DE10061200A1 - Verfahren und Kit zur Diagnose spongiformer Encephalopathien - Google Patents
Verfahren und Kit zur Diagnose spongiformer EncephalopathienInfo
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Abstract
Ein Verfahren zum Nachweis spongiformer Encephalopathien sowie ein Diagnosekit mit Mikropartikeln, die einen gegen einen Erreger der Encephalopathien gerichteten Antikörper tragen.
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren und ein Kit zum Nachweis übertragbarer
spongiformer Encephalopathien.
Alls Übertragbare spongiforme Encephalopathien (transmissible spongiforme
encephalopathy (TSE)) oder auch Prionen-Erkrankungen wird eine Gruppe
neurodegenerativer Erkrankungen bezeichnet, die im Gegensatz zu gene
tisch bedingten ähnlichen Erkrankungen durch die Infektion mit pathogenen
Proteinen (Prionen oder Prionproteinen) ausgelöst werden (Prusiner, 1982).
Dazu gehören die Creutzfeld-Jakob Erkrankung beim Menschen (CJD),
Kuru, Scrapie beim Schaf und die Bovine Spongiforme Encephalopathie
(BSE) beim Rind.
Prionen (nachfolgend auch Prionproteine) sind infektiöse Isoformen nativer
ubiquitär vorkommender Proteine (PrP), deren physiologische Bedeutung
noch unbekannt ist. Von dem nativen Protein unterscheidet sie sich durch
eine Abweichung in der Aminosäuresequenz, die sie unlöslich, hitzeresistent
und zudem unzugänglich für einen vollständigen proteolytischen Abbau
macht (Forloni et al., 1993).
Pathogene Prionproteine besitzen einen kleinen N-terminalen Abschnitt
(PrP106-126), der - im Gegensatz zu dem nativen Protein mit einer α-Helix-
Struktur - eine stabile β-Faltblattstruktur aufweist. Sie neigen zur Aggregation
mit weiteren gleichartigen Peptiden zu so genannten Fibrillen (Tagliavini et
al., 1991). Diese Fibrillen sind nach Infektion einer Zelle in der Lage, native
Proteine in ihrer Struktur zu konvertieren, die damit ihrerseits ebenfalls
pathogen werden (Horwich und Weissman, 1997). Es kommt auf diese
Weise zur Verklumpungen einer Vielzahl pathogener Proteine. Diese Ver
klumpungen sind auch als amyloide Plaques im Hirn erkrankter Individuen
bekannt und stellen - ähnlich wie bei vergleichbaren neurodegenerativen
Erkrankungen wie z. B. Altzheimer oder Veitstanz (Chorea Huntington) - die
primäre Ursache für das Absterben essentieller Hirnregionen dar (Tagliavini
et al., 1991).
Bei allen Säugern verläuft die Pathologie der Prionen-Erkrankungen ver
gleichbar. Aufgrund der hochkonservierten Struktur der Prionen können
Prione aus Plaques erkrankter Individuen nicht nur Individuen der eigenen,
sondern auch einer fremden Spezies infizieren. Dies wurde durch Versuche
mit Rindern und Primaten (Makake) gezeigt (Collinge et al., 1996). Die
Übertragung der Prionen-Erkrankung (Scrapie) vom Schaf auf das Rind
sowie von Rind (BSE) auf den Menschen gilt daher als sehr wahrscheinlich.
Beim Menschen wird dieser Übertragungsweg mit der neuen Variante der
Creutzfeld-Jacob-Erkrankung in Verbindung gebracht, die im Gegensatz zur
klassischen Erkrankung bereits bei jungen Erwachsenen auftritt. Dabei sind
vor allem Personen anfällig, dessen PrP-Protein an der Position 129 ein
Methionin aufweist. Diese Gruppe stellt einen Anteil von ca. 11% der
Gesamtbevölkerung dar.
Nach dem vermehrten Auftreten von BSE-Fällen in Großbritannien Mitte der
80er Jahre existieren strenge Kontrollen über Herkunft und Verwendung von
Schlachtvieh in Europa. Eine vollständige epidemiologische Kontrolle spon
giformer Encephalopathien ist jedoch nur durch die lückenlose Untersuchung
kompletter Tierbestände und des gesamten Schlachtviehs möglich. Daher
wird ein Schnelltest gefordert, mit dem routinemäßig alle Schlachttiere auf
spongiforme Encephalopathien untersucht werden, bevor das Fleisch in den
Handel gelangt.
Zum Nachweis spongiformer Encephalopathien sind post mortem-Verfahren
bekannt, während zuverlässige in vivo-Tests noch nicht zur Verfügung ste
hen. Die post mortem-Verfahren basieren im wesentlichen auf einem immu
nologischen Nachweis der Prionproteine, der mittels prionprotein-spezifi
scher monoklonaler Antikörper erbracht wird. Als Referenz dazu dienen
mikroskopische Untersuchung von Hirnschnitten, wobei insbesondere die
Elektronenmikroskopie (Scott et al., 1992; Stack et al., 1991) und die
Immunohistochemie an formalinfixierten Proben (Schulz-Schaeffer et al.,
2000; Van Eversbroeck et al., 1999) erfolgreich eingesetzt werden. Die bei
den letztgenannten Methoden bringen hoch präzise und zuverlässige Ergeb
nisse. Aufgrund der erforderlichen Arbeitsintensität und der notwendigen
Qualifikation des Personals sind sie als Standardmethode im Rahmen einer
routinemäßigen Massenabfertigung jedoch ungeeignet.
Daneben gibt es Bestrebungen, BSE-Detektionssysteme auf der Basis fluo
reszenzspektroskopischer Methoden zu etablieren. Dazu wird beispielsweise
die als fluorescence correlation spectroscopy (FCS) bekannte Methode her
angezogen, die üblicherweise der Untersuchung dynamischer Prozesse
monomerer Proteine dient (Bieschke et al., 2000). Erste Ergebnisse deuten
auf eine hohe Sensitivität dieses Verfahren auch bei der Diagnose von Prio
nen-Erkrankungen hin. Auch dieses Verfahren bedarf jedoch eines geschul
ten Personals und steht derzeit für den routinemäßigen Einsatz in der Praxis
nicht zur Verfügung stehen.
Alternativ werden auch ELISA-Verfahren zur Diagnose von Prionen-
Erkrankungen, insbesondere BSE eingesetzt (Grathwohl et al., 1997; Meyer
et al., 1999). Dazu werden die Antigene, also Prionproteine, Fibrillen oder
Abschnitte davon aus der aufbereiteten Gehirn- oder Spinalflüssigkeitsprobe
der Rinder zunächst auf Oberflächen z. B. von Mikrotiterplatten immobilisiert
werden. Anschließend erfolgt der immunologische Nachweis über einen
ersten spezifischen und einen zweiten Enzym-gekoppelten Antikörper, oder
andere Farbreaktionen. Hierbei handelt es sich um einen indirekten Test, da
die Prionenproteine selbst nicht detektiert werden.
Derzeit wird der Nachweis von BSE bei Rindern zu Zwecken der veterinär
medizinischen Kontrolle zumeist über Western Blot-Verfahren geführt
(Rubenstein et al., 1987; Doi et al., 1988; Lee et al., 2000). Das Nachweisprinzip
macht sich dabei die Tatsache zunutze, daß das native Prion
protein PrPc durch Proteasen abbaubar ist, während nach einer Protease-
Behandlung das pathogene Prionprotein PrPsc als verdauungsresistentes
Fragment übrigbleibt. Anschließend wird das Fragment über einen Immuno
blot detektiert, d. h. nach einer elektrophoretischen Auftrennung der Probe in
einem Polyacrylamidgel wird das verbliebene PrPsc-Fragment auf eine
Membran übertragen und mit einem Prionprotein-spezifischen Antikörpers
gebunden. Der endgültige Nachweis des zweiten Antikörpers ist
üblicherweise mit einem Enzym gekoppelt, das eine Farbreaktion vermittelt
oder ist radioaktiv markiert.
Das bekannte Immunoblot-Verfahren setzt eine ausreichend hohe Konzen
tration pathogener Prionproteine in der Untersuchungsprobe voraus, die -
nach derzeitigen Erkenntnissen - etwa 6 Monate vor dem Auftreten erster
klinischer Symptome, frühestens aber 30 Monate nach der Infektion des Tie
res in Gehirnproben oder in der Spinalflüssigkeit erreicht ist. Aufgrund der für
den Immunoblot erforderlichen nachweisbaren Anreicherung kann demnach
BSE erst zu einem Zeitpunkt sicher nachgewiesen werden, wenn das
erkrankte Tier bereits schon lange infektiös ist und daher eine Gefahr für den
Konsumenten darstellt. Für die betroffenen Verbraucher und vor allem für die
Landwirte ist dies ein erheblicher Nachteil.
Darüber hinaus beträgt die Bearbeitungszeit für einen dieser - derzeit als
Schnelltest bekannten - Immunoblots etwa 6 bis 7 Stunden und setzt zudem
geschultes Personal voraus. Dieser zeitliche Faktor stellt vor allem aufgrund
der neuen gesetzlichen Verpflichtung zur Überprüfung tatsächlich jeden
Schlachttieres ein erhebliches Hindernis für eine schnelle, zuverlässige und
vollständige veterinärmedizinische Routinekontrolle dar. Darüber hinaus ist
dieses Verfahren nicht für parallele Untersuchungen einer Vielzahl von Pro
ben und für die Automatisierung geeignet. Letztes ist besonders bei hoch
infektiösem Material aus Gründen der Arbeitssicherheit wünschenswert.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, die bekannten immunologi
schen Nachweisverfahren von Prionen-Erkrankungen, insbesondere von
BSE, zu verbessern und damit ein Verfahren und ein Untersuchungspaket
(nachfolgend auch Kit) bereitzustellen, das möglichst sensitiv, einfach zu
handhaben und schnell durchzuführen ist. Das Verfahren sollte dabei mög
lichst auch ohne langwierige Schulung des Personals durchführbar und
daher einer Automatisierung weitgehend zugänglich sein.
Die Aufgabe wird gelöst mit einem Verfahren gemäß dem Hauptanspruch.
Vorteilhafte Weiterentwicklungen sind Gegenstand der Unteransprüche.
Der Erfindung liegt dabei der Gedanke zugrunde, die prionprotein-spezifi
schen Antikörper an Mikropartikel zu binden und eine Antikör
per/Prionprotein-Bindung mit einem zweiten prionprotein-spezifischen Anti
körper nachzuweisen.
Der besondere Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens liegt dabei darin,
die Prionproteine auf der Oberfläche der Mikropartikel anreichern zu können.
Mit dieser Anreicherung wird die Nachweisgrenze der pathogenen Prionpro
teine in den Untersuchungsproben erniedrigt und somit die Sensitivität des
Test deutlich erhöht. Durch die Verwendung von Mikropartikeln können
zudem auch kleinste Probenvolumina analysiert werden, was wiederum der
Arbeitssicherheit dient.
Bei Mikropartikeln (auch microbeads oder microspheres) handelt es sich um
bereits seit fast zwei Jahrzehnten bekannte Instrumente der Biochemie, die
erfolgreich zum Nachweis extrazellulärer Proteine eingesetzt werden (Lisi et
al., 1982; Kempfer et al., 1999; lannelli et al., 1997). Sie stellen feste oder
halbfeste Partikel mit einem Durchmesser von bis maximal 100 µm, vor
zugsweise bis zu 10 µm dar. Besonders geeignet sind Mikropartikel eine
Größe bis zu 8 µm. Sie bestehen üblicherweise aus Polystyrol oder Latex;
auch Mikropartikel auf der Basis von Silikaten sind möglich. An ihren Oberflächen
können Proteine - so auch Antikörper - beispielsweise über Car
boxylgruppen kovalent gebunden sein. Zur Bindung spezifischer Antikörper
an Mikropartikel steht die bekannte sog. Carbodiimid-Methode zur Verfügung
(Molday et al., 1975). Daneben ist erfindungsgemäß jedoch auch der Einsatz
von unmodifizierten Mikropartikeln oder von Mikropartikeln mit spezifischen
Liganden möglich.
In einer besonders vorteilhaften Ausführungsform werden erfindungsgemäß
paramagnetische Mikropartikel eingesetzt, die beispielsweise Eisenionen in
Form von Fe2O3 oder Fe3O4 enthalten. Sie ermöglichen eine einfache und
leichte Handhabung, die mit Hilfe entsprechender Magneten automatisiert
werden kann. Die Automatisierung von Arbeitsschritten ist insbesondere bei
hochinfektiösem Material bedeutsam. So wird durch das erfindungsgemäße
Verfahren der Einsatz eines Robotors möglich, mit dem zum Beispiel über
elektromagnetische Stifte, die in Probelösungen eintauchen, die
paramagnetischen Mikropartikel in eine jeweils nächste Probenlösung
transferiert werden können. Mit fortschreitender Automatisierung sinkt dabei
der Bedarf an qualifiziertem Personal.
In dem erfindungsgemäßen Verfahren können sowohl monoklonale als auch
polyklonale Antikörper mit einer Spezifität gegen Epitope der nativen oder
pathogenen Prionproteine oder der Fibrillen eingesetzt werden. Sofern ein
zweiter Antikörper zum Nachweis des ersten Antikörpers oder der Bindung
des Prionproteins an den ersten Antikörper erforderlich ist, kann dieser ent
weder mit einem durch eine Enzymreaktion detektierbaren Chromogen, oder
einer direkt detektierbaren Chromophore oder fluoreszente Proteine, wie
Phycoerythrin oder Allophycocyanin gekoppelt sein. Auch eine radioaktive
Markierung oder andere Markierungen sind möglich.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann auch in Anlehnung an das bekannte
ELISA-Verfahren durchgeführt werden. Dabei ist allerdings eine Immobilisie
rung der Antigene auf einer Membran oder Oberfläche der Reaktionsgefäße
(üblicherweise also der Mikrotiterplatten) nicht mehr erforderlich. Vielmehr
können die mit Antikörpern gekoppelten Mikropartikel in die wells der Mikro
titerplatten aufgenommen und dort mit dem aufbereiteten Probenmaterial
inkubiert werden. Nach ggf. der Behandlung mit einem zweiten Antikörper
und der anschließenden Farbreaktion kann die Detektion mit Hilfe eines übli
chen Auswertegeräts erfolgen.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform sind prionprotein-spezifi
sche Antikörper an paramagnetische Mikropartikel gebunden (Fig. 1) Die
Antikörper sind dabei vorzugsweise gegen die fibrillären Prionproteine
gerichtet. Mit einem zweiten Fluoreszenz-markierten Antikörper, der gegen
ein anderes Epitop der Fibrillen gerichtet ist, erfolgt der qualitative Nachweis
der Prionproteine. Hiermit ist gewährleistet, daß unspezifisch an den Mikro
partikeln gebundene Proteine nicht erfaßt werden. Die quantitative Erfas
sung der gebundenen Prionen erfolgt durch die Auswertung der Fluo
reszenzsignale in einem Fluoreszenzdetektionsgerät, z. B. einem Durchfluß
zytometer.
Die Verwendung eines Durchflußzytometers stellt eine besonders bevor
zugte Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens dar. Die Vorteile
der Durchflußzytometrie liegen insbesondere darin, daß schon mit einfachen
Geräten 100 Fluoreszenzmoleküle pro Partikel erfaßt werden, was etwa der
hohen Empfindlichkeit eines radioaktiven Assays entspricht. Zum anderen
können bis zu 1000 Partikel pro Sekunde gemessen werden. So kann die
Messung einer hohen Anzahl von Proben innerhalb kürzester Zeit gewährlei
stet werden.
In einer weiteren vorteilhaften Ausführungsform kann eine interne Kontrolle
mitgeführt werden. Diese kann darin bestehen, daß zusätzlich zu den Mikro
partikeln zum Nachweis der pathogenen Prionproteine Mikropartikel mit Anti
körpern gegen das native Prionprotein verwendet werden. Diese dienen der
Kontrolle einer vollständigen Proteolyse des nativen Prionproteins. Sofern
nämlich nach einer Inkubation mit einem zweiten, ebenfalls gegen das native
Protein gerichteten, fluoreszenz-markierten Antikörpers im eine Fluoreszenz
zu detektieren ist, ist der Nachweis einer unvollständigen Proteolyse
erbracht. Dies ist bedeutsam für die Beurteilung möglicher falsch positiver
Ergebnisse, die auf eine unvollständige Verdauung zurückgehen. Die
Zuverlässigkeit des Tests kann durch diese internen Kontrollen somit deut
lich erhöht werden.
Zum Zwecke der internen Kontrolle können für die Auswertung in der Durch
flußzytometrie auch verschiedene Mikropartikel verwendet werden, die sich
ggf. in ihrer Größe oder Färbung unterscheiden. Der Vorteil der Durchfluß
zytometrie liegt dabei darin, daß diese Mikropartikel in einem Verfahren
gleichzeitig aber getrennt voneinander analysiert werden können.
Das erfindungsgemäße Verfahren in der Ausführungsform mit paramagneti
schen Mikropartikel und der Durchflußzytometrie als Detektionsverfahren
fluoreszenz-markierter prionprotein-spezifischer Antikörper bietet zudem den
Vorteil der einfachen und leichten vollständigen Automatisierung.
Nachfolgend wird die Erfindung anhand eines in den Zeichnungen darge
stellten Ausführungsbeispieles des nähren erläutert. Darin zeigen:
Fig. 1 schematische Darstellung des Nachweises von Prionproteinen mit
Hilfe des erfindungsgemäßen Verfahrens und
Fig. 2 Histogramm einer Fluoreszenzdetektion nach der erfindungsge
mäßen Verfahrens mittels einer Durchflußzytometrie
Fig. 1. zeigt ein Schema eines bevorzugten Ausführungsbeispiels des erfin
dungsgemäßen Verfahrens. Danach werden prionprotein-spezifische Anti
körper an einen paramagnetischen Mikropartikel gebunden, die ihrerseits an
das Prionprotein binden. Mittels eines zweiten fluoreszenz-markierten spezifischen
Antikörpers erfolgt der Nachweis der Bindung des Prionproteins an
den ersten Antikörper. Anschließend erfolgt die quantitative Auswertung in
einem Durchflußzytometer.
Fig. 2. zeigt das Beispiel einer durchflußzytometrischen Auswertung. Dazu
wurden paramagnetische Mikropartikel mit gekoppelten Anti-Prion-Antikörper
nach der Zugabe von BSA (A) und nach der Zugabe von prionischen Fibril
len (B) im Durchflußzytometer gemessen. Die Fluoreszenzfärbung erfolgte
durch die Zugabe eines weiteren Anti-Prion-Antikörpers, der mit Phy
coerythrin gekoppelt war.
Die pro Mikropartikel gemessene Orange-Fluoreszenz ist als Histogramm
dargestellt. Ist sie gering, so erscheint ein Histogramm am linken Rand. Ist
sie hingegen hoch, wandert sie nach rechts.
100 mg einer Hirnprobe eines geschlachteten Rindes werden in 900 µl
Lysispuffer (100 mM NaCl, 10 mM EDTA, 0.5% NP-40, 0.5% Natrium
desoxycholat, 10 mM Tris pH 7.4) und 100 µl Proteinase K (1 mg/ml)
übertragen. Die Probe wird anschließend 5 sec. im Ultrathorax (Sigma,
St. Louis, IL, USA) homogenisiert. Der proteolytische Verdau erfolgt bei
37°C für 30 min. Zum Stoppen der enzymatischen Reaktion wird 10 µl
0.5 M PMSF (pH 6.8) hinzugegeben und der Probenansatz für 10 min
gekocht.
Magnetische Mikropartikel. Monoklonale Antikörper 3F4 (M 7216, Dako,
Hamburg) werden mit Hilfe eines Kopplungs-Kits (Cat. No. 19539) der
Firma Polysciences (Warringden, PA, USA) in einem Verhältnis 2 : 1
kovalent an die magnetischen Mikropartikel (CM-30-10) der Fa.
Spherotech Inc. Libertyvill, IL, USA gebunden. Die Mikropartikel weisen
einen Durchmesser von 3,5 µm auf.
Für einen qualitativen Nachweis der Fibrillen wird ein polyklonaler
(Kaninchen-)Antikörper (PA 1-750, Dianova, Hamburg) verwendet.
Dazu werden die Mikropartikel (siehe Ziffer 2.1.) mit 10 µl 1 : 50
verdünntem Antikörper versetzt und 30 min bei 4°C inkubiert
100 µl des Probenansatzes werden mit 10 µl der nach Ziffer 2.1. oder
nach Ziffer 2.1. behandelten Mikropartikel inkubiert. Die Inkubationszeit
beträgt 1 h bei 4°C. Anschließend werden die Mikropartikel zweimal
mit 1 ml PBS plus 0.1% BSA zur Sättigung der freien Bindungsstellen
gewaschen. Der Austausch der Inkubationslösungen erfolgt jeweils
durch Verwendung eines Magnetständers (Fa. Promega).
Die Fluoreszenzmarkierung erfolgt nach wiederholtem Waschen mit
PBS/BSA durch Zugabe von 5 µl Phycoerythrin-(PE)-konjugiertem Anti-
Rabbit-Antikörper (RD I-711116152; Research Diagnostics, Flandern,
NL) und einer 30 minütigen Inkubation bei 4°C. Nach einmaligem
Waschen mit 1 ml PBS und Aufnahme in 1.5 ml PBS können die
Proben im Durchflußzytometer gemessen werden.
Hierzu wird ein PAS III Durchflußzytometer der Firma Partec (Münster)
mit FlowMax-Software verwendet. Das Gerät enthält einen 25 mW-
Argon-Laser, der eine Wellenlänge von 488 nm erzeugt. Die Orange-
Emission wird mit einem 575-605 nm Bandpass-Filter gemessen. Die
Daten werden als Fluoreszenzhistogramm dargestellt, wobei die durch
schnittliche Fluoreszenzintensität gegen die Anzahl der Partikel aufge
tragen ist. Die durchschnittliche Fluoreszenzintensität ist dabei propor
tional zur gebundenen Prionenmenge (Abb. 2).
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Schema des Verfahrens zum Nachweis von Prionen mit Hilfe von Mikroparti
keln.
Durchflußzytometrischer Nachweis von Prionen. Paramagnetische Mikropar
tikel mit gekoppelten Anti-Prion-Antikörper wurden nach Zugabe von BSA (A)
und nach Zugabe prionischer Fibrillen (B) im Durchflußzytometer gemessen.
Die Fluoreszenzfärbung erfolgte durch die Zugabe eine weiteren Anti-Prion-
Antikörpers, der mit Phycoerythrin konjungiert war.
Claims (20)
1. Immunologisches Verfahren zur Bindung von Prionproteinen oder
Abschnitten davon beinhalten die Kopplung eines ersten prionprotein
spezifischen Antikörpers an einen Mikropartikel.
2. Verfahren nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch die Inkubation des
Mikropartikels mit einer Prionproteine bzw. Prionproteinabschnitte ent
haltenden Probe zur Ausbildung eines Antikörper/Prionprotein-Komple
xes.
3. Verfahren nach Anspruch 2, gekennzeichnet durch einen Nachweis
des Antikörper/Prionprotein-Komplexes durch einen zweiten nachweis
baren prionprotein-spezifischen Antikörper.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß der zweite
Antikörper einen Fluoreszenzmarker aufweist.
5. Verfahren nach Anspruch 4, gekennzeichnet durch eine Quantifizie
rung des Fluoreszenzmarkers durch ein Fluoreszenzlesegerät.
6. Verfahren nach Anspruch 5, gekennzeichnet durch eine Durchfluß
zytometrie.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, gekennzeichnet durch
paramagnetische Mikropartikel.
8. Verfahren nach Anspruch 7, gekennzeichnet durch Mikropartikel mit
einem Durchmesser von 0,1 bis 8 µm.
9. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche, gekennzeichnet
durch eine interne Kontrolle.
10. Verfahren nach Anspruch 9, gekennzeichnet durch einen weiteren
Antikörper gegen ein natives Prionprotein.
11. Verfahren nach einem der vorherigen Ansprüche, gekennzeichnet
durch mindestens zwei Arten in Größe oder Farbe verschiedener Mikro
partikel.
12. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 11, gekennzeichnet durch
polyklonale prionprotein-spezifische Antikörper.
13. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 11, gekennzeichnet durch
monoklonale prionprotein-spezifische Antikörper.
14. Mikropartikel mit einem prionprotein-spezifischen Antikörper.
15. Mikropartikel nach Anspruch 14, gekennzeichnet durch einen PrPsc-spezifischen Antikörper.
16. Verwendung eines Mikropartikels nach Anspruch 14 oder 15 zum Nach
weis von Prionen.
17. Verwendung eines Mikropartikels nach Anspruch 14 oder 15 zum Nach
weis spongiformer Encephalopathien.
18. Verfahren zum Nachweis von Prionproteinen nach einem der
vorhergehenden Ansprüche, gekennzeichnet durch die Verwendung
von Blut, Muskel, Spinalflüssigkeit, Urin oder Hirnproben.
19. Diagnosekit nach Anspruch 17, gekennzeichnet durch einen zweiten
prionproteinspezifischen Antikörper.
20. Diagnosekit nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß der
zweite Antikörper einen Fluoreszenzmarker aufweist.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2000161200 DE10061200A1 (de) | 2000-12-08 | 2000-12-08 | Verfahren und Kit zur Diagnose spongiformer Encephalopathien |
DE20022224U DE20022224U1 (de) | 2000-12-08 | 2000-12-08 | System und Kit zur Diagnose spongiformer Encephalopathien |
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DE2000161200 DE10061200A1 (de) | 2000-12-08 | 2000-12-08 | Verfahren und Kit zur Diagnose spongiformer Encephalopathien |
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DE2000161200 Withdrawn DE10061200A1 (de) | 2000-12-08 | 2000-12-08 | Verfahren und Kit zur Diagnose spongiformer Encephalopathien |
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---|---|
DE (1) | DE10061200A1 (de) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2004010122A1 (es) * | 2002-07-19 | 2004-01-29 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | PROCEDIMIENTO DE DETECCIÓN DE PROTEÍNAS PRIÓNICAS INFECTIVAS (PrPSc) POR ESPECTROSCOPIA RAMAN-LASER |
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