DE1234417B - Test reagent for determining the fat content in organic substances, especially in blood serum - Google Patents

Description

Testreagens zur Bestimmung des Fettgehaltes in organischen Substanzen, insbesondere im Blutserum Die vorliegende Erfindung betrifft ein Reagens zur Bestimmung des Fettgehalts in organischen Substanzen, z. B. in Milchprodukten, Nahrungsmitteln, organischen Geweben, Faeces usw., und insbesondere ein Reagens zur Bestimmung des Fettgehaltes im Blutserum.Test reagent for determining the fat content in organic substances, particularly in blood serum The present invention relates to a reagent for determination the fat content in organic substances, e.g. B. in dairy products, food, organic tissues, faeces, etc., and in particular a reagent for determining the Fat content in the blood serum.

Bisher erfolgte die Bestimmung des Fettgehaltes im Blutserum nach Extraktionsmethoden. Diese Methoden haben jedoch wesentliche Nachteile. Sie erfordern einen erheblichen Aufwand an Zeit und Apparaturen und geschultes Personal. Ferner ist zur Durchführung dieser Extraktionsverfahren Äther erforderlich, der wegen seiner leichten Entflammbarkeit besondere Vorsichtsmaßnahmen erfordert, zumal bei erhöhten Temperaturen gearbeitet werden muß. So far, the determination of the fat content in the blood serum has been carried out according to Extraction methods. However, these methods have significant disadvantages. You require a considerable expenditure of time and equipment and trained personnel. Further is necessary to carry out this extraction process because of its ether high flammability requires special precautionary measures, especially at elevated levels Temperatures must be worked.

Zur Bestimmung des Fettgehaltes organischer Substanzen, insbesondere des Blutserums, ist aber auch ein Testreagens bekannt, das nicht ionogene und anionische Netzmittel in wäßriger Lösung im Verhältnis 1: 1 bis 1 : 20 enthält. Mit diesem Testreagens lassen sich aber keine genauen Meßergebnisse erzielen. For determining the fat content of organic substances, in particular of the blood serum, but a test reagent is also known that is non-ionic and anionic Contains wetting agent in aqueous solution in a ratio of 1: 1 to 1:20. With this However, no precise measurement results can be obtained using test reagents.

Es wurde nun gefunden, daß eine wesentliche Verbesserung dann erzielt werden kann, wenn man diesem Testreagens erfindungsgemäß Äthoxytriglykol in einer Menge von mindestens 50 Volumprozent, bezogen auf das anionische Netzmittel, zusetzt. Vorzugsweise fügt man ferner dem Testreagens zusätzlich Natriumchlorid und einen Alkohol in solchen Mengen hinzu, daß die Dichte der Lösung zwischen 1,018 und 1,086 liegt. It has now been found that a substantial improvement is then achieved can be, if this test reagent according to the invention ethoxytriglycol in a Amount of at least 50 percent by volume, based on the anionic wetting agent, is added. It is also preferable to add sodium chloride and one to the test reagent Add alcohol in such amounts that the density of the solution is between 1.018 and 1.086 lies.

Die im Testreagens enthaltenen Verbindungen sind oberflächenaktiv und besitzen Netzmitteleigenschaften, wodurch die Fette aus ihren Emulsionen oder Suspensionen, die nicht fettige Bestandteile, z. B. Proteine oder Lecithine, enthalten, abgetrennt werden. Die nicht ionogenen Netzmittel bewirken vorzugsweise die Trennung der Fetteilchen vom Serum, während die anionischen Netzmittel hauptsächlich das das Fett umgebende Protein klären bzw. Iösen. Das Äthoxytriglykol dient dazu, das anionische Netzmittel mit Wasser mischbar zu machen und damit die Genauig keit der Messung zu erhöhen. The compounds contained in the test reagent are surface-active and have wetting agent properties, whereby the fats from their emulsions or Suspensions containing non-fatty ingredients, e.g. B. proteins or lecithins, be separated. The non-ionic wetting agents preferably effect the separation of the fat particles from the serum, while the anionic wetting agents mainly contain the clarify or dissolve the protein surrounding the fat. The ethoxy triglycol is used to To make anionic wetting agents miscible with water and thus the accuracy of the Increase measurement.

Als nicht ionogene oberflächenaktive Mittel, die zur Brechung der Fettemulsion im Blutserum, in Faeces usw. dienen, können vorzugsweise die folgenden Produkte verwendet werden: Tetradecyldesoxyp olyäthylenglykol, Polyoxyäthylen-sorbitan-monolaurat, Polyoxyäthylen-sorbitan-monolaurat, Polyoxyäthylen-sorbitanmonopalmitat, Alkylarylpolyäthoxy-äthanol, Alkylphenoxypolyäthoxy-äthanol, Isooctylphenoxyäthoxyäthanol, Alkylphenyl-polyäthylen-glycoläther. As a non-ionic surfactant used to break the To serve fat emulsion in blood serum, faeces, etc., the following may preferably be used Products used are: tetradecyldeoxypolyethylene glycol, polyoxyethylene sorbitan monolaurate, Polyoxyethylene sorbitan monolaurate, polyoxyethylene sorbitan monopalmitate, alkylarylpolyethoxyethanol, Alkylphenoxypolyethoxyethanol, isooctylphenoxyethoxyethanol, alkylphenyl polyethylene glycol ether.

In vielen Fällen ist es wünschenswert, das nicht ionogene Netzmittel in alkoholischen Lösungen, wie in Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Butyl-, Octyl- oder Trimethylnonylalkohol zu verwenden. In many cases it is desirable to use the non-ionic surfactant in alcoholic solutions, like in methyl, ethyl, propyl, butyl, octyl or trimethylnonyl alcohol to use.

Als anionische oberflächenaktive Mittel, die geeignet sind, das dispergierte, nicht fettige Material in den zu testenden Produkten zu lösen, das Fett freizusetzen und so eine schnelle Vereinigung der Fetteilchen zu ermöglichen, werden vorzugsweise die folgenden Verbindungen verwendet: Dioctyl-natriumphosphat, Natrium-tetradecylsulfat, Triäthanolamin-tetradecyl-sulfat, Natrium-octyl-sulfat, Diamyl-natrium-sulfosuccinat, Diisobutyl-natrium-sulfo succinat, Natrium-laurylsulfat. As anionic surface-active agents which are suitable for the dispersed, to dissolve non-fatty material in the products to be tested, to release the fat and so to allow rapid association of the fat particles are preferred the following compounds are used: dioctyl sodium phosphate, sodium tetradecyl sulfate, Triethanolamine tetradecyl sulfate, sodium octyl sulfate, diamyl sodium sulfosuccinate, Diisobutyl sodium sulfo succinate, sodium lauryl sulfate.

Diese Netzmittel werden in wäßriger Lösung in Konzentrationen zwischen 10 und 30010 verwendet. These wetting agents are in aqueous solution in concentrations between 10 and 30010 used.

Das anionische Netzmittel wird normalerweise in 25 0i0iger Lösung verwendet, wobei Äthylenglykol sowie Wasser und Äthoxytriglykol als Lösungsmittel verwendet werden können. Das Äthoxytriglykol macht das anionische Netzmittel in wäßrigem Medium löslich. The anionic wetting agent is normally in a 25% solution used, with ethylene glycol and water and ethoxy triglycol as solvents can be used. The ethoxy triglycol makes the anionic wetting agent in soluble in aqueous medium.

Es kann auch nachträglich zugegeben werden; es muß jedoch stets ein Verhältnis von mindestens 50 Volumprozent, bezogen auf das Volumen des anionischen Netzmittels, eingehalten werden.It can also be added afterwards; however, it must always be a Ratio of at least 50 volume percent based on the volume of the anionic Wetting agent, are complied with.

Zur Fettbestimmung im Blutserum, Faeces usw. liegt der bevorzugte Bereich der Dichte der Testreagenzlösung bei Raumtemperatur zwischen 1,018 und 1,086. For fat determination in blood serum, faeces, etc., the preferred one is Range of density of the test reagent solution at room temperature between 1.018 and 1.086.

Zweckmäßig enthält das Testreagens neben dem Alkohol auch noch Natriumchlorid, vorzugsweise in Form einer etwa 0,90/0eigen wäßrigen Lösung, wodurch sich die optimale Dichte des Testreagens gut einstellen läßt. In addition to the alcohol, the test reagent also contains sodium chloride, preferably in the form of an approximately 0.90/0 strength aqueous solution, which results in the optimum The density of the test reagent can be adjusted well.

Bei der Bestimmung des Fettgehaltes nach vorliegender Erfindung wird eine bestimmte Menge des Testreagens zu einer bestimmten Menge der zu testenden Flüssigkeit gegeben. Die Mischung wird erwärmt, um eine Trennung der Schichten und eine Koagulierung der Fetteilchen zu erreichen. Durch Zugabe einer verdünnten Natriumchloridlösung, die gegebenenfalls noch etwa 100in Methylalkohol enthalten kann, wird die Fettschicht in den graduierten Hals eines Kolbens gedrückt, so daß das Volumen dort abgelesen werden kann. When determining the fat content according to the present invention a certain amount of the test reagent to a certain amount of that to be tested Given liquid. The mixture is heated to separate the layers and a coagulation to reach the fat particles. By adding a dilute sodium chloride solution, which may contain about 100% of methyl alcohol may contain, the layer of fat is pressed into the graduated neck of a plunger, so that the volume can be read off there.

Es ist besonders vorteilhaft, die Netzmittel mit der Fett enthaltenden Emulsion ohne mechanisches Rühren zusammenzubringen, so daß die Reagenzien und die Flüssigkeit sich in zwei Schichten abscheiden können. Die Dichten der beiden Phasen werden vorzugsweise so eingestellt, daß sie um nicht mehr als 0,0075 g/cm3 differieren, wobei die Schicht mit den Netzmitteln im allgemeinen die schwerere ist. Wenn man ein solches Zweischichten-System von unten erhitzt, um die physikochemische Reaktion zu beschleunigen, so zirkulieren Teile aus der schwereren Schicht durch die obere Schicht und kehren, da sie dort gekühlt werden, in die niedrigere Schicht zurück. It is particularly advantageous to combine the wetting agents with the fat Bring the emulsion together without mechanical stirring, so that the reagents and the Liquid can separate in two layers. The densities of the two phases are preferably adjusted so that they do not differ by more than 0.0075 g / cm3, the layer with the wetting agents generally being the heavier. If Such a two-layer system is heated from below to initiate the physicochemical reaction To accelerate, parts of the heavier layer circulate through the upper one Layer and, since they are cooled there, return to the lower layer.

Der Vorteil dieses Verfahrens verglichen mit der unmittelbaren Verrührung und Vermischung der Schichten ist, daß das Netzmittel für eine längere Zeit in konzentrierter Form bleibt und so wirksamer seine Funktion erfüllen kann.The advantage of this method compared to the immediate stirring and mixing of the layers is that the wetting agent is more concentrated for a longer time Form remains and can thus fulfill its function more effectively.

In vielen Fällen ist es vorteilhaft, die Fettschicht durch einen Fettfarbstoff, z. B. Öl-Rot 0, anzufärben und somit die Ablesung des Volumens zu erleichtern. In many cases it is beneficial to remove the fat layer through a Fat dye, e.g. B. Oil-Red 0, to be colored and thus the reading of the volume facilitate.

Die vorliegende Methode erlaubt also in breitestem Sinne die Abtrennung von Fett, das in einem flüssigen Material emulgiert ist, und die noch andere dispergierte Substanzen enthält, indem man dem zu testenden Material unter geeigneten Bedingungen ein nicht ionogenes Netzmittel zugibt, um das Fett von den nicht fettigen Bestandteilen zu trennen, und ein anionisches Netzmittel, das die Fetteilchen freisetzt und ihre Koagulation und Schichtung erlaubt. Beide Netzmittel werden in weit höheren Konzentrationen verwendet als üblicherweise bei der Anwendung als Netzmittel. So wird z. B. das nicht ionogene Netzmittel bei der Bestimmung des Fettgehaltes im Serum oder in Faeces vorzugsweise in einer Menge von etwa 5 bis 25 Volumprozent, bezogen auf das Serum, verwendet. The present method thus allows separation in the broadest sense of fat emulsified in a liquid material and dispersed still others Contains substances by adding the material to be tested under suitable conditions a non-ionic wetting agent adds to the fat from the non-fatty ingredients to separate, and an anionic wetting agent that releases the fat particles and theirs Coagulation and stratification allowed. Both wetting agents are used in far higher concentrations used than usually when applied as a wetting agent. So z. B. that non-ionic wetting agents when determining the fat content in serum or faeces preferably in an amount of about 5 to 25 percent by volume, based on the serum, used.

Das anionische Netzmittel wird in einem Bereich von etwa 50 bis 400 Volumprozent, bezogen auf das Serum, zugegeben.The anionic wetting agent will range from about 50 to 400 Percentage by volume, based on the serum, was added.

Außer für analytische Zwecke kann die vorliegende Methode auch auf breiter Basis zur Entfernung von Fett aus Fettemulsionen zur Herstellung von Fettprodukten verwendet werden. So kann z. B. dieselbe Methode und die gleichen Netzmittel, die zur Extraktion und anschließenden Messung des Fetts verwendet werden, nur für eine Extraktion gebraucht werden, wobei zusätzlich das extrahierte Fett dekantiert wird und durch Passagen durch Wasser von Spuren des Netzmittels befreit wird. Except for analytical purposes, the present method can also be based on wide base for removing fat from fat emulsions for making fat products be used. So z. B. the same method and the same wetting agents that can be used for the extraction and subsequent measurement of the fat, only for one Extraction may be needed, with the extracted fat also being decanted and is freed from traces of the wetting agent by passage through water.

Die Bestimmung des Fettgehaltes mit dem Testserum nach vorliegender Erfindung liefert genaue Resultate. The determination of the fat content with the test serum according to the present Invention gives accurate results.

Es ist jedoch ratsam, das Testreagens zunächst mit einer Standardmethode, z. B. mit einem der üblichen Rxtraktionsverfahren zu vergleichen. Bei Verwendung des gleichen Testreagens und eines bestimmten graduierten Meßgefäßes läßt sich die Methode standardisieren und ist so für Reihenuntersuchungen hervorragend geeignet.However, it is advisable to first test the test reagent using a standard method, z. B. to be compared with one of the usual extraction methods. Using the same test reagent and a specific graduated measuring vessel can be the Standardize the method and is therefore ideally suited for series examinations.

Beispiel 8 ml des nicht ionogenen Netzmittels, z. B. eines Alkylphenylpolyäthylenglykoläthers, gelöst in 12 ml Octylalkohol oder Trimethylnonanol, werden zu 160 ml Dioctylnatriumphosphat zugegeben, wobei letzteres 80ml Äthoxytriglykol enthält, um das Dioctylnatriumphosphat mit Wasser mischbar zu machen.example 8 ml of the non-ionic wetting agent, e.g. B. an alkylphenyl polyethylene glycol ether, dissolved in 12 ml octyl alcohol or trimethylnonanol become 160 ml dioctyl sodium phosphate added, the latter containing 80ml Äthoxytriglykol to the dioctyl sodium phosphate to make it miscible with water.

Zu dieser Mischung werden 10 ml eines Fettfarbstoffes (z. B. Öl-Rot O) in einer Verdünnung von 1 : 2000 in alkoholischer Lösung, wie Methylalkohol, oder in Aceton zugegeben. Anschließend wird die gesamte Mischung (270 ml) mit der gleichen Menge physiologischer Kochsalzlösung (0,9°/0 NaCI) versetzt. Diese Mischung ist stabil und kann so in großen Mengen hergestellt werden.10 ml of a fat dye (e.g. oil-red O) in a dilution of 1: 2000 in an alcoholic solution, such as methyl alcohol, or added in acetone. Then the entire mixture (270 ml) with the the same amount of physiological saline solution (0.9% NaCl) is added. This mixture is stable and can therefore be produced in large quantities.

Die angegebene Mischung eignet sich zur Analyse von Serum, das einen ungefähren Fettgehalt von 0,5 bis 2,501, besitzt. Die Anteile der Netzmittel können jedoch zur Analyse anderer fetthaltiger Materialien, wie z. B. Faeces, verändert werden, da letztere bis zu 1001o oder mehr Fett enthalten können. The specified mixture is suitable for the analysis of serum, the one approximate fat content of 0.5 to 2.501. The proportions of the wetting agents can but for the analysis of other fatty materials, such as. B. Faeces, changed as the latter can contain up to 1001o or more fat.

Zur Durchführung des Tests werden 2 ml des Serums, dessen Fettgehalt unter 2,5 01o liegt, in einen Meßkolben einpipettiert und dann mit 20 ml des Reagens versetzt. Das Netzmittelreagens wird am äußeren Flaschenhals so zugegeben, daß das Serum von den Wänden abgespült wird, ohne sich jedoch wesentlich damit zu vermischen. Der Kolben wird dann 10 Minuten in kochendes Wasser gesetzt. Anschließend wird die Mischung bei Raumtemperatur möglichst vorsichtig mit physiologischer Kochsalzlösung, die gegebenenfalls 1001, Methylalkohol enthält, unterschichtet, bis die rote Fettschicht völlig innerhalb des graduierten Halses des Meßkolbens ist. To carry out the test, 2 ml of the serum, its fat content is below 2.5 01o, pipetted into a volumetric flask and then with 20 ml of the reagent offset. The wetting agent reagent is added to the outer neck of the bottle so that the Serum is rinsed off the walls without significantly mixing with it. The flask is then placed in boiling water for 10 minutes. Then the Mix as carefully as possible at room temperature with physiological saline solution, which optionally contains 1001, methyl alcohol, layered until the red layer of fat is completely within the graduated neck of the volumetric flask.

Das Volumen der Schicht wird dann in üblicher Weise abgelesen. Bei dieser Methode ist es nicht notwendig, den Fettgehalt bei 60"C abzulesen, da das Fett in Gegenwart der oberflächenaktiven Mittel flüssig bleibt, selbst wenn die Temperatur auf Raumtemperatur abfällt.The volume of the layer is then read in the usual way. at With this method it is not necessary to read the fat content at 60 "C, as that Fat remains liquid in the presence of the surfactants, even if the Temperature drops to room temperature.

Bei der Bestimmung des Fettgehaltes fester Stoffe, wie z. B. Faeces, muß das zu testende Material zunächst in feinteilige Form gebracht, z. B. gemahlen oder gepulvert werden. When determining the fat content of solids, such as B. Faeces, the material to be tested must first be brought into finely divided form, e.g. B. ground or be powdered.

Claims (2)

Patentansprüche: 1. Testreagens zur Bestimmung des Fettgehaltes in organischen Substanzen, insbesondere im Blutserum, enthaltend nicht ionogene und anionische Netzmittel in wäßriger Lösung im Verhältnis 1: 1 bis 1:20, gekennzeichnet durch einen Gehalt an Äthoxytriglykol in einer Menge von mindestens 50 Volumprozent, bezogen auf das anionische Netzmittel. Claims: 1. Test reagent for determining the fat content in organic substances, especially in blood serum, containing non-ionic and anionic wetting agents in aqueous solution in a ratio of 1: 1 to 1:20 by a content of ethoxy triglycol in an amount of at least 50 percent by volume, based on the anionic wetting agent. 2. Testreagens nach Anspruch, dadurch gekennzeichnet, daß die Lösung zusätzlich Natriumchlorid und einen Alkohol in solchen Mengen enthält, daß die Dichte der Lösung zwischen 1,018 und 1,086 liegt. ~~~~~ In Betracht gezogene Druckschriften: USA.-Patentschrift Nr. 2 863 734. 2. Test reagent according to claim, characterized in that the solution additionally contains sodium chloride and an alcohol in such amounts that the density the solution is between 1.018 and 1.086. ~~~~~ Publications considered: U.S. Patent No. 2,863,734.