DE10031122A1 - Mittel zur Diagnose und Therapie maligner Erkrankungen - Google Patents
Mittel zur Diagnose und Therapie maligner ErkrankungenInfo
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Abstract
Die Erfindung betrifft Mittel zur Diagnose, Prognose und Therapie maligner Erkrankungen. Mit Hilfe der erfinderischen Lösung werden verschiedene Funktionen des für die Tumorprogression wichtige Proteins YB-1 gehemmt. Die Tumorzellen werden dadurch in ihrer Proliferation gestört, werden sensitiv für die Behandlung mit den bekannten Chemotherapeutika und können durch das Immunsystemn als entartet erkannt werden. Die Erfindung beinhaltet des weiteren die Verwendung des Nachweises von YB-1 für die Diagnose und Prognose maligner Erkrankungen. Die Erfindung betrifft weiterhin Peptide von YB-1, insbesondere das N-terminale Peptid, sowie Mutanten und Varianten des Peptids und andere von YB-1 abgeleitete Peptide, die die gleichen Eigenschaften aufweisen, und selektiv Tumorzellen hemmen sowie Mittel zur Diagnose und Therapie maligner Erkrankungen, die vorzugsweise diese Peptide, ggf. in Kombination untereinander und/oder mit weiteren Tumorhemmern, enthalten. Darüber hinaus betrifft die Erfindung Substanzen, die die Peptide erkennen und YB-1 beeinflussen. Anwendungsgebiete sind die Medizin und die pharmazeutische Industrie.
Description
Die Erfindung betrifft Mittel zur Diagnose, Prognose und Therapie
maligner Erkrankungen.
Mit Hilfe der erfinderischen Lösung werden verschiedene Funktionen des
für die Tumorprogression wichtigen Proteins YB-1 gehemmt. Die
Tumorzellen werden dadurch in ihrer Proliferation gestört, werden sensitiv
für die Behandlung mit den bekannten Chemotherapeutika und können
durch das Immunsystem als entartet erkannt werden. Die Erfindung
beinhaltet des weiteren die Verwendung des Nachweises von YB-1 für die
Diagnose und Prognose maligner Erkrankungen. Die Erfindung betrifft
weiterhin Peptide von YB-1, insbesondere das N-terminale Peptid, sowie
Mutanten und Varianten des Peptids und andere von YB-1 abgeleitete
Peptide, die die gleichen Eigenschaften aufweisen, und selektiv
Tumorzellen hemmen sowie Mittel zur Diagnose und Therapie maligner
Erkrankungen, die vorzugsweise diese Peptide, ggf. in Kombination
untereinander und/oder mit weiteren Tumorhemmern enthalten. Darüber
hinaus betrifft die Erfindung Substanzen, die die Peptide erkennen und
YB-1 beeinflussen.
Anwendungsgebiete sind die Medizin und die pharmazeutische Industrie.
YB-1 ist ein Vertreter der Y-Box-Proteinfamilie in humanen Zellen. Y-Box-
Proteine sind in der Lage, an ein bestimmtes DNA-Sequenzmotiv, die
sogenannte Y-Box, zu binden. Das Y-Box-Motiv ist ein transkriptionell
regulatorisches Element, das eine reverse CAAT-Box (ATTG) enthält und
sich in den Promoter- oder Enhancerbereichen verschiedener Gene
befindet.
Ein Teil der Proteine, die von diesen Genen kodiert werden, erfüllt wichtige
Funktionen in der Regulation der Zellproliferation. Dazu zählen zum
Beispiel der EGF-Rezeptor, die Thymidinkinase, PCNA sowie die DNA-
Polymerase I (Ladomery, M. et al., 1995, Bioessays 17: 9-11).
Eine zweite Gruppe von Genen, an deren Regulation YB-1 beteiligt ist,
beinhaltet verschiedene Resistenzgene. Gut untersucht ist die Bedeutung
von YB-1 bei der Regulation von mdr1 in Mammakarzinomen. Das
Produkt dieses Gens, das P-Glykoprotein, ist ein ABC-Transporter, der
verschiedene Zytostatika wieder aus den Tumorzellen entfernt. Dadurch
kommt es zur Entstehung der Multidrug-resistenz von Tumoren. Es
konnte von H.-D. Royer et al. gezeigt werden, daß YB-1 die Transkription
von mdr1 stimuliert. Bei allen untersuchten Mammakarzinomen, die eine
nukleäre Lokalisation von YB-1 aufwiesen, konnte die Expression von P-
Glykoprotein beobachtet werden (Bargou, R. C. et al. 1997, Nature
Medicine 4: 447-450).
Weitere Untersuchungen zeigten, daß YB-1 die Expression von Genen der
MHC-Klasse II repremieren kann (Didier et al., 1988, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 85: 7322-7326). Diese Klasse von Genen erfüllt wichtige
Aufgaben bei der Präsentation von Peptiden auf der Oberfläche von Zellen.
Die Repremierung dieser Gene kann dazu führen, daß diese Tumorzellen
nicht mehr vom Immunsystem als entartet erkannt und neutralisiert
werden.
Das Ziel dieser Erfindung ist die Verwendung des Proteins YB-1 für die
Diagnose, Prognose sowie die Therapie maligner Erkrankungen. Ihr liegt
die Aufgabe zu Grunde, entsprechende Mittel zur Verfügung zu stellen.
Gemäß der Erfindung wird das Protein mit dem Namen DBPB ("DNA
binding protein B"), welches fast identisch mit YB-1 ist, mit
eingeschlossen. Die Unterschiede zwischen YB-1 und DBPB bestehen in
einem Basenaustausch im Bereich der CSD ("cold shock domain") sowie in
einer Verschiebung des Leserahmens ("frameshift") kurz vor dem C-
Terminus. In der wissenschaftlichen Literatur hat sich die Bezeichnung
YB-1 durchgesetzt. Die beiden Proteine gehören zur Familie der Y-Box-
Proteine. Neben spezifischen Regionen besitzen Vertreter dieser
Proteinfamilie auch identische Bereiche, welche somit auch zum
Grundgedanken dieser Erfindung gehören.
Ausgangspunkt der Erfindung ist der überraschende Befund, daß die
Reduktion der YB-1-Expression zur erhöhten Zytostatikasensivität der
behandelten Tumorzellen führt. Darauf aufbauend enthalten die
erfindungsgemäßen Mittel zur Therapie Substanzen, die die Funktionen
von YB-1 in den Tumorzellen beeinflussen können. Dazu zählen
Substanzen, die die intrazelluläre YB-1-Konzentration in Tumorzellen
absenken. Desweiteren gehören dazu Substanzen, die an YB-1 binden
und dadurch dessen Funktionen hemmen, sowie Substanzen, die die
zelluläre Regulation von YB-1 beeinflussen.
Die Absenkung der YB-1-Konzentration in Tumorzellen kann durch ein
Mittel erfolgen, das entweder ein Antisense-Oligonukleotid oder ein
Ribozym gegen die YB-1 mRNA enthält. Die Verwendung der Antisense-
Oligonukleotide bzw. der Ribozyme können entweder direkt oder über
einen gentherapeutischen Vektor (Adenoviren etc.) erfolgen. Als weiteres
therapeutisches Mittel kommen Adenoviren mit konstitutiver YB-1-
Antisense mRNA zur Anwendung. Dafür wird der Vektor pHVad2c/YB-1
as (Abbildung A) zur Verfügung gestellt. Mit beiden Mitteln wird das generelle
Tumorwachstum gehemmt. Desweiteren können für die Absenkung der
YB-1-Konzentration Mittel verwendet werden, die zu einem verstärkten
Abbau von YB-1 führen, sowie Mittel, die die Biosynthese von YB-1
hemmen.
Mit gleicher Zielstellung ist auch der Einsatz von YB-1-Antikörpern zum
Absenken der YB-1-Konzentration bzw. zur Hemmung von Funktionen
von YB-1 durchführbar. Dabei wird mit Hilfe eines Gentransfers die
Expression von intrazellulären Single chain Antikörpern realisiert.
Die Erfindung basiert weiterhin auf der Erkenntnis, daß YB-1 einen Teil
der dargestellten Funktionen nur im Zellkern erfüllen kann. Wird die
Translokation von YB-1 in den Zellkern der Tumorzellen verhindert,
kommt es zu einer Hemmung der Proliferation dieser Zellen sowie zu einer
teilweisen oder vollständigen Hemmung der Expression der Resistenzgene.
Dadurch werden die Tumorzellen zum einen in ihrem Wachstum
gehemmt, zum anderen auch wieder sensitiv für die Behandlung mit
bekannten Zytostatika. Eine weitere Folge ist die verstärkte Expression
der Gene der MHC-Klasse II, wodurch das Immunsystem diese Zellen
wieder als entartet erkennen und eliminieren kann. Nichtmalignes Gewebe
wird auf Grund der Abwesenheit von YB-1 im Zellkern von dieser
Behandlung nicht beeinflußt.
Bis jetzt sind die genauen Mechanismen, die zur Translokation von YB-1
in den Zellkern führen, noch unbekannt, es wurde jedoch eine
zellzyklusabhängige Translokation von YB-1 beobachtet. Dabei konnte
festgestellt werden, daß YB-1 beim Übergang der Zellen von der G1- in die
S-Phase des Zellzyklus aus dem Zytoplasma in den Zellkern transportiert
wird. Im Verlauf der S-Phase ist dann ein Rücktransport von YB-1 in das
Zytoplasma zu beobachten. Desweiteren wurde eine stressinduzierte
Translokation von YB-1 in den Zellkern der untersuchten Zellen
festgestellt. Daraus folgt, daß die Translokation von YB-1 in den Zellkern
durch spezifische Signale induzierbar ist.
Die Erfindung beinhaltet in ihrem Wesen somit auch Mittel, enthaltend
Substanzen, die diese Signalwege in Bezug auf YB-1 spezifisch inhibieren
können.
Die Untersuchung von multidrug-resistenten MCF7-Zellen führte
desweiteren zu der Identifizierung eines Proteins, das mit YB-1 spezifisch
interagiert. Bei diesem Protein handelt es sich um P32/SF2 (auch bekannt
unter dem Namen: P32/TAP, Hyaluronectin, gC1qR). Es konnte
beobachtet werden, daß YB-1 und P32 nur in den resistenten MCF7-
Zellen, die durch eine starke nukleäre Lokalisation von YB-1
gekennzeichnet sind, nicht jedoch in den sensitiven MCF-Zellen mit
einander interagieren. Desweiteren konnte festgestellt werden, daß die
Interaktion von YB-1 und P32 beim Übergang von HeLa-Zellen von der
G1- in die S-Phase am stärksten ist. P32 ist offensichtlich an der
Translokation von YB-1 in den Zellkern beteiligt.
Die Erfindung beinhaltet daher auch Substanzen, die die Interaktion von
YB-1 und P32 teilweise oder vollständig hemmen. Zu diesen Substanzen
gehören unter anderem Antisense-Oligonukleotide oder Ribozyme, die
gegen die mRNA von P32 gerichtet sind, mit dem Ziel die zelluläre
Konzentration von P32 zu senken. Ebenfalls zählen dazu Substanzen, die
zu einem verstärkten Abbau von P32 führen. Desweiteren beinhaltet diese
Erfindung auch Mittel, enthaltend Substanzen, die die jeweiligen
Bindungsstellen von P32 und YB-1 blockieren können, sowie auch
Substanzen, die für die Aktivierung notwendigen Modifikationen von P32
bzw. YB-1 durch Enzyme (Kinasen, Phosphatasen, Methylasen usw.)
verhindern können.
Ein weiterer Bestandteil der Erfindung ist ein Verfahren zur Diagnose
sowie Prognose maligner Erkrankungen, beruhend auf dem Nachweis der
Expression sowie ggf. der intrazellulären Lokalisation von YB-1 und ggf.
von P32.
Insbesondere bei Mammakarzinomen gilt bisher der Nachweis von
Metastasen in den benachbarten Lymphknoten als Marker für die weitere
Behandlung. Bei Patientinnen, deren dem Tumor benachbarte
Lymphknoten keine Metastasen aufweisen (sog. nodalnegativ) wird in der
Regel auf eine weitere Therapie verzichtet, während bei Patientinnen mit
Metastasen in den benachbarten Lymphknoten (sog. nodalpositiv) eine
zusätzliche Behandlung durch eine Chemo- oder Strahlentherapie erfolgt.
Die Erfahrung zeigt jedoch, das dieser Marker unzureichend für eine
genaue Beurteilung der weiteren Behandlung ist. So kommt es bei einem
hohen Prozentsatz der nodalnegativen Patientinnen zur Bildung von
Metastasen bzw. Rezidiven, woran diese Patientinnen häufig versterben.
Die Expression von YB-1 wurde immunhistochemisch bei einer hohen
Anzahl von Mamma- und Ovarialkarzinomen analysiert. Dabei wurde
gemäß der Erfindung festgestellt, daß die Expression von YB-1 mit der
rezidivfreien Überlebenszeit der nodalnegativen Karzinompatientinnen
signifikant korreliert. Alle Patientinnen, deren Tumorproben eine niedrige
YB-1 Expression aufwiesen, hatten in dem Beobachtungszeitraum von
über fünf Jahren keine Rezidive bzw. Metastasen. Im Gegensatz dazu
traten bei allen Patientinnen mit einer hohen YB-1 Expression innerhalb
dieses Zeitraumes (häufig schon im ersten Jahr nach der Behandlung)
Rezidive bzw. Metastasen auf, woran ein großer Teil dieser Patientinnen
auch verstarb. Desweiteren konnte auch bei den nodalpositiven
Mammakarzinompatientinnen eine direkte Korrelation der YB-1-
Expression mit dem Behandlungserfolg nachgewiesen werden. Auch hier
konnten Patientinnen mit einer niedrigen YB-1 Expression erfolgreich
therapiert werden, während Patientinnen mit einer hohen YB-1
Expression innerhalb kurzer Zeit Metastasen bzw. Rezidive bildeten.
Erfindungsgemäß wird der Nachweis von YB-1 in Tumoren, insbesondere
bei Karzinomen (Mamma-, Ovarial-, Prostatakarzinome etc.), Sarkomen
(Osteosarkomen), malignen Melanomen, sowie Hirntumoren
(Glioblastomen, etc.) als prognostischer Marker verwendet, um dadurch
eine gezielte zusätzliche Behandlung und Nachsorge für die Patienten zu
ermöglichen. Die erfindungsgemäßen Mittel können erfolgreich eingesetzt
werden.
Die Beteiligung von YB-1 an der Regulation der im Stand der Technik
dargestellten Gene sowie die weiteren erfindungswesentlichen
Erkenntnisse belegen, daß YB-1 bei den meisten Tumorerkrankungen eine
wichtige Rolle im Zusammenhang mit der Tumorentstehung,
Tumorprogression, Aggressivität, Metastasierung sowie Multidrug-
Resistenz spielt. Daher können die erfindungsgemäßen Mittel bei den
meisten Tumorerkrankungen, insbesondere bei Karzinomen (Mamma-,
Ovarial-, Prostatakarzinome etc.), Sarkomen (Osteosarkomen), malignen
Melanomen, sowie Hirntumoren (Glioblastomen, etc.) angewendet werden.
Eine besondere Bedeutung besitzen die erfindungsgemäßen Mittel für die
Diagnose, Prognose sowie die Therapie von resistenten Tumoren (Multi
drug-Resistenz, Resistenz gegen Strahlung etc.).
Eine direkte Beteiligung von YB-1 an der Regulation von Cyklin A konnte
nachgewiesen werden.
Der Nachweis von YB-1 für die Diagnose und Prognose maligner
Erkrankungen ist mit allen an sich gängigen Techniken realisierbar:
- - Immunhistochemie/Immunfluorescence mit Antikörpern (sowohl polyklonale als auch monoklonale) gegen YB-1 bzw. P32
- - In-Situ-Hybridisierungen zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Tumorschnitten
- - ELISA, RIA u. ä. zum quantitativen Nachweis von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten
- - Westernblots für den Nachweis von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten
- - RT-PCR (semiquantitative, Light-Cycler etc.) zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten
- - Northern-Blot, Dot-Blots, Micro-Arrays oder ähnliche Hybridisierungstechniken zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten.
Erfindungsgemäße Antikörper gegen YB-1 und P32 sind dadurch
gekenzeichnet, daß sie ein oder mehrere der Peptide von YB-1 bzw. P32
erkennen können, insbesondere die folgenden:
für YB-1 - Acetylierung-MSSEAETQQPPA-cys
für P32 - PPTFDGEEEPSQGQK
für P32 - PPTFDGEEEPSQGQK
Ihre Herstellung erfolgt nach an sich bekannten Verfahren z. B. durch:
- a) polyklonale Antikörper:
- - Immunisierung von Kleinsäugern, vorzugsweise von Kaninchen, mit den an Trägern (KLH, BSA etc.) gekoppelten Peptiden
- - Blutung und Gewinnung des Serums
- - Affinitätsreinigung der Antikörper über eine Peptidsäule
- b) monoklonale Antikörper:
- - Immunisierung von Kleinsäugern oder Immunisierung von Milzzellen in vitro mit den erfindungsgemäßen Peptiden
- - Isolierung der Milzzellen und Fusionierung mit Krebszellen zu Hybridomzellen; Selektion positiver Klone
- - Isolierung der Antikörper.
Diese Antikörper werden sowohl in verschiedenen immunologischen
Testsystemen, in unterschiedlichen ELISA-Testsystemen, in der
Durchflußcytometrie und im Western Blot eingesetzt.
Überraschenderweise wurde festgestellt, daß das N-terminale Peptid von
YB-1 mit der Sequenz (Acetylierung-MSSEAETQQPPA-cys) die Proliferation
von HeLa-Zellen deutlich hemmt.
Gegenstand der Erfindung ist deshalb insbesondere das Peptid
MSSEAETQQPPA sowie davon abgeleitete Mutanten und Varianten und
andere von YB-1 abgeleitete Peptide, die die gleichen Eigenschaften
aufweisen, und selektiv Tumorzellen hemmen. Unter der Bezeichnung
Peptid werden im Sinne der Erfindung auch solche Aminosäureketten
verstanden, die N-terminal und C-terminal Substitutionen aufweisen. Zu
diesen Substitutionen können beispielsweise zählen:
Acetylierung, Anfügen eines c-terminale Cysteins zur vereinfachten Kopplung des Peptides an einen Träger, Veresterung mit Fettsäuren, Konjugation mit Zuckerresten, Alkylierungen etc.
Acetylierung, Anfügen eines c-terminale Cysteins zur vereinfachten Kopplung des Peptides an einen Träger, Veresterung mit Fettsäuren, Konjugation mit Zuckerresten, Alkylierungen etc.
Eine Hemmung wurde schon nach der einmaligen Zugabe von nur 10 ng
des Peptides zu 5.103 Hela-Zellen beobachtet. Die Erhöhung der
verwendeten Peptidmenge führte zu einer dosisabhängigen verstärkten
Hemmung. Diese Hemmung steht offensichtlich im Zusammenhang mit
der Expression und der Funktion von YB-1. Das bedeutet, daß Zellen die
eine hohe YB-1-Expression (Tumorzellen) aufweisen, eine hohe Sensitivität
bei der Behandlung mit diesem Peptid besitzen, während Zellen mit wenig
oder gar keinem YB-1 (normales, nichtmalignes Gewebe) von diesem
Peptid nicht beeinflußt werden.
Daraus ergibt sich die erfindungsgemäße Ausführungsvariante mit Hilfe
dieses Peptides selektiv Tumorzellen in ihrem Wachstum zu hemmen und
dieses Peptid und davon abgeleitete Mutanten und Varianten und andere
von YB-1 abgeleitete Peptide, die die gleichen Eigenschaften aufweisen, als
therapeutische Mittel für die Tumorbehandlung zu verwenden.
Zum erfinderischen Grundgedanken gehört die Verwendung dieses
Peptides in der vorliegenden Form sowie gegebenfalls mit zusätzlichen
Modifikationen für die Therapie maligner Erkrankungen. Gleichfalls
gehören dazu Peptide, die zusätzlich zu der dargestellten Sequenz noch
weitere Aminosäuren enthalten, unabhängig davon, ob diese von YB-1
abgeleitet wurden oder nicht. Die Erfindung schließt ebenfalls die
Verwendung weiterer, von der YB-1-Sequenz abgeleiteter Peptide mit ein.
Desweiteren gehören Substanzen zum Wesen dieser Erfindung, die in der
Lage sind, an das oben dargestellte Peptid oder davon abgeleitete Peptide
zu binden, und damit die Funktion von YB-1 zu beeinflussen. Schließlich
sind weiterhin auch Substanzen zum Gegenstand der Erfindung, die
aufgrund der räumlichen Struktur dieses Peptides erstellt werden.
Die Herstellung der Peptide erfolgt nach an sich bekannten Techniken
entweder gentechnisch oder synthetisch.
In einer weiteren Ausführungsvariante enthalten die erfindungsgemäßen
Mittel zusätzlich Zytostatika. Als Zytostatika kommen alle bekannten
Zytostatika in Betracht, beispielsweise Doxorubicin oder Adriblastin.
Eine weitere Ausführungsvariante dieser Erfindung beinhaltet die
Verwendung von YB-1 für das Screening bzw. das Design neuer
therapeutischer Substanzen. Dazu wird die gezielte Expression von YB-1
in kultivierten Zellen oder in einem Mausmodell genutzt.
Die Verwendung entsprechender Zelllinien gehört daher zum
Grundgedanken dieser Erfindung. Ebenso gehört die Verwendung von
Deletionsmutanten von YB-1, sowie die Verwendung von YB-1-
Fusionsproteinen (YB-1 mit Kernlokalisationssequenz, GFP u. ä.) in diesem
Zusammenhang zum Wesen dieser Erfindung.
Die Verwendung YB-1-transgener Mäuse als Tiermodell, allein oder nach
Kreuzung mit anderen transgenen Mäusen gehört ebenfalls zum
erfinderischen Grundgedanken. Desweiteren gehört die Verwendung
dieser Mäuse zur Analyse neuer therapeutischer Substanzen zum Wesen
dieser Erfindung.
Die Erfindung soll nachfolgend durch Ausführungsbeispiele näher
erläutert werden.
Zur Senkung werden folgende YB-1 Antisense-Oligos eingesetzt:
asOligo 1: 600-619 5'-TAT TCT GGT AAT TTT GCT GG-3'
asOligo 2: 1140-1159 5'-TTC ATA TTT CTT CTT GTT GG-3'
asOligo 3: 1160-1179 5'-TCA TTT CTT ATT GCT GGA AT-3'
asOligo 4: 1390-1409 5'-TAT TAC AAA TTA AAA ATG AA-3'
asOligo 5: 5'-CTC GCT GCT CAT GGT TGC GGT-3'
asOligo 2: 1140-1159 5'-TTC ATA TTT CTT CTT GTT GG-3'
asOligo 3: 1160-1179 5'-TCA TTT CTT ATT GCT GGA AT-3'
asOligo 4: 1390-1409 5'-TAT TAC AAA TTA AAA ATG AA-3'
asOligo 5: 5'-CTC GCT GCT CAT GGT TGC GGT-3'
Es existiert allerdings darüberhinaus ein Adenovirus mit der YB-1 cDNA
in antisense Orientierung (pHVad2c CMV/SV40 YB-1 as), der ebenfalls die
endogene YB-1 Konzentration in den infizierten Zellen reduziert.
Folgende Ribozyme werden eingesetzt:
- 1. 5'-TGT ACA AA CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA AAC ATC TTC CT-3'
- 2. 5'-GTC TGG TG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC AAA TAC AT-3'
- 3. 5'-TGC GTT GG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC TTC CTG GG-3'
- 4. 5'-CAA TCT CC CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC ACT GCG AA-3'
- 5. 5'-ACC ACC AG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC CTG TAA CA-3'
Ein synthetisches Peptid (Acetyl-MSSESETQQPPA-cys), das dem N-
Terminus von YB-1 entspricht, wurde an BSA und KLH gekoppelt und
mehrfach in Kaninchen injiziert. Das gewonnene Antiserum wurde durch
eine Peptidsäule affinitätsgereinigt.
Die Anti-YB-1 Antikörper werden in der immunhistochemischen Analyse
von Gewebeschnitten verwendet. Auf Grund der Expression sowie der
Verteilung von YB-1 können mehrere Rückschlüsse gezogen werden. Der
Nachweis von YB-1 in Geweben, die normalerweise kein YB-1
expremieren, kann zur Unterstützung der Diagnose einer
Tumorerkrankung verwendet werden. Die Expressionshöhe von YB-1 in
den Tumorzellen und dem angrenzenden benignen Gewebe korreliert mit
der rezidivfreien Überlebenszeit der Patienten. Daher kann dieser
Nachweis zur Prognose sowie für die Verbesserung der Behandlung bzw.
der Nachsorge verwendet werden. Der Nachweis von YB-1 in den Kernen
der Tumorzellen ergibt einen zusätzlichen Hinweis auf die Expression von
mdr 1 und damit auf die durch das P-Glycoprotein verursachte Multi-drug
Resistenz.
Es werden synthetisch erzeugte Antisense-Oligonukleotide verwendet, um
die Expression von P32 zu hemmen. Diese Oligonukleotide sind von der
Antisense-Sequenz der mRNA von P32 abgeleitet, und führen zu einer
Hemmung der Biosynthese von P32, wodurch die zelluläre Konzentration
dieses Proteins erniedrigt wird. Es werden u. a. folgende Oligonukleotide
verwendet (Aufzählung ist als Beispiel gedacht und nicht vollzählig).
- - 5'-GCA GCA GAG GCA GCA TCG CGG-3'
- - 5'-CAT CAA ATG TTG GTG GGA TGC-3'
Zur Reduktion des Abbaus im Organismus werden chemisch modifizierte
Oligonukleotide verwendet (zum Beispiel Thioate u. ä.)
Es wird ein synthetisches Peptid (PPTFDGEEEPSQGQK) an einen Träger
(BSA oder KLH) gebunden und für die Immunisierung von Kaninchen
verwendet. Die aus dem Serum der Tiere gewonnenen Antikörper werden
für den immunhistochemischen Nachweis von P32 in Tumorproben
verwendet. Die Expression und Verteilung von P32 gibt Hinweise auf die
intrazelluläre Regulation von YB-1 und ermöglicht damit eine
entsprechende Prognose für die weitere Behandlung.
Jeweils 5.103 HeLa-Zellen wurden einmalig mit der angegebenen
Peptidmenge behandelt, und nach 36 Stunden mittels eines
Prolifertionselisas analysiert. Die dargestellten Werte sind der
Durchschnitt von jeweils drei Ansätzen.
Das Peptid (Acetylierung-MSSEAETQQPPA-cys) wird synthetisch oder
gentechnisch hergestellt und gegebenenfalls zusätzlich modifiziert.
Therapeutische Mengen dieses Peptides werden entweder direkt in einen
gut lokalisierten Tumor injiziert, oder das Peptid wird über eine Infusion
appliziert. Die Therapie wird je nach Bedarf wiederholt, bzw. mit den
gängigen Chemotherapeutika oder anderen Therapien kombiniert.
Es wurden Zelllinien etabliert, die durch ein entsprechendes Plasmid YB-1
konstitutiv überexpremieren. Obwohl die Ausgangszelllinien (z. B. HBL100)
nicht tumorigen waren, weisen die Transfektanten zahlreiche Merkmale
von Tumorzellen auf (Deregulation einzelner Zellzyklusregulatoren,
Expression von mdr1 und damit einen Multi-drug resistenten Phänotyp
etc.). Diese Transfektanten sind daher gut für das Screening oder den Test
neuer therapeutischer Substanzen geeignet.
siehe beigefügte Skizze:
(pCDN6/YB-1 HA) - Abbildung B
siehe beigefügte Skizze:
(pCDN6/YB-1 HA) - Abbildung B
Die Erfinder etablierten transgene Mäuse, die YB-1 durch die Verwendung
bestimmter Promotoren gewebespezifisch expremieren (Brustepithel,
Thymus). Da die Überexpression von YB-1 sowie die deregulierte
Lokalisation entscheidende Schritte bei der Tumorentstehung- und
progression sind, stellen diese Mäuse ein gutes Tiermodell für diese
Prozesse dar. Diese Mäuse können als Tiermodell allein oder nach
Kreuzung mit anderen transgenen Mäusen verwendet werden.
Desweiteren können diese Mäuse für die Analyse neuer therapeutischer
Substanzen genutzt werden.
siehe beigefügte Skizzen:
Brustepithel (BLG-YB-1 HA) - Abbildung C
T-Zellen (lck-YB-1 HA) - Abbildung D
siehe beigefügte Skizzen:
Brustepithel (BLG-YB-1 HA) - Abbildung C
T-Zellen (lck-YB-1 HA) - Abbildung D
Zum Nachweis des transgenen Proteins wurde YB-1 mit einem HA-Tag
versehen.
Claims (25)
1. Mittel zur Therapie maligner Erkrankungen, enthaltend Substanzen
zur Absenkung der YB-1 Konzentration oder Substanzen zur
Hemmung der Translokation von YB-1 in den Tumorzellen.
2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es zusätzlich an
sich bekannte Zytostatika wie Doxorubicin, Adriablastin u. a. enthält.
3. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es ein
Antisense-Oligonukleotid gegen die YB-1 mRNA enthält.
4. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es ein
Ribozym gegen die YB-1 mRNA enthält.
5. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es ein
Adenovirus, das die YB-1-Antisense mRNA produziert, enthält.
6. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es
Substanzen, die die Interaktion von YB-1 mit P32 hemmen, enthält.
7. Mittel nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß es Substanzen
enthält, die die jeweiligen Bindungsstellen von YB-1 bzw. P32
blockieren.
8. Mittel nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es synthetische
oder rekombinante Peptide bzw. Polypeptide, die die jeweiligen
Bindungsstellen von YB-1 bzw. P32 blockieren, enthält.
9. Mittel nach Anspruch 1, 2 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß es
Substanzen, die die Modifikation von YB-1 bzw. P32 verhindert sowie
ggf. an sich bekannte Zytostatika enthält.
10. Mittel nach Anspruch 1, 2 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß es
Substanzen zur Absenkung der zellulären Konzentration von P32
enthält.
11. Mittel nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß es Antisense-
Oligonukleotide gegen die mRNA von P32 sowie ggf. an sich bekannte
Zytostatika enthält.
12. Mittel nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß es ein
Ribozym gegen die mRNA von P32 sowie ggf. an sich bekannte
Zytostatika enthält.
13. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, enthaltend Anti-YB-1-Antikörper.
14. Mittel zur Diagnose und Prognose maligner Erkrankungen, dadurch
gekennzeichnet, daß es Antikörper gegen YB-1 und/oder gegen P32
enthält.
15. Mittel nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß sie in
folgenden an sich bekannten Techniken angewandt werden:
- a) Immunhistochemie/Immunfluoreszenz mit Antikörpern gegen YB-1 bzw. P32,
- b) In-Situ-Hybridisierungen zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Tumorschnitten,
- c) ELISA, RIA u. ä. zum quantitativen Nachweis von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten,
- d) Westernblots für den Nachweis von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten,
- e) RT-PCR (semiquantitative, Light-Cycler etc.) zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten,
- f) Northern-Blot, Dot-Blots, Micro-Arrays oder ähnliche Hybridisierungstechniken zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten.
16. Mittel zur Therapie maligner Erkrankungen nach Anspruch 1 bis 14,
dadurch gekennzeichnet, daß die aufgeführten Substanzen durch
gentherapeutische Vektoren in die Tumorzellen eingebracht werden.
17. Verfahren zur Diagnose, Prognose und Therapie maligner
Erkrankungen, insbesondere bei Karzinomen (Mamma-, Ovarial-,
Prostatakarzinome etc.), Sarkomen (Osteosarkomen), malignen
Melanomen, sowie Hirntumoren (Glioblastomen, etc.), dadurch
gekennzeichnet, daß die Höhe der YB-1 Expression in
Gewebeschnitten ermittelt und als Grundlage einer gezielten
zusätzlichen Behandlung bzw. Nachsorge verwendet wird.
18. Peptid MSSEAETQQPPA sowie davon abgeleitete Mutanten und
Varianten und andere von YB-1 abgeleitete Peptide, die die gleichen
Eigenschaften aufweisen, und selektiv Tumorzellen hemmen.
19. Peptid mit der Aminosäuresequenz MSSEAETQQPPA.
20. Antikörper, die spezifisch für YB-1 sind und ein oder mehrere Peptide
der Ansprüche 18 bis 19 erkennen.
21. Verwendung mindestens eines Peptides der Ansprüche 18 oder 19
ggf. in Kombination mit anderen Zytostatika zur Herstellung eines
Antitumormittels.
22. Verwendung nach Anspruch 21 zur Generierung einer effektiven
Tumorvakzine zur Bekämpfung von malignen Erkrankungen
(insbesondere Karzinome (Mamma-, Ovarial-, Prostatakarzinome
etc.), Sarkome (Osteosarkomen), maligne Melanome, sowie
Hirntumore (Glioblastome, etc.)) im Sinne einer aktiven spezifischen
Immunisierung im tumor-therapeutischen Kontext.
23. Antikörper, die spezifisch für P32 sind.
24. Zelllinien, die durch ein entsprechendes Plasmid YB-1 konstitutiv
überexpremieren, zum Screening oder den Test von therapeutischen
Substanzen.
25. Transgene Kleinsäuger, vorzugsweise Mäuse, die YB-1
gewebespezifisch exprimieren, zur Testung therapeutischer
Substanzen.
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002053711A2 (de) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Per Sonne Holm | Verwendung des transkriptionsfaktors yb-1 in adenoviralen systemen |
WO2006063567A1 (de) * | 2004-12-14 | 2006-06-22 | Mertens Peter Rene | Verfahren zur bestimmung entzündlicher vorgänge und pharmazeutische zusammensetzungen zur behandlung derselben |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10015413A1 (de) * | 2000-03-23 | 2001-09-27 | Max Delbrueck Centrum | Mittel zur Diagnose und Therapie viraler Erkrankungen |
AU784975B2 (en) | 2000-10-11 | 2006-08-10 | Sumitomo Chemical Company, Limited | DNA-binding protein YB-1-containing collagen accumulation inhibitors |
WO2002044363A1 (en) * | 2000-11-28 | 2002-06-06 | Genesis Research And Development Corporation Limited | Methods for modulating apoptotic cell death |
DE10150984A1 (de) * | 2001-10-16 | 2003-04-17 | Holm Per Sonne | Verwendung des adenoviralen E2-late-Promotors |
AU2003242585A1 (en) | 2002-05-27 | 2003-12-12 | Per Sonne Holm | Novel use of adenoviruses and nucleic acids coding therefor |
US20070110719A1 (en) | 2003-11-14 | 2007-05-17 | Holm Per S | Novel use of adenoviruses and nucleic acids that code for said viruses |
CA2592699C (en) * | 2004-12-31 | 2023-02-21 | Per Sonne Holm | Method for reversing multiple resistance in animal cells |
WO2008100328A2 (en) * | 2006-07-13 | 2008-08-21 | Burnham Institute For Medical Research | METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETING gC1qR/p32 |
US20130019918A1 (en) | 2011-07-18 | 2013-01-24 | The Regents Of The University Of Michigan | Thermoelectric devices, systems and methods |
WO2014070795A1 (en) | 2012-10-31 | 2014-05-08 | Silicium Energy, Inc. | Methods for forming thermoelectric elements |
WO2015148554A1 (en) | 2014-03-25 | 2015-10-01 | Silicium Energy, Inc. | Thermoelectric devices and systems |
ES2868305T3 (es) | 2014-03-28 | 2021-10-21 | Univ Washington Through Its Center For Commercialization | Vacunas contra el cáncer de mama y de ovario |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU7674896A (en) * | 1995-10-31 | 1997-05-22 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Adenovirus-antisense k-ras expression vectors and their application in cancer therapy |
US6140126A (en) * | 1999-10-26 | 2000-10-31 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of Y-box binding protein 1 expression |
-
2000
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- 2000-06-30 DE DE10031122A patent/DE10031122A1/de not_active Withdrawn
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002053711A2 (de) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Per Sonne Holm | Verwendung des transkriptionsfaktors yb-1 in adenoviralen systemen |
WO2002053711A3 (de) * | 2000-12-28 | 2003-01-23 | Per Sonne Holm | Verwendung des transkriptionsfaktors yb-1 in adenoviralen systemen |
WO2006063567A1 (de) * | 2004-12-14 | 2006-06-22 | Mertens Peter Rene | Verfahren zur bestimmung entzündlicher vorgänge und pharmazeutische zusammensetzungen zur behandlung derselben |
DE102004060385A1 (de) * | 2004-12-14 | 2006-07-06 | Rwth Aachen | Verfahren zur Bestimmung entzündlicher Vorgänge und pharmazeutische Zusammensetzungen zur Behandlung derselben |
US8163507B2 (en) | 2004-12-14 | 2012-04-24 | Peter Rene Mertens | Process for the determination of inflammatory processes and pharmaceutical compositions for the treatment thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU6425800A (en) | 2001-01-22 |
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WO2001002556A2 (de) | 2001-01-11 |
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