DE1598105B1 - Matrixsubstanz fuer die Elektrophorese - Google Patents
Matrixsubstanz fuer die ElektrophoreseInfo
- Publication number
- DE1598105B1 DE1598105B1 DE19661598105D DE1598105DA DE1598105B1 DE 1598105 B1 DE1598105 B1 DE 1598105B1 DE 19661598105 D DE19661598105 D DE 19661598105D DE 1598105D A DE1598105D A DE 1598105DA DE 1598105 B1 DE1598105 B1 DE 1598105B1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- electrophoresis
- carrageenan
- migration
- substance
- matrix substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44747—Composition of gel or of carrier mixture
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44752—Controlling the zeta potential, e.g. by wall coatings
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
1 2
Die Erfindung betrifft eine Matrixsubstanz für die die ihre Wanderung durchgeführt haben, während die
Elektrophorese, bestehend aus Agarose und einer Absorption der Strahlung gemessen wird, um auf diese
Pufferlösung. Weise die unterschiedlichen Anteile in der analysierten
Eine aus Agarose und einer Pufferlösung bestehende Substanz der Menge nach bestimmen zu können.
Matrixsubstanz wird schon seit langem in der Gel- 5 In dem nun folgenden Beschreibungsteil soll die
elektrophorese verwendet (siehe z. B. Mikrochimica Erfindung unter Bezugnahme auf die Zeichnung im
Acta, Jg. 1963, S. 880 bis 885). einzelnen näher erläutert werden. In der Zeichnung ist
Die Elektrophorese eignet sich insbesondere sehr F i g. 1 die schematische Darstellung einer Vorgut
für die klinische Analyse bei der Feststellung des richtung, teilweise im Schnitt, in welcher die neue verVorhandenseins
und der Mengen von Substanzen, io besserte elektrophoretische Matrixsubstanz benutzt
wie z. B. Enzymen, Seren, Kohlenwasserstoffen und werden kann,
Proteinen einschließlich der Albumine und der Globu- F i g. 2 ein Diagramm, welches die Anteile der
line usw. Matrixsubstanz aufzeigt, welche bereits die Wanderung
Moleküle, die Ionen enthalten und verschiedene durchgeführt haben, und
Substanzen bilden, werden auf einem Medium oder 15 F i g. 3 eine Kurvenschar, die das Ergebnis der
einer Matrix für die Zwecke der Ionenwanderung in graphischen Aufzeichnung der Anteile wiedergibt,
ein elektrisches Feld eingebracht; man ruft dann eine welche die Wanderung durchgeführt haben und wie
Ionenwanderung hervor, die in direktem Verhältnis sie mit Hilfe einer Abschirmvorrichtung bestimmt
zu ihrer elektrischen Ladung und zu ihren physi- worden sind.
kaiischen Eigenschaften steht. Die Beweglichkeit der 20 In F i g. 1 sind 1 und 2 Behälter zur Aufnahme einer
unterschiedlichen aufgeladenen Teilchen wird außer- elektrophoretischen gepufferten Lösung 3 bzw. 4. In
dem teilweise durch die Matrixsubstanz für die Wan- die gepufferte Lösung 3 ragt eine negative Elektrode 6
derung gesteuert, auf welcher die zu untersuchende hinein, die mit der negativen Klemme einer elektrischen
Probe niedergeschlagen ist. Bei dieser Art der Elektro- Stromquelle 5 verbunden ist. Eine positive Elektrode 7
phorese findet in gewissem Umfang eine Diffusion 25 ragt in die gepufferte Lösung 4 hinein und ist an die
und eine Endosmose statt, die dadurch bewältigt positive Klemme der elektrischen Stromquelle 5 anwerden
können, daß man eine verbesserte elektrc- geschlossen. Ein stromleitender Streifen 8 verbindet
phoretische Matrixsubstanz benutzt, die eine bessere das eine Ende eines elektrophoretischen Mediums 9 für
Auflösung während des Auswertungsvorgangs er- die Wanderung mit der gepufferten Lösung 3. Ein
möglicht, der auf die Wanderung der geladenen 30 stromleitender Streifen 10 stellt die Verbindung der
Teilchen folgt. gepufferten Lösung 4 mit dem entgegengesetzten Ende Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine des Mediums 9 her. Die elektrische Spannung wird
Matrixsubstanz für die Elektrophorese, bestehend aus also an das Medium 9 angelegt, auf welches die Sub-Agarose
und einer Pufferlösung, zu schaffen, die als stanz 11 aufgelegt wird, und die unterschiedlichen
tragendes Medium für die in dem elektrophoretischen 35 Anteile innerhalb der Substanz werden veranlaßt, ihre
Verfahren zu analysierende Probe dient. Die neue Wanderung in Übereinstimmung mit ihrer Ionen-Matrixsubstanz
soll die Beweglichkeit und das Auf- beweglichkeit und ihrer physikalischen Eigenschaften
lösungsvermögen bei der Analyse verbessern. Außer- auszuführen.
dem soll bei der Elektrophorese zur Steuerung der F i g. 2 zeigt die relativen Stellungen der unter-Elektro-Endosmose
eine Substanz hinzugefügt werden, 4° schiedlichen Anteile nach erfolgter Wanderung auf
die eine Verbesserung des Auflösungsvermögens bei dem Wanderungsmittel gemäß F i g. 1. Die Serum-Serumproteinen
herbeiführt. proteine sind auf einer Linie 12 aufgetragen. Die Die gestellte Aufgabe wird bei einer Matrixsubstanz Wanderung der unterschiedlichen Anteile ist aus der
der eingangs genannten Art erfindungsgemäß gelöst F i g. 2 deutlich zu ersehen. Im allgemeinen benutzte
durch einen Zusatz von Carragenan. 45 man bisher als elektrophoretisches Medium 9 in einem
Verwendet man die Matrixsubstanz nach der Er- herkömmlichen elektrophoretischen System Agar,
findung in dem Verfahren zur Elektrophorese, dann Agar ist saure Polyinvertase, die aus den verschiewird
das Carragenan zur Steuerung der Elektro- densten roten Algen extrahiert worden ist. Das Roh-Endosmose
hinzugefügt. produkt ist allerdings so heterogen, daß es gereinigt Die zu analysierende Substanz wird im allgemeinen 50 werden muß. Agar enthält aber Säuregruppen, welche
in an sich bekannter Weise auf das Medium auf- die Elektro-Endosmose hervorrufen und die Abgetragen
oder in das Medium eingebracht, und die lesungen in einer elektrophoretischen Vorrichtung
unterschiedlichen Bruchteile innerhalb der Substanz beeinflussen. Agarose ist ein Derivat von Agar und
wandern entsprechend der Höhe der Ladung und der stellt ein genau definiertes Polysaccharat (Invertase)
physikalischen Eigenschaften der Substanz. Die bessere 55 dar, welches keine sauren Gruppen enthält. Fügt
Auflösung erreicht man durch Verbesserung der man die Agarose einer gepufferten Lösung als Wirk-Beweglichkeit
der geladenen Teilchen, die Steuerung stoff bei, dann erhält man ein elektrophoretisches
der Elektro-Endosmose sowie durch Verringerung der Medium mit gesteuerter Elektro-Endosmose. Ein
Adsorption in dem tragenden Medium. Agarose ent- solches Mittel eignet sich vorzüglich für ein analyhält
im Gegensatz zu Agar keine Säuregruppen, und 60 tisches elektrophoretisches Verfahren und liefert in
die Adsorptionseffekte werden auf ein Mindestmaß Verbindung mit Serumprotein eine Kurve, wie sie in
herabgesetzt. Das Carragenan verbessert die Beweg- F i g. 3 in gestricheltem Linienzug wiedergegeben ist.
lichkeit der unterschiedlichen Anteile mit Hilfe der Das Albumin und die Alpha-Globuline wandern vom
gesteuerten elektrischen Osmose, wodurch das Auf- Angriffspunkt der Vorrichtung aus. Die Beta-Globuline
lösungsvermögen des gesamten Systems verbessert 65 und die Gamma-Globuline beginnen ihre Wanderung
wird. Im Anschluß an die Wanderung der unter- beträchtlich später und liegen dem Angriffspunkt der
schiedlichen Anteile wird ein Strahlungsfluß erzeugt, Vorrichtung wesentlich näher. Der Angriffspunkt
der bewirken soll, daß die Anteile abgeschirmt werden, verursacht immer einen Fehler bei der Ablesung im
Bereich des Angriffspunktes der Spannung. Wandern die verschiedenen Anteile der Substanz aus dieser
Zone heraus, dann wird die Ablesegenauigkeit besser. Dementsprechend erhält man also eine Ablesung
mit sehr viel besserem Auflösungsvermögen bei der Analyse von Serumproteinen, wenn man Agarose als
Gelierungsreagens verwendet und der Agarose Carragenan hinzufügt. Carragenan enthält in hohem Maße
gebundene Sulfationen. Die Sulfationen sind an die Moleküle gebunden und verursachen eine Wanderung
einiger Proteinanteile in entgegengesetzter Richtung vom Angriffspunkt aus. Der Angriffspunkt der zu
untersuchenden Probe verursacht in diesem Bereich eine irrtümliche Ablesung der Anteile infolge der
Störung des Migrationsmediums durch den betreffenden Stoff. Die Elektro-Endosmose wird durch
die Benutzung von Carragenan als Wirkstoff geregelt. Die Agarose enthält keine Säuregruppen und ist auch
nicht ionisch, so daß durch Hinzufügen einer bekannten Menge Carragenan mit gebundenen Ionen in vorher
bestimmter Menge die Elektroendosmose regelbar ist. Die Albumin-Alpha- und Beta-Globuline wandern
vom Angriffspunkt aus nach links. Die Gamma-Globuline
weisen praktisch keine Wanderungsfähigkeit aufe die Elektro-Endosmose infolge Wanderung
der Wassermoleküle bewirkt indessen eine Massenbewegung des Unterlagemediums in entgegengesetzter
Richtung gegenüber den anderen Proteinanteilen, welche die Gamma-Globuline vom Angriffspunkt aus
wegbewegen. Die gesteuerte Wanderung bewirkt infolgedessen ein verbessertes Auflösungsvermögen. Die
relative Wanderung ergibt sich aus der Kurvenschar in F i g. 3. Dort kennzeichnet die ausgezogene Kurve
die Auswirkung der Benutzung von Carragenan, während der gestrichelte Linienzug die Wanderung
ohne den Gebrauch von Carragenan kennzeichnet.
Eine gepufferte Lösung, die zu einem zufriedenstellenden Betrieb führt, ist Natriumphosphat. Ein
bevorzugtes Beispiel einer solchen Lösung enthält 0,588 °/0 Natriumphosphat in 400 Millilitern Wasser,
wozu 0,17% Agarose und 0,0093% Carragenan hinzugefügt werden. Diese Lösung hat sich bei praktischen
Versuchen als besonders vorteilhaft erwiesen; selbstverständlich ist die Erfindung nicht auf die Verwendung
dieser speziellen Lösung beschränkt, zumal die erforderlichen Prozentgehalte sich in Abhängigkeit
von der Konzentration der Anteile an Protein, aber auch in Abhängigkeit von der Art der zu analysierenden
Stoffe ändert. So kann beispielsweise der ungefähre oder angenäherte Bereich der Prozentzahlen für
Agarose von 0,1 bis 0,3 g je Milliliter reichen. Die Pufferlösungen können aus Natriumphosphat oder
Kaliumphosphat mit einem pH-Wert von annähernd 8,8 bestehen.
Als vorteilhafte Bereiche für das Natriumphosphat kann der Bereich von 0,6 bis 0,7 g je 100 Milliliter
und für Kaliumphosphat der Bereich von etwa 0,5 bis 0,6 g je 100 Milliliter genannt werden. Carragenan
wird vorzugsweise in der »Lamda«-Form verwendet. Carragenan kann in dem Bereich von 0,01 bis 0,1 g
je 100 Milliliter benutzt werden.
Claims (3)
1. Matrixsubstanz für die Elektrophorese, bestehend aus Agarose und einer Pufferlösung,
gekennzeichnet durch einen Zusatz von Carragenan.
2. Matrixsubstanz nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Zusatz von Carragenan
im Bereich von 0,001 bis 0,1 Volumprozent liegt.
3. Matrixsubstanz nach Anspruch 2 zur Verwendung bei der Elektrophorese von Serumproteinen,
dadurch gekennzeichnet, daß der Zusatz von Carragenan weniger als 0,01 Volumprozent
beträgt.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen COPY
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US457660A US3399127A (en) | 1965-05-21 | 1965-05-21 | Electrophoresis medium using agarose and carrageenan |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE1598105B1 true DE1598105B1 (de) | 1970-09-24 |
Family
ID=23817633
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19661598105D Pending DE1598105B1 (de) | 1965-05-21 | 1966-05-11 | Matrixsubstanz fuer die Elektrophorese |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US3399127A (de) |
DE (1) | DE1598105B1 (de) |
GB (1) | GB1121449A (de) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4207166A (en) * | 1971-03-09 | 1980-06-10 | Harald Dahms | Method and apparatus for electrophoresis |
US4111784A (en) * | 1976-02-17 | 1978-09-05 | Harald Dahms | Apparatus for electrophoresis |
DE2861803D1 (en) * | 1977-06-15 | 1982-07-01 | Nat Res Dev | Electrophoresis membranes, their use in a separation method and separation apparatus |
JPS55156851A (en) * | 1979-05-25 | 1980-12-06 | Olympus Optical Co Ltd | Fractionation processing method for electrophoresis |
CA2173994C (en) * | 1993-10-14 | 1999-12-21 | Ming-De Zhu | Suppression of electroendosmosis during electrophoresis in gel-free polymer media by use of charged polymers |
US6358385B1 (en) | 1993-12-17 | 2002-03-19 | The Perkin-Elmer Corporation | Polymers for separation of biomolecules by capillary electrophoresis |
WO1995016910A1 (en) * | 1993-12-17 | 1995-06-22 | Perkin-Elmer Corporation | Uncharged polymers for separation of biomolecules by capillary electrophoresis |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US24752A (en) * | 1859-07-12 | Pobtable oven | ||
US2843540A (en) * | 1956-06-06 | 1958-07-15 | Ressler Newton | Method of electrophoresis of serum proteins |
US3062731A (en) * | 1959-11-18 | 1962-11-06 | Beckman Instruments Inc | Agar-agar system and additive |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3129158A (en) * | 1961-01-24 | 1964-04-14 | Raymond Samuel | Process for gel electrophoresis |
-
1965
- 1965-05-21 US US457660A patent/US3399127A/en not_active Expired - Lifetime
-
1966
- 1966-04-18 GB GB16896/66A patent/GB1121449A/en not_active Expired
- 1966-05-11 DE DE19661598105D patent/DE1598105B1/de active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US24752A (en) * | 1859-07-12 | Pobtable oven | ||
US2843540A (en) * | 1956-06-06 | 1958-07-15 | Ressler Newton | Method of electrophoresis of serum proteins |
US3062731A (en) * | 1959-11-18 | 1962-11-06 | Beckman Instruments Inc | Agar-agar system and additive |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US3399127A (en) | 1968-08-27 |
GB1121449A (en) | 1968-07-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69218832T2 (de) | Musteranalyse durch kapillare Elektrophorese | |
DE3586154T3 (de) | Verbessertes verfahren zur immunofixierungselektrophorese. | |
DE2142628A1 (de) | Elektrophorese Gerat | |
DD203776A5 (de) | Verfahren und vorrichtung zum messen der elektrophoretischen beweglichkeit | |
DE69210048T2 (de) | Verfahren zur elektroeluierung von einem getrennt geladenem makromolekül, wie proteine und dna/rna, enthaltendem gel und vorrichtung und mittel zur anwendung im verfahren | |
DE69212455T2 (de) | Referenzelektroden-Halbzelle | |
DE2828179A1 (de) | Vorrichtung zur elektrophoresetrennung | |
DE10047088C2 (de) | Medium für analytische und präparative Elektrophorese | |
DE1598230A1 (de) | Austauscher-Elektrode | |
DE69129555T2 (de) | Verfahren für die Trennung von ionischen Teilchen mittels Kapillar-Elektrophorese | |
DE2317273C3 (de) | Verfahren zur direkten potentiometrischen Analyse einer Reihe von Flüssigkeitsproben auf eine interessierende Substanz | |
DE2406959B2 (de) | Anordnung und verfahren zur bestimmung von antigenen | |
DE69216807T2 (de) | Kapillarelektrophorese unter verwendung dynamischer bedeckungspuffer | |
DE69113617T2 (de) | Unterdrückung der elektroendosmose bei der kapillarelektrophorese. | |
DE2532779C3 (de) | Verfahren zum elektroquantitativen Bestimmen von Proteinen | |
DE69516048T2 (de) | Elektrophoretische immunosubstraktion auf der kapillare zur klassifikation und typisierung von m-proteinen | |
EP0581081A1 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Persäuren | |
DE1598105B1 (de) | Matrixsubstanz fuer die Elektrophorese | |
DE2737953A1 (de) | Verfahren zum erzielen von antiseren | |
DE60112425T2 (de) | Voltammetrische Analyse unter Verwendung einer Amalgamelektrode | |
DE2361399A1 (de) | Fluessigkeitschromatographisches verfahren und fluessigkeitschromatograph | |
EP0262582A2 (de) | Verfahren zur Bestimmung des Konzentrationsverhältnisses von Lithiumionen zu Natriumionen und Vorrichtung zur Durchführung dieses Verfahrens | |
EP0060533A2 (de) | Elektroanalytische Messanordnung | |
DE2357039A1 (de) | Membran-elektrode zur bestimmung von saeurekonzentrationen in stark sauren loesungen | |
WO2005026715A1 (de) | Serielle isoelektrische fokussierung von immobilisierten ph-gradienten |