DE1468178A1 - Process for the isolation of the antibiotic fusidic acid from fermentation broths by extraction - Google Patents

Description

DB. ING.F.WTJESTHOFF 8 MÜNCHEN θDB. ING.F.WTJESTHOFF 8 MUNICH θ

ΒΙΡΙ» ING. G. PUI<S schwbiobkstbassb 2ΒΙΡΙ »ING. G. PUI <S schwbiobkstbassb 2

DR. E. ν. PECHMANN m.*ro» as Οβ 51DR. E. ν. PECHMANN m. * Ro »as Οβ 51 FKOTBCTFATBJfT MßlfClIKlfFKOTBCTFATBJfT MßlfClIKlf

1A-26 253 14681781A-26 253 1468178

B JB₁ aohreibung zu der Patentanmeldung B JB ₁ aohreibung to the patent application

L0VEMS IEMISKB FABHIK, VED. A. KOHGSTiSD, 11, Ballerup Byvej, Ballerup, DänemarkL0VEMS IEMISKB FABHIK, VED. A. KOHGSTiSD, 11, Ballerup Byvej, Ballerup, Denmark

betreffendconcerning

Verfahren zur Isolierung dea Antibiotikums Puaidinsäure aua gernu>iitation8brüh«n.a_urch Extraktion. Process for the isolation of the antibiotic puaidic acid also used . a _URC h extraction.

Die Erfindung betrifft ein Verfahren aur Isolierung dea neuen Antibiotikums Pusidinaäure,das auch ala Antibiotikum ZH-6 bezeichnet wird, aua, dieaea enthaltenden, KuIturflüaaigkeiten in guter Auebeute und in einem, für therapeutische Zwecke zufriedenatellenden, Reinheitagrad.The invention relates to a method aur isolation of the new antibiotic pusidina acid, the also called antibiotic ZH-6, ouch, the culture fluids containing aea in good yield and in a degree of purity which is satisfactory for therapeutic purposes.

Daa Antibiotikum wird erzeugt, indem man einen Mikroorganiamua unter geregelten Bedingungen in einem geeigneten Kulturmedium wachsen läßt. Die bekannten Pilse Oephaloaporium lamellaeoola und Tuaidium ooccineum Fuck K. Tubaki erzeugen dieseDaa antibiotic is produced by placing a microorganism in a controlled environment grows in a suitable culture medium. The well-known Pilse Oephaloaporium lamellaeoola and Tuaidium ooccineum Fuck K. Tubaki produce this

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Substanz unter geeigneten KuItürbedingungen in, für die industrielle Produktion zufriedenstellenden, Mengen. Das Fermentationsverfahren selbst fällt jedoch nicht in den Umfang der Erfindung.Substance under suitable cooling conditions in, for industrial production, quantities satisfactory. The fermentation process itself falls but not within the scope of the invention.

Das Antibiotikum Fusidinsäure ist eine schwache Säure, die mit verschiedenen anorganischen und organischen Basen Salze und außerdem Solvate, das sind Molekül» verbindungen mit gewissen Lösungsmitteln, bilden kann.The antibiotic fusidic acid is a weak one Acids, salts with various inorganic and organic bases and also solvates, these are molecules » compounds with certain solvents.

Me elektrometrische Titration des Antibiotikums in 80%-igem wässrigen Äthanol liefert einen pK-rfert, der einem pK -Y/ert von ungefähr 5 »3 in Wasser entspricht. Ferner zeigt die Titration ein Äquj.valenzgewicht der Substanz von 516 an.Me electrometric titration of the antibiotic in 80% aqueous ethanol provides one pK-rfert, which has a pK -Y / ert of about 5 »3 in Water corresponds. The titration also shows an equivalent valence weight of the substance of 516.

Untersuchungen über die chemische Struktur und analytische Daten für diese Substanz deuten auf die formel CU-jH^gOg hin. Die Verbindung scheint ein Cyelopentenopolyhydrophenanthren-Hingsystein , das durch zwei Hydroxylgruppen, eine Aoetoxygruppe und vier Methylgruppen substituiert ist und in 17-Stellung über eine Doppelbindung mit dem c< Kohlenstoffatom von 5-Methyl-4,5-hepteneäure verbunden ist, zu enthalten.Studies of the chemical structure and analytical data for this substance suggest based on the formula CU-jH ^ gOg. The connection seems a Cyelopentenopolyhydrophenanthrene Hingsystein, that by two hydroxyl groups, one aoetoxy group and four methyl groups is substituted and in the 17-position via a double bond with the c < Carbon atom linked by 5-methyl-4,5-heptenic acid is to be included.

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U68178 Die Struktur des Antibiotikums FusidinsäureU68178 The structure of the antibiotic fusidic acid

wurde bisher nicht endgültig tufgeklärt, jedoch •vird cuijenoiomen, daß die Verbindung nachstehende Formel (I) besitzt, in welcher die wellenförmigen Linien Jizeigen, daß die Konfiguration an dem betreffenden Kohlenstoffatom un^ev/iss ist und die unterbrochenen Linien, daß sich der betreffende nest in <X -Stellung befindet»has not yet been finally clarified, however • vird cuijenoiomen that the connection below Formula (I) in which the wavy lines show that the configuration at the point in question Carbon atom is un ^ ev / iss and the broken lines that the relevant nest is in <X position »

J-CO₂HJ-CO ₂ H

CH₂-OH₂-GH β C:CH ₂ -OH ₂ -GH β C:

CH, CH,CH, CH,

0OC.CH,0OC.CH,

(D(D

Das Antibiotikum Fusidinsuure ist in Wasser und Hexan schwer löslich und löslich in Äthanol, Azeton , Methylbutylketon, Amylacetat, Chloroform und
ähnlichen Lösungsmitteln.The antibiotic fusidic acid is sparingly soluble in water and hexane and soluble in ethanol, acetone, methyl butyl ketone, amyl acetate, chloroform and
similar solvents.

Wie erwähnt, kann das Antibiotikum Molekülverbindungen, sogenannte Solvate, mit einigen organischen Lösungsmitteln,insbesondere Benzol und Methanol,As mentioned, the antibiotic can have molecular compounds, so-called solvates, with some organic solvents, especially benzene and methanol,

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bilden und dieee Solvate sind gut kristallisierende Verbindungen. Deshalb kann man sich der Bildung von Solvaten bei der Extraktion und Reinigung der Verbindung bedienen· Die kristallinen Alkalisalze dee Antibiotikums Fusidinsäure sind in tfaeti er leicht löslich und können vorteilhafterweise als Bestandteileform and theee solvates are well crystallizing Links. Therefore one can see the formation of solvates during the extraction and purification of the Operating the connection · The crystalline alkali salts dee The antibiotic fusidic acid are easily soluble in tfaeti he and can advantageously be used as ingredients

en
pharmazeutischer Zubereitung/ verwendet werden. Die Salze des Antibiotikums Fusidinsäure mit organischen Aminen und insbesondere solche Salze, deren Amin-Komponente keine hydrophilen Gruppen, z.B. Hydroxylgruppen, enthält, sind in Wasser schwer löslich oder unlöslich, jedoch leicht löslich in gewiesen organischen Lösungsmitteln. Aus diesem Grunde kann das Antibiotikum Fuuidinsäure aus einer, kleine Mengen des Antibiotikumsen
pharmaceutical preparation / can be used. The salts of the antibiotic fusidic acid with organic amines and especially those salts whose amine component does not contain any hydrophilic groups, for example hydroxyl groups, are sparingly soluble or insoluble in water, but easily soluble in certain organic solvents. Because of this, the antibiotic fuuidic acid can be made from a small amount of the antibiotic

enthaltenden, wässrigen Phase in Form eines der oben erwähnten Aminsalze durch Extraktion der wässrigencontaining aqueous phase in the form of one of the above mentioned amine salts by extraction of the aqueous

Phase mit einem für das betreffende Salz geeigneten organischen Lösungsmittel isoliert werden.Phase can be isolated with an organic solvent suitable for the salt in question.

Bei bakteriologischen Untersuchungen erwies sich das Antibiotikum Fusidinsäure gegen verschiedenartige pathogene Mikroorganismen wirksam, insbesondere gegen otaphylococcue aureus_t geisserla gonorrhoea»» einschließlich penioillinresistenter Stämme derselben,In bacteriological tests, the antibiotic fusidic acid was found to be effective against various pathogenic microorganisms, in particular against otaphylococcue aureus _t geisserla gonorrhoea » » including penioillin-resistant strains thereof,

in
Meisseria mengitidea» Myoobacterium tuberoulosle^ und die streptomycin-, ißonikotinsäurehydracid- und p-aiüino-salizyleäure-reaistenten Stämme dieser Organismen und gegen gorynebaoterium diphteriae.in
Meisseria mengitidea » Myoobacterium tuberoulosle ^ and the streptomycin-, ißonikotinsäurehydracid- and p-aiüino-salicylic acid-resistant strains of these organisms and against Gorynebaoterium diphteriae.

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1468178 Das erfindungsgemäße Isolierungsverfahren beruht1468178 The isolation method according to the invention is based

auf den sauren Eigenschaften des Antibiotikums und seinen« oben geschilderten, Löslichkeitseigenachaften und denen adner Salze. Durch Zusatz eineο Amins in freier Form odeipin Form eines seiner Salze oder einer Säure in solchen Mengen, daß wesentliche Mengen des in dem Kulturmedium anwesenden Antibiotikums Pusidinsuure mit diesen in Reaktion treten , wird das Antibiotikum in eine, in organischen Lösungsmitteln lösliche, Form gebracht· Hierauf wird das Antibiotikum mit einem, mit Wasser nicht mischbaren ader im weantlichen nicht mischbaren, organischen Lösungsmittel, z.B. einem JEster, einem Keton oder einem Chlorkohlenwasserstoff, extrahiert und hierauf aus dem Extraktionsmittel isoliert, gegebenenfalls in Form eines seiner üalze mit einer pharmazeutisch zulässigen Base oder in Form eines Solvats der Verbindung.on the acidic properties of the antibiotic and its «solubility properties and described above those of other salts. By adding an o amine in free form odeipin the form of one of its salts or an acid in amounts such that substantial amounts of the antibiotic present in the culture medium Pusidic acid reacts with these, turns the antibiotic into one, in organic solvents soluble, brought into form · The antibiotic is then placed in the wean with a vein that is immiscible with water immiscible, organic solvents, e.g. a ester, a ketone or a chlorinated hydrocarbon, extracted and then isolated from the extractant, optionally in the form of one of its üalts with a pharmaceutically acceptable base or in the form of a solvate of the compound.

Bei der Extraktion in technischem Maßstab erwiesen sich Methyliaobutylketon, Am/laoet^t und ßutylacetat für die Extraktion besonders geeignet.During extraction on an industrial scale, methyliaobutyl ketone, amylolite and butyl acetate were found particularly suitable for extraction.

Vorzugsweise wird die Extraktion nach Entfernung der Feststoffe aus dem Kulturmedium, z.B. der verwendeten Mikroorganismen oder dur verwendeten Nährstoffbestandteile, durch Filtration oder Zentrifugieren, durchgeführt.Preferably, the extraction is carried out after removing the solids from the culture medium, e.g. Microorganisms or the nutrient components used, by filtration or centrifugation.

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iurde das Antibiotikum aus dem KuItürmediuia in Form der freien Säure extrtfiiert, dann kann die organische Phase auf ein Kleines Volumen eingeengt werden, aus weichein sich das Antibiotikum beim Kühlen oder durch Zusatz eines Bestandteiles, der die Löslichkeit des Antibiotikums herabgesetzt , ausscheidet. Auch kann der Extrikt zur Trockene verdampft und hierauf der .Rückstand aus einem geeigneten Lösungsmittel oder Lösungsmittelgemisch, vorzugsweise aus einem Lösungsmittel, mit dem das Antibiotikum ein gut kristallisierendes Solvat bildet, z.B. Benzol oder Methanol, umkristallisiert v/erden.If the antibiotic has been extracted from the cooling medium in the form of the free acid, then the organic phase can be concentrated to a small volume, from which the antibiotic is excreted when cooling or by adding a component that reduces the solubility of the antibiotic. The extract can also be evaporated to dryness and the residue can then be recrystallized from a suitable solvent or solvent mixture, preferably from a solvent with which the antibiotic forms a well-crystallizing solvate, for example benzene or methanol.

Ferner kann durch Extraktion der organischen Phase mit einer wässrigen Lösung oder Suspension eines, das gewünschte Kation enthaltenden, alkalisdh wirkenden otoffes das Antibiotikum in Form eines seiner wasserlöslichen iialze isoliert werden.Furthermore, by extracting the organic phase with an aqueous solution or suspension of a, containing the desired cation, alkalis effective otoffes the antibiotic can be isolated in the form of one of its water-soluble iialze.

Wird das Antibiotikum nach Ansäuren des Kulturmediums extrahiert, dann säurt man vorzugsweise auf einen pH-./ert von 3 bis 6, z.B. von 5 bis 6, an, da hierdurch günstige Bedingungen für eine erfolgreiche Extraktion der Fermentationsflüssigkeit, nach da? Entfernung des Myceliums, entstehen.If the antibiotic is extracted after acidification of the culture medium, then preferably acidification to a pH./ert of 3 to 6, for example from 5 to 6, since this creates favorable conditions for a successful extraction of the fermentation liquid, after that? Removal of the mycelium.

viird das Antibiotikum aus dem Kulturmedium in Form eines seiner Aminsalze extrahiert, dann stellt man denIf the antibiotic is extracted from the culture medium in the form of one of its amine salts, then the

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pH—»ifert vorzugsweise auf 7,0 oder darüber ein.pH preferably drops to 7.0 or above.

Far diese Auufuhrungsart dee erfindungugenäßen Verfahrens bevorzugt man stark bauiuche Amine, die eine hühere, uieht-substituierte, Kohlenwasaerstoffgruppe im Molekül enthalten und insbesondere quaternäre Amine, z.B. üetyl-pyridiniumchlorid.For this type of execution dee according to the invention Process one prefers strongly bulky amines, the a higher, non-substituted, hydrocarbon group contained in the molecule and in particular quaternary amines, e.g. acetyl-pyridinium chloride.

Aua der, das .uninsalz des ioitibiotikums enthaltenden, organischen Phase kann die Verbindung vorteiln^rter»;eiae in Form eines seiner wasserlöslichen Salze iaoliert ./erden, indem man die organische Phase mit einer, das gewünschte Kation enthaltenden, wdssrigalkalischen Losung extrahiert.Also the one containing the unin salt of the ioitibiotic, In the organic phase, the compound can be more advantageous in the form of one of its water-soluble salts iaoliert ./erden by mixing the organic phase with an aqueous alkaline solution containing the desired cation Solution extracted.

Auch kann das Antibiotikum nach anderen bekannten Vorfahren isoliert werden, z.B. durch dopxjelte Umsetzung des Aminsalze8 im Extraktionemedium mit einem anderen, in diesem löslichen oder mäßig löslichen,Salz, das ein Kation euthält, mit welchem das Antibiotikum ein^ in diesem Uxtraktionamedium schwer lösliches, Sale oildet.The antibiotic can also be isolated according to other known methods, e.g. by double conversion of the amine salts8 in the extraction medium with another, in this soluble or sparingly soluble salt, which contains a cation with which the antibiotic becomes a ^ in This extra-extraction medium forms poorly soluble, sale-resistant.

Ferner kann das, das Auinsalz des Antibiotikums enthaltende, iäxtraktionsiaedium mit einer wässrigen Losung einer starken »jaure behandelt werden, um die Aminkomponente aus dem iüxtraktlonsmedium zu entfernen, wodurch man eine organische Phase mit dem Antibiotikum in Form der freien diure erhält, aus dieserihaae kannFurthermore, the extraction medium containing the auine salt of the antibiotic can be treated with an aqueous solution of a strong acid in order to remove the amine component from the extraction medium, whereby an organic phase with the antibiotic in the form of the free acid can be obtained from this acid

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BAOORtQlNAt9098 0 7/105 ^
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das Antibiotikum, wie oben» isoliert werden.the antibiotic, as above »can be isolated.

In einer erfindungsgemäßen, geeigneten Ausführungsart kann die Extraktion als mehrstufiges Verfahren durchgeführt werden, indem man zunächst das Antibiotikum mit einem organischen Lösungsmittel im uegenstrom und hierauf das organische Lösungsmittel mit einer wässrigen Lösung oder Suspension einer alkalisch wirkenden Substanz extrahiert»worauf man schließlich die so gewonnene wässrig« Lösung ansäuert und das Antibiotikum mit einem, mit fässer nicht misohbaren, Lösungsmittel extrahiert·In a suitable embodiment according to the invention, the extraction can be carried out as a multistage process be carried out by first mixing the antibiotic with an organic solvent in a countercurrent and then the organic solvent with an aqueous solution or suspension of an alkaline active substance extracted "whereupon the resulting aqueous" solution is acidified and that Antibiotic with a, with barrels not mismatchable, Solvent extracted

Für die Gegenstromextraktion, die zweckmäßigerweise in einer Podbielniak-üxtraktionsrorrichtting durchgeführt werden.kann, können als Extraktionemittel z.B. Butylaaetat oder Methylisobuty!keton verwendet werden. Aus der auf diese weise erhaltenen organischen Lüsung kann das Antibiotikum mit einer wässrigen latriuahydroxydlösung oder einer wässrigen Suspension ron Xalsiumhydroxyd ausgeschüttelt werden und naoh der Abtrennung und dem Ansäuern der wässrigen Phase wird diese schließlich z.B. mit Methylisobutylketon oder Benzol extrahiert.For the countercurrent extraction, which can expediently be carried out in a Podbielniak extraction device, butyl acetate or methyl isobutyl ketone, for example, can be used as extraction agents. From the organic obtained in this way Lüsung the antibiotic with an aqueous or an aqueous suspension latriuahydroxydlösung ron Xalsiumhydroxyd can be shaken out, and NaOH, the separation and acidification of the aqueous phase finally extracted with methyl isobutyl ketone this example, or benzene.

Das erfindungsgemäee Terfahren wird durch nachstehende Beispiele näher erläuterttThe inventive method is through the following examples are explained in more detail

909807/10 5 4......909807/10 5 4 ......

1A-26 2531A-26 253

Beispiel 1iExample 1i

Sine PermentEfcionaflüsaigkeit mit einer AktiTität entsprechend einem Gehalt von 70 mg des Antibiotikums Tuaidlnsäure je Liter wurde vom Myoel durch Filtration befreit, in 700 1 des Piltrata der pH-Wert mittel· einer 25-#igen HgSO^-LÖsung auf 3,3 eingestellt und in einer Podbielniak-Extraktionsvorrlchtung im Gegenstrom mit 230 1 Butylasetat extrahiert· Die ao erhaltene Butylazetatphase wurde mit 77 1 Wasser, dem eine 10#-ige NaOH-Lösung bia au einem pH-Wert von 10,0 augegeben worden war»extrahiert und die Phasen getrennt. Der pH-tfert der wässrigen Phase wurde nun durch Zugabe einer 25 jt-igen HgSO,-Lösung auf 3,2 eingestellt und die Lösung mit 40 1 Methyliaobutylketon extrahiert. Die Phasen wurden getrennt ,die organische Phase mit 40 g Aktivkohle behandelt und im Vakuum bei einer Siedetemperatur von 25°C zur Trockene verdampft, Der Eindampfrückstand wurde in 500 ml Benzol gelöst und die Lösung über Haoht im Üiaachrank stehen gelassen· Hierbei kristallisierte das Benzolsolvat des Antibiotikums Pusidinaäure.Das Benzolsulvat wlirde abfiltriert und aus Benzol umkristallisiert^ wobei man 12,0 g der reinen Substanz, P 189,0 bis 189,5°^, erhielt.Sine PermentEfciona liquid with a Activity corresponding to a content of 70 mg of the antibiotic tuaidic acid per liter was taken from the myoel freed by filtration, the pH in 700 l of the Piltrata medium · a 25 # strength HgSO ^ solution adjusted to 3.3 and in a Podbielniak Extraktionsvorrlchtung in countercurrent with 230 1 Butyl acetate extracted. The ao obtained butyl acetate phase was mixed with 77 l of water to which a 10 # NaOH solution was added to a pH of 10.0 was »extracted and the phases separated. The pH-tfert the aqueous phase was now adjusted to 3.2 by adding a 25% HgSO, solution and the Solution extracted with 40 1 methyliaobutyl ketone. The phases were separated, the organic phase treated with 40 g of activated charcoal and in vacuo at a Boiling temperature of 25 ° C evaporated to dryness, The The evaporation residue was dissolved in 500 ml of benzene and the solution was kept in the Üiaachrank over Haoht Here, the benzene solvate of the antibiotic pusidina acid crystallized filtered off and recrystallized from benzene ^ whereby one 12.0 g of the pure substance, P 189.0 to 189.5 ° ^, received.

Durch Trocknen des dolvata bei 50° C/0,01 mm HgBy drying the dolvata at 50 ° C / 0.01 mm Hg

909807/105Λ BAD ORIGINAL909807 / 105Λ ORIGINAL BATHROOM

-10- 1A-26 253-10- 1A-26 253

bia sur Gewiohtskonatan« wurde ein benzolfreies Produkt, P 191 bis 192⁰O, ΠΚ7Ζ2 « 9° (c » 1 Ji, bia sur Gewiohtskonatan «became a benzene-free product, P 191 to 192 ⁰ O, ΠΚ7Ζ2 « 9 ° (c »1 Ji,

D Chloroform), erhalten·D chloroform), obtained

Beispiel example 2\2 \

15 OOCjtL Fermentationsbrühe mit einem Gehalt von 3,75 kg des Antibiotikums Fusidinsäure wurde auf einen pH-Wert von 6,0 eingestellt und in einer PodbielniaJc-Extraktionsvorrichtung mit 3000 1 Methylisobutylketon extrahiert. .Der Extrakt enthielt 3,4 kg des Antibiotikums Fusidinsäure. Eb wurde mit 600 1 wässrigen Natriumhydroxyds mit einem pH-Wert von 11,5 extrahiert. Sofort nach der Extraktion wurde die wässrige Phase auf einen pH-*/ert von 3,3 gebracht und Im Vakuum auf ein Volumen von 150 1 eingeengt. Diese enthielten 3,25 kg des Antibiotikums Pusidinsiiure.15 OOCjtL fermentation broth with a content of 3.75 kg of the antibiotic fusidic acid was adjusted to a pH of 6.0 and in a PodbielniaJc extraction device extracted with 3000 l of methyl isobutyl ketone. The extract contained 3.4 kg of the antibiotic fusidic acid. Eb was made with 600 liters of aqueous sodium hydroxide with a pH value extracted from 11.5. Immediately after the extraction, the aqueous phase was brought to a pH of 3.3 and Concentrated to a volume of 150 l in vacuo. These contained 3.25 kg of the antibiotic pusidic acid.

Es wurden 40 1 Benzol hinaugef ligt und unter Rühren der pH-»/ert d^r wässrigen Phase durch Zusatz von Ohlorwaaserstoffsäure auf 5,0 eingestellt. Das Rühren wurde 4 Stunden fortgesetzt und hierauf der, aus dem Benzolsolvat des Antibiotikums Fuaidinsaure bestehende, niederschlag abfiltriert, mit ./asser und Benzol gewaschen und getrocknet. Das Rohprodukt betrug 2,8 kg. Us wurde in 12 1 Methylenchlorid gelöst, filtriert und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der Jäindaittpfrüek3tand wurde in 3,2 1 v/armen Methanols40 l of benzene were added and, while stirring, the pH of the aqueous phase was adjusted to 5.0 by adding hydrochloric acid. Stirring was continued for 4 hours and then the precipitate consisting of the benzene solvate of the antibiotic fuaidic acid was filtered off, washed with ./asser and benzene and dried. The crude product was 2.8 kg. Us was dissolved in 12 l of methylene chloride, filtered and evaporated to dryness in vacuo. The residue was dissolved in 3.2 l v / poor methanol

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gelöst und auf O⁰C abgekühlt, wobei ein Methanol-Solvat auskristallieierte, das abfiltriert, 3 mal mit je 300 ml eiskalten Methanole gewaschen und ge. trocknet wurde, wobei man 2,48 kg farbloses Methanol-Solvat erhielt.dissolved and ^{cooled to 0} ° C., a methanol solvate crystallizing out, which was filtered off, washed 3 times with 300 ml of ice-cold methanol each time and ge. was dried to give 2.48 kg of colorless methanol solvate.

Dieses Produkt wurde in einem Gemisch von 750 ml Methanol und 1750 ml Azeton suspendiert, einige Tropfen Phenolphthalein hinzugefügt und dann unter Rühren 33^-iges wässriges Natriumhydroxyd bis zum Auftreten einer schwach rötlichen Färbung zugesetzt· Die Lösung wurde durch Dicalite, ein aus Diatomeenerde bestehendes Filtriermittel,filtriert, mit 5 1 Methylbutylketon vermengt und im Vakuum auf ungefähr 3 1 eingeengt* Während des Sinengens kristallisiert· das Natriumsalz· Dieses wurde abfiltriert, mit Azeton und hierauf mit Äther gewaschen und getrocknet» wobei man 2,39 kg reines Natriumsalz des Antibiotikums Fusidinsäure erhielt.This product was suspended in a mixture of 750 ml of methanol and 1750 ml of acetone, a few drops of phenolphthalein were added and then, while stirring, 33% aqueous sodium hydroxide until Appearance of a pale reddish color added · The solution was replaced by Dicalite, a diatomaceous earth existing filter medium, filtered, mixed with 5 1 methyl butyl ketone and reduced in vacuo to approximately 3 1 concentrated * Crystallized during the Sinengen · the sodium salt · This was filtered off, washed with acetone and then with ether and dried » 2.39 kg of the pure sodium salt of the antibiotic fusidic acid were obtained.

Beispiel 3tExample 3t

10 1 geklärter Fermentationsbrühe (mit einem Gehalt von ungefähr 700 mg des Antibiotikums Fueidinaäure je 1) wurde auf einen pH-Wert von 7«0 eingestellt.10 1 clarified fermentation broth (with a Content of about 700 mg of the antibiotic fueidic acid 1) each was adjusted to a pH of 7-0.

I.I.

Ss wurden 90 mg Oetyl-Pyridiniumchlorid hinzu-90 mg of acetylpyridinium chloride were added

90980 7/90980 7 /

-12- 1A-2S-12- 1A-2S

gefügt and dl· Lüftung 2 aal alt j· 500 al Methylieobutylketon extrahiert.joined and dl · ventilation 2 aal old j · 500 al Methylobutyl ketone extracted.

laoh dtr Extraktion wurden in der wässrig*» Phase weniger al· 35 ag/1 Antibiotilnui raeldlneättre gefunden.laoh dtr extraction were in the aqueous * » Phase less than 35 ag / 1 Antibiotilnui raeldlneättre found.

SI· Tereinlgten Methylieobutylketon-lxt»»kt· wurden alt Waeeer gtwaeohen und hierauf «la Ubereehul einer gesättigten wässrigen Kaliuaaietmt-Leenag un*er Rühren hinaugefügt.SI · Tereinlgten Methylobutylketon-lxt »» kt · became old Waeeer gtwaeohen and then «la Ubereehul a saturated aqueous Kaliuaaietmt-Leenag and stirring added.

I«oh einetundigea Eühren bei Haumteaperatur wurde da· rohe Kalluaeale de· Antibiotilcuaa fusltlaetmi¹· geeaamelt» alt Aieton gewaeehen und getrooknei.I "oh one hour at skin temperature, the raw Kalluaeale de Antibiotilcuaa fusltlaetmi ¹ " old Aieton was blown and dried.

Sa· erhaltene Seil war für dl· Hereiellvag SalsMi dee Antibiotikuae fu«ldlaeäure la pheraa-■eutlMA reiner QtulitKt gut geeignet.Sa · received rope was for dl · Hereiellvag SalsMi dee Antibiotikuae Fu «ldlaeäure la pheraa- ■ eutlMA pure QtulitKt well suited.

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Claims (1)

-13- 1A-26 253-13- 1A-26 253 1· Verfahren but Isolierung des Antibiotikums fusidinsäure ans eine« dieses enthaltenden Kultur-BMdIm₉ dadurch gekennseiohnet , daß man ein AmIa oder eines seiner SaUe oder eine Säure in aoloher «enge «uetst, dal wesentliche Mengen des in de» Kultunwdlum anwesenden Antibiotikums fusidinsäure in organischem LBsungenitteln löalioh werden und das Antibiotika« «it einem, «it Wasser nicht-mischbaren oder weitgehend nioht-misohbaren organischen Lösungsmittel, insbesondere eine« Seter» einem Keton oder eine« Chlorkohlemwaeseretoff, extrahiert, worauf «an das Antibiotikum aas des Bxtraktioneaittel isoliert, gegebenenfalls in For« eine· seiner Salse «it einer phareaneutiaoh sulässlge« Baee oder in form eines seiner Solrate·Procedure for isolating the antibiotic fusidic acid on a culture medium containing it, ₉ by using an amine or one of its acids or an acid in close proximity so that substantial amounts of the antibiotic fusidic acid present in the culture are in organic solvents and the antibiotics "" with a water-immiscible or largely non-miscible organic solvent, in particular a "set" of a ketone or a "chlorinated carbon dioxide, whereupon" the antibiotic is isolated from the extraction agent, possibly in the form of one of his Salse with a phareaneutiaoh sulässlge Baee or in the form of one of his Solrates 2. Verfahren naoh Anspruoh 1, daduroh g e k e η η -seionnet, daJ «an das Kulturmedium, yorsugswelse auf einen pH-Wert τοη 3 - 6,+ansäuert und das Antibiotika« «it eine« mit Wasser nicht mischbaren oder weltgehend nioht mischbaren organiaohen Löaungsmittel,2. Method according to Claim 1, because there is no problem with the culture medium, yorsugswelse acidified to a pH value τοη 3 - 6, + and the antibiotics «« it a «immiscible with water or world-wide non-miscible organic solvents, Insbesondere einem Xster, einem Keton oder eine«In particular an Xster, a ketone or a « kohlencoal Chloxraraaaerstoff, extrahiert, worauf man das Antibiotikum aus dem Extrakt isoliert, gegebenenfalls in Form einea seiner Salze oder Solvate mit einem organischen Lösungsmittel· Chloxraraastoff , extracted, whereupon the antibiotic is isolated from the extract, optionally in the form of one of its salts or solvates with an organic solvent BADBATH -H- U*6»3-H- U * 6 »3 3· Verfahren nach Anspruoh 1, dadurch g β -kennzeichnet , daß man das Kulturmedium auf einen pH-Wert ron 7,0 oder darüber eine teilt, ein starkes Amin in solchen Mengen hinaufilgt, dafi eine wesentliche Menge dea Aminsalze* des Antibiotikums entsteht und das SaIa mit eines mit Wasser nicht mischbaren oder weitgehend nicht mischbaren organischen lösungsmittel, insbesondere einem Bster, einem Keton oder einem Chlorkohlenwasaeratoff» extrahiert, worauf man das konsenlrlerte Antibiotikum aus dem Extrakt isoliert, gegebenenfalls in Form eines meiner Salze mit pharmazeutisch zulässigen Basen oder in Form eines seiner Solvate mit einem organischen Lösungsmittel·3 · The method according to claim 1, characterized in that the culture medium is on a pH of 7.0 or above one divides strong amine in such amounts that one A substantial amount of the amine salts * of the antibiotic is produced and the salt with one with water does not Miscible or largely immiscible organic solvents, especially a Bster, a ketone or a chlorinated hydrocarbon »extracted, whereupon the consensus antibiotic from the Extract isolated, possibly in the form of one of my salts with pharmaceutically acceptable bases or in the form of one of its solvates with an organic solvent 4. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet, daß man die Extraktion als 4eg«nstromextraktion ausführt.4. The method according to claims 1 to 3 »thereby characterized in that the extraction is carried out as a 4-leg extraction. 5· Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dafi man eine mit «fässer nicht mischbare, das Antibiotikum Pusidinsäure enthaltende, Phase mit wässrigem Alkali extrahiert und aus der so entstandenen wässrigen Lösung eines Salzes des Antibiotikums das Salz isoliert oder das Antibiotikum durch Ansäuarn der Lösung ausfällt.5. The method according to claims 1 to 4, characterized in that one with «barrels immiscible phase containing the antibiotic pusidic acid extracted with aqueous alkali and from the resulting aqueous solution of a salt of the antibiotic isolates the salt or the Antibiotic precipitates by acidifying the solution. -15- 1A-26 253-15- 1A-26 253 6. Verfahren naoh Anspruch 5« dadttreh g β k β α η -seiohnet, ^dafl >ba einer wässrigen Lösung •inea SalMS dta Antibiotikums fusldlnsäure Bensol In solohsB Mengen susetst, daB das in der Lösung Torhandent Antibiotikum in sein Beniol-SolTat übergeführt wird« vorauf man das Oemieeh ansäuert, üb das Benmol-SolYat des Antibiotikums au·sufallen, dieses abtrennt und gegebenenfalls in das Antibiotika« Fusidinsäar* oder ein SaIs desselben umwandelt.6. The method of claim 5 NaOH "dadttreh g k β β α η -seiohnet, ^DAFL> ba an aqueous solution • inea Salm dta antibiotic fusldlnsäure susetst Bensol In solohsB amounts of DAB which is converted in the solution Torhandent antibiotic in its Beniol-SolTat" Before the acid is acidified, the benmol solute of the antibiotic precipitates, this is separated off and, if necessary, converted into the antibiotic "Fusidinsäar" or a salt thereof. 7· Verfahren naoh AnsprUohen 5 oder 6» daduroh gekennseiohnet « dafl man das isolierte rohe Antibiotikum Yusidinsäure aus einem Lösungsmittel, das lur Bildung τοη Solraten alt dem Antibiotikum fähig 1st· umkristallieiert, worauf man das ausgesohiedene Solrat de· Antibiotikums isoliert und gegebenenfallsin das Antibiotikum «der ein SaIs dessslben überführt.7 · Procedure according to claims 5 or 6 »daduroh It is known that the isolated crude antibiotic yusidic acid is obtained from a solvent, which for the formation of solrates is old Antibiotic capable is recrystallized, whereupon the extracted solrat de antibiotic is isolated and, if necessary, into the antibiotic which transfers a saIs of the same. 909807/1054909807/1054