anfallen (Antiplasminaktivität:
ID50 11 mcg/ml, Aktivitätsausbeute: 91%).
»5 Beispiel 3
Trennung der Leupeptin-Pr- und -Ac-di-n-Butylacetale
19,2gderLeupeptinhydrochloride(IDso: 15 mcg/ml)
werden in 270 ml Butanol 2 Stunden lang am Rückfluß gehalten. Die Butanollösung wird mit 270 ml Wasser
gewaschen und zur Trockne eingedampft. Dabei werden 23,4 g eines Rohpulvers erhalten. 14.0 g des
Rohpulvers werden in 20 ml Buianol/Butylacetat/'Es-
sigsäure/Wasser (4:8:1:1) aufgelöst und' einer Säulenchromatographie
(Kieselsäure, Mallinckrodt. 900gl unterzogen, wobei mit dem gleichen Lösungsmittel
entwickelt wird. Das erste Eluat (150 ml), das Rydon-Smith-
und Sakaguchi-Rcaktionen ergibt, wird zur
Trockne eingedampft. Dabei werden l."5g Leupeplin-Pr-di-n-Butylacetalhydrochlorid
in Form eines weißen Pulvers erhalten. Das zweite Eluat (500 ml) wird zur Trockne eingedampft, wobei 5,3 g einer Mischung anfallen,
die Leupeptin-Pr- und "-Ac-di-n-Butylacetal
(Hydrochlorid) enthält. Das dritte Eluat (1400 ml) wird
zur Trockne eingedampft. Dabei werden 3,4 g Leupeptin-Ac-di-n-Butylacetalhydrochlorid
in Form eines weißen Pulvers erhalten.
B e i s ρ i e 1 4
Leupeptin-Pr-Hydrochlorid
93 mg Leupeptin-Pr-di-n-Biitylacetalhydrochlorid
werden in 5 ml einer 0,01 n-Chlor'wasscrstoffsäure ge·
lost und 3 Stunden lang auf 60D C erhitzt. Die Lösung
wird unter Verwendung von Amberlite* IR 45 (OH-Form) auf einen pH von 6,0 neutralisiert und zui
Trockne eingedampft. Dabei werden 72 mg Leupcptin-Pr-Hydrochlorid
in Form eines weißen Pulvers erhalten (ID50: 8 mcg/ml).
Beispiel 5
Leupeptin-Ac-Hydrochlorid
1,0 g Leupeptin-Ac-di-n-Butylacetalhydrochlorid
wird in 50 ml einer 0,01 η-Chlorwasserstoffsäure gelösi
und nach der im Beispiel 4 beschriebenen Arbeitsweise behandelt. Auf diese Weise wird ein weißes Pulvei
aus Leupeptin-Ac-Hydrochlorid (800 mg, ID50:12mcg/
do η») erhalten.
Beispiel 6
Leupeptin-Pr-di-n-Butylacetalpikrat
Einer Lösung von Leupeptin-Pr-di-n-Butylacetalhydrochlorid (48 mg) in 2 ml Wasser werden 31 mg
Natnumpikrat in 1 ml Wasser bei 40 bis 5O0C zugesetzt. Nachdem die Mischung über Nacht bei Zim-
mertemperatur stehengelassen worden ist, wird der ölige Sirup durch Dekantierung abgetrennt und unter
vermindertem Druck getrocknet. Der Rückstand wird mit 2 ml kalten Wassers gewaschen, wobei 50 mg eines
gelben kristallinen Pikrals von Leupeptin-Pr-di-n-Butylacctal
erhalten werden. Das Pikrat wird mit heißem Wasser umkristallisiert.
Beispiel 7
Leupeptin-Ac-di-n-Butylacetalpikrat
Leupeptin-Ac-di-n-Butylacetalpikrat
Einer Lösung von Leupeptin-Ac-di-n-Bulylacetalhydrochlorid
(100 mg) in 2 ml Wasser werden 88 mg Natriumpikrat in t ml Wasser bei 40 bis 500C zugesetzt.
Ein gelbes kristallines Pikrat von Leupeptin-Acdi-n-Butylacetal
(109 mg) wird nach der im Beispiel 6 beschriebenen Arbeitsweise erhalten.
Ein Leupeptin erzeugender Stamm (Streptomyces roseus MA 839-Al) wird 48 Stunden lang unter
Schütteln unter Bedingungen gezüchtet, die den im Beispiel 1 beschriebenen ähnlich sind. Das Myzel wird
aus der Kulturbrühe (375 ml) durch Zentrifugieren abgetrennt und mit 80 ml einer sterilisierten physiologischen
Kochsalzlösung gewaschen. 7,0 bis 7,8 g des erhaltenen feuchten Myzels werden in 26 ml sterilisiertem
Wasser suspendiert. 2 ml der Suspension werden auf 30 ml eines synthetischen Mediums aufgeimpft, das
0,2",, NH4NO3, 0,1 "/,K2HPO4, 0.05",, MgSO1 · 7H„O,
0,05 °o KCl, 0,001% FeSO4-7H2O, 1,0°,, Glukose,
1,0",, Stärke und eine Mischung aus Aminosäuren (3,05 mMol i.-Leucin, 0,61 niMol l.-lsolcucin,
0,70 mMol l.-Prolin und 0,23 mMol i.-Arginin) enthält,|worauf
24Stunden langbei 27°C geschüttelt wird.
Die Reaktionsmischung wird filtriert und an Ambcrlitc*
IRC 50-Harz (5 ml der Η-Form), eingefüllt in eine Säule, adsorbiert. Die Säule wird mit 50 ml eines
50"„igen wäßrigen Acctons gewaschen und mit 0.5 n-HCl
in einem 50%igen wäßrigen Aceton cluiert. 15 ml des Eluats werden mit Amberlite® IR 45 (OH-Form)
neutralisiert und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in 1 ml eines 80%igen Methanols gelöst und
auf eine mit 5 g eines sauren Aluminiumoxyds gefüllte Säule gegeben. Die Entwicklung erfolgt mit 25 ml
Methanol. Das aktive Eluat (5 ml) wird konzentriert und auf eine Dünnschicht-Chromatographie-Platte
(Silicagel G) punktweise aufgebracht. Die Platte wird mit einer Mischung aus Chloroform und Methanol
(4:1) entwickelt. Die Leupeptine werden mit Methanol aus dem Kiesclgel, das an einer Stelle gesammelt wird,
die einem Rf.-Wert von 0,15 bis 0,30 entspricht, extrahiert.
Die Methanollösung wird zur Trockne eingedampft, wobei 1,2 mg eines aus Leupeplinen bestehenden
weißen Pulvers anfallen. Antiplasminaktivität: ID50 10 mcg/nil. Die Aminosäureanalyse des sauren
ίο Hydrolysate (Molverhältnis) ergibt 1,13 Leucin, 0,12
Isoleucin, 0,09 Prolin, Spuren Arginin und 0 Valin.
Bei der Durchführung eines Experiments, das dem
vorstehend beschriebenen ähnlich ist, wobei 2,96mMol
ι-Leucin, 0,57 mMol i.-lsoleucin und 0,65 mMol
L-Prolin als Mischung von Aminosäuren verwendet werden, werden 0,6 mg an Lcupeptinen erhalten. Die
Aminosäureanalyse ergibt 1,16 Leucin, 0,10 Isoleucin und 0,06 Prolin.
Werden 3,05 mMol L-Leucin, 0,7 mMol L-Prolin und 0,23 mMol i-Arginin als Mischung von Aminosäuren
verwendet, dann werden 2 mg Leupeptine erhalten. Die Aminosäurcanalyse ergibt 1,39 Leucin,
0,01 Isoleucin und 0,10 Prolin.
Auf Grund der vorstehend beschriebenen biologisehen Wirksamkeiten eignen sich Leupeptine sowie
ihre Salze zur Behandlung von verschiedenen Entzündungskrankheiten. Zur Behandlung von Pankreatilis
werden Leupeptine in einer sterilen Formulierung subkutan, intramuskulär, intravenös oder oral
verabreicht. Zur Heilung von Hautkrankheiten können Leupeptine als Paste, Creme, Lösung oder Suspension
verwendet werden.
In den Rahmen der Erfindung fallen auch die Säureadditionssalze von Leupeptinen mit organischen
und anorganischen Säuren, wie beispielsweise Chlorwasscrstoffsäure,
Schwefelsäure, Bromwasserstoffsäure. Jodwasscrstoffsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure,
Zitronensäure, Apfelsäure. Weinsäure, Benzoesäure, Zimtsäure, Ascorbinsäure. Essigsäure, Pikrinsäure,
Phytinsäure, Le\opimarsäure-6.8a-cis-endobernsteinsäure,
Sulfaminsäure, Glykolsäure und Mandelsäure. Für therapeutische Zwecke greift man auf Salze
nichttoxischer Säuren zurück, wobei jedoch auch Salze toxischer Säuren, beispielsweise von Pikrinsäure,
zur Durchführung von lsolicrungsmethoden geeignel sind, beispielsweise zum Ausfällen aus wäßrigen Lösungen
sowie für Desinfektionszwecke, bei welcher eine Toxizität ohne Bedeutung ist.
Hierzu 2 Blatt Zeichnungen
Claims (1)
1. Leupeptine der Formel
CHO
R3-CO-NH-CH-CO-Nh-CH-CO-NH-CH- (CHu)3 — NH — C'.
worin R1 und R2 den Substituenten
/CH3
— CH2 — CH,
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2582068 | 1968-04-19 | ||
JP2208069 | 1969-03-25 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE1919837A1 DE1919837A1 (de) | 1969-11-06 |
DE1919837B2 true DE1919837B2 (de) | 1975-02-13 |
DE1919837C3 DE1919837C3 (de) | 1975-09-25 |
Family
ID=26359243
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE1919837A Expired DE1919837C3 (de) | 1968-04-19 | 1969-04-18 | Leupeptine, deren Salze und Verfahren zu ihrer Herstellung |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US3840513A (de) |
BE (1) | BE731760A (de) |
CH (1) | CH523318A (de) |
DE (1) | DE1919837C3 (de) |
DK (1) | DK134705B (de) |
FR (1) | FR2007478A1 (de) |
GB (1) | GB1268212A (de) |
NL (1) | NL165785C (de) |
SE (1) | SE375546B (de) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1292846A (en) * | 1968-11-21 | 1972-10-11 | Zaidan Hojin Biseibutsu | A process for the synthesis of leupeptins and their analogues |
JPS5022116B1 (de) * | 1970-04-28 | 1975-07-28 | ||
US4059573A (en) * | 1973-08-01 | 1977-11-22 | Glaxo Laboratories Limited | Extraction of N-blocked amino acids from aqueous media |
US3971736A (en) * | 1975-01-21 | 1976-07-27 | Merck & Co., Inc. | Cathepsin in D inhibitors |
US4066507A (en) * | 1976-10-13 | 1978-01-03 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Process for producing l-leupeptins |
JPS5754157A (en) * | 1980-09-19 | 1982-03-31 | Nippon Kayaku Co Ltd | L-argininal derivative and its preparation |
US7989173B2 (en) * | 2006-12-27 | 2011-08-02 | The Johns Hopkins University | Detection and diagnosis of inflammatory disorders |
AU2007339762B2 (en) * | 2006-12-27 | 2011-03-31 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for treating inflammation and auto-immune diseases |
US20090142342A1 (en) * | 2006-12-27 | 2009-06-04 | Johns Hopkins University | B7-h4 receptor agonist compositions and methods for treating inflammation and auto-immune diseases |
US9005616B2 (en) | 2009-08-31 | 2015-04-14 | Amplimmune, Inc. | Methods and compositions for the inhibition of transplant rejection |
-
1969
- 1969-04-10 GB GB08421/69A patent/GB1268212A/en not_active Expired
- 1969-04-17 SE SE6905431A patent/SE375546B/xx unknown
- 1969-04-18 CH CH594669A patent/CH523318A/de not_active IP Right Cessation
- 1969-04-18 DK DK213769AA patent/DK134705B/da not_active IP Right Cessation
- 1969-04-18 FR FR6911374A patent/FR2007478A1/fr not_active Withdrawn
- 1969-04-18 DE DE1919837A patent/DE1919837C3/de not_active Expired
- 1969-04-18 BE BE731760D patent/BE731760A/xx not_active IP Right Cessation
- 1969-04-18 NL NL6906010.A patent/NL165785C/xx not_active IP Right Cessation
-
1972
- 1972-06-15 US US00263172A patent/US3840513A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE1919837C3 (de) | 1975-09-25 |
FR2007478A1 (de) | 1970-01-09 |
DE1919837A1 (de) | 1969-11-06 |
SE375546B (de) | 1975-04-21 |
NL165785B (nl) | 1980-12-15 |
BE731760A (de) | 1969-10-01 |
CH523318A (de) | 1972-05-31 |
GB1268212A (en) | 1972-03-22 |
US3840513A (en) | 1974-10-08 |
NL165785C (nl) | 1981-05-15 |
DK134705B (da) | 1976-12-27 |
NL6906010A (de) | 1969-10-21 |
DK134705C (de) | 1977-05-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0151246B1 (de) | Neue Polypeptide mit alpha-Amylase-hemmender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate | |
EP0366060B1 (de) | Glykosidase-Inhibitor Salbostatin, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung | |
DE2718782C2 (de) | ||
DE3134353C2 (de) | Antibiotikum BMG162-aF2, Verfahren zu seiner Herstellung und dieses enthaltende Antitumormittel | |
DE1919837C3 (de) | Leupeptine, deren Salze und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
DE2343963A1 (de) | Staebchenbakterium-peptidase und verfahren zu ihrer herstellung durch kultivierung von staebchenbakterien | |
DE2911353C2 (de) | ||
DE2528984C3 (de) | Bestatin, dessen Verwendung und Verfahren zu dessen Herstellung | |
DE2120930A1 (de) | Pepsin-Inhibitor und Verfahren zu dessen Herstellung | |
DE2028403B2 (de) | Pepstatin | |
DE3048421C2 (de) | Antibiotische Substanz, Verfahren zu deren Herstellung und antimykotisches Mittel, welches diese enthält | |
EP0057349A2 (de) | Neues Peptid-Antibiotikum Komponente B, Verfahren zu seiner Herstellung sowie seine Verwendung in Arzneimitteln | |
EP0173950A2 (de) | Neuer alpha-Glukosidase Inhibitor, Verfahren zur seiner Herstellung, seine Verwendung und pharmazeutische Präparate | |
DE2950980C2 (de) | Antibiotikum BN-183B und Arzneimittel, welche dieses enthalten | |
DE2652677C2 (de) | Antibiotica 890A&darr;1&darr; und 890A&darr;3&darr;, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Antibiotika enthaltende antibakterielle Mittel | |
DE2708493A1 (de) | Neues antibiotikum am-1042 | |
DE2304780A1 (de) | Plasminostreptin und verfahren zu seiner herstellung | |
DE3003359C2 (de) | ||
DE3026425C2 (de) | ||
CH620244A5 (en) | Process for the microbiological preparation of a deacylpepsidin | |
DE2809092A1 (de) | Verfahren zur herstellung von emitanin | |
DE2146674C3 (de) | Faktor und seine Verwendung als Arzneimittel | |
DE2813507C3 (de) | Amastatine, Verfahren zu ihrer Gewinnung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen | |
EP0173948A2 (de) | Neue Pseudooligosaccharide mit alpha-Glukosidase-hemmender Wirkung, Verfahren zur deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate | |
EP0057812A2 (de) | Neues Peptid-Antibiotikum Komponente A, Verfahren zu seiner Herstellung sowie seine Verwendung in Arzneimitteln |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) | ||
E77 | Valid patent as to the heymanns-index 1977 | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |