DE102009003587A1 - Microorganisms for the liquefaction of biomass - Google Patents

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Abstract

Beschrieben wird ein Verfahren zur Verflüssigung von Biomasse, wobei der Biomasse zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zugesetzt wird.A process for the liquefaction of biomass is described in which at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, of the species Paenibacillus macerans and / or of the species Clostridium sporosphaeroides is added to the biomass.

Description

Technisches GebietTechnical area

Die Erfindung betrifft Verfahren zur Verflüssigung von Biomasse unter Verwendung von Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides.The The invention relates to processes for the liquefaction of biomass using microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides.

Stand der TechnikState of the art

Biokraftstoffe werden u. a. durch Vergärung von Pflanzensubstraten mit Hilfe von Hefen, Bakterien oder Pilzen gewonnen. Die produzierten flüssigen Energieträger, insbesondere Ethanol, können anschließend als Brennstoff in geeigneten Feuerungsanlagen oder als Treibstoff in Motoren zur Strom- und Wärmeerzeugung eingesetzt werden. Die Biomasse wird somit in einen flüssigen und gut transportierbaren Energieträger mit relativ hoher Energiedichte umgewandelt, der dann weitgehend universell eingesetzt werden kann.biofuels be u. a. by fermentation of plant substrates with Help of yeasts, bacteria or mushrooms won. The produced liquid energy carriers, especially ethanol, can then be used as fuel in appropriate Combustion plants or as fuel in engines for power and heat generation be used. The biomass thus becomes liquid and well transportable energy sources with relatively high Energy density converted, which then used largely universally can be.

Derzeit werden als Ausgangsmaterial bei der Verflüssigung von Biomasse insbesondere Maiskorn und Getreidekorn eingesetzt. Aufgrund der zunehmenden Rohstoffknappheit und den gestiegenen Rohstoffpreisen wird nun aber versucht, nicht nur die Körner von Mais und Getreide zu verwenden, sondern vielmehr die gesamte Pflanze der Verflüssigung zuzuführen. Dabei handelt es sich um sogenannte „second generation”-Kraftstoffe.Currently are used as starting material in the liquefaction of biomass especially corn kernel and cereal grain used. Due to the increasing scarcity of raw materials and rising commodity prices But now it is not just the grains of corn and corn To use cereals, but rather the entire plant of the To supply liquefaction. It is about around so-called "second generation" fuels.

Um eine effiziente Vergärung der Biomasse sicher zu stellen, muss das als Rohstoff eingesetzte pflanzliche Material zunächst verflüssigt werden. Aus dem flüssigen Biomasse-Substrat wird dann durch Vergärung Ethanol oder ein anderer Biokraftstoff hergestellt. Mit den vorhandenen Techniken werden aber nur unbefriedigende Ausbeuten erreicht, was insbesondere an der nicht ausreichenden Verflüssigung des Rohmaterials liegt.Around to ensure efficient fermentation of the biomass, the plant material used as raw material must first be liquefied. From the liquid biomass substrate is then fermented by ethanol or another biofuel produced. With the existing techniques but only unsatisfactory Yields achieved, which is particularly inadequate Liquefaction of the raw material is.

Es besteht daher ein Bedarf an Verfahren zur Verflüssigung von Biomasse, durch die eine möglichst geringe Viskosität der Biomasse erreicht werden kann.It There is therefore a need for methods of liquefaction of biomass, through which the lowest possible viscosity the biomass can be achieved.

Darstellung der ErfindungPresentation of the invention

Die Aufgabe der Erfindung besteht darin, ein Verfahren zur Verflüssigung von Biomasse bereitzustellen, durch das eine geringe Viskosität der Biomasse erreicht werden kann.The The object of the invention is a method for liquefaction of biomass, through which a low viscosity the biomass can be achieved.

Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch das Verfahren zur Verflüssigung von Biomasse gemäß Anspruch 1 gelöst. Weitere vorteilhafte Details, Aspekte und Ausgestaltungen der vorliegenden Erfindung ergeben sich aus den abhängigen Ansprüchen, der Beschreibung und den Beispielen.These The object is achieved by the method for the liquefaction of biomass according to claim 1 solved. Further advantageous details, aspects and embodiments The present invention will become apparent from the dependent Claims, the description and the examples.

Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zur Verflüssigung von Biomasse zur Verfügung. Der Biomasse wird erfindungsgemäß ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zugesetzt.The The present invention provides a process for liquefaction of biomass available. The biomass is inventively a Microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides added.

Wird im Rahmen der vorliegenden Beschreibung der Ausdruck „Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides” gebraucht, so ist damit für jede beliebige Ausführungsform grundsätzlich zum einen jede einzelne Art von Mikroorganismen gemeint, also Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, Mikroorganismen der Art Paenibacillus macerans und Mikroorganismen der Art Clostridium sporosphaeroides. Es ist aber auch jede beliebige Mischung von zwei oder allen drei Arten der genannten Mikroorganismen umfasst.Becomes in the context of the present description, the term "microorganism the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides "is so used so that for any embodiment in principle on the one hand meant every single kind of microorganisms, thus microorganisms of the Art Clostridium sartagoformum, microorganisms of the species Paenibacillus macerans and microorganisms of the species Clostridium sporosphaeroides. But it is also any mixture of two or all three Species of the mentioned microorganisms.

Überraschenderweise hat sich gezeigt, dass durch die Zugabe von Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zu einem Biomasse-Substrat die Viskosität des Substrats stark vermindert werden kann. Der Einsatz von Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides führt zu einer deutlich verstärkten Verflüssigung der Biomasse und in der Folge zu einer deutlichen Verbesserung von Effizienz und Wirkungsgrad von Anlagen zur Herstellung von Biokraftstoffen.Surprisingly has been shown that by the addition of microorganisms of Art Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or of the species Clostridium sporosphaeroides to a biomass substrate the viscosity of the substrate can be greatly reduced. The use of microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the Species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides leads to a significantly increased liquefaction the biomass and subsequently to a significant improvement of Efficiency and efficiency of plants for the production of biofuels.

Unter der Bezeichnung „Art von Mikroorganismen” wird im Rahmen der vorliegenden Erfindung die entsprechende grundlegende Kategorie der biologischen Taxonomie verstanden. Arten von Mikroorganismen werden anhand ihrer DNA-Sequenzen identifiziert und unterschieden. Unter eine bestimmte Art fallen dabei nicht nur Mikroorganismen mit einer ganz bestimmten DNA-Sequenz, sondern auch bis zu einem gewissen Umfang deren genetische Varianten. Dem einschlägigen Fachmann ist bekannt, welche Stämme von Mikroorganismen unter den Begriff „Art Clostridium sartagoformum”, „Art Paenibacillus macerans” und „Art Clostridium sporosphaeroides” fallen. Im Zusammenhang mit der Verflüssigung von Biomasse sind Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides bisher nicht bekannt.Under the term "type of microorganisms" in the context of the present invention, the corresponding basic Understood category of biological taxonomy. Types of microorganisms are identified and distinguished by their DNA sequences. A certain species does not just include microorganisms with a very specific DNA sequence, but also up to one certain extent of their genetic variants. The relevant It is known to those skilled in the art which strains of microorganisms under the term "Art Clostridium sartagoformum", "Art Paenibacillus macerans "and" Art Clostridium sporosphaeroides ". Related to the liquefaction of biomass Microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides previously unknown.

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einem Verfahren zur Verflüssigung von Biomasse in Form einer Kultur von Mikroorganismen zugesetzt, die überwiegend aus einem Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides besteht.According to a preferred embodiment of the present invention, a microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Pae nibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides in a process for the liquefaction of biomass added in the form of a culture of microorganisms consisting predominantly of a microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides.

In Substraten von Biogasanlagen konnten Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides beispielsweise jeweils in Spuren von weniger als 10–4% Anteil an der gesamten Anzahl von anwesenden Mikroorgansimen nachgewiesen werden. Da für die Zugabe der Mikroorganismen die Menge an aus ihrem natürlichen Vorkommen isolierten Mikroorganismen nicht ausreicht, wird üblicherweise eine Vermehrung in Form einer Kultur vorgenommen. In der Praxis zeigt sich, dass die Zugabe der Mikroorganismen zu einem Biomasse-Substrat am einfachsten direkt in Form einer Kultur von Mikroorganismen vorgenommen wird.In substrates of biogas plants, for example, microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, of the species Paenibacillus macerans and of the species Clostridium sporosphaeroides could each be detected in traces of less than 10 -4 % of the total number of microorganisms present. Since the amount of microorganisms isolated from their natural occurrence is insufficient for the addition of the microorganisms, it is usually propagated in the form of a culture. In practice it is found that the addition of the microorganisms to a biomass substrate is most easily done directly in the form of a culture of microorganisms.

Die Zugabe der Kultur von Clostridium sartagoformum, der Kultur Paenibacillus macerans und/oder der Kultur Clostridium sporosphaeroides kann in Form einer Kultursuspension, in Form trockener, gefriergetrockneter oder feuchter Zellpellets oder auch in Form von Sporensuspensionen, Sporenpräparaten oder trockener, gefriergetrockneter oder feuchter Sporenpellets vorgenommen werden.The Add culture of Clostridium sartagoformum, Paenibacillus culture macerans and / or the culture Clostridium sporosphaeroides can be found in Form of a culture suspension, in the form of dry, freeze-dried or moist cell pellets or in the form of spore suspensions, Spore preparations or dry, freeze-dried or moist Spore pellets are made.

Da die positiven Effekte auf den Vorgang der Biomasse-Verflüssigung mit Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides verbunden sind, sollte zumindest eine dieser Arten von Mikroorganismen in der zugegebenen Kultur in einer das natürliche Vorkommen übersteigenden Konzentration anwesend sein. Selbstverständlich können Mischkulturen in beliebiger Zusammensetzung für die Zugabe verwendet werden. Voraussetzung ist lediglich, dass die Art Clostridium sartagoformum, die Art Paenibacillus macerans oder die Art Clostridium sporosphaeroides bzw. eine Mischung dieser Arten in einer gegenüber dem natürlichen Vorkommen in Biomasse angereicherten Konzentration anwesend ist.There the positive effects on the process of biomass liquefaction with microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides should be associated at least one of these types of microorganisms in the added Culture in a concentration exceeding the natural abundance to be present. Of course, mixed cultures can used in any composition for the addition become. The only requirement is that the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans or the species Clostridium sporosphaeroides or a mixture of these species in a relation to the natural occurrence present in biomass enriched concentration is.

Die Bestimmung der Anteile verschiedener Arten von Mikroorganismen in Mischkulturen stellt für den Fachmann kein Problem dar. So kann beispielsweise mit Hilfe von Fluoreszenz-markierten Oligosonden spezifisch der Anteil von Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Mischung identifiziert werden. Wie bereits erwähnt, werden Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides bevorzugt in Form von Kulturen von Mikroorganismen dem Biomasse-Substrat zugesetzt, wobei die Kulturen von Mikroorganismen überwiegend aus den genannten Mikroorganismen bestehen. Wird neben der Bestimmung der Anzahl an Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides auch die Gesamtzahl an Mikroorganismen bestimmt, so kann der Anteil an Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides in der Kultur in Prozent angegeben werden. Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides sind in einer Mischkultur dann die überwiegend anwesende Art von Mikroorganismen, wenn sie den höchsten prozentualen Anteil der verschiedenen in der Mischkultur anwesenden Arten von Mikroorganismen aufweisen.The Determination of the proportions of different types of microorganisms in Mixed cultures is not a problem for the expert. For example, with the help of fluorescence-labeled oligosensors specifically the proportion of microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides be identified in a mixture. As already mentioned, are microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the Art Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides preferably in the form of cultures of microorganisms the biomass substrate added, the cultures of microorganisms predominantly consist of the said microorganisms. Is next to the provision the number of microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides also the total number of microorganisms determined, so the proportion of Microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides in culture in percent. Microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and the species Clostridium Sporosphaeroides are then predominantly in a mixed culture present type of microorganisms, if they have the highest percentage of the various present in the mixed culture Have species of microorganisms.

Gemäß bevorzugten Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung macht der Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder deren Mischung zumindest 10–4% der Gesamtzahl an in der zu dem Biomasse-Substrat zugegebenen Kultur vorhandenen Mikroorganismen aus. Besonders bevorzugt macht der Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder deren Mischung zumindest 10–2% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen aus und insbesondere bevorzugt macht der Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder deren Mischung zumindest 1% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen aus.According to preferred embodiments of the present invention, the microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans, the species Clostridium sporosphaeroides, or mixtures thereof, constitutes at least 10 -4 % of the total number of microorganisms present in the culture added to the biomass substrate. More preferably, the microorganism of the genus Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans, the genus Clostridium sporosphaeroides or mixture thereof constitutes at least 10 -2 % of the total number of microorganisms present in the culture, and particularly preferred is the microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans, the species Clostridium sporosphaeroides or mixtures thereof at least 1% of the total number of microorganisms present in the culture.

Gemäß weiteren bevorzugten Ausführungsformen macht der Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder deren Mischung zumindest 10% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen aus, besonders bevorzugt macht der Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder deren Mischung zumindest 50% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen aus und insbesondere bevorzugt macht der Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder deren Mischung zumindest 90% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen aus.According to others preferred embodiments makes the microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans, the Species Clostridium sporosphaeroides or mixture thereof at least 10% the total number of microorganisms present in the culture, The microorganism of the species Clostridium is particularly preferred sartagoformum, the species of Paenibacillus macerans, the species Clostridium sporosphaeroides or mixtures thereof at least 50% of the total of microorganisms present in the culture, and in particular the microorganism of the species Clostridium sartagoformum prefers of the species Paenibacillus macerans, the species Clostridium sporosphaeroides or blending at least 90% of the total in culture existing microorganisms.

Gemäß einer ganz besonders bevorzugten Ausführungsformen wird eine Reinkultur eines Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zugesetzt.According to a very particularly preferred embodiments, a pure culture of a microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the Art Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides added.

Unter einer „Reinkultur eines Mikroorganismus” wird im Rahmen der vorliegenden Erfindung die Nachkommenschaft einer einzelnen Zelle verstanden, die durch einen mehrschrittigen Prozess aus einem Gemisch verschiedener Mikroorganismen isoliert wird. Dieser mehrschrittige Mechanismus beginnt mit der Abtrennung einer einzelnen Zelle aus einer Zellpopulation und erfordert, dass auch die aus der Zelle durch Wachstum und Zellteilung hervorgehende Kolonie von anderen Einzelzellen oder Kolonien getrennt bleibt. Durch eine sorgfältige Abtrennung einer Kolonie, erneutes Suspendieren in Flüssigkeit und wiederholtes Ausstreichen können gezielt Reinkulturen von Mikroorganismen gewonnen werden.Under a "pure culture of a microorganism" is in the context of the present invention, the progeny of a single cell understood by a multi-step process is isolated from a mixture of different microorganisms. This multi-step mechanism begins with the separation of a single Cell from a cell population and requires that too from the Cell by growth and cell division resulting colony of others Single cells or colonies remains separate. By a careful Separation of a colony, resuspension in liquid and Repeated streaking can target pure cultures of Microorganisms are recovered.

Die Isolierung einer Reinkultur kann jedoch auch in flüssigen Nährmedien erfolgen, sofern der gewünschte Organismus im Ausgangsmaterial zahlenmäßig überwiegt. Durch serienmäßige Verdünnung der Suspension in der Nährlösung lässt es sich schließlich erreichen, dass sich in der letzten Verdünnungsstufe nur noch eine Zelle befindet. Diese Zelle stellt dann die Basis für eine Reinkultur dar. Diese Erläuterung des Begriffs „Reinkultur” und mögliche Verfahren zur Erzeugung dieser Reinkultur sind unter dem Stichwort „Reinkultur” im Werk „Allgemeine Mikrobiologie” von Hans G. Schlegel in der 7. überarbeiteten Auflage von 1992, erschienen im Georg Thieme Verlag auf der Seite 205 aufgeführt, auf das hiermit vollinhaltlich Bezug genommen wird. Die so erhaltene Reinkultur ist auch biochemisch durch spezifische Stoffwechselprozesse und -aktivitäten, sowie durch spezielle Wachstumsbedingungen gekennzeichnet.However, the isolation of a pure culture can also be carried out in liquid nutrient media, provided that the desired organism outnumbered in the starting material. By serial dilution of the suspension in the nutrient solution, it can finally be achieved that only one cell remains in the last dilution stage. This cell then forms the basis for a pure culture. This explanation of the term "pure culture" and possible processes for the generation of this pure culture are under the keyword "pure culture" in the work "General Microbiology" by Hans G. Schlegel in the 7th revised edition of 1992, published by Georg Thieme Verlag on page 205 listed, to which reference is hereby incorporated by reference. The pure culture thus obtained is also biochemically characterized by specific metabolic processes and activities, as well as by special growth conditions.

Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung handelt es sich bei den genannten Kulturen von Mikroorganismen um immobilisierte Kulturen von Mikroorganismen.According to one another preferred embodiment of the present invention If the mentioned cultures of microorganisms to immobilized cultures of microorganisms.

Als Trägermaterialien, auf denen Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides immobilisiert werden, können natürliche oder synthetische Polymere eingesetzt werden. Bevorzugt werden gelbildende Polymere verwendet. Diese haben den Vorteil, dass Bakterien innerhalb der Gelstruktur aufgenommen bzw. eingelagert werden können. Bevorzugt werden solche Materialien eingesetzt, die sich in Wasser langsam auflösen bzw. abgebaut werden, so dass die Freisetzung des Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides über einen längeren Zeitraum hinweg erfolgt.When Carrier materials on which microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides can be immobilized, natural or synthetic Polymers are used. Preference is given to gel-forming polymers used. These have the advantage of keeping bacteria within the Gel structure can be added or stored. Preferably, those materials are used which are in water slowly dissolve or degraded so that the release of the Microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides for a longer period of time.

Beispiele für geeignete Polymere sind Polvanillin, Polypyrrol, Polyvinylpyrolidon, Polystyrol, Polyvinylchlorid, Polyvinylalkohol, Polyethylen, Polypropylen, Epoxidharze, Polyethylenimine, Polysaccharide wie Agarose, Alginat oder Cellulose, Ethylcellulose, Methylcellulose, Carboxymethylethylcellulose, Celluloseacetate, Alkali-Cellulosesulfat, Copolymere aus Polystyrol und Maleinsäureanhydrid, Copolymere aus Styrol und Methylmethacrylat, Polystyrolsulfonat, Polyacrylate und Polymethacrylate, Polycarbonate, Polyester, Silikone, Cellulosephthalat, Proteine wie Gelatine, Gummi arabicum, Albumin oder Fibrinogen, Gemische aus Gelatine und Wasserglas, Gelatine und Polyphosphat, Gelatine und Copolymere aus Maleinsäureanhydrid und Methylvinylether, Celluloseacetatbutyrat, Chitosan, Polydialkyldimethylammonium-chlorid, Mischungen aus Polyacrylsäuren und Polydiallyldimethylammoniumchlorid sowie deren Gemische. Das Polymermaterial kann auch mit Hilfe üblicher Vernetzer wie Glutaraldehyd, Harnstoff/Formaldehydharzen oder Taninverbindungen vernetzt werden.Examples suitable polymers are polvanillin, polypyrrole, polyvinylpyrolidone, Polystyrene, polyvinyl chloride, polyvinyl alcohol, polyethylene, polypropylene, Epoxy resins, polyethyleneimines, polysaccharides such as agarose, alginate or cellulose, ethylcellulose, methylcellulose, carboxymethylethylcellulose, cellulose acetates, Alkali cellulose sulfate, copolymers of polystyrene and maleic anhydride, Copolymers of styrene and methyl methacrylate, polystyrenesulfonate, Polyacrylates and polymethacrylates, polycarbonates, polyesters, silicones, Cellulose phthalate, proteins such as gelatin, gum arabic, albumin or fibrinogen, mixtures of gelatin and water glass, gelatin and polyphosphate, gelatin and copolymers of maleic anhydride and methyl vinyl ether, cellulose acetate butyrate, chitosan, polydialkyldimethylammonium chloride, Mixtures of polyacrylic acids and polydiallyldimethylammonium chloride as well as their mixtures. The polymer material can also be prepared using conventional Crosslinking crosslinkers such as glutaraldehyde, urea / formaldehyde or Taninverbindungen become.

Alginate als Immobilisate erweisen sich als besonders vorteilhaft, da sie zum einen keinen negativen Einfluss auf die Aktivität von Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides nehmen und da sie zum anderen durch Mikroorganismen langsam abgebaut werden. Durch den langsamen Abbau der Alginat-Immobilisate werden nach und nach die eingeschlossenen Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides freigesetzt.alginates as Immobilisate prove to be particularly advantageous because they on the one hand no negative influence on the activity of Microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides take and as they are slowly degraded to the other by microorganisms. Due to the slow degradation of the alginate immobilizates become and after the enclosed microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides released.

Für die Immoblisation werden die Mikroorganismen mit einem Polymergel vermengt und dann in einer geeigneten Härterlösung gehärtet. Dazu werden sie zunächst mit einer Gellösung vermischt und anschließend in eine Härterlösung aus geeigneter Höhe getropft. Die genauen Vorgehensweisen zur Immobilisation sind dem Fachmann bekannt.For the immoblisation become the microorganisms with a polymer gel mixed and then in a suitable hardener solution hardened. For this they are first with a gel solution mixed and then into a hardener solution dropped from suitable height. The exact procedures for immobilization are known in the art.

Das verwendete Biomasse-Substrat kann insbesondere einen hohen Anteil an festen Bestandteilen aufweisen. Durch die Zugabe zumindest eines Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides werden diese festen Bestandteile zumindest teilweise verflüssigt. Durch die erzielte Verflüssigung des Substrats kann einem Eindicken des Substrats vorgebeugt und gezielt entgegengewirkt werden. Ein weiterer Flüssigkeitseintrag in das Biomasse-Substrat in Form von Wasser während der Verflüssigung zur Aufrechterhaltung eines stabilen Prozesses kann vermieden werden. Somit besteht ein weiterer Vorteil in der Schonung der Ressource Süßwasser. Ebenfalls von Vorteil ist der so erzielte Erhalt der Rühr- und Pumpfähigkeit des Substrats. Dadurch werden Rührwerke und Pumpen geschont und für den Rührvorgang ist deutlich weniger Energie erforderlich.The biomass substrate used may in particular have a high proportion of solid constituents. By adding at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides, these solid constituents are at least partially liquefied. By the achieved liquefaction of the substrate, thickening of the substrate can be prevented and targeted counteracted. Further liquid entry into the biomass substrate in the form of water during liquefaction to maintain a stable process can be avoided. Thus, there is another advantage in conserving the resource freshwater. Also advantageous is the thus obtained receipt of the stirring and pumpability of Substrate. As a result, agitators and pumps are spared and significantly less energy is required for the stirring process.

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Menge zu dem Biomasse-Substrat zugegeben, so dass nach Zugabe der Anteil des Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder der Mischung dieser Mikroorganismen zwischen 10–8% und 50% der Gesamtzahl an in dem Biomasse-Substrat anwesenden Mikroorganismen ausmacht. Insbesondere in Abhängigkeit von der Fermentergröße und damit in Abhängigkeit von der Menge an Biomasse-Substrat kann zur Erzielung der gewünschten Wirkung eine Zugabe von sehr stark unterschiedlichen Mengen an Mikroorganismen notwendig werden.According to a preferred embodiment of the present invention, at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added in an amount to the biomass substrate, so that after addition the proportion of the microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans, the species Clostridium sporosphaeroides or the mixture of these microorganisms between 10 -8 % and 50% of the total number of present in the biomass substrate microorganisms. In particular, depending on the size of the fermenter and thus depending on the amount of biomass substrate may be necessary to achieve the desired effect, an addition of very different amounts of microorganisms.

Sowohl die Bestimmung der Gesamtzahl von Mikroorganismen in dem Biomasse-Substrat wie auch die Bestimmung der Anteile verschiedener Arten von Mikroorganismen im Biomasse-Substrat stellt für den Fachmann kein Problem dar. So kann beispielsweise mit Hilfe von Fluoreszenz-markierten Oligosonden spezifisch der Anteil verschiedener Mikroorganismen in dem Biomasse-Substrat identifiziert werdenEither the determination of the total number of microorganisms in the biomass substrate as well as the determination of the proportions of different types of microorganisms in the biomass substrate is not a problem for the expert Thus, for example, with the aid of fluorescence-labeled oligosensors specifically, the proportion of various microorganisms in the biomass substrate be identified

Besonders bevorzugt wird zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Menge zu dem Biomasse-Substrat zugegeben, dass nach Zugabe der Anteil des Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder der Mischung dieser Mikroorganismen zwischen 10–6% und 25% der Gesamtzahl an in dem Biomasse-Substrat anwesenden Mikroorganismen ausmacht.More preferably, at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added in an amount to the biomass substrate, that after addition of the proportion of the microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans, the Species Clostridium sporosphaeroides or the mixture of these microorganisms accounts for between 10 -6 % and 25% of the total number of microorganisms present in the biomass substrate.

Insbesondere bevorzugt wird zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Menge zu dem Biomasse-Substrat zugegeben, dass nach Zugabe der Anteil des Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder der Mischung dieser Mikroorganismen zwischen 10–4% und 10% der Gesamtzahl an in dem Biomasse-Substrat anwesenden Mikroorganismen ausmacht.More preferably, at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added in an amount to the biomass substrate such that the addition of the microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans, the Species Clostridium sporosphaeroides or the mixture of these microorganisms between 10 -4 % and 10% of the total number of present in the biomass substrate microorganisms.

Ganz besonders bevorzugt wird zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Menge zu dem Biomasse-Substrat zugegeben, dass nach Zugabe der Anteil des Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans, der Art Clostridium sporosphaeroides oder der Mischung dieser Mikroorganismen zwischen 10–3% und 1% der Gesamtzahl an in dem Biomasse-Substrat anwesenden Mikroorganismen ausmacht.Most preferably, at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added in an amount to the biomass substrate such that, after addition, the proportion of the microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans, the species Clostridium sporosphaeroides or the mixture of these microorganisms accounts for between 10 -3 % and 1% of the total number of microorganisms present in the biomass substrate.

Die vorliegende Erfindung umfasst auch die Verwendung eines Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum zur Verflüssigung von Biomasse.The The present invention also encompasses the use of a microorganism of the species Clostridium sartagoformum for the liquefaction of Biomass.

Daneben umfasst die vorliegende Erfindung auch die Verwendung eines Mikroorganismus der Art Paenibacillus macerans zur Verflüssigung von Biomasse.Besides The present invention also encompasses the use of a microorganism of the species Paenibacillus macerans for the liquefaction of biomass.

Schließlich umfasst die vorliegende Erfindung auch die Verwendung eines Mikroorganismus der Art Clostridium sporosphaeroides zur Verflüssigung von Biomasse.After all For example, the present invention also encompasses the use of a microorganism of the Art Clostridium sporosphaeroides for the liquefaction of Biomass.

Bevorzugt wird eine Mischung von zwei oder drei der genannten Arten von Mikroorganismen verwendet.Prefers is a mixture of two or three of the mentioned types of microorganisms used.

Die vorliegende Erfindung umfasst auch die Verwendung der durch eines der beschriebenen Verfahren erhaltenen verflüssigten Biomasse zur Herstellung von Biokraftstoff. Bevorzugt wird die durch eines der beschriebenen Verfahren erhaltenen verflüssigten Biomasse zur Herstellung von Bio-Ethanol eingesetzt.The The present invention also includes the use of the invention the liquefied biomass obtained by the processes described for the production of biofuel. Preferably, the by a the liquefied biomass obtained by the processes described used for the production of bio-ethanol.

Bakterien der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides können mit Hilfe von dem Fachmann bekannten Methoden aus dem Substrat eines Fermenters isoliert werden. Dabei wird ein geeignetes Substrat aus einem Fermenter in ein Selektionsmedium eingebracht, über längere Zeit kultiviert und schließlich einzelne Kolonien von Mikroorganismen aus dem Selektionsmedium isoliert. Nach Vervielfältigung der daraus erhaltenen mikrobiellen DNA mittels PCR können auf der Basis der DNA Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides ausgewählt werden.bacteria of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides can help with methods known to those skilled in the art from the substrate of a fermenter be isolated. This is a suitable substrate from a fermenter introduced into a selection medium, over longer Time cultivates and finally single colonies of microorganisms isolated from the selection medium. After duplication the obtained microbial DNA by PCR based on the DNA microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the Art Paenibacillus macerans and the species Clostridium sporosphaeroides to be selected.

Wege zur Ausführung der ErfindungWays to execute the invention

Bakterien der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und der Art Clostridium sporosphaeroides wurden erfolgreich aus dem Substrat eines Fermenters isoliert. Die Isolation der Mikroorganismen erfolgte jeweils mit Hilfe eines Selektionsmediums, das Carboxymethylcellulose als einzige Kohlenstoffquelle beinhaltete. Carboxymethylcellulose besitzt sehr große Ähnlichkeit mit der in Substraten von Anlagen zur Verflüssigung von Biomasse enthaltenen Cellulose und weist zudem durch die Verknüpfung der Hydroxylgruppen mit Carboxymethylgruppen (-CH2-COOH-) eine verbesserte Löslichkeit in wässrigem Medium auf. Das zur Selektion von Clostridium sartagoformum, Paenibacillus macerans und Clostridium sporosphaeroides eingesetzte Medium wurde mit N2 und CO2 begast, damit die Selektion unter anaeroben Bedingungen erfolgen konnte. Enthaltener Restsauerstoff wurde anschließend mit Hilfe von 0,5 g/l Na2S reduziert und das Medium schließlich autoklaviert (20 Min. bei 121°C).Clostridium sartagoformum, Paenibacillus macerans and Clostridium sporosphaeroides were successfully isolated from the substrate of a fermenter. The isolation of the microorganisms was carried out in each case by means of a selection medium which contained carboxymethylcellulose as sole carbon source. Carboxymethylcellulose is very similar to the cellulose contained in substrates of plants for the liquefaction of biomass and also has by combining the hydroxyl groups with carboxymethyl groups (-CH 2 -COOH-) on an improved solubility in an aqueous medium. The medium used for the selection of Clostridium sartagoformum, Paenibacillus macerans and Clostridium sporosphaeroides was gassed with N 2 and CO 2 , so that the selection could be carried out under anaerobic conditions. Contained residual oxygen was then reduced with the aid of 0.5 g / l Na 2 S and the medium finally autoclaved (20 min. At 121 ° C).

Das Selektionsmedium wurde anschließend mit dem Überstand von Material aus einem Fermenter beimpft. Nach einer einwöchigen Kultivierung bei 40°C zeigten sich bei mikroskopischer Analyse einzelne Stäbchen. Eine weitere Selektion der Flüssigkulturen erfolgte durch den Ausstrich auf anaeroben Carboxymethylcellulose-Platten. Das Zellmaterial der gewachsenen Kolonien diente zur Vervielfältigung der mikrobiellen DNA mittels der Colony-PCR Methode nach einem Standard-Programm. Nach der Sequenzanalyse der Kolonien erbrachte der phylogenetische Vergleich der daraus generierten Sequenzdaten mittels BLAST-Programm (basic local alignment search tool) der Datenbank www.ncbi.nlm.nih.gov , dass die erhaltenen Sequenzen den Organismen Clostridium sartagoformum, Paenibacillus macerans bzw. Clostridium sporosphaeroides als nächsten Verwandten zugeordnet werden können.The selection medium was then inoculated with the supernatant of material from a fermenter. After one week of cultivation at 40 ° C, single rods were observed by microscopic analysis. Further selection of the liquid cultures was made by smearing on anaerobic carboxymethylcellulose plates. The cell material of the grown colonies was used to amplify the microbial DNA by the Colony PCR method according to a standard program. After the sequence analysis of the colonies, the phylogenetic comparison of the sequence data generated therefrom by means of BLAST program (basic local alignment search tool) Database www.ncbi.nlm.nih.gov in that the sequences obtained can be assigned to the organisms Clostridium sartagoformum, Paenibacillus macerans or Clostridium sporosphaeroides as closest relatives.

Versuche mit Reinkulturen der Mikroorganismen Clostridium sartagoformum, Paenibacillus macerans und Clostridium sporosphaeroides zeigten, dass der Zusatz zum stark zähflüssigen, viskosen Carboxymethylcellulose-haltigen Selektionsmedium zu einer sukzessiven Verflüssigung des Mediums führt.tries with pure cultures of the microorganisms Clostridium sartagoformum, Paenibacillus macerans and Clostridium sporosphaeroides showed that the addition to the highly viscous, viscous carboxymethylcellulose-containing Selection medium for a successive liquefaction of the Medium leads.

Während einer Verflüssigung von Biomasse in einem Versuchsfermenter mit einem Volumen von 150 l unter realistischen Anlagenbedingungen wurde über einen Zeitraum von mehreren Monaten der zeitliche Verlauf der Viskosität bestimmt. Die Verflüssigung der Biomasse lief unter ansonsten identischen Bedingungen einmal ohne die Zugabe von Mikroorganismen ab und jeweils unter mehrfacher Zugabe von Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans oder der Art Clostridium sporosphaeroides.While liquefaction of biomass in a trial fermenter with a volume of 150 l under realistic plant conditions was over a period of several months the temporal History of the viscosity determined. The liquefaction the biomass once ran under otherwise identical conditions without the addition of microorganisms from and under multiple Addition of microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the Art Paenibacillus macerans or the species Clostridium sporosphaeroides.

Es wurde festgestellt, dass die Zugabe von Mikroorganismen der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans oder der Art Clostridium sporosphaeroides eine Verringerung der Viskosität des Substrats auf weniger als 2/3 des ursprünglichen Wertes bewirkt.It it was found that the addition of microorganisms of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans or the Art Clostridium sporosphaeroides a reduction in viscosity of the substrate to less than 2/3 of the original value causes.

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNGQUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature

  • - „Allgemeine Mikrobiologie” von Hans G. Schlegel in der 7. überarbeiteten Auflage von 1992, erschienen im Georg Thieme Verlag auf der Seite 205 [0021] - "General Microbiology" by Hans G. Schlegel in the 7th revised edition of 1992, published by Georg Thieme Verlag on page 205 [0021]
  • - Datenbank www.ncbi.nlm.nih.gov [0040] - Database www.ncbi.nlm.nih.gov [0040]

Claims (20)

Verfahren zur Verflüssigung von Biomasse, dadurch gekennzeichnet, dass dem Biomasse-Substrat zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zugesetzt wird.Process for the liquefaction of biomass, characterized in that at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added to the biomass substrate. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in Form einer Kultur von Mikroorganismen zugesetzt wird, wobei der Mikroorganismus zumindest 10–4% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen ausmacht.A method according to claim 1, characterized in that at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added in the form of a culture of microorganisms, wherein the microorganism at least 10 -4 % of the total in Culture of existing microorganisms. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass in der Kultur von Mikroorganismen zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zumindest 10–2% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen ausmacht.A method according to claim 2, characterized in that in the culture of microorganisms at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides at least 10 -2 % of the total number of microorganisms present in the culture. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass in der Kultur von Mikroorganismen zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zumindest 1% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen ausmacht.Method according to claim 3, characterized that in the culture of microorganisms at least one microorganism the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or of the species Clostridium sporosphaeroides at least 1% of the total of microorganisms present in the culture. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass in der Kultur von Mikroorganismen zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zumindest 10% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen ausmacht.Method according to claim 4, characterized in that that in the culture of microorganisms at least one microorganism the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides at least 10% of the total of microorganisms present in the culture. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass in der Kultur von Mikroorganismen zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zumindest 50% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen ausmacht.Method according to claim 5, characterized in that that in the culture of microorganisms at least one microorganism the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or of the species Clostridium sporosphaeroides at least 50% of the total of microorganisms present in the culture. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass in der Kultur von Mikroorganismen zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zumindest 75% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen ausmacht.Method according to Claim 6, characterized that in the culture of microorganisms at least one microorganism the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or of the species Clostridium sporosphaeroides at least 75% of the total of microorganisms present in the culture. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass in der Kultur von Mikroorganismen zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zumindest 90% der Gesamtzahl an in der Kultur vorhandenen Mikroorganismen ausmacht.Method according to claim 7, characterized in that that in the culture of microorganisms at least one microorganism the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or of the species Clostridium sporosphaeroides at least 90% of the total of microorganisms present in the culture. Verfahren nach zumindest einem der Ansprüche 2 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass eine Reinkultur zumindest eines Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zugesetzt wird.Method according to at least one of the claims 2 to 8, characterized in that a pure culture at least a microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added. Verfahren nach zumindest einem der Ansprüche 2 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides dem Biomasse-Substrat als Bestandteil zumindest einer immobilisierten Kultur von Mikroorganismen zugesetzt wird.Method according to at least one of the claims 2 to 9, characterized in that at least one microorganism the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or of the species Clostridium sporosphaeroides as a component of the biomass substrate added to at least one immobilized culture of microorganisms becomes. Verfahren nach zumindest einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Menge zu dem Biomasse-Substrat zugegeben wird, dass nach Zugabe der Anteil des Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides zwischen 10–8% und 50% der Gesamtzahl an in dem Biomasse-Substrat anwesenden Mikroorganismen ausmacht.A method according to at least one of claims 1 to 10, characterized in that at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added in an amount to the biomass substrate, that after addition of the proportion of Microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides accounts for between 10 -8 % and 50% of the total number of microorganisms present in the biomass substrate. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Menge zu dem Biomasse-Substrat zugegeben wird, dass nach Zugabe der Anteil des Mikroorganismus zwischen 10–8% und 25% der Gesamtzahl an in dem Biomasse-Substrat anwesenden Mikroorganismen ausmacht.A method according to claim 11, characterized in that at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added in an amount to the biomass substrate that, after addition, the proportion of the microorganism between 10 -8 % and 25% of the total number of microorganisms present in the biomass substrate. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass zumindest ein Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Menge zu dem Biomasse-Substrat zugegeben wird, dass nach Zugabe der Anteil des Mikroorganismus zwischen 10–4% und 10% der Gesamtzahl an in dem Biomasse-Substrat anwesenden Mikroorganismen ausmacht.A method according to claim 12, characterized in that at least one microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides is added in an amount to the biomass substrate, that after addition of the proportion of the microorganism between 10 -4 % and 10% of the total number of microorganisms present in the biomass substrate. Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass der Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum, der Art Paenibacillus macerans und/oder der Art Clostridium sporosphaeroides in einer Menge zu dem Biomasse-Substrat zugegeben wird, dass nach Zugabe der Anteil des Mikroorganismus zwischen 10–3% und 1% der Gesamtzahl an in dem Biomasse-Substrat anwesenden Mikroorganismen ausmacht.A method according to claim 13, characterized in that the microorganism of the species Clostridium sartagoformum, the species Paenibacillus macerans and / or the species Clostridium sporosphaeroides in an amount to the biomass substrate to is given that after addition of the proportion of the microorganism is between 10 -3 % and 1% of the total number of microorganisms present in the biomass substrate. Verwendung eines Mikroorganismus der Art Clostridium sartagoformum zur Verflüssigung von Biomasse.Use of a microorganism of the species Clostridium sartagoformum for the liquefaction of biomass. Verwendung eines Mikroorganismus der Art Paenibacillus macerans zur Verflüssigung von Biomasse.Use of a microorganism of the species Paenibacillus macerans for the liquefaction of biomass. Verwendung eines Mikroorganismus der Art Clostridium sporosphaeroides zur Verflüssigung von Biomasse.Use of a microorganism of the species Clostridium sporosphaeroides for the liquefaction of biomass. Verwendung nach den Ansprüchen 15 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass eine Mischung von zwei oder drei Arten von Mikroorganismen verwendet wird.Use according to claims 15 to 17, characterized characterized in that a mixture of two or three types of Microorganisms is used. Verwendung der durch ein Verfahren nach zumindest einem der Ansprüche 1 bis 14 erhaltenen verflüssigten Biomasse zur Herstellung von Biokraftstoff.Use of a method according to at least one of claims 1 to 14 obtained liquefied Biomass for the production of biofuel. Verwendung nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass die verflüssigte Biomasse zur Herstellung von Bio-Ethanol verwendet wird.Use according to claim 19, characterized that the liquefied biomass for the production of bio-ethanol is used.
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