DE10323776A1 - Cleaning station for glass sample slides, especially in a DNA post-hybridizing washing stage, comprises a jet to deliver an air stream at the slide which is saturated with distilled water - Google Patents
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Abstract
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Reinigen von mit chemischen und/oder biologischen Proben wie insbesondere DNA-Proben versehenen Objektträgern als Nachbehandlungsschritt zur Hybridisierung und zu wenigstens einem Post-Hybridisierungswaschschritt der Probe, in welchem die hybridisierte Probe mit einer Waschlösung behandelt wird. Die Erfindung betrifft auch eine Vorrichtung zum Reinigen von mit chemischen und/oder biologischen Proben wie insbesondere DNA-Proben versehenen Objektträgern durch Abblasen mit einem Luftstrom in einem Nachbehandlungsschritt nach der Hybridisierung und nach wenigstens einem Post-Hybridisierungs-Waschschritt der Probe.The Invention relates to a method for cleaning with chemical and / or biological samples such as, in particular, slides provided with DNA samples Post-treatment step for hybridization and at least one Post-hybridization wash step of the sample in which the hybridized Sample with a washing solution is treated. The invention also relates to a device for Cleaning with chemical and / or biological samples such as in particular Slides provided with DNA samples by blowing with an air stream in a post-treatment step after hybridization and after at least one post-hybridization wash step the sample.
Zur Untersuchung von chemischen, gentechnischen oder biologischen Proben wie beispielsweise Gewebeproben, DNA-Sequenzen, Blut, Knochenmark, Fruchtwasser, Zytospinpräparate etc. und zur experimentellen Herbeiführung einer Reaktion zwischen zwei komplementären Nukleinsäureeinzelsträngen unter Bildung eines Nukleinsäuredoppelstrangs wird ein in der Molekularbiologie als Hybridisierung bezeichnetes Verfahren eingesetzt. Insbesondere bekannt ist die Technik der Fluoreszenz In-situ Hybridisierung (FISH), bei der sich Einzelstrang-DNA an komplementäre DNA-Sequenzen spezifisch anlagern. Die Ziel-DNA ist dabei die nukleäre DNA von z.B. Interphasenzellenkernen (Metapha sen), welche auf einem geeigneten Objektträger aufgetragen sind. Das Auftropfen der als Array angeordneten DNA-Stränge erfolgt meist mit Robotern, wobei sich die aufgebrachten DNA-Stränge mit der substratbeschichteten Oberfläche der Objektträger verbinden, so daß die Positionierung des Arrays bekannt ist. Im nächsten Schritt wird die Ziel-DNA mit den vorbereiteten Objektträgern in einem Hybridisierungsschritt bei einer Hybridisierungsdauer von etwa 4 bis 16 h verbunden. Anschließend erfolgen wenigstens ein, häufig 3 bis 6 Post-Hybridisierungs-Waschschritte mit z.B. Saline-Sodium-Citrate (SCC), Formamyd oder Formalyd-haltigen Waschlösungen zum Auswaschen ungebundener DNA-Stränge, damit nur fest gebundene und angekettete DNA auf dem Objektträger verbleibt. Bevor nun der Objektträger einer Untersuchung z.B. mit einem geeigneten Mikroskop unterzogen wird, wird er im Stand der Technik getrocknet, wobei dafür Sorge getragen werden muß, daß vor dem Trocknungsprozeß alle Waschlösungen vom Objektträger rückstandslos entfernt werden. Rückstände der meist stark salzhaltigen Waschlösung kann das Untersuchungsergebnis verfälschen.to Examination of chemical, genetic engineering or biological samples such as tissue samples, DNA sequences, blood, bone marrow, Amniotic fluid, cytospin preparations etc. and to experimentally induce a reaction between two complementary Single nucleic acid strands below Formation of a nucleic acid duplex is what is called hybridization in molecular biology Process used. The technique of fluorescence in situ is particularly known Hybridization (FISH), in which single-stranded DNA is specific to complementary DNA sequences attach. The target DNA is the nuclear DNA of e.g. Interphase cells cores (Metapha sen), which are applied to a suitable slide are. The DNA strands arranged as an array are dripped on mostly with robots, with the applied DNA strands themselves the substrate-coated surface connect the slide, So that the Positioning the array is known. The next step is the target DNA with the prepared slides in a hybridization step with a hybridization time of connected for about 4 to 16 h. Then at least one frequently 3 to 6 post hybridization washes with e.g. Saline sodium citrate (SCC), formamide or formaldehyde-containing Washing solutions for Washing out unbound DNA strands, so that only firmly bound and chained DNA remains on the slide. Before the slide an examination e.g. subjected with a suitable microscope is dried in the prior art, taking care must be worn that before the drying process all washing solutions from slides residue be removed. Residues of usually highly saline washing solution can falsify the test result.
Bisher ist bekannt, die Objektträger mit einem Luftstrom mit Druckluft von etwa 1 bar abzublasen. Hierbei werden die Objektträger teilweise senkrecht angeordnet, um das Abblasen zu verbessern. Außerdem ist bekannt, innerhalb oder außerhalb der Hybridisierungskammer mit anderen Gasen wie z.B. Stickstoff durch Verdrängungs- oder Verdunstungsabblasen eine Trocknung zu erreichen.So far is known the slide blow off with an air stream with compressed air of about 1 bar. in this connection become the slides partially arranged vertically to improve the blow-off. Besides, is known, inside or outside the hybridization chamber with other gases such as nitrogen through displacement or evaporative blowing to achieve drying.
Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren und eine Vorrichtung zu schaffen, mit der eine auch automatisierbare Nachreinigung der Objektträger ermöglicht wird, ohne daß das Meßergebnisse durch den Trocknungsprozess verfälscht wird.task the invention is to provide a method and a device which also enables automated cleaning of the slides, without that Measurement results falsified by the drying process becomes.
Diese Aufgabe wird hinsichtlich des Verfahrens dadurch gelöst, daß der Nachbehandlungsschritt ein Abblasen der Objektträger mit einem feuchten oder vorzugsweise mit einem nassen Luftstrom umfaßt. Überraschend hat sich gezeigt, daß es im Nachbehandlungsschritt der Post-Hybridisierungs-Waschschritte nicht erforderlich ist, eine unmittelbare Trocknung zu erzielen, sondern daß demgegenüber ein Abblasen mit feuchter oder insbesondere nasser Luft zu einer ausreichenden Nachreinigung der Objektträger und hybridisierten Proben führt.This With regard to the method, the object is achieved in that the aftertreatment step blowing off the slides with a moist or preferably with a wet air stream includes. Surprised has been shown that in Post-treatment post-hybridization wash steps not is necessary to achieve immediate drying, but that in contrast a Blow off with moist or especially wet air to a sufficient level Post-cleaning of the slides and hybridized samples.
Der Luftstrom wird vorzugsweise mit destilliertem Wasser gesättigt, insbesondere übersättigt, so daß das Abblasen mit einem nassen, insbesondere auch kondensierte Wassertropfen enthaltenden Luftstrom erfolgt. Ein Sättigungsgrad von etwa 0,6 oder ein höherer Sättigungsgrad bis zu einschließlich 1 kann sich als besonders vorteilhaft erweisen. Der Luftstrom besteht insbesondere aus einem Druckluftstrom. Der Druckluftstrom hat vorzugsweise einen mittleren Druck von etwa 1 bis 6 bar, vorzugsweise etwa 3 bis 5 bar, insbesondere etwa 4 bar hat. Der Objektträger wird vorzugsweise mit dem Luftstrom in einem Winkel von etwa 10° bis 90° angeströmt. Günstig ist insbesondere, wenn der Objektträger relativ zu einer Abblasdüse für den Luftstrom bewegt wird. Alternativ kann auch die Abblasdüse relativ zum Objektträger bewegt werden.The Air flow is preferably saturated with distilled water, especially oversaturated, so that this Blow off with a wet, especially condensed water drop containing airflow takes place. A degree of saturation of about 0.6 or a higher one saturation up to and including 1 can prove to be particularly advantageous. The airflow is there especially from a stream of compressed air. The compressed air stream preferably has an average pressure of about 1 to 6 bar, preferably about 3 up to 5 bar, in particular about 4 bar. The slide will preferably flowed with the air stream at an angle of about 10 ° to 90 °. Is cheap especially if the slide relative to a blow-off nozzle for the Airflow is moved. Alternatively, the blow-off nozzle can also be relative to the slide be moved.
Weiter vorzugsweise kann die Abblasdüse einen Austrittsschlitz, insbesondere einen Breitschlitz als Austritt zur gleichzeitigen Nachbehandlung mehrere Objektträger aufweisen. Alternativ kann die Abblasdüse auch punktuelle Austrittsöffnungen aufweisen. Zur Anfeuchtung des Luft- bzw. Druckluftstromes ist besonders vorteilhaft, wenn der Luftstrom durch eine Befeuchtungseinrichtung hindurchgeführt wird, in der der Luftstrom mit destilliertem Wasser angereichert, gesättigt oder ggf. übersättigt wird. Die Befeuchtungseinrichtung kann einen mit einer radialen Öffnung versehenen Strömungskanal aufweisen, wobei über die radiale Öffnung destilliertes Wasser zur Befeuchtung des Luftstroms angesaugt wird. Eine derartige Befeuchtungseinrichtung arbeitet mithin nach dem Venturi-Prinzip, wobei in einem verengten, mit der Wasserzufuhr verbundenen Strömungsquerschnitt die Wasserpartikel mit dem Luftstrom mitgerissen werden.Further preferably the blow-off nozzle can Exit slot, in particular a wide slot as an exit to have multiple slides at the same time. Alternatively, you can the blow-off nozzle also selective openings exhibit. To humidify the air or compressed air flow is special advantageous if the air flow through a humidifier is passed through in which the air flow is enriched, saturated or distilled water may become over-saturated. The moistening device can be provided with a radial opening flow channel have, with about the radial opening distilled water is drawn in to humidify the air flow. A Such humidification device therefore works on the Venturi principle, wherein in a narrow flow cross-section connected to the water supply the water particles are carried away with the air flow.
Die vorgenannte Aufgabe wird auch mit einer Vorrichtung zum Reinigen von mit chemischen und/oder biologischen Proben wie insbesondere DNA-Proben versehenen Objektträgern durch Abblasen mit einem Luftstrom in einem Nachbehandlungsschritt nach der Hybridisierung und nach wenigstens einem Post-Hybridisierungs-Waschschritt der Probe, gelöst, wobei die Vorrichtung eine Befeuchtungseinrichtung aufweist, in der der Luftstrom mit destilliertem Wasser zu einem feuchten oder vorzugsweise nassen Luftstrom anreicherbar ist.The aforementioned task is also with a device for cleaning of with chemical and / or biological samples such as in particular DNA samples provided slides by blowing with an air stream in a post-treatment step after hybridization and after at least one post-hybridization wash step the sample, solved, wherein the device has a moistening device, in which the air flow with distilled water to a damp or preferably wet air flow can be enriched.
Vorzugsweise ist der Vorrichtung ein Drucklufterzeuger zur Erzeugung eines Druckluftstromes zugeordnet und/oder die Befeuchtungseinrichtung weist einen mit einer radialen Öffnung versehenen, vorzugsweise mit einer Verengung versehenen Strömungskanal aufweist, wobei an die insbesondere im Bereich der Verengung angeordnete radiale Öffnung ein Verbindungsrohr angeschlossen ist, daß in einen Behälter für destilliertes Wasser eintaucht. Zweckmäßigerweise kann der Behälter vorzugsweise unmittelbar unterhalb des Strömungskanals angeordnet sein. Die Vorrichtung kann eine Abblasdüse für den feuchten oder vorzugsweise nassen Luftstrom aufweisen, wobei die Abblasdüse insbesondere mit einem Austrittsschlitz, einem Breitschlitz als Austritt zur gleichzeitigen Reinigung mehrere Objektträger oder mitpunktuellen Austrittsöffnungen versehen sein kann.Preferably the device is assigned a compressed air generator for generating a compressed air flow and / or the moistening device preferably has one provided with a radial opening having a narrowed flow channel, wherein to the radial opening arranged in particular in the area of the constriction Connection tube is connected that in a container for distilled Water immersed. Conveniently, can the container preferably be arranged immediately below the flow channel. The Device can be a blow-off nozzle for the have moist or preferably wet air flow, the Blow Off especially with an exit slot, a wide slot as Discharge for cleaning several slides or with selective openings can be provided.
Besonders günstig ist, wenn die Abblasdüse in einem Winkel von etwa 10° bis 90° relativ zur Ebene der Objektträger angeordnet ist. Die Objektträger oder die Abblasdüse können relativ zueinander bewegt werden, um die Endreinigung mit dem feuchten bzw. nassen Luftstrom gleichmäßig und schnell über die Länge des Objektträgers durchführen zu können. Die Objektträger können insbesondere aus Glas bestehen und z.B. als Glas-Slides ausgebildet sein.Especially Cheap is when the blow-off nozzle is in an angle of about 10 ° to 90 ° relative to the slide level is arranged. The slides or the blow-off nozzle can be moved relative to each other to complete the cleaning with the damp or wet air flow evenly and quickly over the Length of slide carry out to be able to. The slides can consist in particular of glass and e.g. designed as glass slides his.
Die Erfindung wird nun anhand eines in der Zeichnung schematisch dargestellten Ausführungsbeispiels erläutert.The Invention is now shown schematically in the drawing embodiment explained.
In
der einzigen Fig. ist mit insgesamt 10 eine nur schematisch angedeutete
Vorrichtung dargestellt, mit der die aus länglichen, rechteckförmigen Glas-Slides
bestehenden Objektträger
Die
Objektträger
Die
Abblaßdüse bzw.
Auslaßdüse
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