DE112021004999T5

DE112021004999T5 - Krebstherapie unter verwendung von toll-like-rezeptor-agonisten

Info

Publication number: DE112021004999T5
Application number: DE112021004999.2T
Authority: DE
Inventors: Steven C. Katz; Bryan F. Cox; David Benjamin Jaroch
Original assignee: Trisalus Life Sciences Inc
Current assignee: Trisalus Life Sciences Inc
Priority date: 2020-09-22
Filing date: 2021-09-21
Publication date: 2023-07-20
Also published as: AU2021347154A9; KR20230121995A; EP4217064A1; US20230364125A1; JP2023542988A; CA3196273A1; AU2021347154A1; WO2022066670A1

Abstract

Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung sehen Verfahren zur Behandlung von Krebs und Verfahren zur Verabreichung von Toll-like-Rezeptor (TLR)-Agonisten an feste Tumore in der Leber unter Verwendung einer lokoregionalen Therapie durch das Gefäßsystem vor. In einem Aspekt bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Verfahren zur Behandlung von Metastasen des Aderhautmelanoms in der Leber, das die Verabreichung von TLR9-Agonisten an die Leber umfasst.

Description

QUERVERWEIS AUF VERWANDTE ANMELDUNG(EN)
Diese Anmeldung beansprucht die Vorteile von: U.S. Provisional Patent Application No. 63/081,613 , die am 22. September 2020 eingereicht wurde; U.S. Provisional Patent Application No. 63/115,435 , die am 18. November 2020 eingereicht wurde; U.S. Provisional Patent Application No. 63/139,622 , die am 20. Januar 2021 eingereicht wurde; U.S. Provisional Patent Application No. 63/159,857 , die am 11. März 2021 eingereicht wurde; U.S. Provisional Patent Application No. 63/159,867 , die am 11. März 2021 eingereicht wurde, und die vorläufige US-Patentanmeldung Nr. 63/225,026 , die am 23. Juli 2021 eingereicht wurde, die alle durch Verweis in ihrer Gesamtheit einbezogen werden.
SEQUENZPROTOKOLL
Die vorliegende Anmeldung enthält ein Sequenzprotokoll, das elektronisch im ASCII-Format eingereicht wurde und hiermit durch Bezugnahme in vollem Umfang einbezogen wird. Die am 16. September 2020 erstellte ASCII-Kopie trägt die Bezeichnung A372-502_SL.txt und hat eine Größe von 484 Byte.
BEREICH DER ERFINDUNG
Die vorliegende Offenbarung bezieht sich allgemein auf Verfahren zur Behandlung von Krebs und Verfahren zur Verabreichung von Toll-like-Rezeptor (TLR)-Agonisten an solide Tumoren in der Leber unter Verwendung einer lokoregionalen Therapie durch das Gefäßsystem.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Krebs ist eine verheerende Krankheit, bei der es zu einem unkontrollierten Wachstum von Zellen kommt, was zum Wachstum von festen Tumoren in einer Vielzahl von Organen wie der Haut und der Leber führen kann.
Tumore können zunächst in einer beliebigen Anzahl von Organen auftreten oder das Ergebnis von Metastasen oder Ausbreitung von anderen Orten sein.
Das Melanom ist eine vielgestaltige Krankheit, die ein breites Spektrum von Subtypen und Erscheinungsformen umfasst. Das Melanom ist eine Krebserkrankung, die sich aus Melanozyten entwickelt und eine Reihe von Subtypen und Erscheinungsformen umfassen kann, darunter in allen Organen oder Geweben, in denen Melanozyten vorkommen, wie der Haut und dem Auge, und auch Metastasen in anderen Organen wie der Leber.
Das Aderhautmelanom (UM) ist das häufigste primäre intraokulare Malignom und macht 85-95 % der primären okulären Malignome und 3-5 % aller Melanomfälle aus. Diese Malignome entstehen aus Melanozyten innerhalb des Aderhauttrakts, der aus Iris, Ziliarkörper und Aderhaut besteht. Die definitive Behandlung des Primärtumors mit Strahlentherapie oder Enukleation führt zu geringen Raten von Lokalrezidiven. Trotz wirksamer lokaler Kontrolle kommt es jedoch bei mehr als >50 % der Patienten zu einer metastasierten Erkrankung. Das metastasierende Aderhautmelanom betrifft in mehr als >90 % der Fälle die Leber und geht auf eine hämatologische Streuung zurück. Die Neigung der Krankheit zur Bildung von Lebermetastasen (LM) wurde in Tumorstudien an Mäusen und Menschen untersucht. Andere Stellen, an denen Aderhautmelanome metastasieren, sind Lunge, Knochen, Gehirn, Lymphknoten und Haut. Die soliden Tumoren in der Leber, die von einem metastasierten Aderhautmelanom herrühren (z. B. multifokale viszerale Tumoren), sind besonders schwierig zu behandeln.
Die Behandlung metastasierter Erkrankungen kann in verschiedene Kategorien eingeteilt werden, darunter auf die Leber gerichtete Therapien, zytotoxische Chemotherapie, Immuntherapie, molekular zielgerichtete Therapien und epigenetische Modifikatoren. Metastasierte Erkrankungen haben sehr schlechte Ergebnisse mit einer 1-Jahres-Gesamtüberlebensrate von 43 %, gerechnet ab dem Zeitpunkt der ursprünglichen Diagnose.
Obwohl bestimmte Antikörpertherapien wie Ipilimumab, Nivolumab, Pembrolizumab und Atezolizumab für die Behandlung des kutanen Melanoms durch intravenöse systemische Infusion zugelassen sind, wurden diese Therapien nicht als sicher oder wirksam für die Behandlung des metastasierten Aderhautmelanoms zugelassen.
Dementsprechend besteht nach wie vor ein Bedarf an einer sicheren und wirksamen Therapie zur Behandlung des metastasierten Aderhautmelanoms.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Verfahren zur Behandlung von Krebs und Verfahren zur Verabreichung von TLR-Agonisten an solide Tumore in der Leber unter Verwendung einer lokoregionalen Therapie durch das Gefäßsystem.
In einem Aspekt bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Verfahren zur Behandlung von Metastasen des Aderhautmelanoms in der Leber, dass die Verabreichung eines TLR-Agonisten durch eine intravaskuläre Vorrichtung durch hepatische arterielle Infusion (HAI) umfasst. Gemäß einer anderen Ausführungsform umfasst die Behandlung der Metastasen des Aderhautmelanoms in der Leber die Verabreichung eines TLR-Agonisten durch eine intravaskuläre Vorrichtung mittels Pfortaderinfusion (PVI).
In einigen Ausführungsformen werden die TLR-Agonisten durch druckaktivierte Medikamentenverabreichung (PEDD) verabreicht, was die Verabreichung eines Therapeutikums durch eine Vorrichtung, wie z. B. eine Kathetervorrichtung, einschließt, die einen Nettoanstieg des Flüssigkeitsdrucks innerhalb des Gefäßes und/oder des Zielgewebes oder des Tumors erzeugt, bewirkt und/oder dazu beiträgt.
In einigen Ausführungsformen werden die TLR-Agonisten durch eine druckfähige Vorrichtung verabreicht, wie z. B. eine, die den Gefäßdruck erhöht.
In einigen Ausführungsformen ist der TLR-Agonist ein CpG-Oligodesoxynukleotid der Klasse C (CpG-C ODN).
In einigen Ausführungsformen führt die Verabreichung eines TLR-Agonisten durch eine intravaskuläre Vorrichtung an die Leber zu einer Verringerung von myeloid-abgeleiteten Suppressorzellen (MDSCs) oder zur funktionellen Veränderung von MDSCs, um die Immunsuppression zu begrenzen.
In einigen Ausführungsformen ist der TLR-Agonist ein TLR9-Agonist.
Diese und andere Objekte, Merkmale und Vorteile der beispielhaften Ausführungsformen der vorliegenden Offenbarung werden beim Lesen der folgenden detaillierten Beschreibung der beispielhaften Ausführungsformen der vorliegenden Offenbarung deutlich, wenn sie in Verbindung mit der gesamten Beschreibung betrachtet werden.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
Weitere Objekte, Merkmale und Vorteile der vorliegenden Offenbarung werden aus der folgenden detaillierten Beschreibung ersichtlich, die in Verbindung mit den beiliegenden Abbildungen, die illustrative Ausführungsformen der vorliegenden Offenbarung zeigen, betrachtet wird.

1 veranschaulicht die Struktur von SD-101.
2A-2B illustrieren die Wirkung einer beispielhaften Kombination eines beispielhaften TLR9-Agonisten und eines Checkpoint-Inhibitors auf die Tumorprogression in einem Mausmodell für Lebermetastasen.
3A-3D zeigen die Wirkung von beispielhaften TLR9-Agonisten auf die MDSC-Population, PD-L1 und CD4- und CD8-Population und Aktivierungsexpression in menschlichen PBMCs.
zeigen die Wirkung von beispielhaften TLR9-Agonisten auf NF_κB und IFNa-regulierte Zytokinproduktion in menschlichen PMBCs.
5A-5D veranschaulichen die Wirkung eines beispielhaften TLR9-Agonisten auf die menschliche MD SC-Programmierung.
6 zeigt das Schema für die Entwicklung von Lebermetastasen in Mäusen und ein entsprechendes Behandlungsprotokoll für die Verabreichung über die Pfortader und die Schwanzvene.
7A-7B zeigen die Wirkung eines beispielhaften TLR9-Agonisten auf die Tumorlast.
8A-8D illustrieren eine Gating-Strategie und die Wirkung des beispielhaften TLR9-Agonisten auf die MDSC-Population, M-MDSC-Population und G-MDSC-Population.
9A-9C zeigen eine Gating-Strategie und die Wirkung des beispielhaften TLR9-Agonisten auf die M1- und M2-Makrophagenpopulationen in Lebermetastasen.
10A-10B zeigen die Wirkung des beispielhaften TLR9-Agonisten auf NF_κB, STAT3-Aktivierung und IL6-Produktion.
11A-11B zeigen die Wirkung der Konzentration des beispielhaften TLR9-Agonisten auf die NF_κB-Signalaktivität.
12 veranschaulicht eine Probenverarbeitungsmethodik von vier Primärlappen einer Leber, die in 1 cm dicke Scheiben geschnitten werden.
zeigen repräsentative Histogramme von Pixelintensitätswerten in unbehandeltem bzw. behandeltem Gewebe.

Die zeigen Nah-IR-Bildgebung, die die Verabreichung eines markierten ODN durch Nadelinjektion ( mit der Verabreichung an ein lokales arterielles Netzwerk unter Verwendung einer PEDD-Vorrichtung ( vergleicht.
15A-15B zeigen Nah-IR-Bildgebung, die die Abgabe eines markierten ODN durch Nadelinjektion (15A) mit der Abgabe an ein lokales arterielles Netzwerk unter Verwendung einer PEDD-Vorrichtung (15B) vergleicht.
16A-16B zeigen die Signalintensität von markiertem ODN 2395 und SD-101 einzeln, verabreicht durch Nadel und PEDD, sowie die Signalintensität für beide Verbindungen zusammen.
17A-17B zeigen die therapeutische Abdeckung für markiertes ODN 2395 und SD-101, einzeln verabreicht durch Nadel und PEDD, sowie das Gewebevolumen für beide Verbindungen zusammen.
18 zeigt die Reaktion der Leberenzyme nach Infusion des markierten Oligonukleotids in die Leberarterie.
19 zeigt die Signalintensität von markiertem ODN, das im Schweinelebergewebe nach Verabreichung durch einen Endlochkatheter oder durch PEDD zurückgehalten wird.
20A-20C zeigen Schweinelebergewebe, das einen hohen Grad an Signalüberlappung mit Endloch- und PEDD-Vorrichtungen aufweist.
21 A-21C zeigen Schweinelebergewebe, das einen geringen Grad an Signalüberlappung mit Endloch- und PEDD-Geräten aufweist.
22 zeigt ein Venn-Diagramm des mittleren behandelten Gewebevolumens bei der Endlochbehandlung, des mittleren behandelten Gewebevolumens bei der PEDD-Behandlung und des überlappenden mitbehandelten Gewebevolumens.
23 zeigt ein klinisches Gesamtstudiendesign zur Behandlung von Lebermetastasen des Aderhautmelanoms gemäß einer Ausführungsform der Erfindung.
In den Zeichnungen werden, sofern nicht anders angegeben, dieselben Bezugsziffern und Zeichen verwendet, um gleiche Merkmale, Elemente, Komponenten oder Teile der dargestellten Ausführungsformen zu bezeichnen. Während die vorliegende Offenbarung nun im Detail unter Bezugnahme auf die Figuren beschrieben wird, geschieht dies in Verbindung mit den illustrativen Ausführungsformen und ist nicht durch die in den Figuren und den beigefügten Absätzen dargestellten besonderen Ausführungsformen beschränkt.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG
Die folgende Beschreibung der Ausführungsformen enthält nicht einschränkende, repräsentative Beispiele, die auf Ziffern verweisen, um insbesondere Merkmale und Lehren verschiedener Aspekte der Erfindung zu beschreiben. Die beschriebenen Ausführungsformen können separat oder in Kombination mit anderen Ausführungsformen aus der Beschreibung der Ausführungsformen realisiert werden. Eine fachkundige Person, die die Beschreibung der Ausführungsformen liest, sollte in der Lage sein, die verschiedenen beschriebenen Aspekte der Erfindung zu verstehen. Die Beschreibung der Ausführungsformen sollte das Verständnis der Erfindung so weit erleichtern, dass andere Ausführungsformen, die nicht ausdrücklich beschrieben sind, aber dem Fachmann, der die Beschreibung der Ausführungsformen gelesen hat, bekannt sind, als mit der Anwendung der Erfindung vereinbar verstanden werden. Toll-like-Rezeptor-Agonisten
Toll-like-Rezeptoren sind Mustererkennungsrezeptoren, die mikrobielle pathogenassoziierte molekulare Muster (PAMPs) erkennen können. Die Stimulierung von TLR, wie z. B. TLR9, kann nicht nur eine breite Stimulierung des angeborenen Immunsystems bewirken, sondern auch spezifisch auf die Hauptursachen der Immunsuppression in der Leber einwirken. TLR1-10 werden beim Menschen exprimiert und erkennen eine Vielzahl von mikrobiellen PAMPs. In diesem Zusammenhang kann TLR9 auf unmethylierte CpG-DNA reagieren, einschließlich mikrobieller DNA. CpG bezieht sich auf das Motiv eines Cytosin- und Guanin-Dinukleotids 1. TLR9 wird konstitutiv in B-Zellen, plasmazytoiden dendritischen Zellen (pDCs), aktivierten Neutrophilen, Monozyten/Makrophagen, T-Zellen und MDSCs exprimiert. TLR9 wird auch in Nicht-Immunzellen exprimiert, darunter Keratinozyten sowie Darm-, Gebärmutterhals- und Atemwegsepithelzellen. TLR9 kann an seine Agonisten in Endosomen binden. Die Signalübertragung kann über MYD88/IkB/NfKB erfolgen, um die Expression proinflammatorischer Zytokine zu induzieren. Ein paralleler Signalweg über IRF7 induziert Interferone vom Typ 1 und 2 (z. B. IFN-α, IFN-γ usw.), die adaptive Immunreaktionen stimulieren. Darüber hinaus können TLR9-Agonisten die Zytokin- und IFN-Produktion und die funktionelle Reifung von Antigen-präsentierenden dendritischen Zellen induzieren.
Gemäß einer Ausführungsform kann ein TLR9-Agonist MDSCs reduzieren und umprogrammieren. MDSCs sind die Haupttreiber der Immunsuppression in der Leber. MDSCs treiben auch die Expansion anderer Suppressorzelltypen wie T-regulatorische Zellen (Tregs), tumorassoziierte Makrophagen (TAMs) und krebsassoziierte Fibroblasten (CAFs) an. MDSC können Immunzellen herunterregulieren und die Wirksamkeit von Immuntherapien beeinträchtigen. Darüber hinaus sind hohe MDSC-Werte im Allgemeinen eine Vorhersage für den schlechten Verlauf einer Krebserkrankung. In diesem Zusammenhang wird angenommen, dass die Verringerung, Veränderung oder Beseitigung von MDSCs die Fähigkeit des Immunsystems des Wirts, den Krebs zu bekämpfen, sowie die Fähigkeit der Immuntherapie, günstigere therapeutische Reaktionen hervorzurufen, verbessert. In einer Ausführungsform können TLR9-Agonisten MDSCs in immunstimulierende Ml-Makrophagen umwandeln, unreife dendritische Zellen in reife dendritische Zellen umwandeln und Effektor-T-Zellen expandieren, um eine reaktionsfähige Tumormikroumgebung zu schaffen, die die Anti-Tumor-Aktivität fördert.
Gemäß einer Ausführungsform können synthetische CpG-Oligonukleotide (CPG-ONs), die die immunstimulierende Natur der mikrobiellen CpG-DNA nachahmen, für den therapeutischen Einsatz entwickelt werden. In einer Ausführungsform ist das Oligonukleotid ein Oligodeoxynukleotid (ODN). Es gibt eine Reihe verschiedener CpG-ODN-Klassentypen, z. B. Klasse A, Klasse B, Klasse C, Klasse P und Klasse S, die bestimmte strukturelle und funktionelle Merkmale gemeinsam haben. CPG-ODNs der Klasse A (oder CPG-A ODNs) werden mit der Reifung von pDCs in Verbindung gebracht, haben aber nur geringe Auswirkungen auf B-Zellen und induzieren am meisten IFNα; CPG-ODNs der Klasse B (oder CPG-B ODNs) induzieren stark die B-Zell-Proliferation, aktivieren die pDC- und Monozyten-Reifung, die NK-Zell-Aktivierung und die Produktion von Entzündungszytokinen; und CPG-ODNs der Klasse C (oder CPG-C ODNs) können die B-Zell-Proliferation und die IFN-α-Produktion induzieren. Ferner können CPG-C ODNs gemäß einer Ausführungsform mit den folgenden Attributen assoziiert sein: (i) unmethylierte Dinukleotid-CpG-Motive, (ii) nebeneinander liegende CpG-Motive mit flankierenden Nukleotiden (z. B. AACGTTCGAA), (iii) ein vollständiges Phosphorothioat (PS)-Grundgerüst, das die Nukleotide verbindet (im Gegensatz zu den natürlichen Phosphodiester (PO)-Grundgerüsten, die in bakterieller DNA zu finden sind), und (iv) eine selbst-komplimentäre, palindromische Sequenz (z.B. AACGTT). In diesem Zusammenhang können sich CPG-C ODNs aufgrund ihrer palindromischen Natur selbst binden, wodurch doppelsträngige Duplex- oder Haarnadelstrukturen entstehen.
Ferner können die CPG-C ODNs gemäß einer Ausführungsform ein oder mehrere 5'-TCG-Trinukleotide, bei denen das 5'-T 0, 1, 2 oder 3 Basen vom 5'-Ende des Oligonukleotids entfernt positioniert ist, und mindestens eine palindromische Sequenz mit einer Länge von mindestens 8 Basen enthalten, die ein oder mehrere unmethylierte CG-Dinukleotide umfasst. Die eine oder mehrere 5'-TCG-Trinukleotidsequenzen können vom 5'-Ende der palindromischen Sequenz durch 0, 1 oder 2 Basen getrennt sein, oder die palindromische Sequenz kann die gesamte oder einen Teil der einen oder mehreren 5'-TCG-Trinukleotidsequenzen enthalten. In einer Ausführungsform sind die CpG-C-ODNs 12 bis 100 Basen lang, vorzugsweise 12 bis 50 Basen, vorzugsweise 12 bis 40 Basen oder vorzugsweise 12 bis 30 Basen lang. In einer Ausführungsform hat das CpG-C ODN eine Länge von 30 Basen. In einer Ausführungsform ist das ODN mindestens (Untergrenze) 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 50, 60, 70, 80 oder 90 Basen lang. In einer Ausführungsform ist das ODN höchstens (Obergrenze) 100, 90, 80, 70, 60, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31 oder 30 Basen lang.
In einer Ausführungsform ist die mindestens eine palindromische Sequenz 8 bis 97 Basen lang, vorzugsweise 8 bis 50 Basen lang oder vorzugsweise 8 bis 32 Basen lang. In einer Ausführungsform ist die mindestens eine palindromische Sequenz mindestens (Untergrenze) 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 oder 30 Basen lang. In einer Ausführungsform ist die mindestens eine palindromische Sequenz höchstens (Obergrenze) 50, 48, 46, 44, 42, 40, 38, 36, 34, 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12 oder 10 Basen lang.
In einer Ausführungsform kann das CpG-C ODN die Sequenz von SEQ ID NO: 1 umfassen.
Gemäß einer Ausführungsform kann das CpG-C ODN das SD-101 umfassen. SD-101 ist ein 30-mer Phosphorothioat-Oligodesoxynukleotid mit der folgenden Sequenz:

5'-TCG AAC GTT CGA ACG TTC GAA CGT TCG AAT-3' (SEQ ID NO: 1)

Der Wirkstoff SD-101 wird in Form des Natriumsalzes isoliert. Die Struktur von SD-101 ist in 1 dargestellt.
Die Molekularformel der freien Säure von SD-101 ist C₂₉₃ H₃₆₉ N₁₁₂ O₁₄₉ P₂₉ S₂₉ und die Molekularmasse der freien Säure von SD-101 beträgt 9,672 Dalton. Die Molekularformel des SD-101-Natriumsalzes ist C₂₉₃ H₃₄₀ N₁₁₂ O₁₄₉ P₂₉ S₂₉ Na₂₉ und die Molekularmasse des SD-101-Natriumsalzes beträgt 10.309 Dalton.
Ferner kann gemäß einer Ausführungsform die CPG-C ODN-Sequenz der SEQ ID NO 172 entsprechen, wie sie in dem US-Patent Nr. 9,422,564 beschrieben ist, das durch Bezugnahme hierin in seiner Gesamtheit enthalten ist.
In einer Ausführungsform kann das CpG-C ODN eine Sequenz umfassen, die mindestens 75 % Homologie zu einer der vorgenannten Sequenzen aufweist, wie z. B. SEQ ID NO: 1.
Gemäß einer anderen Ausführungsform kann die CPG-C ODN-Sequenz einer der anderen Sequenzen entsprechen, die in U.S. Patent Nr. 9,422,564 beschrieben sind. Ferner kann die CPG-C ODN-Sequenz auch einer der Sequenzen entsprechen, die in U.S. Patent No. 8,372,413 beschriebenen Sequenzen entsprechen, die ebenfalls durch Bezugnahme in ihrer Gesamtheit hierin aufgenommen sind.
Gemäß einer Ausführungsform kann jedes der hier besprochenen CPG-C ODNs in ihrer pharmazeutisch akzeptablen Salzform vorliegen. Beispielhafte basische Salze sind Ammoniumsalze, Alkalimetallsalze wie Natrium-, Lithium- und Kaliumsalze, Erdalkalimetallsalze wie Calcium- und Magnesiumsalze, Zinksalze, Salze mit organischen Basen (z. B., organische Amine) wie N-Me-D-Glucamin, N-[1-(2,3-Dioleoyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammoniumchlorid, Cholin, Tromethamin, Dicyclohexylamine, t-Butylamine und Salze mit Aminosäuren wie Arginin, Lysin und dergleichen. In einer Ausführungsform liegen die CpG-C-ODNs in Form von Ammonium-, Natrium-, Lithium- oder Kaliumsalzen vor. In einer bevorzugten Ausführungsform liegen die CpG-C ODNs in der Natriumsalzform vor. Das CpG-C ODN kann in einer pharmazeutischen Lösung bereitgestellt werden, die einen pharmazeutisch akzeptablen Hilfsstoff enthält. Alternativ kann das CpG-C ODN als gefriergetrockneter Feststoff bereitgestellt werden, der anschließend vor der Verabreichung in sterilem Wasser, Kochsalzlösung oder einem pharmazeutisch akzeptablen Puffer rekonstituiert wird.
Zu den pharmazeutisch verträglichen Hilfsstoffen der vorliegenden Offenbarung gehören beispielsweise Lösungsmittel, Füllstoffe, Puffermittel, Mittel zur Einstellung der Tonizität und Konservierungsmittel. In einer Ausführungsform können die pharmazeutischen Zusammensetzungen einen Hilfsstoff enthalten, der als eines oder mehrere der folgenden Elemente fungiert: Lösungsmittel, Füllstoff, Puffer und tonisierendes Mittel (z. B. kann Natriumchlorid in Kochsalzlösung sowohl als wässriger Träger als auch als tonisierendes Mittel dienen). Die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Offenbarung sind zur parenteralen und/oder perkutanen Verabreichung geeignet.
In einer Ausführungsform umfassen die pharmazeutischen Zusammensetzungen ein wässriges Vehikel als Lösungsmittel. Geeignete Vehikel sind zum Beispiel steriles Wasser, Kochsalzlösung, phosphatgepufferte Kochsalzlösung und Ringerlösung. In einer Ausführungsform ist die Zusammensetzung isotonisch.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können einen Füllstoff enthalten. Füllstoffe sind besonders nützlich, wenn die pharmazeutische Zusammensetzung vor der Verabreichung lyophilisiert werden soll. In einer Ausführungsform ist das Füllmittel ein Schutzmittel, das zur Stabilisierung und Verhinderung des Abbaus der Wirkstoffe während der Gefrier- oder Sprühtrocknung und/oder während der Lagerung beiträgt. Geeignete Füllstoffe sind Zucker (Mono-, Di- und Polysaccharide) wie Saccharose, Lactose, Trehalose, Mannitol, Sorbital, Glucose und Raffinose.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können ein Puffermittel enthalten. Puffermittel steuern den pH-Wert, um den Abbau des Wirkstoffs während der Verarbeitung, Lagerung und gegebenenfalls Rekonstitution zu verhindern. Geeignete Puffer sind z. B. Salze, die Acetat, Citrat, Phosphat oder Sulfat enthalten. Andere geeignete Puffer sind z. B. Aminosäuren wie Arginin, Glycin, Histidin und Lysin. Das Puffermittel kann außerdem Salzsäure oder Natriumhydroxid enthalten. In einigen Ausführungsformen hält das Puffermittel den pH-Wert der Zusammensetzung in einem Bereich von 4 bis 9 aufrecht. In einer Ausführungsform ist der pH-Wert größer als (Untergrenze) 4, 5, 6, 7 oder 8. In einigen Ausführungsformen ist der pH-Wert kleiner als (Obergrenze) 9, 8, 7, 6 oder 5. Das heißt, der pH-Wert liegt im Bereich von etwa 4 bis 9, wobei die Untergrenze kleiner ist als die Obergrenze.
Die pharmazeutischen Zubereitungen können ein Mittel zur Einstellung der Tonizität enthalten. Geeignete Mittel zur Einstellung der Tonizität sind beispielsweise Dextrose, Glycerin, Natriumchlorid, Glycerin und Mannitol.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können ein Konservierungsmittel enthalten. Geeignete Konservierungsmittel sind z. B. Antioxidantien und antimikrobielle Mittel. In einer Ausführungsform wird die pharmazeutische Zusammensetzung jedoch unter sterilen Bedingungen hergestellt und befindet sich in einem Behälter für den einmaligen Gebrauch, so dass die Zugabe eines Konservierungsmittels nicht erforderlich ist.

Tabelle 1 beschreibt die Chargenformel für SD-101 Drug Product - 16 g/L: Tabelle 1

Inhaltsstoff	Klasse	Konzentration	Menge pro Charge	Klinikgelände DVXA05
Inhaltsstoff	Klasse	Konzentration	Menge pro Charge	Chargengröße 2.224 L
SD-101 Droge Substanz*	GMP	1.6%	16.00 g	35.584g¹
Natriumphosphat, dibasisch und wasserfrei	USP/NF, EP	1.02%	1.02 g	2.268 g
Natriumphosphat, monobasisch wasserfrei	USP	0.34%	0.34g	0.747 g
Natriumchlorid	USP/NF, EP	7.31%	7.31 g	16.257 g
steriles Wasser für Injektionszwecke	USP/NF, EP	QS	QS	2.224 L (kg) (QS)

¹ Die Menge basiert auf dem gemessenen Gehalt in der Lösung (ohne Berücksichtigung der Feuchtigkeit im gefriergetrockneten Pulver)
* SD-101 Arzneimittelwirkstoff in Tabelle 1 spiegelt die Gesamtheit aller Oligonukleotide, einschließlich SD-101, wider.

In einigen Ausführungsformen kann die Einheitsdosisstärke von etwa 0,1 mg/mL bis etwa 20 mg/mL reichen. In einer Ausführungsform beträgt die Einheitsdosisstärke von SD-101 13,4 mg/mL.
CpG-C ODNs können Modifikationen enthalten. Geeignete Modifikationen können Modifikationen der 3'OH- oder 5'OH-Gruppe, Modifikationen der Nukleotidbase, Modifikationen der Zuckerkomponente und Modifikationen der Phosphatgruppe umfassen, sind aber nicht darauf beschränkt.
Modifizierte Basen können in die palindromische Sequenz aufgenommen werden, solange die modifizierte(n) Base(n) dieselbe Spezifität für ihr natürliches Komplement durch Watson-Crick-Basenpaarung beibehalten (z. B. bleibt der palindromische Teil des CpG-C-ODN selbstkomplementär).
CpG-C ODNs können linear oder kreisförmig sein oder kreisförmige Teile und/oder eine Haarnadelschleife enthalten. CpG-C ODNs können einzelsträngig oder doppelsträngig sein. CpG-C ODNs können aus DNA, RNA oder einem DNA/RNA-Hybrid bestehen.
CpG-C ODNs können natürlich vorkommende oder modifizierte, nicht natürlich vorkommende Basen enthalten und können modifizierte Zucker, Phosphate und/oder Termini enthalten. Zu den Phosphatmodifikationen gehören beispielsweise neben den Phosphodiesterbindungen auch Methylphosphonat, Phosphorothioat, Phosphoramidat (verbrückend oder nicht verbrückend), Phosphotriester und Phosphorodithioat, die in beliebiger Kombination verwendet werden können, ohne darauf beschränkt zu sein. In einer Ausführungsform haben CpG-C-ODNs nur Phosphorothioat-Bindungen, nur PhosphodiesterBindungen oder eine Kombination aus Phosphodiester- und Phosphorothioat-Bindungen.
Auf dem Gebiet bekannte Zuckermodifikationen, wie 2'-Alkoxy-RNA-Analoga, 2'-Amino-RNA-Analoga, 2'-Fluor-DNA und 2'-Alkoxy- oder Amino-RNA/DNA-Chimären und andere hier beschriebene, können ebenfalls hergestellt und mit jeder Phosphatmodifikation kombiniert werden. Beispiele für Basenmodifikationen umfassen, sind aber nicht beschränkt auf die Addition einer elektronenziehenden Einheit an C-5 und/oder C-6 eines Cytosins des CpG-C ODN (z.B. 5-Bromcytosin, 5-Chlorcytosin, 5-Fluorcytosin, 5-Jodcytosin) und C-5 und/oder C-6 eines Uracils des CpG-C ODN (z.B. 5-Bromouracil, 5-Chlorouracil, 5-Fluorouracil, 5-Jodouracil). Wie bereits erwähnt, sollte die Verwendung einer Basenmodifikation in einer palindromischen Sequenz eines CpG-C ODN die Selbstkomplementarität der beteiligten Basen für die Watson-Crick-Basenpaarung nicht beeinträchtigen. Außerhalb einer palindromischen Sequenz können modifizierte Basen jedoch ohne diese Einschränkung verwendet werden. So können z. B. 2'-O-Methyl-Uridin und 2'-O-Methyl-Cytidin außerhalb der palindromischen Sequenz verwendet werden, während 5-Bromo-2'-desoxy-Cytidin sowohl innerhalb als auch außerhalb der palindromischen Sequenz verwendet werden kann. Andere modifizierte Nukleotide, die sowohl innerhalb als auch außerhalb der palindromischen Sequenz verwendet werden können, sind 7-Deaza-8-aza-dG, 2-Amino-dA und 2-Thio-dT.
Duplex- (d.h. doppelsträngige) und Haarnadelformen der meisten ODNs befinden sich häufig in einem dynamischen Gleichgewicht, wobei die Haarnadelform im Allgemeinen bei niedriger Oligonukleotidkonzentration und höheren Temperaturen bevorzugt wird. Kovalente Zwischenstrang- oder Intrastrang-Vernetzungen erhöhen die Duplex- bzw. Haarnadel-Stabilität gegenüber thermischen, ionischen, pH- und konzentrationsbedingten Konformationsänderungen. Chemische Querverbindungen können verwendet werden, um das Polynukleotid für die physikalisch-chemische und biologische Charakterisierung entweder in der Duplex- oder der Haarnadelform zu fixieren. Vernetzte ODNs, die konformationsmäßig homogen und in ihrer aktivsten Form (entweder Duplex- oder Haarnadelform) „eingesperrt“ sind, könnten möglicherweise aktiver sein als ihre unvernetzten Gegenstücke. Dementsprechend können einige CpG-C-ODNs der vorliegenden Offenbarung kovalente Zwischenstrang- und/oder Intrastrang-Vernetzungen enthalten.
Die Techniken zur Herstellung von Polynukleotiden und modifizierten Polynukleotiden sind in der Technik bekannt. Natürlich vorkommende DNA oder RNA, die Phosphodiesterbindungen enthalten, können
können im Allgemeinen synthetisiert werden, indem das entsprechende Nukleosidphosphoramidit nacheinander an die 5'-Hydroxygruppe der wachsenden ODN, die am 3'-Ende an einen festen Träger gebunden ist, gekoppelt wird, gefolgt von der Oxidation des intermediären Phosphittriesters zu einem Phosphattriester. Sobald die gewünschte Polynukleotidsequenz synthetisiert ist, wird das Polynukleotid vom Träger entfernt, die Phosphattriestergruppen werden zu Phosphatdiestern entschützt und die Nukleosidbasen werden mit wässrigem Ammoniak oder anderen Basen entschützt.
Das CpG-C ODN kann phosphatmodifizierte Oligonukleotide enthalten, von denen einige dafür bekannt sind, das ODN zu stabilisieren. Dementsprechend umfassen einige Ausführungsformen stabilisierte CpG-C ODNs. Das Phosphorderivat (oder die modifizierte Phosphatgruppe), das an den Zucker- oder Zuckeranalogteil im ODN gebunden sein kann, kann ein Monophosphat, Diphosphat, Triphosphat, Alkylphosphonat, Phosphorothioat, Phosphorodithioat, Phosphoramidat oder ähnliches sein.
CpG-C ODNs können ein oder mehrere Ribonukleotide (mit Ribose als einzigem oder Hauptzuckerbestandteil), Desoxyribonukleotide (mit Desoxyribose als Hauptzuckerbestandteil), modifizierte Zucker oder Zuckeranaloga enthalten. So kann die Zuckerkomponente neben Ribose und Desoxyribose auch Pentose, Desoxypentose, Hexose, Desoxyhexose, Glucose, Arabinose, Xylose, Lyxose und eine analoge Cyclopentylgruppe sein. Der Zucker kann in Form von Pyranosyl oder Furanosyl vorliegen. Im CpG-C-Oligonukleotid ist die Zuckerkomponente vorzugsweise das Furanosid von Ribose, Desoxyribose, Arabinose oder 2'-0-Alkylribose, und der Zucker kann an die jeweiligen heterocyclischen Basen in jeder anomeren Konfiguration gebunden sein. Die Herstellung dieser Zucker oder Zuckeranaloga und der entsprechenden Nukleoside, bei denen diese Zucker oder Analoga an eine heterocyclische Base (Nukleinsäurebase) gebunden sind, ist an sich bekannt und muss daher hier nicht beschrieben werden. Zuckermodifikationen können auch vorgenommen und mit jeder Phosphatmodifikation bei der Herstellung eines CpG-C ODN kombiniert werden.
Die heterozyklischen Basen oder Nukleinsäurebasen, die in das CpG-C-ODN eingebaut werden, können die natürlich vorkommenden Hauptpurin- und Pyrimidinbasen sein (nämlich Uracil, Thymin, Cytosin, Adenin und Guanin, wie oben erwähnt), sowie natürlich vorkommende und synthetische Modifikationen dieser Hauptbasen. So kann ein CpG-C ODN eines oder mehrere von Inosin, 2'-Desoxyuridin und 2-Amino-2'-desoxyadenosin enthalten.
Gemäß einer anderen Ausführungsform ist das CPG-ODN eines von CPG-ODNs der Klasse A (CPGP-A ODNs), CPG-ODNs der Klasse B (CPG-B ODNs), CPG-ODNs der Klasse P (CPG-P ODN) und CPG-ODNs der Klasse S (CPG-S ODN). In diesem Zusammenhang kann das CPG-A ODN CMP-001 sein.
In einer anderen Ausführungsform kann das CPG-ODN Tilsotolimod (IMO-2125) sein.
Checkpoint-Inhibitoren
Gemäß einer Ausführungsform können die TLR-Agonisten der vorliegenden Erfindung in Kombination mit einem Checkpoint-Inhibitor (CPI) verwendet werden. Der Checkpoint-Inhibitor kann einen Programmed Death 1-Rezeptor (PD-1)-Antagonisten umfassen. Ein PD-1-Antagonist kann jede chemische Verbindung oder jedes biologische Molekül sein, das die Bindung des auf einer Krebszelle exprimierten Programmed Cell Death 1 Ligand 1 (PD-L1) an den auf einer Immunzelle (T-Zelle, B-Zelle oder NKT-Zelle) exprimierten PD-1 blockiert und vorzugsweise auch die Bindung des auf einer Krebszelle exprimierten PD-L2 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 (PD-L2) an den von der Immunzelle exprimierten PD-1 blockiert. Alternative Namen oder Synonyme für PD-1 und seine Liganden sind: PDCD1, PD1, CD279 und SLEB2 für PD-1; PDCD1L1, PDL1, B7H1, B7-4, CD274 und B7-H für PD-L1; und PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc und CD273 für PD-L2. Bei allen Behandlungsmethoden, Medikamenten und Verwendungen der vorliegenden Erfindung, bei denen ein menschliches Individuum behandelt wird, blockiert der PD-1-Antagonist die Bindung von menschlichem PD-L1 an menschliches PD-1, und vorzugsweise blockiert er die Bindung von sowohl menschlichem PD-L1 als auch PD-L2 an menschliches PD-1.
Gemäß einer Ausführungsform kann der PD-1-Antagonist einen monoklonalen Antikörper (mAb) oder ein antigenbindendes Fragment davon umfassen, der/das spezifisch an PD-1 oder PD-L1 bindet, und vorzugsweise spezifisch an menschliches PD-1 oder menschliches PD-L1 bindet. Bei dem mAb kann es sich um einen menschlichen Antikörper, einen humanisierten Antikörper oder einen chimären Antikörper handeln, der eine menschliche konstante Region enthalten kann. In einigen Ausführungsformen ist die humane konstante Region aus der Gruppe ausgewählt, die aus den konstanten Regionen IgGl, IgG2, IgG3 und IgG4 besteht, und in bevorzugten Ausführungsformen ist die humane konstante Region eine konstante Region IgG1 oder IgG4. In einigen Ausführungsformen ist das antigenbindende Fragment ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Fab-, Fab'-SH-, F(ab')₂-, scFv- und Fv-Fragmenten.
Gemäß einer Ausführungsform kann der PD-1-Antagonist ein Immunoadhäsin umfassen, das spezifisch an PD-1 oder PD-L1 bindet und vorzugsweise spezifisch an menschliches PD-1 oder menschliches PD-L1 bindet, z. B. ein Fusionsprotein, das den extrazellulären oder PD-1-bindenden Teil von PD-L1 oder PD-L2 enthält, der an eine konstante Region wie eine Fc-Region eines Immunglobulinmoleküls fusioniert ist.
Gemäß einer Ausführungsform kann der PD-1-Antagonist die Bindung von PD-L1 an PD-1 hemmen und hemmt vorzugsweise auch die Bindung von PD-L2 an PD-1. In einigen Ausführungsformen der obigen Behandlungsmethode, Medikamente und Verwendungen ist der PD-1-Antagonist ein monoklonaler Antikörper oder ein antigenbindendes Fragment davon, der spezifisch an PD-1 oder an PD-L1 bindet und die Bindung von PD-L1 an PD-1 blockiert. In einer Ausführungsform ist der PD-1-Antagonist ein Anti-PD-1-Antikörper, der eine schwere Kette und eine leichte Kette umfasst.
Gemäß einer Ausführungsform kann der PD-1-Antagonist einer von Nivolumab, Pembrolizumab und Cemiplimab sein. Gemäß einer anderen Ausführungsform wird Nivolumab intravenös (IV) über eine periphere Vene in einer Dosis von 480 mg alle vier Wochen („Q4W“) verabreicht. Gemäß einer anderen Ausführungsform wird Nivolumab intravenös (IV) über eine periphere Vene in einer Dosis von 1 mg/kg alle drei Wochen („Q3W“) verabreicht. In einer weiteren Ausführungsform wird Nivolumab gleichzeitig, zur gleichen Zeit, ungefähr zur gleichen Zeit oder am gleichen Tag mit SD-101 verabreicht. In einer anderen Ausführungsform wird Nivolumab wöchentlich, alle zwei Wochen, alle drei Wochen, alle vier Wochen oder monatlich im Anschluss an die Verabreichung von einem oder mehreren Zyklen von SD-101 verabreicht.
Gemäß einer anderen Ausführungsform kann das CPI einen PD-L1-Antagonisten enthalten. In diesem Zusammenhang kann der PD-L1-Antagonist einer der Wirkstoffe Atezolizumab, Avelumab und Durvalumab sein.
Gemäß einer anderen Ausführungsform kann der CPI einen CTLA-4-Antagonisten enthalten. In diesem Zusammenhang kann der CTLA-4-Antagonist Ipilimumab sein. Gemäß einer anderen Ausführungsform wird Ipilimumab intravenös (IV) über eine periphere Vene in einer Dosis von 3 mg/kg alle drei Wochen verabreicht. In einer weiteren Ausführungsform wird Ipilimumab gleichzeitig, zur gleichen Zeit, ungefähr zur gleichen Zeit oder am gleichen Tag mit SD-101 verabreicht. In einer anderen Ausführungsform wird Nivolumab einmal pro Woche, alle zwei Wochen, alle drei Wochen, alle vier Wochen oder monatlich nach der Verabreichung eines oder mehrerer Zyklen von SD-101 verabreicht.
Vorrichtungen zur Erzielung einer lokoregionalen Verabreichung
Gemäß einer Ausführungsform kann jede der oben beschriebenen Vorrichtungen jede Vorrichtung umfassen, die nützlich ist, um eine lokoregionale Verabreichung an einen Tumor zu erreichen, einschließlich eines Katheters selbst, oder sie kann einen Katheter zusammen mit anderen Komponenten (z. B. Filterventil, Ballon, Drucksensorsystem, Pumpsystem, Spritze, äußerer Verabreichungskatheter usw.) umfassen, die in Kombination mit dem Katheter verwendet werden können. In bestimmten Ausführungsformen ist der Katheter ein Mikrokatheter.
In einigen Ausführungsformen kann die Vorrichtung eine oder mehrere Eigenschaften aufweisen, die unter anderem Folgendes umfassen: Selbstzentrierungsfähigkeit, die für eine homogene Verteilung der Therapie in einem stromabwärts verzweigten Gefäßnetz sorgen kann; Anti-Reflux-Fähigkeit, die den retrograden Fluss des TLR-Agonisten blockieren oder hemmen kann (z. B. unter Verwendung eines Ventils und Filters und/oder Ballons); ein System zur Messung des Drucks im Inneren des Gefäßes; und ein Mittel zur Modulation des Drucks im Inneren des Gefäßes, z. B. durch Verursachen einer Druckabnahme bei der Platzierung und während der 2cc/min-Infusion und einer Druckerhöhung während des Kochsalzbolus. In einigen Ausführungsformen ist das System so ausgelegt, dass der Druck während des gesamten Verfahrens kontinuierlich in Echtzeit überwacht wird.
In einigen Ausführungsformen ist die Vorrichtung, die zur Durchführung der Verfahren der vorliegenden Erfindung verwendet werden kann, eine Vorrichtung, wie sie in U. S. Patent No. 8,500,775 , U. S. Patent No. 8,696,698 , U. S. Patent No. 8,696,699 , U.S. Patent No. 9,539,081 , U.S. Patent No. 9,808,332 , U.S. Patent No. 9,770,319 , U.S. PatentNo. 9,968,740 , U.S. PatentNo. 10,813,739 , U.S. PatentNo. 10,588,636 , U.S. PatentNo. 11,090,460 , U.S. Patent Publication No. 2018/0193591 , US-Patentveröffentlichung Nr. 2018/0250469 , US-Patentveröffentlichung Nr. 2019/0298983 , US-Patentveröffentlichung Nr. 2020/0038586 und US-Patentveröffentlichung Nr. 2020-0383688 , die alle durch Bezugnahme hierin in ihrer Gesamtheit enthalten sind.
In einigen Ausführungsformen ist die Vorrichtung eine Vorrichtung, wie sie in U.S. Patent No. 9,770,319. In bestimmten Ausführungsformen kann die Vorrichtung eine Vorrichtung sein, die als Surefire Infusion System bekannt ist.
In einigen Ausführungsformen unterstützt die Vorrichtung die Messung des intravaskulären Drucks während der Anwendung. In einigen Ausführungsformen ist die Vorrichtung eine Vorrichtung, wie sie in der U.S. Patentveröffentlichung Nr. 2020-0383688 offenbart ist. In bestimmten Ausführungsformen kann es sich bei der Vorrichtung um ein Gerät handeln, das als TriSalus Infusion System bekannt ist. In bestimmten Ausführungsformen kann es sich bei dem Gerät um das TriNav®-Infusionssystem handeln. Der TriNav® ist ein einlumiger Katheter, der mit einem Einwegventil ausgestattet ist, das dynamisch auf lokale Druckveränderungen reagiert, wie sie z. B. durch den Herzzyklus oder durch Infusionen hervorgerufen werden. Die Ventilstruktur moduliert die distalen Gefäßdrücke und den Blutfluss. Dies wiederum kann die therapeutische Verteilung und die First-Pass-Absorption aufgrund der verlängerten Kontaktzeit innerhalb des Gefäßsystems verändern.
In einigen Ausführungsformen kann der TLR-Agonist durch eine Vorrichtung über PEDD verabreicht werden. In einigen Ausführungsformen kann der TLR-Agonist verabreicht werden, während der Druck im Gefäß überwacht wird, was zur Anpassung und Korrektur der Positionierung der Vorrichtung an der Infusionsstelle und/oder zur Anpassung der Infusionsgeschwindigkeit verwendet werden kann. Der Druck kann zum Beispiel durch ein Drucksensorsystem mit einem oder mehreren Drucksensoren überwacht werden.
Die Infusionsgeschwindigkeit kann angepasst werden, um den Gefäßdruck zu verändern, was das Eindringen des TLR-Agonisten in das Zielgewebe oder den Tumor fördern kann. In einigen Ausführungsformen kann die Infusionsgeschwindigkeit unter Verwendung einer Spritzenpumpe als Teil des Verabreichungssystems eingestellt und/oder kontrolliert werden. In einigen Ausführungsformen kann die Infusionsgeschwindigkeit mit Hilfe eines Pumpensystems eingestellt und/oder gesteuert werden. In einigen Ausführungsformen kann die Infusionsrate unter Verwendung eines Pumpensystems etwa 0,1 cc/min bis etwa 40 cc/min oder etwa 0,1 cc/min bis etwa 30 cc/min oder etwa 0,5 cc/min bis etwa 25 cc/min oder etwa 0,5 cc/min bis etwa 20 cc/min oder etwa 1 cc/min bis etwa 15 cc/min oder etwa 1 cc/min bis etwa 10 cc/min oder etwa 1 cc/min bis etwa 8 cc/min oder etwa 1 cc/min bis etwa 5 cc/min betragen. Ferner kann die Infusionsgeschwindigkeit bei Verwendung einer Bolusinfusion etwa 30 cc/min bis etwa 360 cc/min oder etwa 120 cc/min bis etwa 240 cc/min betragen. In einer Ausführungsform dauert das SD-101-Infusionsverfahren etwa 30-60 Minuten. In einer weiteren Ausführungsform wird SD-101 über einen Zeitraum von etwa 25 Minuten verabreicht.
Methoden, die die Verabreichung an die Leber umfassen
In einer Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung Verfahren zur Behandlung eines festen Tumors in der Leber, wie z.B. eines Tumors, der die Metastase eines Melanoms ist, wie z.B. eines Aderhautmelanoms, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Toll-like-Rezeptor-Agonisten an einen Patienten, der dies benötigt, umfasst, wobei der Toll-like-Rezeptor-Agonist durch eine Vorrichtung mittels HAI an einen solchen festen Tumor in der Leber verabreicht wird. HAI bezieht sich auf die Infusion einer Behandlung in die Leberarterie der Leber. In einer Ausführungsform wird der Toll-like-Rezeptor-Agonist oder werden die Agonisten durch die perkutane Einführung einer Vorrichtung in die Verzweigungen einer Leberarterie eingebracht, z. B. durch einen Katheter und/oder eine Vorrichtung, die eine druckunterstützte Verabreichung ermöglicht. Gemäß einer Ausführungsform ist der Toll-like-Rezeptor-Agonist ein TLR9-Agonist, und in einigen Ausführungsformen ist der TLR9-Agonist SD-101. In einer Ausführungsform ist der Patient ein menschlicher Patient.
Gemäß einer anderen Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung Verfahren zur Behandlung eines festen Tumors in der Leber, wie eines Tumors, der die Metastase eines Melanoms, wie eines Aderhautmelanoms, ist, wobei das Verfahren die Verabreichung eines Toll-like-Rezeptor-Agonisten an einen Patienten, der dies benötigt, umfasst, wobei der Toll-like-Rezeptor-Agonist durch eine Vorrichtung mittels PVI an einen solchen festen Tumor in der Leber verabreicht wird. PVI bezieht sich auf die Infusion einer Behandlung in das hepatische portalvenöse System. In einer Ausführungsform wird der Toll-like-Rezeptor-Agonist oder werden die Agonisten durch die perkutane Einführung einer Vorrichtung in die Zweige des hepatischen Pfortadersystems eingebracht, z. B. durch einen Katheter und/oder eine Vorrichtung, die eine druckunterstützte Verabreichung ermöglicht. Gemäß einer Ausführungsform ist der Toll-like-Rezeptor-Agonist ein TLR₉-Agonist und in einigen Ausführungsformen ist der TLR₉-Agonist SD-101. In einer Ausführungsform ist der Patient ein menschlicher Patient.
Gemäß einer Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Lebermetastase eines Aderhautmelanoms, wobei das Subjekt histologisch oder zytologisch bestätigte metastatische UM mit einer reinen Lebererkrankung oder einer leberdominanten Erkrankung aufweist. Bei einer leberdominanten Erkrankung können intrahepatische Metastasen den größten Anteil der Erkrankung im Vergleich zu anderen Organen ausmachen, wobei als zulässige extrahepatische Lokalisationen die Lunge, die Haut oder das subkutane Gewebe und die Knochen in Frage kommen. Eine leberdominante Erkrankung kann auch dann vorliegen, wenn intrahepatische Metastasen den größten Anteil der Erkrankung im Vergleich zu anderen Organen ausmachen oder wenn das Fortschreiten von LM eine erhebliche Bedrohung für das Leben des Patienten darstellt. Gemäß einer anderen Ausführungsform umfassen die Verfahren die Verabreichung an einen Patienten, der männlich oder weiblich und achtzehn Jahre alt oder älter ist.
Gemäß einer anderen Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Lebermetastase eines Aderhautmelanoms, wobei das Subjekt innerhalb von 14 Tagen vor der Aufnahme in die Studie keine vorherige zytotoxische Chemotherapie, gezielte Therapie oder externe Strahlentherapie erhalten hat. Gemäß einer anderen Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung die Verabreichung an Probanden, die innerhalb von 30 Tagen vor der Aufnahme in die Studie keine Therapie mit einer vorherigen immunologischen Checkpoint-Blockade erhalten haben. Checkpoint-Blockade innerhalb von 30 Tagen vor der ersten Dosis der Studienintervention erhalten haben und die keine laufenden immunvermittelten AEs Grad 2 oder höher aufweisen. Gemäß einer weiteren Ausführungsform werden die Verfahren der vorliegenden Erfindung an Probanden verabreicht, die noch nie eine Therapie mit einer vorherigen immunologischen Checkpoint-Blockade erhalten haben. Gemäß einer Ausführungsform der Erfindung umfassen die Verfahren auch die Verabreichung an Patienten, die noch nie eine vorherige embolische HAI-Therapie mit permanentem embolischem Material erhalten haben. In einer anderen Ausführungsform schließen die Verfahren der vorliegenden Erfindung Probanden ein, die eine vorherige chirurgische Resektion oder Radiofrequenzablation einer oligometastatischen Lebererkrankung erhalten haben.
Gemäß einer anderen Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Lebermetastase eines Aderhautmelanoms, wobei das Subjekt keine Vorgeschichte oder andere gleichzeitige Malignität aufweist, es sei denn, die Malignität ist klinisch unbedeutend. In einer anderen Ausführungsform können Patienten, die nach den Methoden der vorliegenden Erfindung behandelt werden, keine laufende Behandlung haben. In einer weiteren Ausführungsform ist das Subjekt klinisch stabil.
In einer anderen Ausführungsform können die Verfahren der vorliegenden Erfindung die Verabreichung an einen Patienten umfassen, der eine messbare Erkrankung in der Leber gemäß den RECIST v.1.1-Kriterien aufweist. In einer weiteren Ausführungsform können die Verfahren der vorliegenden Erfindung die Verabreichung an einen Patienten umfassen, der beim Screening einen Eastern Cooperative Oncology Group („ECOG“) Performance Score („PS“) von 0-1 aufweist. In einer anderen Ausführungsform haben Probanden, denen eine Therapie gemäß den Methoden der vorliegenden Erfindung verabreicht wird, eine vom Prüfarzt geschätzte Lebenserwartung von mehr als 3 Monaten beim Screening. In einer weiteren Ausführungsform haben die Probanden ein QTc-Intervall ≤480 msec.
In einer anderen Ausführungsform sind alle assoziierten klinisch signifikanten medikamentenbedingten Toxizitäten aus früheren Krebstherapien vor der Behandlung abgeklungen. In dieser Ausführungsform ist die Auflösung auf Grad ≤1 oder auf das Niveau des Patienten vor der Behandlung. In einer weiteren Ausführungsform kann der Patient Alopezie des Grades 2 und Endokrinopathien haben, die durch eine Ersatztherapie kontrolliert werden.
In einer anderen Ausführungsform können die Verfahren der vorliegenden Erfindung die Verabreichung an einen Patienten umfassen, der beim Screening eine angemessene Organfunktion aufweist. In einer Ausführungsform kann ein Proband mit adäquater Organfunktion eine oder mehrere der folgenden Eigenschaften aufweisen: (i) Thrombozytenzahl >100.000/µL, (2) Hämoglobin ≥8,0 g/dL, (3) Anzahl der weißen Blutkörperchen (WBC) >2.000/µL, (4) Serumkreatinin ≤2,0 mg/dL, es sei denn, die gemessene Kreatinin-Clearance ist >40 mL/min/1. 73 m², (5) Gesamtbilirubin und direktes Bilirubin ≤2,0 × die obere Grenze des Normalwerts (ULN) und alkalische Phosphatase <5 × ULN, (6) bei Patienten mit dokumentiertem Morbus Gilbert Gesamtbilirubin bis zu 3. 0 mg/dL, (7) ALT und AST ≤5 × ULN und (8) Prothrombinzeit/International Normalized Ratio (INR) oder aktivierte partielle Thromboplastinzeit (aPTT) Testergebnisse beim Screening ≤1,5 × ULN (dies gilt nur für Patienten, die keine therapeutische Antikoagulation erhalten; Patienten, die eine therapeutische Antikoagulation erhalten, sollten vor der ersten Dosis der Studienintervention mindestens 4 Wochen lang eine stabile Dosis erhalten).
Gemäß einer anderen Ausführungsform können die Methoden der vorliegenden Erfindung auch zur Behandlung von Lebermetastasen infolge anderer Krebsarten, z. B. Darmkrebs (d. h. Lebermetastasen von Darmkrebs), Bauchspeicheldrüsenkrebs wie duktales Adenokarzinom der Bauchspeicheldrüse (d. h. Lebermetastasen von duktalem Adenokarzinom der Bauchspeicheldrüse), verwendet werden.
Gemäß einer anderen Ausführungsform ist der Tumor nicht resezierbar.
Gemäß einer anderen Ausführungsform können die Verfahren der vorliegenden Erfindung mit anderen Krebstherapeutika wie Immunmodulatoren, tumortötenden Mitteln und/oder anderen zielgerichteten Therapeutika verabreicht werden.
Gemäß einer Ausführungsform kann die TLR9-Therapie in Kombination mit einer Zelltherapie verabreicht werden, wodurch eine Zelltherapie durch Modulation des Immunsystems ermöglicht wird.
In einer Ausführungsform sollen die oben genannten Methoden der Verabreichung an die Leber dazu führen, dass der Toll-like-Rezeptor-Agonist in den gesamten soliden Tumor, in das gesamte Organ oder im Wesentlichen in den gesamten Tumor eindringt. In einer Ausführungsform verbessern solche Verfahren die Durchblutung des Toll-like-Rezeptor-Agonisten für einen Patienten, der dies benötigt, unter anderem durch Überwindung des interstitiellen Flüssigkeitsdrucks und der festen Belastung des Tumors. In einer anderen Ausführungsform kann die Perfusion durch ein ganzes Organ oder einen Teil davon Vorteile für die Behandlung der Krankheit bringen, indem der Tumor dem therapeutischen Wirkstoff vollständig ausgesetzt wird. In einer Ausführungsform sind solche Methoden besser in der Lage, den Toll-like-Rezeptor in Bereiche des Tumors zu bringen, die nur schlecht an den systemischen Kreislauf angeschlossen sind. In einer anderen Ausführungsform liefern solche Methoden höhere Konzentrationen des Toll-like-Rezeptor-Agonisten in einen solchen Tumor, wobei im Vergleich zur herkömmlichen systemischen Verabreichung über eine periphere Vene oder durch direkte intertumorale Injektion weniger Toll-like-Rezeptor-Agonist an Nicht-Zielgewebe abgegeben wird. In einer Ausführungsform führen solche Methoden zu einer Verringerung der Größe, einer Verringerung der Wachstumsrate, einer Schrumpfung oder einer Beseitigung des soliden Tumors.
Die Methoden der vorliegenden Erfindung können auch die Kartierung der Gefäße, die zum rechten und linken Leberlappen führen, vor der Durchführung der HAI oder die selektive Infusion in bestimmte Sektoren oder Segmente und, falls erforderlich, den Verschluss von Gefäßen, die nicht zur Leber führen oder die anderweitig kein Ziel sind, umfassen. In einigen Ausführungsformen können die Patienten vor der Infusion einem Kartierungsangiogramm unterzogen werden, z. B. über einen Zugang über die gemeinsame Oberschenkelarterie.
Methoden zur Kartierung von Gefäßen im Körper und zur Verabreichung von Therapeutika sind dem normalen Fachmann gut bekannt. Ein Verschluss kann beispielsweise durch die Verwendung von Mikrospulen-Embolisationen erreicht werden, die es dem Arzt ermöglichen, Arterien oder Gefäße außerhalb des Zielgebiets zu blockieren und dadurch die Zufuhr der modifizierten Zellen zur Leber zu optimieren. Die Mikrospiralen-Embolisation kann je nach Bedarf durchgeführt werden, beispielsweise vor der Verabreichung der ersten Dosis von TLR9-Agonisten, um die optimale Infusion einer pharmazeutischen Zusammensetzung zu erleichtern, die die TLR9-Agonisten enthält. In einer anderen Ausführungsform kann ein steriler Schwamm (z. B. GELFOAM) verwendet werden. In diesem Fall kann der sterile Schwamm geschnitten und in den Katheter geschoben werden. In einer anderen Ausführungsform kann der sterile Schwamm als Granulat bereitgestellt werden.
In einigen Ausführungsformen können die Dosen eines TLR9-Agonisten, wie SD-101, etwa 0,01 mg, etwa 0,03 mg, etwa 0,05 mg, etwa 0,1 mg, etwa 0,3 mg, etwa 0,5 mg, etwa 1 mg, etwa 1. 5 mg, etwa 2 mg, etwa 2,5 mg, etwa 3 mg, etwa 3,5 mg, etwa 4 mg, etwa 4,5 mg, etwa 5 mg, etwa 5,5 mg, etwa 6 mg, etwa 6,5 mg, etwa 7 mg, etwa 7,5 mg oder etwa 8 mg. In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in Dosen von 12 mg, 16 mg und 20 mg verabreicht.
Die Verabreichung einer Milligramm-Menge von SD-101 (z. B. etwa 2 mg) beschreibt die Verabreichung von etwa 2 mg der in 1 dargestellten Zusammensetzung. Eine solche Menge an SD-101 (z. B. etwa 2 mg) kann auch in einer Zusammensetzung enthalten sein, die zusätzlich zu dieser Menge an SD-101 weitere Stoffe enthält, wie z. B. andere verwandte und nicht verwandte Verbindungen. Äquivalente molare Mengen anderer pharmazeutisch akzeptabler Salze werden ebenfalls in Betracht gezogen.
In einigen Ausführungsformen können die Dosen eines TLR9-Agonisten, wie SD-101, zwischen etwa 0,01 mg und etwa 10 mg, zwischen etwa 0,01 mg und etwa 8 mg und zwischen etwa 0,01 mg und etwa 4 mg liegen. In einigen Ausführungsformen können die Dosen eines TLR9-Agonisten, wie SD-101, zwischen etwa 2 mg und etwa 10 mg, zwischen etwa 2 mg und etwa 8 mg und zwischen etwa 2 mg und etwa 4 mg liegen. In einigen Ausführungsformen können die Dosen eines TLR9-Agonisten, wie SD-101, weniger als etwa 10 mg, weniger als etwa 8 mg, weniger als etwa 4 mg oder weniger als etwa 2 mg betragen. Solche Dosen können täglich, wöchentlich oder alle zwei Wochen verabreicht werden. In einer Ausführungsform werden die Dosen von SD-101 schrittweise erhöht, z. B. durch Verabreichung von etwa 2 mg, gefolgt von etwa 4 mg und dann von etwa 8 mg.
In einigen Ausführungsformen können die Verfahren der vorliegenden Erfindung die Verabreichung eines Dosierungsschemas umfassen, das Zyklen umfasst, wobei einer oder mehrere der Zyklen die Verabreichung von SD-101 über HAI und PEDD umfassen. Wie hierin verwendet, ist ein „Zyklus“ eine Wiederholung einer Dosierungssequenz. In einer Ausführungsform umfasst ein Zyklus drei wöchentliche Dosen pro Zyklus (d. h. Verabreichung von SD-101 einmal pro Woche über drei aufeinanderfolgende Wochen). In einer Ausführungsform kann ein Behandlungszyklus gemäß der vorliegenden Erfindung Perioden der SD-101-Verabreichung, gefolgt von „Aus“-Perioden oder Ruhezeiten, umfassen. In einer anderen Ausführungsform umfasst der Zyklus zusätzlich zu den drei wöchentlichen Dosen pro Zyklus eine Woche, zwei Wochen, drei Wochen oder vier Wochen als Ruhezeit nach der wöchentlichen Verabreichung von SD-101. In einer weiteren Ausführungsform umfasst der Zyklus zusätzlich zu den drei wöchentlichen Dosen pro Zyklus etwa achtunddreißig Tage als Ruhezeit nach der wöchentlichen Verabreichung von SD-101. In einer anderen Ausführungsform umfasst der gesamte Zyklus etwa zweiundfünfzig Tage. In einer anderen Ausführungsform umfasst das Dosierungsschema mindestens einen, mindestens zwei oder mindestens drei Zyklen oder länger.
In einigen Ausführungsformen bezieht sich die vorliegende Erfindung auf die Verwendung eines TLR9-Agonisten bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines festen Tumors in der Leber, wie eines Tumors, der die Metastase eines Melanoms, wie eines Aderhautmelanoms, ist, wobei das Verfahren die Verabreichung des TLR9-Agonisten an einen Patienten, der dessen bedarf, umfasst, wobei der TLR9-Agonist durch eine Vorrichtung durch HAI an einen solchen festen Tumor in der Leber verabreicht wird.
In einigen Ausführungsformen wird SD-101 zur Behandlung des metastasierten Aderhautmelanoms in einer Dosis von 0,5 mg durch HAI verabreicht, und in einigen Ausführungsformen wird das SD-101 ferner durch eine Vorrichtung verabreicht, die den Druck moduliert (d.h. PEDD). In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 0,5 mg durch HAI über eine Vorrichtung verabreicht, die den Gefäßdruck in Kombination mit einem Checkpoint-Inhibitor moduliert, wobei der Checkpoint-Inhibitor Nivolumab ist. In anderen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 0,5 mg durch HAI und durch eine Vorrichtung, die den Druck moduliert, in Kombination mit Ipilimumab verabreicht. In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 0,5 mg durch HAI und durch eine Vorrichtung, die den Druck moduliert, in Kombination mit Ipilimumab und Nivolumab verabreicht.
In einigen Ausführungsformen wird SD-101 zur Behandlung des metastasierten Aderhautmelanoms in einer Dosis von 2 mg durch HAI verabreicht, und in einigen Ausführungsformen wird das SD-101 außerdem durch eine Vorrichtung zur Druckmodulation (d. h. PEDD) verabreicht. In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 2 mg durch HAI über eine Vorrichtung verabreicht, die den Gefäßdruck in Kombination mit einem Checkpoint-Inhibitor moduliert, wobei der Checkpoint-Inhibitor Nivolumab ist. In anderen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 2 mg durch HAI und durch eine Vorrichtung, die den Druck moduliert, in Kombination mit Ipilimumab verabreicht. In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 2 mg durch HAI und durch eine Vorrichtung, die den Druck moduliert, in Kombination mit Ipilimumab und Nivolumab verabreicht.
In einigen Ausführungsformen wird SD-101 zur Behandlung des metastasierten Aderhautmelanoms in einer Dosis von 4 mg durch HAI verabreicht, und in einigen Ausführungsformen wird SD-101 außerdem durch eine Vorrichtung zur Druckmodulation (d. h. PEDD) verabreicht. In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 4 mg durch HAI über eine Vorrichtung verabreicht, die den Gefäßdruck in Kombination mit einem Checkpoint-Inhibitor moduliert, wobei der Checkpoint-Inhibitor Nivolumab ist. In anderen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 4 mg durch HAI und durch eine Vorrichtung, die den Druck moduliert, in Kombination mit Ipilimumab verabreicht. In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 4 mg durch HAI und durch eine Vorrichtung, die den Druck moduliert, in Kombination mit Ipilimumab und Nivolumab verabreicht.
In einigen Ausführungsformen wird SD-101 zur Behandlung des metastasierten Aderhautmelanoms in einer Dosis von 8 mg durch HAI verabreicht, und in einigen Ausführungsformen wird das SD-101 außerdem durch eine Vorrichtung zur Druckmodulation (d. h. PEDD) verabreicht. In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 8 mg durch HAI über eine Vorrichtung verabreicht, die den Gefäßdruck in Kombination mit einem Checkpoint-Inhibitor moduliert, wobei der Checkpoint-Inhibitor Nivolumab ist. In anderen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 8 mg durch HAI und durch eine Vorrichtung, die den Druck moduliert, in Kombination mit Ipilimumab verabreicht. In einigen Ausführungsformen wird SD-101 in einer Dosis von 8 mg durch HAI und durch eine Vorrichtung, die den Druck moduliert, in Kombination mit Ipilimumab und Nivolumab verabreicht.
In einigen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zur Behandlung von Zielläsionen. In dieser Ausführungsform können die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem vollständigen Ansprechen führen, das das Verschwinden aller Zielläsionen umfasst. In einigen Ausführungsformen können die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem teilweisen Ansprechen führen, das eine Verringerung der Summe des längsten Durchmessers der Zielläsionen um mindestens 30 % umfasst, wobei die Summe des längsten Durchmessers des Ausgangswertes als Referenz genommen wird. In einigen Ausführungsformen können die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einer stabilen Erkrankung der Zielläsionen führen, die weder eine ausreichende Schrumpfung, um als partielles Ansprechen zu gelten, noch eine ausreichende Zunahme, um als fortschreitende Erkrankung zu gelten, umfasst, wobei als Referenz die kleinste Summe des längsten Durchmessers seit Beginn der Behandlung dient. In einer solchen Ausführungsform ist eine fortschreitende Erkrankung durch eine Zunahme der Summe der längsten Durchmesser der Zielläsionen um mindestens 20 % gekennzeichnet, wobei als Bezugsgröße die kleinste Summe des längsten Durchmessers seit Beginn der Behandlung oder das Auftreten einer oder mehrerer neuer Läsionen herangezogen wird. Die Summe muss eine absolute Zunahme von 5 mm aufweisen.
In einer anderen Ausführungsform führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zur Behandlung von Nicht-Ziel-Läsionen. In dieser Ausführungsform können die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem vollständigen Ansprechen führen, das das Verschwinden aller Nicht-Ziel-Läsionen umfasst. In einigen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zum Fortbestehen einer oder mehrerer Nicht-Ziel-Läsionen, jedoch nicht zu einem vollständigen Ansprechen oder einer progressiven Erkrankung. In einer solchen Ausführungsform ist eine fortschreitende Erkrankung durch ein eindeutiges Fortschreiten der bestehenden Nichtziel-Läsionen und/oder das Auftreten einer oder mehrerer neuer Läsionen gekennzeichnet.
In einigen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einer vorteilhaften Gesamtansprechrate, wie einer Gesamtansprechrate gemäß RECIST v.1.1. In diesen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einer Gesamtansprechrate, die ein vollständiges Ansprechen ist, wobei der Patient ein vollständiges Ansprechen der Zielläsionen, ein vollständiges Ansprechen von Nicht-Ziel-Läsionen und keine neuen Läsionen aufweist. In anderen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem Gesamtansprechen, das ein partielles Ansprechen ist, bei dem der Patient ein vollständiges Ansprechen der Zielläsionen, ein nicht vollständiges Ansprechen und eine nicht fortschreitende Erkrankung der Nicht-Zielläsionen und keine neuen Läsionen aufweist. In anderen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem Gesamtansprechen, das ein partielles Ansprechen ist, wobei der Proband ein partielles Ansprechen für Zielläsionen, eine nicht fortschreitende Erkrankung für Nicht-Zielläsionen und keine neuen Läsionen aufweist. In einer anderen Ausführungsform führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem Gesamtansprechen, das eine stabile Erkrankung ist, wobei das Subjekt eine stabile Erkrankung der Zielläsionen, ein nichtprogressives Ansprechen für Nicht-Zielläsionen und keine neuen Läsionen aufweist.
In einigen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einer verlängerten Dauer des Gesamtansprechens. In einigen Ausführungsformen wird die Dauer des Gesamtansprechens von dem Zeitpunkt an gemessen, an dem die Messkriterien für ein vollständiges Ansprechen oder ein teilweises Ansprechen (je nachdem, was zuerst erfasst wird) erfüllt sind, bis zum ersten Datum, an dem ein Wiederauftreten oder ein Fortschreiten der Krankheit objektiv dokumentiert wird (wobei als Referenz für ein Fortschreiten der Krankheit die kleinsten seit Beginn der Behandlung erfassten Messwerte gelten). Die Dauer des vollständigen Ansprechens kann von dem Zeitpunkt an gemessen werden, an dem die Messkriterien für ein vollständiges Ansprechen zum ersten Mal erfüllt sind, bis zum ersten Tag, an dem ein Fortschreiten der Erkrankung objektiv dokumentiert wird. In einigen Ausführungsformen wird die Dauer der stabilen Erkrankung vom Beginn der Behandlung bis zur Erfüllung der Kriterien für ein Fortschreiten der Erkrankung gemessen, wobei die kleinsten seit Beginn der Behandlung aufgezeichneten Messwerte, einschließlich der Ausgangsmessungen, als Referenz dienen.
In noch anderen Ausführungsformen führen die Methoden der vorliegenden Erfindung zu einer verbesserten Gesamtüberlebensrate. Beispielsweise kann die Gesamtüberlebensrate vom Zeitpunkt der Aufnahme in die Studie bis zum Tod berechnet werden. Patienten, die vor dem Datenschnittpunkt für die abschließende Wirksamkeitsanalyse noch leben oder die vor dem Ende der Studie ausscheiden, werden an dem Tag zensiert, an dem sie nachweislich zuletzt am Leben waren.
In anderen Ausführungsformen führen die Methoden der vorliegenden Erfindung zu einem progressionsfreien Überleben. Beispielsweise kann das progressionsfreie Überleben ab dem Datum der Dokumentation eines Rückfalls (oder eines anderen eindeutigen Indikators für die Krankheitsentwicklung) oder dem Datum des Todes berechnet werden, je nachdem, was zuerst eintritt. Patienten, die keinen dokumentierten Rückfall haben und vor dem Datenschnittpunkt für die endgültige Wirksamkeitsanalyse noch am Leben sind oder die vor dem Ende der Studie ausscheiden, werden zum Zeitpunkt des letzten radiologischen Nachweises, der das Fehlen eines Rückfalls dokumentiert, zensiert.
In einigen Ausführungsformen führen die Methoden der vorliegenden Erfindung zu einer vorteilhaften Gesamtansprechrate, wie einer Gesamtansprechrate gemäß mRECIST. In diesen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem Gesamtansprechen, das ein vollständiges Ansprechen ist, bei dem der Patient ein vollständiges Ansprechen der Zielläsionen, ein vollständiges Ansprechen der Nicht-Zielläsionen und keine neuen Läsionen aufweist. In anderen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem Gesamtansprechen, das ein partielles Ansprechen ist, bei dem der Patient ein vollständiges Ansprechen der Zielläsionen, ein nicht vollständiges Ansprechen und ein unvollständiges Ansprechen der Nicht-Zielläsionen und keine neuen Läsionen aufweist. In anderen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem Gesamtansprechen, das ein partielles Ansprechen ist, wobei der Proband ein partielles Ansprechen für Zielläsionen, eine nicht fortschreitende Erkrankung für Nicht-Zielläsionen und keine neuen Läsionen aufweist. In einer anderen Ausführungsform führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einem Gesamtansprechen, das eine stabile Erkrankung ist, wobei das Subjekt eine stabile Erkrankung der Zielläsionen, ein nichtprogressives Ansprechen für Nicht-Zielläsionen und keine neuen Läsionen aufweist.
In einigen Ausführungsformen führen die Verfahren der vorliegenden Erfindung zu einer vorteilhaften Gesamtansprechrate, wie z. B. einer Gesamtansprechrate gemäß iRECIST.
Gemäß einer anderen Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Lebermetastase eines Aderhautmelanoms, wobei die Verabreichung von SD-101 zu einer Verringerung der Tumorlast führt. In einigen Ausführungsformen wird die Tumorlast um etwa 10 %, um etwa 20 %, um etwa 30 %, um etwa 40 %, um etwa 50 %, um etwa 60 %, um etwa 70 %, um etwa 80 %, um etwa 90 % oder um etwa 100 % reduziert.
Gemäß einer anderen Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Lebermetastase eines Aderhautmelanoms, wobei die Verabreichung von SD-101 zu einer Verringerung der Tumorprogression führt. In einigen Ausführungsformen wird die Tumorprogression um etwa 10 %, um etwa 20 %, um etwa 30 %, um etwa 40 %, um etwa 50 %, um etwa 60 %, um etwa 70 %, um etwa 80 %, um etwa 90 % oder um etwa 100 % reduziert.
Gemäß einer anderen Ausführungsform umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Lebermetastase eines Aderhautmelanoms, wobei die Verabreichung von SD-101 das MDSC-Kompartiment in der Leber umprogrammiert, um eine Immunkontrolle der Lebermetastasen zu ermöglichen und/oder das Ansprechen auf eine systemische Anti-PD-1-Therapie durch Eliminierung von MDSC zu verbessern. In einigen Ausführungsformen sind die Methoden der vorliegenden Erfindung bei der Kontrolle von MDSC überlegen. In einigen Ausführungsformen umfassen die Verfahren der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Lebermetastase eines Aderhautmelanoms, wobei die Verabreichung von SD-101 die Häufigkeit von MDSC-Zellen (CDl 1b+Gr1+), monozytären MDSC (M-MDSC; CD1 1b+Ly6C+) Zellen oder granulozytären MDSC (G-MDSC; CD1 1b+LY6G+) Zellen reduziert. Gemäß einer anderen Ausführungsform erhöhen die Methoden der vorliegenden Erfindung die Ml-Makrophagen verstärken. Gemäß einer weiteren Ausführungsform verringern die Methoden der vorliegenden Erfindung M2-Makrophagen.
In einer anderen Ausführungsform erhöhen die Methoden der vorliegenden Erfindung die NFKB-Phosphorylierung. In einer weiteren Ausführungsform erhöhen die Methoden der vorliegenden Erfindung IL-6. In einer anderen Ausführungsform erhöhen die Methoden der vorliegenden Erfindung IL 10. In einer weiteren Ausführungsform erhöhen die Verfahren der vorliegenden Erfindung IL-29. In einer anderen Ausführungsform erhöhen die Verfahren der vorliegenden Erfindung IFNa. In einer weiteren Ausführungsform verringern die Methoden der vorliegenden Erfindung die STAT3-Phosphorylierung.
Die vorliegende Erfindung wird im folgenden Beispiel, das nur zur Veranschaulichung/Demonstration dient und die Erfindung in keiner Weise einschränken soll, näher erläutert und/oder demonstriert.
Beispiel 1
Im vorliegenden Beispiel wurde die Hypothese aufgestellt, dass eine regionale intravaskuläre Infusion eines beispielhaften TRL9-Agonisten die Ansprechbarkeit auf einen systemisch infundierten CPI verstärken würde.
In diesem Zusammenhang wurden Mäuse mit etabliertem MC38-CEA-Luc LM mit einer regionalen Verabreichung eines TLR9-Agonisten, d.h. ODN-2395 (30µg/Maus), mit oder ohne intraperitoneale Verabreichung des CPI, z.B. Anti-PD-1-Antikörper (250µg/Maus), behandelt. Acht- bis zwölfwöchige männliche C57BL6-Mäuse wurden eine Woche lang intra-splenisch mit 0,5e6 MC38-CEA-Luc-Zellen infiziert. Die Biolumineszenz wurde mittels IVIS gemessen, und die Mäuse wurden am DO vor der Behandlung mit 30µg/Maus ODN2395 über PV mit/ohne 250 µg/Maus Anti-PDl-Antikörper über IP am D0, D+3 und D+6 randomisiert. Als Kontrolle dienten PBS-behandelte Mäuse, die mit PV behandelt wurden. Die Tumorprogression wurde an D+2, D+4, D+7, D+10 und D+12 überwacht.
zeigt die Wirkung einer Kombination aus einem beispielhaften TLR9-Agonisten und dem CPI auf die Tumorprogression. Wie in der Abbildung dargestellt, war die Kontrolle des LM-Wachstums bei der kombinatorischen Behandlung signifikant höher als bei der Anti-PD-1- (p<0,01) oder Kontrollbehandlung (z. B. PBS) (p<0,05). In sind PBS (PV), ODN 30µg (PV), anti-PD-1 250µg (IP) + PBS (PV) und anti-PD-1 250µg (IP) + ODN 30µg (PV) in der Grafik dargestellt (von links nach rechts, PBS liegt der Y-Achse am nächsten). In wurde das Tumorwachstum mittels IVIS-Bildgebung an den Tagen D+2, D+4, D+7, D+10 und D+12 überwacht. Die Tumorprogression wurde mittels 2-Way ANOVA und anschließendem Tukey's post-hoc Test analysiert. In der Grafik ist die fache Veränderung gegenüber D0 für Ctrl, anti-PD-1, ODN und anti-PD-1 + ODN über die Zeit dargestellt, wobei Ctrl die größte fache Veränderung gegenüber D0 und anti-PD-1 + ODN die geringste zeigt.
Um die Auswirkungen der TLR9-Aktivierung auf humane MDSC (hu-MDSC) zu untersuchen, wurden mononukleäre Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) gesunder Spender mit ODN-2395 oder SD-101 behandelt. Es zeigte sich, dass beide die hu-MDSC-Population (CD1 1b+CD33+HLADR-) in nichtlinearer, dosisabhängiger Weise verringerten, was mit einer Zunahme der PD-L1-Expression einherging, wie durch eine durchflusszytometrische Analyse (FC) festgestellt wurde (siehe ). In dieser Studie wurden humane PBMCs aus den Kammern des Leukoreduktions-Reservoir-Systems (LRS) isoliert. 1e6/ml PBMCs wurden 48 Stunden lang mit steigenden Konzentrationen (0,04-10 µM) von SD-101, ODN2395 und Ctrl ODN5328 (1pµM) behandelt. In ist die Gating-Strategie für die phänotypische Analyse der MDSC- und PD-L1-Expression dargestellt. In den wurden die MDSC-Population und ihre entsprechende PD-L1-Expression ausgewertet. Es wurden vier Spender mit drei Wiederholungen verwendet, und die Daten wurden als Mittelwert ± SEM dargestellt. In wurden (a) CD4, (b), CD8 (c) und CD69 mittels FC ausgewertet. Es wurden drei Spender mit drei Wiederholungen verwendet. Diese Abbildungen zeigen, dass die TLR9-Stimulation mit ODN2395 oder SD-101 die MDSC-Bildung aus PBMCs hemmt.
Darüber hinaus wurde durch die Verwendung von Luminex gezeigt, dass ODN-2395 und SD-101 die Expression von IL-29, IFNα und NFκB zusammen mit den nachgeschalteten Zytokinen IL-6 und IL-10 verstärken. In den wurden menschliche PBMC 48 Stunden lang mit steigenden Dosen von (0,04-10 µM) SD-101 (linker Kasten), (0,04-3 µM) ODN2395 (rechter Kasten) und Ctrl ODN5328 (1 µM) behandelt. Die Zellüberstände wurden mittels Luminex-Analyse auf IL-29 ( , IFNα ( , IL-6 ( ) und IL-10 ( ) untersucht. Es wurden zwei Spender und zwei Replikate verwendet. NT, Ctrl ODN und steigende Dosen (0,04-3 µM) sind von links nach rechts auf der X-Achse jeder Gruppe dargestellt. Die zeigen, dass die TLR9-Stimulation mit ODN2395 oder SD-101 die NEκB- und IFNa-regulierte Zytokinproduktion steigert.
Um die Wirkung von SD-101 bei der Modulation der Differenzierung von hu-MDSC aus humanen PBMC zu untersuchen, wurden die humanen PBMC mit IL6+GM-CSF in Anwesenheit oder Abwesenheit von SD-101 behandelt, wie in 5A-5D gezeigt. In dieser Studie wurden humane PBMC 7 Tage lang mit 20ng/ml IL6 und GM-CSF mit/ohne 0,3 µM SD-101 entweder intermittierend oder einmal für 48 Stunden behandelt. In ist eine Gating-Strategie für die phänotypische Analyse von MDSC (CD1 1b+CD33+HL ADR-) dargestellt. In 5B ist das Behandlungsprotokoll dargestellt. In ist die Wirkung von TLR9A auf MDSCs und ihre Subpopulationen dargestellt. In wurden PBMCs in Anwesenheit von IL6 und GM-CSF zu MDSC differenziert und einmalig 48 Stunden lang mit/ohne 0,3 µM SD-101 behandelt, und nach 7 Tagen wurde eine FC durchgeführt, um die MDSC-Population zu überwachen (acht Spender). Die Daten sind als Mittelwert ± SEM angegeben. Die FC-Analyse ergab, dass SD-101 die durch IL6+GM-CSF induzierte Entwicklung von hu-MDSC blockierte, vorzugsweise den immunsuppressiveren monozytären MDSC-Subtyp einschränkte und auch die Polarisierung von Ml-Makrophagen vorantrieb. Darüber hinaus reichte eine einmalige Behandlung mit SD-101 über 48 Stunden aus, um die Differenzierung von hu-MDSC für zwei Wochen zu hemmen. Somit wurde gezeigt, dass die Stimulation von TLR9 mit SD-101 die Programmierung von menschlichen MDSC hemmt.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die TLR9-Stimulation die Fähigkeit der Checkpoint-Therapie zur Kontrolle von Lebermetastasen in einem Mausmodell verbessert. TLR9-Agonisten hemmen PBMC-abgeleitete MDSCs und verstärken die PD-L1-Expression von MDSCs, ohne die T-Zell-Populationen zu beeinträchtigen. ODN2395 und SD-101 modulieren die Produktion von IFNα, IL29 (IFNa-abhängige Zytokine), IL6 und IL 10 (NFκB-abhängige Zytokine) in einer biphasischen Weise. SD-101 hemmt die MDSC-Programmierung, und eine einzige Behandlung reicht aus, um diese hemmende Wirkung hervorzurufen.
Somit deuten sowohl die In-vitro- als auch die In-vivo-Ergebnisse darauf hin, dass eine regionale TLR9-Stimulation in einem LM-Modell das Ansprechen auf eine systemische Anti-PD-1-Therapie durch Eliminierung von MDSC verbessert, wobei die Wirkung auf hu-MDSC im Blut in-vitro bestätigt wurde. Darüber hinaus verstärkte eine erhöhte PD-L1-Expression als Reaktion auf die TLR9-Stimulation unter den MDSC die Anti-PD-1-Wirkung weiter. Daher kann die Kombination regionaler Infusionen eines TLR9-Agonisten mit systemischen Anti-PD-1-Wirkstoffen das Ansprechen auf die Anti-PD-1-Therapie durch Unterdrückung der MDSC-Programmierung verbessern und zur Behandlung von Lebertumoren sowie zur intrahepatischen Immunsuppression eingesetzt werden.
Beispiel 2
Im vorliegenden Beispiel wurde die Hypothese aufgestellt, dass eine regionale intravaskuläre Infusion von TRL9-Agonisten das MDSC-Kompartiment der Leber umprogrammieren würde, um eine Immunkontrolle von Lebermetastasen (LM) zu ermöglichen. Die Wirkung eines TLR9-Agonisten der Klasse C, z. B. ODN-2395, wurde im Hinblick auf die Hemmung des Fortschreitens von LM und seine Auswirkungen auf die MDSC-Population in der Leber untersucht. Insbesondere wurde eine regionale intravaskuläre Infusion von ODN-2395 mit einer systemischen Verabreichung von ODN-2395 hinsichtlich der Kontrolle der LM-Progression und der Auswirkungen auf die Größe der MDSC-Population in der Leber verglichen.
C57BL6-Mäuse wurden mit 2,5e6 MC38-CEA-Luc-Zellen intra-splenisch infiziert. Nach einer Woche wurden die Mäuse mit 1, 3, 10 oder 30 µg ODN-2395 über die Portalvene (PV: regional) oder 30 µg intravenös (systemisch) über die Schwanzvene (TV) behandelt. Die Verabreichung eines Wirkstoffs über die Pfortader der Maus führt zu einer regionalen Verabreichung an die Leber der Tiere. Die Tumorlast wurde 24 und 48 Stunden nach der ODN-Verabreichung durch Auswertung der Biolumineszenz gemessen. CD45+-Zellen wurden isoliert, und eine FACS-Analyse wurde durchgeführt, um MDSCs, monozytäre MDSCs (M-MDSC) und Ml-Makrophagen-Untergruppen zu quantifizieren, zusammen mit Signalereignissen stromabwärts von TLR9.
veranschaulicht das Schema/die Methode zur Entwicklung von LM und das Behandlungsprotokoll. Acht bis zwölf Wochen alten männlichen C57BL6-Mäusen wurden über den intra-splenischen Weg 2,5e6 MC38-CEA-Luc-Zellen verabreicht, die eine Woche lang wachsen durften.
Die Biolumineszenzwerte wurden mittels IVIS bestimmt, und die Mäuse wurden entsprechend randomisiert und mit 1, 3, 10, 30 µg/Maus ODN-2395 über PV und 30 µg/Maus ODN-2395 über TV behandelt. Für die anschließende Studie am D+2 nach der Behandlung wurden die Mäuse geopfert und die Lebern zur Isolierung von CD45⁺ Zellen entnommen. Die isolierten CD45⁺ NPCs wurden dann auf MDSCs und Makrophagen untersucht.
zeigen die Wirkung von ODN-2395 auf die Tumorprogression. Insbesondere zeigt 7 A das Tumorwachstum/die Tumorlast am Tag der Behandlung (D0), D1 und D2 für 1, 3, 10, 30 µg/Maus ODN-2395 über PV und 30 µg/Maus ODN-2395 über TV. Die Tumorprogression wurde mittels 2-Way ANOVA, gefolgt von Tukey's post-hoc Test, analysiert (*p<0,05).
zeigt die Biolumineszenz und den P-Wert für Tumorlasten, die mit 30µg ODN2395 über PV und TV behandelt wurden. Wie in 7A-7B dargestellt, verringerten 30 µg ODN-2395, verabreicht über PV (im Vergleich zu TV), die Tumorlast signifikant (p<0,01).
zeigen die Wirkung von ODN-2395 auf die MDSC-Population in LM. In diesem Zusammenhang zeigt 8A eine Gating-Strategie zur Analyse von CD45⁺ Zellen, die mittels FACS aus LM isoliert wurden. Ferner zeigen die , und die gemessenen MDSC-Zellen (CD1 1b+Gr1+), monozytären MDSC (M-MDSC;
CD1 1b+Ly6C+) und granulozytären MDSC (G-MDSC; CDl1b+LY6G+) Zellen für 1, 3, 10, 30 µg/Maus ODN-2395 über PV bzw. 30 µg/Maus ODN-2395 über TV. Wie in 8B und 8C dargestellt, waren 30 µg ODN-2395 über PV bei der Kontrolle von MDSC und M-MDSC im Vergleich zu den Mäusen, die 30 µg ODN-2395 über TV erhielten, überlegen, was auf eine erhöhte tumorsuppressive TME hindeutet, die durch ODN-2395 vorteilhaft reprogrammiert werden kann, insbesondere wenn 30 µg ODN-2395 über PV verabreicht werden.
BILD 9A-9C zeigen die Wirkung von ODN-2395 auf die M1- und M2-Makrophagenpopulationen in LM. In diesem Zusammenhang illustriert 9A eine Gating-Strategie zur Analyse der aus LM isolierten CD45+-Zellen auf M1- und M2-Makrophagen. Es wird insbesondere eine phänotypische Analyse gezeigt. und zeigen die gemessene Ml-Makrophagen-Zellpopulation (F4/80⁺CD38⁺EGR2^-) und M2-Makrophagen-Zellpopulation (F4/80⁺CD38^-EGR2⁺) für 1, 3, 10, 30 µg/Maus ODN-2395 über PV und 30 µg/Maus ODN-2395 über TV. In diesem Zusammenhang wiesen Mäuse, die ODN-2395 über PV erhielten, signifikant erhöhte Ml-Makrophagenpopulationen und reduzierte M2-Populationen auf, verglichen mit und 30 µg über TV. Diese Daten lassen vermuten, dass ODN-2395, insbesondere 30 µg über PV, CD1 1b+F4/80+ monozytäre Zellen in Richtung einer pro-entzündliche/antitumorigene Ml-Makrophagen und reduzierte die pro-angiogene M2-Population, zusätzlich zu den MDSC.
10A-10B zeigen die Wirkung von ODN-2395 auf die NFKB-Signalgebung. Insbesondere 10A zeigt Western Blotting für PNEκB (p65^S536), Gesamt-NFκB, pSTAT3^Y705, STAT3 und IL-6 für 30µg ODN2395 durch PV und TV, wobei GAPDH als Proteinkontrolle verwendet wird. Ferner zeigt die densitometrische Analyse für 30 µg ODN-2395 mittels PV und TV. In dieser Hinsicht erhöhte 30 µg ODN-2395, wenn es über PV infundiert wurde, die NFκB-Phosphorylierung mit einem gleichzeitigen Anstieg von IL-6 und verringerter STAT3-Phosphorylierung in der LM im Vergleich zur TV-Injektion.
zeigen die Wirkung der ODN-2395-Konzentration auf die NFκB-Signalaktivität, wobei HEK293-Blue-Zellen in einem reporterbasierten Assay 21 Stunden lang mit ODN-2395 und SD-101 in steigenden Dosen (0,004-10 µM) behandelt wurden. Damit sollte die dosisabhängige Wirkung von ODN-2395 bei der Aktivierung der NFκB-Signalgebung über TLR9 untersucht werden. In diesem Zusammenhang wurde die Freisetzung der sekretierten embryonalen alkalischen Phosphatase (SEAP) in 11A durch Messung der Absorption bei 650 nm bestimmt. Ferner ist in 11B die Wirkung von Chloroquin (Chq) auf die NFκB-Signalaktivität dargestellt. In diesem Zusammenhang wurden die Zellen 45 Minuten lang mit Chloroquin (1 µg/ml) vorbehandelt, bevor ODN-2395 in steigenden Konzentrationen (0,012-3 µM) für 21 Stunden zugegeben und die Absorption bei 650 nm gemessen wurde. Die Absorption bei 650 nm von Zellen, die mit TNFa mit/ohne Chq-Vorbehandlung behandelt wurden, ist in 11B dargestellt. Wie in 11B dargestellt, hemmte Chloroquin die durch TLR9-Agonisten vermittelte Aktivierung von NFκB, was zeigt, dass ODN-2395 den NFκB-Signalweg durch Interaktion mit TLR9 aktiviert.
In Anbetracht der obigen Ausführungen wurde festgestellt, dass die in vivo PV-Verabreichung von 30 µg von ODN-2395 die Tumorlast verringerte, die Häufigkeit von MDSCs (vorwiegend die immunsuppressivere Subpopulation der M-MDSCs) verringerte und die pro-inflammatorischen/antitumorigenen M1-Makrophagen erhöhte, bei gleichzeitiger Abnahme der immunsuppressiven M2-Makrophagen. Auf molekularer Ebene erhöhte ODN-2395 die Phosphorylierung von NFκB zusammen mit der IL6-Expression und verringerte die Phosphorylierung von STAT3. Darüber hinaus bestätigte der in vitro SEAP-Assay, dass die durch ODN-2395 vermittelte NFκB-Aktivierung von TLR9 abhängig ist.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass 30 µg ODN-2395, die über PV verabreicht wurden, bei der Verringerung der Tumorlast nach 24 Stunden effizienter waren (im Vergleich zu TV) und bis zu 48 Stunden anhielten. Die regionale Verabreichung von ODN-2395 reduzierte auch die Häufigkeit von MDSCs, vor allem die immunsuppressivere M-MDSCs-Subpopulation in LM. Darüber hinaus verstärkte die regionale Verabreichung von ODN-2395 auch die pro-inflammatorischen/antitumorigenen M1-Makrophagen. Darüber hinaus wurde mit Hilfe eines NFκB-abhängigen Assays für lösliche alkalische Phosphatase (z. B. SEAP) festgestellt, dass ODN-2395 die Aktivität des Transkriptionsfaktors NFκB dosisabhängig erhöht (p<0,001). Ferner zeigten Western-Blot-Daten von Tumorlysaten, dass die ODN-Verabreichung durch PV die NFκB (pP65)-Aktivität und die Produktion von IL-6 signifikant erhöhte und die STAT3-Aktivität im Vergleich zu IV verringerte.
Beispiel 3
In diesem Beispiel wurde eine allgemeine Toxikologiestudie mit SD-101 HAI/PEDD an Hausschweinen durchgeführt. Diese Studie wurde unter Verwendung des TriNav®-Katheters zur direkten hepatischen arteriellen Verabreichung bei Dosierungen von 0 (Vehikel) mit einem Volumen von 10 ml/kg/Tag durchgeführt. Die zu bewertenden Dosierungen waren 0 (Vehikel), 2, 4 und 8 mg SD-101. Drei SD-101-Verabreichungen wurden 2 Schweinen/Gruppe an den Tagen 0, 7 und 14 verabreicht, wobei die Sektion am Tag 15 stattfand. Dem Standard während der gesamten Studie wurden Standardbeurteilungen durchgeführt, einschließlich klinischer Beobachtungen, Körpergewicht und Futteraufnahme. Vor der Verabreichung des Medikaments und nach der zweiten und dritten Verabreichung von SD-101 wurden vollständige tierärztliche Untersuchungen durchgeführt.
An den Tagen 0 und 14 wurden serielle Blutproben für toxikokinetische (TK) Analysen (und bis zu 2 Metaboliten) entnommen, um die Exposition und Disposition von SD-101 zu berechnen. An diesen Tagen wurden auch Proben für mögliche Analysen von Anti-Drogen-Antikörpern (ADA) entnommen. Serumproben wurden für Zytokinanalysen vor der Behandlung sowie an den Tagen 0 (vor der Verabreichung) und 14 entnommen. Vor der Behandlung und unmittelbar vor der Nekropsie wurde ein gründliches Hämatologie-, klinischchemisches und Gerinnungspanel durchgeführt. Die folgenden Organgewichte wurden bestimmt und mikroskopische histopathologische Untersuchungen durchgeführt: Leber (4 Lappen), Lunge, Milz, Thymus, Nieren, Herz, Lymphknoten (drainierende und nicht drainierende), darmassoziiertes lymphatisches Gewebe, Knochenmark, Gehirn und grobe Läsionen. Die Gewebespiegel von SD-101 und bis zu 2 Metaboliten wurden in Leber (4 Lappen), Lunge, Milz, Thymus, Nieren, Herz, Lymphknoten (drainierend und nicht drainierend), darmassoziiertem lymphatischem Gewebe, Knochenmark, Gehirn und groben Läsionen bestimmt. Bei allen Schweinen in der Studie gab es keinen Hinweis auf Hepatotoxizität nach Infusion von SD-101 in die Leberarterie.
Darüber hinaus wurde eine Wiederholungsstudie durchgeführt, bei der die Tiere eine einmalige Verabreichung von SD-101 in Dosen von 0, 0,5, 4 oder 8 mg erhielten. In Übereinstimmung mit der vorherigen Studie wurden keine behandlungsbedingten unerwünschten Wirkungen beobachtet. Wichtig ist, dass die pharmakokinetischen Analysen des Serums zeigten, dass die systemischen SD-101-Spiegel nach HAI bei Schweinen 100-mal niedriger waren als die, die in Primatenstudien nach subkutaner Injektion beobachtet wurden.
Beispiel 4
In diesem Beispiel wurde ein Vergleich zwischen der Verabreichung eines TLR9-Agonisten über PEDD/HAI, z. B. mit dem TriNav® Infusionssystem, und der Verabreichung des TLR9-Agonisten über eine Nadelinjektion untersucht. Insbesondere konzentrierte sich die Studie auf den Verabreichungsweg (direkte Injektion in das Lebergewebe über eine Nadelinjektion gegenüber lokaler -regionaler PEDD-Infusion) auf die intrahepatische Lokalisierung der fluoreszenzmarkierten Toll-like-Rezeptor 9 (TLR9) Klasse C-Agonisten SD-101 (Cy5.5-SD-101) und des Werkzeugmoleküls Oligo-Deoxynukleotid (ODN) 2395 Oligo (IRD800-ODN 2395).
Um die Auswirkung einer PEDD-Vorrichtung auf die therapeutische Verteilung zu bewerten, wurde ein Schweinemodell ausgewählt, das Ähnlichkeiten in der Lebervaskulatur, der Zellstruktur und der inneren Organstruktur im Vergleich zur menschlichen Leber aufweist. Schweinemodelle wurden bereits ausgiebig bei Untersuchungen zur lokalen Verabreichung von Therapeutika eingesetzt. Die vaskuläre Anatomie der Leber ist mit dem Größenbereich kompatibel, der für das PEDD TriNav®-Gerät indiziert ist (1,5-3,5 mm Durchmesser).
Die Studie wurde an 8-1 Wochen alten weiblichen Yorkshire-Cross-Schweinen mit einem Gewicht von 45-65 kg durchgeführt.
Der TLR9-Agonist SD-101 Sequenz-Oligo wurde synthetisiert und mit dem Fluorophor Cy5.5 (ex. 685 nm, em. 706nm) konjugiert.
Der TLR9-Agonist ODN 2395 Sequenz-Oligo wurde synthetisiert und mit dem Fluorophor IRDye800 (ex. 791 nm, em. 809 nm) konjugiert.
Studiendesign
Insgesamt wurden 8 gesunde weibliche Schweine für die Studie ausgewählt. Die Tiere der ersten Kohorte (n=4) erhielten IRD800-ODN 2395 über HAI mit einem PEDD-Gerät (TriNav®, Kat.-Nr. TNV-21120-35), gefolgt von einer Nadelinjektion von Cy5.5-SD-101. Die Tiere der zweiten Kohorte (n=4) erhielten Cy5.5-SD-101 über eine HAI mit einem PEDD-Gerät, gefolgt von einer Nadelinjektion von IRD800-ODN 2395.
Injektion mit der Nadel
Eine 15 cm lange perkutane Zugangsnadel mit 21 Gauge wurde unter Ultraschallkontrolle in den rechten lateralen oder rechten medialen Leberlappen eingeführt. Die 3 mL Oligo-Lösung wurde dann mit einer Geschwindigkeit von 0,3-0,6 mL/s von Hand injiziert. Diese Geschwindigkeit und dieses Volumen entsprechen der klinischen Praxis bei der Injektion von Therapeutika in Tumore.
HAI
Die HAI wurde mit dem TriNav® Infusionssystem durchgeführt. Der TriNav® ist ein einlumiger Katheter, der mit einem Einwegventil ausgestattet ist, das dynamisch auf lokale Druckänderungen reagiert, wie sie z. B. durch den Herzzyklus oder durch die Infusion hervorgerufen werden. Die Ventilstruktur moduliert die distalen Gefäßdrücke und den Blutfluss. Dies wiederum kann die therapeutische Verteilung und die First-Pass-Absorption aufgrund der verlängerten Kontaktzeit innerhalb des Gefäßsystems verändern.
Die Sei dinger-Technik wurde verwendet, um einen Zugang durch die Oberschenkelarterie zu erhalten. Eine 5F-Einführschleuse wurde an der Stelle befestigt. Mit einem 5F-Angiographiekatheter wurde eine Angiographie durchgeführt, um die hepatische Arterienanatomie zu identifizieren. Anschließend wurde ein Gefäß mit einem Durchmesser von 1,5 bis 3,5 mm (Mittelwert 2,59 mm±0,21 mm SE) ausgewählt, das den linken Medial- und/oder linken Seitenlappen versorgt. Das TriNav®-Infusionssystem wurde in das Zielgefäß geschleust. Ein invasiver Blutdruckwandler, der an einen Quantien-Druckmonitor angeschlossen war, wurde zur Messung des Drucks durch das Lumen des Infusionssystems (distal zum Mikroventil) und durch das Lumen des Angiographiekatheters (proximal zum Mikroventil) verwendet. Die therapeutische lOmL-Spritze wurde dann in eine Spritzenpumpe eingesetzt, und die Lösung wurde durch das TriNav®-Gerät mit einer Rate von 2 ml/min für eine Gesamtdauer von 5 Minuten infundiert.
Blutprobenentnahme
Das Verfahren und die therapeutischen Auswirkungen auf die Leberenzyme (Alanin-Aminotransferase [ALT] und Aspartat-Aminotransferase [AST]) wurden untersucht. Die Blutentnahme erfolgte vor dem Eingriff, nach der Platzierung des Geräts im Zielgefäß, unmittelbar nach der HAI (t=0) und danach alle 10 Minuten über einen Zeitraum von insgesamt 90 Minuten.
Vorbereitung des Gewebes
Die Tiere wurden nach der Infusion und der Blutentnahme geschlachtet und die Leber wurde entfernt. Jeder Leberlappen wurde abgetrennt und eine Nah-IR-Bildgebung mit einem Pearl Trilogy Imaging System durchgeführt, um die Muster der Arzneimittelaufnahme zu identifizieren. Jeder Lappen wurde dann in 1 cm dicke Schnitte geschnitten ( ) und mit dem Pearl-System auf beiden Gewebeseiten separat abgebildet (85µm Auflösung, 700 nm, 800 nm und Weißlichtkanäle). Das gesamte Lebervolumen wurde auf das Vorhandensein der ODN-Tool-Verbindung im Gewebe untersucht.
Quantifizierung des therapeutischen Signals
Die mit dem Pearl Imaging System erzeugten Gewebebilder bestanden aus separaten 700 nm und 800 nm Fluoreszenzkanälen. Innerhalb des Bildes wurden unterschiedliche Emissionsintensitäten für die Hintergrund-Probenvorbereitungsplatte, normales unbehandeltes Lebergewebe und behandeltes Lebergewebe beobachtet. Eine speziell entwickelte grafische MATLAB-Benutzeroberfläche (GUI) wurde entwickelt, um diese diskreten Signalbereiche zu identifizieren ( und . Scheiben (n=3) aus unbehandelten Bereichen der Leber jedes Tieres wurden abgebildet, um ein Histogramm der Pixel-Lichtintensitätswerte zu erstellen. Für die mit der Probenvorbereitungsplatte verbundenen Pixelintensitäten wurde eine „niedrige“ Intensitätswertgrenze (I) ermittelt. Ein „hoher“ Intensitätsgrenzwert wurde bei der maximalen Pixelintensität bestimmt, die in unbehandeltem Nicht-Zielgewebe gemessen wurde. Zur Bestimmung der Gewebeschwellenwerte wurde jeweils ein Mittelwert aus den Messungen für den niedrigen (n=3) und den hohen (n=3) Wert gebildet. Die Gewebeschnitte wurden dann auf der Grundlage der Schwellenwerte verarbeitet.
Das von behandeltem Zielgewebe ausgehende Signal, das durch eine Pixelintensität identifiziert wurde, die über dem Schwellenwert „Hoch“ lag, wurde für die 700nm (Cy5.5-SD-101) und 800nm (IRD800-ODN 2395) Werkzeugverbindungen ermittelt. Die Gesamtsignalintensität in Luminous Units (lu) wurde durch die Addition der lu für Pixel, die diese Kriterien erfüllen, berechnet. Dies ergab Daten, die mit dem für die Nadelinjektion (n=4 für IRD800-ODN2395, n=4 für Cy5.5-SD-101, n=8 Gesamtmessungen) und die HA-Infusion (n=4 für IRD800-ODN2395, n=4 für Cy5.5-SD-101, n=8 Gesamtmessungen) beobachteten Signal übereinstimmten. Es wurde der mittlere lu für die beiden Seiten jeder Scheibe bestimmt. Die Summe dieser Messungen für alle Schichten wurde dann für jeden Probanden berechnet, und die lu-Summen für die beiden Infusionsmethoden wurden dann mit Hilfe eines Zwei-Stichproben-Äquivalenztests mit einem Vertrauensintervall von 95 % verglichen.
Das Bedeckungsvolumen wurde berechnet, indem der Mittelwert der Anzahl der Pixel, die eine höhere Intensität als den Schwellenwert „Hoch“ aufweisen, für die beiden Seiten jeder Schicht ermittelt wurde. Dieser Wert wurde dann für alle Gewebeschnitte (Nadelinjektion (n=4 für IRD800- ODN2395, n=4 für Cy5.5-SD-101, n=8 Gesamtmessungen) und HAI (n=4 für IRD800-ODN2395, n=4 für Cy5.5-SD-101, n=8 Gesamtmessungen)) in ein Gewebevolumen (85 µm x 85 µm Pixel x 1cm Schnitttiefe) umgerechnet. Messungen)). Die Gewebevolumina für die beiden Infusionsmethoden wurden dann mit Hilfe eines Äquivalenztests mit zwei Stichproben und einem Konfidenzintervall von 95 % verglichen.
Ergebnisse
Bildgebung des Gewebes
Die Nah-IR-Bildgebung des Lebergewebes zeigte deutliche Unterschiede im Verteilungsmuster des markierten ODN, wenn die Therapie mit einem PEDD-Gerät in das lokale arterielle Netzwerk eingebracht wurde ( und , im Vergleich zur Injektion mit einer Nadel ( und .
Therapeutische Verabreichung
Die Analyse des im Lebergewebe aufgezeichneten Gesamtsignals wurde für jedes der ODNs durchgeführt. Die für das markierte ODN 2395 gemessene Signalintensität war signifikant größer, wenn es mit einem PEDD-Gerät infundiert wurde (n= 4, 46483±42851u SE) als bei Injektion mit einer Nadel (n=4, 16438±47931u SE) (p=0,003) (16A). Die Signalintensität für markiertes SD-101 (n=4, 5151 1±212671u SE) unterschied sich nicht signifikant von der Injektion mit der Nadel (n=4, 22112±126481u SE) (p=0,15), was auf eine höhere Variabilität zwischen den Tieren zurückzuführen ist ( . Die kombinierte Signalintensität beider durch PEDD verabreichter ODNs (n=8, 48997± 10088 lu SE) war signifikant größer als bei der Verabreichung durch Nadelinjektion (n=8, 19275±6352 lu SE) (p=0,015) ( .
Therapeutische Deckung
Die Analyse des im Lebergewebe aufgezeichneten Gesamtsignals wurde für jedes der ODNs durchgeführt. Die für das markierte ODN 2395 gemessene Gewebeabdeckung war signifikant größer, wenn es mit einem PEDD-Gerät infundiert wurde (n=4, 159,2±36,6cm³ SE) als bei Injektion mit einer Nadel (n=4, 15,7±3,3 cm³ SE) (p=0,015) (17A). Die Gewebeabdeckung für markiertes SD-101 (n=4, 38,8±10,9cm³ SE) war ebenfalls signifikant größer als die Injektion mit der Nadel (n=4, 11,3±4,7cm³ SE) (p=0,04) ( . Die kombinierte Signalintensität beider Verbindungen, die durch PEDD verabreicht wurden (n=8, 99,0±28,8cm³ SE), war signifikant größer als bei der Verabreichung durch Nadelinjektion (n=8, 13,5±2,9cm³ SE) (p=0,011) ( .
Leberenzym-Werte

Mit Hilfe der Minitab Software (Minitab LLC, Chicago, IL) wurden gepaarte t-Tests durchgeführt, um festzustellen, ob die AST- oder ALT-Werte eine signifikante Veränderung im Vergleich zu den Ausgangswerten vor dem Eingriff aufwiesen. Es wurden keine signifikanten Veränderungen für AST oder ALT im Verlauf der Blutentnahme beobachtet (Tabelle 2 und 18). Tabelle 2

Zeitpunkt nach der Dosis (min)	Mittlerer ALT-Wert (SEM) (U/L)	p-Wert ^a	Mittelwert AST (SEM) (U/L)	p-Wert ^a
Basislinie	23 (2.7)		16 (2.2)
0	24 (3.0)	0.879	14 (1.8)	0.580
10	24 (3.1)	0.881	15 (1.6)	0.823
20	23 (2.8)	0.899	16 (1.9)	0.934
30	23 (2.9)	0.975	16 (1.6)	0.893
40	23 (3.0)	0.976	17 (1.2)	0.848
50	22 (3.2)	0.883	17 (1.6)	0.690
60	22 (3.3)	0.862	17 (1.5)	0.648
70	22 (3.0)	0.785	17 (1.3)	0.776
80	23 (3.0)	0.951	17 (1.3)	0.672
90	22 (3.1)	0.834	18 (1.4)	0.550

ALT = Alanin-Aminotransferase; AST = Aspartat-Aminotransferase; SEM = Standardfehler des Mittelwerts. a Die Gewebevolumina für die beiden Infusionsmethoden wurden dann mit einem t-Test verglichen.
Die Ergebnisse dieser Studie unterstreichen die Grenzen der direkten Injektion. Das in die Leber injizierte Therapeutikum zeigte eine relativ begrenzte Diffusion innerhalb des Gewebes und beschränkte sich oft auf ein bis zwei 1 cm dicke Leberabschnitte. Dieses Verteilungsmuster würde nicht ausreichen, um eine multifokale diffuse Erkrankung zu behandeln.
Die PEDD bietet eine alternative Methode der therapeutischen Verabreichung. PEDD wird mit einem Kathetersystem durchgeführt, das mit einer Einweg-Mikroventilstruktur ausgestattet ist. Wenn das Ventil im Blutstrom platziert wird, moduliert es physikalisch den Blutfluss und den Druck. Der Blutfluss wird nach der Platzierung des Geräts aufrechterhalten, so dass die Therapeutika stromabwärts in das Zielgefäßnetz wandern können. Während der Infusion kann der Druck lokal innerhalb des arteriellen Netzwerks erzeugt werden, ohne dass die Gefahr eines Refluxes in Nicht-Zielgewebe besteht.
In dieser Studie wurde normales Schweinelebergewebe mit einer PEDD-Vorrichtung behandelt, um die Verteilung und Gewebeaufnahme der markierten ODN-Sequenzen zu quantifizieren. Mittels quantitativer Nah-IR-Bildgebung von 1 cm großen Lebergewebeschnitten wurde das gesamte Volumen des Gewebes, das der markierten Verbindung ausgesetzt ist und diese aufnimmt, quantifiziert. Das Volumen des Gewebes, das dem ODN nach der PEDD-Infusion ausgesetzt war, war mehr als siebenmal so groß wie bei der Injektion mit einer Nadel (99,0±28,8cm³ SE bzw. 13,5±2,9cm³). Unerwarteterweise war die Gesamtlichtintensität, ein Maß für die Therapieaufnahme, im mit PEDD behandelten Gewebe ebenfalls signifikant größer (48997±10088 lu SE PEDD vs. 19275±6352 lu SE Nadelinjektion, 2,5-facher Anstieg).
Es wurde erwartet, dass die direkte Nadelinjektion das gesamte therapeutische Volumen in das Zielgewebe bringt, was zu einer hohen Verabreichungseffizienz führt. Allerdings wurde im Vergleich zu PEDD eine deutlich geringere Lichtintensität beobachtet. Dies könnte mit dem Phänomen des Rückflusses zusammenhängen, der entsteht, wenn das Infusat um die Nadel wandert und aus dem Nadelkanal herausfließt. Das Ausmaß dieses Phänomens wird von mehreren Faktoren beeinflusst, wie z. B. der Einstichgeschwindigkeit der Nadel, dem Einstichwinkel, der Infusionsgeschwindigkeit, dem Nadeldurchmesser und dem Gewebedruck.
Der Rückfluss wird mit einer verminderten Wirksamkeit der in den Tumor injizierten Therapeutika in Verbindung gebracht. Wir stellen die Hypothese auf, dass ein wesentlicher Teil des infundierten ODN-Volumens durch den Nadeltrakt in den Bauchraum zurückfließt, was zu einer geringeren Geweberetention führt.
PEDD-Vorrichtungen modulieren physikalisch den Blutfluss und den lokalen Gefäßdruck, was möglicherweise zu den in der Studie beobachteten hohen ODN-Retentionswerten beiträgt. Bei der Erstplatzierung verursachte die Vorrichtung einen Druckgradienten von 96,8 mmHg±6,2 mmHg SE proximal der Klappe auf 57,6 mmHg±8,3 mmHg SE distal der Klappe (n=8 Messungen). Eine Druckverringerung führt auch zu langsameren Blutflussgeschwindigkeiten. Während der Infusion hatte das Therapeutikum wahrscheinlich eine längere Kontaktzeit mit dem Gewebe, was zu einer robusten Absorption führte.
Die Verwendung einer PEDD-Vorrichtung führte zu einer signifikant stärkeren Ablagerung von MAA im Tumorgewebe, während die Abgabe an normales Gewebe im Vergleich zu herkömmlichen Kathetersystemen deutlich reduziert wurde. Die in dieser Studie behandelte normale Schweineleber reagierte wahrscheinlich auf den durch die PEDD-Vorrichtung induzierten Druckgradienten, was zu einem gewissen Grad an Flussumleitung führte.
Im vorliegenden Modell war jedoch kein Tumorgewebe vorhanden, so dass ein differentieller Fluss zu einem kranken Gewebezustand nicht beobachtet wurde.
AST- und ALT-Messungen wurden über einen Zeitraum von 90 Minuten nach der Infusion von markiertem ODN durchgeführt. Diese Zeitspanne hat sich als ausreichend erwiesen, um signifikante Erhöhungen der Enzymwerte nach Verabreichung bekannter Hepatotoxine wie Tetrachlorkohlenstoff zu erkennen. Während die in dieser Studie verabreichte Dosis des markierten Oligonukleotids in präklinischen Modellen als subtherapeutisch eingestuft werden würde, zeigen diese Ergebnisse weiter, dass der Verabreichungsweg durch PEDD nicht zu signifikanten Erhöhungen der Leberenzyme führte. Im Verlauf der Studie wurden keine Anzeichen von Hepatotoxizität beobachtet.
Zusammenfassend wurde in der vorliegenden Studie die Verabreichung von IRnahen markierten ODNs über eine herkömmliche direkte Nadelinjektion im Vergleich zur Infusion mit der PEDD-Technologie unter Verwendung des TriNav®-Kathetersystems verglichen. Ziel war es, die Intensität des Signals und das Signalvolumen als Indikatoren für die Arzneimittelretention und die Gewebeverteilung zu quantifizieren. In dieser Hinsicht verbesserte die Medikamentenverabreichung mit PEDD/TriNav® sowohl die Signalintensität (ein Index für die Medikamentenretention) als auch das dem Medikament ausgesetzte Gewebevolumen (ein Index für die Medikamentenverteilung) erheblich. Diese signifikante Steigerung der therapeutischen Abdeckung könnte ein entscheidender Faktor bei der Behandlung diffuser Erkrankungen sein. Eine solche Methodik könnte es ermöglichen, dass Therapeutika sowohl Makro- als auch Mikrometastasen erreichen, deren Behandlung mit herkömmlichen Nadelinjektionen ansonsten unpraktisch oder unmöglich wäre.
Beispiel 5
Das Ziel dieser Studie war es, den Verabreichungsweg (über einen Endlochkatheter gegenüber einer lokalen -regionalen PEDD-Infusion) auf die intrahepatische Lokalisierung der fluoreszenzmarkierten Toll-like Rezeptor 9 (TLR9) Klasse C Agonisten SD-101 (Cy5.5-SD-101 und IRDye800CW-SD-101) zu untersuchen.
Nach der Verabreichung der Prüfsubstanzen wurde das Lebergewebe mit Nah-Infrarot-Bildgebung (Nah-IR) analysiert, um die beiden Verabreichungsmodalitäten zu vergleichen. Die Nah-Infrarot-Bildgebung nutzt ein Spektralfenster der relativen Gewebetransparenz und wird in der Klinik häufig zur anatomischen Kartierung und Identifizierung von Krebsgewebe eingesetzt. Es wurde eine quantitative Analyse der therapeutischen Verteilung und Konzentration im gesamten Organismus durchgeführt.
Materialien und Methoden
Versuchstiere
Die Studie wurde an 8-1 Wochen alten weiblichen Yorkshire-Cross-Schweinen mit einem Gewicht von 45-60 kg (Oak Hill Genetics, Ewing, IL) durchgeführt.
Oligonukleotid (ODN)-Testartikel
Der TLR9-Agonist SD-101-Sequenz-Oligo wurde synthetisiert und mit dem Fluorophor Cy5.5 (ex. 685 nm, em. 706nm) konjugiert.
Das Sequenz-Oligo des TLR9-Agonisten SD-101 wurde synthetisiert und mit dem Fluorophor IRDye800CW (ex. 767 nm, em. 791) konjugiert.
Studiendesign
Insgesamt wurden 8 gesunde weibliche Schweine für die Studie ausgewählt. Alle Tiere erhielten zwei Infusionen des Therapeutikums, wobei die erste Infusion mit einem Endlochkatheter durchgeführt wurde, gefolgt von einer zweiten Infusion mit einem PEDD-Gerät (TriNav®, Kat.-Nr. TNV-21120-35, TriSalus Life Science, Westminster CO) 15 Minuten nach Abschluss der ersten Infusion. Die Reihenfolge der Infusion des Testartikels wurde abgewechselt, wobei jeweils vier Tiere bei der ersten Infusion eine Infusion mit Cy5.5-SD-101 oder IRD800CW-SD-101 über den Endlochkatheter und bei der zweiten Infusion eine Infusion mit Cy5.5-SD-101 oder IRD800CW-SD-101 über den PEDD-Katheter erhielten.
Die Reihenfolge der Geräte wurde im Rahmen dieses Studiendesigns nicht gewechselt. Dies ist darauf zurückzuführen, dass mögliche kurzfristige (15-30 min) Veränderungen der Gefäßphysiologie, die sich aus der PEDD-Infusion ergeben, das hämodynamische Muster, das mit dem Endlochkatheter assoziiert ist, verwirren und die Wahrscheinlichkeit eines Gefäßspasmus, der eine zweite Infusion verhindert, auf ein Minimum reduziert werden soll.
Vorbereitung des Testartikels
Die lyophilisierten Pellets des Testartikels wurden in reinem DNase-freiem Wasser in einer Konzentration von 2,5 nmol/ml resuspendiert. Das ODN-Konzentrat wurde dann in Leeröhrchen aliquotiert und vor der Verwendung bei -60 bis -80°C gelagert.
Zum Zeitpunkt der Verabreichung wurde das jeweilige gefrorene ODN-Konzentrat aufgetaut. Das ODN-Konzentrat wurde mit 9 mL steriler Kochsalzlösung verdünnt, um ein Gesamtvolumen von 10mL zu erhalten, das 2,5 nmol der Substanz enthielt, und vor der Infusion in einer 10mL-Polypropylenspritze (BD Bioscience, San Jose, CA) gelagert. Die Dosierung wurde so gewählt, dass sie ein optimales Bildgebungssignal liefert und als subtherapeutisch eingestuft wird. Spritzen, die das ODN enthielten, wurden mit dem Pearl Trilogy Imaging System (Li-Cor, Lincoln NE) abgebildet, um die anfängliche Lichtintensität des Infusats vor der Verabreichung zu quantifizieren und die Konsistenz der Dosierung zwischen den Probengruppen sicherzustellen.
Lokale hepatische arterielle Infusion
Die Seidinger-Technik wurde verwendet, um einen Zugang über die Oberschenkelarterie zu erhalten. Eine 5F-Einführschleuse (Pinnacle, Terumo Medical Corporation, Somerset, NJ) wurde an der Stelle befestigt. Mit einem 5F-Angiographiekatheter (Glidecath, Terumo Medical Corporation, Somerset, NJ) wurde eine Angiographie durchgeführt, um die hepatische Arterienanatomie zu identifizieren. Anschließend wurde ein Gefäß mit einem Durchmesser von 1,5 bis 3,5 mm (Mittelwert 2,98 mm±0,13 mm SE) ausgewählt, das den linken Medial- und/oder den linken Seitenlappen versorgt. Der Endlochkatheter wurde dann zum Zielort verfolgt (verschiedene, 0,018"-0,021" ID, (Direxion, Rebar-18, Renegade, Boston Scientific, Marlborough, MA), (Excelsior 1018, Stryker Neurovascular, Fremont CA), und (Transit, Cordis, Miami Lakes, FL)).
Ein invasiver Blutdruckwandler (TruWave PX600, Edwards Lifesciences Corp., Irvine CA), der an einen Quantien-Druckmonitor (Abbott, Abbott Park, IL) angeschlossen war, wurde zur Messung des Drucks durch das Lumen des Infusionssystems (an der distalen Spitze) und durch das Lumen des angiographischen Katheters (proximal des Infusionslumens) verwendet. Die therapeutische 10mL-Spritze wurde dann in eine Spritzenpumpe (NE-1000, New Era Pump Systems Inc. Farmingdale, NY) eingesetzt, und die erste Testartikellösung wurde durch einen Endlochkatheter mit einer Rate von 2mL/min für eine Gesamtdauer von 5 Minuten infundiert. Diese Rate und dieses Volumen entsprechen der klinischen Praxis für die HA-Infusion. Nach der Infusion wurde die Vorrichtung 5 Minuten lang in ihrer Position belassen und dann herausgezogen.
Das TriNav®-Infusionssystem wurde dann an der exakt gleichen Stelle im Zielgefäß nachgeführt, wie durch die Angiographie bestätigt. Die zweite Infusion wurde in identischer Weise mit dem alternativen Farbkanal ODN durchgeführt. Der PEDD durfte nach Abschluss der Infusion 5 Minuten lang in seiner Position verbleiben.
Vorbereitung des Gewebes
Die Tiere wurden nach der Entfernung der Vorrichtung getötet und die Leber wurde entfernt. Jeder Leberlappen wurde abgetrennt und eine Nah-Infrarot-Bildgebung mit einem Pearl Trilogy Imaging System durchgeführt, um Muster der Arzneimittelaufnahme zu identifizieren. Jeder Lappen wurde dann, wie in Beispiel 4 ( ) beschrieben, in 1 cm dicke Schnitte geschnitten und mit dem Pearl-System auf beiden Gewebeseiten separat abgebildet (85µm Auflösung, 700 nm, 800 nm und Weißlichtkanäle). Das gesamte Lebervolumen wurde auf das Vorhandensein der ODN-Tool-Verbindung im Gewebe untersucht.
Quantifizierung des therapeutischen Signals
Die Quantifizierung des therapeutischen Signals wurde gemäß dem in Beispiel 4 beschriebenen Verfahren durchgeführt (13A-13B). Die Überlappung des behandelten Gewebes innerhalb der Infusionszone wurde durch Zuweisung einer Koordinate für jedes Pixel im Bild bewertet. Pixel, die ein Signal oberhalb des „hohen“ Schwellenwerts sowohl für den roten als auch für den grünen Kanal aufwiesen, wurden als Bereiche betrachtet, in denen sich beide Behandlungen überlappten. Die Pixel wurden nach dem Vorhandensein von Grünkanalsignalen, Rotkanalsignalen und sich überlappenden Grün- und Rotsignalen quantifiziert.
Ergebnisse
Testartikel-Gewebeaufnahme

Die Nah-IR-Bildgebung der Leber wurde verwendet, um die Signalintensität und die Verteilung der absorbierten ODN-Testartikel zu quantifizieren, die von den Endloch- und PEDD-Geräten abgegeben wurden (n=4 pro Gerät / markiertes ODN). Die Daten wurden mit einem t-Test für 2 Stichproben in der MiniTab-Software (Minitab LLC, Chicago, IL) analysiert. Beide ODN-Artikel zeigten den gleichen Trend eines zunehmenden Signals, wenn sie von PEDD geliefert wurden (Tabelle 3). Die Zusammenfassung der Signalintensitätsmessungen für beide ODN-Artikel (n=8 pro Gerät) zeigte einen signifikanten Anstieg der Signalintensität, wenn sie mit PEDD verabreicht wurden ( . p=0,033). Tabelle 3

Signalintensität (Iu)
ODN	Endloch Katheter Mittelwert In (SE)	PEDD-Infusion System Mittelwert In (SE)	p-Wert
IRD800CW-SD-101	77962 (22656)	91211 (7522)	0.348
(n=4)
Cy5.5-SD-101 (n=4)	33252 (20729)	85272 (33045)	0.045
kombiniert (n=8)	55607 (31230)	88242 (22413)	0.033

zeigt die Signalintensität von markiertem ODN, dass im Lebergewebe nach der Verabreichung durch einen Endlochkatheter oder durch PEDD zurückgehalten wurde.

Darüber hinaus wurden keine signifikanten Unterschiede in der Gewebebedeckung beobachtet, wenn die normale Schweineleber mit einem End-Loch-Gerät im Vergleich zu einem PEDD-Gerät behandelt wurde (Tabelle 4). Tabelle 4

behandeltes Gewebevolumen (cm ² )
ODN	Endloch-Katheter Mittelwert In (SE)	PEDD-Infusionssystem Mittelwert In (SE)	p-Wert
IRD800CW-SD-101 (n=4)	185.9 (70.2)	172.2 (48.5)	0.762
Cy5.5-SD-101 (n=4)	63.2 (35.8)	101.1 (45.6)	0.249
Kombiniert (n=8)	124.5 (83.4)	136.6 (57.9)	0.742

Während die Verabreichungsvorrichtung keinen signifikanten Einfluss auf das Gesamtvolumen des behandelten Gewebes hatte, stimmte die Verteilung des markierten ODN zwischen den Infusionen nicht vollständig überein (Tabelle 5). Einige Tiere zeigten ein hohes Maß an Homologie im Verteilungsmuster zwischen den beiden Infusionen ( ), während andere Proben eine heterogene Verteilung aufwiesen ( ). zeigen beispielsweise Gewebe, das einen hohen Grad an Signalüberlappung bei der Infusion mit Endloch- und PEDD-Geräten aufweist: (a) zeigt die 800 nm grüne Kanalverteilung von IRD800CW-SD-101, das mit einem Endlochkatheter verabreicht wurde, (b) zeigt die 700 nm rote Kanalverteilung von Cy5.5-SD-101, das mit PEDD verabreicht wurde, und (c) zeigt ein zusammengesetztes Bild, das die Überlappung der Verteilung mit den Infusionsgeräten veranschaulicht. Die zeigen Gewebe, das einen geringen Grad an Signalüberlappung bei der Infusion mit Endloch- und PEDD-Geräten aufweist: (a) zeigt die Verteilung des roten 700-nm-Kanals von Cy5.5-SD-101, das mit einem Endloch-Katheter verabreicht wurde, (b) IB zeigt die Verteilung des grünen 800-nm-Kanals von IRD800CW-SD-101, das mit PEDD verabreicht wurde, und (c) zeigt ein zusammengesetztes Bild, das die Überlappung der Verteilung mit den Infusionsgeräten zeigt. zeigt ein Venn-Diagramm, in dem das mittlere behandelte Gewebevolumen am Endloch, das mittlere behandelte Gewebevolumen mit PEDD und das überlappende mitbehandelte Gewebevolumen verglichen werden. Tabelle 5

Verteilung des markierten ODN im Gewebe
Themen-ID	End-Loch-Infusion Volumen (cm²)	PEDD Infusionsvolumen (cm²)	Überschneidungen Volumen (cm²)	Prozentsatz des Endlochs Volumen überschneidend PEDD-Infusionszone
P20112	93.7	166.5	75.9	45.6%
P20126	91.3	153.5	54.3	35.4%
P20127	152.7	82.8	69.3	83.7%
P21055	166.7	125.0	115.0	92.0%
P21094	48.2	240.9	39.6	16.4%
P21095	289.3	149.9	139.0	92.8%
P21109	19.7	128.0	17.8	13.9%
P2111	134.8	46.7	39.5	84.5%
Mittelwert (SE)	136.6 (20.5)	124.6 (29.5)	68.7 (14.4)	58.0 (12)%

Druckmodulation
Das expandierbare Mikroventil des TriNav®-Geräts dient der Modulation des lokalen Gefäßdrucks. Das Einwegventil erzeugt einen lokalen Druckgradienten, wobei proximal des Ventils ein höherer Druck herrscht als distal des Ventils. Der mittlere Druck proximal des Ventils (gemessen durch den Basiskatheter) betrug 87±4 mmHg, während der distale Gefäßdruck mit 50±7 mmHg signifikant niedriger war (p=0,0001), was einer Senkung des Gefäßdrucks um 43 % entspricht. Das Endloch hatte keinen signifikanten Einfluss auf den vaskulären Druck, wobei ein proximaler Druck von 93±6 mmHg und ein distaler Druck von 88±9 mmHg gemessen wurde.
Es ist anzumerken, dass die Reihenfolge der Geräte in dieser Studie nicht geändert wurde, wobei die Endlochinfusion als erstes und die PEDD-Infusion als zweites durchgeführt wurde. Es wurde eine 5-minütige Zeitspanne festgelegt, damit im Blut vorhandenes markiertes ODN durch das Organ zirkulieren konnte, woraufhin die PEDD-Vorrichtung für die zweite Infusion im Gefäß positioniert wurde. Dieses Verfahren führte in der Regel dazu, dass beide Infusionen innerhalb von 15 Minuten durchgeführt wurden. Es ist möglich, dass durch die längere Zirkulationszeit etwas markiertes SD-101 aus dem Gewebe ausgewaschen wurde, was zu einer höheren Signalintensität bei der PEDD-Infusion im Vergleich zur Endlochinfusion führte. Es ist jedoch davon auszugehen, dass dieser Effekt über einen längeren Zeitraum auftritt als die schnelle Auswaschung von Material aus den Blutgefäßen, die im Versuchsplan in der Auswaschungsphase berücksichtigt wurde. In früheren Untersuchungen wurde ein TriNav®-Gerät verwendet, um Cy5.5-SD-101 auf identische Weise zu infundieren (n=4), jedoch wurde das Blut vor der Organanalyse mindestens 90 Minuten lang zirkulieren gelassen. Es gab keinen signifikanten Unterschied in der Signalintensität bei den Probanden mit einer 90-minütigen Zirkulationsdauer im Vergleich zur 5-minütigen Dauer bei den Probanden in dieser Studie (51.511±21267 lu SE gegenüber 85.272±16.523 (p=0,265)).
Schlussfolgerungen
In der vorliegenden Studie wurde die Verabreichung von IR-nah markierten ODNs durch konventionelle Endlochkatheterinfusion im Vergleich zur Infusion mit der PEDD-Technologie unter Verwendung des TriNav®-Kathetersystems. Ziel war es, die Intensität des Signals und das Volumen des Signals als Indizes für die Arzneimittelretention und die Gewebeverteilung zu quantifizieren.
Die Medikamentenabgabe mit PEDD/TriNav® erhöhte die Signalintensität (ein Index für die Medikamentenretention) im Vergleich zum Endlochgerät signifikant. Dies könnte mit der Modulation von Druck und Fluss innerhalb des Gefäßsystems zusammenhängen, die durch die Platzierung des TriNav® hervorgerufen wird und zu einer höheren Gewebeabsorption der Testartikel führt. Auch die Gewebebedeckungsmuster zwischen dem Endlochkatheter und dem TriNav® wichen trotz Infusion an identischen Stellen voneinander ab. Der Blutfluss reagiert empfindlich auf Veränderungen des lokalen Drucks und der Position des Infusionslumens in einem Gefäß. Das am TriNav®-Gerät angebrachte Mikroventil neigt dazu, das Infusionslumen des Geräts innerhalb des Gefäßes selbst zu zentrieren und gleichzeitig einen lokalen Rückgang des Blutdrucks und des Blutflusses zu erzeugen. Diese physikalischen Eigenschaften der TriNav®-Vorrichtung führten wahrscheinlich zu der in dieser Studie beobachteten Umverteilung des Blutflusses und der damit verbundenen therapeutischen Ablagerung.
Beispiel 6
In diesem Beispiel wurden lebergerichtete Infusionen eines TLR9-Agonisten, SD-101, mit dem Ziel verabreicht, die Ansprechraten auf die CPI-Therapie bei UM im Stadium 4 zu erhöhen und UM-Metastasen, z. B. Lebermetastasen (LM), zu verbessern. In dieser Hinsicht kann SD-101 für die Behandlung aller UM-LM-Läsionen eingesetzt werden. Darüber hinaus können durch die distalen Effekte von SD-101 in Kombination mit CPI-System-Infusionen auch extrahepatische Läsionen von einer verbesserten Immunreaktivität profitieren.
Das primäre Ziel der Phase 1 besteht darin, die Sicherheit von SD-101 zu bestimmen und die maximal verträgliche Dosis (MTD) oder die optimale Dosis von PEDD/HAI von SD-101 allein, die MTD oder die optimale Dosis von SD-101 in Kombination mit Nivolumab und die optimale Dosis von Nivolumab zu ermitteln. Kombination mit Nivolumab und von SD-101 in Kombination mit Ipilimumab und Nivolumab. Darüber hinaus soll als sekundäres Ziel ermittelt werden, ob im Phase-lb-Teil der Studie CPI mit einem oder zwei Wirkstoffen eingesetzt werden soll. Im Hinblick auf die Phase lb ist das primäre Ziel die Bewertung der Gesamtansprechrate (ORR) nach RECIST v1.1 (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors) und des 12-Monats-Gesamterfolgs (OS) für PEDD/HAI SD-101 in Kombination mit systemischer, d.h. intravenöser (IV), immunologischer Checkpoint-Blockade (co-primäre Endpunkte). Weitere sekundäre Ziele sind (i) die Bewertung der Wirksamkeit in Bezug auf die RECIST für Immuntherapie (iRECIST) ORR, die mRECIST ORR, die RECIST 1.1 leberspezifische Ansprechrate (HRR), die Dauer des Ansprechens (DOR), das gesamte progressionsfreie Überleben (PFS) und die Rate des klinischen Nutzens (komplettes Ansprechen [CR] + partielles Ansprechen [PR] + SD) und (ii) die Bewertung der Sicherheit/Toxizität der gewählten MTD oder optimalen Dosis von SD-101 in Kombination mit CPI. Darüber hinaus gibt es auch explorative Ziele: (i) die Bewertung der RECIST v1.1 des leberspezifischen progressionsfreien Überlebens (HPFS); (ii) Bewertung des pathologischen Ansprechens in LM nach PEDD/HAI von SD 101 mit oder ohne systemische IV CPI-Infusion und Korrelation mit der Bewertung des Ansprechens auf bildgebende Verfahren; (iii) Bewertung der Lebertumor- und Plasmaspiegel von SD 101 nach PEDD/HAI; (iv) Bewertung der intratumoralen immunologischen Auswirkungen der Behandlung auf myeloid-abgeleitete Suppressorzellen (MDSC), Lymphozyten und Zytokinprofile unter Verwendung gepaarter Lebertumor- und normaler Leberbiopsien zu Beginn und während der Behandlung; (v) Bewertung der peripheren immunologischen pharmakodynamischen Wirkungen der Behandlung durch serielle Blutentnahme für CTC, zirkulierende Zytokine und andere immunologische Korrelate; (vi) Bewertung der abskopalen Wirkungen von SD 101 als Einzelwirkstoff über PEDD/HAI; (vii) Bewertung der Veränderungen des ECOG PS im Vergleich zum Ausgangswert im Laufe der Zeit; (viii) Bewertung der Veränderungen der Lebensqualität im Vergleich zum Ausgangswert unter Verwendung des EORTC-QLQ-C30-Instruments.
Das Gesamtdesign der Studie ist in zu finden. Die Studie ist offen, multizentrisch und nicht-randomisiert.
Wie unten näher beschrieben, wird in Phase 1 eine Sentinel-Kohorte aufgenommen, um die Sicherheit von SD-101 zu bestimmen, das über PEDD/HAI mit einer Dosiseskalation von zwei Dosen innerhalb eines Patienten verabreicht wird. Die Patienten der Sentinel-Kohorte erhalten zwei Infusionen (im Abstand von zwei Wochen), wobei die erste Infusion die erste Dosisstufe (0,5 mg) und die zweite Infusion die zweite Dosisstufe (2 mg) umfasst, mit Bewertungen der Toxizität, bevor sie in eine der Kohorten der Studie aufgenommen werden. Die Aufnahme der Patienten in die Sentinel-Kohorte erfolgt in einem Abstand von 7 Tagen. Falls keine dosislimitierenden Toxizitäten (DLTs) auftreten, kann jeder Patient zum zweiten Infusionszeitpunkt der Dosisstufe 1 in die Kohorte A wechseln (d. h. Kohorte A, Dosis an Tag 8). Nach Abschluss der Sentinel-Kohorte werden steigende Dosen von SD-101 allein (Kohorte A), zusammen mit Nivolumab (Kohorte B) und zusammen mit einer Kombination aus Ipilimumab und Nivolumab (Kohorte C) verabreicht. Die Kohorten B und C beginnen eine Dosisstufe unterhalb der MTD oder der optimalen Dosis von Kohorte A, um die Sicherheit bei der Zugabe von CPI zu SD-101 zu optimieren. Kohorte C beginnt nach Abschluss von Kohorte B. Zur Bestimmung der MTD wird ein standardmäßiges 3 + 3 Dosis-Eskalations-Design verwendet.
Nach der Bestimmung der MTD oder der optimalen Dosis von SD-101 für PEDD/HAI und der Verträglichkeit des/der CPI-Schemas/-Schemata wird der Ansatz in Phase lb fortgesetzt. Die Patienten in Phase lb erhalten die in Phase 1 gewählte SD-101-Dosis in Kombination mit einer ein- oder doppelwirkenden Checkpoint-Blockade. Bei der Wahl der Einzel- oder Doppel-CPI-Therapie in Kombination mit SD-101 für Phase lb können neben den Ansprechraten aus den Kohorten B und C in Phase 1 auch Sicherheitsdaten berücksichtigt werden. SD-101 wird über zwei Zyklen verabreicht, mit drei wöchentlichen Dosen pro Zyklus für die Phase-1-Kohorten A, B und C und die Phase lb. Für die Sentinel-Kohorte wird SD-101 über 1 Minizyklus, bestehend aus zwei Infusionen im Abstand von 2 Wochen. Nach der ersten SD-101-Infusion ist für jeden Patienten eine Beobachtung oder Einweisung über Nacht im Krankenhaus erforderlich. Wenn die erste SD-101-Dosis gut vertragen wird, liegt es im Ermessen des behandelnden Arztes, die weiteren SD-101-Infusionen über Nacht zu beobachten oder aufzunehmen. Wenn nachfolgende Infusionen ambulant durchgeführt werden, wird der Patient mindestens 6 Stunden nach der Infusion beobachtet, bevor er nach Hause entlassen wird, sofern er klinisch stabil ist. Treten im Zusammenhang mit SD-101 PEDD/HAI Ereignisse des Grades 2 auf, die nach der ersten Infusion eine stationäre Behandlung erfordern, kann der Patient nach jeder weiteren SD-101 Infusion über Nacht zur Beobachtung oder Einweisung behalten werden.
Einschlusskriterien
Um in die Studie aufgenommen zu werden, muss der Patient alle folgenden Einschlusskriterien erfüllen:

1. Männlich oder weiblich, Alter ≥18 Jahre zum Zeitpunkt der Untersuchung
2. Sie müssen in der Lage sein, die Studie zu verstehen und vor der Durchführung der Studie eine schriftliche Einverständniserklärung abzugeben
3. Histologisch oder zytologisch bestätigtes metastasiertes UM mit ausschließlich oder leberdominanten Erkrankung. Die leberdominante Erkrankung ist definiert als:
1. a. Phase 1, Kohorte A - Intrahepatische Metastasen, die im Vergleich zu anderen Organen den größten Anteil der Erkrankung ausmachen, wobei als extrahepatische Lokalisationen die Lunge, die Haut oder das subkutane Gewebe und die Knochen zulässig sind.
2. b. Phase 1, Kohorten B und C und Phase lb - Intrahepatische Metastasen, die den größten Anteil der Erkrankung im Verhältnis zu anderen Organen ausmachen, oder wenn das Fortschreiten der LM eine erhebliche Bedrohung für das Leben des Patienten darstellt.
4. Keine vorherige zytotoxische Chemotherapie, zielgerichtete Therapie oder externe Strahlentherapie innerhalb von 14 Tagen vor der Aufnahme in die Studie
5. Nur Phase 1: Hat innerhalb von 30 Tagen vor der ersten Dosis der Studienintervention keine Therapie mit einer immunologischen Checkpoint-Blockade erhalten und hat keine laufenden immunvermittelten SARs Grad 2 oder höher. Nur Phase 1b: Hat noch nie eine Therapie mit einer immunologischen Checkpoint-Blockade erhalten
6. Keine vorherige embolische HAI-Therapie mit permanentem embolischem Material. Hinweis: Eine vorherige chirurgische Resektion oder Radiofrequenzablation einer oligometastatischen Lebererkrankung ist sowohl für den Phase-1- als auch für den Phase-lb-Teil dieser Studie zulässig. Leberläsionen, die ablative Therapien erhalten haben, sollten nicht als Zielläsionen betrachtet werden, es sei denn, sie haben sich seit der Therapie deutlich weiterentwickelt.
7. Keine bösartige Erkrankung in der Vorgeschichte oder andere gleichzeitige Erkrankungen, es sei denn, die bösartige Erkrankung ist klinisch unbedeutend, es ist keine laufende Behandlung erforderlich und der Patient ist klinisch stabil
8. Messbare Erkrankung in der Leber gemäß RECIST v.1.1-Kriterien
9. Hat beim Screening ein ECOG PS von 0-1
10. Der Prüfarzt schätzt die Lebenserwartung des Patienten beim Screening auf >3 Monate
11. Hat ein QTc-Intervall ≤480 msec
12. Alle damit verbundenen klinisch bedeutsamen (nach Einschätzung des Prüfarztes) arzneimittelbedingten Toxizitäten aus früheren Krebstherapien müssen vor der Verabreichung der Studienbehandlung abgeklungen sein (auf Grad <1 oder das Niveau des Patienten vor der Behandlung) (Alopezie Grad 2 und Endokrinopathien, die durch eine Ersatztherapie kontrolliert werden, sind zulässig).
13. Angemessene Organfunktion beim Screening, nachgewiesen durch:
- - Thrombozytenzahl >100.000/pL
- - Hämoglobin ≥8,0 g/dL
- - Anzahl der weißen Blutkörperchen (WBC) >2.000/pL
- - Serumkreatinin ≤2,0 mg/dL, es sei denn, die gemessene Kreatinin-Clearance beträgt
- >40 mL/min/1,73 m2
Gesamtbilirubin und direktes Bilirubin ≤2,0 * die obere Grenze der Norm (ULN) und alkalische Phosphatase ≤5 x ULN. Bei Patienten mit nachgewiesener Gilbert-Krankheit ist ein Gesamtbilirubin von bis zu 3,0 mg/dL zulässig. ALT und AST ≤5 x ULN - Prothrombinzeit/International Normalized Ratio (INR) oder aktivierte partielle Thromboplastinzeit (aPTT): Testergebnisse beim Screening ≤1,5 × ULN (dies gilt nur für Patienten, die keine therapeutische Antikoagulation erhalten; Patienten, die eine therapeutische Antikoagulation erhalten, sollten mindestens 4 Wochen vor der ersten Dosis der Studienintervention eine stabile Dosis erhalten) Hinweis: Labortests, deren Ergebnisse nach Ansicht des Prüfers nicht mit dem klinischen Status des Patienten vereinbar sind, können einmal wiederholt werden, um die Teilnahmeberechtigung zu prüfen.
14. Frauen im gebärfähigen Alter dürfen nicht schwanger und nicht laktierend oder postmenopausal sein und müssen beim Screening und vor der ersten Dosis der Studienintervention einen negativen Schwangerschaftstest auf humanes Choriongonadotropin (hCG) vorweisen.
- - Frauen im gebärfähigen Alter müssen sich verpflichten, auf sexuelle Aktivitäten mit männlichen Partnern zu verzichten, oder, falls sie mit einem nicht sterilisierten männlichen Partner sexuell aktiv sind, müssen sie sich verpflichten, ab dem Screening und während der gesamten Studie hochwirksame Methoden der Empfängnisverhütung anzuwenden und sich verpflichten, diese Vorsichtsmaßnahmen noch 100 Tage nach der letzten Dosis der Studienintervention anzuwenden.
- - Nicht sterilisierte Männer, die mit einer Frau im gebärfähigen Alter sexuell aktiv sind, müssen sich verpflichten, ab Tag 1 während der gesamten Studie und bis 30 Tage nach der letzten Dosis der Studienintervention wirksame Verhütungsmethoden anzuwenden und Samenspenden zu vermeiden.

PHASE 1
Die einzelnen Patientenkohorten der Phase 1 sind wie folgt:
Sentinel-Kohorte - Intra-Patienten-Dosis-Eskalations-Kohorte von PEDD/HAI der SD-101-Monotherapie unter Verwendung eines Standard-3+3-Designs, gefolgt von einem Übergang zu Kohorte A (siehe unten) bei Fehlen von DLTs:

- Infusion #1 (Sentinel Day 1): 0,5 mg (n = 3-6)
- Infusion #2 (Sentinel Day 15): 2 mg (n = 3-6)

Die Aufnahme von Patienten in die Sentinel-Kohorte ist um 7 Tage gestaffelt. Ein neuer Patient wird nicht früher als 7 Tage nach Abschluss der ersten Infusion von SD-101 bei dem vorherigen Patienten aufgenommen.
Nach Infusion Nr. 1 für jeden Patienten kann ein Sicherheitsüberprüfungsausschuss (Safety Review Committee, SRC) zusammentreten, um die klinischen Daten bis Tag 11 zu überprüfen und zu entscheiden, ob eine Dosiseskalation auf Infusion Nr. 2 erfolgen kann. Nach Infusion Nr. 2 für jeden Patienten kann das SRC zusammentreten, um die klinischen Daten bis zum 18. Tag zu überprüfen, und bei Fehlen von DLTs und nach Bestätigung durch das SRC kann der Patient in die Kohorte A mit der 2-mg-Dosis übergehen. Besteht Uneinigkeit über die Interpretation der Sicherheit, kann die Entscheidung des unabhängigen Gutachters das Ergebnis bestimmen.
Kohorte A - Dosis-Eskalations-Kohorte von PEDD/HAI mit SD-101-Monotherapie (2 Zyklen, 1 Dosis pro Woche × 3 Wochen, pro Zyklus) unter Verwendung eines Standard-3+3-Designs, gefolgt von einer optionalen Expansionsgruppe, um die maximal verträgliche Dosis (MTD) oder die optimale Dosis von SD-101 allein zu ermitteln und die Ansprechrate der Monotherapie zu schätzen:

- Dosisstufe 1: 2 mg (n = 3-6)
- Dosisstufe 2: 4 mg (n = 3-6)
- Dosisstufe 3: 8 mg (n = 3-6)

Die Aufnahme der ersten 2 Patienten in jeder Dosisstufe kann um mindestens 48 Stunden gestaffelt werden. Unter der Annahme, dass bis zu drei Dosisstufen von SD-101 (2, 4 und 8 mg) untersucht werden, können mindestens 19 und maximal 28 Patienten in Kohorte A eingesetzt werden. Weitere Dosisstufen (in Schritten von 4 mg) können auf der Grundlage von Sicherheits- und Ansprechdaten hinzugefügt werden. Eine Expansionsgruppe von zehn Patienten mit der SD-101-Monotherapie-MTD oder der optimalen Dosis kann gleichzeitig mit Kohorte B durchgeführt werden.
Kohorte B - Standard 3 + 3 Design Dosis-Reskalationskohorte von PEDD/HAI von SD-101 (2 Zyklen, 1 Dosis pro Woche × 3 Wochen, pro Zyklus) in Kombination mit intravenösem (IV) Nivolumab 480 mg alle vier Wochen (Q4W), um die MTD oder die optimale Dosis von SD-101 mit Nivolumab als Monotherapie zu ermitteln:

- Dosisstufe 1: Angesichts des Potenzials für eine erhöhte Hepatotoxizität bei dieser Kombination beginnt die Dosiseskalation für Nivolumab in Kombination mit PEDD/HAI von SD-101 bei einer Dosisstufe unterhalb der MTD oder optimalen Dosis aus Kohorte A (d. h. MTD-1 oder optimale Dosis-1) (n = 3-6)
- Dosisstufe 2: Nivolumab in Kombination mit PEDD/HAI von SD-101 in der MTD oder optimalen Dosis von Kohorte A (n = 3-6), oder wenn MTD-1 oder optimale Dosis-1 nicht vertragen wird, kann auf MTD-2 oder optimale Dosis-2 deeskaliert werden

Die Aufnahme der ersten 2 Patienten in jeder Dosisstufe kann um mindestens 48 Stunden gestaffelt werden. Unter der Annahme, dass bis zu 2 Dosisstufen von SD-101 in Kombination mit Nivolumab in Kohorte B untersucht werden, können mindestens 6 und maximal 12 Patienten in Kohorte B erforderlich sein. Eine optionale Erweiterungsgruppe von bis zu zehn Patienten, die SD-101 in Kombination mit Nivolumab erhalten, kann gleichzeitig mit Kohorte C durchgeführt werden. Eine optionale Kohorte Bl mit 10 Patienten zur Prüfung von Ipilimumab als Einzelwirkstoff in Kombination mit PEDD/HAI von SD-101 in der MTD oder optimalen Dosis von Kohorte A (n=3-6); oder wenn die MTD-1 oder die optimale Dosis-1 in Kohorte B nicht vertragen wird, wird in Kohorte Bl auf MTD-2 oder optimale Dosis-2 deeskaliert. Da Nivolumab und Ipilimumab unterschiedliche Wirkmechanismen haben (PD-1 vs. CTLA-4), kann bei geringer biologischer Aktivität von Nivolumab eine Studie mit Ipilimumab als Einzelwirkstoff erwünscht sein, bevor man zu Kohorte C.
Kohorte C - Standard 3 + 3 Design Dosis-Reskalationsstudie von PEDD/HAI von SD-101 (2 Zyklen, 1 Dosis pro Woche x 3 Wochen, pro Zyklus) in Kombination mit systemischem IV Ipilimumab 3 mg/kg und systemischem IV Nivolumab 1 mg/kg alle drei Wochen (Q3W) für jeweils vier Dosen, gefolgt von Nivolumab 480 mg systemischem IV Q4W, um die MTD oder optimale Dosis von SD-101 mit dual-agent CPI zu identifizieren:

- Dosisstufe 1: Ipilimumab und Nivolumab in Kombination mit PEDD/HAI von SD-101 in einer Dosisstufe unterhalb der MTD oder der optimalen Dosis aus Kohorte B (n = 3-6)
- Dosisstufe 2: Ipilimumab und Nivolumab in Kombination mit PEDD/HAI von SD-101 in der MTD oder optimalen Dosis von SD-101 aus Kohorte B (n = 3-6), oder wenn MTD-1 oder optimale Dosis-1 nicht vertragen wird, kann auf MTD-2 oder optimale Dosis-2 deeskaliert werden.

Unter der Annahme, dass bis zu 2 Dosisstufen von SD-101 untersucht werden (zuerst die MTD-1 oder optimale Dosis-1, dann die MTD oder optimale Dosis aus Kohorte B oder MTD-2/optimale Dosis-2, wenn MTD-1/optimale Dosis-1 nicht vertragen wurde), können in Kohorte C mindestens 6 und maximal 12 Patienten benötigt werden. Die Aufnahme der ersten 2 Patienten in jeder Dosisstufe kann um mindestens 48 Stunden gestaffelt sein. Eine optionale Expansionskohorte von 10 Patienten kann aufgenommen werden, wenn zusätzliche Daten benötigt werden, um zwischen Einzel- und Doppelwirkstoff-CPI in Kombination mit SD-101 über PEDD/HAI für Phase 1b.
PHASE 1b
Phase lb kann nach Abschluss von Kohorte B oder Kohorte C und Prüfung der Daten durch das SRC beginnen. Diese Phase wird in Abhängigkeit von der Entscheidung über die SD-101-Dosis und das CPI-Schema durchgeführt. In Phase lb wird ein zweistufiges Design verwendet, um festzustellen, ob der Anteil der Reaktionen auf die SD-101 MTD oder die optimale Dosis + Einzel- oder Doppelwirkstoff-CPI ausreichend hoch ist, um weitere Tests zu rechtfertigen.
Der Phase-1b-Teil der Studie sieht bis zu 40 Teilnehmer vor. Es wird ein zweistufiges Design mit der kleinsten Gesamtstichprobe (sog. Minimax-Design; Simon 1989) verwendet. In der ersten Phase werden 22 Patienten eingeschlossen, und wenn 3 oder mehr Reaktionen beobachtet werden, wird die Kohorte der Phase lb auf insgesamt 40 Patienten erweitert, um die Wirksamkeit weiter zu bewerten. Die Aufnahme in diese Kohorte wird gestoppt, wenn in der ersten Phase 2 oder weniger Reaktionen beobachtet werden. Wenn die Gesamtzahl der Ansprecher >7 ist, ist eine weitere Prüfung der Behandlung gerechtfertigt. Eine Zwischenanalyse kann nach der Behandlung von fünfzig Patienten durchgeführt werden, um die Gesamtansprechrate (ORR) zu bewerten.
Dauer der Verabreichung
Dauer der Verabreichung von SD-101 (alle Teilnehmer in Phase 1 und Phase 1b):
Sentinel-Kohorte - bis zu 7 Dosen SD-101 (einschließlich der Dosen, die nach dem Übergang zu Kohorte A verabreicht werden)
Kohorten A, B, C und Phase lb - Bis zu 6 Dosen (maximal 2 Zyklen von SD-101, 3 wöchentliche Dosen pro Zyklus). Auf der Grundlage von Toxizität oder Verträglichkeit können weniger Dosen oder Zyklen von SD-101 verabreicht werden. der Toxizität oder Verträglichkeit verabreicht werden. Alle Patienten, die mindestens eine PEDD/HAI-Dosis von SD-101 erhalten haben, werden als auswertbar betrachtet.
Dauer der CPI-Verabreichung

Phase 1, Sentinel-Kohorte und Kohorte A: nicht anwendbar
Phase 1, Kohorte B und optionale Erweiterungskohorte: bis zu zwölf Monate Nivolumab 480 mg Q4W
Phase 1, optionale Kohorte B1: systemische IV Ipilimumab 3 mg/kg Q3W für 4 Dosen
Phase 1, Kohorte C und optionale Erweiterungskohorte: (i) systemisches IV-Nivolumab 1 mg/kg Q3W für 4 Dosen, dann 480 mg/kg Q4W für bis zu zwölf Monate und (ii) systemisches IV Ipilimumab 3 mg/kg Q3W für 4 Dosen.
Phase 1b: CPI-Schema gemäß den Daten der Phase 1 für bis zu zwölf Monate Verabreichte Interventionen

Die Interventionen und geplanten Dosierungen sind in Tabelle 6 zusammengefasst. Tabelle 6

Intervention Name	SD-101	Opdivo® (nivolumab) ^a	Yervoy® (ipilimumab) ^b
Typ	Medikament (ODN)	Biologikum (Antikörper)	Biologikum (Antikörper)
Dosisformulierung	Lösung	Lösung zur Injektion	Lösung zur Injektion
Einheitsdosisstärke(n)	13.4 mg/mL*	40 mg/4 mL	5 mg/mL
		100 mg/10 mL
		240 mg/24mL
Dosierungsstufe(n)	0.5, 2, 4 oder 8 mg^c	1 mg/kg IV	3 mg/kg IV
Dosierungsstufe(n)	0.5, 2, 4 oder 8 mg^c	380 mg IV
Art der Verabreichung	intravaskuläre Injektion durch PEDD/HAI über 30-60 Minuten	IV	IV
Verwendung	Experimentell	Hintergrundintervention	Hintergrundintervention
IMP und NIMP	IMP	NIMP	NIMP
Beschaffung	TriSalus	kommerziell - Baustellenversorgung	kommerziell - Baustellenversorgung
Verpackung und Kennzeichnung	Einwegfläschchen	Einzeldosisfläschchen	Einzeldosisfläschchen

* Die Dosisstärke von SD-101 bezieht sich nur auf SD-101 Oligo

Infusion von SD-101

Die SD-101 Lösung wird über das hepatische arterielle System infundiert, optional unter Verwendung des TriNav® Infusionssystems. Es kann ein femoraler oder brachialer/radialer Zugang verwendet werden. Hämangiome, Shunt-Gefäße oder andere vaskuläre Läsionen in der Leber, die die Therapie beeinträchtigen könnten, werden nach dem Ermessen des behandelnden Facharztes für interventionelle Radiologie embolisiert. Für die SD-101-Infusionsverfahren wird das Medikament in einer 50-mL-Spritze (therapeutische Dosis) und einem 100-mL-Fläschchen mit dem für die therapeutische Spülung erforderlichen Volumen (10 ml) zubereitet und verabreicht, beides in der therapeutischen Konzentration, die wie in Tabelle 7 unten beschrieben bereitgestellt werden kann. Tabelle 7

Kohorte	SD-101 zu verabreichende Dosis (mg)	zu verabreichende Menge (mL)	Dosis SD-101 Konzentration (mg/ml)	erforderliches Gesamtvolumen	mg SD-101 pro gewünschtem Volumen	Volumen SD-101 Stammlösung	Volumen Kochsalzlösung	Anzahl der benötigten DP-Fläschchen
1	2 mg	50.0 mL	0.04 mg/ml	80 ml	3.2	0.24 ml	80 ml	1 Fläschchen, 13.4 mg/mL **
2	4 mg	50.0 mL	0.08 mg/ml	80 ml	6.4	0.48 ml	80 ml	1 Fläschchen, 13.4 mg/mL **
3	8 mg	50.0 mL	0.16 mg/ml	80 ml	12.8	0.96 ml	80 ml	2 Fläschchen, 13.4 mg/mL **
4*	1 mg	50.0 mL	0.02 mg/ml	80 ml	1.6	0.12 ml	80 ml	1 Fläschchen, 13.4 mg/mL **

* Kann auf der Grundlage von Daten zur Sicherheit und zum Ansprechen hinzugefügt werden.
** Die Dosisstärke von SD-101 (13,4 mg/mL) bezieht sich nur auf SD-101 Oligo.

Gemäß einer Ausführungsform kann ein Verfahrensablauf für die SD-101-Behandlungssitzungen Folgendes umfassen: (i) Zugang zum Gefäßsystem des Patienten über die Seidinger-Technik durch die Oberschenkelarterie; (ii) Vorbereitung einer Spülung mit heparinisierter Kochsalzlösung (es sei denn, dies ist für den Patienten kontraindiziert) unter Verwendung eines Druckbeutels; (iii) Anschließen der Leitung mit heparinisierter Kochsalzlösung an den Basiskatheter und Sicherstellen einer kontinuierlichen Spülung während des gesamten Verfahrens; (iv) Anschließen eines invasiven Blutdruckmessgeräts (IBP) an einen Patientenmonitor; (v) Verfolgen des Geräts zum Zielort der Behandlung; (vi) Anschließen einer Hochdruckschlauchleitung und Spülen des Wandlers und der Leitung, um sicherzustellen, dass keine Blasen vorhanden sind; (vii) Anschließen einer Hochdruckschlauchleitung an die Nabe des TriNav®-Infusionssystems; (viii) Stabilisieren der Druckmessung und Aufzeichnen des mittleren distalen Gefäßdrucks; (ix) Trennen der Hochdruckschlauchleitung vom TriNav®-Infusionssystem und Beibehalten der Leitung im sterilen Bereich für nachfolgende Druckmessungen; (x) Anschließen der 10-mL-Vorfüllspritze an den Absperrhahn und Spülen, bis der Hochdruckschlauch vollständig mit therapeutischer Lösung gefüllt ist und die Lösung am Ende des Schlauchs austritt; (xi) Anschließen der 50-mL-Spritze an den Hochdruckschlauch; (xii) Einsetzen der 50-mL-Spritze in die Spritzenpumpe; (xiii) vor der Infusion Spülen des distalen Endes des Absperrhahns mit der 10-mL-Vorfüllspritze, bis Flüssigkeit aus dem Absperrhahn austritt; (xiv) Verbinden der Nabe des TriNav®-Infusionssystems mit dem Absperrhahn und Drehen des Absperrhahns in die Position, um aus der 50-mL-Therapiespritze zu infundieren; (xv) Austauschen der 10-mL-Vorfüllspritze gegen eine 1-mL-Kochsalzbolusspritze; (xvi) Infundieren des berechneten Volumens des Therapeutikums (50-mL/# der Stellen) aus der 50-mL-Spritze mit der Spritzenpumpe über 2 Minuten mit einer Rate von 2-mL/min (z. B. 4-mL-Volumen); (xv) Infundieren des berechneten Volumens des Therapeutikums (50-mL/# der Stellen) aus der 50-mL-Spritze. z. B. 4 ml Volumen); (xvii) Drehen des Absperrhahns an der 1-mL-Spritze und Infusion des 1-mL-Kochsalzaliquots von Hand mit einer Rate von 2 ml/s (z. B. 0. (xviii) nach der Bolusinfusion Drehen des Hahns, um die Infusion aus der 50-mL-Spritze fortzusetzen; (xix) Infundieren des verbleibenden berechneten Volumens des Therapeutikums mit einer Rate von 2-mL/min; (xx) nach Beendigung der Infusion des gewünschten Volumens (auf der Pumpe angezeigt), Stoppen der weiteren Infusion und Trennen des Hochdruckschlauchs vom TriNav®-Infusionssystem; (xxi) Ablassen des registrierten Volumens, das zur Vorbereitung der folgenden Infusion abgegeben wurde; und (xxii) Wiederholen der Schritte (iv) bis (xxi) für die verbleibenden selektiven Infusionen.
In einer Ausführungsform wird das zu verabreichende Volumen von 50,0 mL pro Segment oder Sektor der Leber zugewiesen. In einer Ausführungsform kann die Berechnung des infundierten Volumens pro Segment oder Sektor vor dem SD-101-Infusionsverfahren (auf der Grundlage eines MRT- oder CT-Scans vor dem Verfahren) oder während der gleichen Sitzung wie die SD-101-Infusion (auf der Grundlage der oben beschriebenen Angiographie oben beschrieben). In einer Ausführungsform kann die therapeutische Dosis von 50 mLl wie folgt aufgeteilt werden: 3 × 10 ml Infusionen in die Zielgefäße des rechten Leberlappens und 2 × 10 ml Infusionen in die Zielgefäße des linken Leberlappens. Darüber hinaus kann die Verteilung der 10-mL-Aliquots auf der Grundlage der Lage der messbaren Erkrankung und des Zielgefäßdurchmessers angepasst werden. In einer anderen Ausführungsform wird das infundierte Volumen pro Segment oder Sektor wie folgt berechnet: (perfundiertes Lebervolumen/Gesamtlebervolumen) * 40 + (geschätztes Tumorvolumen im perfundierten Segment/geschätztes Gesamttumorvolumen in der Leber) * 10). In einer Ausführungsform sollte das geplante SD-101-Volumen pro Segment oder Sektor, das für das erste SD-101-Infusionsverfahren ermittelt wurde, als geplantes Volumen für jedes nachfolgende SD-101-Infusionsverfahren verwendet werden.
Auswertungen zum Tumoransprechen
Alle Patienten können sich einer Bildgebung mit Magnetresonanztomographie (MRT) und Positronenemissionstomographie (PET)/Computertomographie (CT) unterziehen, um das Ausmaß der Erkrankung in der Leber und an anderen Stellen zu beurteilen, sowie Leberbiopsien und Untersuchungen von zirkulierenden Tumorzellen (CTC), zirkulierenden Zytokinen und anderen immunologischen Korrelaten. Das Ansprechen des Tumors kann anhand der Standardkriterien für die Bewertung des Ansprechens bei soliden Tumoren (RECIST v1.1) röntgenologisch gemessen werden. Die offizielle Bewertung des Ansprechens (RECIST v1.1) ist bis Tag 84 möglich. Das Ansprechen auf die LM wird anhand eines abdominalen CT oder MRT beurteilt, während extrahepatische Läsionen anhand von Ganzkörper-PET/CT-Scans beurteilt werden. Die endgültige Bewertung des Ansprechens erfolgt an Tag 168, um sicherzustellen, dass eine Pseudoprogression ausgeschlossen und das anfängliche Ansprechen bestätigt ist. Bildgebende Verfahren werden danach alle 90 Tage durchgeführt. Die Leberbildgebung mittels MRT mit Eovist®-Kontrastmittel sollte, wann immer möglich, zur Beurteilung verwendet werden
Es können vier Leberbiopsien durchgeführt werden:

- Phase 1 Sentinel-Kohorte - eine erste Biopsie wird am 15. Tag vor der 2-mg-Infusion von SD-101 und nach der Infusion an Tag 15 entnommen (für SD-101-Spiegel im Tumorgewebe)
- Phase-1-Kohorten A, B und C sowie Phase Ib: Eine Baseline-Biopsie wird am Tag 1 vor der ersten Infusion von SD-101 und nach der Infusion am Tag 1 (für SD-101-Spiegel im Tumorgewebe), zu Beginn des zweiten Zyklus von SD-101 (vor SD-101-Infusion Nr. 4) und an Tag 100 entnommen. Das pathologische Ansprechen kann auf der Grundlage der Überprüfung durch den Pathologen vor Ort anhand der Bewertung von Nekrose und Fibrose in den Tumorproben beurteilt werden.

Pharmakokinetik
Es können Blutproben entnommen werden, um die systemische Exposition von SD-101 nach PEDD/HAI zu charakterisieren. Für die Konzentrationen von Nivolumab oder Ipilimumab können keine Probenahmen oder Tests durchgeführt werden.
Die Tumorkonzentrationen von SD-101 können in den Biopsieproben von LM nach der Infusion gemessen werden, die für die Bewertung des Tumoransprechens und aus zusätzlichen Biopsien nach der Infusion an Tag 15 für die Sentinel-Kohorte und an Tag 1 für die Kohorten A, B und C gewonnen wurden.
Pharmakodynamik
Blutproben können für die Messung von CTC, zirkulierenden Zytokinen und anderen immunologischen Korrelaten, einschließlich IFN-a- und IFN-y-verwandter Gensignaturen, entnommen werden, die für diese Klasse von Therapeutika informativer sein können als pharmakokinetische Bewertungen.
Sicherheit
Zu den Sicherheitsbewertungen gehören unerwünschte Ereignisse (AEs), klinische Labortests, Vitalparameter, körperliche Untersuchungen und Elektrokardiogramme (EKGs).
Die folgenden Ereignisse gelten als DLTs, wenn sie während eines der beiden SD-101 Zyklen oder innerhalb von 4 Wochen nach der letzten SD-101 Dosis in Zyklus 1 beobachtet werden und als auf die Studienintervention (SD-101 oder CPI-Therapie) und/oder das PEDD-Gerät zurückzuführen angesehen werden:

- Zytokinfreisetzungssyndrom (CRS) ≥Grad 4
- das sich nicht innerhalb von 7 Tagen auf ≤Grad 2 erholt
- gemäß den Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE) des National Cancer Institute (NCI)
- CRS Grad 3 gemäß NCI CTCAE, das sich nicht innerhalb von 7 Tagen auf < Grad 2 erholt
- Autoimmun-AE ≥ Grad 3 nach NCI CTCAE
- Allergische Reaktion AEs ≥ Grad 3 gemäß NCI CTCAE
- Hämatologische AEs des Grades 4, die sich nicht innerhalb von 7 Tagen auf ≤ Grad 2 erholen
- Jede AE des Grades 4 gemäß NCI CTCAE in einem beliebigen Organsystem

Patienten, die während eines Zyklus von SD-101 eine DLT entwickeln, können dauerhaft von den Studienmaßnahmen ausgeschlossen werden, es sei denn, es wird hinreichend begründet, dass ein alternativer Ansatz (z. B. wie klinisch indiziert mit Dosisanpassung) angesichts der spezifischen DLT als einigermaßen sicher zu erwarten ist. Der Patient kann entsprechend der klinischen Praxis behandelt und auf ein Abklingen der Toxizität überwacht werden.
Bei schweren oder lebensbedrohlichen infusionsbedingten Reaktionen kann die SD-101- und/oder CPI-Therapie dauerhaft abgebrochen werden. Dosisunterbrechungen, Verzögerungen oder das Absetzen der SD-101- und/oder CPI-Therapie sind erforderlich, wenn ein Patient eine immunvermittelte Reaktion des Grades 3 oder höher aufweist. Eine Unterbrechung der SD-101- und/oder CPI-Therapie wegen abnormaler Lebertests ist erforderlich, wenn ein Patient eine der unten aufgeführten Bedingungen erfüllt oder bei abnormalen Leberchemiewerten, die nicht den im Prüfplan festgelegten Abbruchregeln entsprechen, wenn der Prüfer der Meinung ist, dass dies im besten Interesse des Patienten liegt.

- Der Patient hat eine klinische Gelbsucht
- Der Patient hat Anzeichen einer Koagulopathie
- Der Patient hat klinische Anzeichen einer portalen Hypertension, einschließlich, aber nicht beschränkt auf Aszites oder Varizenblutungen

Alle Patienten können im Rahmen dieser Studie mindestens 1 Jahr lang nach Beginn der Behandlung auf ihre Sicherheit hin beobachtet werden. Alle in die Studie aufgenommenen Patienten können in einem separaten Langzeit-Follow-up-Protokoll auf das Gesamtüberleben (OS) nach einem Jahr untersucht werden.
Patienten, die die Studienbehandlung aus anderen Gründen als dem Fortschreiten der Erkrankung (z. B. Toxizität, Rücknahme der Einwilligung) abbrechen, können sich weiterhin alle 90 Tage planmäßigen Tumoruntersuchungen unterziehen, bis der Patient stirbt, ein Fortschreiten der Erkrankung (intra- oder extrahepatisch) eintritt oder eine weitere systemische Krebstherapie beginnt, je nachdem, was zuerst eintritt.
Rettungsmedikation und Therapie
Das Studienzentrum wird immunmodulatorische Notfallmedikamente bereitstellen, die vor Ort beschafft werden. Die folgenden Notfallmedikamente können verwendet werden:
Medikamente

1. IL-6-Rezeptor-Antikörper Tocilizumab 4-8 mg/kg systemisch intravenös über 60 Minuten bei CRS, Wiederholung je nach klinischer Indikation möglich
2. Methylprednisolon 2 mg/kg systemischer IV-Bolus, gefolgt von 0,5 mg/kg IV alle 6-12 Stunden bei CRS Grad >2 oder neurologischer Funktionsstörung. Die erste Dosis kann gegeben werden.

Die erste Dosis kann ohne Rücksprache mit dem Prüfarzt oder Beauftragten verabreicht werden; die nachfolgenden Dosen müssen jedoch nach Rücksprache mit dem Prüfarzt oder Beauftragten verabreicht werden.

3. Erwägen Sie 1 bis 2 Dosen von Anti-TNFα-Mitteln (Infliximab oder Etanercept). Der Nutzen ist nicht bekannt, aber da TNFα akut ansteigen kann, ist es eine Überlegung wert, dies in einem frühen Stadium des Krankheitsprozesses zu tun.
4. Etanercept 25 mg SC zweimal wöchentlich für 2 Dosen, die im Abstand von 3 bis 4 Tagen verabreicht werden (0,4 mg/kg zweimal wöchentlich, maximal 25 mg pro Dosis
5. Infliximab 10 mg/kg systemisch intravenös wöchentlich × 2 Dosen

Interventionen

1. Endoskopische Cholangiographie und Stentimplantation
2. Perkutane Cholangiographie und Stentimplantation

Obwohl die Einnahme von Notfallmedikamenten zu jedem Zeitpunkt der Studie zulässig ist, sollte die Einnahme von Notfallmedikamenten, wenn möglich und klinisch sinnvoll, mindestens 6 Stunden nach der Verabreichung des Studieneingriffs verschoben werden. Datum und Uhrzeit der Verabreichung von Notfallmedikamenten sowie Name und Dosierungsschema der Notfallmedikamente müssen aufgezeichnet werden.
Unerwünschte Ereignisse, die eindeutig auf das Fortschreiten der Krankheit zurückzuführen sind, nicht mit dem Studienmedikament in Zusammenhang stehen oder für die in Frage kommende Patientenpopulation der Studie zu erwarten sind, gelten nicht als DLTs.
Bewertung des Zytokinfreisetzungssyndroms
Der Prüfer oder ein von ihm Beauftragter wird jeden Patienten auf das Vorliegen eines schweren CRS. Die Einstufung des CRS wird auf der Grundlage der NCI CTCAE v5.0 vorgenommen.
Bildgebung
Das Ausmaß der Erkrankung wird zu den Zeitpunkten der Sentinel-Kohorte, der Kohorte A, der Kohorte B und der Kohorte C radiologisch gemessen. Die Screening-Untersuchungen müssen eine MRT des Abdomens und des Beckens (mit oralem/systemischem IV-Eovist-Kontrastmittel, sofern nicht kontraindiziert) und eine Gehirnuntersuchung (CT mit systemischem IV-Kontrastmittel oder MRT) umfassen. Zusätzlich zur MRT des Abdomens und des Beckens sollte eine Spiral-CT-Untersuchung des Brustkorbs durchgeführt werden. Ist eine MRT medizinisch kontraindiziert oder liegt es im Ermessen des Arztes, kann eine CT-Untersuchung der Brust, des Abdomens und des Beckens mit systemischem Dreiphasenkontrastmittel durchgeführt werden. Wenn eine PET/CT-Untersuchung durchgeführt wird, muss der CT-Teil der Untersuchung den Standards für eine Vollkontrast-CT entsprechen. Die Bildgebung der Leber mittels MRT mit Eovist-Kontrastmittel sollte, wann immer möglich, zur Beurteilung von LM eingesetzt werden, zusammen mit PET/CT zur Beurteilung von Erkrankungen außerhalb der Leber. Das gleiche bildgebende Verfahren, das beim Screening verwendet wurde, muss während der gesamten Studie eingesetzt werden.
Jede auswertbare oder messbare Erkrankung muss beim Screening dokumentiert und bei jeder nachfolgenden Tumoruntersuchung neu beurteilt werden. Bei Patienten mit messbarer Erkrankung wird das Ansprechen gemäß RECIST v1.1. bewertet. Für die Bewertung des Ansprechens während der Phase 1 werden lokale Bildgebungsdaten verwendet. Eine unabhängige zentrale Überprüfung (Independent Central Review, ICR) zur Beurteilung des Ansprechens kann während der Phase 1b durchgeführt werden.
Nach dem Ermessen des Prüfarztes kann bei Verdacht auf PD jederzeit eine Bildgebung durchgeführt werden. Darüber hinaus werden mRECIST- und iRECIST-Bewertungen für die Erhebung sekundärer Endpunktdaten durchgeführt, fließen aber nicht in die offizielle Bewertung des Ansprechens ein.
ECOG-Leistungsstatus
Die ECOG-PS-Skala wird verwendet, um zu beurteilen, wie sich die Krankheit auf die täglichen Lebensaktivitäten und die Fähigkeit des Patienten auswirkt, sich selbst zu versorgen. Zu jedem festgelegten Zeitpunkt wird der Patient von qualifiziertem Personal vor Ort anhand der folgenden Skala bewertet:

0. Völlig aktiv, in der Lage, alle vor der Erkrankung ausgeübten Tätigkeiten ohne Einschränkung auszuüben
1. Eingeschränkt in körperlich anstrengenden Aktivitäten, aber gehfähig und in der Lage, leichte oder sitzende Arbeiten zu verrichten, z. B. leichte Hausarbeit, Büroarbeit
2. Gehfähig und in der Lage, sich selbst zu versorgen, aber nicht in der Lage, Arbeitstätigkeiten auszuführen; mehr als 50 % der Wachzeit auf den Beinen und unterwegs
3. Nur eingeschränkt fähig, sich selbst zu versorgen; mehr als 50 % der wachen Zeit an das Bett oder den Stuhl gefesselt
4. Vollständig behindert; kann sich nicht selbst versorgen; vollständig an das Bett oder den Stuhl gefesselt
5. Tot

Veränderungen, d. h. Verschlechterungen, werden nicht als SARs dokumentiert, es sei denn, sie werden im Rahmen der ungerichteten Befragung zu SARs gemeldet.
RECIST y1.1 Definitionen
Messbare Erkrankung - Das Vorhandensein von mindestens einer messbaren Läsion. Beschränkt sich die messbare Erkrankung auf eine einzelne Läsion, so sollte ihr neoplastischer Charakter durch Zytologie/Histologie bestätigt werden.
Messbare Läsionen - Läsion, die in mindestens einer Dimension genau gemessen werden kann und deren längster Durchmesser ≥10 mm ist (CT-Schichtdicke ≤5 mm).
Nicht messbare Läsionen - Alle anderen Läsionen, einschließlich kleiner Läsionen (längster Durchmesser ≤10 mm) sowie wirklich nicht messbare Läsionen (z. B. leptomeningeale Erkrankung, Aszites, Pleura-/Perikarderguss, entzündliche Brusterkrankung, lymphangitische Beteiligung von Haut oder Lunge, abdominale Massen, die mit reproduzierbaren bildgebenden Verfahren nicht messbar sind).
Ausgangssituation Dokumentation
Alle messbaren Läsionen bis zu einer Höchstzahl von 2 Läsionen pro Organ und insgesamt 5 Läsionen, die für alle beteiligten Organe repräsentativ sind, sollten als Zielläsionen identifiziert und bei Studienbeginn erfasst und gemessen werden.
Die Zielläsionen sollten auf der Grundlage ihrer Größe (Läsionen mit dem größten Durchmesser) und ihrer Eignung für genaue wiederholte Messungen mit einheitlichen bildgebenden Verfahren ausgewählt werden.
Die Summe des längsten Durchmessers (LD) für alle Zielläsionen (ohne Knoten) wird berechnet und als Basislinien-Summen-LD angegeben. Der Basislinien-Summen-LD wird als Referenz verwendet, um das objektive Ansprechen des Tumors in der messbaren Dimension der Krankheit zu charakterisieren.
Alle anderen Läsionen (oder Krankheitsherde) sollten als Nicht-Ziel-Läsionen identifiziert und ebenfalls zu Studienbeginn erfasst werden. Messungen dieser Läsionen sind nicht erforderlich, jedoch sollte das Vorhandensein oder Fehlen jeder dieser Läsionen während der gesamten Nachbeobachtung notiert werden.
Bewertung von Zielläsionen
Vollständiges Ansprechen (CR): Verschwinden aller Zielläsionen
Partielles Ansprechen (PR): Rückgang der Summe der LD der Zielläsionen um mindestens 30 %, wobei die Summe der LD zu Beginn der Behandlung als Referenz dient.
Progressive Erkrankung (PD): Mindestens 20%ige Zunahme der Summe der LD der Zielläsionen, wobei als Referenz die kleinste seit Behandlungsbeginn aufgezeichnete LD-Summe gilt, oder das Auftreten von einer oder mehreren neuen Läsionen. Die Summe muss eine absolute Zunahme auf 5 mm aufweisen.
Stabile Erkrankung (SD): Weder ausreichende Schrumpfung, um für PR zu qualifizieren, noch ausreichende Zunahme, um für PD zu qualifizieren, wobei die kleinste Summe der LD seit Beginn der Behandlung als Referenz dient.
Bewertung von Nicht-Ziel-Läsionen
Vollständiges Ansprechen (CR): Verschwinden aller Nicht-Ziel-Läsionen
Nicht-CR/Nicht-PD: Fortbestehen einer oder mehrerer Nicht-Ziel-Läsion(en)
Fortschreitende Erkrankung (PD): Eindeutiges Fortschreiten bestehender Nicht-Ziel-Läsionen und/oder das Auftreten einer oder mehrerer neuer Läsionen.

Das Gesamtüberleben im Sinne von vollständigem Ansprechen, teilweisem Ansprechen und stabiler Erkrankung wird nach RECIST 1.1 wie folgt bewertet: Tabelle 8

Zielläsionen	Nichtziel-Läsionen	neue Läsionen	Gesamtreaktion
vollständige Reaktion	vollständige Reaktion	Nein	vollständige Reaktion
vollständige Reaktion	nicht vollständiges Ansprechen / nicht fortschreitende Krankheit	Nein	teilweise Reaktion
teilweise Reaktion	nicht fortschreitende Krankheit	Nein	teilweise Reaktion
stabile Erkrankung	nicht fortschreitende Krankheit	Nein	stabile Erkrankung
fortschreitende Krankheit	Jede	Ja oder nein	fortschreitende Krankheit
jede	ortschreitende Krankheit	Ja oder nein	fortschreitende Krankheit
Jede	Jede	Ja	fortschreitende Krankheit

Dauer des Gesamtansprechens
Die Dauer des Gesamtansprechens wird gemessen ab dem Zeitpunkt, an dem die Messkriterien für CR oder PR (je nachdem, was zuerst erfasst wird) erfüllt sind, bis zum ersten Datum, an dem ein Rezidiv oder PD objektiv dokumentiert wird (wobei als Referenz für PD die kleinsten Messwerte seit Beginn der Behandlung herangezogen werden). Die Gesamtdauer der CR wird ab dem Zeitpunkt gemessen, an dem die Messkriterien für CR erstmals erfüllt sind, bis zum ersten Zeitpunkt, an dem PD objektiv dokumentiert wird. Dauer der SD: Die stabile Erkrankung wird vom Beginn der Behandlung bis zur Erfüllung der Kriterien für ein Fortschreiten der Erkrankung gemessen, wobei als Referenz die kleinste Summe der seit Beginn der Behandlung aufgezeichneten Messwerte, einschließlich der Ausgangsmessungen, herangezogen wird.
Gesamtüberleben
Für alle Patienten wird das Gesamtüberleben vom Tag der Aufnahme in die Studie bis zum Zeitpunkt des Todes berechnet. Patienten, die vor dem Datenschnittpunkt für die endgültige Wirksamkeitsanalyse noch am Leben sind oder die vor dem Ende der Studie ausscheiden, werden an dem Tag zensiert, an dem sie nachweislich zuletzt am Leben waren.
Fortschrittsfreies Überleben
Für alle Patienten wird das progressionsfreie Überleben (PFS) vom Tag der Aufnahme in die Studie bis zum Zeitpunkt der CT-Untersuchung, die einen Rückfall (oder einen anderen eindeutigen Indikator für die Entwicklung der Krankheit) dokumentiert, oder bis zum Tod berechnet, je nachdem, was zuerst eintritt. Patienten, die keinen dokumentierten Rückfall haben und vor dem Datenschnittpunkt für die endgültige Wirksamkeitsanalyse noch am Leben sind oder die die Studie vor dem Ende abbrechen, werden zum Zeitpunkt des letzten radiologischen Nachweises, der keinen Rückfall dokumentiert, zensiert.
Modifizierter RECIST (mRECIST)
Die mRECIST-Definitionen für das hepatozelluläre Karzinom lauten wie folgt:

Vollständiges Ansprechen (CR) = Verschwinden jeglicher intratumoraler arterieller Anreicherung in allen Zielläsionen
Partielles Ansprechen (PR) = Verringerung der Summe der Durchmesser der lebensfähigen (Anreicherung in der arteriellen Phase) Zielläsionen um mindestens 30 %, wobei die Summe der Durchmesser der Zielläsionen zu Beginn der Behandlung als Referenz dient.
Stabile Erkrankung (SD) = Alle Fälle, die weder für PR noch für progressive Erkrankung in Frage kommen

Progressive Erkrankung (PD) = Eine Zunahme der Summe der Durchmesser der lebensfähigen (sich vergrößernden) Zielläsionen um mindestens 20 %, wobei die kleinste Summe der Durchmesser der lebensfähigen (sich vergrößernden) Zielläsionen seit Beginn der Behandlung als Referenz dient.

Das Gesamtüberleben in Form von vollständigem Ansprechen, teilweisem Ansprechen und stabiler Krankheit in mRECIST wird wie folgt bewertet: Tabelle 9

Zielläsionen	Nichtziel-Läsionen	neue Läsionen	Gesamtreaktion
CR	CR	Nein	CR
CR	IR/SD	Nein	PR
PR	Nicht-PD	Nein	PR
SD	Nicht-PD	Nein	SD
PD	Jede	Ja oder nein	PD
Jede	PD	Ja oder nein	PD
Jede	Jede	Ja	PD

Abkürzungen: CR = vollständiges Ansprechen; PR = teilweises Ansprechen; IR = unvollständiges Ansprechen; SD = stabile Erkrankung; PD = fortschreitende Erkrankung.
Quelle: Lencioni R, Llovet JM. Modifizierte RECIST-Bewertung (mRECIST) für das hepatozelluläre Karzinom. Sem Liver Dis. 2010;30:52-60.
RECIST 1,1 für immunbasierte Therapeutika (iRECIST)

Das Ansprechen wird auch mit iRECIST bewertet. Kurz gesagt werden die wichtigsten Unterschiede zwischen RECIST und iRECIST in Seymour et al. 2017 wie folgt erläutert: „Die Prinzipien, die zur Bestimmung des objektiven Tumoransprechens verwendet werden, sind weitgehend unverändert von RECIST 1.1, während eine wesentliche Änderung von iRECIST das Konzept des ‚Zurücksetzens der Messlatte‘ ist, wenn auf die RECIST 1.1-Progression bei der nächsten Beurteilung eine Tumorschrumpfung folgt. iRECIST definiert iUPD auf der Grundlage der RECIST 1. Die Bestätigung basiert entweder auf der Beobachtung einer weiteren Größenzunahme (oder der Anzahl neuer Läsionen) in der Läsionskategorie (d. h. Zielkrankheit, Nicht-Zielkrankheit), in der zuerst eine Progression festgestellt wurde, oder auf der Beobachtung einer Progression (definiert durch RECIST 1.1) in Läsionskategorien, die zuvor nicht den RECIST 1.1-Progressionskriterien entsprachen. Wird jedoch keine Progression wie oben beschrieben bestätigt, sondern eine Tumorschrumpfung (im Vergleich zum Ausgangswert), die die Kriterien von iCR, iPR oder iSD erfüllt, wird der Balken zurückgesetzt, so dass erneut iUPD auftreten (im Vergleich zu den Nadir-Werten) und dann bei der nächsten Bewertung bestätigt werden muss (durch weiteres Wachstum), damit iCPD zugewiesen wird. Kommt es zu keiner Veränderung der Tumorgröße/-ausdehnung gegenüber dem iUPD, dann wäre der Zeitpunkt des Ansprechens wieder der iUPD. Dieser Ansatz ermöglicht es, atypische Reaktionen, wie z. B. verzögerte Reaktionen, die nach einer Pseudoprogression auftreten, zu identifizieren, besser zu verstehen und besser zu charakterisieren.“ Tabelle 10

Zielläsionen*	Nichtziel-Läsionen*	neue Läsionen*	Zeitpunkt-Antwort
Zielläsionen*	Nichtziel-Läsionen*	neue Läsionen*	keine vorherige iUPD**	vorherige iUPD; *
iCR	iCR	nein	iCR	iCR
iCR	nichtiCR/nichtiUPD	Nein	iPR	iPR
iPR	nichtiCR/nichtiUPD	Nein	iPR	iPR
iSD	nichtiCR/nichtiUPD	Nein	iSD	iSD
iUPD mit keiner Veränderung oder Abnahme gegenüber der letzten TP	iUPD mit keiner Veränderung oder Abnahme gegenüber der letzten TP	Ja	NA	NLs bestätigen iCPD, wenn NLs zuvor identifiziert wurden und an Größe (≥5mm im SOM für NLT oder jegliche Zunahme für NLNT) oder Anzahl zunehmen. Wenn keine Veränderung der NLs (Größe oder Anzahl) gegenüber der letzten TP vorliegt, bleibt iUPD
iSD	iUPD	Nein	iUPD	bleibt iUPD, es sei denn, iCPD wird aufgrund einer weiteren Zunahme der NT-Krankheit bestätigt (muss nicht die RECIST 1.1-Kriterien für eine eindeutige PD erfüllen)
iUPD	NichtiCR/NichtiUPD	Nein	iUPD	bleibt iUPD, es sei denn, iCPD wird auf der Grundlage von: - weiterer Anstieg der SOM um mindestens 5 mm, sonst bleibt iUPD
iUPD	iUPD	Nein	iUPD	bleibt iUPD, es sei denn, iCPD wird aufgrund eines weiteren Anstiegs bestätigt: - zuvor identifizierte Zielläsion iUPD SOM ≥5mm und/oder - NT-Läsion iUPD (vorherige Beurteilung - muss keine eindeutige PD sein)
Zielläsionen*	Nichtziel-Läsionen*	neue Läsionen*	Zeitpunkt Antwort
Zielläsionen*	Nichtziel-Läsionen*	neue Läsionen*	keine vorherige iUPD**	vorherige iUPD; *
iUPD	iUPD	Ja	iUPD	bleibt iUPD, es sei denn, iCPD wird aufgrund eines weiteren Anstiegs bestätigt: - zuvor identifizierte Zielläsion iUPD ≥5 mm und/oder -vorherige identifizierte NT-Läsion iUPD (muss nicht eindeutig sein) und/oder - Größe oder Anzahl der zuvor identifizierten neuen Läsionen
Nicht-iUPD/PD	NichtiUPD/PD	Ja	iUPD	bleibt iUPD, es sei denn, iCPD wird auf der Grundlage von: - Größenzunahme oder Anzahl neuer, zuvor identifizierter Läsionen

Abkürzungen: iCPD = bestätigte Immun-PD; iCR = komplettes Ansprechen des Immunsystems; iPR = partielles Ansprechen des Immunsystems; iSD = immunstabile Erkrankung; iUPD = unbestätigte Immun-PD; NL = neue Läsionen; NT = Nicht-Ziel; PD = progrediente Erkrankung; SOM = Summe der Maßnahmen; TP = Zeitpunkt
* Nach den Grundsätzen von RECIST 1.1. Wenn keine Pseudoprogression auftritt, sind die RECIST-1.1- und iRECIST-Kategorien für CR, PR und SD gleich. ** in jeder Läsionskategorie. *** zuvor bei der Bewertung unmittelbar vor dieser TP identifiziert.
Quelle: Seymour L, Bogaerts J, Perrone A, Ford R, Schwartz LH, Mandrekar S, et al. iRECIST: guidelines for response criteria for use in trials testing immunotherapeutics. Lancet Oncol.
2017;18(3):E143-E152.

In diesem Beispiel wurde SD-101 über HAI/PEDD an zwei menschliche Patienten verabreicht. Das SD-101 wurde den menschlichen Patienten mit dem TriNav® Infusionssystem verabreicht. In diesem Zusammenhang wurde dem ersten Patienten eine Dosis von 0,5 mg SD-101 und dem zweiten Patienten eine Dosis von 2,0 mg SD-101 verabreicht. Die Bioproben der Patienten wurden wie folgt entnommen:

- Tag 1 - Zytokine vor der Infusion, PK, ADA, immunologische Korrelate
- Tag 1 - Post-Infusions-PK (15, 30 min, 1, 2, 4, 6 Stunden)
- Tag 8 - Zytokine, immunologische Korrelate Tag 15 - Zytokine vor der Infusion, PK, immunologische Korrelate
- Tag 15 - Post-Infusions-PK (15, 30 min, 1, 2, 4, 6 Stunden)
- Tag 15 - Prä-Infusions-Leberbiopsie
- Tag 15 - Post-Infusions-Leberbiopsie

TS-PERIQ-01 Behandlungszusammenfassungen
Patient 101-001 hat die Sentinel-Kohorte (0,5mg und 2mg SD-101 Dosen) abgeschlossen und war der erste Patient, der SD-101 über PEDD/HAI erhalten hat. Darüber hinaus wurden am Sentinel-Tag 15 Leberbiopsien vor und nach der SD-101-Infusion durchgeführt. Korrelative Blutproben, einschließlich Zytokine, immunologische Korrelate, einschließlich MDSC-Spiegel, PK- und ADA-Proben wurden zu mehreren Zeitpunkten entnommen. Dieser Patient wurde vom Sicherheitsausschuss für den Übergang zu Kohorte A mit der 2mg-Dosis freigegeben. Der Patient hat keine SAEs im Zusammenhang mit SD-101 PEDD HAI erlebt.
Patient 101-002 hat die Sentinel-Kohorte abgeschlossen (0,5mg und 2mg SD-101 Dosen über PEDD/HAI). Darüber hinaus wurden am 15. Sentinel-Tag Leberbiopsien vor und nach der SD-101-Infusion durchgeführt. Korrelative Blutproben, einschließlich Zytokine, immunologische Korrelate, einschließlich MDSC-Werte, PK- und ADA-Proben wurden zu mehreren Zeitpunkten entnommen. Eine Sitzung des Sicherheitskomitees ist anberaumt, um festzustellen, ob der Patient mit der 2mg-Dosis in die Kohorte A wechseln kann. Bei dem Patienten sind keine SAEs im Zusammenhang mit SD-101 aufgetreten.
Das Vorstehende veranschaulicht lediglich die Prinzipien der Offenlegung. Verschiedene Modifikationen und Abänderungen der beschriebenen Ausführungsformen sind für den Fachmann angesichts der hierin enthaltenen Lehren offensichtlich. Der Fachmann wird daher in der Lage sein, zahlreiche Systeme, Anordnungen und Verfahren zu entwickeln, die, obwohl sie hier nicht ausdrücklich gezeigt oder beschrieben sind, die Grundsätze der Offenbarung verkörpern und somit in den Geist und den Anwendungsbereich der Offenbarung fallen können. Verschiedene beispielhafte Ausführungsformen können sowohl zusammen als auch austauschbar verwendet werden, wie es für den Fachmann verständlich sein sollte. Darüber hinaus können bestimmte Begriffe, die in der vorliegenden Offenbarung, einschließlich der Beschreibung, verwendet werden, in bestimmten Fällen synonym verwendet werden, einschließlich, aber nicht beschränkt auf, zum Beispiel, Daten und Informationen. Es sollte verstanden werden, dass, während diese Wörter und/oder andere Wörter, die synonym zueinander sein können, hier synonym verwendet werden können, dass es Fälle geben kann, in denen solche Wörter nicht synonym verwendet werden sollen. Soweit der Stand der Technik nicht ausdrücklich durch Bezugnahme hierin aufgenommen wurde, ist er ausdrücklich in seiner Gesamtheit hierin aufgenommen. Alle Veröffentlichungen, auf die verwiesen wird, sind in ihrer Gesamtheit durch Bezugnahme in diesen Text aufgenommen.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
Diese Liste der vom Anmelder aufgeführten Dokumente wurde automatisiert erzeugt und ist ausschließlich zur besseren Information des Lesers aufgenommen. Die Liste ist nicht Bestandteil der deutschen Patent- bzw. Gebrauchsmusteranmeldung. Das DPMA übernimmt keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
Zitierte Patentliteratur

US 63/081613 [0001]
US 63/115435 [0001]
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US 63/159867 [0001]
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US 9539081 [0073]
US 9808332 [0073]
US 9770319 [0073]
US 9968740 [0073]
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US 2020/0038586 [0073]
US 20200383688 [0073]

Claims

Verfahren zur Behandlung einer Lebermetastase eines Aderhautmelanoms, umfassend die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge eines Agonisten des Toll-like-Rezeptors 9 mit der folgenden Struktur an ein bedürftiges Subjekt 5'-TCG AAC GTT CGA ACG TTC GAA CGT TCG AAT-3' (SEQ ID NO: 1).
Verfahren nach Anspruch 1, wobei der TLR9-Agonist durch eine Vorrichtung durch hepatische arterielle Infusion (HAI) verabreicht wird.
Verfahren nach Anspruch 1, bei dem der TLR9-Agonist über eine Vorrichtung durch Pfortaderinfusion (PVI) verabreicht wird.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei die therapeutisch wirksame Menge des verabreichten TLR9-Agonisten aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 4 mg oder 8 mg besteht.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei der TLR9-Agonist durch eine Kathetervorrichtung verabreicht werden kann.
Verfahren nach Anspruch 5, wobei die Kathetervorrichtung ein Einwegventil umfasst, das dynamisch auf lokale Druckänderungen anspricht.
Verfahren nach Anspruch 5, wobei der TLR9-Agonist durch die Kathetervorrichtung über druckaktivierte Arzneimittelabgabe verabreicht wird.
Verfahren nach Anspruch 7, wobei der TLR9-Agonist mit einer Infusionsrate von etwa 1 cc/min bis etwa 5 cc/min verabreicht wird.
Verfahren nach Anspruch 7, wobei der TLR9-Agonist über einen Zeitraum von etwa 25 Minuten verabreicht wird.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei der TLR9-Agonist in Kombination mit einem oder mehreren Checkpoint-Inhibitoren verabreicht wird, wobei die Checkpoint-Inhibitoren systemisch verabreicht werden, entweder gleichzeitig, vor oder nach der Verabreichung des TLR9-Agonisten.
Verfahren nach Anspruch 10, wobei der eine oder die mehreren Checkpoint-Inhibitoren mindestens einen von Nivolumab, Pembrolizumab und Cemiplimab, Atezolizumab, Avelumab und Durvalumab und Ipilimumab umfassen.
Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Verabreichung des TLR9-Agonisten ein Dosierungsschema umfasst, das Zyklen umfasst, wobei einer oder mehrere der Zyklen die Verabreichung des TLR9-Agonisten über eine Kathetervorrichtung durch hepatische arterielle Infusion gefolgt von der systemischen Verabreichung eines Checkpoint-Inhibitors umfassen.
Verfahren nach Anspruch 10, wobei der eine oder die mehreren Checkpoint-Inhibitoren mindestens einen von Nivolumab, Pembrolizumab und Cemiplimab, Atezolizumab, Avelumab und Durvalumab und Ipilimumab umfassen.