DE1598928B2 - REAGENT FOR DETECTION OF INFECTIOUS MONONUCLEOSIS - Google Patents
REAGENT FOR DETECTION OF INFECTIOUS MONONUCLEOSISInfo
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Description
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Die Erfindung betrifft ein Reagens zum Nachweis Probe vorhanden sind, zu adsorbieren. So adsorbiert der infektiösen Mononukleose, das in einer Kochsalz- zum Beispiel ein Antigen, das aus Pferdenieren herlösung suspendierte Erythrozyten zur Agglutination gestellt ist, den Forssmannschen und den Serumder heterophilen Antikörper in dem zu titrierenden krankheits-Antikörper, während ein Antigen, das aus Testserum enthält. 5 Rindererythrozyten hergestellt ist, die Antikörper der Die infektiöse Mononukleose ist eine akute Krank- infektiösen Mononukleose und der Serumkrankheit heit, die am häufigsten bei Patienten in der Alters- adsorbiert. Die Adsorption dieser Antikörper nach gruppe von 16 bis 25 Jahren auftritt; sie ist gekenn- Behandlung mit den Antigenen zeigt sich durch den zeichnet durch Fieber, eine allgemeine Lymphknoten- Verlust der Fähigkeit des Serums, Schaferythrozyten vergrößerung und eine Lymphozytose mit atypischen io zu agglutinieren. So können nach Abtrennung der mit Lymphozyten. Im Blut der Mononukleosepatienten dem Antigen behandelten Proben diese in Reihenfinden sich gewöhnlich heterophile Antikörper, d. h. Verdünnung titriert werden, um die Titer ihres rest-Antikörper mit einer Affinität zu verwandten oder liehen Antikörpergehaltes zu bestimmen, die ausidentischen Antigenen, die in Schafzellen, Meer- reichen, um eine Agglutination der Schaferythrozyten schweinchengewebe und vielen anderen damit nicht 15 zu erzeugen.The invention relates to a reagent for detecting samples are present to adsorb. So adsorbed infectious mononucleosis, which is dissolved in a saline, for example an antigen that is derived from horse kidneys suspended erythrocytes is put to agglutination, the Forssmann and the Serumder heterophile antibody in the disease antibody to be titrated, while an antigen that consists of Contains test serum. 5 bovine erythrocytes is produced, the antibodies of the infectious mononucleosis is an acute disease-infectious mononucleosis and serum sickness that is, most commonly adsorbed in patients in old age. The adsorption of these antibodies after group from 16 to 25 years of age occurs; it is known- treatment with the antigens is shown by the characterized by fever, a general lymph node loss of the ability of the serum to produce sheep erythrocytes enlargement and agglutinate lymphocytosis with atypical io. After separating the with Lymphocytes. Samples treated with the antigen in the blood of mononucleosis patients find these in series usually heterophilic antibodies, d. H. Dilution will be titrated to the titre of your residual antibodies with an affinity to related or borrowed antibody content to determine which are identical Antigens that are found in sheep cells, sea-rich, around agglutination of sheep erythrocytes piggy tissue and many others with it not to produce 15.
verwandten biologischen Substanzen festgestellt wur- Wenn man dann die im Präsumptivtest bestimmten den; auf ihnen beruht der allgemein angewendete Gehalte mit den Gehalten nach der Adsorption zweier heterophile Antikörpertest für diese Krankheit. weiterer Serenproben im Differentialtest vergleicht, Obgleich heterophile Antikörper in den Seren von so kann man die Art der im Testserum vorhandenen S0% aller mit Mononukleose infizierten Patienten 20 Antikörper bestimmen. Zum Beispiel ist bei Vergefunden werden, so ist bemerkenswert, daß diese Wendung von Pferdenieren- und Rinderzellenantigenen Antikörper auch im Blut von Personen, die diese der heterophile Antikörpertest für infektiöse Mononu-Krankheit nicht haben, vorhanden sind. So können kleose positiv, wenn beim Differentialtest bei der Addie Antikörper durch Injektion von biologischen Sub- sorption des Serums am Pferdenierenantigen keine stanzen, die Fferdeserum enthalten, erzeugt werden, 25 vollständige Entfernung der Antischafzellen-Aggluinsbesondere bei Personen, die nach diesen Injektionen tinine stattfindet, wogegen durch Adsorption an dem eine Serumerkrankung zeigen. Weiterhin können sie Rinderzellenantigen die Antischafagglutinine vollauf natürliche Weise in geringen Mengen als so- ständig entfernt werden.related biological substances were found- If one then determined in the presumptive test the; on them rests the generally applied contents with the contents after the adsorption of two heterophile antibody test for this disease. compares further sera samples in the differential test, Although there are heterophile antibodies in the sera of so one can determine the type of those present in the test serum S0% of all patients infected with mononucleosis can determine 20 antibodies. For example, is found at It is noteworthy that this turn of horse kidney and bovine cell antigens Antibodies also found in the blood of people who took this the heterophile antibody test for infectious Mononu disease do not have, are present. So kleose can be positive if the differential test with the Addie Antibodies by injection of biological sub- sorption of the serum on the horse kidney antigen none punches containing horse serum are generated, in particular complete removal of the anti-sheep cell aggluities in persons who after these injections tinine takes place, whereas by adsorption on the show a serum disorder. In addition, they can contain bovine cell antigens which contain anti-sheep agglutinins can be removed naturally in small quantities rather than immediately.
genannte Forssmannsche Antikörper oder native Man sieht also, daß eine verhältnismäßig kompli-Heterophile im Blutstrom erscheinen. Infolge dieser 30 zierte und zeitraubende serologische Testreihe erVielzahl von heterophilen Antikörpern, die in den forderlich ist, um die Anwesenheit von heterophilen Testseren vorhanden sein können, war es bisher nötig, Antikörpern, die für die infektiöse Mononukleose verhältnismäßig komplizierte, mehrstufige serologische charakteristisch sind, festzustellen und diese AntiTests anzuwenden, um die heterophilen Antikörper, körper von den natürlich auftertenden Antikörpern die für die Mononukleose charakteristisch sind, zu 35 und von den Antikörpern, die für die Serumkrankheit identifizieren und zu unterscheiden. charakteristisch sind, zu unterscheiden. Weiterhin Die üblichen serologischen Tests für die hetero- wurde gefunden, daß die Titration mit Schaferythrophilen Antikörper beruhen darauf, daß diese Anti- Zyten häufig falsche positive Ergebnisse im Glaskörper durch ihre Fähigkeit, eine Agglutination von plattentest liefert, was weitere zeitraubende Versuche Schaferythrozyten hervorzurufen, nachgewiesen wer- 40 erfordert, bei denen der Präsumptivtest und der den können. Um Mononukleose nachzuweisen, wurde Differentialtest, wie sie vorstehend beschrieben sind, unter Ausnutzung dieser Erscheinung ein dreistufiger angewendet werden müssen. In einem Fall wurden diagnostischer Test entwickelt. Zuerst wird ein »Glas- 9% falsch positiv reagierende Seren gefunden (Daplattentest« durchgeführt, bei dem das auf heterophile ν i d s ο h η L, Further Studies on Heterophile AntiAntikörper verdächtige Serum mit Schaferythrozyten 45 bodies in Serum Sickness, J. Immunolog., 18, S. 31 titriert wird, um alle darin vorhandenen Antikörper bis 49 [1930]).So called Forssmann's antibody or native one can see that a relatively compli-heterophile appear in the bloodstream. As a result of this ornate and time-consuming serological test series of the large number of heterophile antibodies that may be present in the test sera for the presence of heterophile test sera, it has hitherto been necessary to determine antibodies that are relatively complex, multi-level serological characteristics of infectious mononucleosis and to use these anti-tests to identify and distinguish the heterophile antibodies, bodies from the naturally occurring antibodies characteristic of mononucleosis, and from the antibodies that are responsible for serum sickness. are characteristic to distinguish. Furthermore, the conventional serological tests for hetero- was found that the titration with Schaferythrophilen antibodies based on the fact that this anti-Z often yten false positive results in the vitreous by their ability provides an agglutination of plate test, causing what other time-consuming trials sheep erythrocytes, 40 is required, in which the presumptive test and the can. In order to detect mononucleosis, the differential test as described above, taking advantage of this phenomenon, would have to be applied in three stages. In one case, diagnostic tests were developed. First, a »glass 9% false positive reacting serum is found (Daplatte test«), in which the serum with sheep erythrocytes 45 bodies in Serum Sickness, J. Immunolog., Suspected of being heterophile ν ids ο h η L, Further Studies on Heterophile AntiAntibodies 18, p. 31 is titrated to all antibodies present in it up to 49 [1930]).
zu agglutinieren. Es wurde weiterhin vorgeschlagen, für den heteroFalls
die Agglutination positiv ist und das Vor- philen Antikörpertest auf infektiöse Mononukleose
handensein dieser Antikörper anzeigt, wird ein rohe Pferdeerythrozyten an Stelle von Schaferythrozweiter
»Präsumptivtest« durchgeführt, bei dem meh- 50 zyten zu verwenden (P. B e e r, The Heterophile Antirere
Proben des Testserums in Reihenverdünnung mit bodies in Infectious Mononucleosis and after the
den Erythrozyten titriert werden. Mit diesem Test soll Injection of Serum, J. Clin. Invest, 15, S. 591 bis 599
der Titer des gesamten heterophilen Antikörper- [1936]; A. M. B arr ett, The Serological Diagnosis
gehalts des Testserums bestimmt werden, der aus- of Glandular Fever [Infectious Mononucleosis)]: A
reicht, um eine Agglutination der Erythrozyten zu 55 New Technique, J. Hyg., 41, S. 330 bis 343 [1941]).
erzeugen. Es wurde jedoch gefunden, daß dadurch die Spe-Um den »Präsumtivtest« zu bestätigen und um die zifität des Agglutinationstests nicht verbessert wurde,
Art der im Testserum vorhandenen heterophilen Anti- weshalb dieser Ersatztest nicht empfohlen wurde
körper zu unterscheiden, ist es gewöhnlich erwünscht, (A. M. B a r r e 11, a. a. O., S. 334).
einen dritten oder einen »Differentialtest« auf Hetero- 60 Die Verwendung von rohen Schaferythrozyten als
phile durchzuführen. Bei diesem Test werden. zwei Testreagens für den serologischen Nachweis der Moweitere
Proben des ursprünglichen Testserums mit nonukleose wurde auch deswegen für unzweckmäßig
zwei Antigenen getestet, von denen das erste in der angesehen, weil man die frischen Zellen nach einer
Lage ist, alle Forssmannschen und Serumkrankheits- Lagerzeit von einer Woche wegwerfen und häufig neue
Antikörper, die in der behandelten Probe vorhanden 65 Erythrozytenreagenssuspensionen herstellen muß. Es
sind, zu adsorbieren und von denen das zweite in der wurde bereits vorgeschlagen (C. D. C 0 x, Preserva-Lage
ist, alle Antikörper der infektiösen Mononu- tion of Sheep Erythrocytes and Their Use in a Rapid
kleose und der Serumkrankheit, die in der anderen Plate Titration of Heterophilic Antibodies in Infec-to agglutinate. It has also been suggested that if the agglutination is positive for heteroFalls and the pre-phile antibody test for infectious mononucleosis indicates the presence of these antibodies, a crude horse erythrocyte should be carried out instead of sheep erythrocytes. B eer, The Heterophile Antirere Samples of the test serum in serial dilution with bodies in Infectious Mononucleosis and after the erythrocytes are titrated. Injection of Serum, J. Clin. Invest, 15, pp. 591 to 599, the titer of the total heterophile is to be titrated with this test Antibody [1936]; AM B arrett, The Serological Diagnosis content of the test serum determined from Glandular Fever [Infectious Mononucleosis]]: A sufficient to agglutinate the erythrocytes 55 New Technique, J. Hyg., 41, pp. 330 to 343 [1941]).
produce. It was found, however, that this did not improve the specificity of the "presumptive test" and the accuracy of the agglutination test, differentiating the type of heterophilic anti-bodies present in the test serum, which is why this substitute test was not recommended, it is usually desirable (AM Barre 11, op. Cit., P. 334).
To conduct a third or "differential test" for hetero- 60 The use of raw sheep erythrocytes as phile. Be in this test. Two test reagents for the serological detection of the mo Further samples of the original test serum with nonucleose was therefore tested for inexpedient two antigens, the first of which is considered to be because the fresh cells are after a location, all Forssmann's and serum disease storage time of one week throw away and often new antibodies that must be produced in the treated sample 65 red blood cell reagent suspensions. There are to be adsorbed, and the second of which has already been proposed in the (CD C 0 x, Preserva-Able, All Antibodies to Infectious Mononu- tion of Sheep Erythrocytes and Their Use in a Rapid Kleose and Serum Sickness, Which in the other Plate Titration of Heterophilic Antibodies in Infec-
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tious Mononucleosis, J. Lab. & Clin. Med., 48, S. 298 trhozyten der Gattung Equus eine starke positive bis 303 [1956]), diese Schwierigkeit dadurch zu um- Agglutination bei Seren von Patienten mit infektiöser gehen, daß man die Schaferythrozyten durch Behänd- Mononukleose zeigen, reagieren Seren mit niedrigen lung mit Formaldehyd konserviert. Leider wird jedoch Gehalten an heterophilen Antikörpern, außer denen, durch die Konservierung dieser Zellen die Anzahl der 5 die für die infektiöse Mononukleose charakteristischtious Mononucleosis, J. Lab. & Clin. Med., 48, p. 298 thyroid cells of the genus Equus have a strong positive to 303 [1956]), this difficulty in avoiding agglutination in sera from patients with infectious go that you show the sheep erythrocytes by hand- mononucleosis, sera react with low preserved with formaldehyde. Unfortunately, however, levels of heterophilic antibodies are found, except for those by preserving these cells the number of 5 which is characteristic of infectious mononucleosis
falschen positiven Versuchsergebnisse bei der Titration sind, nicht mit den mit Aldehyd behandelten Eryder konservierten Schaferythrozyten mit heterophilen throzyten der Gattung Equus. Glasplattentests mitfalse positive test results in the titration are not with the aldehyde treated Eryder preserved sheep erythrocytes with heterophilic throcytes of the genus Equus. Glass plate tests with
Agglutinen nicht vermindert, weshalb auch die Spe- diesen Erythrozyten liefern deshalb mehr spezifischeAgglutins are not diminished, which is why the special erythrocytes also supply more specific ones
zifität des heterophilen Antikörpers für die infektiöse positive oder negative Hinweise und machen in vielenspecificity of the heterophilic antibody for the infectious positive or negative indications and make in many
Mononukleose nicht erhöht wird. io Fällen die weiteren zeitraubenden serologischen TestsMononucleosis does not increase. io cases the further time-consuming serological tests
Die Behandlung von Erythrozyten verschiedener unnötig oder vermindern zumindest die Anzahl derThe treatment of erythrocytes different unnecessarily or at least reduce the number of
Herkunft mit Aldehyden, insbesondere Formaldehyd, Präsumptiv- und Differentialtests, die noch erforder-Origin with aldehydes, especially formaldehyde, presumptive and differential tests that are still required
und anderen Stoffen, zur Stabilisierung und Konser- lieh sind, um die Anwesenheit der für die infektiöseand other substances that are used to stabilize and preserve the presence of the infectious
vierung ist an sich bekannt (Herstellung menschlicher Mononukleose charakteristischen Antikörper zu be-is known per se (production of antibodies characteristic of human mononucleosis to
Test-Erythrozyten aus Zeitschrift für Immunitäts- und 15 stätigen.Test erythrocytes from Journal of Immunity and 15 years.
Allergieforschung, 127, S. 459 bis 468 [1964]; Behänd- Vorzugsweise enthält das Reagens gemäß der Erlung
menschlicher Erythrozyten mit Formaldehyd, findung Pferdeerythrozyten, die mit 0,2 bis 1 Voluma.
a. 0.125, S. 326 bis 337 [1963]; Behandlung mensch- teil eines geeigneten Aldehyds, vorzugsweise Formlicher
und verschiedener tierischer Erythrozyten, dar- aldehyd, je Volumteil Erythrozyten, behandelt sind,
unter auch Pferdeerythrozyten mit Formaldehyd, 20 Die Behandlung kann bei jeder geeigneten Temperatur
a.a.O., 126, S. 312 bis 324 [1964]). Den genannten durchgeführt werden, wobei die Reagenzien vorzugs-Literaturstellen
ist jedoch nicht zu entnehmen, daß weise bei Temperaturen von etwa 4 bis etwa 400C
derartig behandelte Erythrozyten als Testreagens für umgesetzt werden. Die so mit dem Aldehyd behaninfektiöse
Mononukleose verwendet wurden. delten Zellen sind in einer Kochsalzlösung suspen-Der
Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein 25 diert, derart, daß die Suspension etwa 2 bis 6 Volum-Reagens
zum Nachweis der infektiösen Mononukleose prozent Zellen und zweckmäßig noch ein geeignetes
zu schaffen, das spezifischer ist als das bekannte Schaf- Konservierungsmittel, wie Natriumazid, Phenol oder
erythrozyten enthaltende Reagens und das wegen Natriumäthylenmercurithiosalicylat, enthält. Es wurde
seiner besseren Spezifität praktisch keine falschen gefunden, daß die so hergestellten Reagenzien auch
positiven Ergebnisse liefert, so daß die bisher erfor- 30 noch nach 6 Wochen oder mehr stabil sind, wenn sie
derlichen zeitraubenden Präsumptiv- und Differen- bei Temperaturen von etwa 4° C gelagert werden,
tialtests nicht mehr nötig sind. Weiterhin soll das Die mit Formaldehyd behandelten Pferdeerythro-Reagens
stabil und auch noch nach langer Lagerzeit zyten bzw. die anderen, mit Aldehyd behandelten Eryverwendbar
sein. throzyten der Gattung Equus werden gegen die Test-Gegenstand der Erfindung ist ein Reagens zum 35 seren titriert, wobei ein Glasplattentest, wie er vorNachweis
der infektiösen Mononukleose, das in einer stehend beschrieben wurde, angewendet wird. Diese
Kochsalzlösung suspendierte Erythrozyten zur Agglu- Glasplattentests liefern einen eindeutigen makroskotination
der heterophilen Antikörper in dem zu titrie- pischtn Nachweis für die Anwesenheit von heterorenden
Testserum enthält; dieses Reagens ist dadurch philen Antikörpern, wobei positiv reagierende Seren
gekennzeichnet, daß die Erythrozyten von der Gattung 40 eine grobe Agglutination zeigen, die sich gewöhnlich
Equus stammen und in an sich bekannter Weise mit innerhalb einer Minute nach dem Titrieren ausbildet,
einem wasserlöslichen, mit den Erythrozyten vertrag- . In den Figuren sind Agglutinationsbilder von tylichen
Aldehyd behandelt sind. Die Suspendierung von pischen Glasplattentests bei Verwendung von mit
Erythrozyten in physiologischer Kochsalzlösung ist bei Formaldehyd behandelten Pferdeerythrozytenreagenserologischen
Untersuchungen bekannt (vgl. zum 45 zien gemäß der Erfindung angegeben.
Beispiel N. H e u m i η g, Klin. Labotaroriumsdia- F i g. 1 zeigt eine negative Kontrollprobe einer
gnostik, Verlag Urban und Schwarzenberg, 1. Auf- Salzlösung und
lage, 1959, S. 220). F i g. 2 ein grobes Agglutinationsbild bei einemAllergieforschung, 127, pp. 459 to 468 [1964]; Hand- Preferably, the reagent contains according to the invention of human erythrocytes with formaldehyde, finding horse erythrocytes with 0.2 to 1 volume. a. 0.125, pp. 326 to 337 [1963]; Treatment of human part of a suitable aldehyde, preferably formal and various animal erythrocytes, daraldehyde, per part by volume of erythrocytes, including horse erythrocytes with formaldehyde, 20 The treatment can take place at any suitable temperature, loc. Cit., 126, p. 312 to 324 [ 1964]). Are performed the aforementioned, in which the reagents preferential references is not to be inferred that are implemented as at temperatures from about 4 to about 40 0 C thus-treated erythrocytes as test reagent. The mononucleosis thus treated with the aldehyde was used. Delten cells are suspen-The invention is based on the object of a 25 diert such that the suspension about 2 to 6 volume reagent for the detection of infectious mononucleosis percent cells and expediently to create a suitable one that is more specific than the well-known sheep preservative such as sodium azide, phenol or red blood cell reagent and the sodium ethylene mercurithio salicylate because of. Because of its better specificity, practically no false results have been found that the reagents prepared in this way also give positive results, so that the previously required ones are still stable after 6 weeks or more if they use the time-consuming presumptive and differential at temperatures of about 4 weeks ° C are stored,
tial tests are no longer necessary. Furthermore, the horse erythro-reagent treated with formaldehyde should be stable and still be usable after a long storage period, or the other ery treated with aldehyde. Thrrocytes of the genus Equus are titrated against the test object of the invention is a reagent for the sera, using a glass plate test, as it is before the detection of infectious mononucleosis, which was described in a standing, is used. Erythrocytes suspended in this saline solution for agglutinating glass plate tests provide an unambiguous macroscotination of the heterophile antibodies in which the titration contains proof of the presence of heterogeneous test serum; This reagent is characterized by phile antibodies, with positively reacting sera being characterized by the fact that the erythrocytes of the genus 40 show a coarse agglutination, which usually originates from Equus and forms in a manner known per se with within one minute after titration, a water-soluble one with the Erythrocytes contracted. In the figures, agglutination patterns are treated by common aldehyde. The suspension of pischen glass plate tests when using erythrocytes in physiological saline solution is known for horse erythrocyte reagent serological examinations treated with formaldehyde (cf. for the information given according to the invention.
Example N. H eumi η g, Klin. Labotaroriumsdia- F i g. 1 shows a negative control sample of a gnostik, Verlag Urban and Schwarzenberg, 1. Auf-Salzlösung and
lage, 1959, p. 220). F i g. 2 shows a rough agglutination image in one
Die Erythrozyten der Gattung Equus können mit positiven Glasplattenversuch.The erythrocytes of the genus Equus can be tested with positive glass plates.
einem geeigneten wasserlöslichen Aldehyd, der mit 5° Die nachstehenden Beispiele erläutern bevorzugtea suitable water-soluble aldehyde, which is preferred at 5 ° The following examples illustrate preferred
den behandelten roten Blutkörperchen verträglich ist, Ausführungsformen des Reagens gemäß der Er-the treated red blood cells is compatible, embodiments of the reagent according to the invention
d. h. diese nicht zerstört, behandelt sein. Geeignete findung.d. H. this not be destroyed, treated. Suitable finding.
Aldehyde sind z. B. Formaldehyd, Glutaraldehyd oder B e i s ο i e 1 1
Pyruvaldehyd.Aldehydes are z. B. formaldehyde, glutaraldehyde or biscuit ο ie 1 1
Pyruvaldehyde.
Es wurde gefunden, daß bei Verwendung der mit 55 Es wurde eine 4%ige Suspension von mit Form-Aldehyd behandelten Erythrozyten der Gattung Equus aldehyd behandelten Pferdeerythrozyten in einer Salzeine bedeutend niedrigere Anzahl an falschen positiven lösung, die 0,1 % Natriumazid als Konservierungs-Ergebnissen als bei Verwendung von Testantigenen mittel enthielt, hergestellt. Die mit Formaldehyd beaus Schaferythrozyten erhalten wird. In einem Fall handelten Erythrozyten wurden wie folgt erhalten: ergab bei Verwendung von mit Formaldehyd behan- 60 Pferdeblut wurde direkt in Alseversche Lösung eindelten Pferdeerythrozyten als serologisches Reagens geblutet, so daß das fertige Gemisch zur Hälfte aus von 300 getesteten Seren nur eines eine falsche po- Pferdeblut und zur anderen Hälfte aus Alseverscher sitive Agglutination, was einem Anteil von nur 0,4 % Lösung bestand. Zu 50 ml dieses Gemisches wurden an falschen positiven Ergebnissen entsprach. An- 20 ml 50%ige Formaldehydlösung gegeben, und das dererseits ist, wie schon gesagt, aus der Literatur be- 65 Gemisch wurde in einen Brutschrank von 370C gekannt, daß bei einer Titration mit Schaferythrozyten bracht.It was found that when using the with 55 It was a 4% suspension of form aldehyde-treated erythrocytes of the genus Equus aldehyde treated horse erythrocytes in a salt a significantly lower number of false positive solution containing 0.1% sodium azide as a preservative. Results than when using test antigens were produced. Which is obtained with formaldehyde from sheep erythrocytes. In one case treated erythrocytes were obtained as follows: when using formaldehyde-treated horse blood, horse erythrocytes directly dipped into Alsescher's solution were bled as a serological reagent, so that half of the finished mixture of 300 sera tested resulted in only one having a wrong po- Horse blood and the other half from Alseverscher-sensitive agglutination, which consisted of only 0.4% solution. False positive results were equivalent to 50 ml of this mixture. Toggle 20 ml of 50% added formaldehyde solution, which is the other hand, as already said, from the literature loading 65 mixture was known in an incubator of 37 0 C, that introduced at a titration with sheep erythrocytes.
9 % der Seren falsch positiv reagierten. Ein Tropfen der Suspension in der Salzlösung wurde9% of the sera reacted false positively. One drop of the suspension in the saline solution was added
Während also die mit Aldehyd behandelten Ery- jeweils zu einem Tropfen eines zu untersuchendenSo while the aldehyde-treated Ery- each add a drop of one to be examined
Serums auf einer ebenen Glasplatte gegeben, bei Raumtemperatur mit einem Holzstäbchen vermischt, 2 Minuten verrieben und innerhalb dieser Zeit unter indirektem Licht auf die Agglutination geprüft. Bei jedem Glasplattenversuch wurde gleichzeitig ein Kontrollversuch mit Kochsalzlösung durchgeführt. Bei den Glasplattentests wurden mit der Salzkontrollösung regelmäßig klare oder feinkörnige Bilder, wie sie in F i g. 1 dargestellt sind, beobachtet. Positiv reagierende Seren erzeugten dagegen grobe Agglutinationsbilder, wie sie in F i g. 2 dargestellt sind.Serum is placed on a flat glass plate, mixed with a wooden stick at room temperature, Rubbed in for 2 minutes and checked for agglutination within this time under indirect light. at a control experiment with saline solution was carried out at the same time as each glass plate experiment. Both Glass plate tests with the salt control solution regularly produced clear or fine-grained images, as shown in F i g. 1 are observed. In contrast, positively reacting sera produced rough agglutination images, as shown in FIG. 2 are shown.
Die mit Formaldehyd behandelten Pferdezellen wurden bei Glasplattentests mit 978 verschiedenen Testseren verwendet, und die Ergebnisse wurden mit serologischen Diagnosen verglichen, die unter Verwendung des Glasplattentests, des Präsumptivtests und des Differentialtests nach Davidsohn (David s ο h n, L Serologie Diagnosis of Infectious Mononucleosis, J. A. M. Α., 108, S. 289 bis 295 [1937]) erhalten wurden. Bei den 978 Tests differierten die Ergebnisse, die nach dem einfachen Glasplattentest unter Verwendung von mit Formaldehyd behandelten Pferdeerythrozyten erhalten wurden, von den nach dem Differentialtest erhaltenen nur in neun Fällen, was einer Nachweisgenauigkeit von 99 % entspricht. In der Tabelle I sind die positiven und negativen Indikationen über das Vorliegen der infektiösen Mononukleose (IM) nach den jeweiligen Tests miteinander verglichen.The formaldehyde treated horse cells were in glass plate tests with 978 different Test sera were used, and the results were compared with serological diagnoses made using the glass plate test, the presumptive test and the differential test according to Davidsohn (David s ο h n, L Serologie Diagnosis of Infectious Mononucleosis, J. A. M. Α., 108, pp. 289 to 295 [1937]). The results of the 978 tests differed, those treated with formaldehyde after the simple glass plate test using Horse erythrocytes were obtained in only nine cases of those obtained after the differential test corresponds to a detection accuracy of 99%. In Table I are the positive and negative indications on the presence of infectious mononucleosis (IM) according to the respective tests.
Tabelle I
Gesamtergebnisse der TestsTable I.
Overall results of the tests
Reaktionreaction
der mitthe one with
Formaldehydformaldehyde
behandeltentreated
PferdezellenHorse cells
Positiv positive
Negativ negative
Insgesamt All in all
Gesamtzahl der FälleTotal number of cases
295 683 978 Differentialtest
nach Davidsohn295 683 978 differential test
after Davidsohn
pos. IMpos. IN THE
290
4290
4th
neg. IMneg. IM
5
6795
679
Diagnosegenauigkeit
99%Diagnostic accuracy
99%
Mehrere Testseren, die mit dem mit Formaldehyd behandelten Pferdeerythrozyten titriert wurden, wurden auch gegen Schafzellen titriert, um die Leistungsfähigkeit der Glasplattentests mit dem üblichen rohen Schafzellenreagenz gegenüber den mit Formaldehyd behandelten Pferdezellenreagenz gemäß der Erfindung zu vergleichen. Bei diesen Tests wurden 250 Seren, die von Blutspendern und von Patienten mit einer Vielzahl von Krankheiten erhalten wurden, als Kontrollproben verwendet. Von diesen Seren bewirkte ein Serum eines Patienten mit Bronchialasthma eine positive Agglutination, während 249 Seren bei den mit Formaldehyd behandelten Pferdezellen negativ reagierten.Several test sera titrated with the formaldehyde treated horse erythrocyte were made also titrated against sheep cells to test the performance of the glass plate tests with the usual raw Sheep cell reagent versus the formaldehyde-treated horse cell reagent according to the invention to compare. These tests used 250 sera obtained from blood donors and from patients with a variety from diseases were used as control samples. Of these sera, one serum was effective of a patient with bronchial asthma a positive agglutination, while 249 sera in the horse cells treated with formaldehyde reacted negatively.
Weiterhin wurden 117 Seren von Patienten mit klinischen Symptomen, die auf infektiöse Mononukleose schließen ließen, untersucht. Von diesen Seren agglutinierten 28 sowohl frische Schafzellen, als auch mit Formaldehyd behandelte Pferdezellen; 41 Seren reagierten weder mit frischen Schafzellen, noch mit den mit Formaldehyd behandelten Pferdezellen; 47 Seren reagierten positiv mit Schafzellen und negativ mit den mit Formaldehyd behandelten Pferdezellen. Alle letztgenannten Seren wurden dann gegen frische Schafzellen titriert. Von den 47 Seren ergaben 25 einen Titer von 1: 7, 16 einen Titer von 1:14 und 6 einen Titer von 1: 28. Keines dieser Seren erfüllte die serologischen Kriterien für die Diagnose der infektiösen Mononukleose. Von den 28 Seren, die positiv mit den Schafzellen und den mit Formaldehyd behandelten Pferdezellen reagierten, wurden 25 nach dem Differentialtest als infektiöse Mononukleose diagnostiziert.Furthermore, 117 sera were collected from patients with clinical symptoms indicative of infectious mononucleosis closed, examined. Of these sera, 28 agglutinated both fresh sheep cells and with Formaldehyde treated horse cells; 41 sera reacted neither with fresh sheep cells nor with the horse cells treated with formaldehyde; 47 sera reacted positively with sheep cells and negatively with the horse cells treated with formaldehyde. All of the latter sera were then tested against fresh sheep cells titrated. Of the 47 sera, 25 gave a titer of 1: 7, 16 a titer of 1:14 and 6 one Titer of 1:28. None of these sera met the serological criteria for the diagnosis of infectious Mononucleosis. Of the 28 sera that treated positive with sheep cells and those treated with formaldehyde Horse cells responded, 25 were diagnosed as infectious mononucleosis by the differential test.
Tabelle II erläutert die unterschiedliche Reaktivität der Schafzellen und der mit Formaldehyd behandelten Pferdezellen beim Nachweis der infektiösen Mononukleose. Table II illustrates the different reactivity of sheep cells and those treated with formaldehyde Horse cells in the detection of infectious mononucleosis.
Vergleich der Reaktivität von Schafzellen und mit Formaldehyd behandelten Pferdezellen bei Seren von Patienten, bei denen Verdacht auf auf infektiöse Mononukleose bestandComparison of the reactivity of sheep cells and formaldehyde-treated horse cells in sera from Patients suspected of having infectious mononucleosis
behandelter
Pferdezellenwith formaldehyde
treated
Horse cells
der FälleTotal number
of the falls
1:14of serums
1:14
1:28without IM
1:28
negativ
für IMidsoh η
negative
for IM
positiv
für IMafter D a \
positive
for IM
(6) Patienten mit Bronchialasthma, Diabetes mellitus bzw. nichtidentifizierte Infektion der Atmungsorgane,(6) Patients with bronchial asthma, diabetes mellitus or unidentified infections of the respiratory organs,
(7) Serum eines Rekonvaleszenten,(7) convalescent serum,
(8) Patient mit Bronchialasthma.(8) patient with bronchial asthma.
Es wurde eine 4%ige Suspension von mit Glutaraldehyd (C5H8O3) behandelten Pferdeerythrozyten in einer Kochsalzlösung, die 0,1% Natriumazid als Konservierungsmittel enthielt, hergestellt. Die mit Glutaraldehyd behandelten Erythrozyten wurden wie folgt erhalten: Pferdeblut wurde direkt in Alseversche Lösung eingeblutet, so daß das endgültige Gemisch zur Hälfte aus Pferdeblut und zur Hälfte aus Alseverscher Lösung bestand. Zu 50 ml dieses Gemisches wurden 50 ml 25°/oiger Glutaraldehyd, 16 ml 10%ige Natriumcarbonatlösung (bis zu einem pH-Wert von 7,0) und 50 ml 0,15molarer Phosphatpuffer (bis zu einem pH-Wert von 7,2) gegeben. Das Gemisch wurde dann 8 Stunden auf 25° C gehalten.A 4% suspension of glutaraldehyde (C 5 H 8 O 3 ) treated horse erythrocytes in a saline solution containing 0.1% sodium azide as a preservative was prepared. The erythrocytes treated with glutaraldehyde were obtained as follows: Horse blood was bled directly into Alsever's solution so that the final mixture consisted of half horse blood and half Alsescher's solution. To 50 ml of this mixture was added 50 ml of 25 ° / o sodium glutaraldehyde, 16 ml of 10% sodium carbonate solution (until a pH value of 7.0) and 50 ml 0,15molarer phosphate buffer (up to a pH value of 7, 2) given. The mixture was then held at 25 ° C. for 8 hours.
Die mit Glutaraldehyd behandelten Zellen wurden bei Glasplattentests mit zwanzig verschiedenen Testseren verwendet, und die Ergebnisse wurden mit den Diagnosen des Präsumptivtests und des Differentialtests nach Davidsohn verglichen. Die Ergebnisse des so durchgeführten Tests wichen von den Ergebnissen des Davissohn-Tests nur in einem Fall ab.The cells treated with glutaraldehyde were tested on glass plates with twenty different test sera used, and the results were compared with the diagnoses of the presumptive test and the differential test compared to Davidsohn. The results of the test carried out in this way deviated from the results of the Davissohn test in only one case.
2525th
Es wurde eine 4%ige Suspension von mit Pyruvaldehyd behandelten Pferdeerythrozyten in Kochsalzlösung mit 0,1 % Natriumazid als Konservierungsmittel hergestellt. Die mit Pyruvaldehyd behandelten Erythrozyten wurden zuerst wie folgt erhalten: Pferdeblut wurde direkt in Alseversche Lösung eingeblutet so daß das endgültige Gemisch zur Hälfte aus Pferdeblut und zur anderen Hälfte aus Alseverscher Lösung bestand. Zu 50 ml dieses Gemisches wurden 50 ml einer Pyruvaldehydlösung, die 8 ml 43%igen Pyruvaldehyd, 17 ml einer l%igen Natriumcarbonatlösung und 25 ml eines 0,15molaren Phosphatpuffers enthielt, gegeben. Das gebildete Gemisch hatte einen pH-Wert von 6,5 und wurde dann auf einer Temperatur von 25° C gehalten.A 4% suspension of pyruvaldehyde-treated horse erythrocytes in saline was obtained Made with 0.1% sodium azide as a preservative. Those treated with pyruvaldehyde Erythrocytes were first obtained as follows: Horse blood was bled directly into Alsever's solution so that the final mixture was half horse blood and the other half Alseverscher solution duration. 50 ml of a pyruvaldehyde solution, the 8 ml of 43% pyruvaldehyde, Contained 17 ml of a 1% sodium carbonate solution and 25 ml of a 0.15 molar phosphate buffer, given. The resulting mixture had a pH of 6.5 and was then at a temperature kept at 25 ° C.
Die mit Pyruvaldehyd behandelten Pferdezellen wurden bei Glasplattentests mit zwanzig verschiedenen Testseren verwendet, und die Ergebnisse wurden mit den serologischen Diagnosen des Präsumptivtests und des Differentialtests nach Davidsohn verglichen. Die Ergebnisse der zwanzig einfachen Glasplattentests nach diesem Beispiel wichen nur in einem Fall von den Ergebnissen des Davidsohn-Tests ab.The pyruvaldehyde-treated horse cells were tested in glass plate tests with twenty different Test sera were used and the results were compared with the serological diagnoses of the presumptive test and of the Davidsohn differential test. The results of the twenty simple glass plate tests according to this example only deviated from the results of the Davidsohn test in one case.
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|---|---|---|---|
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