DE102011088854A1 - Preparing O-amino-hydroxy-octadec-en-yl phosphate useful for preparing sphingosine-1-phosphate, comprises oxidizing substituted oxazolidin-yl-methanol derivative and reacting substituted carbaldehyde derivatives with alkyne compounds - Google Patents

Preparing O-amino-hydroxy-octadec-en-yl phosphate useful for preparing sphingosine-1-phosphate, comprises oxidizing substituted oxazolidin-yl-methanol derivative and reacting substituted carbaldehyde derivatives with alkyne compounds Download PDF

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Abstract

Preparing O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate or its stereoisomers and/or its derivatives, comprises: (e) oxidizing substituted oxazolidin-4-yl-methanol derivatives (V) using oxalyl chloride, dimethyl sulfoxide and Hunig's base (less than 5.5 equivalents) at a temperature of not less than -70[deg] C to obtain substituted oxazolidine-4-carbaldehyde derivatives (VI); and (f) reacting (VI) with 1-alkyne compounds (VIII) (at least 1.5 equivalents) and a base to obtain substituted 1-oxazolidin-4-yl-alk-2-yn-1-ol derivatives (VIIa), and purifying (VIIa) by distilling unreacted (VIII). Preparing O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate or its stereoisomers and/or its derivatives, comprises: (e) oxidizing substituted oxazolidin-4-yl-methanol derivatives of formula (V) using oxalyl chloride, dimethyl sulfoxide and Hunig's base (less than 5.5 equivalents) at a temperature of not less than -70[deg] C to obtain substituted oxazolidine-4-carbaldehyde derivatives of formula (VI); and (f) reacting (VI) with 1-alkyne compounds of formula (H-CC-R3) (VIII) (at least 1.5 equivalents) and a base to obtain substituted 1-oxazolidin-4-yl-alk-2-yn-1-ol derivatives of formula (VIIa), and purifying (VIIa) by distilling unreacted (VIII). Pg : protecting group; either R1, R2 : 1-6C alkyl or phenyl (both optionally substituted) or H; or R1+R2 : 4-6C cycloalkyl (optionally substituted); and R3 : alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, arylalkyl, arylalkenyl, aryl-alkynyl, alkylaryl, alkenylaryl or alkynyl-aryl (all optionally substituted and all optionally comprise several N, O or S in its carbon skeleton). An independent claim is also included for preparing sphingosine-1-phosphate or its stereoisomers and/or its derivatives, comprising (i) converting L-serine to (S)-methyl 2-amino-3-hydroxypropanoate (Xa) or its salts, (ii) protecting the amino functional group of (Xa) or its salts to obtain (S)-methyl 2-amino-3-hydroxypropanoate derivatives of formula (HO-CH 2-CH(NH-Pg)-C(=O)-O-CH 3) (Xb), (iii) protecting the primary hydroxy group and the amino group of (Xb) to obtain substituted (S)-oxazolidine-4-carboxylic acid ester compounds of formula (Xc), (iv) reducing (Xc) to obtain substituted (R)-1-oxazolidin-4-yl-methanol derivatives of formula (Xd), (v) oxidizing (Xd) using oxalyl chloride, dimethyl sulfoxide and Hunig's base (less than 5.5 equivalents) at a temperature of not less than -70[deg] C to obtain substituted (S)-oxazolidine-4-carbaldehyde derivatives of formula (Xe), (vi) reacting (Xe) with 1-pentadecyne (1.5 equivalents) and a base to obtain (VIIb), (vii) partially deprotecting (VIIb) to obtain (2S,3R)-2-amino-octadec-4-yne-1,3-diol derivatives of formula (HO-CH 2-CH(NH-Pg)-CH(OH)-CC-C 1 3H 2 7) (Xf), (viii) reducing the triple bond of (Xf) to a trans double bond to obtain (E)-(2S,3R)-2-amino-octadec-4-ene-1,3-diol derivatives of formula (HO-CH 2-CH(NH-Pg)-CH(OH)-CH=CH-C 1 3H 2 7) (Xg), (ix) phosphorylating the primary hydroxy group of (Xg) to obtain phosphoric acid (E)-(2S,3R)-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-enyl ester dimethyl ester derivatives of formula (P(O-CH 3) 2(=O)-O-CH 2-CH(NH-Pg)-CH(OH)-CH=CH-C 1 3H 2 7) (Xh), and (x) deprotecting (Xh) to obtain sphingosine-1-phosphate, and purifying the obtained sphingosine-1-phosphate by distilling unreacted 1-pentadecyne. [Image] [Image].

Description

Technisches Gebiet der ErfindungTechnical field of the invention

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf einen neuen Prozess zur Darstellung von Sphingososin-1-phosphat oder einem Stereoisomer und/oder einem Derivat davon, sowie auf Intermediate, die nützlich in diesem Prozess sind. Die vorliegende Erfindung bezieht sich ebenso auf Sphingosin-1-phosphat oder einem Stereoisomer und/oder einem Derivat davon, welches besonders rein ist.The present invention relates to a novel process for preparing sphingosine-1-phosphate or a stereoisomer and / or a derivative thereof, as well as to intermediates useful in this process. The present invention also relates to sphingosine-1-phosphate or a stereoisomer and / or a derivative thereof, which is particularly pure.

Hintergrund der ErfindungBackground of the invention

Sphingosin-1-phosphat (S1P), dessen (2S,3R,4E)-D-erythro Isomer unten gezeigt ist, ist ein Signalprotein. Sphingolipide sind eine große Klasse biologisch wichtiger Zellmembrankomponenten, bestimmt durch einen besonderen aliphatischen Aminoalkhol, Sphingosin, der unten gezeigt ist. Wenn Sphingolipide in Zellen gegenwärtig sind, werden sie unter Bildung von Sphingosin als metabolischem Zwischenprodukt metabolisiert. Phosphorylierung von Sphingosin zu S1P wird von Sphingosin-Kinase katalysiert S1P ist ein potenter Botenstoff. Es arbeitet sowohl intrazellulär, als auch interzellulär und spielt eine Hauptrolle in der Signalübertragung in verschiedensten Geweben. Eines der Hauptangriffspunkte von S1P sind Mitglieder der Familie der Lysophospholipid-Rezeptoren.Sphingosine 1-phosphate (S1P), whose (2S, 3R, 4E) -D-erythro isomer is shown below, is a signaling protein. Sphingolipids are a large class of biologically important cell membrane components, as determined by a particular aliphatic aminoalkyne, sphingosine, shown below. When sphingolipids are present in cells, they are metabolized to form sphingosine as a metabolic intermediate. Phosphorylation of sphingosine to S1P is catalyzed by sphingosine kinase S1P is a potent messenger. It works both intracellularly and intercellularly and plays a major role in signaling in a variety of tissues. One of the main targets of S1P are members of the family of lysophospholipid receptors.

Figure 00010001
Figure 00010001

Obwohl S1P wichtig für den gesamten menschlichen Körper ist, scheint es für die Haut besonders wichtig zu sein. Es moduliert die Proliferation von Hautzellen. Dies trifft besonders für Keratinocyten zu, während Fibroplasten nicht auf diesem Weg beeinflusst werden. Abgesehen von Zellwachstum und Differenzierung ist S1P für Chemotaxis und Angiogenese verantwortlich. Während S1P die epidermale Proliferation unterdrückt, ähnlich wie Glucocorticoide, unterscheidet es sich von diesen insoweit, dass es die Proliferation von dermalen Fibroplasten nicht reduziert. Tatsächlich aktiviert S1P Fibroblasten basierte extrazelluläre Matrix-Proteinproduktion. Wegen der hyperproliferativen Wirkung gegen Epidermiszellen wurde S1P als ein pharmazeutisch aktiver Bestandteil gegen hyperproliferative Hautkrankheiten, besonders psorias vulgaris und acne vulgaris, in Erwägung gezogen.Although S1P is important to the entire human body, it seems to be particularly important to the skin. It modulates the proliferation of skin cells. This is especially true for keratinocytes, while fibroblasts are not affected this way. Apart from cell growth and differentiation, S1P is responsible for chemotaxis and angiogenesis. While S1P suppresses epidermal proliferation, much like glucocorticoids, it differs from it in that it does not reduce the proliferation of dermal fibroblasts. Indeed, S1P activates fibroblast-based extracellular matrix protein production. Because of its hyperproliferative action against epidermal cells, S1P has been considered as a pharmaceutically active ingredient against hyperproliferative skin diseases, especially psorias vulgaris and acne vulgaris.

F. Ruan et. Al. (Bioorg. & Med. Chem. Let., 2(9), 1992, p 973–978) berichten über die chemische Synthese von S1P. Zuerst wurde das Ausgangsmaterial, ein D-erythro olefinischer Alkohol, ausgehend von L-Serin dargestellt. Das Ausgangsmaterial besitzt sowohl eine primäre und eine sekundäre Hydroxyl-Gruppe, als auch eine Amin-Gruppe. Die Synthese beginnt mit dem Schutz der Amin-Funktion und der sekundären Hydroxyl-Gruppe, des Ausgangsmaterials. Die primäre Hydroxyl-Gruppe, die ungeschützt bleibt, wird dann phosphoryliert und die Schutzgruppen der Amin-Gruppe und der sekundären Hydroxyl-Gruppe werden schließlich entfernt, um S1P zu liefern. Die Synthese führt nur zu einem einzigen Isomer, ist aber länglich (10 Stufen von L-Serin zu S1P mit etwa 98h Synthesezeit) und liefert S1P in einer relativ niedrigen Ausbeute (etwa 10,7% Gesamtausbeute). F. Ruan et. Al. (Bioorg. & Med. Chem. Let., 2 (9), 1992, p 973-978) report the chemical synthesis of S1P. First, the starting material, a D-erythro olefinic alcohol, was prepared starting from L-serine. The starting material has both a primary and a secondary hydroxyl group, as well as an amine group. The synthesis begins with the protection of the amine function and the secondary hydroxyl group, the starting material. The primary hydroxyl group, which remains unprotected, is then phosphorylated and the protecting groups of the amine group and the secondary hydroxyl group are eventually removed to provide S1P. The synthesis results in only one isomer but is elongated (10 steps from L-serine to S1P with about 98h of synthesis time) and provides S1P in a relatively low yield (about 10.7% overall yield).

B. Kratzer et. Al. (THL; 34(11), 1993, p 1761–1764) beschreiben die Synthese von S1P unter Nutzung von D-erythro 2-Azido-3-O-TBDMS-Sphingosin als Ausgangsmaterial. Dieses Ausgangsmaterial, das eine primäre und eine sekundäre Hydroxyl-Gruppe besitzt ebenso wie eine Azid-Gruppe, wird ausgehend von D-Glucose in einem neun Stufen umfassenden Prozess in einer Ausbeute von 15% erhalten, wobei die sekundäre Hydroxyl-Funktionalität mit Einer TBDMS-Gruppe geschützt wird. Wenn das Ausgangsmaterial dargestellt ist, wird die Azid-Gruppe zur Amin-Gruppe reduziert, die dann, eine Carbonat-Gruppe nutzend, geschützt wird. Die ungeschützte primäre Hydroxyl-Gruppe der erhaltenen Komponente wird dann mit Hilfe von bis(2-Cyanoethoxy)(diisopropylamino)phosphin zu einem Phosphit-Intermediat phosphoryliert, das dann zu einem Phosphat-Triester oxidiert wird. Dann entfernt man die 2-Cyanoethyl-Gruppen und die Schutzgruppen der sekundären Hydroxyl-Gruppe und der Aminogruppe, um S1P zu erhalten. Einerseits liefert die Synthese nur ein Isomer, andererseits ist die Synthese sehr lang (14 Schritte von D-Glucose zu S1P mit einer ungefähren Dauer von 318h) und liefert S1P nur in einer relativ geringen Ausbeute (etwa 8,4% Gesamtausbeute). Zusätzlich werden für die Synthese gefährliche Chemikalien, wie Dioxan und besonders Natriumazid benötigt, einer, besonders in Gegenwart von halogenierten Lösungsmitteln, hochexplosiven Verbindung. B. scratches et. Al. (THL; 34 (11), 1993, p 1761-1764) describe the synthesis of S1P using D-erythro 2-azido-3-O-TBDMS-sphingosine as starting material. This starting material, which has a primary and a secondary hydroxyl group as well as an azide group, is obtained starting from D-glucose in a process comprising nine steps in a yield of 15%, wherein the secondary hydroxyl functionality with a TBDMS- Group is protected. When the starting material is shown, the azide group is reduced to the amine group, which is then protected using a carbonate group. The unprotected primary hydroxyl group of the resulting moiety is then phosphorylated by bis (2-cyanoethoxy) (diisopropylamino) phosphine to a phosphite intermediate, which is then oxidized to a phosphate triester. Then, the 2-cyanoethyl groups and the protective groups of the secondary hydroxyl group and the amino group are removed to obtain S1P. On the one hand, the synthesis provides only one isomer, on the other hand, the synthesis is very long (14 steps from D-glucose to S1P with an approximate duration of 318h) and gives S1P only in a relatively low yield (about 8.4% overall yield). In addition will be for the synthesis of hazardous chemicals such as dioxane and especially sodium azide needed, a, especially in the presence of halogenated solvents, highly explosive compound.

WO 95/21848 beschreibt die chemische Synthese von S1P und dessen Derivaten. Sphingosin dient als Ausgangsmaterial. Zuerst wird die Amino-Gruppe in Sphingosin zum Beispiel mit einer Boc-Gruppe geschützt, dann wird das Amino-geschützte Sphingosin mit bis(2-Cyanoethoxy)(diisopropylamino)phosphin umgesetzt und die erhaltene Komponente zum Phosphat-Triester oxidiert. Schließlich werden die 2-Cyanoethyl-Gruppen und die Amin-Schutzgruppe entfernt, um S1P zu liefern. Die Synthese, wie sie in Patent WO 95/21848 beschrieben ist, besitzt mehrere Nachteile, die sie ungeeignet zur Herstellung im industriellen Maßstab macht, zum Beispiel Schwierigkeiten in der Darstellung das Ausgangsmaterials Sphingosin und auch in der Darstellung von Reagenzien, wie bis (Cyanoethoxy)(diisopropylamino)phosphin, sowie niedrige Ausbeuten. WO 95/21848 describes the chemical synthesis of S1P and its derivatives. Sphingosine serves as starting material. First, the amino group in sphingosine is protected with, for example, a Boc group, then the amino-protected sphingosine is reacted with bis (2-cyanoethoxy) (diisopropylamino) phosphine and the resulting component is oxidized to the phosphate triester. Finally, the 2-cyanoethyl groups and the amine protecting group are removed to provide S1P. The synthesis, as described in Patent WO 95/21848 has several disadvantages that make it unsuitable for industrial scale production, for example, difficulties in preparing the starting material sphingosine and also in the preparation of reagents such as bis (cyanoethoxy) (diisopropylamino) phosphine, as well as low yields.

Also besteht durchaus Bedarf nach einem Prozess zur Herstellung von S1P und dessen Stereoisomeren und Derivaten, besonders zur Produktion von S1P, seinen Stereoisomeren und Derivaten in industriellem Maßstab, besonders durch Steigerung der Ausbeuten und der dadurch zugänglichen Mengen für diese Komponenten in kürzerer Zeit unter Minimierung des Einsatzes von gefährlichen oder teuren Chemikalien.Thus, there is a need for a process for the production of S1P and its stereoisomers and derivatives, particularly for the production of S1P, its stereoisomers and derivatives on an industrial scale, especially by increasing the yields and the amounts available for these components in a shorter time while minimizing the Use of dangerous or expensive chemicals.

Zusammenfassung der ErfindungSummary of the invention

Für die Absichten der vorliegenden Erfindung werden die Begriffe „Sphingosin-1-phosphat” und „S1P” austauschbar benutzt und meinen das (25,3R,4E)-D-erythro Isomer 11a, wie in gezeigt. Stereoisomere von S1P werden ebenso in dargestellt. Analog bedeutet der Begriff „Sphingosin” das (2S,3R,4E)-D-erythro Isomer.For the purposes of the present invention, the terms "sphingosine 1-phosphate" and "S1P" are used interchangeably to mean the (25,3R, 4E) -D-erythro isomer 11a, as in shown. Stereoisomers of S1P are also known in shown. Analogously, the term "sphingosine" means the (2S, 3R, 4E) -D-erythro isomer.

Für die Absichten der vorliegenden Erfindung schließt Verbindung 11R die Verbindungen 11Ri und 11Rii mit ein; die Verbindung 11Ri schließt die Verbindungen 11a, 11c, 11e und 11g mit ein; und die Verbindung 11Rii schließt die Verbindungen 11b, 11d, 11f und 11h mit ein. Die Verbindung 10R schließt die Verbindungen 10Ri und Rii mit ein; die Verbindung 10Ri schließt die Verbindungen 10a, 10c, 10e und 10g mit ein und Verbindung 10Rii schließt die Verbindungen 10b, 10d, 10f und 10h mit ein. Die Verbindung 9R schließt die Verbindungen 9Ri und 9Rii mit ein; die Verbindung 9Ri schließt die Verbindungen 9a, 9c, 9e und 9g mit ein; und die Verbindung 9Rii schließt die Verbindungen 9b, 9d, 9f, und 9h mit ein. Die Verbindung 8R schließt die Verbindungen 8a bis 8h mit ein. Die Verbindung 7R schließt die Verbindungen 7a bis 7h mit ein. Die Verbindung 6 schließt die Verbindungen 6a und 6e mit ein. Die Verbindung 5 schließt die Verbindungen 5a und 5e mit ein. Die Verbindung 4 schließt die Verbindungen 4a und 4e mit ein. Die Verbindung 3 schließt die Verbindungen 3a und 3e mit ein. Die Verbindung 2 schließt die Verbindungen 2a, 2e und 2x mit ein. Die Verbindung 1 schließt die Verbindungen 1a und 1e mit ein.For the purposes of the present invention, compound 11R includes compounds 11Ri and 11Rii; compound 11Ri includes compounds 11a, 11c, 11e, and 11g; and compound 11Rii includes compounds 11b, 11d, 11f and 11h. Compound 10R includes compounds 10Ri and Rii; Compound 10Ri includes compounds 10a, 10c, 10e, and 10g, and compound 10Rii includes compounds 10b, 10d, 10f, and 10h. Compound 9R includes compounds 9Ri and 9Rii; compound 9Ri includes compounds 9a, 9c, 9e and 9g; and compound 9Rii includes compounds 9b, 9d, 9f, and 9h. Compound 8R includes compounds 8a through 8h. The compound 7R includes the compounds 7a to 7h. Compound 6 includes compounds 6a and 6e. Compound 5 includes compounds 5a and 5e. Compound 4 includes compounds 4a and 4e. Compound 3 includes compounds 3a and 3e. Compound 2 includes compounds 2a, 2e and 2x. Compound 1 includes compounds 1a and 1e.

Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung bedeutet der Begriff „substanziell enantiomerenrein”, dass die fragliche Verbindung zu mehr als 90% aus einem einzelnen Stereoisomer besteht, bevorzugt aus mehr als 95%, sehr bevorzugt aus mehr als 98%, besonders bevorzugt aus mehr als 98,5%, mehr bevorzugt aus mehr als 99%, noch mehr bevorzugt aus mehr als 99,3%, am meisten bevorzugt aus mehr als 99,5% (wie durch chirale HPLC gemessen).For the purposes of the present invention, the term "substantially enantiomerically pure" means that more than 90% of the compound in question consists of a single stereoisomer, preferably greater than 95%, more preferably greater than 98%, most preferably greater than 98 , 5%, more preferably more than 99%, even more preferably more than 99.3%, most preferably more than 99.5% (as measured by chiral HPLC).

Ein erster Aspekt der vorliegenden Erfindung stellt einen Prozess zur Darstellung von O-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11R oder ein Stereoisomer davon und/oder ein Derivat davon dar, aus Schritt (e) und/oder Schritt (f) bestehend:

  • e) Oxidation von Alkohol 5 zu Aldehyd 6:
    Figure 00030001
    wobei Schritt (e) unter Nutzung von Oxalylchlorid, DMSO und weniger als 5,5 eq. Hünig Base und/oder bei einer Temperatur nicht unter –70°C durchgeführt wird
  • (f) Reaktion von Aldehyd 6 mit einem 1-alkin HCΞCR3 und einer Base zu Alkin 7R:
    Figure 00040001
A first aspect of the present invention is a process for preparing O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11R or a stereoisomer thereof and / or a derivative thereof, from step (e) and / or step (f) consisting of:
  • e) Oxidation of Alcohol 5 to Aldehyde 6:
    Figure 00030001
    wherein step (e) using oxalyl chloride, DMSO and less than 5.5 eq. Hunig base and / or at a temperature not below -70 ° C is performed
  • (f) Reaction of aldehyde 6 with a 1-alkyne HCΞCR3 and a base to alkyne 7R:
    Figure 00040001

Wobei Schritt (f) unter Nutzung von mindestens 1,5 eq.1-Alkin und/oder wobei Alkin 7R durch abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Alkin gereinigt wird; wobei Pg eine Schutzgruppe ist;
wobei R1 und R1 unabhängig voneinander Wasserstoff, eine optional substituierte C1 bis C6-Alkylkette, oder eine optional substituierte Phenylgruppe, oder die Reste R1 und R2 zusammen eine optional substituierte C4 bis C6-Cycloalkylgruppe bilden und wobei R3 ein Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Arylalkyl-, Arylalkenyl-, Arylalkinyl-, Alkylaryl-, Alkenylaryl- oder Alkinylaryl-Rest ist, von denen jeder optional substituiert sein kann und jede optional mehrere Heteroatome N, O oder S in seinem Kohlenstoffgerüst einschließen kann.Wherein step (f) is purified using at least 1.5 eq.1-alkyne and / or wherein alkyne 7R is purified by distilling off unreacted 1-alkyne; where Pg is a protecting group;
where R 1 and R 1 independently of one another hydrogen, an optionally substituted C 1 to C 6 alkyl chain, or an optionally substituted phenyl group, or the radicals R 1 and R 2 together form an optionally substituted C 4 to C 6 cycloalkyl group and R 3 is an alkyl, alkenyl , Alkynyl, aryl, arylalkyl, arylalkenyl, arylalkynyl, alkylaryl, alkenylaryl or alkynylaryl radical, each of which may be optionally substituted and each optionally including multiple heteroatoms N, O or S in its carbon backbone.

Bevorzugt beinhaltet der Prozess der vorliegenden Erfindung beide Schritte (e) und (f).Preferably, the process of the present invention includes both steps (e) and (f).

Sehr bevorzugt wird Alkohol 5 durch einen Prozess erhalten, der einen oder mehrere der Stufen (a) bis (d) enthält:

  • (a) Umwandlung von Serin 1 zu Ester 2 oder einem Salz davon, wobei R' ein unsubstituierter C1-6 Alkyl-, Phenyl- oder Benzylrest ist:
    Figure 00040002
  • (b) Schutz der Aminogruppe von Ester 2 oder eines Salzes davon unter Bildung von Ester 3, wobei Pg eine Schutzgruppe ist:
    Figure 00040003
  • (c) Schutz der primären Hydroxylgruppe und der Amino Gruppe von Ester 3 unter Erhalt von Ester 4, wobei R1 und R2 unabhängig von einander Wasserstoff, optional substituierte C1-C6 Alkyl-Reste, oder optional substituierte Phenyl-Reste seien können, oder R1 und R2 zusammen einen optional substituierten C4-C7 Cycloalkyl Rest formen können.
    Figure 00050001
  • (d) Reduktion von Ester 4 zu Alkohol 5:
    Figure 00050002
Most preferably, alcohol 5 is obtained by a process comprising one or more of steps (a) to (d):
  • (a) Conversion of serine 1 to ester 2 or a salt thereof, wherein R 'is an unsubstituted C1-6 alkyl, phenyl or benzyl radical:
    Figure 00040002
  • (b) protecting the amino group of ester 2 or a salt thereof to form ester 3, where Pg is a protecting group:
    Figure 00040003
  • (c) protecting the primary hydroxyl group and the amino group of ester 3 to give ester 4, wherein R 1 and R 2 independently of one another may be hydrogen, optionally substituted C 1 -C 6 alkyl radicals, or optionally substituted phenyl radicals, or R1 and R2 together may form an optionally substituted C4-C7 cycloalkyl radical.
    Figure 00050001
  • (d) Reduction of ester 4 to alcohol 5:
    Figure 00050002

Besonders bevorzugt beinhaltet der Prozess der vorliegenden Erfindung zwei, drei oder alle vier Stufen (a) bis (d).More preferably, the process of the present invention includes two, three, or all four stages (a) through (d).

R' ist ein unsubstituierter C1-6 Alkyl-, Phenyl- oder Benzylrest. Besonders bevorzugt ist R' Methyl. Bevorzugt in Stufe (a) ist Serie 1 ein Serin-methylester-hydrochlorid Salz. R 'is an unsubstituted C 1-6 alkyl, phenyl or benzyl radical. Most preferably, R 'is methyl. Preferably in step (a), series 1 is a serine methyl ester hydrochloride salt.

Die Veresterung von Stufe (a) kann zum Beispiel säurekatalysiert erfolgen, oder ein Carbodiimid, wie N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) nutzend, oder durch Aktivierung der Carboxyl-Funktion von Serin 1 durch Überführung in ein Säurechlorid, oder durch Aktivierung der Carboxyl-Funktion von Serie 1 durch Überführung in ein Anhydrid.For example, the esterification of step (a) may be acid catalyzed or using a carbodiimide such as N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) or by activation of the carboxyl function of serine 1 by conversion to an acid chloride or by activation of the carboxyl Function of Series 1 by conversion into an anhydride.

Nach einer wässrigen Aufarbeitung benötigt das Produkt aus Stufe (a), Ester 2 oder sein Salz keine weitere Reinigung. Bevorzugt wird Ester 2 oder sein Salz in einer Ausbeute von 98%, 99%, 99,5%, 99,9% oder mehr erhalten.After an aqueous work-up, the product from step (a), ester 2 or its salt requires no further purification. Preferably, ester 2 or its salt is obtained in a yield of 98%, 99%, 99.5%, 99.9% or more.

Besonders bevorzugt wird in Stufe (a) ein Methylester hergestellt. Ein bevorzugtes Salz, das in Stufe (a) erhalten wird ist das Hydrochlorid. In einer bevorzugten Ausführungsform kann die Veresterung von Schritt (a) unter der Nutzung von Thionylchlorid und Methanol durchgeführt werden. Vorzugsweise wird das Thionylchlorid in einem leichten Überschuss (besonders bevorzugt etwa 1,05 eq). Vorzugsweise wird die Reaktionsmischung 10–30 Stunden refluxiert. Wenn Thionylchlorid und Methanol in Schritt (a) eingesetzt werden, wird Serinmethylester Hydrochlorid erhalten.Particularly preferably, in step (a) a methyl ester is prepared. A preferred salt obtained in step (a) is the hydrochloride. In a preferred embodiment, the esterification of step (a) may be carried out using thionyl chloride and methanol. Preferably, the thionyl chloride will be in a slight excess (more preferably about 1.05 eq). Preferably, the reaction mixture is refluxed for 10-30 hours. When thionyl chloride and methanol are used in step (a), serine methyl ester hydrochloride is obtained.

Wenn -Pg(Schutzgruppe)-CO-OtBu (Boc) ist, kann in Schritt (b) di-tert-Butyldicarbonat (Boc2O) eingesetzt werden und eine Base wie Triethylamin in einem Lösungsmittel wie Dichlormethan. Bevorzugt wird di-tert-Butyldicarbonat (Boc2O) in einem leichten Überschuss (besonders bevorzugt etwa 1,02 eq) eingesetzt. Bevorzugt wird die Base im Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt 2–3 eq). Bevorzugt wird die Reaktion unter einer Schutzgasatmosphäre bestehend aus Stickstoff durchgeführt. Nach der wässrigen Aufarbeitung ist keine weitere Reinigung vom Produkt Ester 3 nötig. Bevorzugt wird Ester 3 in einer Ausbeute von 98%, 99%, 99,5%, 899,9% oder mehr erhalten.When -Pg (protecting group) is -CO-OtBu (Boc), di-tert-butyl dicarbonate (Boc 2 O) may be used in step (b) and a base such as triethylamine in a solvent such as dichloromethane. Preferably, di-tert-butyl dicarbonate (Boc 2 O) is used in a slight excess (more preferably about 1.02 eq). Preferably, the base is used in excess (more preferably 2-3 eq). The reaction is preferably carried out under a protective gas atmosphere consisting of nitrogen. After the aqueous workup no further purification of the product ester 3 is necessary. Preferably, ester 3 is obtained in a yield of 98%, 99%, 99.5%, 899.9% or more.

Stufe (c) kann ausgehend von einem Aldehyd oder Keton oder einem Derivat davon durchgeführt werden unter Bildung des Acetals oder Ketals 4. Die Reaktion kann durch Säure oder Lewis Säure katalysiert werden. Nach der wässrigen Aufarbeitung kann das Produkt Ester 4 durch Filtration über Kieselgel unter Anwendung von zum Beispiel n-Hexan und/oder Essigsäureethylester als Eluent gereinigt werden. Vorzugsweise wird Ester 4 in einer Ausbeute von 75%, 80%, 84% oder mehr erhalten.Step (c) may be carried out starting from an aldehyde or ketone or a derivative thereof to form the acetal or ketal 4. The reaction may be catalyzed by acid or Lewis acid. After the aqueous workup, the product ester 4 can be purified by filtration through silica gel using, for example, n-hexane and / or ethyl acetate as the eluent. Preferably, ester 4 is obtained in a yield of 75%, 80%, 84% or more.

R1 und R2 sind unabhängig voneinander Wasserstoff, ein optional substituierter C1-C6 Alkylrest oder ein optional substituierter Phenyl-Rest, oder R1 und R2 können zusammen einen optional substituierten C4-C7 Cycloalkylrest bilden. Optionale Substituenten schließen -F, -Cl, -Br, -I, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -SH, -NH2, -CN, -NO2, -OMe, -SMe, -NMe2, -CO2H, -CHO und -CO2Me ein.R 1 and R 2 are independently hydrogen, an optionally substituted C 1 -C 6 alkyl radical or an optionally substituted phenyl radical, or R 1 and R 2 may together form an optionally substituted C 4 -C 7 cycloalkyl radical. Optional substituents include -F, -Cl, -Br, -I, -CF 3 , -CCl 3 , -CBr 3 , -CI 3 , -OH, -SH, -NH 2 , -CN, -NO 2 , -OMe , -SMe, -NMe 2 , -CO 2 H, -CHO and -CO 2 Me.

In einer bevorzugten Ausführungsart sind R1 und R2 beide Methyl. Dann kann Schritt (c) unter Nutzung von 2,2-Dimethoxypropan und einer Säure, Aceton und einer Säure, 2-Methoxypropen und einer Lewis Säure, Aceton und Iod oder Kupfersulfat oder 2-Chlor-2-methoxypropan und einer Säure durchgeführt werden. In einer bevorzugten Ausführungsart kann in Schritt (c) 2,2-Dimethoxypropan und eine Säure, wie Toluolsulfonsäure in einem Lösungsmittel, wie Dichlormethan eingesetzt werden. Bevorzugt wird das 2,2-Dimethoxypropan im Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt 4–6 eq). Bevorzugt wird die Säure in katalytischen Mengen (besonders bevorzugt 0,1–0,2 eq) eingesetzt. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 1–4 Tagen durchgeführt werden.In a preferred embodiment, R 1 and R 2 are both methyl. Then, step (c) can be carried out using 2,2-dimethoxypropane and an acid, acetone and an acid, 2-methoxypropene and a Lewis acid, acetone and iodine or copper sulfate or 2-chloro-2-methoxypropane and an acid. In a preferred embodiment, step (c) may employ 2,2-dimethoxypropane and an acid such as toluenesulfonic acid in a solvent such as dichloromethane. Preferably, the 2,2-dimethoxypropane is used in excess (particularly preferably 4-6 eq). The acid is preferably used in catalytic amounts (particularly preferably 0.1-0.2 eq). The reaction can be carried out at room temperature in 1-4 days.

Die Reduktion in Stufe (d) kann mit LiAlH4, DIBAL, NaBH4 und LiCl, NaBH4 und AlCl3, BH3/THF, LiBEt3H, NaAlEt2H2, oder Wasserstoff und einem Katalysator durchgeführt werden. In einer bevorzugten Ausführungsart kann die Reduktion in Schritt (d) unter Nutzung von LiAlH4 in einem Lösungsmittel wie THF durchgeführt werden. Bevorzugt wird das LiAlH4 im Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt 1,5–2 eq). Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 1–24 Stunden durchgeführt werden. Nach einer wässrigen Aufarbeitung braucht das Produkt, Alkohol 5, nicht werter gereinigt werden. Bevorzugt wird der Alkohol 5 in einer Ausbeute von 84%, 90%, 95% oder mehr erhalten.The reduction in step (d) can be carried out with LiAlH 4 , DIBAL, NaBH 4 and LiCl, NaBH 4 and AlCl 3 , BH 3 / THF, LiBEt 3 H, NaAlEt 2 H 2 , or hydrogen and a catalyst. In a preferred embodiment, the reduction in step (d) can be carried out using LiAlH 4 in a solvent such as THF. Preferably, the LiAlH 4 is used in excess (particularly preferably 1.5-2 eq). The reaction can be carried out at room temperature in 1-24 hours. After an aqueous work-up, the product, alcohol 5, does not need to be purified. Preferably, the alcohol 5 is obtained in a yield of 84%, 90%, 95% or more.

In einer Ausführungsart wird substanziell enantiomerenreines L-Serin 1a eingesetzt, um substanziell enantiomerenreinen Alkohol 5a zu erhalten. Bevorzugt wird substanziell enantiomerenreiner Alkohol 5a zu substanziell enantiomerenreinem Aldehyd 6a umgesetzt. Bevorzugt wird substanziell enantiomerenreiner Aldehyd 6a zu substanziell enantiomerenereinem Alkin 7a oder 7c umgesetzt.In one embodiment, substantially enantiomerically pure L-serine 1a is used to obtain substantially enantiomerically pure alcohol 5a. Substantially enantiomerically pure alcohol 5a is preferably reacted to give substantially enantiomerically pure aldehyde 6a. Preferably, substantially enantiomerically pure aldehyde 6a is converted to substantially enantiomeric alkyne 7a or 7c.

Figure 00070001
Figure 00070001

In einer alternativen Ausführungsart wird substanziell enantiomerenreines L-Serin 1e eingesetzt, um substanziell enantiomerenreinen Alkohol 5e zu erhalten. Bevorzugt wird substanziell enantiomerenreiner Alkohol 5e zu substanziell enantiomerenreinem Aldehyd 6e umgesetzt. Bevorzugt wird substanziell enantiomerenreiner Aldehyd 6e zu substanziell enantiomerenereinem Alkin 7e oder 7g umgesetzt.In an alternative embodiment, substantially enantiomerically pure L-serine 1e is used to obtain substantially enantiomerically pure alcohol 5e. Substantially enantiomerically pure alcohol 5e is preferably reacted to give substantially enantiomerically pure aldehyde 6e. Preferably, substantially enantiomerically pure aldehyde 6e is converted to substantially enantiomeric alkyne 7e or 7g.

Figure 00070002
Figure 00070002

In einer Ausführungsart wird Alkin 7R in O-trans-2-Amin-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Ri überführt oder ein Streoisomer davon und/oder ein Derivat davon unter Nutzung eines Prozesses, der einen oder mehrere Schritte (g) bis (j) beinhaltet:

  • (g) teilweises Entschützen von Alkin 7R zu Alkin 8R:
    Figure 00080001
  • (h) Reduktion der Dreifachbindung in Alkin 8R zu einer trans-Doppelbindung unter Bildung von Alken 9Ri:
    Figure 00080002
  • (i) Phosphorylierung der primären Hydroxylgruppe von 9Ri zu Phosphat 10Ri:
    Figure 00080003
  • (j) Entschützen von Phosphat 10Ri unter Bildung von O-trans-2-Amino-3-Hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Ri oder ein Stereoisomer davon:
    Figure 00080004
In one embodiment, alkyne 7R is converted to O-trans-2-amine-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Ri or a streight isomer thereof and / or a derivative thereof using a process comprising one or more Steps (g) to (j) include:
  • (g) partial deprotection of alkyne 7R to alkyne 8R:
    Figure 00080001
  • (h) Reduction of the triple bond in alkyne 8R to a trans double bond to give alkene 9Ri:
    Figure 00080002
  • (i) Phosphorylation of the primary hydroxyl group of 9Ri to phosphate 10Ri:
    Figure 00080003
  • (j) deprotecting phosphate 10Ri to give O-trans-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Ri or a stereoisomer thereof:
    Figure 00080004

Bevorzugt enthält der Prozess der vorliegenden Erfindung zwei, drei oder alle vier Schritte (g) bis (j)Preferably, the process of the present invention comprises two, three or all four steps (g) to (j)

Bevorzugt wird substanziell enantiomerenreines Alkin 7a, 7c, 7e oder 7g in substanziell enantiomerenreines Sphingosin-1-phosphat 11a, 11c, 11e oder 11g überführt.Substantially enantiomerically pure alkyne 7a, 7c, 7e or 7g is preferably converted into substantially enantiomerically pure sphingosine 1-phosphate 11a, 11c, 11e or 11g.

Figure 00090001
Figure 00090001

In einer alternativen Ausführungsart wird Alkin 7R in O-cis-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Rii oder ein Stereoisomer davon und/oder ein Derivat davon überführt, wobei der Prozess einen oder mehrere Schritte (g) bis (j) enthält:

  • (g) teilweises Entschützen von Alkin 7R unter Bildung von Alkin 8R:
    Figure 00090002
  • (h) Reduktion der Dreifachbindung von Alkin SR zu einer cis Doppelbindung unter Bildung von Alken 9Rii:
    Figure 00090003
  • (i) Phosphorylierung der primären Hydroxylfunktion in Alken 9Rii unter Bildung von 10Rii:
    Figure 00100001
  • (j) Entschützen von Phosphat 10Rii unter Bildung von O-cis-2-Amino-3-Hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Rii oder ein Stereoisomer davon:
    Figure 00100002
In an alternative embodiment, alkyne 7R is converted to O-cis-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Rii or a stereoisomer thereof and / or a derivative thereof, the process comprising one or more steps (g) to (j) contains:
  • (g) partial deprotection of alkyne 7R to give alkyne 8R:
    Figure 00090002
  • (h) Reduction of the triple bond of alkyne SR to a cis double bond to give alkene 9Rii:
    Figure 00090003
  • (i) Phosphorylation of the primary hydroxyl function in alkene 9Rii to give 10Rii:
    Figure 00100001
  • (j) deprotecting phosphate 10Rii to give O-cis-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Rii or a stereoisomer thereof:
    Figure 00100002

Bevorzugt enthält der Prozess der vorliegenden Erfindung zwei, drei oder alle vier Schritte (g) bis (j)Preferably, the process of the present invention comprises two, three or all four steps (g) to (j)

Bevorzugt wird substanziell enantiomerenreines Alkin 7b, 7d, 7f oder 7h in substanziell enantiomerenreines Sphingosin-1-phosphat 11b, 11d, 11f oder 11h überführt:

Figure 00100003
Substantially enantiomerically pure alkyne 7b, 7d, 7f or 7h is preferably converted into substantially enantiomerically pure sphingosine 1-phosphate 11b, 11d, 11f or 11h:
Figure 00100003

Schritt (e) kann durch eine Swern Oxidation durchgeführt werden, wobei Oxalylchlorid, DMSO und eine Base, wie Hünig-Base (N,N-Diisopropylethylamin) in einem Lösungsmittel, wie Dichlormethan eingesetzt wird.Step (e) may be carried out by Swern oxidation using oxalyl chloride, DMSO and a base such as Hünig's base (N, N-diisopropylethylamine) in a solvent such as dichloromethane.

Bevorzugt wird das Oxalylchlorid im Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt etwa 1,5 eq). Bevorzugt wird das DMSO im Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt etwa 3 eq). Bevorzugt wird Hünig-Base im Überschuss eingesetzt (mehr bevorzugt 4–5,5 eq, besonders bevorzugt 4,3–5eq.). Die Erfinder der vorliegenden Entwicklung haben festgestellt, dass weniger als 5,5 eq. Hünig-Base nötig sind, damit die Reaktion unter vollständigem Umsatz abläuft. Demzufolge wird Schritt (e) bevorzugt unter Einsatz von Oxalylchlorid, DMSO und weniger als 5,5 eq. Hünig-Base durchgeführt.Preferably, the oxalyl chloride is used in excess (more preferably about 1.5 eq). Preferably, the DMSO is used in excess (more preferably about 3 eq). Preference is given to using Hünig base in excess (more preferably 4-5.5 eq, particularly preferably 4.3-5 eq.). The present inventors have found that less than 5.5 eq. Hünig base are necessary so that the reaction proceeds under complete conversion. Accordingly, step (e) is preferably carried out using oxalyl chloride, DMSO and less than 5.5 eq. Hünig-Base performed.

Swern Oxidationen, besonders die Reaktion von DMSO und Oxalylchlorid werden bei niedrigen Temperaturen, gewöhnlich –78°C durchgeführt. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben entdeckt, dass es möglich ist Schritt (e) bei einer Temperatur nicht niedriger als –70°C durchzuführen. Also wird Schritt (e) bevorzugt bei einer Temperatur nicht tiefer als –70°C durchgeführt. Sehr bevorzugt wird die Reaktion von DMSO und Oxalylchlorid (die Bildung eines Dimethylchlorosulfoniumdichlorid Intermediates) bei einer Temperatur von –40°C bis –70°C durchgeführt, mehr bevorzugt bei –40°C bis –60°C, noch mehr bevorzugt bei –40°C bis –55°C, am meisten bevorzugt bei –40°C bis –50°C. Bevorzugt wird die folgende Addition von Alkohol 5 (Bildung einer Alkoxysulfonium Ion Zwischenstufe) bei einer Temperatur von –40°C bis –70°C durchgeführt, sehr bevorzugt bei –40°C bis –60°C, mehr bevorzugt bei –40°C bis –55°C, am meisten bevorzugt bei –40°C bis –50°C.Swern oxidations, especially the reaction of DMSO and oxalyl chloride, are carried out at low temperatures, usually -78 ° C. The inventors of the present invention have discovered that it is possible to carry out step (e) at a temperature not lower than -70 ° C. Thus, step (e) is preferably carried out at a temperature not lower than -70 ° C. Most preferably, the reaction of DMSO and oxalyl chloride (the formation of a dimethylchlorosulfonium dichloride intermediate) is conducted at a temperature of from -40 ° C to -70 ° C, more preferably at -40 ° C to -60 ° C, even more preferably at -40 ° C to -55 ° C, most preferably from -40 ° C to -50 ° C. Preferably, the following addition of alcohol 5 (formation of an alkoxysulfonium ion intermediate) is carried out at a temperature of -40 ° C to -70 ° C, more preferably at -40 ° C to -60 ° C, more preferably at -40 ° C to -55 ° C, most preferably from -40 ° C to -50 ° C.

Die Swern Oxidation in Schritt (e) kann bei einer Temperatur nicht niedriger als –70°C in 2–10 Stunden durchgeführt werden. Bevorzugt wird die Reaktion unter ein Schutzgasatmosphäre von Stickstoff durchgeführt. Nach einer wässrigen Aufarbeitung braucht das Produkt Aldehyd 6 nicht weiter gereinigt werden. Bevorzugt wird der Aldehyd 6 in einer Ausbeute von 75%, 80%, 85%, 90%, 94% oder mehr erhalten.The Swern oxidation in step (e) can be carried out at a temperature not lower than -70 ° C in 2-10 hours. Preferably, the reaction is carried out under a protective gas atmosphere of nitrogen. After an aqueous work-up, the product aldehyde 6 need not be further purified. Preferably, the aldehyde 6 is obtained in a yield of 75%, 80%, 85%, 90%, 94% or more.

Das bevorzugte 1-Alkin HCΞCR3, das in Schritt (f) eingesetzt wird, ist 1-Pentadecin HCΞC-C13H27. The preferred 1-alkyne HCΞCR 3 used in step (f) is 1-pentadecine HCΞC-C 13 H 27 .

Schritt (f) kann unter Nutzung von einem 1-Alkin (bevorzugt 1-pentadecin) und einer Base wie einem Organolithium Reagenz oder einem Grignard-Reagenz in einem Lösungsmittel wie THF durchgeführt werden, um ein erythro Isomer zu erhalten (bevorzugt erythro Isomer 7a oder 7g). Bevorzugte Organolithium Reagenzien sind Butyllithium, Methyllithium und Phenyllithium. Besonders bevorzugt ist Butyllithium. Optional kann die Reaktion in Gegenwart von Additiven, wie HMPA, TMEDA oder Tributoxyzirkoniumchlorid durchgeführt werden.Step (f) may be carried out using a 1-alkyne (preferably 1-pentadecine) and a base such as an organolithium reagent or a Grignard reagent in a solvent such as THF to obtain an erythro isomer (preferably erythro isomer 7a or 7g). Preferred organolithium reagents are butyllithium, methyllithium and phenyllithium. Particularly preferred is butyllithium. Optionally, the reaction may be carried out in the presence of additives such as HMPA, TMEDA or tributoxyzirconium chloride.

Figure 00110001
Figure 00110001

Alternativ kann Stufe (f) unter Einsatz von einem 1-Alkin (bevorzugt 1-Pentadecin) und einer Base, wie ein Organolithium Reagenz oder Grignard-Reagenz in einem Lösungsmittel, wie THF in Gegenwart von Zinkbromid oder Kupferiodid durchgeführt werden, um das threo-Isomer (bevorzugt threo-Isomer 7c oder 7e) zu erhalten. Bevorzugte Organolithium-Reagenzien sind Butyllithium, Methyllithium und Phenyllithium. Besonders bevorzugt ist Butyllithium.Alternatively, step (f) may be carried out using a 1-alkyne (preferably 1-pentadecine) and a base such as an organolithium reagent or Grignard reagent in a solvent such as THF in the presence of zinc bromide or copper iodide to give the threo Isomer (preferably threo isomer 7c or 7e) to obtain. Preferred organolithium reagents are butyllithium, methyllithium and phenyllithium. Particularly preferred is butyllithium.

Figure 00120001
Figure 00120001

Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben gefunden, dass eine bessere Ausbeute erzielt werden kann, wenn Stufe (f) unter Einsatz von mindestens 1,5 eq 1-Alkin durchgeführt wird. Also wird Stufe (f) bevorzugt unter Einsatz von 1-Alkin im Überschuss, sehr bevorzugt mindestens 1,5 eq, besonders bevorzugt 1,8–2 eq durchgeführt. Bevorzugt wird die Base im Überschuss eingesetzt (mindestens 1,5 eq, bevorzugt 1,6–2 eq, mehr bevorzugt 1,64,8 eq). Die Reaktion kann bei einer Temperatur von –60°C bis –10°C durchgeführt werden, bevorzugt bei –50°C bis –15°C, mehr bevorzugt bei –40°C bis –20°C, in 4–8 Stunden. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben herausgefunden, dass Alkin 7R durch Abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Alkin gereinigt werden kann. Bevorzugt wird Alkin 7R in einer Ausbeute von 75%, 80%, 84%, 87% oder mehr erhalten.The inventors of the present invention have found that a better yield can be achieved when step (f) is carried out using at least 1.5 eq 1-alkyne. Thus, step (f) is preferably carried out using 1-alkyne in excess, very preferably at least 1.5 eq, particularly preferably 1.8-2 eq. Preferably, the base is used in excess (at least 1.5 eq, preferably 1.6-2 eq, more preferably 1.64.8 eq). The reaction may be carried out at a temperature of -60 ° C to -10 ° C, preferably at -50 ° C to -15 ° C, more preferably at -40 ° C to -20 ° C, in 4-8 hours. The inventors of the present invention have found that alkyne 7R can be purified by distilling off unreacted 1-alkyne. Preferably, alkyne 7R is obtained in a yield of 75%, 80%, 84%, 87% or more.

Schritt (g) kann unter Säurekatalyse durchgeführt werden. in einer bevorzugten Ausführungsart kann Schritt (g) unter Verwendung von Amberlyst® 15 in einem Lösungsmittel wie Methanol durchgeführt werden. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 10–100 Stunden durchgeführt werden. Nach einer wässrigen Aufarbeitung kann das Produkt Alkin 8R durch Filtration über Kieselgel gereinigt werden, mit n-Hexan und/oder Essigsäureethylester als Eluent. Bevorzugt wird Alkin 8R in einer Ausbeute von 45%, 48%, 50%, 60%, 70% oder mehr erhalten.Step (g) can be carried out under acid catalysis. in a preferred embodiment, step (g) are carried out in a solvent such as methanol 15 using Amberlyst ®. The reaction can be carried out at room temperature in 10-100 hours. After an aqueous work-up, the product alkyne 8R can be purified by filtration through silica gel, with n-hexane and / or ethyl acetate as the eluent. Preferably, alkyne 8R is obtained in a yield of 45%, 48%, 50%, 60%, 70% or more.

Die Reduktion in Stufe (h) wird bevorzugt unter Einsatz eines Reduktionsmittels, das die Dreifachbindung von Alkin 8R zu einer trans Doppelbindung reduziert, durchgeführt, um zur Bildung von Alken 9Ri zu führen, wie Natrium in flüssigem Ammoniak oder Red-Al. In einer bevorzugten Ausführungsart wird die trans-Reduktion in Stufe (h) unter Einsatz von Red-Al in einem Lösungsmittel wie THF durchgeführt.The reduction in step (h) is preferably carried out using a reducing agent that reduces the triple bond of alkyne 8R to a trans double bond to result in the formation of alkene 9Ri, such as sodium in liquid ammonia or Red-Al. In a preferred embodiment, the trans reduction in step (h) is carried out using Red-Al in a solvent such as THF.

Bevorzugt wird Red-Al im Überschuss verwendet (bevorzugt 3–5 eq, besonders bevorzugt 4–4,5 eq). Die Reaktion kann bei einer Temperatur zwischen 0°C und Raumtemperatur in 15–20 Stunden durchgeführt werden.Preferably, Red-Al is used in excess (preferably 3-5 eq, more preferably 4-4.5 eq). The reaction can be carried out at a temperature between 0 ° C and room temperature in 15-20 hours.

Alternativ kann die Reduktion in Schritt (h) unter Verwendung einer Reduktionsmittels, das die Dreifachbindung von Alkin 8R zu einer cis-Doppelbindung unter Bildung von Alken 9Rii reduziert, wie Wasserstoff und einem Katalysator wie Pd auf Bariumsulfat, Wasserstoff und einem Katalysator wie aktiviertes Zink, Ameisensäure und einem Übergangsmetallkatalysator, DIBAL, Isobutylmagnesiumchlorid und cp2TiCl2 oder einem Dialkylborhydrid wie Dicyclohexylborhydrid (cy2BH) in Essigsäure, bis(1,2-Dimethylpropyl)borhydrid (Sia2BH) in Essigsäure oder 9BBN in Methanol. In einer bevorzugten Ausführungsart kann die cis-Reduktion in Stufe (h) unter Nutzung von Wasserstoff und Palladium auf Bariumsulfat in Gegenwart von Chinolin in einem Lösungsmittel, wie Diethylether durchgeführt werden. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 15–20 Stunden durchgeführt werden.Alternatively, the reduction in step (h) can be accomplished by using a reducing agent which reduces the triple bond of alkyne 8R to a cis double bond to form alkene 9Rii, such as hydrogen and a catalyst such as Pd on barium sulfate, hydrogen and a catalyst such as activated zinc, Formic acid and a transition metal catalyst, DIBAL, isobutylmagnesium chloride and cp 2 TiCl 2 or a Dialkyl borohydride such as dicyclohexylborohydride (cy 2 BH) in acetic acid, bis (1,2-dimethylpropyl) borohydride (Sia 2 BH) in acetic acid or 9BBN in methanol. In a preferred embodiment, the cis reduction in step (h) can be carried out using hydrogen and palladium on barium sulfate in the presence of quinoline in a solvent such as diethyl ether. The reaction can be carried out at room temperature in 15-20 hours.

Nach einer wässrigen Aufarbeitung benötigt das Produkt, Alken 9Ri oder 9Rii keine weitere Reinigung. Bevorzugt wird das Alken 9Ri oder 9Rii in einer Ausbeute von 75%, 80%, 85%, 90%, 95% oder mehr erhalten.After an aqueous workup, the product, Alken 9Ri or 9Rii requires no further purification. Preferably, the alkene 9Ri or 9Rii is obtained in a yield of 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or more.

Stufe (i) kann unter Einsatz von Phosphorsäure, einem Phosphorsäurederivat wie einem Ester, Chlorid, Bromid, Fluorid oder Anhydrid oder Trimethylphosphit, Tetrabrommethan und einer Base ausgeführt werden. Bevorzugt wird Stufe (i) mit Trimethylphosphit, Tetrabrommethan und einer Base wie Pyridin, die auch als Lösemittel dienen kann, durchgeführt. Bevorzugt wird Trimethylphosphit im Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt ungefähr 1,25–1,7 eq). Bevorzugt wird Tetrabrommethan im Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt etwa 1,1–1,5 eq). Bevorzugt wird Pyridin in einem grollen Überschuss eingesetzt und dient also auch als Lösungsmittel. Die Reaktion kann bei einer Temperatur von 0°C bis Raumtemperatur in 5–10 Stunden durchgeführt werden. Nach einer wässrigen Aufarbeitung kann das Produkt, Phosphat 10Ri oder 10Rii durch Filtration über Kieselgel, mit zum Beispiel n-Hexan und/oder Essigsäureethylester als Eluenten, gereinigt werden. Bevorzugt wird Phosphat 10Ri oder 10Rii in einer Ausbeute von 40%, 50%, 60%, 64% oder mehr erhalten.Step (i) may be carried out using phosphoric acid, a phosphoric acid derivative such as an ester, chloride, bromide, fluoride or anhydride or trimethyl phosphite, tetrabromomethane and a base. Preferably, step (i) is carried out with trimethyl phosphite, tetrabromomethane and a base such as pyridine, which may also serve as a solvent. Preferably, trimethyl phosphite is used in excess (more preferably about 1.25-1.7 eq). Preference is given to using tetrabromomethane in excess (more preferably about 1.1-1.5 eq). Preferably, pyridine is used in a large excess and thus also serves as a solvent. The reaction can be carried out at a temperature of 0 ° C to room temperature in 5-10 hours. After an aqueous work-up, the product, phosphate 10Ri or 10Rii can be purified by filtration through silica gel with, for example, n-hexane and / or ethyl acetate as eluent. Preferably, phosphate 10Ri or 10Rii is obtained in a yield of 40%, 50%, 60%, 64% or more.

Stufe (j) kann unter Verwendung von Trimethylsilylbromid in einem Lösungsmittel, wie Dichlormethan durchgeführt werden. Bevorzugt wird Trimethylsilylbromid im Überschuss verwendet (mehr bevorzugt 3–6 eq, noch mehr bevorzugt etwa 4,5 eq). Die Reaktion kann bei einer Temperatur von 0°C bis Raumtemperatur in 2–10 Stunden erfolgen. Nach einer wässrigen Aufarbeitung kann das Produkt O-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Ri oder 11Rii durch Kristallisation aus einem Solvens wie THF und/oder Wasser gereinigt werden. Bevorzugt wird das O-2-Amin-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Ri oder 11Rii in einer Ausbeute von 65%, 68%, 75%, 85% oder mehr erhalten.Step (j) may be carried out using trimethylsilyl bromide in a solvent such as dichloromethane. Preferably, trimethylsilyl bromide is used in excess (more preferably 3-6 eq, even more preferably about 4.5 eq). The reaction can be carried out at a temperature of 0 ° C to room temperature in 2-10 hours. After an aqueous workup, the product O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Ri or 11Rii can be purified by crystallization from a solvent such as THF and / or water. Preferably, the O-2-amine-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Ri or 11Rii is obtained in a yield of 65%, 68%, 75%, 85% or more.

Eine bevorzugte Ausführungsart der vorliegenden Erfindung ist ein Prozess zur Darstellung von Sphingosin-1-phosphat 11a oder einem Stereosiomer davon und/oder einem Derivat davon beinhaltet einen oder mehrere Schritte (a) bis (j):

  • (a) Umsetzung von L-Serin 1a zu Methylester 2a oder einem Salz davon:
    Figure 00140001
  • (b) Schutz der Aminofunktion von Methylester 2a oder einem Salz davon unter Bildung von Methylester 3a, wobei Pg eine Schutzgruppe ist:
    Figure 00140002
  • (c) Schutz der primären Hydroxylgruppe und der Aminogruppe von Methylester 3a unter Bildung von Methylester 4a, wobei R1 und R2 unabhängig voneinander Wasserstoff, ein optional substituierter C1-C6 Alkylrest oder eine optional substituierter Phenylrest sein können oder R1 und R2 zusammen einen optional substituierten C4-C7 Cycloalkylrest formen können:
    Figure 00140003
  • (d) Reduktion von Methylester 4a unter Bildung von Alkohol 5a:
    Figure 00140004
  • (e) Oxidation von Alkohol 5a unter Bildung von Aldehyd 6a:
    Figure 00150001
  • (f) Reaktion von Aldehyd 6a mit 1-Pentadekin und einer Base unter Bildung von Alkin 7a:
    Figure 00150002
  • (g) teilweises Entschützen von Alkin 7a unter Bildung von Alkin 8a:
    Figure 00150003
  • (h) Reduktion der Dreifachbindung von Alkin 8a zu einer trans-Doppelbindung unter Bildung von Alken 9a:
    Figure 00150004
  • (i) Phosphorylierung der primären Hydroxyl-Gruppe von Alken 9a unter Bildung von Phosphat 10a:
    Figure 00150005
  • (j) Entschützen von Phosphat 10a unter Bildung von Sphingosin-1-phosphat 11a:
    Figure 00160001
    wobei der Prozess mindestens einen der folgenden Punkte beinhaltet:
  • – Stufe (e) wird unter Einsatz von Oxalylchlorid, DMSO und weniger als 5,5 Äquivalente Hünig-Base durchgeführt;
  • – Stufe (e) wird bei einer Temperatur nicht unter –70°C durchgeführt;
  • – Stufe (f) wird unter Einsatz von mindestens 1,5 Äquivalenten 1-Pentadecin durchgeführt; oder
  • – Reinigung von Alkin 7a, das in Stufe (f) erhalten wird, durch Abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Pentadecin.
A preferred embodiment of the present invention is a process for preparing sphingosine 1-phosphate 11a or a stereoisomer thereof and / or a derivative thereof includes one or more steps (a) to (j):
  • (a) Reaction of L-serine 1a to methyl ester 2a or a salt thereof:
    Figure 00140001
  • (b) protecting the amino function of methyl ester 2a or a salt thereof to form methyl ester 3a, where Pg is a protecting group:
    Figure 00140002
  • (c) protecting the primary hydroxyl group and the amino group of methyl ester 3a to form methyl ester 4a, wherein R 1 and R 2 can independently be hydrogen, an optionally substituted C 1 -C 6 alkyl group or an optionally substituted phenyl group, or R 1 and R 2 together form an optionally substituted C 4 -C 7 cycloalkyl radical:
    Figure 00140003
  • (d) Reduction of methyl ester 4a to give alcohol 5a:
    Figure 00140004
  • (e) oxidation of alcohol 5a to give aldehyde 6a:
    Figure 00150001
  • (f) Reaction of aldehyde 6a with 1-pentadekin and a base to give alkyne 7a:
    Figure 00150002
  • (g) partial deprotection of alkyne 7a to give alkyne 8a:
    Figure 00150003
  • (h) Reduction of the triple bond of alkyne 8a to a trans double bond to give alkene 9a:
    Figure 00150004
  • (i) Phosphorylation of the primary hydroxyl group of alkene 9a to give phosphate 10a:
    Figure 00150005
  • (j) Deprotecting phosphate 10a to form sphingosine 1-phosphate 11a:
    Figure 00160001
    the process includes at least one of the following:
  • Step (e) is carried out using oxalyl chloride, DMSO and less than 5.5 equivalents of Hünig's base;
  • - Step (e) is carried out at a temperature not lower than -70 ° C;
  • Step (f) is carried out using at least 1.5 equivalents of 1-pentadecine; or
  • - Purification of alkyne 7a, which is obtained in step (f), by distilling off unreacted 1-pentadecine.

Vorzugsweise beinhaltet der Prozess 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 oder alle zehn Stufen (a) bis (j).Preferably, the process includes 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or all ten stages (a) through (j).

Die Veresterung in Stufe (a) kann beispielsweise durch eine säurekatalysierte Veresterung durchgeführt werden; unter Einsatz eines Carbodiimides, wie N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC); durch Aktivierung der Carbonsäure-Funktionalität von L-Serin 1a durch Umwandlung in ein Säurechlorid; oder durch Aktivierung der Carbonsäure-Funktionalität des L-Serins 1a durch Umsetzung zu einem Säureanhydrid. Nach einer wässrigen Aufarbeitung muss das Produkt von Stufe (a), Methylester 2a oder ein Salz davon, nicht weiter gereinigt werden. Vorzugsweise wird der Methylester 2a oder ein Salz davon in einer Ausbeute von 98%, 99%, 99,5%, 99,9% oder mehr erhalten. Ein bevorzugtes Salz, das in Stufe (a) erhalten wird, ist das Hydrochlorid 2x. In einer besonders bevorzugten Ausführungsart kann die Veresterung in Stufe (a) unter Einsatz von Thionylchlorid und Methanol durchgeführt werden. Vorzugsweise wird das Thionylchlorid in leichtem Überschuss (vorzugsweise 1,05 Äquivalente) eingesetzt. Vorzugsweise wird das Reaktionsgemisch 10–30 Stunden refluxiert. Wenn Thionylchlorid und Methanol in Stufe (a) eingesetzt werden, wird Methylester 2a als das Hydrochlorid-Satz 2x erhalten:

Figure 00160002
The esterification in step (a) can be carried out, for example, by an acid-catalyzed esterification; using a carbodiimide such as N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC); by activation of the carboxylic acid functionality of L-serine 1a by conversion to an acid chloride; or by activation of the carboxylic acid functionality of L-serine 1a by conversion to an acid anhydride. After an aqueous workup, the product of step (a), methyl ester 2a or a salt thereof need not be further purified. Preferably, the methyl ester 2a or a salt thereof is obtained in a yield of 98%, 99%, 99.5%, 99.9% or more. A preferred salt obtained in step (a) is the hydrochloride 2x. In a particularly preferred embodiment, the esterification in step (a) can be carried out using thionyl chloride and methanol. Preferably, the thionyl chloride is used in slight excess (preferably 1.05 equivalents). Preferably, the reaction mixture is refluxed for 10-30 hours. When thionyl chloride and methanol are used in step (a), methyl ester 2a is obtained as the hydrochloride set 2x:
Figure 00160002

Wenn Pg -CO-OtBu (Boc) ist, kann Stufe (b) unter Nutzung von di-tert.-Butyldicarbonat (Boc2O) und eine Base, wie Triethylamin in einem Lösungsmittel, wie Dichlormethan durchgeführt werden. Vorzugsweise wird das di-tert.-Butyldicarbonat in einem leichten Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt etwa 1,02 Äquivalente). Vorzugsweise wird die Base im Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt 2–3 Äquivalente), Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 10–20 Stunden durchgeführt werden. Vorzugsweise wird die Reaktion unter einer Schutzgasatmosphäre aus Stickstoff durchgeführt. Nach einer wässrigen Aufarbeitung braucht das Produkt Methylester 3a nicht weiter gereinigt werden. Vorzugsweise wird das Produkt, Methylester 3a, in einer Ausbeute von 98%, 99%, 99,5%, 99,9% oder mehr erhalten.When Pg is -CO-OtBu (Boc), step (b) can be carried out using di-tert-butyl dicarbonate (Boc 2 O) and a base such as triethylamine in a solvent such as dichloromethane. Preferably, the di-tert-butyl dicarbonate is used in a slight excess (more preferably about 1.02 equivalents). Preferably, the base is used in excess (more preferably 2-3 equivalents). The reaction can be carried out at room temperature in 10-20 hours. Preferably, the reaction is carried out under a protective gas atmosphere of nitrogen. After an aqueous work-up, the product methyl ester 3a need not be further purified. Preferably, the product, methyl ester 3a, is obtained in a yield of 98%, 99%, 99.5%, 99.9% or more.

Stufe (c) kann unter Einsatz eines Aldehydes oder Ketones oder eines Derivates davon durchgeführt werden unter Bildung eines Acetales oder Ketales 4a. Die Reaktion kann durch Säure oder Lewis-Säure katalysiert werden. Nach einer wässrigen Aufarbeitung kann das Produkt, Methylester 4a durch eine Filtration über Kieselgel unter Einsatz von n-Hexan und/oder Essigsäureethylester als Eluent gereinigt werden. Vorzugsweise wird Methylester 4a in einer Ausbeute von 75%, 80%, 84% oder mehr erhalten.Step (c) may be carried out using an aldehyde or ketone or a derivative thereof to form an acetal or ketal 4a. The reaction can be catalyzed by acid or Lewis acid. After an aqueous workup, the product, methyl ester 4a can be purified by filtration through silica gel using n-hexane and / or ethyl acetate as the eluent. Preferably, methyl ester 4a is obtained in a yield of 75%, 80%, 84% or more.

R1 und R2 sind unabhängig voneinander Wasserstoff, ein optional substituierter C1-C6 Alkyl-Rest, oder ein optional substituierter Phenyl-Rest, oder R1 und R2 formen zusammen einen optional substituierten C4-C6 Cycloalkyl-Rest. Optionale Substituenten schließen -F, -Cl, -Br, -I, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -SH, -NH2, -CN, -NO2, -OMe, -SMe, -NMe2, -CO2H, -CHO und -CO2Me mit ein.R 1 and R 2 are independently hydrogen, an optionally substituted C 1 -C 6 alkyl radical, or an optionally substituted phenyl radical, or R 1 and R 2 together form an optionally substituted C 4 -C 6 cycloalkyl radical. Optional substituents include -F, -Cl, -Br, -I, -CF 3 , -CCl 3 , -CBr 3 , -CI 3 , -OH, -SH, -NH 2 , -CN, -NO 2 , -OMe , -SMe, -NMe 2 , -CO 2 H, -CHO and -CO 2 Me.

In einer bevorzugten Ausführungsart sind R1 und R2 beide Methyl. Dann kann Stufe (c) unter Einsatz von 2,2-Dimethoxypropan und einer Säure, Aceton und einer Säure, 2-Methoxypropen und einer Säure oder Lewis Säure, Aceton und Iod oder Kupfersulfat oder 2-Chloro-2-methoxy-propan und einer Säure durchgeführt werden.In a preferred embodiment, R 1 and R 2 are both methyl. Then, step (c) can be carried out using 2,2-dimethoxypropane and an acid, acetone and an acid, 2-methoxypropene and an acid or Lewis acid, acetone and iodine or copper sulfate or 2-chloro-2-methoxy-propane and a Acid are carried out.

In einer besonders bevorzugten Ausführungsart kann Stufe (c) unter Einsatz von 2,2-Dimethoxypropan und einer Saure, wie Taluolsulfonsäure in einem Lösungsmittel, wie Dichlormethan durchgeführt werden. Vorzugsweise wird das 2,2-Dimethoxypropan im Überschuss (besonders bevorzugt 4–6 Äquivalente) eingesetzt. Vorzugsweise wird die Säure in katalytischen Mengen eingesetzt (besonders bevorzugt 0,1–0,2 Äquivalente. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 1–4 Tagen durchgeführt werden.In a particularly preferred embodiment, step (c) may be carried out using 2,2-dimethoxypropane and an acid such as toluenesulfonic acid in a solvent such as dichloromethane. Preferably, the 2,2-dimethoxypropane is used in excess (more preferably 4-6 equivalents). Preferably, the acid is used in catalytic amounts (more preferably 0.1-0.2 equivalents.) The reaction can be carried out at room temperature in 1-4 days.

Die Reduktion in Stufe (d) kann unter Einsatz von LiAlH4, DIBAL, NaBH4 und LiCl; NaBH4 und AlCl3, BH3/THF, AlH3, LiBEt3H, NaAlEt2H2 oder Wasserstoff und einem Katalysator durchgeführt werden. In einer bevorzugten Durchführungsart kann die Reduktion in Stufe (d) unter Einsatz von LiAlH4 in einem Lösungsmittel wie THF durchgeführt werden. Vorzugsweise wird das LiAlH4 im Überschuss (besonders bevorzugt 1,5–2 Äquivalente) eingesetzt. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 1–24 Stunden durchgeführt werden. Nach einer wässrigen Aufarbeitung, benötigt das Produkt, Alkohol 5a, keine weitere Reinigung. Vorzugsweise wird der Alkohol 5a in einer Ausbeute von 84%, 90%, 95% oder mehr erhalten.The reduction in step (d) can be carried out using LiAlH 4 , DIBAL, NaBH 4 and LiCl; NaBH 4 and AlCl 3 , BH 3 / THF, AlH 3 , LiBEt 3 H, NaAlEt 2 H 2 or hydrogen and a catalyst. In a In one preferred embodiment, the reduction in step (d) can be carried out using LiAlH 4 in a solvent such as THF. Preferably, the LiAlH 4 is used in excess (more preferably 1.5-2 equivalents). The reaction can be carried out at room temperature in 1-24 hours. After an aqueous work-up, the product, alcohol 5a, requires no further purification. Preferably, the alcohol 5a is obtained in a yield of 84%, 90%, 95% or more.

Stufe (e) kann mit Hilfe einer Swern Oxidation unter Einsatz von Oxalylchlorid, DMSO und einer Base, wie Hünig Base (N,N-Diisopropylamin) in einem Lösungsmittel, wie Dichlormethan durchgeführt werden. Vorzugsweise wird das Oxalylchlorid im Überschuss (besonders bevorzugt etwa 1,5 Äquivalente) eingesetzt. Vorzugsweise wird das DMSO im Überschuss (besonders bevorzugt etwa 3 Äquivalente) eingesetzt. Vorzugsweise wird die Hünig Base im Überschuss (besonders bevorzugt 4–5,5 Äquivalente, noch mehr bevorzugt 4,3–5 Äquivalente) eingesetzt. Die Erfinder der vorliegenden Entwicklung haben entdeckt, dass weniger als 5,5 Äquivalente Hünig Base notwendig sind, um die Reaktion vollständig ablaufen zu lassen. Demzufolge wird Stufe (e) vorzugsweise unter Einsatz von Oxalylchlorid, DMSO und weniger als 5,5 Äquivalente Hünig Base durchgeführt.Step (e) may be carried out by means of Swern oxidation using oxalyl chloride, DMSO and a base such as Hünig's base (N, N-diisopropylamine) in a solvent such as dichloromethane. Preferably, the oxalyl chloride is used in excess (more preferably about 1.5 equivalents). Preferably, the DMSO is used in excess (more preferably about 3 equivalents). Preferably, the Hünig base is used in excess (more preferably 4-5.5 equivalents, even more preferably 4.3-5 equivalents). The inventors of the present invention have discovered that less than 5.5 equivalents of Hünig base are necessary to complete the reaction. Accordingly, step (e) is preferably carried out using oxalyl chloride, DMSO and less than 5.5 equivalents of Hünig base.

Swern Oxidationen, insbesondere die Reaktion von DMSO und Oxalylchlorid werden bei niedrigen Temperaturen durchgeführt, gewöhnlich –78°C. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben festgestellt, dass es möglich ist Stufe (e) bei einer Temperatur nicht niedriger als –70°C durchzuführen. Also wird Stufe (e) vorzugsweise bei einer Temperatur nicht unter –70°C durchgeführt. Besonders bevorzugt wird die Reaktion von DMSO und Oxalylchlorid (Bildung eines Dimethylchlorosulfoniumchlorid Intermediates) bei einer Temperatur von –40°C bis –70°C durchgeführt, mehr bevorzugt bei –40°C bis –60°C am meisten bevorzugt zwischen –40°C und –50°C. Vorzugsweise wird die folgende Addition von Alkohol 5a (Bildung eines Alkoxysulfonium-Ion Intermediates) bei einer Temperatur von –40°C bis –70°C durchgeführt, besonders bevorzugt zwischen –40°C und –60°C, mehr bevorzugt zwischen –40°C und –55°C, am meisten bevorzugt zwischen –40°C und –50°C. Vorzugsweise wird die Addition der Base (Bildung des Produktes, Aldehyd 6a) bei einer Temperatur von –30°C bis –70°C, besonders bevorzugt zwischen –30°C und –60°C, mehr bevorzugt zwischen –30°C und –55°C, am meisten bevorzugt bei –30°C bis –50°C.Swern oxidations, especially the reaction of DMSO and oxalyl chloride, are carried out at low temperatures, usually -78 ° C. The inventors of the present invention have found that it is possible to carry out step (e) at a temperature not lower than -70 ° C. Thus, step (e) is preferably carried out at a temperature not lower than -70 ° C. More preferably, the reaction of DMSO and oxalyl chloride (formation of a dimethylchlorosulfonium chloride intermediate) is conducted at a temperature of -40 ° C to -70 ° C, more preferably at -40 ° C to -60 ° C, most preferably between -40 ° C and -50 ° C. Preferably, the subsequent addition of alcohol 5a (formation of an alkoxysulfonium ion intermediate) is carried out at a temperature of -40 ° C to -70 ° C, more preferably between -40 ° C and -60 ° C, more preferably between -40 ° C and -55 ° C, most preferably between -40 ° C and -50 ° C. Preferably, the addition of the base (formation of the product, aldehyde 6a) at a temperature of -30 ° C to -70 ° C, more preferably between -30 ° C and -60 ° C, more preferably between -30 ° C and 55 ° C, most preferably at -30 ° C to -50 ° C.

Die Swern Oxidation in Schritt (e) kann bei einer Temperatur nicht niedriger als -/=°C in 2–10 Stunden durchgeführt werden. Vorzugsweise wird die Reaktion unter einer Stickstoff Schutzgasatmosphäre durchgeführt. Nach einer wässrigen Aufarbeitung benötigt das Produkt, Aldehyd 6a keine weitere Reinigung. Vorzugsweise wird Aldehyd 6a in einer Ausbeute von 75%, 80%, 85%, 90%, 94% oder mehr erhalten.The Swern oxidation in step (e) can be carried out at a temperature not lower than - / = ° C in 2-10 hours. Preferably, the reaction is carried out under a nitrogen blanket gas atmosphere. After an aqueous workup, the product, aldehyde 6a requires no further purification. Preferably, aldehyde 6a is obtained in a yield of 75%, 80%, 85%, 90%, 94% or more.

Stufe (f) kann unter Einsatz von 1-Pentadecin und einer Base, wie ein Organolithium Reagenz oder ein Grignard Reagenz in einem Lösungsmittel, wie THF unter Bildung des D-erythro Isomers 7a durchgeführt werden. Besonders bevorzugte Organolithium Reagenzien sind Butyllithium, Methyllithium und Phenyllithium, noch stärker bevorzugt Butyllithium. Optional kann die Reaktion in Gegenwart von Additiven, wie HMPA, TMEDA oder Tributylzirkonchlorid durchgeführt werden. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung entdeckten, dass eine bessere Ausbeute erzielt werden kann, wenn Stufe (f) unter Einsatz von mindestens 1,5 Äquivalenten 1-Pentadekin durchgeführt wird. Also wird Stufe (f) vorzugsweise unter Einsatz von 1-Pentadekin im Überschuss (besonders bevorzugt mindestens 1,5 Äquivalente, stärker bevorzugt 1,6–2 Äquivalente, am meisten bevorzugt 1,6–1,8 Äquivalente) durchgeführt. Die Reaktion kann bei einer Temperatur von –60°C bis –10°C durchgeführt werden, bevorzugt bei –50°C bis –15°C, am meisten bevorzugt bei –40°C bis –20°C in 4–8 Stunden. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben festgestellt, dass Akin 7a durch destillative Entfernung von 1-Pentadekin gereinigt werden kann. Demzufolge wird Produkt 7a nach einer wässrigen Aufarbeitung bevorzugt durch destillatives Entfernen von nicht abreagiertem 1-Pentadecin gereinigt. Vorzugsweise wird Alkin 7a in einer Ausbeute von 75%, 80%, 84%, 87% oder mehr erhalten.Step (f) may be carried out using 1-pentadecine and a base such as an organolithium reagent or a Grignard reagent in a solvent such as THF to form the D-erythro isomer 7a. Especially preferred organolithium reagents are butyllithium, methyllithium and phenyllithium, even more preferably butyllithium. Optionally, the reaction may be carried out in the presence of additives such as HMPA, TMEDA or tributylzirconium chloride. The inventors of the present invention discovered that a better yield can be achieved when step (f) is carried out using at least 1.5 equivalents of 1-pentadekin. Thus, step (f) is preferably carried out using 1-pentadekin in excess (more preferably at least 1.5 equivalents, more preferably 1.6-2 equivalents, most preferably 1.6-1.8 equivalents). The reaction may be carried out at a temperature of -60 ° C to -10 ° C, preferably at -50 ° C to -15 ° C, most preferably at -40 ° C to -20 ° C in 4-8 hours. The inventors of the present invention have found that Akin 7a can be purified by distillative removal of 1-pentadekine. Accordingly, after an aqueous work-up, product 7a is preferably purified by distillative removal of unreacted 1-pentadecine. Preferably, alkyne 7a is obtained in a yield of 75%, 80%, 84%, 87% or more.

Alternativ dazu kann Stufe (f) unter Einsatz von 1-Pentadecin und einer Base, wie ein Organolithium Reagenz oder einem Grignard Reagenz in einem Lösungsmittel, wie THF in Gegenwart von Zinkbromid oder Kupferiodid unter Bildung des L-threo Isomers 7c durchgeführt werden. Besonders bevorzugte Organolithium Reagenzien sind Butyllithium, Methyllithium und Phenyllithium, besonders bevorzugt Butyllithium.Alternatively, step (f) may be carried out using 1-pentadecine and a base such as an organolithium reagent or a Grignard reagent in a solvent such as THF in the presence of zinc bromide or copper iodide to form the L-threo isomer 7c. Particularly preferred organolithium reagents are butyllithium, methyllithium and phenyllithium, more preferably butyllithium.

Figure 00190001
Figure 00190001

Stufe (g) kann durch saure Katalyse durchgeführt werden. In einer bevorzugten Ausführungsart wird Stufe (g) unter Einsatz von Amberlyst® 15 in einem Lösungsmittel, wie Methanol durchgeführt. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 10–100 Stunden durchgeführt werden. Nach einer wässrigen Aufarbeitung kann das Produkt, Alkin 8a, durch Filtration über Kieselgel mit n-Hexan und/oder Essigsäureethylester als Eluenten gereinigt werden. Vorzugsweise wird Alkin 8a in einer Ausbeute von 45%, 48%, 50%, 60%, 70% oder mehr erhalten. Step (g) can be carried out by acid catalysis. In a preferred embodiment, step (g) is dissolved in a solvent such as methanol carried out using Amberlyst ® 15 °. The reaction can be carried out at room temperature in 10-100 hours. After an aqueous work-up, the product, alkyne 8a, can be purified by filtration through silica gel with n-hexane and / or ethyl acetate as the eluent. Preferably, alkyne 8a is obtained in a yield of 45%, 48%, 50%, 60%, 70% or more.

Die Reduktion in Stufe (h) wird vorzugsweise unter Einsatz eines Reduktionsmittels, das die Dreifachbindung des Alkins 8a zu einer trans Doppelbindung unter Bildung von Alken 9a umwandelt, durchgeführt, wie Natrium in flüssigem Ammoniak, oder Red-Al. In einer bevorzugten Ausführungsart wird die trans Reduktion in Stufe (h) unter Einsatz von Red-Al in einem Lösungsmittel wie THF durchgeführt. Besonders bevorzugt wird Red-Al in einem Überschuss (noch stärker bevorzugt 3–5 Äquivalente, am meisten bevorzugt 4–4,5 Äquivalente) eingesetzt. Die Reaktion kann bei einer Temperatur von 0°C in 15–50 Stunden durchgeführt werden.The reduction in step (h) is preferably carried out using a reducing agent which converts the triple bond of the alkyne 8a to a trans double bond to form alkene 9a, such as sodium in liquid ammonia, or Red-Al. In a preferred embodiment, the trans reduction in step (h) is carried out using Red-Al in a solvent such as THF. More preferably, Red-Al is used in an excess (more preferably still 3-5 equivalents, most preferably 4-4.5 equivalents). The reaction can be carried out at a temperature of 0 ° C in 15-50 hours.

Alternativ kann die Reduktion in Stufe (h) unter Einsatz einer Reduktionsmittels durchgeführt werden, das die Dreifachbindung von Alkin 8a zu einer cis Doppelbindung unter Bildung von Alken 91, reduziert, wie Wasserstoff und ein Katalysator wie Pd auf Bariumsulfat, Wasserstoff und ein Katalysator, wie aktiviertes Zink, Ameisensäure und ein Übergangsmetallkatalysator, DIBAL, Isobutylmagnesiumchlorid und cp2TiCl2, oder ein Dialkylborhydrid, wie Dicyclohexylborhydrid (cy2BH) in Essigsäure, bis(1,2-Dimethylpropyl)Borhydrid (Sia2BH) in Essigsäure, oder 9-BBN in Methanol:

Figure 00200001
Alternatively, the reduction in step (h) can be carried out using a reducing agent which reduces the triple bond of alkyne 8a to a cis double bond to form alkene 91, such as hydrogen and a catalyst such as Pd on barium sulfate, hydrogen and a catalyst such as activated zinc, formic acid and a transition metal catalyst, DIBAL, isobutylmagnesium chloride and cp 2 TiCl 2 , or a dialkylborohydride such as dicyclohexylborohydride (cy 2 BH) in acetic acid, bis (1,2-dimethylpropyl) borohydride (Sia 2 BH) in acetic acid, or 9 -BBN in methanol:
Figure 00200001

In einer bevorzugten Durchführungsart wird die cis Reduktion in Stufe (h) unter Einsatz von Wasserstoff und Palladium auf Bariumsulfat in Gegenwart von Chinolin in einem Lösungsmittel wie Diethylether durchgeführt. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur in 15–20 Stunden durchgeführt werden. Dann kann in Stufe (i) die primäre Hydroxyl-Gruppe von Alken 9b unter Bildung von Phosphat 10b phosphoryliert werden:

Figure 00200002
und in Stufe (j) kann Phosphat 10b unter Bildung von Stereoisomer 11b von Sphingosin-1phosphat 11a gebildet werden:
Figure 00200003
In a preferred embodiment, the cis reduction in step (h) is carried out using hydrogen and palladium on barium sulfate in the presence of quinoline in a solvent such as diethyl ether. The reaction can be carried out at room temperature in 15-20 hours. Then, in step (i), the primary hydroxyl group of alkene 9b can be phosphorylated to form phosphate 10b:
Figure 00200002
and in step (j), phosphate 10b can be formed to form stereoisomer 11b of sphingosine 1 phosphate 11a:
Figure 00200003

Nach einer wässrigen Aufarbeitung benötigt das Produkt, Alken 9a oder 9b keine weitere Reinigung. Vorzugsweise wird Alken 9a oder 9b in einer Ausbeute von 75%, 80%, 85%, 90%, 95% oder mehr erhalten.After an aqueous work-up, the product, alkene 9a or 9b, does not require further purification. Preferably, alkene 9a or 9b is obtained in a yield of 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or more.

Stufe (i) kann unter Einsatz von Phosphorsäure, einem Phosphorsäurederivat wie einem Ester, einem Chlorid, einem Bromid, einem Fluorid oder Anhydrid, oder Trimethylphosphit, Tetrabrommethan und einer Base durchgeführt werden. Vorzugsweise wird Stufe (1) unter Einsatz von Trimethylphosphit, Tetrabrommethan und einer Base, wie Pyridin, die ebenso als Lösungsmittel benutzt werden kann, durchgeführt. Vorzugsweise wird Trimethylphosphit im Überschuss eingesetzt ( besonders bevorzugt etwa 1,1 bis 1,7 Äquivalente). Vorzugsweise wird Tetrabrommethan in einem Überschuss eingesetzt (besonders bevorzugt 1,1 bis 1,5%). Vorzugsweise wird Pyridin ein einem grollen Überschuss eingesetzt und dient ebenso als Lösungsmittel. Die Reaktion kann bei einer Temperatur von 0°C bis Raumtemperatur in 5–10 Stunden durchgeführt werden. Nach einer wässrigen Aufarbeitung kann das Produkt Phosphat 10a oder 10b durch Filtration über Kieselgel gereinigt werden, unter Einsatz von zum Beispiel n-Hexan und/oder Essigsäureethylester als Eluenten. Vorzugsweise wird Phosphat 10a oder 10b in Ausbeuten von 40%, 50%, 60%, 64% oder mehr erhalten.Step (i) may be carried out using phosphoric acid, a phosphoric acid derivative such as an ester, a chloride, a bromide, a fluoride or anhydride, or trimethyl phosphite, tetrabromomethane and a base. Preferably, step (1) is carried out using trimethyl phosphite, tetrabromomethane and a base such as pyridine, which may also be used as a solvent. Preferably, trimethyl phosphite is used in excess (more preferably about 1.1 to 1.7 equivalents). Preferably, tetrabromomethane is used in an excess (more preferably 1.1 to 1.5%). Preferably, pyridine is used in a moderate excess and also serves as a solvent. The Reaction can be carried out at a temperature of 0 ° C to room temperature in 5-10 hours. After an aqueous work-up, the product phosphate 10a or 10b can be purified by filtration through silica gel using, for example, n-hexane and / or ethyl acetate as the eluent. Preferably, phosphate 10a or 10b is obtained in yields of 40%, 50%, 60%, 64% or more.

Stufe (j) kann unter Einsatz von Trimethylsilylbromid in einem Lösungsmittel, wie Dichlormethan durchgeführt werden. Vorzugsweise wird das Trimethylsilylbromid in einem Überschuss (besonders bevorzugt 3–6 Äquivalente, am meisten bevorzugt etwa 4,5 eq) eingesetzt. Die Reaktion kann bei einer Temperatur von 0°C bis Raumtemperatur in 2–10 Stunden durchgeführt werden. Nach einer wässrigen Aufarbeitung kann Sphingosin-1-phosphat 11a oder Stereoisomer 11b durch Kristallisation aus einem Lösungsmittel wie THF und/oder Wasser gereinigt werden. Vorzugsweise wird Sphingosin-1-phosphat 11a oder Stereoisomer 11b in einer Ausbeute von 65%, 68%, 75%, 85% oder mehr erhalten.Step (j) may be carried out using trimethylsilyl bromide in a solvent such as dichloromethane. Preferably, the trimethylsilyl bromide is used in excess (more preferably 3-6 equivalents, most preferably about 4.5 eq). The reaction can be carried out at a temperature of 0 ° C to room temperature in 2-10 hours. After an aqueous work-up, sphingosine-1-phosphate 11a or stereoisomer 11b can be purified by crystallization from a solvent such as THF and / or water. Preferably, sphingosine-1-phosphate 11a or stereoisomer 11b is obtained in a yield of 65%, 68%, 75%, 85% or more.

Der erste Aspekt der vorliegenden Erfindung bietet einen Prozess zur Darstellung von O-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11R:

Figure 00210001
oder eines Stereoisomers und/oder eines Derivates davon. Derivate von O-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11R, die durch die vorliegende Erfindung erfasst werden, schließen ein:
Figure 00210002
wobei Ra, Rb, Rc, Rd und Re unabhängig von einander Wasserstoff, oder ein Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Arylalkyl-, Arylalkenyl-, Arylalkinyl-, Alkylaryl-, Alkenylaryl- oder Alkinylaryl Rest sein können, jede von diesen kann optional substituiert sein und jeder von diesen kann optional Heteroatome, wie N, O oder S in seinem Kohlenstoff Gerüst enthalten. Optionale Substituenten schließen -F, -Cl, -Br, -I, -CF3, -CBr3, -CI3, -OH, -SH, -NH2, -CN, -NO2, -OMe, -SMe, -NMe2, -CO2H, -CHO und -CO2Me ein.The first aspect of the present invention provides a process for preparing O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11R:
Figure 00210001
or a stereoisomer and / or a derivative thereof. Derivatives of O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11R which are covered by the present invention include:
Figure 00210002
wherein R a , R b , R c , R d and R e independently of one another may be hydrogen, or an alkenyl, alkynyl, aryl, arylalkyl, arylalkenyl, arylalkynyl, alkylaryl, alkenylaryl or alkynylaryl radical Each of these may optionally be substituted and each of these may optionally contain heteroatoms such as N, O or S in its carbon backbone. Optional substituents include -F, -Cl, -Br, -I, -CF 3 , -CBr 3 , -CI 3 , -OH, -SH, -NH 2 , -CN, -NO 2 , -OMe, -SMe, -NMe 2 , -CO 2 H, -CHO and -CO 2 Me.

In allen Ausführugsformen des Prozesses der vorliegenden Erfindung kann die Schutzgruppe Pg jede geeignete Amino-Schutzgruppe sein. Geeignete Schutzgruppen sind Stand der Technik wie Sie zum Beispiel in Kapitel 7 von „Protective Groups in Organic Synthesis” von T. W. Greene und P. G. M. Wuts (Wiley-Interscience, 3. Auflage, 1999) beschrieben sind und darin durch Literaturhinweise vollständig behandelt werden.In all embodiments of the process of the present invention, the protecting group Pg may be any suitable amino-protecting group. Suitable protecting groups are known in the art, for example as described in Chapter 7 of "Protective Groups in Organic Synthesis" by T.W. Greene and P.G.M. Wuts (Wiley-Interscience, 3rd Ed., 1999), which are fully incorporated herein by references.

Vorzugsweise ist -Pg -CO-OR oder -CO-R, wobei R unabhängig von einander ein, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Arylalkyl-, Arylalkenyl-, Arylalkinyl-, Alkylaryl-, Alkenylaryl-, oder Alkinylaryl-Rest sein, jeder von diesen kann optional Substituiert sein und jeder von diesen kann optional einen oder mehrere Heteroatome, wie N, O oder S im Kohlenstoffgerüst enthalten. Optionale Substituenten schließen -F, -Cl, -Br, -I, -CF3, -CCl3, -CBr3, -CI3, -OH, -SH, -NH2, -CN, -NO2, -OMe, -SMe, -NMe2, -CO2H, -CHO und -CO2Me ein.Preferably, -Pg is -CO-OR or -CO-R, wherein R independently of one another is an alkenyl, alkynyl, aryl, arylalkyl, arylalkenyl, arylalkynyl, alkylaryl, alkenylaryl, or alkynylaryl radical Each of these may optionally be substituted and each of these may optionally contain one or more heteroatoms such as N, O or S in the carbon skeleton. Optional substituents include -F, -Cl, -Br, -I, -CF 3 , -CCl 3 , -CBr 3 , -CI 3 , -OH, -SH, -NH 2 , -CN, -NO 2 , -OMe , -SMe, -NMe 2 , -CO 2 H, -CHO and -CO 2 Me.

Ein Alkyl-Rest kann geradkettig oder verzweigt sein oder cyclische Rest einschließen. Vorzugsweise ist ein Alkyl-Rest eine C1-C20 Alkyl-Rest, stärker bevorzugt ein C1-C15 Rest. Ein Alkenyl-Rest kann geradkettig oder verzweigt sein oder cyclische Reste einschließen. Vorzugsweise ist ein Alkenyl-Rest ein C2-C20 Alkenyl-Rest, stärker bevorzugt ein C2-C15 Alkyl-Rest. Ein Alkinyl-Rest kann geradkettig oder verzweigt sein oder cyclische Reste einschließen. Vorzugsweise ist ein Alkinyl-Rest ein C2-C20 Alkyl-Rest, stärker bevorzugt ein C2-C15 Alkinyl-Rest. Vorzugsweise ist ein Aryl-Rest ein C4-C30 Aryl-Rest.An alkyl radical may be straight-chain or branched or include cyclic radicals. Preferably, an alkyl radical is a C 1 -C 20 alkyl radical, more preferably a C 1 -C 15 radical. An alkenyl radical may be straight-chain or branched or may include cyclic radicals. Preferably, an alkenyl radical is a C 2 -C 20 alkenyl radical, more preferably a C 2 -C 15 alkyl radical. An alkynyl radical may be straight-chain or branched or include cyclic radicals. Preferably, an alkynyl radical is a C 2 -C 20 alkyl radical, more preferably a C 2 -C 15 alkynyl radical. Preferably, an aryl radical is a C 4 -C 30 aryl radical.

Vorzugsweise ist -Pg -CO-OtBu (Boc), -CO-OCH2Ph (Cbz oder Z), -CO-O-CHrC6H4-pOMe (Moz), -CO-O-CH2-C6H4-pNO2, -CO-O-CH2-C6H2-pBr, -CO-O-CH2-C6H4pCl, -CO-O-CH2-C6H3-2,4-CL2, -CO-OCH2-C13H9 (Fmoc), -CO-O-CHPh2, -CO-OMe, -CO-OEt, -CO-OCH2CCl3 (Troc), -CO-OCH2CH2SiMe3 (Teoc), -CO-O-CH2CH2SMe oder -CO-OCH2CH2SO2Me. Besonders bevorzugt ist -Pg -CO-OtBu (Boc).Preferably -Pg is -CO-O t Bu (Boc), -CO-OCH 2 Ph (Cbz or Z), -CO-O-CHRC 6 H 4 -pOMe (Moz), -CO-OCH 2 -C 6 H 4 -pNO 2 , -CO-O-CH 2 -C 6 H 2 -pBr, -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 pCl, -CO-O-CH 2 -C 6 H 3 -2 , 4-CL 2 , -CO-OCH 2 -C 13 H 9 (Fmoc), -CO-O-CHPh 2 , -CO-OMe, -CO-OEt, -CO-OCH 2 CCl 3 (Troc), CO-OCH 2 CH 2 SiMe 3 (Te oc ), -CO-O-CH 2 CH 2 SMe or -CO-OCH 2 CH 2 SO 2 Me. Particularly preferred is -Pg -CO-OtBu (Boc).

Vorzugsweise wird der Prozess der vorliegenden, Erfindung in industriellen Maßstab durchgeführt, vorzugsweise um ein Zwischenprodukt oder O-2-Amino-3-hydroxy-octade-4-en-1-yl phosphat 11Ri oder 11Rii oder ein Stereoisomer davon (besonders bevorzugt Sphingosin-1-phosphat 11a) oder ein Derivat davon in Chargen von 100 g, 500 g, 1 kg, 5 kg, 10 kg, 50 kg, 100 kg oder mehr herzustellen. Um den Prozess der vorliegenden Erfindung für einen industriellen Maßstab geeignet zu machen, wird der Prozess vorzugsweise ohne den Einsatz einer Chromatographie durchgeführt. Dennoch ist eine Filtration über eine kleinere Menge Kieselgel auch in industriellem Maßstab akzeptabel.Preferably, the process of the present invention is carried out on an industrial scale, preferably an intermediate or O-2-amino-3-hydroxy-octade-4-en-1-yl phosphate 11Ri or 11 Rii or a stereoisomer thereof (particularly preferably sphingosine 1-phosphate 11a) or a derivative thereof in batches of 100 g, 500 g, 1 kg, 5 kg, 10 kg, 50 kg, 100 kg or more. In order to make the process of the present invention suitable for an industrial scale, the process is preferably carried out without the use of chromatography. Nevertheless, filtration over a smaller amount of silica gel is also acceptable on an industrial scale.

Um den Prozess der vorliegenden Erfindung für den industriellen Maßstab geeignet zu machen wird der Prozess vorzugsweise bei Temperaturen nicht tiefer als –70°C durchgeführt.In order to make the process of the present invention suitable for industrial scale, the process is preferably carried out at temperatures not lower than -70 ° C.

Um den Prozess der vorliegenden Erfindung geeignet für eine Herstellung in industriellem Maßstab zu machen, wird im Prozess vorzugsweise O-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Ri oder 11Rii oder ein Stereoisomer davon (vorzugsweise Sphingosin-1-phosphat 11a) oder ein Derivat davon ausgehend von Serin 1 in einer Gesamtausbeute von 7% oder mehr und/oder ausgehend von Aldehyd G in einer Gesamtausbeute von 11% oder mehr hergestellt.In order to make the process of the present invention suitable for industrial scale production, in the process preferably O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Ri or 11Rii or a stereoisomer thereof (preferably sphingosine 1-phosphate 11a) or a derivative thereof from serine 1 in an overall yield of 7% or more and / or starting from aldehyde G in an overall yield of 11% or more.

Einen zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung bietet das Zwischenprodukt Phosphat 10a, mit der Formel:

Figure 00230001
wobei Pg eine Schutzgruppe ausgewählt von -CO-OCH2Ph (Cbz oder Z), -CO-O-CH2-C6H4-pOMe (Moz), -CO-O-CH2-C6H4-pNO2, -CO-O-CH2-C6H4-pBr, -CO-O-CH2-C6H4pCl, -CO-O-CH2-C6H3-2,4-CL2, -CO-OCH2-C13H9 (Fmoc), -CO-O-CHPh2, -CO-OMe, -CO-OEt, -CO-OCH2CCl3 (Troc), -CO-OCH2CH2SiMe3 (Teoc), -CO-O-CH2CH2SMe oder -CO-OCH2CH2SO2Me sein kann.A second aspect of the present invention provides the intermediate phosphate 10a, having the formula:
Figure 00230001
where Pg is a protecting group selected from -CO-OCH 2 Ph (Cbz or Z), -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 -pOMe (Moz), -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 -pNO 2 , -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 -pBr, -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 pCl, -CO-O-CH 2 -C 6 H 3 -2,4-CL 2 , -CO-OCH 2 -C 13 H 9 (Fmoc), -CO-O-CHPh 2 , -CO-OMe, -CO-OEt, -CO-OCH 2 CCl 3 (TROC), -CO-OCH 2 CH 2 SiMe 3 (Teoc), -CO-O-CH 2 CH 2 SMe or -CO-OCH 2 CH 2 SO 2 Me.

Ein dritter Aspekt der vorliegenden Erfindung ist es, dass O-2-Amino-3-hydraxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11a oder ein Stereoisomer oder Derivat davon, erhalten durch die Ausführung des Prozesses, ein Bestandteil der vorliegenden Erfindung wird. Der dritte Aspekt der vorliegenden Erfindung bietet ebenso, dass O-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11R (vorzugsweise Sphingosin-1-phoshat 11a) oder ein Derivat davon im wesentlichen enantiomerenrein erhalten wird. Der dritte Aspekt der vorliegenden Erfindung bietet ebenso, dass O-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11R (vorzugsweise Sphingosin-1-phoshat 11a) oder ein Derivat davon im wesentlichen frei von Verunreinigungen erhalten wird. Der dritte Aspekt der vorliegenden Erfindung bietet ebenso, dass O-2-Amin-3-hydroxy-octadec--4-en-1-yl phosphat 11R oder ein Stereoisomer davon (vorzugsweise Sphingoson-1-phosphat 11a) und Derivate davon, geeignet sind, für den Gebrauch in der Medizin zum Beispiel zur Behandlung oder Vorbeugung vor entzündlichen Dermatosen, hyperproliferativen Dermatosen, psorias, psorias vulgaris, acne vulgaris, Dermatoheliose, actinische Keratose oder solare Keratose.A third aspect of the present invention is that O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11a or a stereoisomer or derivative thereof obtained by carrying out the process is a constituent of the present invention becomes. The third aspect of the present invention also provides that O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11R (preferably sphingosine 1-phosphate 11a) or a derivative thereof is obtained in substantially enantiomerically pure form. The third aspect of the present invention also provides that O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11R (preferably sphingosine 1-phosphate 11a) or a derivative thereof is substantially free of impurities becomes. The third aspect of the present invention also provides that O-2-amine-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11R or a stereoisomer thereof (preferably sphingosone 1-phosphate 11a) and derivatives thereof are suitable For example, for use in medicine for the treatment or prevention of inflammatory dermatoses, hyperproliferative dermatoses, psorias, psorias vulgaris, acne vulgaris, dermatoheliosis, actinic keratosis or solar keratosis.

Für die Zweckbestimmung der vorliegenden Erfindung meint der Begriff „im wesentlichen enantiomerenrein”, dass die fragliche Komponente zu mehr als 90% aus einem einzelnen Stereoisomer, vorzugsweise zu mehr als 95%, besonders bevorzugt zu mehr als 98%, mehr bevorzugt zu mehr als 99%, noch mehr bevorzugt zu mehr als 99,2% und am meisten bevorzugt zu mehr als 99,5% (durch HPLC Messung) besteht.For the purpose of the present invention, the term "substantially enantiomerically pure" means that more than 90% of the component in question consists of a single stereoisomer, preferably more than 95%, more preferably more than 98%, more preferably more than 99% %, more preferably more than 99.2%, and most preferably more than 99.5% (by HPLC measurement).

Ein vierter Aspekt der vorliegenden Erfindung bietet eine Methode zur Behandlung oder Vorbeugung bei bedürftigen Patienten bei einer entzündlichen Dermatose, hyperproliferativer Dermatose, psorias, psorias vulgaris, acne vulgaris, Dermatoheliose, actinischer Keratose oder solarer Keratose, unter Bereitstellung einer therapeutisch oder prophylaktisch wirksame Menge von O-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11R oder eines Stereoisomeres davon (vorzugsweise Sphingosin-1-phosphat 11a) oder eines Derivates davon. Vorzugsweise ist der Patient ein Säuger, besonders bevorzugt ein Mensch.A fourth aspect of the present invention provides a method of treating or preventing needy patients in inflammatory dermatosis, hyperproliferative dermatosis, psorias, psorias vulgaris, acne vulgaris, dermatoheliosis, actinic keratosis, or solar keratosis to provide a therapeutically or prophylactically effective amount of O. 2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11R or a stereoisomer thereof (preferably sphingosine 1-phosphate 11a) or a derivative thereof. Preferably, the patient is a mammal, more preferably a human.

Kurze Beschreibung der SchemataShort description of the schemes

Die vorliegende Erfindung wird jetzt anhand von Beispielen mit Hinweisen zu den beigefügten Schemata beschrieben wobei:

  • Schema 1 Sphingosin-1-phosphat (S1P) 11a und seine Stereoisomere zeigt.
  • Schema 2 eine schematische Darstellung der Reaktionssequenz zeigt, die in der vorliegenden Erfindung enthalten ist.
  • Schemata 3 und 4 schematische Darstellungen der Reaktionssequenz zeigen, welche von der in Schema 2 dargestellten in ihrer Stereochemie abweicht.
The present invention will now be described by way of example with references to the accompanying drawings in which:
  • Scheme 1 shows sphingosine 1-phosphate (S1P) 11a and its stereoisomers.
  • Scheme 2 shows a schematic representation of the reaction sequence contained in the present invention.
  • Schemes 3 and 4 show schematic representations of the reaction sequence, which differs from that shown in Scheme 2 in their stereochemistry.

Ausführliche Beschreibung der ErfindungDetailed description of the invention

Die vorliegende Erfindung wird jetzt anhand von synthetischen Beispielen beschrieben. Beispiele 1–10 folgen der Reaktionssequenz, wie sie in Schema 2 dargestellt ist. Beispiele 11–13 folgen der Reaktionssequenz, wie sie in Schema 3 dargestellt ist. Beispiele 14–18 folgen der Reaktionssequenz, wie sie in Schema 4 dargestellt ist.The present invention will now be described by way of synthetic examples. Examples 1-10 follow the reaction sequence as shown in Scheme 2. Examples 11-13 follow the reaction sequence as shown in Scheme 3. Examples 14-18 follow the reaction sequence as shown in Scheme 4.

Synthetische BeispieleSynthetic examples

Beispiel 1: L. Serinmethylester Hydrochlorid 2xExample 1: L. Serine methyl ester hydrochloride 2x

Figure 00250001
Figure 00250001

  • (a) L-Serin 1a (107 g; 1,018 mol) wurde in Methanol suspendiert (800 ml). Thionylchlorid (78 ml; 1,075 mol; 1,05 eq) wurde tropfenweise über 35 Minuten addiert. Die entstehende gelbe Lösung wurde 15 Stunden refluxiert und im Vakuum unter Isolierung von 2x als weißem Feststoff (159,2 g; quantitativ) eingeengt. 1H-NMR (DMSO-d6): ☐☐8,64 (s, 2H, NH2); 5,62 (s(br), 1H, OH); 4,07 (t, J = 3,5 Hz; 1H; CHNH2); 3,83 (d, J = 3,5 Hz; 2H; CH 2OH); 3,75 (s; 3H; OCH 3).(a) L-Serine 1a (107 g, 1.018 mol) was suspended in methanol (800 mL). Thionyl chloride (78 ml, 1.075 mol, 1.05 eq) was added dropwise over 35 minutes. The resulting yellow solution was refluxed for 15 hours and concentrated in vacuo to isolate 2x as a white solid (159.2 g, quantitative). 1 H-NMR (DMSO-d 6 ): □ 8.64 (s, 2H, NH 2 ); 5.62 (s (br), 1H, OH ); 4.07 (t, J = 3.5 Hz; 1H; C H NH 2 ); 3.83 (d, J = 3.5 Hz; 2H; C H 2 OH); 3.75 (s, 3H, OC H 3 ).
  • (b) L-Serin 1a (107 g; 1,018 ml) wurde in Methanol suspendiert (800 ml). Thionylchlorid (78 ml; 1,075 mol; 1,05 eq.) wurde tropfenweise über 26 Minuten addiert. Die resultierende gelbe Lösung wurde 21 Stunden refluxiert und dann im Vakuum unter Erhalt des Produktes 2x als weißer Feststoff (158,8 g, quant.) erhalten. 1H-NMR (DMSO-d6): siehe oben.(b) L-serine 1a (107 g, 1.018 mL) was suspended in methanol (800 mL). Thionyl chloride (78 ml, 1.075 mol, 1.05 eq.) Was added dropwise over 26 minutes. The resulting yellow solution was refluxed for 21 hours and then obtained in vacuo to give the product 2x as a white solid (158.8 g, quant.). 1 H-NMR (DMSO-d 6 ): see above.
  • (c) Die Reaktion wurde wie in Beispiel 1a in großem Maßstab durchgeführt. Dabei wurden 2 kg L-Serin eingesetzt, um 2,93 kg (98,9%) L-Serinmethylester hydrochlorid 2x zu erhalten. 1H-NMR (DMSO-d6): siehe oben.(c) The reaction was carried out as in Example 1a on a large scale. In this case, 2 kg of L-serine were used to obtain 2.93 kg (98.9%) of L-serine methyl ester hydrochloride 2x. 1 H-NMR (DMSO-d 6 ): see above.

Beispiel 2: N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-Serinmethylester 3a (mit Boc als Pg)Example 2: N- (tert-butoxycarbonyl) -L-serine methyl ester 3a (with Boc as Pg)

Figure 00260001
Figure 00260001

  • (a) 158,6 g (1,02 mol) L-Serinmethylester Hydrochlorid 2x wurden unter N2 in 2L Dichlormethan suspendiert und mit 223 g (2,2 mol) Triethylamin versetzt. Die Suspension wurde auf 6°C abgekühlt und eine Lösung von 227,6 g (1,03 mol) Di-tert-Butyl-dicarbonat in 500 ml Dichlormethan innerhalb von 1 h 15 min zugetropft (Ti = 6°C). Anschließend wurde bei RT über Nacht gerührt. Zu der gelben Lösung wurde 11 gesättigte NaHCO3-Lösung gegeben und eine Stunde gerührt. Das Gemisch wurde in einen Scheidetrichter überführt und nach Zugabe von weiteren 750 ml NaHCO3-Lösung die Phasen getrennt (zum Teil Feststoffe an der Grenzfläche). Die wässrige Phase wurde 3 mal mit je 250 ml Dichlormethan extrahiert, die vereinten organischen Phasen über 770 g Na2SO4 getrocknet, das Trockenmittel abgesaugt und mit 500 ml Dichlormethan nachgewaschen. Die vereinten organischen Phasen wurden unter Vakuum eingeengt Es wurden 220,17 g (98,5% d. Th.) des Produktes 3a als gelbes viskoses Öl erhalten. 1H-NMR (CDCl3) entspricht; Material enthält noch Spuren von NEt3. 1H (CDCl3): 5,47 (s(br); 1H); 4,37 (s(br); 1H); 3,95 (dd; 1H; J = 4/11 Hz); 3,89 (dd; 1H; J = 3–4/11 Hz); 3,77 (s; 3H); 2,94 (s(br); 0,3H); s(br) 2,54 (0,7 H); s 1,45 (9H) [a]D: –16,2° (c = 4; MeOH(a) 158.6 g (1.02 mol) of L-serine methyl ester hydrochloride 2 × were suspended under N 2 in 2 L dichloromethane and treated with 223 g (2.2 mol) of triethylamine. The suspension was cooled to 6 ° C. and a solution of 227.6 g (1.03 mol) of di-tert-butyl dicarbonate in 500 ml of dichloromethane was added dropwise over 1 h 15 min (T i = 6 ° C.). The mixture was then stirred at RT overnight. To the yellow solution was added 11% saturated NaHCO 3 solution and stirred for one hour. The mixture was transferred to a separatory funnel and after addition of another 750 ml of NaHCO 3 solution, the phases were separated (in some cases solids at the interface). The aqueous phase was extracted 3 times with 250 ml dichloromethane, the combined organic phases dried over 770 g Na 2 SO 4 , the desiccant was filtered off and washed with 500 ml dichloromethane. The combined organic phases were concentrated in vacuo to give 220.17 g (98.5% of theory) of the product 3a as a yellow viscous oil. 1 H-NMR (CDCl 3 ) corresponds; Material still contains traces of NEt 3 . 1 H (CDCl 3): 5.47 (s (br); 1H); 4.37 (s (br); 1H); 3.95 (dd; 1H; J = 4/11 Hz); 3.89 (dd; 1H; J = 3-4 / 11 Hz); 3.77 (s, 3H); 2.94 (s (br); 0.3H); s (br) 2.54 (0.7H); s 1.45 (9H) [a] D : -16.2 ° (c = 4, MeOH
  • b) 157,7 g (1,01 mol) des L-Serinmethylester Hydrochlorid 2x wurden unter N2 in 2L Dichlormethan suspendiert und mit 225,8 g (2,23 mol) Triethylamin versetzt. Die Suspension wurde auf 5°C abgekühlt und eine Lösung von 227,7 g (1,04 mol) Di-tert-Butyl-dicarbonat in 500 ml Dichlormethan innerhalb von 1 h 15 min zugetropft. Anschließend wurde bei RT über Nacht gerührt. Zu dem gelben Reaktionsgemisch wurde 11 gesättigte NaHCO3-Lösung gegeben und 1,5 h gerührt. Das Gemisch wurde in einen Scheidetrichter überführt und die Phasen getrennt. Die wässrige Phase wurde 4 mal mit je 250 ml Dichlormethan extrahiert, die vereinten organischen Phasen über 636 g Na2SO4 getrocknet, das Trockenmittel abgesaugt und mit 2 × 500 ml Dichlormethan nachgewaschen. Die vereinten organischen Phasen wurden vollständig eingeengt. Das Material wurde anschließend im Vakuumofen getrocknet. Es wurden 220,46 g (99%) des Produktes 3a als gelbes viskoses Öl erhalten. 1H-NMR (CDCl3): siehe oben.b) 157.7 g (1.01 mol) of the L-Serinmethylester hydrochloride 2x were suspended under N 2 in 2L dichloromethane and treated with 225.8 g (2.23 mol) of triethylamine. The suspension was cooled to 5 ° C and a solution of 227.7 g (1.04 mol) of di-tert-butyl dicarbonate in 500 ml of dichloromethane within 1 h 15 min. The mixture was then stirred at RT overnight. To the yellow reaction mixture was added 11% saturated NaHCO 3 solution and stirred for 1.5 h. The mixture was transferred to a separatory funnel and the phases separated. The aqueous phase was extracted 4 times with 250 ml dichloromethane, the combined organic phases were dried over 636 g Na 2 SO 4 , the desiccant was filtered off with suction and washed with 2 × 500 ml dichloromethane. The combined organic phases were completely concentrated. The material was then dried in a vacuum oven. There were obtained 220.46 g (99%) of product 3a as a yellow viscous oil. 1 H-NMR (CDCl 3 ): see above.

Der Ansatz im Großmaßstab wurde völlig analog zu Beispiel 2b durchgeführt. Die Umsetzung erfolgte in 2 Teilmengen. 1,74 kg L-Serinmethylester Hydrochlorid 2x ergaben 2,43 kg N-tert-Butoxycarbonyl)-L-Serinmethylester 3a (99,1%), 1,34 kg ergaben 1,92 kg (quantitativ).The large-scale approach was carried out completely analogously to Example 2b. The reaction took place in 2 subsets. 1.74 kg L-serine methyl ester hydrochloride 2x gave 2.43 kg of N-tert-butoxycarbonyl-L-serine methyl ester 3a (99.1%), 1.34 kg gave 1.92 kg (quantitative).

Beispiel 3: Methyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-carboxylat 4a (mit Boc als Pg und Methyl als R1 und R2)Example 3: Methyl N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (S) -carboxylate 4a (with Boc as Pg and methyl as R1 and R2)

Figure 00270001
Figure 00270001

  • (a) N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-Serinmethylester 3a aus Beispiel 2a (210,67 g; 0,96 mol) wurde in Dichlormethan gelöst (11). 2,2-Dimethoxypropan (208,2 g; 2,0 mol) und p-Toluolsulfonsäure (3,34 g; 17,6 mmol) wurden addiert das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur unter Feuchtigkeitsausschluss gerührt. Da die Reaktion noch nicht vollständig beendet war, wurde weitere p-Toluolsulfonsäure (zu einer Gesamtmenge von 30,36 g; 160 mmol) und weiteres 2,2-Dimethoxypropan (zu einer Gesamtmenge von 452,8 g; 4,35 mol) addiert und weitere 2,5 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde K2CO3 (22,4 g) addiert, filtriert und das Filtrat mit ges. NaHCO3 Lösung (0,51) gewaschen. Die Phasen des 2-Phasen Gemisches wurden getrennt. Die organische Phase wurde über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 4a als gelbes Öl zu erhalten (203,2 g; 81,6%). 1H NMR(C6D6): 4,45 (dd; 0,3H; J: 2,5/7 Hz); 4,17 (dd; 0,6H; J = 3/7 Hz); 3,78 (dd; J = 2,5/9 Hz); 3,77 (dd; J: 3/9 Hz; beide zusammen 3,78 und 3,771H); 3,65 (dd; J = 7/9 Hz); 3,61 (dd; J = 7/9 Hz; beide zusammen 3,65 und 3,61 1H; Signale stark überlagert); s 3,27; s 3,25 (beide zusammen 3H); 1,89 (s; 1,8H); 1,77 (s; 1,04H); s 1,55 (1,82 H); weitere Signale überlagert von folgendem Signal; 1,39; 1,37 (s; beide zusammen 9H); im NMR ist erkennbar, dass ein Gemisch aus 2 Rotameren vorliegt. [☐]D = –45,5° (C = 1, CHCl3).(a) N- (tert-butoxycarbonyl) -L-serine methyl ester 3a from Example 2a (210.67 g, 0.96 mol) was dissolved in dichloromethane (11). 2,2-Dimethoxypropane (208.2 g, 2.0 mol) and p-toluenesulfonic acid (3.34 g, 17.6 mmol) were added, the reaction mixture was stirred overnight at room temperature with exclusion of moisture. Since the reaction was not yet complete, additional p-toluenesulfonic acid (to a total of 30.36 g, 160 mmol) and further 2,2-dimethoxypropane (to a total of 452.8 g, 4.35 mol) were added and stirred for a further 2.5 days at room temperature. Then K 2 CO 3 (22.4 g) was added, filtered and the filtrate washed with sat. NaHCO 3 solution (0.51). The phases of the 2-phase mixture were separated. The organic phase was dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give crude product 4a as a yellow oil (203.2 g, 81.6%). 1 H NMR (C 6 D 6 ): 4.45 (dd, 0.3H, J: 2.5 / 7 Hz); 4.17 (dd, 0.6H, J = 3/7 Hz); 3.78 (dd, J = 2.5 / 9 Hz); 3.77 (dd, J: 3/9 Hz, both together 3.78 and 3.771H); 3.65 (dd, J = 7/9 Hz); 3.61 (dd, J = 7/9 Hz, both together 3.65 and 3.61 1H, signals strongly superimposed); 3:27; s 3.25 (both together 3H); 1.89 (s, 1.8H); 1.77 (s, 1.04H); s 1.55 (1.82 H); additional signals superimposed by the following signal; 1.39; 1.37 (s, both together 9H); NMR shows that a mixture of 2 rotamers is present. [□] D = -45.5 ° (C = 1, CHCl 3 ).

Um polare Verunreinigungen zu entfernen wurde eine Teilmenge von Rohprodukt 4a (156 g) durch Lösen in einem 2:1 Gemisch aus n-Hexan und Essigsäureethylester und Filtration über 424 g Kieselgel gereinigt. Das Filtrat wurde unter Vakuum eingeengt und 4a als blassgelbes Öl isoliert (140,9 g).
1H-NMR(C6D6): wie oben, zeigt Rotamere.To remove polar impurities, a portion of crude product 4a (156 g) was purified by dissolving in a 2: 1 mixture of n-hexane and ethyl acetate and filtering over 424 g of silica gel. The filtrate was concentrated in vacuo and 4a isolated as a pale yellow oil (140.9 g).
1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above, shows rotamers.

Etwas von Rohprodukt 4a (13 g) wurde chromatographisch gereinigt. Sauberes Produkt 4a wurde als blassgelbes Öl isoliert. [☐]D = –52,0° (C = 1, CHCl3).

  • (b) N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-Serinmethylester 3a aus Beispiel 2b (220,1 g, 1 mol) wurde in Dichlormethan (1 l) gelöst. 2,2-Dimethoxyprapan (210,9 g; 2,02 mol) und p-Touolsulfonsäure (18, g, 96 mmol) wurden addiert und das Reaktionsgemisch 23 Stunden bei Raumtemperatur unter Feuchtigkeitsausschluss gerührt. Da die Reaktion noch unvollständig war, wurde weitere p-Toluolsulfonsäure (zu einer Gesamtmenge von 34,2 g; 180 mmol) und weiteres 2,2-Dimethoxypropan (zu einer Gesamtmenge von 545,1 g; 5,23 mol) addiert und weitere 2,5 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde K2CO3 (10,6 g) addiert und die Mischung eine Stunde gerührt, sowie filtriert und das Filtrat mit ges. NaHCO3 gewaschen (0,81). Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 × 250 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 4a zu isolieren (221,2 g). 1H-NMR(C6D6): wie oben, zeigt Rotamere.
Some of crude product 4a (13 g) was purified by chromatography. Clean product 4a was isolated as a pale yellow oil. [□] D = -52.0 ° (C = 1, CHCl 3 ).
  • (b) N- (tert-butoxycarbonyl) -L-serine methyl ester 3a from Example 2b (220.1 g, 1 mol) was dissolved in dichloromethane (1 L). 2,2-Dimethoxyprapan (210.9 g, 2.02 mol) and p-toluenesulfonic acid (18, g, 96 mmol) were added and the reaction stirred for 23 hours at room temperature with exclusion of moisture. Since the reaction was still incomplete, additional p-toluenesulfonic acid (to a total of 34.2 g, 180 mmol) and additional 2,2-dimethoxypropane (to a total of 545.1 g, 5.23 mol) were added and others Stirred for 2.5 days at room temperature. Then K 2 CO 3 (10.6 g) was added and the mixture was stirred for one hour, filtered and the filtrate washed with sat. NaHCO 3 (0.81). The phases of the two-phase mixture were separated. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (3 x 250 ml). The combined organic phases were dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to isolate crude product 4a (221.2 g). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above, shows rotamers.

Um polare Verunreinigungen zu entfernen wurde in einem 1:1 Gemisch aus n-Hexan und Essigsäureethylester (150 ml) gelöst und über eine Schicht Kieselgel (4 cm hoch; 265 g) filtriert, sowie mit weiterem Eluent (2l) gewaschen. Das Filtrat wurde eingeengt, um filtriertes Produkt 4a als blassgelbes Öl (215,4 g; 82,7%) zu erhalten.
1H-NMR(C6D6): wie oben, zeigt Rotamere.To remove polar impurities, it was dissolved in a 1: 1 mixture of n-hexane and ethyl acetate (150 ml) and filtered through a pad of silica gel (4 cm high, 265 g) and washed with further eluent (21). The filtrate was concentrated to give filtered product 4a as a pale yellow oil (215.4 g, 82.7%).
1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above, shows rotamers.

Eine Teilmenge des filtrierten Produktes 4a (1,3 g) wurde durch Destillation gereinigt, wobei sauberes Produkt 4a als farbloses Öl (0,81 g) erhalten wurde.
1H-NMR(C6D6): wie oben, zeigt Rotamere.

  • (c) Die Reaktion wurde im Großmaßstab, wie in Beispiel 3b durchgeführt. Aus 4,35 kg N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-Serinmethylester 3a wurden 4,36 kg (84,7%) Methyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxyzolidin-4-(S)-carboxylat 4a erhalten. 1H-NMR(C6D6): wie oben, zeigt Rotamere.
A portion of the filtered product 4a (1.3 g) was purified by distillation to give clean product 4a as a colorless oil (0.81 g).
1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above, shows rotamers.
  • (c) The reaction was carried out on a large scale as in Example 3b. From 4.35 kg of N- (tert-butoxycarbonyl) -L-serine methyl ester 3a was added 4.36 kg (84.7%) of methyl N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxyzolidine. 4- (S) -carboxylate 4a. 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above, shows rotamers.

Beispiel 4: N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(R)-yl methanol 5a (mit Boc als Pg und Methyl als R1 und R2)Example 4: N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (R) -yl methanol 5a (with Boc as Pg and methyl as R1 and R2)

Figure 00280001
Figure 00280001

  • (a) LiAlH4 (2,52 g; 66 mmol) wurde in THF (100 ml) suspendiert. Dann wurde eine Lösung des Rohprodukts 4a aus Beispiel 3a (10,1 g; 39,0 mmol) in THF 50 ml tropfenweise über 30 Minuten addiert und das Reaktionsgemisch wurde 2,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Eine 10% KOH Lösung (25 ml) wurde tropfenweise unter Eiskühlung zugegeben und die Reaktionsmischung über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die entstandene LiAlH4 Schlacke und Nebenprodukte besaßen eine schleimige Konsistenz und konnten nicht filtriert werden. Deshalb wurde das Reaktionsgemisch dekantiert. Die verbliebenen Salze wurden in Wasser gelöst und mit Methyl-tert-butylether (3 × 50 ml) gerührt und filtriert. Die Phasen der Zweiphasigen Filtrate wurden getrennt und die wässrige Phase erschöpfend mit Methyl-tert-butylether extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit ges. Kochsalzlösung (250 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und im Vakuum eingeengt. Produkt 5a wurde als viskoses blassgelbes Öl (8,2 g; 91,0%) isoliert, 1H-NMR (C6D6): 3,75–3,95 (m; 1H); 3,5–3,7 (m; 3H); 3,50–3,70 (m; 3H); 3,35–3,70 (m; 1H); 1,55 (s; 3H); 1,41 (s; 3H); 1,36 (s; 9H)(a) LiAlH 4 (2.52 g, 66 mmol) was suspended in THF (100 mL). Then, a solution of the crude product 4a from Example 3a (10.1 g, 39.0 mmol) in THF 50 ml was added dropwise over 30 minutes and the reaction mixture was stirred at room temperature for 2.5 hours. A 10% KOH solution (25 ml) was added dropwise with ice-cooling and the reaction mixture was stirred at room temperature overnight. The resulting LiAlH 4 slag and by-products had a slimy consistency and could not be filtered. Therefore, the reaction mixture was decanted. The remaining salts were dissolved in water and stirred with methyl tert-butyl ether (3 x 50 ml) and filtered. The phases of the biphasic filtrates were separated and the aqueous phase exhaustively extracted with methyl tert-butyl ether. The combined organic phases were washed with sat. Brine (250 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. Product 5a was isolated as a viscous pale yellow oil (8.2 g, 91.0%), 1 H NMR (C 6 D 6 ): 3.75-3.95 (m, 1H); 3.5-3.7 (m; 3H); 3.50-3.70 (m; 3H); 3.35-3.70 (m; 1H); 1.55 (s, 3H); 1.41 (s, 3H); 1.36 (s; 9H)
  • (b) LiAlH4 (2,98 g); 18,5 mmol) wurde zu THF (100 ml) addiert und eine Lösung des filtriertem Produktes 4a aus Beispiel 3a (9,96 g; 38,4 mmol) in 50 ml THF wurde tropfenweise über 30 Minuten addiert und anschließend wurde die Reaktionsmischung 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurden Wasser (2,5 ml), eine 10% NaOH Lösung (3,5 ml) und schließlich mehr Wasser (8 ml) tropfenweise unter Eisbadkühlung addiert, sowie 40 Minuten gerührt. Methyl-tert-butylether (20 ml) wurde addiert und das Reaktionsgemisch über MgSO4 getrocknet und im Vakuum eingeengt, um Produkt 5a als blassgelbes viskoses Öl (7,75 g; 87,2%) zu isolieren. 1H-NMR(C6D6): wie oben.(b) LiAlH 4 (2.98 g); 18.5 mmol) was added to THF (100 mL) and a solution of the filtered product 4a from Example 3a (9.96 g, 38.4 mmol) in 50 mL THF was added dropwise over 30 minutes and then the reaction mixture became 1 Stirred at room temperature. Then, water (2.5 ml), a 10% NaOH solution (3.5 ml) and finally more water (8 ml) were added dropwise with ice-bath cooling and stirred for 40 minutes. Methyl tert -butyl ether (20 mL) was added and the reaction dried over MgSO 4 and concentrated in vacuo to isolate product 5a as a pale yellow viscous oil (7.75 g, 87.2%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.
  • (c) LiAlH4 (32,26 g; 0,85 mol) wurde in THF vorgelegt und tropfenweise über 50 Minuten mit einer Lösung des filtrierten Produktes 4a in THF (650 ml) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur gerührt und dann tropfenweise unter Kühlung, durch ein Eisbad, mit Wasser (24 ml), einer 10% NaOH Lösung (33 ml) und mehr Wasser (60 ml) versetzt und anschließend über Nacht gerührt. Methyl-tert-butylether (200 ml) wurde addiert und das Reaktionsgemisch wurde über MgSO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Produkt 5a als blassgelbes Öl (93,9 g; 80,4%) zu erhalten. 1H-NMR(C6D6): wie oben.(c) LiAlH 4 (32.26 g, 0.85 mol) was placed in THF and treated dropwise over 50 minutes with a solution of the filtered product 4a in THF (650 mL). The reaction mixture was stirred at room temperature and then added dropwise with cooling through an ice-bath, with water (24 ml), a 10% NaOH solution (33 ml) and more water (60 ml) and then stirred overnight. Methyl tert-butyl ether (200 ml) was added and the reaction was dried over MgSO 4 and concentrated in vacuo to give product 5a as a pale yellow oil (93.9 g, 80.4%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.
  • (d) Die Reaktion wurde im Großmaßstab wie in Beispiel 4b durchgeführt. Aus 2,29 kg Methyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4(S)-carboxylat 4a wurden 1,73 kg (84,7%) N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(R)-yl methanol 5a gewonnen. 1H-NMR(C6D6): wie oben.(d) The reaction was carried out on a large scale as in Example 4b. From 2.29 kg of methyl N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (S) -carboxylate 4a, 1.73 kg (84.7%) of N- (tert- Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (R) -yl-methanol 5a. 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.

Beispiel 5: N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-axazolidin-4(S)-yl methanal 6a (mit Boc als Pg und Methyl als R1 und R2) Example 5: N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-axazolidin-4 (S) -ylmethanal 6a (with Boc as Pg and Methyl as R1 and R2)

Figure 00300001
Figure 00300001

  • (a) N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(R)-yl methanol 5a (7,24 g; 31,3 mmol) wurden in Dichlormethan (60 ml) gelöst und dann mit Dess-Martin periodinan (DMP) (20,4 g; 48,2 mmol) versetzt (exotherm). Das Reaktionsgemisch wurde gekühlt, wasserfeuchtes Dichlormetahn (125 ml) wurde addiert und 30 Minuten gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde über etwas Kieselgel filtriert, das mit weiterem Dichlormethan gewaschen wurde. Die vereinigten Filtrate wurden mit einer 1:1 Mischung aus ges. NaHCO3 Lösung und 1M Na2S2O7 Lösung (160 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Produkt 6a als gelbes 01 (3,75g; 52,5%) zu erhalten. 1H NMR: 9,33 (s(br); 1H); 3,7–4,2 (in; 1H); 3,55–7,70 (m; 1H); 3,45–3,55 (m; 1H); 1,5–1,7 (m; 3H); 1,4–1,5 (m; 3H); 1,33 (s; 9H)(a) N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (R) -yl-methanol 5a (7.24 g, 31.3 mmol) was dissolved in dichloromethane (60 ml) and then Dess-Martin periodinane (DMP) (20.4 g, 48.2 mmol) (exothermic). The reaction mixture was cooled, water-wet dichloromethane (125 ml) was added and stirred for 30 minutes. The reaction mixture was filtered through some silica gel, which was washed with more dichloromethane. The combined filtrates were washed with a 1: 1 mixture of sat. NaHCO 3 solution and 1M Na 2 S 2 O 7 solution (160 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give product 6a as yellow oil (3.75 g, 52.5%). 1 H NMR: 9.33 (s (br); 1H); 3.7-4.2 (in; 1H); 3.55-7.70 (m; 1H); 3.45-3.55 (m; 1H); 1.5-1.7 (m, 3H); 1.4-1.5 (m, 3H); 1,33 (s; 9H)
  • (b) Oxalylchlorid (4,5 ml; 6,62 g; 1,5 eq.) wurde in Dichlormethan (80 ml) gelöst und auf 78°C gekühlt. DMSO (7,4 ml; 8,1 g; 104 mmol; 3 eq.) wurde in Dichlormethan (10 ml) gelöst und tropfenweise über 25 Minuten zu der Reaktionsmischung zugetropft, wobei die Innentemperatur auf –70°C anstieg. Das Reaktionsgemisch erwärmte sich innerhalb von 20 Minuten auf –60°C. N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxyzolidin-4(R)-yl methanol 5a (8 g; 35 mmol) wurde in Dichlormethan (60 ml) gelöst und tropfenweise über 50 Minuten zur Reaktionsmischung addiert, wobei die Innentemperatur auf –55°C anstieg. Dann wurde das Reaktionsgemisch 30 Minuten gerührt bis die Innentemperatur auf –45°C angestiegen war. Eine Mischung aus Hünig-Base (36 ml; 6,2 eq) und Dichlormethan (5 ml) wurde tropfenweise über 5 Minuten addiert, wobei die Innentemperatur –32°C erreichte. Die Farbe des Reaktionsgemisches änderte sich von blassrosa zu klar gelb. Man ließ das Reaktionsgemisch über eine Stunde auf 12°C erwärmen und kühlte dann erneut auf –8°C. Das Reaktionsgemisch wurde in eiskalte 1M HCl Lösung (130 ml) eingegossen und gerührt bis sich zwei Phasen gebildet hatten, die getrennt wurden. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 × 30 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit Phosphat-Puffer (ph 7) (4 × 80 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und im Vakuum eingeengt. Produkt 6a wurde als gelbes Öl (7,29 g; 91,9%) erhalten. 1H-NMR(C6D6): wie oben. [☐]D = –63°(b) Oxalyl chloride (4.5 mL, 6.62 g, 1.5 eq.) was dissolved in dichloromethane (80 mL) and cooled to 78 ° C. DMSO (7.4 mL, 8.1 g, 104 mmol, 3 eq.) Was dissolved in dichloromethane (10 mL) and added dropwise to the reaction mixture dropwise over 25 minutes with the internal temperature rising to -70 ° C. The reaction heated to -60 ° C over 20 minutes. N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxyzolidin-4 (R) -yl-methanol 5a (8 g, 35 mmol) was dissolved in dichloromethane (60 ml) and added dropwise to the reaction mixture over 50 minutes added, the internal temperature rose to -55 ° C. Then, the reaction mixture was stirred for 30 minutes until the internal temperature rose to -45 ° C. A mixture of Hünig's base (36 ml, 6.2 eq) and dichloromethane (5 ml) was added dropwise over 5 minutes, the internal temperature reaching -32 ° C. The color of the reaction mixture changed from pale pink to clear yellow. The reaction mixture was allowed to warm to 12 ° C over 1 hour and then re-cooled to -8 ° C. The reaction mixture was poured into ice-cold 1M HCl solution (130 ml) and stirred until two phases had formed, which were separated. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (3 × 30 ml). The combined organic phases were washed with phosphate buffer (pH 7) (4 × 80 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. Product 6a was obtained as a yellow oil (7.29 g, 91.9%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above. [☐] D = -63 °
  • (c) Oxalylchlorid (4,5 ml; 6,62 g; 52 mmol; 1,5 eq) wurde in Dichlormethan (80 ml) gelöst und auf –78°C gekühlt. DMSO (7,4 ml; 8,1 g; 104 mmol; 3 eq) wurde in Dichlormethan gelöst (10 ml) und tropfenweise zu der Oxalylchlorid Lösung zugegeben, wobei die Innentemperatur auf –70°C anstieg. Das Reaktionsgemisch 45 Minuten gerührt und erwärmte sich dabei auf –60°C. N-(tert-Butoxycarbanyl)-2,2-dimethyl-l,3-oxazolidin-4(R)-yl methanol 5a (8g; 35 mmol) wurde in Dichlormethan (60 ml) gelöst und tropfenweise innerhalb von 50 Minuten zum Reaktionsgemisch addiert. Dann wurde das Reaktionsgemisch 45 Minuten gerührt dabei erwärmte es sich auf –45°C. Eine Mischung aus Hünig Base (36 ml; 6,2 eq) und Dichlormethan (5 ml) wurde tropfenweise über 20 Minuten addiert. Dann wurde das Reaktionsgemisch 45 Minuten gerührt und erwärmte sich dabei auf 0°C. Das Reaktionsgemisch wurde in eiskalte 1M HCl Lösung (130 ml) eingegossen und gerührt, bis sich zwei Phasen bildeten, die getrennt wurden. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 × 30 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden über Na2SO4 getrocknet und im Vakuum eingeengt. Produkt 6a kannte als gelbes Öl (7,36 g; 92,8%) isoliert werden. 1H-NMR(C6D6): wie oben.(c) Oxalyl chloride (4.5 ml, 6.62 g, 52 mmol, 1.5 eq) was dissolved in dichloromethane (80 ml) and cooled to -78 ° C. DMSO (7.4 mL, 8.1 g, 104 mmol, 3 eq) was dissolved in dichloromethane (10 mL) and added dropwise to the oxalyl chloride solution with the internal temperature rising to -70 ° C. The reaction mixture stirred for 45 minutes and warmed to -60 ° C. N- (tert-Butoxycarbanyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4 (R) -yl-methanol 5a (8g, 35mmol) was dissolved in dichloromethane (60ml) and added dropwise to the reaction mixture over 50 minutes added. Then the reaction mixture was stirred for 45 minutes while warming to -45 ° C. A mixture of Hünig base (36 ml, 6.2 eq) and dichloromethane (5 ml) was added dropwise over 20 minutes. The reaction mixture was stirred for 45 minutes and warmed to 0 ° C. The reaction mixture was poured into ice-cold 1 M HCl solution (130 ml) and stirred until two phases separated which were separated. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (3 × 30 ml). The combined organic phases were dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. Product 6a could be isolated as a yellow oil (7.36 g, 92.8%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.
  • (d) Die folgende Reaktion wurde unter Stickstoff durchgeführt: Oxalylchlorid (2,83 ml; 33 ml; 1,5 eq) wurde in trockenem Dichlormethan (80 ml) gelöst und auf –50°C gekühlt. DMSO (4,69 ml; 66 mmol; 3 eq) wurde in trockenem Dichlormethan (10 ml) gelöst und tropfenweise über 45 Minuten zugetropft, wobei die Innentemperatur auf –46°C stieg. Zu Beginn der Zugabe bildete sich ein Gas. Dann wurde das Reaktionsgemisch 20 Minuten bei –50°C gerührt. N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolin-3(R)-yl methhanol 5a (5 g; 22 mmol) wurde in trockenem Dichlormethan (60 ml) gelöst und tropfenweise über 1,25 Stunden addiert. Dann wurde das Reaktionsgemisch 30 Minuten bei –50°C gerührt. Eine Mischung aus Hünig-Base (22,5 ml; 6,2 eq) und trockenem Dichlormethan (5 ml) wurde tropfenweise über 5 Minuten addiert, wobei die Inntemperatur –35°C nicht überstieg. Dann wurde das Reaktionsgemisch so lange gerührt bis die Innentemperatur auf 0°C stieg und im Anschluss in eine eiskalte 1M HCl Lösung (130 ml) eingegossen. Die Phasen des entstandenen Zweiphasengemisches wurden getrennt und die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 × 30 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit Phosphat Puffer (Na2HPO4/NaH2PO4, 0,5M bezüglich Phosphat) (4 × 80 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Produkt 6a wurde als gelblich braunes Öl (3,78 g; 76,3%) erhalten. 1H-NMR(C6D6): wie oben. [☐]D = –73,7° (c = 1,3).(d) The following reaction was carried out under nitrogen: oxalyl chloride (2.83 ml, 33 ml, 1.5 eq) was dissolved in dry dichloromethane (80 ml) and cooled to -50 ° C. DMSO (4.69 mL, 66 mmol, 3 eq) was dissolved in dry dichloromethane (10 mL) and added dropwise dropwise over 45 minutes with the internal temperature rising to -46 ° C. At the beginning of the addition, a gas formed. Then, the reaction mixture was stirred at -50 ° C for 20 minutes. N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolin-3 (R) -ylmethanol 5a (5 g, 22 mmol) was dissolved in dry dichloromethane (60 ml) and dropped dropwise over 1.25 Hours added. Then, the reaction mixture was stirred at -50 ° C for 30 minutes. A mixture of Hünig's base (22.5 mL, 6.2 eq) and dry dichloromethane (5 mL) was added dropwise over 5 minutes with the internal temperature not exceeding -35 ° C. Then, the reaction mixture was stirred until the internal temperature rose to 0 ° C and then poured into an ice-cold 1M HCl solution (130 ml). The phases of the resulting two-phase mixture were separated and the aqueous phase was extracted with dichloromethane (3 x 30 ml). The combined organic phases were washed with phosphate buffer (Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 0.5 M with respect to phosphate) (4 x 80 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. Product 6a was obtained as a yellowish brown oil (3.78 g, 76.3%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above. [☐] D = -73.7 ° (c = 1.3).
  • (e) Die folgende Reaktion wurde unter Stickstoff durchgeführt: Dichlormethan (700 ml) wurde auf –50°C gekühlt, Oxylylchlorid (47 ml; 542 mmol; 1,5 eq) wurde zugetropft und der Tropftrichter mit Dichlormethan (140 ml) gespült. DMSO (77 ml; 1,09 ml; 3 eq) wurde in Dichlormethan (105 ml) gelöst und tropfenweise zu der Oxalylchlorid Lösung addiert, wobei die Innentemperatur –43°C erreichte und am Anfang der Addition eine Gasentwicklung beobachtet wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 20 Minuten nachgerührt. N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(R)-yl methanol 5a (83,46 g; 361 mmol) wurde in Dichlormethan (650 ml) gelöst und bei einer Innentemperatur bei –43°C tropfenweise über 3 Stunden addiert. Der Tropftrichter wurde mit Dichlormethan gespult (2 × 50 ml) und das Reaktionsgemisch wurde 40 Minuten bei –50°C gerührt. Eine Mischung aus Hünig-Base (367 ml; 6,2 eq; und Dichlormethan (60 ml) wurde tropfenweise über 20 Minuten addiert und dabei stieg die Innentemperatur. Das Reaktionsgemisch wurde gerührt bis 5°C erreicht wurden. Dann wurde eine eiskalte 1M HCl Lösung (1,41) tropfenweise addiert. Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (3 × 300 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Phosphat Puffer (151 g NaH2PO4 Dihydrat und 117 g NaH2PO4 Monohydrat in 3,41 l Wasser) (4 × 850 ml), über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Produkt 6a wurde als gelbes Öl (63,55 g; 76,8%) erhalten. 1H-NMR(C6D6): wie oben. [☐]D = –75,2° (c = 1,34; CHCl3).(e) The following reaction was carried out under nitrogen: dichloromethane (700 ml) was cooled to -50 ° C, oxylyl chloride (47 ml, 542 mmol, 1.5 eq) was added dropwise and the dropping funnel was rinsed with dichloromethane (140 ml). DMSO (77 mL, 1.09 mL, 3 eq) was dissolved in dichloromethane (105 mL) and added dropwise to the oxalyl chloride solution, the internal temperature reaching -43 ° C and gas evolution observed at the beginning of the addition. The reaction mixture was stirred for 20 minutes. N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4 (R) -yl-methanol 5a (83.46 g, 361 mmol) was dissolved in dichloromethane (650 ml) and allowed to stand at an internal temperature -43 ° C added dropwise over 3 hours. The dropping funnel was spooled with dichloromethane (2 × 50 ml) and the reaction mixture was stirred at -50 ° C for 40 minutes. A mixture of Hünig's base (367 mL, 6.2 eq) and dichloromethane (60 mL) was added dropwise over 20 minutes while the internal temperature rose The reaction mixture was stirred until 5 ° C was reached, then ice-cold 1M HCl The phases of the two-phase mixture were separated and the aqueous phase was extracted with dichloromethane (3 × 300 ml) The combined organic phases were washed with phosphate buffer (151 g NaH 2 PO 4 dihydrate and 117 g NaH . 2 PO 4 monohydrate (3.41 l in water) 4 × 4 dried 850 ml), over Na 2 SO and concentrated under vacuum product 6a was obtained as a yellow oil (63.55 g; obtained 76.8%) 1 H. -NMR (C 6 D 6 ): as above. [□] D = -75.2 ° (c = 1.34, CHCl 3 ).
  • (f) Die folgende Reaktion wurde unter Stickstoff durchgeführt: Oxalylchlorid (2,83 ml; 33 mmol; 1,5 eq) wurde in Dichlormethan (13 ml) gelöst und auf –50°C gekühlt. DMSO (4,69 ml; 66 mmol; 3 eq) wurde in Dichlormethan gelöst (13 ml) und innerhalb von 30 Minuten tropfenweise zu der Oxalylchlorid Lösung zugetropft, wobei die Innentemperatur –45°C erreichte und bei der Addition eine Gasentwicklung beobachtet wurde. Dann wurde das Reaktionsgemisch 20 Minuten bei –50°C gerührt. N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(R)-yl methanol 5a (5 g; 22 mmol) wurde in Dichlormethan (31 ml) gelöst und innerhalb einer Stunde tropfenweise zu der Reaktionsmischung addiert. Dann wurde das Reaktionsgemisch 30 Minuten bei –50°C gerührt. Eine Mischung von Hünig-Base (15,7 ml; 4,3 eq) und Dichlormethan (4 ml) wurde tropfenweise über 5 Minuten zugetropft, wobei die Innentemperatur –35°C erreichte. Dann ließ man das Reaktionsgemisch auf 0° erwärmen. Danach wurde eiskalte 1M HCl Lösung (51 ml) tropfenweise zum Reaktionsgemisch addiert. Die Phasen des entstandenen Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (30 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit Phosphat Puffer (14,29 g Na2HPO4 Dihydrat und 11,13 g NaH2PO4 Monohydrat in 320 ml Wasser) (4 × 80 ml), über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Produkt 6a als gelbes Öl (4,5 g; 90,8%) zu isolieren. 1H-NMR(C6D6): wie oben. [☐]D = –76,6° (c = 1,34; CHCl3).(f) The following reaction was carried out under nitrogen: Oxalyl chloride (2.83 ml, 33 mmol, 1.5 eq) was dissolved in dichloromethane (13 ml) and cooled to -50 ° C. DMSO (4.69 ml, 66 mmol, 3 eq) was dissolved in dichloromethane (13 ml) and added dropwise dropwise over 30 minutes to the oxalyl chloride solution, the internal temperature reaching -45 ° C and evolution of gas being observed upon addition. Then, the reaction mixture was stirred at -50 ° C for 20 minutes. N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (R) -yl-methanol 5a (5 g, 22 mmol) was dissolved in dichloromethane (31 ml) and added dropwise to the solution over a period of one hour Added reaction mixture. Then, the reaction mixture was stirred at -50 ° C for 30 minutes. A mixture of Hünig's base (15.7 ml, 4.3 eq) and dichloromethane (4 ml) was added dropwise dropwise over 5 minutes, the internal temperature reaching -35 ° C. Then the reaction mixture was allowed to warm to 0 °. Thereafter, ice-cold 1M HCl solution (51 ml) was added dropwise to the reaction mixture. The phases of the resulting two-phase mixture were separated. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (30 ml). The combined organic phases were dried over Na 2 SO 4 with phosphate buffer (14.29 g Na 2 HPO 4 dihydrate and 11.13 g NaH 2 PO 4 monohydrate in 320 ml water) (4 × 80 ml) and concentrated in vacuo to isolate product 6a as a yellow oil (4.5 g, 90.8%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above. [□] D = -76.6 ° (c = 1.34, CHCl 3 ).
  • (g) Die Reaktion wurde im Großmaßstab wie in Beispiel 5f durchgeführt. 1,62 kg N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxyzolidin-4(R)-yl methanol 5a, 1,5 eq Oxalylchlorid, 3 eq DMSO und 4,3 eq Hünig Base in konzentrierterer Lösung wurden eingesetzt, um 1,51 kg (94,0%) N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-y1 methanal 6a. 1H-NMR(C6D6): wie oben.(g) The reaction was carried out on a large scale as in Example 5f. 1.62 kg of N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxyzolidine-4 (R) -yl methanol 5a, 1.5 eq of oxalyl chloride, 3 eq of DMSO and 4.3 eq Hunig base in More concentrated solutions were used to obtain 1.51 kg (94.0%) of N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (S) -ylmethanal 6a. 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.

Die Versuche von Beispiel 5 zeigen, dass Alkohol 5a durch verschiedene Methoden, wie Dess-Martin Oxidation (Beispiel 5a) und Swern Oxidation (Beispiele 5b–g) zu Aldehyd 6a oxidiert werden kann. Sie zeigen ebenso, dass die Swern Oxidation bei –78°C (Beispiele 5b–c), wie in der Literatur beschrieben, aber genauso bei –40°C bis –50°C (Beispiele 5d–g) erfolgreich durchgeführt werden können. Weiterhin zeigen diese auf, dass die Reaktion in annehmbar hohen Konzentrationen durchgeführt werden können (Beispiele 5f–9 in Vergleich zu 5d–g), was die Durchführung in industriellem Maßstab erst ermöglicht.The experiments of Example 5 show that alcohol 5a can be oxidized to aldehyde 6a by various methods, such as Dess-Martin oxidation (Example 5a) and Swern oxidation (Examples 5b-g). They also show that the Swern oxidation at -78 ° C (Examples 5b-c), as described in the literature, but also at -40 ° C to -50 ° C (Examples 5d-g) can be successfully performed. Furthermore, these show that the reaction can be carried out in acceptably high concentrations (Examples 5f-9 compared to 5d-g), which makes the implementation on an industrial scale possible.

Beispiel 6: 1(R)-[N-(tert-Butoxycarbonyl)-2',2'-dimethyl-1',3'-oxazolidin-4'(S)-yl]-hexadec-2-in-1-ol 7a (mit Boc als Pg und Methyl als R1 und R2)Example 6: 1 (R) - [N- (tert-butoxycarbonyl) -2 ', 2'-dimethyl-1', 3'-oxazolidine-4 '(S) -yl] -hexadec-2-yn-1 ol 7a (with Boc as Pg and methyl as R1 and R2)

Figure 00330001
Figure 00330001

  • (a) 1-Pentadecin (2,31 ml; 8,8 mmol; 2,0 eq) wurde in trockenem THF (50 ml) gelöst und auf unter –20°C gekühlt. BuLi (3,2 ml; 2,5M; 7,8 mmol, 1,8 eq) wurde addiert, während die Innentemperatur unter –20°C gehalten wurde. Eine milchig weiße Reaktionsmischung wurde erhalten, die 1,5 Stunden bei einer Temperatur unter –20°C gerührt wurde. N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-yl methanal 6a (1 g; 4,4 mmol) wurde in trockenem THF (30 ml) gelöst, auf –20°C gekühlt und zum Reaktionsgemisch addiert. Das Reaktionsgemisch wurde 4 Stunden bei einer Temperatur unter –20°C gehalten, wobei sich die Trübung langsam auflöste. Die Reaktion wurde durch Zugabe von NH4Cl Lösung (50 ml) gequenscht. Ausgefallene Salze wurden durch Addition von Wasser (30 ml) gelöst. Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (4 × 25 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit Kochsalzlösung (2 × 25 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und ml Vakuum eingeengt, um Rohprodukt von 7a als orange-braunes Öl (2,78 g) zu erhalten. Um nicht abreagiertes 1-Pentadecin zu entfernen wurde Rohprodukt 7a durch Chromatographie (54 g Kieselgel; Eluent erst n-Hexan, dann 6:1 n-Hexan:Essigsäureethylester) gereinigt, wobei das chromatographierte Produkt 7a als gelbes Öl (1,37 g; 3,2 mmol; 71,8%) isoliert wurde. 1H NMR (C6D6, 400 MHz): 0,89 (t; J = 6,5 Hz: 3H); 1,1–1,5 (m; 37H); 2,1 (dt; 1,5/7 Hz; 2H); 3,70–3,85 (m; 1H); 3,85-3,95 (m; 1H); 3,95–4,05 (m; 1H); 4,4–4,5 (m; 1H); 5,41 (d; 1H; J = 6 Hz). Diastereoselektivität 1:7.(a) Dissolve 1-pentadecine (2.31 mL, 8.8 mmol, 2.0 eq) in dry THF (50 mL) and cool to below -20 ° C. BuLi (3.2 mL, 2.5M, 7.8 mmol, 1.8 eq) was added while keeping the internal temperature below -20 ° C. A milky white reaction mixture was obtained, which was stirred for 1.5 hours at a temperature below -20 ° C. N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (S) -ylmethanal 6a (1g, 4.4mmol) was dissolved in dry THF (30ml), cooled to -20 ° C and added to the reaction mixture. The reaction mixture was kept at a temperature below -20 ° C for 4 hours, with the turbidity slowly dissolving. The reaction was quenched by the addition of NH 4 Cl solution (50 mL). Precipitated salts were dissolved by addition of water (30 ml). The phases of the two-phase mixture were separated. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (4 x 25 ml). The combined organic phases were washed with brine (2 x 25 mL), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give crude product of 7a as an orange-brown oil (2.78 g). To remove unreacted 1-pentadecine, crude product 7a was purified by chromatography (54 g silica gel, eluent first n-hexane then 6: 1 n-hexane: ethyl acetate) to give the chromatographed product 7a as a yellow oil (1.37 g; 3.2 mmol, 71.8%) was isolated. 1 H NMR (C 6 D 6 , 400 MHz): 0.89 (t, J = 6.5 Hz: 3H); 1.1-1.5 (m, 37H); 2.1 (dt; 1.5 / 7 Hz; 2H); 3.70-3.85 (m; 1H); 3.85-3.95 (m; 1H); 3.95-4.05 (m; 1H); 4.4-4.5 (m; 1H); 5.41 (d; 1H, J = 6 Hz). Diastereoselectivity 1: 7.
  • (b) 1-Pentadecin (2,1 ml; 7,9 mmol; 1,8 eq wurde in trockenem THF (50 ml) gelöst und auf –30°C gekühlt. BuLi (2,82 ml; 2,5M; 7,0 mmol; 1,6 eq) wurde addiert, wobei die Innentemperatur auf –25°C stieg. Eine milchig weiße Lösung wurde erhalten, die noch 1,5 Stunden bei einer Temperatur unter –20°C gerührt wurde. N-(tert Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-yl methanal 6a (1 g; 4,4 mmol) wurde in trockenem THF (30 ml) gelöst, auf –20°C gekühlt und dann zum Reaktionsgemisch addiert. Das Reaktionsgemisch wurde 4 Stunden bei einer Temperatur unter –20°C gerührt, dabei löste sich die Trübung langsam auf. Die Reaktion wurde durch Addition von NH4Cl Lösung (40 ml) gequenscht. Die Phasen des Zweiphasensystemes wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (4 × 25 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Kochsalzlösung (2 × 25 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt 7a wurde als orangebraunes Öl (2,77 g) isoliert. Um nicht abreagiertes 1-Pentadecin abzutrennen, wurde Rohprodukt 7a durch Chromatographie (51 g Kieselgel; Eluent erst n-Hexan, dann 6:1 n-Hexan:Essigsäureethylester), wobei das chromatographierte Produkt 7a als gelbes Öl (1,38 g; 3,2 mmol; 72,3%) erhalten wurde. 1H-NMR(C6D6): wie oben. Diastereoselektivität: 1:8.(b) 1-Pentadecine (2.1 ml, 7.9 mmol, 1.8 eq was dissolved in dry THF (50 ml) and cooled to -30 ° C. BuLi (2.82 ml, 2.5M, 7 , 0 mmol, 1.6 eq) was added, the internal temperature rising to -25 ° C. A milky white solution was obtained, which was stirred for a further 1.5 hours at a temperature below -20 ° C. N- (tert Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (S) -ylmethanal 6a (1g, 4.4mmol) was dissolved in dry THF (30ml), cooled to -20 ° C and then The reaction mixture was stirred for 4 hours at a temperature below -20 ° C., during which the turbidity slowly dissolved, and the reaction was quenched by addition of NH 4 Cl solution (40 ml) The phases of the two-phase system were separated. The aqueous layer was extracted with dichloromethane (4 x 25 mL) and the combined organic layers were washed with brine (2 x 25 mL), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give crude product 7a isolated as orange-brown oil (2.77 g). To separate unreacted 1-pentadecine, crude product 7a was purified by chromatography (51 g silica gel, eluent first n-hexane then 6: 1 n-hexane: ethyl acetate) to give the chromatographed product 7a as a yellow oil (1.38 g, 3 , 2 mmol, 72.3%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above. Diastereoselectivity: 1: 8.
  • (c) 1-Pentadecin (2,1 ml; 7,9 mmol; 1,8 eq) wurde in THF (50 ml) gelöst und auf –20°C gekühlt. BuLi (2,82 ml; 2,5M; 7 mmol; 1,6 eq) wurde addiert und das Reaktionsgemisch wurde 1,5 Stunden bei einer Temperatur unter –20°C gerührt und dann auf –40°C gekühlt. N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)yl methanal 6a (1 g; 4,4 mmol) wurde in THF (2,5 ml) gelost und zum Reaktionsgemisch addiert. Das Reaktionsgemisch wurde auf –20°C aufwärmen. gelassen und 4,5 Stunden bei dieser Temperatur gerührt. Die Reaktion wurde durch Addition von NH4Cl Lösung (50 ml) gequenscht. Ausgefallene Salze wurden in weiterer NH4Cl Lösung (130 ml) und Wasser (25 ml) gelöst. Die Phasen des Zweiphasensystemes wurden getrennt und die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (4 × 25 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Rohprodukt 7a wurde als gelbes Öl (2,77 g) isoliert. Um nicht abreagiertes 1-Pnetadecin abzutrennen, wurde Rohprodukt 7a durch Chromatographie gereinigt (53 g Kieselgel; Eluent erst n-Hexan, dann 6:1 n-Hexan:Essigsäureethylester), wobei chromatographiertes Produkt 7a als gelbes Öl (0,71 g; 37,2%) erhalten wurde. 1H-NMR(C6D6): wie oben. Diastereoselektivität 1:8 bis 1:12.(c) 1-Pentadecine (2.1 mL, 7.9 mmol, 1.8 eq) was dissolved in THF (50 mL) and cooled to -20 ° C. BuLi (2.82 mL, 2.5 M, 7 mmol, 1.6 eq) was added and the reaction mixture was stirred at a temperature below -20 ° C for 1.5 hours and then cooled to -40 ° C. N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4 (S) -ylmethanal 6a (1 g, 4.4 mmol) was dissolved in THF (2.5 mL) and added to the reaction mixture , The reaction mixture was warmed to -20 ° C. left and stirred for 4.5 hours at this temperature. The reaction was quenched by addition of NH 4 Cl solution (50 mL). Precipitated salts were dissolved in further NH 4 Cl solution (130 ml) and water (25 ml). The phases of the two-phase system were separated and the aqueous phase was extracted with dichloromethane (4 x 25 ml). The combined organic phases were dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. Crude product 7a was isolated as a yellow oil (2.77 g). To separate unreacted 1-p-nadecine, crude product 7a was purified by chromatography (53 g silica gel, eluent first n-hexane, then 6: 1 n-hexane: ethyl acetate) to give chromatographed product 7a as a yellow oil (0.71 g, 37 , 2%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above. Diastereoselectivity 1: 8 to 1:12.
  • (b) THF (2,41) wurde auf –20°C gekühlt und 1-Pentadecin (124 ml; 471 mmol; 1,8 eq) wurde addiert. BuLi (167 ml; 2,5 M; 419 mmol; 1,6 eq) wurde tropfenweise über 25–30 Minuten addiert, wobei die Innentemperatur bei etwa –20°C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 1,5 Stunden bei –20°C gerührt, wobei sich eine milchig weiße Suspension bildete und dann auf –40°C gekühlt. N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-yl methanal 6a (60 g; 262 mmol) wurde in THF (200 ml) gelöst und tropfenweise innerhalb von 35 Minuten zu dem Reaktionsgemisch addiert, während die Innentemperatur bei etwa –40°C gehalten wurde. Dem Reaktionsgemisch wurde erlaubt sich auf –20°C zu erwärmen und anschließend wurde für 4 Stunden diese Temperatur gehalten. Die Reaktion wurde durch langsame Addition von NH4Cl Lösung (730 ml) bei einer Datentemperatur bis –15°C gequenscht. Dann wurde weitere NH4Cl Lösung (1700 ml) addiert. Ausgefallene Salze wurden durch Addition von Wasser (1 l) gelöst. Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (1,6 l; 1,1 l; 1 l; 1 l) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit NaCl Lösung (2 × 1 l) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, wobei Rohprodukt 7a als orangebraunes Öl (15 7,27 g) isoliert wurde.(b) THF (2.41) was cooled to -20 ° C and 1-pentadecine (124 mL, 471 mmol, 1.8 eq) was added. BuLi (167 mL, 2.5 M, 419 mmol, 1.6 eq) was added dropwise over 25-30 minutes, keeping the internal temperature at about -20 ° C. The reaction mixture was stirred for 1.5 hours at -20 ° C to form a milky white suspension and then cooled to -40 ° C. N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (S) -ylmethanal 6a (60 g, 262 mmol) was dissolved in THF (200 mL) and added dropwise over 35 minutes added to the reaction mixture, while the internal temperature was kept at about -40 ° C. The reaction mixture was allowed to warm to -20 ° C and then held at this temperature for 4 hours. The reaction was quenched by slow addition of NH 4 Cl solution (730 ml) at a data temperature down to -15 ° C. Then additional NH 4 Cl solution (1700 ml) was added. Precipitated salts were dissolved by addition of water (1 L). The phases of the two-phase mixture were separated. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (1.6 L, 1.1 L, 1 L, 1 L). The combined organic phases were washed with NaCl solution (2 × 1 L), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give crude product 7a as an orange-brown oil (157.27 g).

Etwas Rohprodukt 7a (5,08 g) wurde durch abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Pentadecin gereinigt. Das nicht abreagierte 1-Pentadecin wurde als farbloses Destillat (1,64 g) erhalten und das durch die Destillation gereinigte Produkt 7a wurde als braunes Öl (3,11 g) erhalten.
1H-NMR(C6D6): wie oben.Some crude product 7a (5.08 g) was purified by distilling off unreacted 1-pentadecine. The unreacted 1-pentadecine was obtained as a colorless distillate (1.64 g) and the product 7a purified by distillation was obtained as a brown oil (3.11 g).
1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.

Das 1H-NMR zeigt, dass durch die Destillation das Produkt 7a weder zersetzt wird noch das sie einen Einfluss auf das Verhältnis der Diastereomere hat. Um das Verhältnis der Diastereoisomere im Produkt zu bestimmen, wurde destillativ gereinigtes Produkt 7a weiter durch Chromatographie gereinigt (56 g Kieselgel; Eluent erst n-Hexan, dann 6:1 n-Hexan:Essigsäureethylester), wobei chromatograpiertes Produkt 7a als gelbes Öl (1,17 g; 31,6% errechnete Gesamtausbeute) erhalten wurde.
1H-NMR(C6D6): wie oben. Diastereoselektivität: 1:5.The 1 H NMR shows that the distillation of the product 7a is neither decomposed nor that it has an influence on the ratio of diastereomers. To increase the ratio of diastereoisomers in the product Purified product 7a purified by distillation was further purified by chromatography (56 g silica gel eluting first n-hexane then 6: 1 n-hexane: ethyl acetate) to give chromatographed product 7a as a yellow oil (1.17 g, 31.6%). calculated total yield).
1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above. Diastereoselectivity: 1: 5.

Die Hauptmenge des Rohproduktes 7a (152 g) wurde durch abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Pentadecin gereinigt. Nicht abreagiertes 1-Pentadecin wurde als blassgelbes Destillat (74,11 g) erhalten, das destillativ gereinigte Produkt 7a als braunes Öl (81,75 g; 73,9% Gesamtausbeute). Eine Teilmenge des destillativ gereinigten Produktes 7a (10,04 g) wurde weiter durch Filtration über Kieselgel (42 g; Eluent erst n-Hexan, dann 6:1 n-Hexan:Essigsäureethylester) gereinigt, wobei filtriertes Produkt 7a als orangefarbenes Öl (6,06 g; 44,6% Gesamtausbeute) isoliert wurde.
1H-NMR(C6D6): wie oben.

  • (e) 1-Pentadecin (74 ml; 279 mmol; 1,8 eq) wurde in trockenem THF (1,4 l) gelöst und auf –20°C gekühlt. BuLi (100 ml; 2,5M; 248 mmol; 1,6 eq) wurde tropfenweise über 25 Minuten addiert, wobei die Innentemperatur bei etwa –20°C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 1,5 Stunden bei einer Temperatur unter –20°C unter Bildung einer milchigen Suspension gerührt, die dann auf –40°C gekühlt wurde. N-(tert-Butoxycarbonal)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-yl methanal 6a (35,45 g; 155 mmol) wurde in THF (120 ml) gelöst und tropfenweise über 45 Minuten bei einer Innentemperatur von etwa –40°C zum Reaktionsgemisch addiert. Der Reaktionsmischung wurde es erlaubt sich auf –20°C zu erwärmen und anschließend wurde für weitere 4 Stunden bei dieser Temperatur gerührt. Die Reaktion wurde durch tropfenweise Addition von NH4Cl Lösung (430 ml) gequenscht. Ausgefallene Salze wurden durch Addition von weiterer NH4Cl Lösung (1 l) und Wasser (400 ml) gelöst. Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (4 × 590 ml) extrahiert und die vereinten organischen Phasen mit Kochsalzlösung (2 × 190 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und im. Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt 7a wurde als orangebraunes Öl (99,77 g) isoliert 1H-NMR(C6D6): wie oben. Das Rohprodukt 7a wurde durch abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Pentadecin gereinigt. Das nicht abreagierte 1-Pentadecin wurde als farbloses Destillat (56,23 g) erhalten und das destillativ gereinigte Produkt 7a als braunes Öl (36,21 g; 53,5%). 1H-NMR(C6D6): wie oben. Diastereoselektivität 1:4.
  • (f) 1-Pentadecin (11,6 ml; 44,2 mmol, 2,3 eq) wurde in THF gelöst (144 ml) und auf –20°C gekühlt. BuLi (12 ml; 2,5 M; 31 mmol; 1,6 eq) wurde tropfenweise addiert, wobei die Innentemperatur unter –20°C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 1,5 Stunden bei einer Innentemperatur unter –20°C gerührt. N-(tert Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-yl methanal 6a (4,39 g; 19,1 mmol) wurde in THF (11 ml) gelöst, auf –20°C gekühlt und tropfenweise bei –20°C zum Reaktionsgemisch addiert. Das Reaktionsgemisch wurde 4 Stunden bei einer Innentemperatur unter –20°C gerührt. Die Reaktion wurde durch Addition von NH4Cl Lösung (50 ml) gequenscht. Ausgefallene Salze wurden durch Addition von weiterer NH4Cl Lösung (130 ml) und Wasser (50 ml) gelöst. Die Phasen des Zweiphasensystemes wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Dichlormethan (4 × 100 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden über Na2SO4 getrocknet und im Vakuum eingeengt, wobei Rohprodukt 7a als gelbes Öl (13,18 g) erhalten wurde. Eine Teilmenge des Rohproduktes 7a (3 g) wurden. durch Chromatographie gereinigt (58 g Kieselgel; Eluent erst n-Hexan, dann 6:1 n-Hexan:Essigsäureethylester). Das chromatographierte Produkt 7a wird als gelbes Öl (1 g; 52,4%) erhalten. 1H-NMR(C6D6): wie oben.
  • (g) Die Reaktion wurde im Großmaßstab wie in Beispiel 6f in 2 Durchläufen durchgeführt:
The bulk of the crude product 7a (152 g) was purified by distilling off unreacted 1-pentadecine. Unreacted 1-pentadecine was obtained as a pale yellow distillate (74.11 g), the purified product 7a by distillation as a brown oil (81.75 g, 73.9% overall yield). A portion of the purified product 7a (10.04 g) was further purified by filtration through silica gel (42 g, eluent first n-hexane, then 6: 1 n-hexane: ethyl acetate) to give filtered product 7a as an orange oil (6 , 06 g, 44.6% overall yield) was isolated.
1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.
  • (e) Dissolve 1-pentadecine (74 mL, 279 mmol, 1.8 eq) in dry THF (1.4 L) and cool to -20 ° C. BuLi (100 mL, 2.5 M, 248 mmol, 1.6 eq) was added dropwise over 25 minutes, keeping the internal temperature at about -20 ° C. The reaction mixture was stirred for 1.5 hours at a temperature below -20 ° C to form a milky suspension, which was then cooled to -40 ° C. N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4 (S) -ylmethanal 6a (35.45 g, 155 mmol) was dissolved in THF (120 mL) and dropped dropwise over 45 minutes added at an internal temperature of about -40 ° C to the reaction mixture. The reaction mixture was allowed to warm to -20 ° C and then stirred for an additional 4 hours at this temperature. The reaction was quenched by dropwise addition of NH 4 Cl solution (430 mL). Precipitated salts were dissolved by addition of further NH 4 Cl solution (1 L) and water (400 mL). The phases of the two-phase mixture were separated. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (4 × 590 ml) and the combined organic phases were washed with brine (2 × 190 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. Vacuum concentrated. The crude product 7a was isolated as an orange-brown oil (99.77 g). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above. The crude product 7a was purified by distilling off unreacted 1-pentadecine. The unreacted 1-pentadecine was obtained as a colorless distillate (56.23 g) and the purified product 7a by distillation as a brown oil (36.21 g, 53.5%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above. Diastereoselectivity 1: 4.
  • (f) 1-Pentadecine (11.6 ml, 44.2 mmol, 2.3 eq) was dissolved in THF (144 ml) and cooled to -20 ° C. BuLi (12 mL, 2.5 M, 31 mmol, 1.6 eq) was added dropwise keeping the internal temperature below -20 ° C. The reaction mixture was stirred for 1.5 hours at an internal temperature below -20 ° C. N- (tert-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4 (S) -ylmethanal 6a (4.39 g, 19.1 mmol) was dissolved in THF (11 mL) to -20 Cooled ° C and added dropwise at -20 ° C to the reaction mixture. The reaction mixture was stirred for 4 hours at an internal temperature below -20 ° C. The reaction was quenched by addition of NH 4 Cl solution (50 mL). Precipitated salts were dissolved by addition of further NH 4 Cl solution (130 ml) and water (50 ml). The phases of the two-phase system were separated. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (4 x 100 ml). The combined organic phases were dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give crude product 7a as a yellow oil (13.18 g). A subset of crude product 7a (3 g) was added. purified by chromatography (58 g of silica gel, eluent first n-hexane, then 6: 1 n-hexane: ethyl acetate). The chromatographed product 7a is obtained as a yellow oil (1 g, 52.4%). 1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.
  • (g) The reaction was carried out on a large scale as in Example 6f in 2 passes:

Je 610 g N-(text-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-yl methanal 6a wurden eingesetzt, um 994 g (85,4%) beziehungsweise 1019 g (87,5%) 1(R)-[N-(tert-Butoxycarbonyl)-2',2'-dimethyl-1',3'-oxazohdin-4'(S)-yl]-hexadec-2-in-1-ol 7a zu erhalten, das durch abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Pentadecin, aber nicht durch Filtration über Kieselgel gereinigt wurde.
1H-NMR(C6D6): wie oben.610 g of N- (text-butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidine-4 (S) -ylmethanal 6a were used to obtain 994 g (85.4%) and 1019 g (87.5%), respectively %) 1 (R) - [N- (tert-butoxycarbonyl) -2 ', 2'-dimethyl-1', 3'-oxazohdin-4 '(S) -yl] -hexadec-2-yn-1-ol 7a, which was purified by distilling off unreacted 1-pentadecine, but not by filtration over silica gel.
1 H-NMR (C 6 D 6 ): as above.

Die Experimente des Beispieles 6 zeigen, dass 1,8 eq 1-Pentadecin genug sind um eine vollständige Reaktion zu erreichen (Beispiele 6a–b). Sie zeigen ebenso, dass es möglich ist sie in einer ausreichend hohen Konzentration (Beispiel 6c–g verglichen mit 6a–b) durchzuführen, was sie für einen industriellen Maßstab geeignet macht. Weiterhin zeigen diese auf, dass es möglich ist Produkt 7a durch eine Destillation und/oder Filtration über Kieselgel für den Großmaßstab zu reinigen. Gleichfalls zeigen die Experimente des Beispiels 7 unten, dass es nicht nötig ist Produkt 7a durch Filtration über Kieselgel zu reinigen und dass das Rohprodukt oder destillativ gereinigtes Produkt 7a direkt im nächsten Schritt, dem Entschützen der primären Hydroxyl- und Amin-Gruppe, eingesetzt werden können.The experiments of Example 6 show that 1.8 eq of 1-pentadecine are enough to achieve a complete reaction (Examples 6a-b). They also show that it is possible to carry them out in a sufficiently high concentration (Example 6c-g compared to 6a-b), making them suitable for an industrial scale. Furthermore, these show that it is possible to purify product 7a by distillation and / or filtration on silica gel for large scale. Likewise, the experiments of Example 7 below show that it is not necessary to purify product 7a by filtration over silica gel and that the crude or distilled purified product 7a can be used directly in the next step of deprotecting the primary hydroxyl and amine groups ,

Beispiel 7: 2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(R)-diol 8a (mit Boc als Pg) Example 7: 2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (R) -diol 8a (with Boc as Pg)

Figure 00360001
Figure 00360001

  • (a) Destillativ gereinigtes Produkt 7a (3,1 g) wurde in Methanol (70 ml) gelöst und Amberlyst® 15 (3,67 g) wurde addiert. Das Reaktionsgemisch wurde 81 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, über Celite® filtriert und unter Vakuum eingeengt, tun Produkt 8a als gelbes Öl (2,04 g; 72,4%) zu erhalten. 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): ☐ 0,85 (t; J = 6,5 Hz; 3H); 1,1–1,5 (m; 31H); 2,14 (dt; J = 1,5/7 Hz; 2H); 3,4–3,6 (m; 3H); 4,2–4,3 (m; 1H); 4,48 (t; J = 5 Hz; 1H); 5,29 (d; J = 6 Hz; 1H); 6,13 (d; J: 7,5 Hz; 1H).(a) by distillation purified product 7a (3.1 g) was dissolved in methanol (70 ml) and Amberlyst ® 15 (3.67 g) was added. The reaction mixture was stirred for 81 hours at room temperature, filtered through Celite ® and concentrated under vacuum to do 8a product as a yellow oil (2.04 g; 72.4%) of. 1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): □ 0.85 (t, J = 6.5 Hz, 3H); 1.1-1.5 (m, 31H); 2.14 (dt, J = 1.5 / 7 Hz, 2H); 3.4-3.6 (m; 3H); 4.2-4.3 (m; 1H); 4.48 (t; J = 5 Hz, 1H); 5.29 (d, J = 6 Hz, 1H); 6.13 (d: J: 7.5 Hz; 1H).
  • (b) Destillativ gereinigtes Produkt 7a (10,02 g) wurden in Methanol (230 ml) gelöst und Amberlyst®15 (11,71 g) wurde addiert. Das Reaktionsgemisch wurde 39 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, über Celite® filtriert und unter Vakuum eingeengt, um Produkt 8a als orangebraunes Öl (7,66 g; 84,2%) zu erhalten. 1H NMR (DMSO-d6): wie oben.(b) by distillation purified product 7a (10.02 g) were dissolved in methanol (230 ml) and Amberlyst ® 15 (11.71 g) was added. The reaction mixture was stirred for 39 hours at room temperature, filtered through Celite ® and concentrated under vacuum to give the product 8a as an orange brown oil (7.66 g; 84.2%) of. 1 H NMR (DMSO-d 6 ): as above.
  • (c) Destillativ gereinigtes Produkt 7a (33,53 g) wurde in Methanol (220 ml) gelöst und Amberlyst®15 (39,43 g) wurde addiert. Das Reaktionsgemisch wurde 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, über Celite® filtriert und unter Vakuum zu einer methanolischen Lösung von etwa 500 ml reduziert, die mit n-Hexan (3 × 250 ml) extrahiert wurde. Die methanolische Lösung wurde unter Vakuum eingeengt und Produkt 8a wurde als braunes Öl (8,76 g) isoliert. Die n-Hexan Extrakte wurden unter Vakuum eingeengt, um verunreinigtes Produkt 8a zu erhalten, das über Kieselgel (55 g; Eluent erst n-Hexan, dann 2:1 n-Hexan: Essigsäureethylester) filtriert wurde, um filtriertes Produkt 8a (2,91 g) zu erhalten. Das extraktiv gereinigte Produkt 8a und das filtrierte Produkt 8a wurden vereint zu einer Gesamtausbeute von 11,67 g (38,3%). 1H NMR (DMSO-d6) wie oben.(c) by distillation purified product 7a (33.53 g) was dissolved in methanol (220 ml) and Amberlyst ® 15 (39.43 g) was added. The reaction mixture was stirred for 16 hours at room temperature, filtered through Celite ® and reduced under vacuum to a methanolic solution of about 500 ml, the (3 × 250 ml) was extracted with n-hexane. The methanolic solution was concentrated in vacuo and product 8a was isolated as a brown oil (8.76 g). The n-hexane extracts were concentrated in vacuo to give contaminated product 8a, which was filtered through silica gel (55 g, eluent first n-hexane, then 2: 1 n-hexane: ethyl acetate) to give filtered product 8a (2, 91 g). The extractively purified product 8a and the filtered product 8a were combined to give an overall yield of 11.67 g (38.3%). 1 H NMR (DMSO-d 6 ) as above.
  • (d) Destillativ gereinigtes Produkt 7a (36,21 g) wurde in Methanol (240 ml) gelöst und Amberlyst®15 (42,58 g) wurde addiert. Das Reaktionsgemisch wurde 41 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, über Celite® filtriert und unter Vakuum zu 500 ml einer methanolischen Lösung reduziert, die mit n-Hexan (700 ml, dann 5 × 250 ml) extrahiert wurde. Die methanolische Phase wurde unter Vakuum eingeengt, um Produkt 8a als braunes Öl (10,08 g) zu isolieren. Die n-Hexan Phasen wurden unter Vakuum eingeengt, um verunreinigtes Produkt 8a als braunes Öl (12,23 g) zu isolieren, welches über Kieselgel (190 g; Eluent erst n-Hexan, darin 4:1 n-Hexan:Essigsäureethylester) filtriert wurde, um filtriertes Produkt 8a (3,72 g) zu isolieren. Das extraktiv gereinigte Produkt 8a und das filtrierte Produkt 8a wurden zu einer Gesamtmenge von 13,80 g (42,0%) vereint. 1H NMR (DMSO-d6) wie oben.(d) distillation purified product 7a (36.21 g) was dissolved in methanol (240 ml) and Amberlyst ® 15 (42.58 g) was added. The reaction mixture was stirred for 41 hours at room temperature, filtered through Celite ® and reduced under vacuum to 500 ml of a methanolic solution with n-hexane (700 ml, then 5 × 250 ml) was extracted. The methanolic phase was concentrated in vacuo to isolate product 8a as a brown oil (10.08 g). The n-hexane phases were concentrated in vacuo to isolate contaminated product 8a as a brown oil (12.23 g) which was filtered through silica gel (190 g; eluent first n-hexane, therein 4: 1 n-hexane: ethyl acetate) to isolate filtered product 8a (3.72 g). The extractively purified product 8a and the filtered product 8a were combined to a total of 13.80 g (42.0%). 1 H NMR (DMSO-d 6 ) as above.
  • (e) Die Reaktion wurde im Großmaßstab wie in Beispiel 7b durchgeführt. Ausgehend von 2,01 kg 1(R)-[N-tert-Butoxycarbonyl)-2',2'-dimethyl-1',3'-oxazolidin 4'(S)-yl]-hexadec-2-in-1-ol 7a wurden 1,46 kg (80%) rohes 2(S)-N-(tert-Butyoxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(R)-diol 8a erhalten, die über Kieselgel filtriert wurden, um 0,88 kg (48,2%) filtriertes Produkt 8a zu isolieren. 1H NMR (DMSO-d6) wie oben.(e) The reaction was carried out on a large scale as in Example 7b. Starting from 2.01 kg of 1 (R) - [N-tert-butoxycarbonyl) -2 ', 2'-dimethyl-1', 3'-oxazolidine 4 '(S) -yl] -hexadec-2-yn-1 -ol 7a, 1.46 kg (80%) of crude 2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (R) -diol 8a were obtained, which were filtered through silica gel, to isolate 0.88 kg (48.2%) of filtered product 8a. 1 H NMR (DMSO-d 6 ) as above.

Beispiel 8: trans-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-en-1,3(R)-diol (N-Boc-Sphingosin) 9a, (mit Boc als Pg)Example 8: trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-ene-1,3 (R) -diol (N-Boc-Sphingosine) 9a, (with Boc as Pg)

Figure 00380001
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  • (a) 2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(R)-diol 8a (0,99 g; 2,5 mmol) wurde in trockenem THF (25 ml) gelöst und auf 0°C gekühlt. Red-Al (3 ml; 70%; 10,8 mmol; 4,3 eq) wurden in THF (23 ml) gelöst und auf 0°C vorgekühlt. Die Lösung des Alkins 8a wurde zu der Lösung von Red-Al bei 0°C addiert, wobei eine Gasentwicklung auftrat. Dann ließ man das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und 16,5 Stunden weiter rühren. Das Reaktionsgemisch wurde erneut auf 0°C gekühlt und mit Methanol (2 ml) gequenscht, wobei wiederum eine Gasentwicklung auftrat. Eine Kalium-Natrium-Tartrat Lösung (26 g/100 ml) (100 ml) wurde zum Reaktionsgemisch addiert und man rührte 3,5 Stunden bei Raumtemperatur. Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die organische Phase wurde mit Kalium-Natrum-Tartrat Lösung (50 ml) und NaCl Lösung (50 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, so dass Produkt 9a als farbloses 01 (0,93 g; 93,5%) isoliert wurde. 1H (DMSO-d6, 400 MHz): ☐ 0,85 (t; J = 7 Hz; 3H); 1,1–1,4 (m; 31H); 1,9–2,0 (m; 2H); 2,9–3,0 (m; 1H); 3,4–3,5 (m; 2H); 3,85 (dt; J = 5,5/6,5 Hz; 1H); 4,38 (t; J = 5,5 Hz; 1H); 4,74 (d; 5 Hz; 1H); 5,40 (dd, J = 6,5/15,5 Hz; 1H); 5,53 (dt; J = 6,5/15; 1H); 6,16 (d; J = 9 Hz; 1H).(a) 2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (R) -diol 8a (0.99 g, 2.5 mmol) was dissolved in dry THF (25 mL ) and cooled to 0 ° C. Red-Al (3 mL, 70%, 10.8 mmol, 4.3 eq) was dissolved in THF (23 mL) and precooled to 0 ° C. The solution of alkyne 8a was added to the solution of Red-Al at 0 ° C, with gas evolution occurring. Then, the reaction mixture was allowed to warm to room temperature and further stirred for 16.5 hours. The reaction mixture was recooled to 0 ° C and quenched with methanol (2 mL), again with gas evolution. A potassium sodium tartrate solution (26 g / 100 ml) (100 ml) was added to the reaction mixture and stirred at room temperature for 3.5 hours. The phases of the two-phase mixture were separated. The organic phase was washed with potassium sodium tartrate solution (50 ml) and NaCl solution (50 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give product 9a as colorless 01 (0.93 g; 93, 5%) was isolated. 1 H (DMSO-d 6 , 400 MHz): □ 0.85 (t, J = 7 Hz, 3H); 1.1-1.4 (m, 31H); 1.9-2.0 (m, 2H); 2.9-3.0 (m, 1H); 3.4-3.5 (m; 2H); 3.85 (dt, J = 5.5 / 6.5 Hz, 1H); 4.38 (t; J = 5.5 Hz, 1H); 4.74 (d; 5Hz, 1H); 5.40 (dd, J = 6.5 / 15.5 Hz, 1H); 5.53 (dt; J = 6.5 / 15; 1H); 6.16 (d, J = 9 Hz, 1H).
  • (b) 2(S)-N-(tert-Butaxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(R)-diol 8a (13,8 g; 35 mmol) wurde in THF (50 ml) gelöst und auf 0°C gekühlt. Red-Al (41 ml; 70%; 147 mmol, 4,2 eq) wurde in THF (50 ml) gelöst und auf 0°C gekühlt. Die Lösung des Alkins 8a wurde zu der Lösung des Red-Al bei 0°C addiert. Das Reaktionsgemisch ließ man auf Raumtemperatur erwähnen und 41 Stunden bei RT rühren. Das Reaktionsgemisch wurde auf 0°C gekühlt und langsam mit Methanol gequenscht, wobei eine Gasentwicklung auftrat. Eine gesättigte Natrium-Kalium Tartrat Lösung (99,34 g/150 ml) (150 ml) wurde addiert und das Gemisch wurde weitere 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Methyl-tert-butylether (3 × 150 ml) extrahiert. Die organische Phase wurde mit Natrium-Kalium-Tartrat Lösung (92,23 g/150 ml) (150 ml) und NaCl Lösung (150 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, und unter Vakuum eingeengt, um Produkt 9a (10,43 g; 75,5%) zu isolieren, 1H NMR (DMSO-d6) wie oben.(b) 2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (R) -diol 8a (13.8 g, 35 mmol) was dissolved in THF (50 mL) and cooled to 0 ° C. Red Al (41 mL, 70%, 147 mmol, 4.2 eq) was dissolved in THF (50 mL) and cooled to 0 ° C. The solution of alkyne 8a was added to the solution of Red-Al at 0 ° C. The reaction mixture was allowed to come to room temperature and stirred at RT for 41 hours. The reaction mixture was cooled to 0 ° C and quenched slowly with methanol to evolve gas. A saturated sodium potassium tartrate solution (99.34 g / 150 ml) (150 ml) was added and the mixture was stirred at room temperature for an additional 5 hours. The phases of the two-phase mixture were separated. The aqueous phase was extracted with methyl tert-butyl ether (3 x 150 ml). The organic phase was washed with sodium potassium tartrate solution (92.23 g / 150 ml) (150 ml) and NaCl solution (150 ml), dried over Na 2 SO 4 , and concentrated in vacuo to give product 9a (10 , 43 g, 75.5%), 1 H NMR (DMSO-d 6 ) as above.
  • (c) Die Reaktion wurde im Großmaßstab wie in Beispiel 8b durchgeführt. Dabei wurden 883 g 2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(R)-diol 8a eingesetzt, um 844 g (95,1%) trans-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-en-1,3(R)-diol 9a zu erhalten. 1H NMR (DMSO-d6) wie oben.(c) The reaction was carried out on a large scale as in Example 8b. 883 g of 2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (R) -diol 8a were used to give 844 g (95.1%) of trans-2 (S). To obtain N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-ene-1,3 (R) -diol 9a. 1 H NMR (DMSO-d 6 ) as above.

Beispiel 9: O,O'-Drmethyl-O''-[trans-2(S)-N-(tert-butoxycarbonyl)amino-3(R)-hxdroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphat (N-Bac-sphingosin-1-phosphat)10a (mit Boc als Pg)Example 9: O, O -methyl-O "- [trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-3 (R) -xy-oxo-octadec-4-en-1-yl] phosphate ( N-Bac-sphingosine-1-phosphate) 10a (with Boc as Pg)

Figure 00390001
Figure 00390001

  • (a) trans-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-en-1,3(R)-diol 9a (9,95 g; 25 mmol) wurde in Pyridin (60 ml) gelöst und auf 0°C gekühlt. Tetrabrommethan (12,44 g; 37,5 mmol; 1,5 eq) wurde addiert. Trimethylphosphit (5 ml, 42,5 mmol; 1,7 eq) wurde tropfenweise über eine Stunde bei einer Innentemperatur unter 10°C addiert. Dann ließ man das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und 5 weitere Stunden bei RT rühren. Methyl-tert.-butlether (200 ml) wurde zum Reaktionsgemisch addiert und es wurde mit 2M HCl Lösung (195 ml) gewaschen. Um eine Phasentrennung zu erreichen mussten weitere 50 ml Methyl-tert.-butylether addiert werden. Das Reaktionsgemisch wurde nochmals mit 2M HCl Lösung (195 ml) gewaschen. Um eine Phasentrennung zu erreichen wurden Methyl tert.-butylether (140 ml), NaCl Lösung (80 ml), 1M NaOH Lösung (100 ml) und NaHCO3 Lösung (200 ml) addiert. Die organische Phase wurde mit NaHCO3 Lösung (100 ml) gewaschen. Nach Addition von fester NaCl trennte sich das Gemisch in 3 Phasen: eine organische Phase, eine braune Zwischenschicht und eine wässrige Phase. Die organische Phase wurde mit NaCl Lösung (100 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 10a als braunes Öl (13,37 g) zu isolieren. Rohprodukt 10a wurde über Kieselgel (95 g; Eluent: erst 1:1 Essigsäureethylester:n-Hexan, dann 2:1) filtriert, um filtriertes Produkt 10a als gelbes Öl (8,18g; 64,7%) zu erhalten. 1H-NMR (DMSO-d6): ☐ 0,85 (t; J = 7 Hz; 3H); 1,2–1,3 (m; 22H); 1,36 (s; 9H); 1,9–2,1 (m; 2H); 3,4–3,6 (m; 1H); 3,65 (d; J = 11 Hz; 6H); 3,75–3,85 (m; 1H); 3,85–4,0 (m; 1H); 4,1 (ddd; J = 3–4/6/10 Hz; 1H); 5,0 (d; J = 5 Hz; 1H); 5,39 (dd(br); J = 7/15 Hz; 1H); 5,58 (dt; J = 7/15 Hz; 1H); 6,68 (d; J = 9Hz; 1H).(a) trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-ene-1,3 (R) -diol 9a (9.95g, 25mmol) was dissolved in pyridine (60ml) dissolved and cooled to 0 ° C. Tetrabromomethane (12.44 g, 37.5 mmol, 1.5 eq) was added. Trimethyl phosphite (5 mL, 42.5 mmol, 1.7 eq) was added dropwise over one hour at an internal temperature below 10 ° C. The reaction mixture was then allowed to warm to room temperature and stir at RT for 5 more hours. Methyl tert-butyl ether (200 ml) was added to the reaction mixture and washed with 2M HCl solution (195 ml). In order to achieve a phase separation, an additional 50 ml of methyl tert-butyl ether had to be added. The reaction mixture was washed again with 2M HCl solution (195 ml). To achieve phase separation, methyl tert -butyl ether (140 ml), NaCl solution (80 ml), 1M NaOH solution (100 ml) and NaHCO 3 solution (200 ml) were added. The organic phase was washed with NaHCO 3 solution (100 ml). After addition of solid NaCl, the mixture separated into 3 phases: an organic phase, a brown intermediate layer and an aqueous phase. The organic phase was washed with NaCl solution (100 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to isolate crude product 10a as a brown oil (13.37 g). Crude product 10a was filtered through silica gel (95 g, eluent: first 1: 1 ethyl acetate: n-hexane, then 2: 1) to give filtered product 10a as a yellow oil (8.18 g, 64.7%). 1 H-NMR (DMSO-d 6 ): □ 0.85 (t; J = 7 Hz, 3H); 1.2-1.3 (m; 22H); 1.36 (s; 9H); 1.9-2.1 (m, 2H); 3.4-3.6 (m; 1H); 3.65 (d; J = 11 Hz, 6H); 3.75-3.85 (m, 1H); 3.85-4.0 (m; 1H); 4.1 (ddd, J = 3-4 / 6/10 Hz, 1H); 5.0 (d, J = 5 Hz, 1H); 5.39 (dd (br); J = 7/15 Hz; 1H); 5.58 (dt; J = 7/15 Hz; 1H); 6.68 (d, J = 9Hz, 1H).
  • (b) Die Reaktion wurde im Großmaßstab, wie in Beispiel 9a durchgeführt. Aus 832 g trans-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-en 1,3(R)-diol 9a wurden 446 g (42,2%) O,O'-Dimethyl-O''-(trans-2(S)-N-(tert-butoxycarbonyl)amino-3(R)-hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphat 10a erhalten. 1H NMR (DMSO-d6) wie oben.(b) The reaction was carried out on a large scale as in Example 9a. From 832 g of trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-ene 1,3 (R) -diol 9a were added 446 g (42.2%) of O, O'-dimethyl-O '' - (trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl () amino-3 R) -hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphate obtained 10a 1 H NMR (DMSO-d 6). as above.

Beispiel 10: O-trans-2(S)-amino-3)-hydroxy-octadec-4-en-yl phosphat (Sphingosin-1 phosphat) 11a Example 10: O-trans-2 (S) -amino-3) -hydroxy-octadec-4-enyl phosphate (sphingosine-1-phosphate) 11a

Figure 00400001
Figure 00400001

  • (a) O,O'-Dimethyl-O''-[trans-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-3(R)-hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphat 10a (500 mg; 0,99 mmol) wurden in Dichlormethan (12,5 ml) gelöst und auf etwa 2°C gekühlt. Trimethylsilylboamid (0,6 ml; 4,5 mmol, 4,5 eq) wurde tropfenweise über 5 Minuten addiert. Das Reaktionsgemisch ließ man auf Raumtemperatur erwärmen und 2 Stunden bei RT rühren. Das Reaktionsgemisch wurde eingeengt und Methanol (12,5 ml) wurde zu dem Rückstand addiert. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann erneut unter Vakuum eingeengt, um einen rosa Schaum (0,5 g) zu erhalten, der aus einer 2:1 Mischung aus THF und Wasser (7 ml) kristallisiert wurde. Der Feststoff wurde mit eiskaltem n-Hexan gewaschen, sowie unter Vakuum getrocknet. Sphingosin-1-phosphat 11a wurde als weißer Feststoff isoliert (320 mg; 85,6%). 1H (DOAc, 70°C): 6,3–6,5 (m; 1H); 5,9–6,1 (m; 1H); 4,9–5,1 (m; 1H); 4,74,9 (m; 2H); 4,14,3 (m; 1H); 2,5–2,6 (m; 2H); 1,7–2,0 (m; 22H); 1,34 (t; 3H; J: 6,5 Hz).(a) O, O'-dimethyl-O "- [trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-3 (R) -hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphate 10a (500mg, 0.99mmol) were dissolved in dichloromethane (12.5ml) and cooled to about 2 ° C. Trimethylsilylboamide (0.6 mL, 4.5 mmol, 4.5 eq) was added dropwise over 5 minutes. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stir at RT for 2 hours. The reaction mixture was concentrated and methanol (12.5 ml) was added to the residue. The reaction mixture was stirred for 2 hours at room temperature and then concentrated again under vacuum to give a pink foam (0.5 g) which was crystallized from a 2: 1 mixture of THF and water (7 ml). The solid was washed with ice-cold n-hexane and dried under vacuum. Sphingosine 1-phosphate 11a was isolated as a white solid (320 mg, 85.6%). 1 H (DOAc, 70 ° C): 6.3-6.5 (m, 1H); 5.9-6.1 (m; 1H); 4.9-5.1 (m; 1H); 4.74.9 (m; 2H); 4,14,3 (m; 1H); 2.5-2.6 (m, 2H); 1.7-2.0 (m; 22H); 1.34 (t; 3H, J: 6.5 Hz).
  • (b) O,O'-Dimethyl-O''-[trans-2(5)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-3(R)-hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphat 10a (5,16 g; 10,2 mmol) wurde in Dichlormethan (125 ml) gelöst und auf etwa 2°C gekühlt. Trimethylsilylbromid (6,1 ml; 46 mmol, 4,5 eq) wurde tropfenweise über 5 Minuten addiert. Das Reaktionsgemisch ließ man auf Raumtemperatur erwärmen und 1,25 Stunden bei Raumtemperatur rühren. Das Reaktionsgemisch wurde unter Vakuum eingeengt und der Rückstand in Methanol (125 ml) aufgenommen. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann erneut unter Vakuum eingeengt, um einen rosa Schaum zu erhalten, der aus einer 2:1 Mischung aus THF und Wasser (75 ml) zur Kristallisation gebracht wurde. Der Feststoff wurde mit eiskaltem n-Hexan gewaschen, sowie unter Feinvakuum bei 30°C getrocknet. Sphingosin-1-phosphat 11a wurde als weißer Feststoff (3,0 g; 77,8%) isoliert. 1H-NMR (DOAc): wie oben.(b) O, O'-dimethyl-O "- [trans-2 (5) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-3 (R) -hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphate 10a (5.16 g, 10.2 mmol) was dissolved in dichloromethane (125 mL) and cooled to about 2 ° C. Trimethylsilylbromide (6.1 mL, 46 mmol, 4.5 eq) was added dropwise over 5 minutes. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 1.25 hours at room temperature. The reaction mixture was concentrated in vacuo and the residue was taken up in methanol (125 ml). The reaction mixture was stirred for 2 hours at room temperature and then concentrated again under vacuum to give a pink foam which was crystallized from a 2: 1 mixture of THF and water (75 ml). The solid was washed with ice-cold n-hexane and dried under mild vacuum at 30 ° C. Sphingosine 1-phosphate 11a was isolated as a white solid (3.0 g, 77.8%). 1 H-NMR (DOAc): as above.
  • (c) Die Reaktion wurde im Großmaßstab wie in Beispiel 10b durchgeführt. Aus 281 g bzw.165 g O,O'-Dimethyl-O''-[trans-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-3(R)-hydroxy-actadec-4-en-1-yl] phosphat 10a wurden 144 g (68,6%) bzw. 69 g (55,9%) Sphingosin-1-phosphat 11a erhalten. 1H-NMR (DOAc): wie oben.(c) The reaction was carried out on a large scale as in Example 10b. From 281 g or 165 g of O, O'-dimethyl-O "- [trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-3 (R) -hydroxy-actadec-4-ene-1 yl] phosphate 10a, 144 g (68.6%) and 69 g (55.9%) of sphingosine 1-phosphate 11a were obtained. 1 H-NMR (DOAc): as above.

Das Sphingosin-1-phosphat 11a, das durch die Methode der vorliegenden Erfindung erhalten wurde, wurde durch HPLC analysiert. Dabei zeigte sich, dass die Reinheit 99,2% betrug und die Enantiomerenreinheit 99,3%, wie durch chirale HPLC bestimmt wurde.The sphingosine-1-phosphate 11a obtained by the method of the present invention was analyzed by HPLC. It was found that the purity was 99.2% and the enantiomeric purity 99.3%, as determined by chiral HPLC.

Beispiel 11: cis-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-en-1,3(R)-diol 9b (mit Boc als Pg)Example 11: cis-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-ene-1,3 (R) -diol 9b (with Boc as Pg)

Figure 00410001
Figure 00410001

  • (a) 2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(R)-diol 8a (250 mg: 0,63 mmol) wurde in Diethylether (35 ml) gelöst. Chinolin (0,05 ml) und Pd auf BaSO4 (10%) (645 mg) wurden addiert, das Reaktionsgemisch wurde dreimal mit Stickstoff gespült und dann unter einer H2-Atmosphäre 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde über Celite® filtriert und im Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 9b als gelbes Öl (340 mg) zu erhalten. Das Rohprodukt 9b wurde durch Chromatographie (37g Kieselgel; Eluent erst 6:1 n-Hexan:Essigsäureethylester, dann 2:1) gereinigt, um Produkt 9b (150 mg; 59,7%) zu erhalten. 1H (DMSO-d6): ☐ 6,13 (d; J := 9 Hz; 1H); 5,2–5,5 (m; 2H); 4,69 (d; J = 5 Hz; 1H); 4,39 (t; J = 6 Hz; 1H); 4,15–4,30 (m; 1H); 3,45–3,55 (m; 2H); 3,3–3,5 (m; 1H); 2,0–2,1 (m; 2H); 1,36 (s; 9H); 1,2–1,3 (m 22H); 0,85 (t; J = 6,5 Hz; 3H)(a) 2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (R) -diol 8a (250 mg: 0.63 mmol) was dissolved in diethyl ether (35 ml). Quinoline (0.05 ml) and Pd on BaSO 4 (10%) (645 mg) were added, the reaction mixture was purged three times with nitrogen and then stirred under H 2 atmosphere for 16 hours at room temperature. The reaction mixture was filtered through Celite ® and concentrated in vacuo to give as yellow oil (340 mg) to obtain crude 9b. The crude product 9b was purified by chromatography (37 g silica gel, eluent first 6: 1 n-hexane: ethyl acetate, then 2: 1) to give product 9b (150 mg, 59.7%). 1 H (DMSO-d 6 ): □ 6.13 (d; J: = 9 Hz; 1H); 5.2-5.5 (m; 2H); 4.69 (d; J = 5 Hz, 1H); 4.39 (t, J = 6 Hz, 1H); 4.15-4.30 (m; 1H); 3.45-3.55 (m; 2H); 3.3-3.5 (m; 1H); 2.0-2.1 (m, 2H); 1.36 (s; 9H); 1.2-1.3 (m 22H); 0.85 (t, J = 6.5 Hz, 3H)
  • (b) 2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(R)-diol 8a (1,57 g; 3,95 mmol) wurde in Diethylether (220 ml) gelöst Chinolin (0,31 ml) und Pd auf BaSO4 (10%) (645 mg) wurden addiert und das Reaktionsgemisch dreimal mit Stickstoff gespült Das Reaktionsgemisch wurde unter einer Wasserstoffatmosphäre 17,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde das Reaktionsgemisch über Celite® filtriert und im Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 9b als gelbes Öl (1,97 g) zu erhalten. Rohprodukt 9b wurde durch Säulenchromatographie (40 g Kieselgel; Eluent: erst 6.1 n-Hexan:Essigsäureethylester, dann 2:1) gereinigt, um Produkt 9b als gelbes Öl (1,05 g; 66,5%) zu erhalten, das als kristalliner Feststoff anfällt. 1H (DMSO-d6): wie oben.(b) 2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (R) -diol 8a (1.57 g, 3.95 mmol) was dissolved in diethyl ether (220 ml). Quinoline (0.31 ml) and Pd on BaSO 4 (10%) (645 mg) were added and the The reaction mixture was purged with nitrogen three times. The reaction mixture was stirred under a hydrogen atmosphere for 17.5 hours at room temperature. Then, the reaction mixture was filtered through Celite ® and concentrated in vacuo to give as yellow oil (1.97 g) to obtain crude 9b. Crude product 9b was purified by column chromatography (40 g silica gel, eluent: 6.1 n-hexane: ethyl acetate only, then 2: 1) to give product 9b as a yellow oil (1.05 g, 66.5%), which was found to be crystalline Solid is obtained. 1 H (DMSO-d 6): as above.

Beispiel 12: O,O'-Dimethyl-O''-[cis-2(S)-N-(tert-butoxycarbonyl)amino-3(R)-hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphat 10b (mit Boc als Pg)Example 12: O, O-Dimethyl-O "- [cis-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-3 (R) -hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphate 10b (with Boc as Pg)

Figure 00420001
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cis-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-en-1,3(R)-diol 9b (700 mg;1,75 mmol) wurde in Pyridin (6 ml) gelöst. Tetrabrommethan (871 mg, 2,63 mmol; 1,5 eq) wurde addiert und das Reaktionsgemisch wurde auf 0°C gekühlt. Trimethylphosphit (0,35 ml; 2,98 mmol; 1,75 eq) wurde tropfenweise über 10 Minuten addiert. Dann ließ man das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte weitere 4,5 Stunden. Das Reaktionsgemisch wurde mit Diethylether (45 ml) verdünnt und mit 1M HCl-Lösung (45 ml) gewaschen. Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Diethylether (3 × 45 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit NaHCO3 Lösung (45 ml) und NaCl Lösung (45 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 10b als rotes Öl (1,1 g) zu erhalten. Rohprodukt 10b wurde durch Säulenchromatographie (100 g Kieselgel; Eluent 2:1 Essigsäureethylester/n-Hexan) gereinigt, um Produkt 10b als gelbes Öl (570 mg; 64,1%) zu erhalten.
1H (DMSO-d6): ☐ 6,68 (d; J = 9 Hz; 1H); 5,3–5,5 (m; 1H); 5,2–5,3 (m; 1H); 4,8–5,1 (s(br); 1H); 4,0–4,2 (m; 1H); 3,9–4,0 (m; 1H); 3,65 (d; J = 11 Hz; 6H); 3,5–3,6 (m; 1H); 3,3–3,4 (m; 1H); 1,95–2,10 (m; 2H); 1,35 (s; 9H); 1,2–1,3 (m; 22H); 0,85 (t; 6,5 Hz; 3H).cis-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-ene-1,3 (R) -diol 9b (700 mg, 1.75 mmol) was dissolved in pyridine (6 ml). Tetrabromomethane (871 mg, 2.63 mmol, 1.5 eq) was added and the reaction was cooled to 0 ° C. Trimethyl phosphite (0.35 ml, 2.98 mmol, 1.75 eq) was added dropwise over 10 minutes. Then the reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for an additional 4.5 hours. The reaction mixture was diluted with diethyl ether (45 ml) and washed with 1M HCl solution (45 ml). The phases of the two-phase mixture were separated. The aqueous phase was extracted with diethyl ether (3 × 45 ml). The combined organic phases were washed with NaHCO 3 solution (45 ml) and NaCl solution (45 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give crude product 10b as a red oil (1.1 g). Crude product 10b was purified by column chromatography (100 g silica gel, eluent 2: 1 ethyl acetate / n-hexane) to give product 10b as a yellow oil (570 mg, 64.1%).
1 H (DMSO-d 6 ): □ 6.68 (d; J = 9 Hz, 1H); 5.3-5.5 (m, 1H); 5.2-5.3 (m; 1H); 4.8-5.1 (s (br); 1H); 4.0-4.2 (m, 1H); 3.9-4.0 (m; 1H); 3.65 (d; J = 11 Hz, 6H); 3.5-3.6 (m; 1H); 3.3-3.4 (m, 1H); 1.95-2.10 (m; 2H); 1.35 (s; 9H); 1.2-1.3 (m; 22H); 0.85 (t, 6.5 Hz, 3H).

Beispiel 13: O-cis-2(S)-amino-3(R)-hydroxy-octadec-4-en 1-yl phosphat (cis-Sphingosin-1-phosphat)11bExample 13: O-cis-2 (S) -amino-3 (R) -hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate (cis-sphingosine-1-phosphate) 11b

Figure 00420002
Figure 00420002

O,O'-Dimethyl-O''-[cis-2(S)-N-(tert-butoxycarbonyl)amino-3(R)-hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphat 10b (0,58 g; 1,18 mmol) wurde in Dichlormethan (14,5 ml) gelöst und auf 0°C gekühlt. Trimethylsilylbromid (0,7 ml; 5,3 mmol; 4,5 eq) wurde tropfenweise über 5 Minuten addiert. Das Reaktionsgemisch ließ man auf Raumtemperatur erwärmen und rührte für weitere 2,5 Stunden. Das Reaktionsgemisch wurde unter Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde in Methanol (15 ml) aufgenommen. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und erneut unter Vakuum eingeengt, um einen braunen Schaum (0,54 g) zu erhalten, der aus einer 2:1 Mischung aus THF und Wasser kristallisiert wurde und unter Vakuum getrocknet werden konnte.O, O'-dimethyl-O "- [cis-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-3 (R) -hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphate 10b (0, 58 g, 1.18 mmol) was dissolved in dichloromethane (14.5 mL) and cooled to 0 ° C. Trimethylsilylbromide (0.7 mL, 5.3 mmol, 4.5 eq) was added dropwise over 5 minutes. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for an additional 2.5 hours. The reaction mixture was concentrated in vacuo and the residue was taken up in methanol (15 ml). The reaction mixture was stirred for 2 hours at room temperature and concentrated again under vacuum to give a brown foam (0.54 g) which was crystallized from a 2: 1 mixture of THF and water and dried under vacuum.

Cis Sphingosin-1-Phosphat 11b wurde als weißer Feststoff (0,25 g; 55,8%) erhalten.
1H-NMR (DOAc): ☐ 5,99 (dt, J = 7–8/11 Hz; 1H); 5,76 (dd; J = 9/11 Hz; 1H); 5,17 (dd; J = 5/9 Hz; 1H; 4,45–4,65 (m; 2H); 3,95 (dt; J = 4–5/5–6 Hz; 1H); 2,35–2,50 (m; 2H); 1,50–1,75 (m; 22H); 1,14 (t; J: 6–7 Hz; 3H).Cis sphingosine 1-phosphate 11b was obtained as a white solid (0.25 g, 55.8%).
1 H-NMR (DOAc): □ 5.99 (dt, J = 7-8 / 11 Hz, 1H); 5.76 (dd, J = 9/11 Hz, 1H); 5.17 (dd; J = 5/9 Hz; 1H; 4.45-4.65 (m; 2H); 3.95 (dt; J = 4-5 / 5-6 Hz; 1H); 2, 35-2.50 (m; 2H); 1.50-1.75 (m; 22H); 1.14 (t; J: 6-7 Hz; 3H).

Beispiel 14:1(S)-[N-(tert-Butoxycarbonyl)-2',2'-dimethyl-1',3'-oxazolidin-4'(S)yl]-hexadec-2-in-1-ol 7c (mit Boc als Pg und Methyl als R1 und R2) Example 14: 1 (S) - [N- (tert-butoxycarbonyl) -2 ', 2'-dimethyl-1', 3'-oxazolidine-4 '(S) yl] -hexadec-2-yn-1-ol 7c (with Boc as Pg and methyl as R 1 and R 2 )

Figure 00430001
Figure 00430001

1-Pentadecin (2,5 ml; 9,7 mmol; 2,2 eq) wurde in Diethylether (30 ml) gelöst und auf –30°C gekühlt. BuLi (3,5 ml; 8,8 mmol; 2 eq) wurden addiert, während man die Temperatur unter –15°C hielt. Dann wurde das Reaktionsgemisch eine Stunde unter -25°C gerührt. Wasserfreies ZnBr2 (2,36 g) wurde durch Aufschmelzen unter Vakuum getrocknet und dann im Diethylether (20 ml) durch Erwärmen gelöst, wobei eine trübe, gelbe Lösung gebildet wurde, die zur Reaktionsmischung addiert wurde. Dann wurde das Reaktionsgemisch eine Stunde bei 0°C gerührt. Eine weiße, viskose Lösung bildete sich, die durch Addition von Diethylether (20 ml) verdünnt und dann auf –70°C gekühlt wurde. N-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4(S)-yl methanal 6a (1 g; 4,4 mmol) wurde in Diethylether (20 ml) gelöst, auf –70°C gekühlt und tropfenweise zum Reaktionsgemisch addiert. Das Reaktionsgemisch ließ man auf Raumtemperatur erwärmen und rührte 19 Stunden weiter. Dann wurde das Reaktionsgemisch auf –20°C gekühlt und mit NH4Cl Lösung (50 ml) gequenscht. Ausgefallene Salze wurden durch Addition von Wasser (30 ml) gelöst. Die Phasen das Zweiphasengemisches wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Diethylether (2 × 50 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit NaCl-Lösung (50 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 7c (2,84 g) zu erhalten. Das Rohprodukt 7c wurde durch eine Filtration über Kieselgel (56 g; Eluent; erst n-Hexan, dann 6:1 n-Hexan:Essigsäureethylester)gereinigt, um das filtrierte Produkt 7c (1,61 g; 84,3%) zu erhalten.
1H NMR (DMSO-d6): ☐ 4,75–4,85 (m; 1H); 4,25 (s(br); 1H); 4,17 (dd; J = 2/9 Hz; 1H); 3,81 (dd; J = 6/9 Hz; 1H); 2,16 (dt; J = 2/7 Hz; 2H); 1,34 (s); 1,50–1,20 (m; beide zusammen 1,34 und 1,50–1,20 37–38 H); 0,89 (t; J: 6,5 Hz; 3H).1-Pentadecine (2.5 mL, 9.7 mmol, 2.2 eq) was dissolved in diethyl ether (30 mL) and cooled to -30 ° C. BuLi (3.5 mL, 8.8 mmol, 2 eq) was added while keeping the temperature below -15 ° C. Then, the reaction mixture was stirred at -25 ° C for one hour. Anhydrous ZnBr 2 (2.36 g) was dried by melting under vacuum and then dissolved in diethyl ether (20 ml) by heating to form a turbid yellow solution which was added to the reaction mixture. Then, the reaction mixture was stirred at 0 ° C for one hour. A white, viscous solution formed, which was diluted by addition of diethyl ether (20 mL) and then cooled to -70 ° C. N- (tert-Butoxycarbonyl) -2,2-dimethyl-1,3-oxazolidin-4 (S) -ylmethanal 6a (1g, 4.4mmol) was dissolved in diethyl ether (20ml) to -70 ° C cooled and added dropwise to the reaction mixture. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for a further 19 hours. Then, the reaction mixture was cooled to -20 ° C and quenched with NH 4 Cl solution (50 ml). Precipitated salts were dissolved by addition of water (30 ml). The phases of the two-phase mixture were separated. The aqueous phase was extracted with diethyl ether (2 x 50 ml). The combined organic phases were washed with NaCl solution (50 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give crude product 7c (2.84 g). The crude product 7c was purified by filtration through silica gel (56 g, eluent, first n-hexane, then 6: 1 n-hexane: ethyl acetate) to give the filtered product 7c (1.61 g, 84.3%) ,
1 H NMR (DMSO-d 6 ): □ 4.75-4.85 (m, 1H); 4.25 (s (br); 1H); 4.17 (dd, J = 2/9 Hz, 1H); 3.81 (dd, J = 6/9 Hz, 1H); 2.16 (dt, J = 2/7 Hz, 2H); 1.34 (s); 1.50-1.20 (m, both together 1.34 and 1.50-1.20 37-38 H); 0.89 (t, J: 6.5 Hz, 3H).

Beispiel 15: 2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(S)-diol 8c (mit Boc als Pg)Example 15: 2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (S) -diol 8c (with Boc as Pg)

Figure 00440001
Figure 00440001

1(S)-[tert-Butoxycarbony1)-2',2'-dimethu1-1',3'-oxazolidin-4'(S)-yl]-hexadec-2-in-1-ol 7c (1,55 g; 3,5 mmol) wurde in Methanol gelöst (37 ml) und Amberlyst® 15 (1,95 g) wurde addiert, Das Reaktionsgemisch wurde 93 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, tiber Celite® filtriert und unter Vakuum eingeengt, um Produkt 8c (0,97 g; 68,9%) zu isolieren.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 0,86 (t; J: 6,5 Hz; 3H); 1,2–1,6 (m; 31H); 2,15 (t(br); J = 7 Hz; 2H); 3,2–3,6 (m; 3H); 4,2–4,3 (m; 1H); 4,58 (t; J = 5 Hz; 1H); 5,17 (d; J = 6,5 Hz; 1H); 6,12 (d; J = 7,5 Hz; 1H)1 (S) - [tert -Butoxycarbony1) -2 ', 2'-dimethu1-1', 3'-oxazolidine-4 '(S) -yl] -hexadec-2-yn-1-ol 7c (1.55 g; 3.5 mmol) was dissolved in methanol (37 ml) and Amberlyst ® 15 (1.95 g) was added, The reaction mixture was stirred for 93 hours at room temperature, tiber Celite ® filtered and concentrated under vacuum to afford the product 8c ( 0.97 g, 68.9%).
1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): 0.86 (t, J: 6.5 Hz, 3H); 1.2-1.6 (m; 31H); 2.15 (t (br); J = 7 Hz; 2H); 3.2-3.6 (m; 3H); 4.2-4.3 (m; 1H); 4.58 (t, J = 5 Hz, 1H); 5.17 (d, J = 6.5 Hz, 1H); 6.12 (d; J = 7.5 Hz; 1H)

Beispiel 16: trans-2(S)-N-(tert Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-en-1,3(S)-diol 9c (mit Boc als Pg)Example 16: trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-ene-1,3 (S) -diol 9c (with Boc as Pg)

Figure 00440002
Figure 00440002

2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-octadec-4-in-1,3(S)-diol 8c (970 mg; 2,44 mmol) wurde in Diethylether gelöst (15 ml) und auf 0°C gekühlt. Red-Al. (3,7 ml; 65%; 12,2 mmol; 5 eq); wurde in Diethylether gelöst und auf 0°C gekühlt. Die Lösung von Alkin 8c wurde bei 0°C zu der Lösung von Red-Al addiert. Die Reaktionslösung ließe man auf Raumtemperatur erwärmen und rührte für weitere 43 Stunden. Dann wurde die Reaktionsmischung auf 0°C gekühlt, und durch tropfenweise Addition von Methanol gequenscht, wobei Gasentwicklung auftrat. Dieethylether (25 ml) und Kalium-Natrium Tartrat Lösung (25 ml) wurden addiert und das Reaktionsgemisch wurde 21 Stunden gerührt. Die Phasen des Zweiphasensystemes wurden getrennt. Die wässrige Phase wurde mit Diethylether (2 × 25 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit Kalium-Natrium-Tartrat Lösung (25 ml) und NaCl Lösung (25 ml) gewaschen, über Na2SO4 getrocknet und unter Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 9c (870 mg) zu isolieren. Das Rohprodukt 9c wurde durch Säulenchromatographie (73 g Kieselgel; Eluent: erst 2:1 n-Hexan:Essigssäureethylester, dann 3:2) gereinigt, um chromatographiertes Produkt 9c (480 mg; 49,2%) zu erhalten.
1H (DMSO-d6, 400 MHz): ☐☐0,86 (d; J = 6,5 Hz; 3H);1,2–1,4 (m; 31H); 1,8–2,0 (m; 2H); 3,2–3,5 (m; 5H); 4,0–4,2 (in, 1H), 5,40 (dd; J = 4,5/16 Hz; 1H); 5,57 (ddt; J = 1/6,5/16 Hz; 1H); 5,92 (d; J = 8 Hz; 1H).2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-octadec-4-yne-1,3 (S) -diol 8c (970 mg, 2.44 mmol) was dissolved in diethyl ether (15 ml) and brought to 0 ° C cooled. Red-Al. (3.7 ml, 65%, 12.2 mmol, 5 eq); was dissolved in diethyl ether and cooled to 0 ° C. The solution of alkyne 8c was added to the solution of Red-Al at 0 ° C. The reaction solution was allowed to warm to room temperature and stirred for an additional 43 hours. Then, the reaction mixture was cooled to 0 ° C, and quenched by dropwise addition of methanol, whereby Gas evolution occurred. The ethyl ether (25 ml) and potassium sodium tartrate solution (25 ml) were added and the reaction mixture was stirred for 21 hours. The phases of the two-phase system were separated. The aqueous phase was extracted with diethyl ether (2 x 25 ml). The combined organic phases were washed with potassium sodium tartrate solution (25 ml) and NaCl solution (25 ml), dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to isolate crude product 9c (870 mg). The crude product 9c was purified by column chromatography (73 g silica gel, eluent: first 2: 1 n-hexane: ethyl acetate, then 3: 2) to give chromatographed product 9c (480 mg, 49.2%).
1 H (DMSO-d 6 , 400 MHz): □ 0.86 (d, J = 6.5 Hz, 3H); 1.2-1.4 (m, 31H); 1.8-2.0 (m, 2H); 3.2-3.5 (m; 5H); 4.0-4.2 (in, 1H), 5.40 (dd, J = 4.5 / 16Hz, 1H); 5.57 (ddt; J = 1 / 6.5 / 16 Hz; 1H); 5.92 (d, J = 8 Hz, 1H).

Beispiel 17: O,O'-Dimethyl-O''[trans-2(S)-N-(tert-butoxycarbonyl)amino-3(S)-hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphat 10c (mit Boc als Pg)Example 17: O, O-Dimethyl-O "[trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-3 (S) -hydroxy-octadec-4-en-1-yl] phosphate 10c ( with Boc as Pg)

Figure 00450001
Figure 00450001

trans-2(S)-N-(tert Butoxycarbonyt)amino-octadec-4-en-1,3(S)-diol 9c (0,44 g) 1,15 mmol) wurde m Pyridin (3 ml) gelöst und auf 0°C gekühlt. Tetrabrommethan (572 mg;1,73 mmol; 1,5 eq) wurde addiert. Trimethylphosphit (0,23 ml; 1,95 mmol; 1,7 eq) wurden tropfenweise bei einer Innentemperatur unter 10°C innerhalb von 5 Minuten addiert. Dann ließ man das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte für weitere 4,5 Stunden. Essigsäureethylester (40 ml) wurde zum Reaktionsgemisch addiert und es wurde mit 1 M HCl Lösung (2 × 30 ml) gewaschen. Die Phasen des Zweiphasengemisches wurden getrennt und die wässrige Phase wurde mit Essigsäureethylester (2 × 50 ml) extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden mit NaHCO3 Lösung und mit NaCl-Lösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, sowie unter Vakuum eingeengt, um Produkt 10 c als braunoranges Öl (0,61 g) zu erhalten. Rohprodukt 10c wurde über Kieselgel filtriert (60 g; Eluent: 2:1 Essigsäureethylester:n-Hexan), um das filtrierte Produkt 10c (0,42 g; 74,5%) zu isolieren.
1H-NMR (CDCl3): ☐ 5,77 (ddt; J = 1/6–7/15 Hz; 1H); 5,46 (dd; J = 7/15 Hz; 1H); 4,29–4,37 (m; 1H); 4,09 (t; J = 7–8 Hz; 1H); 3,78 (d; J = 11 Hz; 3H); 3,77 (d; J = 11 Hz; 3H); 3,55–3,70 (m; 1H); 3,03 (s(br); 1H); 1,95–2,10 (m; 2H); 1,42 (s; 9H); 1,20–1,40 (m; 22H); 0,86 (t; J = 7 Hz; 3H)Trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyt) amino-octadec-4-ene-1,3 (S) -diol 9c (0.44 g) 1.15 mmol) was dissolved in pyridine (3 ml) and cooled to 0 ° C. Tetrabromomethane (572 mg, 1.73 mmol, 1.5 eq) was added. Trimethyl phosphite (0.23 ml, 1.95 mmol, 1.7 eq) was added dropwise at an internal temperature below 10 ° C within 5 minutes. Then the reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for an additional 4.5 hours. Ethyl acetate (40 ml) was added to the reaction mixture and washed with 1 M HCl solution (2 x 30 ml). The phases of the two-phase mixture were separated and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (2 x 50 ml). The combined organic phases were washed with NaHCO 3 solution and with NaCl solution, dried over Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo to give product 10 c as a tan orange oil (0.61 g). Crude product 10c was filtered through silica gel (60 g, eluent: 2: 1 ethyl acetate: n-hexane) to isolate the filtered product 10c (0.42 g, 74.5%).
1 H-NMR (CDCl3): ☐ 5.77 (ddt; J = 1 / 6-7 / 15 Hz; 1H); 5.46 (dd, J = 7/15 Hz, 1H); 4.29-4.37 (m; 1H); 4.09 (t; J = 7-8 Hz, 1H); 3.78 (d, J = 11 Hz, 3H); 3.77 (d, J = 11 Hz, 3H); 3.55-3.70 (m; 1H); 3.03 (s (br); 1H); 1.95-2.10 (m; 2H); 1.42 (s; 9H); 1.20-1.40 (m; 22H); 0.86 (t, J = 7 Hz, 3H)

Beispiel 18: O-trans-2(S)-amino-3(S)-hydroxy-actadec-4-en-1-yl phosphat (D-threo-Sphingosin-1-phosphat) 11cExample 18: O-trans-2 (S) -amino-3 (S) -hydroxy-actadec-4-en-1-yl phosphate (D-threo-sphingosine-1-phosphate) 11c

Figure 00450002
Figure 00450002

O,O'-Dimethyl-O''-[trans-2(S)-N-(tert-Butoxycarbonyl)amino-3(S)-hydroxy-actadec-4-en-1-yl] phosphat 10c (0,42 g, 0,85 mmol) wurde in Dichlormethan (10 ml) gelöst und auf 0°C gekühlt. Trimethylsilylbromid (0,5 ml; 3,8 mmol; 4,5 eq) wurde tropfenweise über 10 Minuten addiert. Das Reaktionsgemisch ließ man auf Raumtemperatur erwärmen und für weitere 2 Stunden rühren. Das Reaktionsgemisch wurde in unter Vakuum eingeengt und der Rückstand in Methanol (10 ml) aufgenommen. Das Reaktionsgemisch wurde 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann unter Vakuum eingeengt, um Rohprodukt 11c zu isolieren, das aus einer 2:1 Mischung aus THF und Wasser (2 ml) kristallisiert wurde, sowie unter Vakuum getrocknet und als weißer Feststoff erhalten wurde (170 mg; 52,4%).
1H-NMR (DOAc): 6,37 (dt; J = 7/15 Hz; 1H); 5,94 (dd; J = 7/15 Hz; 1H); 4,83 (t; J = 7 Hz; 1H); 4,64–4,76 (m; 1H); 4,50–4,64 (m; 1H); 3,85–4,00 (m; 1H); 2,48–2,60 (m; 2H); 1,68–1,90 (m; 22H); 1,32 (t; J = 6–7 Hz; 3H).O, O'-dimethyl-O "- [trans-2 (S) -N- (tert-butoxycarbonyl) amino-3 (S) -hydroxy-actadec-4-en-1-yl] phosphate 10c (0, 42 g, 0.85 mmol) was dissolved in dichloromethane (10 ml) and cooled to 0 ° C. Trimethylsilylbromide (0.5 mL, 3.8 mmol, 4.5 eq) was added dropwise over 10 minutes. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stir for an additional 2 hours. The reaction mixture was concentrated in vacuo and the residue was taken up in methanol (10 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature for 12 hours and then concentrated in vacuo to isolate crude product 11c, which was crystallized from a 2: 1 mixture of THF and water (2 ml), dried in vacuo and obtained as a white solid (170 52.4%).
1 H-NMR (DOAc): 6.37 (dt, J = 7/15 Hz, 1H); 5.94 (dd, J = 7/15 Hz, 1H); 4.83 (t, J = 7 Hz, 1H); 4.64-4.76 (m; 1H); 4.50-4.64 (m; 1H); 3.85-4.00 (m; 1H); 2.48-2.60 (m; 2H); 1.68-1.90 (m; 22H); 1.32 (t, J = 6-7 Hz, 3H).

Die vorliegende Erfindung ist nur durch Beispiele beschrieben worden. Die Beispiele sollen den Anwendungsbereich der Erfindung nicht begrenzen. Zahlreiche Modifikationen und Ausführungsformen sind möglich, ahne den Anwendungsbereich und den Geist der Erfindung zu verlassen, die nur durch die folgenden Patentansprüche definiert sind.The present invention has been described by way of example only. The examples are not intended to limit the scope of the invention. Numerous modifications and embodiments are possible, without departing from the scope and spirit of the invention, which are defined only by the following claims.

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Zitierte PatentliteraturCited patent literature

  • WO 95/21848 [0006, 0006] WO 95/21848 [0006, 0006]

Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature

  • F. Ruan et. Al. (Bioorg. & Med. Chem. Let., 2(9), 1992, p 973–978) [0004] F. Ruan et. Al. (Bioorg. & Med. Chem. Let., 2 (9), 1992, p 973-978) [0004]
  • B. Kratzer et. Al. (THL; 34(11), 1993, p 1761–1764) [0005] B. scratches et. Al. (THL; 34 (11), 1993, p 1761-1764) [0005]

Claims (16)

Verfahren zur Herstellung von O-2amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11R oder ein Stereoisomer davon und/oder ein Derivat davon, beinhaltend Herstellungsschritt (e) und/oder Herstellungsschritt (f): e) Oxidation von Alkohol 5 zu Aldehyd 6:
Figure 00470001
wobei Schritt (e) unter Nutzung von Oxalylchlorid, DMSO und weniger als 5,5 eq. Hünig Base und/oder bei einer Temperatur nicht unter –70°C durchgeführt wird (f) Reaktion von Aldehyd 6 mit einem 1-alkin HC≡CR3 und einer Base zu Alkin 7R:
Figure 00470002
Wobei Schritt (f) unter Nutzung von mindestens 1,5 eq. 1-Alkin und/oder wobei Alkin 7R durch abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Alkin gereinigt wird; wobei Pg eine Schutzgruppe ist; wobei R1 und R1 unabhängig voneinander Wasserstoff, eine optional substituierte C1 bis C6-Alkylkette, oder eine optional substituierte Phenylgruppe, oder die Reste R1 und R2 zusammen eine optional substituierte C4 bis C6-Cycloalkylgruppe bilden und wobei R3 ein Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Arylalkyl-, Arylalkenyl-, Arylalkinyl-, Alkylaryl-, Alkenylaryl- oder Alkinylaryl-Rest ist, von denen jeder optional substituiert sein kann und jede optional mehrere Heteroatome N, O oder S in seinem Kohlenstoffgerüst einschließen kann.A process for producing O-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11R or a stereoisomer thereof and / or a derivative thereof, including preparation step (e) and / or production step (f): e) oxidation from alcohol 5 to aldehyde 6:
Figure 00470001
wherein step (e) using oxalyl chloride, DMSO and less than 5.5 eq. Hunig base and / or at a temperature not lower than -70 ° C is carried out (f) reaction of aldehyde 6 with a 1-alkyne HC≡CR3 and a base to alkyne 7R:
Figure 00470002
Where step (f) using at least 1.5 eq. 1-alkyne and / or wherein alkyne 7R is purified by distilling off unreacted 1-alkyne; where Pg is a protecting group; wherein R 1 and R 1 independently of one another hydrogen, an optionally substituted C 1 to C 6 alkyl chain, or an optionally substituted phenyl group, or the radicals R 1 and R 2 together form an optionally substituted C 4 to C 6 cycloalkyl group and R 3 is an alkyl, Alkenyl, alkynyl, aryl, arylalkyl, arylalkenyl, arylalkynyl, alkylaryl, alkenylaryl or alkynylaryl, each of which may be optionally substituted and each optionally including a plurality of heteroatoms N, O or S in its carbon backbone can. Verfahren zur Herstellung wie in Anspruch 1 beschrieben, wobei Alkohol 5 durch einen Prozess erhalten wird, der ein Herstellungsverfahren enthält, der mehrere der Stufen von (a) bis (d) enthält: (a) Umwandlung von Serin 1 zu Ester 2 oder einem Salz davon, wobei R' ein unsubstituierter C1-6 Alkyl-, Phenyl- oder Benzylrest ist:
Figure 00480001
(b) Schutz der Aminogruppe von Ester 2 oder eines Salzes davon unter Bildung von Ester 3, wobei Pg eine Schutzgruppe ist
Figure 00480002
(c) Schutz der primären Hydroxylgruppe und der Amino Gruppe von Ester 3 unter Erhalt von Ester 4, wobei R1 und R2 unabhängig von einander Wasserstoff, optional substituierte C1-C6 Alkyl-Reste, oder optional substituierte Phenyl-Reste seien können, oder R1 und R2 zusammen einen optional substituierten C4-C7 Cycloalkyl Rest formen können.
Figure 00480003
(d) Reduktion von Ester 4 zu Alkohol 5:
Figure 00480004
wobei R' ein unsubstituierter C1-6 Alkyl-, Phenyl- oder Benzylrest sein kann.A process for the preparation as described in claim 1, wherein alcohol 5 is obtained by a process containing a production process containing several of the steps from (a) to (d): (a) conversion of serine 1 to ester 2 or a salt of which R 'is an unsubstituted C 1-6 alkyl, phenyl or benzyl radical:
Figure 00480001
(b) protecting the amino group of ester 2 or a salt thereof to form ester 3, where Pg is a protecting group
Figure 00480002
(c) protecting the primary hydroxyl group and the amino group of ester 3 to give ester 4, wherein R 1 and R 2 independently of one another may be hydrogen, optionally substituted C 1 -C 6 alkyl radicals, or optionally substituted phenyl radicals, or R1 and R2 together may form an optionally substituted C4-C7 cycloalkyl radical.
Figure 00480003
(d) Reduction of ester 4 to alcohol 5:
Figure 00480004
where R 'may be an unsubstituted C 1-6 alkyl, phenyl or benzyl radical. Ein Herstellungsverfahren, bei dem in den weiteren Ansprüchen das bevorzugte 1-Alkin HCΞCR3, 1-Pentadecin HCΞC-C13H27 ist.A production process in which, in the further claims, the preferred 1-alkyne is HCΞCR 3 , 1-pentadecine HCΞC-C 13 H 27 . Ein Herstellungsverfahren in dem in den weiteren Ansprüchen das stark entiomerenangereicherte Aldehyd 6 in die stark enantiomerenangereicherten Alkine 7a oder 7c überfuhrt werden.
Figure 00490001
A preparation process in which the strongly entiomerenangereicherte aldehyde 6 in the further claims in the strongly enantiomerically enriched alkynes 7a or 7c überfuhrt.
Figure 00490001
 Ein Herstellungsverfahren, wie in den Ansprüchen 1 bis 4 beschrieben, wobei das Alkin 7R in das O-trans-2-Amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Ri überführt wird oder in ein Streoisomer davon und/oder in ein Derivat davon unter Nutzung eines Prozesses, der einen oder mehrere Schritte (g) bis (j) beinhaltet: (g) teilweises Entschützen von Alkin 7R zu Alkin 8R:
Figure 00500001
(h) Reduktion der Dreifachbindung in Alkin 8R zu einer trans-Doppelbindung unter Bildung von Alken 9Ri:
Figure 00500002
(i) Phosphorylierung der primären Hydroxylgruppe von 9Ri zu Phosphat 10Ri:
Figure 00500003
(j) Entschützen von Phosphat 10Ri unter Bildung von O-trans-2-Amin-3-Hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Ri oder ein Stereoisomer davon:
Figure 00500004
A preparation process as described in claims 1 to 4, wherein the alkyne 7R is converted to the O-trans-2-amino-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Ri or a streight isomer thereof and / or or a derivative thereof using a process involving one or more steps (g) to (j): (g) partial deprotection of alkyne 7R to alkyne 8R:
Figure 00500001
(h) Reduction of the triple bond in alkyne 8R to a trans double bond to give alkene 9Ri:
Figure 00500002
(i) Phosphorylation of the primary hydroxyl group of 9Ri to phosphate 10Ri:
Figure 00500003
(j) deprotecting phosphate 10Ri to give O-trans-2-amine-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Ri or a stereoisomer thereof:
Figure 00500004
 Ein Herstellungsverfahren, wie in Anspruch 5 beschrieben, das bevorzugt substanziell enantiomerenreines Alkin 7a, 7c, 7e oder 7g in substanziell enantiomerenreines Sphingosin-1-phosphat 11a, 11c, 11e oder 11g überführt.
Figure 00520001
A preparation process as described in claim 5 which preferably converts substantially enantiomerically pure alkyne 7a, 7c, 7e or 7g to substantially enantiomerically pure sphingosine 1-phosphate 11a, 11c, 11e or 11g.
Figure 00520001
 Ein Herstellungsverfahren, das in einer alternativen Ausführungsart das Alkin 7R in das O-cis-2-Amin-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Rii oder ein Stereoisomer davon und/oder ein Derivat davon überführt, wobei der Prozess einen oder mehrere Schritte (g) bis (j) enthält: (g) teilweises Entschützen von Alkin 7R unter Bildung von Alkin 8R:
Figure 00520002
(h) Reduktion der Dreifachbindung von Alkin 8R zu einer cis Doppelbindung unter Bildung von Alken 9Rii:
Figure 00520003
(i) Phosphorylierung der primären Hydroxylfunktion in Alken 9Rii unter Bildung von 10Rii:
Figure 00530001
(j) Entschützen von Phosphat 10Rii unter Bildung von O-cis-2-Amin-3-Hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphat 11Rii oder ein Stereoisomer davon:
Figure 00530002
A method of preparation which, in an alternative embodiment, converts the alkyne 7R to the O-cis-2-amine-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Rii or a stereoisomer thereof and / or a derivative thereof; Process one or more steps (g) to (j) contains: (g) partial deprotection of alkyne 7R to give alkyne 8R:
Figure 00520002
(h) Reduction of the triple bond of alkyne 8R to a cis double bond to give alkene 9Rii:
Figure 00520003
(i) Phosphorylation of the primary hydroxyl function in alkene 9Rii to give 10Rii:
Figure 00530001
(j) deprotecting phosphate 10Rii to give O-cis-2-amine-3-hydroxy-octadec-4-en-1-yl phosphate 11Rii or a stereoisomer thereof:
Figure 00530002
 Ein Herstellungsverfahren, wie in Anspruch 7 beschrieben, das bevorzugt substanziell enantiomerenreines Alkin 7b, 7d, 7f oder 7h in substanziell enantiomerenreines Sphingosin 1-phosphat 11b, 11d, 11f oder 11h überführt:
Figure 00530003
A preparation process as described in claim 7 which converts preferably substantially enantiopure alkyne 7b, 7d, 7f or 7h into substantially enantiopure sphingosine 1-phosphate 11b, 11d, 11f or 11h:
Figure 00530003
 Ein Herstellungsverfahren mit der bevorzugten Ausführungsart zur Darstellung von Sphingosin-1-phosphat 11a oder einem Stereosiomer davon und/oder einem Derivat davon beinhaltet einen oder mehrere Schritte (a) bis (j): (a) Umsetzung von L-Serin 1a zu Methylester 2a oder einem Salz davon:
Figure 00530004
(b) Schutz der Aminofunktion von Methylester 2a oder einem Salz davon unter Bildung von Methylester 3a, wobei Pg eine Schutzgruppe ist:
Figure 00540001
(c) Schutz der primären Hydroxylgruppe und der Aminogruppe von Methylester 3a unter Bildung von Methylester 4a, wobei R1 und R2 unabhängig voneinander Wasserstoff, ein optional substituierter C1-C6 Alkylrest oder eine optional substituierter Phenylrest sein können oder R1 und R2 zusammen einen optional substituierten C4-C7 Cycloalkylrest formen können:
Figure 00540002
(d) Reduktion von Methylester 4a unter Bildung von Alkohol 5a:
Figure 00540003
(e) Oxidation von Alkohol 5a unter Bildung von Aldehyd 6a:
Figure 00540004
(f) Reaktion von Aldehyd 6a mit 1-Pentadekin und einer Base unter Bildung von Alkin 7a:
Figure 00550001
(g) teilweises Entschützen von Alkin 7a unter Bildung von Alkin 8a:
Figure 00550002
(h) Reduktion der Dreifachbindung von Alkin 8a zu einer trans-Doppelbindung unter Bildung von Alken 9a:
Figure 00550003
(i) Phosphorylierung der primären Hydroxyl-Gruppe von Alken 9a unter Bildung von Phosphat 10a:
Figure 00550004
(j) Entschützen von Phosphat 10a unter Bildung von Sphingosin-1-phosphat 11a:
Figure 00560001
wobei der Prozess mindestens einen der folgenden Punkte beinhaltet: – Stufe (e) wird unter Einsatz von Oxalylchlorid, DMSO und weniger als 5,5 Äquivalente Hünig-Base durchgeführt; – Stufe (e) wird bei einer Temperatur nicht unter –70°C durchgeführt; – Stufe (f) wird unter Einsatz von mindestens 1,5 Äquivalenten 1-Pentadecin durchgeführt; oder – Reinigung von Alkin 7a, das in Stufe (f) erhalten wird, durch Abdestillieren von nicht abreagiertem 1-Pentadecin.A preparation method of the preferred embodiment for preparing sphingosine 1-phosphate 11a or a stereoisomer thereof and / or a derivative thereof includes one or more steps (a) to (j): (a) Reaction of L-serine 1a to methyl ester 2a or a salt thereof:
Figure 00530004
(b) protecting the amino function of methyl ester 2a or a salt thereof to form methyl ester 3a, where Pg is a protecting group:
Figure 00540001
(c) protecting the primary hydroxyl group and the amino group of methyl ester 3a to form methyl ester 4a, wherein R 1 and R 2 can independently be hydrogen, an optionally substituted C 1 -C 6 alkyl radical or an optionally substituted phenyl radical, or R 1 and R 2 together form an optionally substituted C4-C7 cycloalkyl radical:
Figure 00540002
(d) Reduction of methyl ester 4a to give alcohol 5a:
Figure 00540003
(e) oxidation of alcohol 5a to give aldehyde 6a:
Figure 00540004
(f) Reaction of aldehyde 6a with 1-pentadekin and a base to give alkyne 7a:
Figure 00550001
(g) partial deprotection of alkyne 7a to give alkyne 8a:
Figure 00550002
(h) Reduction of the triple bond of alkyne 8a to a trans double bond to give alkene 9a:
Figure 00550003
(i) Phosphorylation of the primary hydroxyl group of alkene 9a to give phosphate 10a:
Figure 00550004
(j) Deprotecting phosphate 10a to form sphingosine 1-phosphate 11a:
Figure 00560001
the process including at least one of the following: - step (e) is carried out using oxalyl chloride, DMSO and less than 5.5 equivalents of Hünig's base; - Step (e) is carried out at a temperature not lower than -70 ° C; Step (f) is carried out using at least 1.5 equivalents of 1-pentadecine; or - purifying alkyne 7a obtained in step (f) by distilling off unreacted 1-pentadecine. Ein Herstellungsverfahren, wie in Anspruch 9 beschrieben, in dem alternativ die Reduktion in Stufe (h) unter Einsatz einer Reduktionsmittels durchgeführt werden kann, das die Dreifachbindung von Alkin 8a zu einer cis Doppelbindung unter Bildung von Alken 9b reduziert wird:
Figure 00560002
A preparation process as described in claim 9, in which, alternatively, the reduction in step (h) can be carried out using a reducing agent which reduces the triple bond of alkyne 8a to a cis double bond to form alkene 9b:
Figure 00560002
 Ein Herstellungsverfahren, in dem -Pg vorzugsweise -CO-OR oder -CO-R ist, wobei R unabhängig von einander ein, Alkenyl-, Alkinyl-, Aryl-, Arylalkyl-, Arylalkenyl-, Arylalkinyl-, Alkylaryl-, Alkenylaryl-, oder Alkinylaryl-Rest sein, jeder von diesen kann optional Substituiert sein und jeder von diesen kann optional einen oder mehrere Heteroatome, wie N, O oder S im Kohlenstoffgerüst enthalten kann. Optionale Substituenten schließen -F, -Cl, -Br, -I, -CF3, -CCl3, -CBr3, -Cl3, -OH, -SH, -NH2, -CN, -NO2, -OMe, -SMe, -NMe2, -CO2H, -CHO und -CO2Me ein.A production process in which -Pg is preferably -CO-OR or -CO-R, where R independently of one another is an alkenyl, alkynyl, aryl, arylalkyl, arylalkenyl, arylalkynyl, alkylaryl, alkenylaryl, or alkynylaryl radical, each of which may optionally be substituted, and each of which may optionally contain one or more heteroatoms such as N, O or S in the carbon skeleton. Optional substituents include -F, -Cl, -Br, -I, -CF 3 , -CCl 3 , -CBr 3 , -Cl 3 , -OH, -SH, -NH 2 , -CN, -NO 2 , -OMe , -SMe, -NMe 2 , -CO 2 H, -CHO and -CO 2 Me. Ein Herstellungsverfahren, in dem -Pg vorzugsweise-CO-OtBu (Boc), -CO-OCH2Ph (Cbz oder Z), -CO-O-CH2-C6H4-pOMe (Moz), -CO-O-CH2-C6H4-pNO2, -CO-O-CH2-C6H4-pBr, -CO-O-CH2-C6H4pCl, -CO-O-CH2-C6H3-2,4-CL2, -CO-OCH2-Cl3H9 (Fmoc), -CO-O-CHPh2, -CO-OMe, -CO-OEt, -CO-OCH2CCl3(Troc), -CO-OCH2CH2SiMe3 (Teoc), -CO-O-CH2CH2SMe oder -CO-OCH2CH2SO2Me ist.A manufacturing method in which -Pg preferably-CO-O t Bu (Boc), -CO-OCH 2 Ph (Cbz or Z), -CO-OCH 2 -C 6 H 4 -pOMe (Moz), -CO -O-CH 2 -C 6 H 4 -pNO 2 , -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 -pBr, -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 pCl, -CO-O-CH 2 -C 6 H 3 -2,4-CL 2 , -CO-OCH 2 -Cl 3 H 9 (Fmoc), -CO-O-CHPh 2 , -CO-OMe, -CO-OEt, -CO-OCH 2 CCl 3 (TROC), -CO-OCH 2 CH 2 SiMe 3 (Teoc), -CO-O-CH 2 CH 2 SMe, or -CO-OCH 2 CH 2 SO 2 Me. Ein Herstellungsverfahren, in dem -Pg bevorzugt -CO-OtBu (Boc) ist.A production process in which -Pg is preferably -CO-OtBu (Boc). Ein Herstellungsverfahren in dem das Zwischenprodukt Phosphat 10a, mit der Formel:
Figure 00570001
wobei. Pg eine Schutzgruppe ausgewählt von -CO-OCH2Ph (Cbz oder Z), -CO-O-CH2-C6H4-pOMe (Moz), -CO-O-CH2-C6H4-pNO2, -CO-O-CH2-C6H4-pBr, -CO-O-CH2-C6H4pCl, -CO-O-CH2-C6H3-2,4-CL2, -CO-OCH2-C13H9 (Fmoc), -CO-O-CHPh2, -CO-OMe, -CO-OEt, -CO-OCH2CCl3 (Troc), -CO-OCH2CH2SiMe3 (Teoc), -CO-O-CH2CH2SMe oder -CO-OCH2CH2SO2Me sein kann,A production process in which the intermediate phosphate 10a, having the formula:
Figure 00570001
in which. Pg is a protecting group selected from -CO-OCH 2 Ph (Cbz or Z), -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 -pOMe (Moz), -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 -pNO 2 , -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 -pBr, -CO-O-CH 2 -C 6 H 4 pCl, -CO-O-CH 2 -C 6 H 3 -2,4-CL 2 , -CO-OCH 2 - C 13 H 9 (Fmoc), -CO-O-CHPh 2 , -CO-OMe, -CO-OEt, -CO-OCH 2 CCl 3 (TROC), -CO-OCH 2 CH 2 SiMe 3 (Teoc), -CO-O-CH 2 CH 2 SMe or -CO-OCH 2 CH 2 SO 2 Me may be Ein Herstellungsverfahren, das zur Herstellung von Sphingosin-1-phosphat 11a besonders geeignet ist und zu einem Sphingosin-1-phosphat 11a
Figure 00570002
A preparation process which is particularly suitable for the production of sphingosine 1-phosphate 11a and to a sphingosine 1-phosphate 11a
Figure 00570002
 Eine Verbindung, wie in Anspruch 15 beschrieben, für die Verwendung in der Medizin.A compound as described in claim 15 for use in medicine.
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