DE1916105A1

DE1916105A1 - Saure Ionenaustauscher auf Agarose-Basis

Info

Publication number: DE1916105A1
Application number: DE19691916105
Authority: DE
Inventors: Schell Horst Dithelm; Chetie Victor Francise
Original assignee: INST DE BIOCHIMIE AL ACADEMIEI
Current assignee: INST DE BIOCHIMIE AL ACADEMIEI
Priority date: 1968-03-30
Filing date: 1969-03-28
Publication date: 1969-10-09
Also published as: CH519523A; US3651041A; CA921465A; GB1228065A; FR2005167A1

Description

Anmelder: IITSTITUTUL DE BIOGHIMIS AI AGADEMIEI RSS Bukarest (Rumänien), str. Docentilor, 20

Saure Ionenaustauscher auf Agarose-Basis

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von sauren Ionenaustauschern auf Agarose-Basis.

Es sind bereits ähnliche Ionenaustauscher auf Zellulose- und Dextran-Basis bekannt.

Das erfindung3gemäße Verfahren besteht im wesentlichen darin, daß die Sulfoäthyl-Gruppe in das Agarose-Molekül oder in das mittels Epichlorhydrin durch Glyceryl-Brücken vernetzte Agarose-Molekül eingeführt wird» · . "

Die im Tall der einfachen Agarose erhaltenen Derivate lösen sich beim Erwärmen in Wasser. Durch Abkühlen der erhaltenen lösungen erhält man Gele, die nach einer der in der Fachliteratur bekannten Methoden granuliert werden können· Die im Pail der vernetzten Agarose erhaltenen Derivate sind auch in der \prme wasserunlöslich. Ihre Gele werden zunächst mechanisch zerkleinert, dann entwässert, getrocknet und anschließend zwecks Isolierung der Partikel gewünschter

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Größe selektiv gesiebt.

Mit dem erfindungsgemäßen Verfahren v/erden neue, stärk säure" "^!* Ionenaustauscher geschaffen, die sich insbesondere zur Untersuchung, Isolierung und Reinigung hochmolekularer Verbindungen,-wie Eiweißstoffe pflanzlicher oder tierischer Herkunft, Enzyme etc. eignen«,

Im folgenden wird das erfindungsgemäße Verfahren anhand zweier Ausführungsbeispiele näher erläutert.

Beispiel 1

10 g Agarose werden in 35 ml einer auf ca. 0⁰C gekühlten ION Natriumhydroxydlösung eingetragen und gut verrührt. Nach einer Stunde Stehen gibt man in zwei bis drei Portionen 3 g in 5 ml Wasser gelöstes Natriumbromäthylsulfonat unter kräftigem Rühren zu und rührt noch 30 Minuten bei niederer Temperatur weiter. Sodann wird das Gemenge in Stickstoffatmosphäre in einem Paraffinbad auf 115 - 120⁰C erhitzt, wobei anfangs einige Male umgerührt wird. Nach dreistündigem Erhitzen wird das gelbbraune Reaktionsgemisch in 30 ml destilliertem warmen Wasser gelöst und bei 50 - 55°0 mit 300 - 400-ml Äthpnol unter kräftigem Rühren gefällt. Man fällt noch zweimal nach und wäscht jedesmal mit 75$igem Äthanol auf der Glasnutseh« bis zur völligen Entfärbung und Beseitigung auch der letzten Natriumhydroxydreste. Dann wird das Reaktionsprodukt in 200 ml einer mit 75$igem Äthanol hergestellten, 0,5 N Schwefelsäurelösung suspendiert, an der Wasserstrahlpumpe abgesaugt, mit

bis zur völligen Entfernung der Schwefelsäure

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,gewascheil, Mit Äthanol und dann mit Aceton-entwässert und_; , getrocknet· Bs werden 7 g Sulfoäthyl>-Agaro-se als weißes .Pulver mit einem Ge&alt an sauren G-ruppen -von ca· Qj 35 aväl/g Irockengewiöht erhalten* ... ',_.".

Beispiel 2, .._ . .. .-,.-. . .

Es wird, wie in Beispiel 1 beschrieben verfahren mit dem Unterschied, daß anstelle von einfacher Agarose von 10 g mittels &lyceryl-Brücken vernetzter Agarose (Agarose X-7,5, 50 - 100 mesh) ausgegangen.wirdoUach dreistündiger Erhitzung des Reaktionsgemisehes auf 115 - 120⁰C in Stickstoffatmosphäre werden die Gelteilchen auf einer Giasnutsche mit destilliertem Wasser "bis zur völligen Entfärbung und Entfernung des Natriumhydroxyds gewaschen. Dann wird, das Produkt in 200 ml 0,5 F Schwefelsäure suspendiert, mit destilliertem Wasser zu.£ Entfernung der Schwefelsäure gewaschen, mit Äthanol und/oder Aceton entwässert und getrocknet. Man erhält 8 g Sulfoäthylderivat der quervernetzten Agarose mit einem Gehalt an sauren Gruppen von ca. 0,3 mval/g Trockengewicht.

Bei den oben erwähnten Beispielen kann die Menge des zugefügten Hatriumbromäthylsulfonats auch geändert werden, wobei Stoffe erhalten werden, welche sich durch ihre physikalischchemischen und mechanischen Eigenschaften voneinander unterscheiden. Es muß aber erwähnt werden, daß das IJatriumbromäthylsulfonat nur bei der vernetzten Agarose in größeren Mengen angewendet werden kann, nicht dagegen bei der einfachen Agarose da letztere beim Vergrößern der Menge des zugefügten Natriumbromäthylsulfonats Produkte mit einer zu großen !löslichkeit· — ~—~ — ^

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Claims

Pat entansprüche

Verfahren zur Herstellung von sauren Ionenaustauschern aus Agarose, dadurch gekennzeichnet, daß Sulfoäthyl-Gruppen in das Agarose-Molekül eingeführt werden und die warmen wäßrigen Lösungen der erhaltenen Derivate * zur Gelbildung abgekühlt werden.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß

Agarose in basischem Milieu durch dreistündiges Erhitzen

ο in Stick stoffatmosphäre auf 115.- 120 0 mit Natriumbrom-

äthylsulfonat behandelt wird.
3. Verfahren zur Herstellung von sauren Ionenaustauschern aus durch Glyceryl-Brücken vernetzter Agarose nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Sulfoäthyl-Gruppen in das durch Glyceryl-Brücken vernetzte Agarose-Molekül eingeführt werden und die erhaltenen Derivate in die Gelpartikel übergeführt werden.

4· Verfahren nach Anspruch 3_t dadurch gekennzeichnet, daß die vernetzte Agarose in basischem Milieu durch dreistündiges Erhitzen in Stickstoffatmosphäre auf 115 - 120⁰C

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mit Hatriiimbromätiiylsulfonat behandelt wird,

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