DE1017323B - Process for the production of insulin-containing preparations with a protracted effect - Google Patents

Description

Verfahren zur Herstellung von insulinhaltigen Präparaten mit protrahierter Wirkung a Verschiedene Methoden zur Herstellung insulinhaltiger Präparate mit im Verhältnis zu den reinen Insulinpräparaten protrahierter Wirkung sind bekannt. Man kennt z. B. Protamin-Insulin-Suspensionen mit oder ohne einen Gehalt von Zink sowie zinkhaltiges Insulin in Kombination mit einem alkalischen Protein bzw. Proteinspaltungsprodukten. Ferner kennt man Produkte, die aus Insulin mit mit Methyl- bzw. Äthylverbindungen veresterter Gelatine hergestellt sind. Auch ist bekannt, Insulin mit Insulinestern oder basischen Estern der Steroidreihe unter gewissen Bedingungen umzusetzen.Process for the production of insulin-containing preparations with a protracted effect a Various methods for the production of insulin-containing preparations with a protracted effect in relation to the pure insulin preparations are known. One knows z. B. protamine-insulin suspensions with or without a content of zinc and zinc-containing insulin in combination with an alkaline protein or protein cleavage products. Products are also known which are made from insulin with gelatin esterified with methyl or ethyl compounds. It is also known to convert insulin with insulin esters or basic esters of the steroid series under certain conditions.

In der deutschen Patentschrift 838893 wird die Herstellung eines Insulinmethylesters beschrieben, der eine verzögerte Insulinwirkung zeigt. In der deutschen Patentschrift 860798 wird beschrieben, daß dieser Insulinmethylester auch zur Herstellung von schwerlöslichen Verbindungen mit Insulin verwendet werden kann.The German patent 838893 describes the production of an insulin methyl ester which shows a delayed action of insulin. In the German patent 860798 it is described that this insulin methyl ester can also be used for the production of poorly soluble compounds with insulin.

Alle bekannten Insulinprodukte neigen jedoch stark zu einer Spaltung, wobei das Insulin für sich allein kristallisiert und dadurch die Präparate inhomogen und für den Gebrauch ungeeignet werden.However, all known insulin products have a strong tendency to split, whereby the insulin crystallizes on its own, making the preparations inhomogeneous and become unsuitable for use.

Es wurde nun gefunden, daß man eine besonders günstige Wirkung dadurch erreichen kann, daß man an das Insulin in wäßriger Lösung ein animalisches, verestertes Albumin bindet, in dem die Säuregruppen ganz oder teilweise durch Veresterung inaktiviert sind. Je nach Wahl des Mengenverhältnisses der einzelnen Komponenten erhält das Produkt eine bestimmte Wirkungsbreite, d. h., bei steigendem Gehalt an verestertem Albumin erreicht man eine entsprechend größere protrahierte Wirkung.It has now been found that this gives a particularly beneficial effect can achieve that an animal, esterified to the insulin in aqueous solution Albumin binds by completely or partially inactivating the acid groups through esterification are. Depending on the choice of the proportions of the individual components, the Product has a certain range of effects, i. i.e., with increasing esterified content Albumin achieves a correspondingly greater protracted effect.

Besonders vorteilhaft ist die Verwendung humaner Albumine, die beispielsweise aus Blutserum hergestellt sind, weil bei ihrer Verwendung in zuverlässiger Weise die Bildung von Antistoffen und diejenigen Übelstände, die der Verwendung nicht humaner Albumine anhaften, vermieden werden. Die hergestellten Produkte sind oft wasserunlöslich und lassen sich leicht abschleudern.The use of human albumins, for example made from blood serum because they are reliable when used the formation of anti-substances and those ills of not use adhering to human albumins should be avoided. The products manufactured are often insoluble in water and easy to spin off.

Es ist im allgemeinen vorteilhaft, die Veresterung möglichst weitgehend durchzuführen, derart, daß eine möglichst große Anzahl der Säuregruppen in den Proteinen zur Reaktion gebracht und dadurch inaktiviert wird.It is generally advantageous to carry out the esterification as much as possible carry out in such a way that the largest possible number of acid groups in the proteins is brought to reaction and thereby inactivated.

Zweckmäßigerweise gibt man während oder nach der Reaktion noch Zink in ionogener Form oder ein Phenol bzw. mehrere Phenole hinzu. Vorteilhaft lassen sich z. B. Kresole, gegebenenfalls eine Mischung von o-, m- und p-Kresolen, im folgenden Trikresol genannt, verwenden.It is advisable to add zinc during or after the reaction in ionic form or a phenol or several phenols are added. Let advantageous z. B. cresols, optionally a mixture of o-, m- and p-cresols, in the following Use called tricresol.

Man kann die Veresterung zweckmäßig in an sich bekannter Weise mit Diazoverbindungen sowohl der aliphatischen wie gegebenenfalls der aromatischen Reihe durchführen. Besonders vorteilhaft ist die Verwendung von Diazomethan. Die Veresterung kann auch mit Alkoholen in Gegenwart von Katalysatoren oder mit Methylestern starker Säuren, z. B. Methylester von Schwefelsäure und Halogenwasserstoffsäuren, durchgeführt werden.The esterification can expediently be carried out in a manner known per se Diazo compounds both of the aliphatic and optionally of the aromatic series carry out. The use of diazomethane is particularly advantageous. The esterification can also be stronger with alcohols in the presence of catalysts or with methyl esters Acids, e.g. B. methyl esters of sulfuric acid and hydrohalic acids carried out will.

Die erfindungsgemäß hergestellten Präparate sind im Gegensatz zu bekannten Produkten definierte Verbindungen, deren Zusammensetzung unverändert bleibt. Sie haben nicht den schleimigen Charakter der bekannten Insulin-Gelatine-Produkte und sind deshalb leichter in der Injektionsspritze zu handhaben. Der protrahierte Effekt der erfindungsgemäßen Insulin-Albumin-Präparate ist länger als bei Insulin-Gelatine-Präparaten. Darüber hinaus ruft das erfindungsgemäße Produkt mit Sicherheit keine allergischen Reaktionen hervor. Die Insulinwirkung hält sich über längere Zeit konstant.The preparations produced according to the invention are in contrast to known ones Products defined compounds, the composition of which remains unchanged. she do not have the slimy character of the well-known insulin gelatin products and are therefore easier to handle in the injection syringe. The protracted effect of the insulin-albumin preparations according to the invention is longer than that of insulin-gelatin preparations. In addition, the product according to the invention certainly does not cause any allergic reactions Reactions. The insulin effect remains constant over a long period of time.

Beispiel 1 43,5 mg kristallisiertes Insulin - entsprechend 23 int. Einheiten pro mg - werden in 10 ml 0,01 n-Salzsäure gelöst, der man 2 mg Zinkionen in Form von Zinkchlorid zugibt. Zu dieser Lösung setzt man 220 mg in 10 m1 0,01 n-Salzsäure gelöstes Methylalbumin. Mit Natriumhydroxyd wird die Mischung auf einen p,1-Wert von 7,2 eingestellt und bis auf 25 ml verdünnt.Example 1 43.5 mg of crystallized insulin - corresponding to 23 int. Units per mg - are dissolved in 10 ml of 0.01 N hydrochloric acid, which gives 2 mg of zinc ions adds in the form of zinc chloride. 220 mg in 10 ml of 0.01 are added to this solution Methyl albumin dissolved in n-hydrochloric acid. With sodium hydroxide the mixture adjusted to a p.1 value of 7.2 and diluted down to 25 ml.

Man erhält eine Aufschlämmung, die 40 Einheiten pro ml enthält und direkt für Injektionszwecke verwendbar ist, wenn sie, wie in den Beispielen 5 bis 7 beschrieben, sterilisiert wird.A slurry containing 40 units per ml is obtained can be used directly for injection purposes if, as in Examples 5 to 7 described, is sterilized.

Beispiel 2 Methyliertes Ochsalbumin wird in Wasser, das durch Zusatz von Säure bis auf einen pH-Wert von 4 gebracht worden ist, gelöst. Die Lösung wird durch Fitrierpapier filtriert. Die erhaltene Lösung wird getrocknet, um die lösbare Menge haltbar zu machen und um sie genau abwiegen zu können. Das so gewonnene Präparat wird in gleicher Weise, wie im Beispiel 1 angegeben, gelöst und dem Insulin in einem entsprechenden Mengenverhältnis zugesetzt.Example 2 Methylated ox albumin is dissolved in water, which is obtained by adding has been brought to a pH of 4 by acid, dissolved. The solution will be filtered through filter paper. The resulting solution is dried to make the solvable To preserve the quantity and to be able to weigh it precisely. The preparation obtained in this way is in the same way as specified in Example 1, dissolved and the insulin in one corresponding proportions added.

Beispiel 3 Zur Herstellung einer Lösung, die 20 i. E./ml Zinkinsulin enthält, werden 0,914 g kristallinisches Insulin von einer Stärke von etwa 23 i. E./mg in 35 ml 0,1 n-HCL gelöst und mit 0,914 g in 35 ml H20 gelöstem Methylalbumin gemischt. Der Mischung setzt man 16 g Glycerin, 42 mg Zn++, 1,5 g Trikresol und 0,6 g Phenol hinzu. Die Lösung wird steril filtriert. Das Filter wird hierauf mit Wasser gespült, bis als Filtrat etwa 900 ccm vorliegen. Unter sterilen Kautelen setzt man etwa 59 ml 0,1 n-NaOH hinzu. Der pH-Wert der Mischung wird kontrolliert und auf etwa 7,1 eingestellt und die Mischung auf 1000 ml aufgefüllt.Example 3 To prepare a solution containing 20 i. E./ml zinc insulin contains 0.914 g of crystalline insulin of a strength of about 23 i. E./mg dissolved in 35 ml of 0.1 N HCL and 0.914 g of methyl albumin dissolved in 35 ml of H20 mixed. 16 g of glycerol, 42 mg of Zn ++, 1.5 g of tricresol and Add 0.6 g of phenol. The solution is filtered sterile. The filter is then with Rinsed with water until the filtrate is about 900 ccm. Under sterile conditions about 59 ml of 0.1 N NaOH are added. The pH of the mixture is checked and adjusted to about 7.1 and the mixture made up to 1000 ml.

Beispiel 4 Zur Herstellung einer Lösung, die 40 i. E./mg Zinkinsulin enthält, werden 1,828 g kristallinisches Insulin von einer Stärke von etwa 23. i. E./mg in 40 ml 0,1 n-H Cl gelöst und mit 1,828 g in 40 ml Wasser gelöstem Methylalbumin gemischt. Der Mischung setzt man 16 g Glycerin, 84 mg Zn++, 1,5 g Trikresol und 0,6 g Phenol hinzu. Die Lösung wird steril filtriert und das Filter unter sterilen Bedingungen mit destilliertem Wasser gespült, bis etwa 900 ml Filtrat vorliegen. Unter sterilen Bedingungen werden 74 ml 0,1 n-Natriumhydroxyd zugesetzt. Der pxWert der Mischung wird kontrolliert und auf einen pH-Wert von etwa 7,1 eingestellt und die Mischung auf 1000 ml aufgefüllt.Example 4 To prepare a solution containing 40 i. E./mg zinc insulin contains 1.828 g of crystalline insulin of a strength of about 23 i. E./mg dissolved in 40 ml of 0.1 n-H Cl and with 1.828 g of methyl albumin dissolved in 40 ml of water mixed. 16 g of glycerol, 84 mg of Zn ++, 1.5 g of tricresol and Add 0.6 g of phenol. The solution is filtered sterile and the filter under sterile Conditions flushed with distilled water until there is approximately 900 ml of filtrate. 74 ml of 0.1 N sodium hydroxide are added under sterile conditions. The px value the mixture is controlled and adjusted to a pH of about 7.1 and the mixture made up to 1000 ml.

Beispiel 5 Zur Herstellung einer Lösung, die 80 i. E./ml Zinkinsulin enthält, werden 3,656 g kristallinisches Insulin von einer Stärke von etwa 23 i. E./mg in 50 ml 0,1 n-HCl gelöst und mit 3,656 g Methylalbumin, in 50 ml H20 gelöst, gemischt. Der Mischung setzt man 16 g Glycerin, 160 mg Zn++ in Form von Zn C12, 1,5 g Trikresol und 0,6 g Phenol hinzu. Die Lösung wird steril filtriert und das Filter mit Wasser gespült, bis etwa 850 ml Filtrat vorliegen. Unter sterilen Bedingungen setzt man etwa 104 ml 0,1 n-Natriumhydroxy d hinzu. Der pH-Wert der Mischung wird kontrolliert und auf einen PH-Wert von etwa 7,1 eingestellt und die Mischung auf 1000 ml aufgefüllt.Example 5 To prepare a solution containing 80 i. E./ml zinc insulin contains 3.656 g of crystalline insulin of a strength of about 23 i. E./mg dissolved in 50 ml 0.1 n-HCl and mixed with 3.656 g methyl albumin, dissolved in 50 ml H20, mixed. The mixture is added 16 g of glycerine, 160 mg of Zn ++ in the form of Zn C12, Add 1.5 g tricresol and 0.6 g phenol. The solution is sterile filtered and the The filter is rinsed with water until there is about 850 ml of filtrate. Under sterile conditions about 104 ml of 0.1 n sodium hydroxide are added. The pH of the mixture will be controlled and adjusted to a pH of about 7.1 and the mixture on 1000 ml filled up.

Beispiel 6 Zur Herstellung einer Lösung, die 40 i. E./ml Zinkinsulin enthält, werden 1,828 g kristallinisches Insulin von einer Stärke von etwa 23 i. E./mg in 40 ml 0,1 n-H Cl gelöst und mit 0,366 g Äthylalbumin, in 40 ml Wasser gelöst, gemischt. Der Mischung setzt man. 16 g Glycerin, 84 mg Zn-+, 1,5 g Kresol und 0,6 g Phenol hinzu. Die Lösung wird steril filtriert und das Filter mit destilliertem Wasser gespült, bis etwa 900 ml Filtrat vorliegen. Unter sterilen Bedingungen setzt man etwa 61 tnl 0,1 n-NaOH hinzu, bis zu einem PH-Wert von 7,1. Der Inhalt wird auf 1000 ml aufgefüllt.Example 6 To prepare a solution containing 40 i. E./ml zinc insulin contains 1.828 g of crystalline insulin of a strength of about 23 i. E./mg dissolved in 40 ml 0.1 n-H Cl and with 0.366 g ethyl albumin, dissolved in 40 ml water, mixed. The mixture is set. 16 g glycerine, 84 mg Zn- +, 1.5 g cresol and 0.6 g phenol added. The solution is filtered sterile and the filter with distilled Rinsed with water until there is about 900 ml of filtrate. Sets under sterile conditions about 61 tnl 0.1 N NaOH are added up to a pH of 7.1. The content will made up to 1000 ml.

Claims (5)

PATENTANSPRÜCHE: 1. Verfahren zur Herstellung von insulinhaltigen Präparaten mit protrahierter Wirkung, dadurch gekennzeichnet, daß man an Insulin in wäßriger Lösung ein animalisches, verestertes Albumin bindet. PATENT CLAIMS: 1. Process for the production of insulin-containing Preparations with a protracted effect, characterized in that one insulin an animal, esterified albumin binds in aqueous solution. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Veresterung in an sich bekannter Weise mit Diazoverbindungen, mit Alkoholen in Gegenwart von Katalysatoren oder mit Methylestern starker Säuren durchführt. 2. Procedure according to Claim 1, characterized in that the esterification is known per se Way with diazo compounds, with alcohols in the presence of catalysts or with Performs methyl esters of strong acids. 3. Verfahren nach Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man ein humanes Albumin verwendet. 3. The method according to claims 1 and 2, characterized characterized in that a human albumin is used. 4. Verfahren nach Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß während oder nach der Reaktion Zinkionen zugesetzt werden. 4. The method according to claims 1 and 2, characterized in that zinc ions are added during or after the reaction will. 5. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß während oder nach der Reaktion Phenole zugesetzt werden. In Betracht gezogene Druckschriften: Deutsche Patentschriften Nr. 860 798, 838 893; USA.-Patentschrift Nr. 2 574 889.5. Process according to Claims 1 to 3, characterized in that during or phenols are added after the reaction. Considered publications: German Patent Nos. 860 798, 838 893; U.S. Patent No. 2,574,889.