DE102019214130A1

DE102019214130A1 - Chromatograph und quantitative Bestimmungsmethode mittels Chromatographie

Info

Publication number: DE102019214130A1
Application number: DE102019214130.7A
Authority: DE
Inventors: Masato Fukuda; Masahito Ito; Naoki Sugimoto
Original assignee: Hitachi High Tech Science Corp
Current assignee: Hitachi High Tech Science Corp
Priority date: 2018-09-26
Filing date: 2019-09-17
Publication date: 2020-03-26
Also published as: JP7246680B2; JP2020051827A; CN110954637B; CN110954637A

Abstract

[Problem]Bereitstellung eines Chromatographen und eines quantitativen Bestimmungsverfahren mittels Chromatographie, bei dem der Arbeitsgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz hinzuzufügen, nicht erforderlich ist, auch wenn eine auf der Methode mit internem Standard basierende Kalibrierungskurve verwendet wird, und das gleichzeitig die Messung vereinfacht und eine Abnahme der quantitativen Genauigkeit verhindert.[Mittel zur Lösung der Probleme]Der Chromatograph 100 zur quantitativen Bestimmung eines bestimmten Messobjekts X, der mit einer Steuereinheit 9 und einer Speichereinheit 8 ausgerüstet ist, wobei die Speichereinheit die Daten der Kalibrierungskurve CAL1 und CAL2 basierend auf der Methode mit internem Standard speichert, die das Intensitätsverhältnis der Intensität des Messobjekts und der Intensität des oben genannten internen Standards enthalten, wobei die internen Standards a und b in bestimmten Konzentrationen zu dem Messobjekt zugegeben werden müssen, und die Steuereinheit, wenn die Chromatogramme CRa, CRb und CRc der QC-Probe, die den internen Standard in bestimmter Konzentration enthält, und das Chromatogramm der unbekannten Probe, die das Messobjekt X in nicht bekannter Konzentration enthält aber keinen Standard enthält, gemessen worden sind, aus der Intensität des internen Standards der QC-Probe und der Intensität des Messobjekts der unbekannten Probe die Intensitätsverhältnisse Xn/a und Xn/b berechnet und auf der Grundlage der Kalibrierungskurven die quantitative Bestimmung des Messobjekts in der unbekannten Probe durchführt.

Description

[Technisches Gebiet]
Die vorliegende Erfindung betrifft Chromatographen wie Flüssigchromatographen und Gaschromatographen sowie quantitative Bestimmungsmethoden mittels Chromatographie.
[Stand der Technik]
Bislang sind für die quantitative Analyse mittels Chromatographie wie Flüssigchromatographie (HPLC) usw. Verfahren mit externem Standard und Verfahren mit internem Standard bekannt. Von diesen verhindert das Verfahren mit internem Standard Fehler, die aufgrund täglicher Änderungen der chromatographischen Empfindlichkeit und der Bedingungen, Schwankungen der Probeninjektionsmenge, Verflüchtigung des Lösungsmittels und dergleichen auftreten können, und weist eine höhere Messgenauigkeit als das Verfahren mit externem Standard auf.
Darüber hinaus definiert JISK0214:2013 Begriffe, die im Zusammenhang mit der Chromatographie stehen.
Bei diesem Verfahren mit internem Standard wird eine Probe, die eine Eichsubstanz mit bekannter Konzentration und eine (interne) Standardsubstanz in einer bestimmten Konzentration enthält, bei verschiedenen Konzentrationen der Eichsubstanz gemessen und aus dem Verhältnis zwischen der Intensität der Eichsubstanz und der Intensität des internen Standards eine Kalibrierungskurve erhalten, die den Zusammenhang mit der Konzentration der Eichsubstanz als lineare Funktion zeigt, und mit dieser Kalibrierungskurve wird eine quantitative Bestimmung der unbekannten Probe durchgeführt. (Patentdokument 1).
[Literatur zum Stand der Technik]
[Patentdokumente]
[Patentdokument 1] JP S 61-52301
[Zusammenfassung der Erfindung]
[Durch die Erfindung zu lösende Probleme]
Es ist übrigens bei dem Verfahren mit internem Standard erforderlich, der Probe auch bei der Messung einer unbekannten Probe eine Standardsubstanz einer bestimmten Konzentration zuzusetzen, dabei besteht jedoch das Problem, dass das Abwiegen einer Standardsubstanz in einer bestimmten Konzentration umständlich ist und Geschicklichkeit erfordert, und dass ungenaues Abwiegen der Standardsubstanz die Genauigkeit der Gehaltsbestimmung verringert.
Daher ist es das Ziel der vorliegenden Erfindung, die oben genannten Probleme zu lösen und einen Chromatographen und eine quantitative Bestimmungsmethode mittels Chromatographie bereitzustellen, bei denen der Arbeitsvorgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zuzusetzen, nicht erforderlich ist, auch wenn eine auf der Methode mit internem Standard basierende Kalibrierungskurve verwendet wird, und die eine vereinfachte Messung möglich macht und verhindert, dass die Messgenauigkeit abnimmt.
[Mittel zur Lösung der Probleme]
Um das oben genannte Ziel zu erreichen, ist der Chromatograph der vorliegenden Erfindung, der zur quantitativen Bestimmung bestimmter Messobjekte eingesetzt wird, mit einer Steuereinheit und einer Speichereinheit ausgerüstet, wobei die oben genannte Speichereinheit die Daten einer Kalibrierungskurve speichert, die auf der Methode mit internem Standard basieren und die das Intensitätsverhältnis der Intensität der oben genannten Messobjekte und der Intensität des oben genannten internen Standards enthalten, wobei der oben genannte interne Standard in bestimmten Konzentrationen zu dem oben genannten Messobjekt zugegeben werden muss, und wenn ein Chromatogramm einer QC-Probe, die die oben genannte bestimmte Konzentration des oben genannten internen Standard enthält und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die das oben genannte Messobjekt in unbekannter Konzentration und keinen internen Standard enthält, gemessen worden ist, berechnet die oben genannte Steuereinheit aus der Intensität des oben genannten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe das Intensitätsverhältnis und führt eine quantitative Bestimmung des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe auf Basis der oben genannten Kalibrierungskurve durch.
Mit diesem Chromatographen ist es möglich, eine quantitative Bestimmung durchzuführen, ohne dass der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zugegeben wird, auch wenn eine auf der Methode mit internem Standard basierende Kalibrierungskurve verwendet wird. Aus diesem Grund ist ein komplizierter und Geschicklichkeit erfordernder Vorgang zum Abwiegen einer bestimmten Konzentration der Standardsubstanz für die unbekannte Probe nicht erforderlich, und es kann verhindert werden, dass Fehler beim Abwiegen der Standardsubstanz die Genauigkeit der Gehaltsbestimmung verringern. Und dadurch, dass der Arbeitsvorgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zuzusetzen, nicht erforderlich ist, kann die Messung vereinfacht und eine Abnahme der quantitativen Genauigkeit verhindert werden.
In dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung speichert die oben genannte Speichereinheit die Diagnosekriterien, die auf der Wellenform oder der Intensität eines Standardchromatogramms basieren, das den oben genannten internen Standard in der oben genannten bestimmten Konzentration enthält, und die oben genannte Steuereinheit kann basierend auf den oben genannten Diagnosekriterien in Bezug auf die Wellenform oder Intensität des Chromatogramms der oben genannten QC-Probe beurteilen, ob die oben genannte unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht.
Die Durchführung der quantitativen Bestimmung einer unbekannten Probe ohne Zugabe einer Standardsubstanz basiert auf der Voraussetzung, dass die Streuung der Messwerte bei normaler Kontrolle und Wartung in einem kleinen Bereich liegt. Daher wird vor der Messung der unbekannten Probe das Chromatogramm einer QC-Probe angefertigt, und man betrachtet die Intensität ihres internen Standards als dieselbe wie die Intensität des internen Standards in der unbekannten Probe in dem Fall, dass man angenommen hat, dass der interne Standard zu der unbekannten Probe zugegeben wurde. Demzufolge erhält man falsche Messergebnisse, wenn man dieses Verfahren in dem Fall verwendet, dass sich der Zustand des Chromatographen verschlechtert hat und die Streuung der Messwerte größer geworden ist.
Daher ist es bei diesem Chromatographen möglich, fehlerhafte Messungen zu verhindern, indem der Zustand des Chromatographen im Voraus diagnostiziert und die quantitative Bestimmung der unbekannten Probe dann durchgeführt wird, wenn der Gerätezustand als normal angesehen wird.
In dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung speichert die oben genannte Speichereinheit die Daten einer zusätzlichen Kalibrierungskurve basierend auf der Methode mit internem Standard, für die man einem zusätzlichen Messobjekt, das sich von dem oben genannten Messobjekt unterscheidet, den oben genannten internen Standard in der oben genannten bestimmten Konzentration zugeben muss, und die das Intensitätsverhältnis der Intensität des oben genannten zusätzlichen Messobjekts und der Intensität des oben genannten internen Standards enthält, wobei bei den Daten der Kalibrierungskurve die Intensität des oben genannten internen Standards in den Daten der oben genannten zusätzlichen Kalibrierungskurve durch das Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1) aus der Intensität A2 des oben genannten internen Standards in der oben genannten bestimmten Konzentration, wenn das oben genannte zusätzliche Messobjekt gleichzeitig anwesend ist, und der Intensität A1 des oben genannten internen Standards der oben genannten Konzentration, wenn das oben genannte Messobjekt in der gleichen Konzentration wie das oben genannte zusätzliche Messobjekt gleichzeitig anwesend ist, korrigiert worden ist, und die oben genannte QC-Probe enthält außerdem das oben genannte Messobjekt in bekannter Konzentration, und im Fall, dass das oben genannte zusätzliche Messobjekt quantitativ bestimmt wird, wird das Chromatogramm der oben genannten QC-Probe gemessen, und wenn die oben genannte Steuereinheit auf Basis der oben genannten Diagnosekriterien die Messung der oben genannten unbekannten Probe freigegeben hat, kann die oben genannte Steuereinheit basierend auf den Daten der oben genannten korrigierten Kalibrierungskurve das oben genannte zusätzliche Messobjekt in einer zweiten unbekannten Probe, die das zusätzliche Messobjekt in unbekannter Konzentration enthält und den internen Standard nicht enthält, quantitativ bestimmen.
Wenn ein zusätzliches Messobjekt quantitativ bestimmt wird, das sich vom Messobjekt unterscheidet, kann dies normalerweise auf die gleiche Weise erfolgen wie das Messen des Chromatogramms der QC-Probe und des Chromatogramms der unbekannten Probe, wenn eine Kalibrierungskurve ähnlich der des Messobjekts gespeichert wird.
Andererseits verbessert sich die Untersuchungsgenauigkeit des Chromatographen, wenn QC-Proben, die das Messobjekt enthalten, bei der quantitativen Bestimmung des Messobjekts als QC-Proben verwendet werden, wenn jedoch diese QC-Proben auch für die quantitative Bestimmung des zusätzlichen Messobjekts verwendet werden, kann die Messgenauigkeit des zusätzlichen Messobjekts abnehmen. Aber es besteht der Wunsch, die QC-Proben, die das Messobjekt enthalten, für alle Messungen (Messung der zusätzlichen Messobjekte) zu verwenden, weil die Verarbeitbarkeit abnimmt, wenn man für jedes zusätzliche Messobjekt eine QC-Probe vorbereitet.
Daher werden die Daten der Kalibrierungskurven basierend auf der Methode mit internem Standard für die zusätzlichen Messobjekte, die mit dem Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1) korrigiert worden sind, als Daten einer zusätzlichen Kalibrierungskurve gespeichert. Auf diese Weise kann durch quantitative Bestimmung des zusätzlichen Messobjekts unter Verwendung der Daten dieser korrigierten Kalibrierungskurve das zusätzliche Messobjekt genau quantitativ bestimmt werden, selbst wenn die QC-Probe, die das Messobjekt enthält, auch bei der quantitativen Bestimmung des zusätzlichen Messobjekts verwendet wird.
Bei dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung umfasst der interne Standard mindestens zwei Arten, den ersten internen Standard und den zweiten internen Standard, deren Peaks im Chromatogramm vor und nach dem Peak des oben genannten Messobjekts erscheinen. Die oben genannten Daten der Kalibrierungskurven enthalten mindestens die Daten der ersten Kalibrierungskurve und die Daten der zweiten Kalibrierungskurve, die jeweils dem ersten internen Standard und dem zweiten internen Standard entsprechen, und die oben genannte Steuereinheit kann, wenn das oben genannte Messobjekt der oben genannten unbekannten Probe quantitativ bestimmt wird, aus dem Intensitätsverhältnis des ersten internen Standards und dem Intensitätsverhältnis des zweiten internen Standards, das aus der Intensität des oben genannten ersten internen Standards und des oben genannten zweiten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe berechnet worden ist, unter Bezug auf die Daten der oben genannten ersten Kalibrierungskurve und die Daten der oben genannten zweiten Kalibrierungskurve die oben genannten Messobjekte separat quantitativ bestimmen und den Mittelwert dieser quantitativen Werte ermitteln.
Gemäß diesem Chromatographen wird die Messgenauigkeit erhöht, weil der interne Standard mindestens zwei Arten, den ersten internen Standard und den zweiten internen Standard, umfasst, deren Peaks im Chromatogramm jeweils vor und nach dem Peak des oben genannten Messobjekts erscheinen.
In dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung enthalten die oben genannten Diagnosekriterien den ersten Schwellenwert der Verbreiterung der Wellenform des oben genannten Standardchromatogramms, und die oben genannte Steuereinheit kann beurteilen, dass die Messung der oben genannten unbekannten Probe nicht möglich ist, wenn die Verbreiterung der Wellenform der oben genannten QC-Probe den oben genannten ersten Schwellenwert überschreitet.
Gemäß diesem Chromatographen kann auf der Grundlage der Verbreiterung der Wellenform im Chromatogramm der QC-Probe genau beurteilt werden, ob die Messung der unbekannten Probe möglich ist oder nicht.
In dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung enthalten die oben genannten Diagnosekriterien einen zweiten Schwellenwert der Intensität des oben genannten Standardchromatographen, und die oben genannte Steuereinheit kann beurteilen, ob die Messung der oben genannten unbekannten Probe möglich ist oder nicht, wenn die Intensität des Chromatogramms der oben genannten QC-Probe unterhalb des oben genannten zweiten Schwellenwertes liegt.
Bei diesem Chromatographen kann auf der Grundlage der Intensität des Standardchromatogramms genau beurteilt werden, ob die Messung der unbekannten Probe möglich ist oder nicht.
Bei der quantitativen Bestimmungsmethode mittels Chromatographie der vorliegenden Erfindung handelt es sich um ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung mittels Chromatographie, bei dem ein bestimmtes Messobjekt quantitativ bestimmt wird, wobei vorab die Daten einer Kalibrierungskurve basierend auf der Methode mit internem Standard, die das Intensitätsverhältnis der Intensität der oben genannten Messobjekte und der Intensität des oben genannten internen Standards enthalten, gespeichert werden, wobei der oben genannte interne Standard in bestimmten Konzentrationen zu dem oben genannten Messobjekt zugegeben werden muss, und wenn ein Chromatogramm einer QC-Probe, die die oben genannte bestimmte Konzentration des oben genannten internen Standards enthält, und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die das oben genannte Messobjekt in unbekannter Konzentration und keinen internen Standard enthält, gemessen worden ist, wird aus der Intensität des oben genannten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe das Intensitätsverhältnis berechnet und eine quantitative Bestimmung des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe auf Basis der oben genannten Kalibrierungskurve durchgeführt.
[Wirkung der Erfindung]
Bei der vorliegenden Erfindung ist mit der quantitativen Bestimmungsmethode mittels Chromatographie der Arbeitsvorgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zuzusetzen, nicht erforderlich, auch wenn eine Kalibrierungskurve basierend auf der Methode mit internem Standard verwendet wird, und sie macht eine vereinfachte Messung möglich und kann verhindern, dass die Messgenauigkeit abnimmt.
Figurenliste

[ ] zeigt den Aufbau eines Flüssigchromatographen (Gerät) gemäß der Ausführungsform der vorliegenden Erfindung.
[ ] zeigt die Aufbereitung der auf der Methode mit internem Standard basierenden Daten der Kalibrierungskurven
[ ] zeigt die auf der Methode mit internem Standard basierenden Daten der Kalibrierungskurven
[ ] zeigt ein Chromatogramm einer QC-Probe, die einen internen Standard enthält, und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die ein Messobjekt in unbekannter Konzentration aber keinen internen Standard enthält
[ ] zeigt das Verfahren zur quantitativen Bestimmung des Messobjekts in der unbekannten Probe an Hand der Daten der Kalibrierungskurven
[ ] zeigt ein Standardchromatogramm für die Diagnosekriterien und ein Chromatogramm einer QC-Probe
[ ] zeigt die Diagnosekriterien (Tabelle)
[ ] zeigt den Zustand, bei dem sich die Peakintensität des internen Standards geändert hat, als das Messobjekt Y zusammen mit dem internen Standard vorlag
[ ] zeigt die Daten der Kalibrierungskurven, die mittels des Intensitätsverhältnisses des internen Standards korrigiert wurden

[Ausführungsart der Erfindung]
Nachfolgend werden Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung unter Bezugnahme auf die Zeichnungen beschrieben.
zeigt den Aufbau des Flüssigchromatographen 100 gemäß der Ausführungsform der vorliegenden Erfindung.
Der Flüssigchromatograph 100 dient zur quantitativen Bestimmung bestimmter Messobjekte. Er enthält ein Datenverarbeitungsgerät (Steuereinheit) 7 zur Steuerung des gesamten Gerätes, eine mobile Phase (eine Mischung aus Eluent und Lösungsmittel) 1, eine Pumpe 2 für die Zuführung der mobilen Phase 1, einen Autosampler 3 zum Injizieren der Proben, eine Säule 4 zur Trennung der Komponenten, einen Säulenofen 5, der die Säule 4 auf einer konstanten Temperatur hält, einen Detektor 6 zum Erfassen der getrennten Komponenten und eine Anzeigeeinheit 10.
Die Datenverarbeitungseinheit 7 besteht aus einem Computer, der eine Steuereinheit (CPU) 9, die die Analyse ausführt und die Analyseergebnisse analysiert, und eine Speichereinheit 8 (Festplatte oder dergleichen) enthält, die die Analysenergebnisse speichert. Die Anzeigeeinheit 10 (Monitor) zeigt die Analysenergebnisse an.
Der Detektor 6 ist ein dreidimensionaler Detektor mit mehreren Komponenten zum Erfassen der Signalintensität und er ist in der Lage, gleichzeitig die Signalintensität in Bezug auf die Zeit bei mehreren Wellenlängen zu erfassen.
Die Probe wird von einem Injektor (hier nicht abgebildet) des Autosamplers 3 injiziert, durchläuft die Säule 4 zusammen mit der mobilen Phase 1, die von der Pumpe 2 zugeführt wird, und wird in die verschiedenen in der Probe enthaltenen Komponenten aufgetrennt.
Die in Komponenten aufgetrennte Probe wird vom Detektor 6 detektiert. Das Signal des Detektors 6 wird zur Verarbeitung der Daten an die Datenverarbeitungseinrichtung 7 gesendet.
Die Säule 4 ist ein Gerät, das allgemein als Trenneinheit verwendet wird, um die in der mobilen Phase 1 vorhandenen Bestandteile der Probe zu trennen. Sie umfassen zum Beispiel gepackte Säulen oder Monolithsäulen und andere. Als Packmittel für die Säule 4 können Stoffe verschiedenen Typs wie solche vom Adsorptionstyp, Verteilungstyp und lonenaustauschtyp verwendet werden. Die Säule 4 sollte in einem Säulenofen 5 installiert sein, damit die Säule 4 auf einer konstanten Temperatur gehalten und die Probe reproduzierbar getrennt werden kann.
Um das Messobjekt quantitativ zu bestimmen, speichert die Speichereinheit 8 die auf der Methode mit internem Standard basierenden Daten der Kalibrierungskurve, die das Intensitätsverhältnis der Intensität der Messobjekte und der Intensität des internen Standards enthalten. Die Daten der Kalibrierungskurven können durch die übliche Methode mit internem Standard erhalten werden, wie es zum Beispiel in den und gezeigt ist.
Zunächst wird, wie in gezeigt, das Messobjekt mit einer bekannten Konzentration durch STD-X (Standardprobe) wiedergegeben, wenn X das Messobjekt ist. Dann werden die internen Standards a und b in bestimmter Konzentration zu STD-X hinzugefügt und die Chromatogramme angefertigt. Dabei wird die Konzentration des Messobjekts X verändert und mit den verschiedenen Konzentrationen X₁ , X₂ , X₃ jeweils ein Chromatogramm angefertigt.
Dabei erscheinen die Peaks der internen Standards a und b jeweils vor und nach dem Peak im Chromatogramm des Messobjekts X. Die internen Standards a und b entsprechen in den Patentansprüchen jeweils dem „ersten internen Standard“ und dem „zweiten internen Standard“.
Als nächstes wird, wie in dargestellt ist, das Intensitätsverhältnis (STD/a) jeder Intensität der Messobjekte STD-X₁ , STD-X₂ und STD-X₃ , deren Konzentration bekannt ist, und der Intensität des internen Standards a an der vertikalen Achse in Abhängigkeit von dem internen Standard a abgetragen. Alle Konzentrationen Conc der Messobjekte STD-X₁ , STD-X₂ und STD-X₃ werden an der horizontalen Achse abgetragen und so die Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL1, die die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts X darstellen, in Form einer linearen Funktion erhalten.
Auf die gleiche Weise werden für den internen Standard b, wie in dargestellt ist, das Intensitätsverhältnis (STD/b) jeder Intensität der Messobjekte STD-X₁ , STD-X₂ und STD-X₃ , deren Konzentration bekannt ist, und der Intensität des internen Standards b an der vertikalen Achse abgetragen. Alle Konzentrationen Conc der Messobjekte STD-X₁ , STD-X₂ und STD-X₃ werden an der horizontalen Achse abgetragen und so die Daten der zweiten Kalibrierungskurve CAL2, die die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts X darstellen, in Form einer linearen Funktion erhalten.
Dabei ist zu beachten, dass die Daten der Kalibrierungskurven nicht auf eine lineare Funktion beschränkt sind, sondern auch eine Tabelle, eine angenäherte Kurve oder dergleichen sein können, solange sie die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts wiedergeben.
Als nächstes wird ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung eines Messobjekts durch Anfertigung eines Chromatogramms einer unbekannten Probe, die das Messobjekt in einer unbekannten Konzentration enthält, unter Bezugnahme auf die und erläutert.
Zunächst wird, wie in dargestellt ist, ein Chromatogramm der QC-Probe angefertigt, das die gleichen Konzentrationen der internen Standards a und b enthält wie die internen Standards a und b bei der Erstellung der Daten der Kalibrierungskurven (Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL1 und Daten der zweiten Kalibrierungskurve CAL2) in den und .
Als nächstes wird, wie in gezeigt, ein Chromatogramm einer unbekannten Probe angefertigt, die das Messobjekt Xn in unbekannter Konzentration, die internen Standards a und b jedoch nicht enthält.
Dann berechnet die Steuereinheit 9, wie in dargestellt ist, aus der Intensität des ersten internen Standards a der QC-Probe und der Intensität des Messobjekts Xn der unbekannten Probe das erste Intensitätsverhältnis Xn/a, und ermittelt aus dem ersten Intensitätsverhältnis Xn/a basierend auf den Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL1 die Konzentration Conc1 des Messobjekts Xn. Auf die gleiche Weise berechnet die Steuereinheit 9 aus der Intensität des zweiten internen Standards b der QC-Probe und der Intensität des Messobjekts Xn der unbekannten Probe das zweite Intensitätsverhältnis Xn/b, und ermittelt aus dem zweiten Intensitätsverhältnis Xn/b basierend auf den Daten der zweiten Kalibrierungskurve CAL2 die Konzentration Conc2 des Messobjekts Xn.
Als Nächstes ermittelt die Steuereinheit 9 aus den Konzentrationen Conc1 und Conc2 den Mittelwert Conc Xn = (Conc1 + Conc2) / 2, um die Konzentration des Messobjekts Xn zu bestimmen. Auf diese Weise führt die Steuereinheit 9 die quantitative Bestimmung des Messobjekts Xn der unbekannten Probe durch.
Idealerweise ist Conc1 = Conc2, weil aber aufgrund des Einflusses verschiedener Verunreinigungen und dergleichen Conc1 und Conc2, die durch die Kalibrierungskurve berechnet wurden, möglicherweise nicht gleich sind, wird die Genauigkeit der quantitativen Bestimmung verbessert, wenn man den Mittelwert Conc Xn ermittelt.
Der Mittelwert Conc Xn wird dann verwendet, wenn zwei oder mehr interne Standards vorhanden sind. Wenn nur ein interner Standard vorhanden ist, ist keine Mittelwertbildung erforderlich, und es kann auf eine einzelne Kalibrierungskurve Bezug genommen werden.
Auf diese Weise kann auch dann, wenn eine auf der Methode mit internem Standard basierende Kalibrierungskurve verwendet wird, eine quantitative Bestimmung durchgeführt werden, ohne dass der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zugesetzt wird. Aus diesem Grund ist ein komplizierter und Geschicklichkeit erfordernder Vorgang zum Abwiegen einer bestimmten Konzentration der Standardsubstanz für die unbekannte Probe nicht erforderlich, so dass verhindert werden kann, dass Fehler beim Abwiegen der Standardsubstanz die Genauigkeit der Gehaltsbestimmung verringert. Und dadurch, dass der Arbeitsgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zuzusetzen, nicht erforderlich ist, kann die Messung vereinfacht und eine Abnahme der quantitativen Genauigkeit verhindert werden.
Die Durchführung der quantitativen Bestimmung einer unbekannten Probe ohne Zugabe einer Standardsubstanz basiert auf der Voraussetzung, dass aufgrund der Fortschritte in der Flüssigkeitschromatographie die Streuung der Messungen bei normaler Kontrolle und Wartung in einem kleinen Bereich liegt. Daher wird vor der Messung der unbekannten Probe das Chromatogramm der in gezeigten QC-Probe angefertigt, und man betrachtet die Intensität ihres internen Standards als dieselbe wie die Intensität des internen Standards in der unbekannten Probe in dem Fall, dass man angenommen hat, dass der interne Standard zu der unbekannten Probe hinzugefügt wurde.
Demzufolge erhält man falsche Messergebnisse, wenn man dieses Verfahren in dem Fall verwendet, dass sich der Zustand des Flüssigchromatographen verschlechtert hat und die Streuung der Messwerte größer geworden ist.
Daher ist es bevorzugt, dass der Zustand des Flüssigkeitschromatographen 100 im Voraus diagnostiziert wird und die quantitative Bestimmung der unbekannten Probe dann durchgeführt wird, wenn der Gerätezustand als normal angesehen wird.
Diese Diagnose kann beispielsweise wie in den und angegeben durchgeführt werden. Zunächst speichert die Speichereinheit 8 die Diagnosekriterien, die auf der Wellenform oder Intensität eines Standardchromatogramms basieren, das den internen Standard mindestens in der gleichen Konzentration wie die QC-Probe enthält.
Beispiele dieser Diagnosekriterien umfassen, wie in gezeigt, Wellenformdaten eines Chromatogramms (Standardchromatogramm) CR, das ein Messobjekt X in einer bekannten Konzentration X₁ und die internen Standards a und b enthält. In diesem Beispiel ist das Standardchromatogramm CR dasselbe wie das Chromatogramm, das zur Erstellung der in gezeigten Kalibrierungskurve der Konzentration X₁ des Messobjekts X benutzt wird.
Die Diagnosekriterien enthalten jedoch möglicherweise nicht den Peak des Messobjekts X, falls diese auf der Wellenform oder Intensität des Chromatogramms basieren, das die internen Standards a und b in der gleichen Konzentration enthält wie die QC-Probe. Dann beurteilt die Steuereinheit 9 basierend auf den Diagnosekriterien hinsichtlich der Wellenform oder Intensität des Chromatogramms der QC-Probe, ob die unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht.
Die QC-Probe kann, wie zeigt, die internen Standards a und b enthalten, wenn jedoch, wie in den Chromatogrammen CRa, CRb und CRc von gezeigt wird, das Messobjekt X die internen Standards a und b in bekannter Konzentration enthält, kann die Diagnosegenauigkeit verbessert werden, weil die Diagnose unter Verwendung des Peaks des Messobjekts X durchgeführt wird,.
In der folgenden Beschreibung wird angenommen, dass die Diagnosekriterien und die QC-Probe auch das Messobjekt X mit einer bekannten Konzentration X₁ enthalten, es ist jedoch auch selbstverständlich, dass die Diagnosekriterien und die QC-Probe das Messobjekt X nicht enthalten können.
zeigt ein Standardchromatogramm CR und die Chromatogramme CRa, CRb und CRc der QC-Probe. Wie in zu sehen ist, enthält das Standardchromatogramm CR den Peak S0 des Messobjekts X sowie die Peaks S1 und S2 des ersten internen Standards a und b auf, die jeweils vor und nach der Retentionszeit von Peak S0 auftauchen.
Für jeden der Peaks S0, S1 und S2 wird die Halbwertsbreite (Peakbreite) durch W0, W1 und W2, und die Intensität (zum Beispiel die Peakfläche) durch A0, A1 und A2 dargestellt.
zeigt ein Beispiel der in der Speichereinheit 8 gespeicherten Diagnosekriterien (Tabelle) J1. Diese Diagnosekriterien J1 basieren auf dem Standardchromatogramm CR und für jeden der Peaks S0, S1 und S2 sind die ersten Schwellenwerte der Halbwertsbreite Wx, Wy und Wz und die zweiten Schwellenwerte der Intensität (Peakfläche) Ax, Ay und Az gespeichert.
Die Steuereinheit 9 führt eine Diagnose basierend auf den Diagnosekriterien J1 durch und beurteilt, ob eine unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht.
Zum Beispiel wird angenommen, dass, wie in gezeigt, das Chromatogramm CRa der QC-Probe erhalten wurde. Die Steuereinheit 9 ermittelt die Halbwertsbreite und Intensität jedes Peaks S0 bis S2 aus dem Chromatogramm CRa der QC-Probe, und wenn beispielsweise die Halbwertsbreiten W0a und W2a der Peaks S0 und S2 jeweils die ersten Schwellenwerte Wx bzw. Wz überschreiten, urteilt sie, dass die unbekannte Probe nicht gemessen werden kann.
Wenn die Halbwertsbreiten W0a und W1 jeweils die ersten Schwellenwerte Wx bzw. Wz überschreiten, wird ein Defekt der stationären Phase (Säule 4) angenommen.
Ferner wird, wie in gezeigt, angenommen, dass ein Chromatogramm CRb einer anderen QC-Probe erhalten wurde. Die Steuereinheit 9 ermittelt die Halbwertsbreite und die Intensität jedes Peaks S0 bis S2 aus dem Chromatogramm CRb der QC-Probe, und wenn beispielsweise die Intensität A1b des Peaks S1 kleiner als der zweite Schwellenwert Ay ist, urteilt sie, dass die unbekannte Probe nicht gemessen werden kann.
Im Fall, dass die Intensität A1b kleiner ist als der zweite Schwellenwert Ay, wird ein Defekt des Detektors angenommen (zum Beispiel kann ein Lampenwechsel des Detektors erforderlich sein).
Weiterhin wird, wie in gezeigt, angenommen, dass ein weiteres Chromatogramm CRc einer anderen QC-Probe erhalten wurde. Die Steuereinheit 9 ermittelt die Halbwertsbreite und die Intensität jedes Peaks S0 bis S2 aus dem Chromatogramm CRb der QC-Probe, und wenn beispielsweise mindestens eine der Halbwertsbreiten W1c und W2c der Peaks S1 oder S2 den ersten Schwellenwert Wy oder Wz überschritten haben, urteilt sie, dass die unbekannte Probe nicht gemessen werden kann.
Im Fall, dass mindestens eine der Halbwertsbreiten W1c und W2c höher ist als der zweite Schwellenwert Ay, wird angenommen, dass eine Störung bei der mobilen Phase vorliegt.
In dem Beispiel des Chromatogramms CRb der QC-Probe von wurde bestimmt, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist, wenn die Intensität A1b des Peaks S1 kleiner ist als der zweite Schwellenwert Ay, aber auch im Fall, dass alle Intensitäten A0b bis A2b der Peaks S0 bis S2 jeweils kleiner als der zweite Schwellenwert sind oder wenn zwei oder mehr von diesen Intensitäten v kleiner als der zweite Schwellenwert sind oder wenn irgendeine der Intensitäten A0b bis A2b kleiner als der zweite Schwellenwert ist, kann entschieden werden, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist.
Ferner wurde in dem Beispiel des Chromatogramms CRc der QC-Probe von festgestellt, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist, wenn wenigstens eine der Halbwertsbreiten W1c und W2c den Schwellenwert Wy oder Wz überschritten hat, aber auch im Fall, dass alle Halbwertsbreiten W0c bis W2c der Peaks S0 bis S2 jeweils den ersten Schwellenwert überschritten haben oder wenn zwei oder mehr dieser Halbwertsbreiten W0c bis W2c den ersten Schwellenwert überschritten haben oder wenn irgendeine der Halbwertsbreiten W0c bis W2c den ersten Schwellenwert überschritten haben, kann entschieden werden, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist.
Wenn entschieden worden ist, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist, kann die Steuereinheit 9 dieses auf der Anzeigeeinheit 10 anzeigen, oder es kann eine Stimme ertönen, die die Bedienungsperson darauf aufmerksam macht, und sie kann den Flüssigkeitschromatographen 100 so steuern, dass die Messung nicht durchgeführt werden kann. Diese Steuerung kann die Messung physikalisch verhindern, aber es ist einfacher, die Software so zu steuern, dass das Computerprogramm zum Ausführen der Messung nicht weiterläuft.
Wenn die Messung der unbekannten Probe zugelassen worden ist, kann die Steuereinheit 9 dieses auf der Anzeigeeinheit 10 anzeigen, oder es kann eine Stimme ertönen, die die Bedienungsperson darauf aufmerksam macht, und sie kann den Flüssigkeitschromatographen 100 so steuern, dass die Messung durchgeführt werden kann. Diese Steuerung kann zum Beispiel ein Computerprogramm zur Durchführung der Messung automatisch voranschreiten lassen und die Steuerung einfach per Software durchführen.
Wenn ein zusätzliches Messobjekt Y quantitativ bestimmt wird, das sich von dem Messobjekt X unterscheidet, kann normalerweise auf die gleiche Art wie in gezeigt das Chromatogramm der QC-Probe und das Chromatogramm der unbekannten Probe auf die gleiche Weise gemessen werden, wenn die gleiche Kalibrierungskurve wie bei dem Messobjekt X gespeichert ist.
Wenn man andererseits als QC-Probe bei der quantitativen Bestimmung von Messobjekt X, eine QC-Probe verwendet, die wie in der oben genannten das Messobjekt X enthält, nimmt zwar die Messgenauigkeit des Flüssigkeitschromatographen 100 zu, wenn diese QC-Probe jedoch auch zur quantitativen Bestimmung des Messobjekts Y verwendet wird, kann die Genauigkeit bei der Bestimmung des Messobjekts Y abnehmen.
Wie in gezeigt ist, variieren selbst dann, wenn die internen Standards a und b in der QC-Probe jeweils die gleichen Substanzen sind und in der gleichen Konzentration vorliegen, die Peakintensitäten der internen Standards a und b, wenn das Messobjekt Y und die internen Standards a und b zusammen vorliegen, was daran liegt, dass es vorkommt, dass die Peakintensität der internen Standards a und b der QC-Probe, die das Messobjekt X enthält, unterschiedlich ist. Übrigens wird im Beispiel der die Peakintensität der internen Standards a und b größer, wenn das Messobjekt Y enthalten ist.
Andererseits besteht der Wunsch, dass für jedes weitere Messobjekt Y die QC-Probe, die das Messobjekt X enthält, bei allen Messungen verwendet werden kann, weil die Verarbeitbarkeit abnimmt, wenn man für jedes zusätzliche Messobjekt Y eine QC-Probe vorbereitet, die das Messobjekt X enthält.
Daher werden als zusätzliche Daten der Kalibrierungskurve von Messobjekt Y basierend auf der Methode mit internen Standard in der Speichereinheit 8 die Daten der Kalibrierungskurve gespeichert, die mit dem folgenden Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1) korrigiert wurden.
Dann kann durch die quantitative Bestimmung von Messobjekt Y unter Verwendung dieser korrigierten Daten der Kalibrierungskurve das Messobjekt Y mit großer Genauigkeit quantitativ analysiert werden, selbst wenn bei der quantitativen Bestimmung des Messobjekts Y auch die QC-Probe verwendet wird, die das Messobjekt X enthält.
Konkret werden, wie in gezeigt, die Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL3 und der zweiten Kalibrierungskurve CAL4 für das Messobjekt Y auf die gleiche Weise wie im Fall des Messobjekts X von und erstellt.
Wie in gezeigt ist, erhält man die erste Kalibrierungskurve CAL3, indem man für den internen Standard a das Intensitätsverhältnis (STD/a) der Intensität jedes der Messobjekte STD-Y₁ , STD-Y₂ und STD-Y₃ , deren Konzentration bekannt ist, und der Intensität des internen Standards a an der vertikalen Achse abträgt und alle Konzentrationen Conc der Messobjekte STD-Y₁ , STD-Y₂ und STD-Y₃ an der horizontalen Achse abträgt, in Form einer linearen Funktion, die die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts X zeigt.
Die zweite Kalibrierungskurve CAL4 erhält man, indem man auf die gleiche Weise für den internen Standard b, wie in gezeigt ist, das Intensitätsverhältnis (STD/b) der Intensität jedes der Messobjekte STD-Y₁ , STD-Y₂ und STD-Y₃ , deren Konzentration bekannt ist, und der Intensität des internen Standards b an der vertikalen Achse abträgt und alle Konzentrationen Conc der Messobjekte STD-Y₁ , STD-Y₂ und STD-Y₃ an der horizontalen Achse abträgt, in Form einer linearen Funktion, die die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts X zeigt.
Als nächstes wird, wie in gezeigt, das Intensitätsverhältnis (A2/A1) der internen Standards aus der Intensität A2 der internen Standards a, b mit der gleichen Konzentration wie bei der QC-Probe, als das Messobjekt Y gleichzeitig vorhanden war, und der Intensität A1 der internen Standards a, b mit der gleichen Konzentration wie bei der QC-Probe, als das Messobjekt X in der gleichen Konzentration wie das Messobjekt Y vorhanden war, ermittelt.
Das Intensitätsverhältnis (A2/A1) der internen Standards wird für jeden internen Standard a und b berechnet, zum Beispiel beträgt es für den internen Standard a (A2/A1) = (ay/ax) und für den internen Standard b (A2/A1) = (by/bx).
Wie in gezeigt, speichert die Speichereinheit 8 die Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6, bei denen die Intensität der internen Standards in den Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL3 und der zweiten Kalibrierungskurve CAL4 mit dem Intensitätsverhältnis (A2/A1) der internen Standards korrigiert worden sind.
Bei dieser Korrektur wird der Wert des Nenners a des Intensitätsverhältnis (STD/a) der Intensität jedes der Messobjekte STD-Y₁ , STD-Y₂ und STD-Y₃ auf der horizontalen Achse der ersten Kalibrierungskurve CAL 3 und der Intensität des internen Standards mit (ay/ax) multipliziert. Das heißt, das Intensitätsverhältnis wird = STD/{a x (ay/ax)} nach der Korrektur.
Da in diesem Beispiel ay > ax ist, wird, wie zeigt, das Intensitätsverhältnis nach der Korrektur kleiner, und, wie zeigt, die Steigung bei den Daten der Kalibrierungskurve CAL5 nach der Korrektur kleiner als die der ersten Kalibrierungskurve CAL 3. In gleicher Weise haben die Daten der korrigierten Kalibrierungskurven CAL6 eine geringere Steigung als die zweite Kalibrierungskurve CAL4.
Die Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 entsprechen den „Daten der korrigierten (zusätzlichen) Kalibrierungskurven“ in den Ansprüchen.
Dabei ist zu beachten, dass die Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 nicht auf eine lineare Funktion beschränkt sind, sondern auch eine Tabelle, eine angenäherte Kurve oder dergleichen sein können, sofern sie die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts darstellen.
Als nächstes wird, wie oben beschrieben, das Chromatogramm einer QC-Probe gemessen, die das Messobjekt X in einer bekannten Konzentration und die internen Standards a und b in einer vorbestimmten Konzentration enthält.
Dann beurteilt die Steuereinheit 9 auf der Grundlage der oben genannten Diagnosekriterien und des Chromatogramms der QC-Probe, ob, wie oben beschrieben, die unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht. Wenn die Messung zugelassen wird, führt die Steuereinheit 9 unter Bezugnahme auf die Daten der korrigierten Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 eine quantitative Bestimmung des Messobjekts Y der unbekannten Probe durch. Das Verfahren zur quantitativen Bestimmung ist das gleiche wie das für das Messobjekt X, und die Konzentrationen des Messobjekts Y werden aus den Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 jeweils auf die gleiche Weise wie in erhalten und gemittelt.
Auf diese Weise kann unter Verwendung der Daten der korrigierten Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6, ohne Zugabe von Standardsubstanz zur unbekannten Probe die quantitative Bestimmung des Testobjekts Y mit großer Genauigkeit durchgeführt werden, selbst wenn bei der quantitativen Bestimmung des Messobjekts Y auch die QC-Probe verwendet wird, die das Messobjekt X enthält.
Es ist selbstverständlich, dass die vorliegende Erfindung nicht auf die oben beschriebene Ausführungsform beschränkt ist, sondern sich auf verschiedene Modifikationen und Äquivalente erstreckt, die im Geist und Umfang der vorliegenden Erfindung enthalten sind. Die Anzahl der internen Standards ist nicht auf mehrere beschränkt, auch einer ist möglich. Vorzugsweise enthält der interne Standard jedoch mindestens zwei Arten, einen ersten internen Standard und einen zweiten internen Standard, deren Peaks im Chromatogramm des Messobjekts jeweils vor und nach dessen Peak auftreten, da so die Messgenauigkeit verbessert wird.
Die korrigierten (zusätzlichen) Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 können zum Zeitpunkt des Versands des Chromatographiegerätes 100 im Voraus in der Speichereinheit 8 gespeichert werden, oder die Bedienungsperson fertigt später die QC-Probe, die das Messobjekt Y und die internen Standards a und b enthält nur einmal an und erstellt das Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1), das er danach in der Speichereinheit 8 speichern kann.
Bezugszeichenliste

8: Speichereinheit
9: Steuereinheit
10: Speichereinheit
100: (Flüssigkeits)Chromatograph
CR: Standardchromatogramm
CR1 bis CR3: Chromatogramm der QC-Probe
J1: Diagnosekriterien
W0 bis W2: Wellenform des Standardchromatogramms
A0 bis A2: Intensität des Standardchromatogramms
W0a, W0c bis W2c: Wellenform des Chromatogramms der QC-Probe
A0b bis A2b: Intensität des Chromatogramms der QC-Probe
Wx bis Wz: erster Schwellenwert
Ax bis Az: zweiter Schwellenwert
X, Xn: Messobjekte
a: erster interner Standard
b: zweiter interner Standard
CAL1: Daten der ersten Kalibrierungskurve
CAL2: Daten der zweiten Kalibrierungskurve
CR: Standardchromatogramm
CRa, CRb, CRc: Chromatogramme der QC-Proben
Y: zusätzliches Messobjekt
CAL5, CAL6: Daten der korrigierten Kalibrierungskurven
Xn/a: erstes Intensitätsverhältnis
Xn/b: zweites Intensitätsverhältnis

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Patentliteratur

JP 61052301 [0005]

Claims

Ein Chromatograph zur quantitativen Bestimmung eines bestimmten Messobjekts, der mit einer Steuereinheit und einer Speichereinheit ausgerüstet ist, wobei bei diesem Chromatographen die oben genannte Speichereinheit die Daten einer Kalibrierungskurve speichert, die auf der Methode mit internem Standard basiert, und die das Intensitätsverhältnis der Intensität des oben genannten Messobjekts und der Intensität des oben genannten internen Standards enthält, wobei der oben genannte interne Standard in bestimmten Konzentrationen zu dem oben genannten Messobjekt zugegeben werden muss, und bei dem die oben genannte Steuereinheit, wenn ein Chromatogramm einer QC-Probe, die die oben genannte bestimmte Konzentration des oben genannten internen Standard enthält und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die das oben genannte Messobjekt in unbekannter Konzentration und keinen internen Standard enthält, gemessen worden ist, aus der Intensität des oben genannten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe das Intensitätsverhältnis berechnet und eine quantitative Bestimmung des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe auf Basis der oben genannten Kalibrierungskurve durchführt.
Ein Chromatograph wie Anspruch 1 beschrieben, wobei die oben genannte Speichereinheit auf Basis der Wellenform und Intensität eines Standardchromatogramms, das den oben genannten internen Standard in der oben genannten bestimmten Konzentration enthält, die Diagnosekriterien erstellt, und die oben genannte Steuereinheit basierend auf den oben genannten Diagnosekriterien in Bezug auf die Wellenform oder Intensität des Chromatogramms der oben genannten QC-Probe beurteilt, ob die oben genannte unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht.
Ein Chromatograph wie Anspruch 2 beschrieben, wobei die oben genannte Speichereinheit die Daten einer zusätzlichen Kalibrierungskurve basierend auf der Methode mit internem Standard speichert, für die man einem zusätzlichen Messobjekt, das sich von dem oben genannten Messobjekt unterscheidet, den oben genannten internen Standard in der oben genannten bestimmten Konzentration zugeben muss, und die das Intensitätsverhältnis der Intensität des oben genannten zusätzlichen Messobjekts und der Intensität des oben genannten internen Standards enthält, wobei bei den Daten der Kalibrierungskurve die Intensität des oben genannten internen Standards in den Daten der oben genannten zusätzlichen Kalibrierungskurve durch das Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1) aus der Intensität A2 des oben genannten internen Standards in der oben genannten bestimmten Konzentration, wenn das oben genannte zusätzliche Messobjekt gleichzeitig anwesend ist, und der Intensität A1 des oben genannten internen Standards der oben genannten Konzentration, wenn das oben genannte Messobjekt in der gleichen Konzentration wie das oben genannte zusätzliche Messobjekt gleichzeitig anwesend ist, korrigiert worden ist, und wobei die oben genannte QC-Probe außerdem das oben genannte Messobjekt in bekannter Konzentration enthält, und im Fall, dass das oben genannte zusätzliche Messobjekt quantitativ bestimmt wird, das Chromatogramm der oben genannten QC-Probe gemessen wird, und wenn die oben genannte Steuereinheit auf Basis der oben genannten Diagnosekriterien die Messung der oben genannten unbekannten Probe freigegeben hat, die oben gennannte Steuereinheit basierend auf den oben genannten Daten der korrigierten Kalibrierungskurve das oben genannte zusätzliche Messobjekt in einer zweiten unbekannten Probe, die das zusätzliche Messobjekt in unbekannter Konzentration enthält und den internen Standard nicht enthält, quantitativ bestimmen kann.
Ein Chromatograph wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 beschrieben, wobei der interne Standard mindestens zwei Arten umfasst, den ersten internen Standard und den zweiten internen Standard, deren Peaks im Chromatogramm vor und nach dem Peak des oben genannten Messobjekts erscheinen, die oben genannten Daten der Kalibrierungskurven mindestens die Daten der ersten Kalibrierungskurve und die Daten der zweiten Kalibrierungskurve, die jeweils dem ersten internen Standard und dem zweiten internen Standard entsprechen, enthalten, und die oben genannte Steuereinheit, wenn das oben genannte Messobjekt der oben genannten unbekannten Probe quantitativ bestimmt wird, aus dem Intensitätsverhältnis des ersten internen Standards und dem Intensitätsverhältnis des zweiten internen Standards, das aus der Intensität des oben genannten ersten internen Standards und des oben genannten zweiten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe berechnet worden ist, unter Bezug auf die Daten der oben genannten ersten Kalibrierungskurve und die Daten der oben genannten zweiten Kalibrierungskurve die oben genannten Messobjekte separat quantitativ bestimmen und den Mittelwert dieser quantitativen Werte ermitteln kann.
Ein Chromatograph wie in einem der Ansprüche 1 bis 4 beschrieben, wobei die oben genannten Diagnosekriterien den ersten Schwellenwert der Verbreiterung der Wellenform des oben genannten Standardchromatogramms enthalten, und die oben genannte Steuereinheit beurteilen kann, dass die Messung der oben genannten unbekannten Probe nicht möglich ist, wenn die Verbreiterung der Wellenform der oben genannten QC-Probe den oben genannten ersten Schwellenwert überschreitet.
Ein Chromatograph wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 beschrieben, wobei die oben genannten Diagnosekriterien einen zweiten Schwellenwert der Intensität des oben genannten Standardchromatographen enthalten, und die oben genannte Steuereinheit beurteilen kann, ob die Messung der oben genannten unbekannten Probe möglich ist oder nicht, wenn die Intensität des Chromatogramms der oben genannten QC-Probe unterhalb des oben genannten zweiten Schwellenwertes liegt.
Ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung mittels Chromatographie, bei dem ein bestimmtes Messobjekt quantitativ bestimmt wird, wobei vorab die Daten der Kalibrierungskurve, die auf der Methode mit internem Standard basieren und die das Intensitätsverhältnis der Intensität der oben genannten Messobjekte und der Intensität des oben genannten internen Standards enthalten, gespeichert werden, wobei der oben genannte interne Standard in bestimmten Konzentrationen zu dem oben genannten Messobjekt zugegeben werden muss, und wenn ein Chromatogramm einer QC-Probe, die die oben genannte bestimmte Konzentration des oben genannten internen Standard enthält und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die das oben genannte Messobjekt in unbekannter Konzentration und keinen internen Standard enthält, gemessen worden ist, aus der Intensität des oben genannten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe das Intensitätsverhältnis berechnet wird und eine quantitative Bestimmung des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe auf Basis der oben genannten Kalibrierungskurve durchgeführt wird.