DD299291A5 - Protected amino acids and process for their preparation - Google Patents

Abstract

Beschrieben sind Verfahren zur Herstellung von N-Trityl-Carbamoylgruppen enthaltenden Aminosaeurederivaten der Formel * worin n fuer 1 oder 2 steht, R1 Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe, R2 Wasserstoff oder eine Carboxylschutzgruppe und R3 Triphenylmethyl, 4-Monomethoxy-trityl oder 4,4-Dimethoxy-trityl bedeuten, und von reaktionsfaehigen Carbonsaeurederivaten von solchen Verbindungen der Formel I, worin R1 fuer eine Aminoschutzgruppe und R2 fuer Wasserstoff stehen. Diese Verbindungen koennen als Ausgangsstoffe zur Herstellung von Peptiden, z. B. durch Festphasensynthese, verwendet werden. Sie sind hierzu besser geeignet als analoge Verbindungen der Formel I, worin R3 Wasserstoff oder eine der bisher gebraeuchlichen Carbamoylschutzgruppen bedeutet. Formel (I){Herstellungsverfahren; Aminosaeurederivate; Carbamoylschutzgruppen; N-Trityl-Carbamoylgruppen; Triphenylmethyl; * Ausgangsstoffe; Peptidherstellung; Festphasensynthese}Described are methods for preparing N-trityl carbamoyl-containing amino acid derivatives of the formula wherein n is 1 or 2, R 1 is hydrogen or an amino protecting group, R 2 is hydrogen or a carboxyl protecting group and R 3 is triphenylmethyl, 4-monomethoxy-trityl or 4,4-dimethoxy -trityl, and of reactive carboxylic acid derivatives of those compounds of the formula I in which R 1 is an amino-protecting group and R 2 is hydrogen. These compounds can be used as starting materials for the preparation of peptides, eg. B. by solid phase synthesis. They are better suited for this purpose than analogous compounds of the formula I in which R 3 is hydrogen or one of the previously customary carbamoyl protective groups. Formula (I) {Production Method; Aminosaeurederivate; carbamoyl protecting groups; N-trityl-carbamoyl; triphenylmethyl; * Starting materials; Peptide production; Solid phase synthesis}

Description

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Anwendungsgebiet dor ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft Verfahren zur Herstellung N-Trityl-Carbamoylgruppen enthaltender .Aminosäurederivate, welche in der Peptidsynthese verwendet werden können.The invention relates to processes for the preparation of amino acid derivatives containing N-trityl carbamoyl groups, which can be used in peptide synthesis.

Charakteristik des bekannten Standes der TechnikCharacteristic of the known state of the art

Die Amidgruppen der Aminosäuren Asparagin und Glutamin führen bei der Peptidsynthese häufig zu unerwünschten Nebenreaktionen, z.B. Dehydratisierung zum Nitril, intramolekulare Cyclisierung zum Imid und, im Falle von Glutamin, zur Pyrrolidonbildung. Außerdem beobachtet man bei der Festphasensynthese mit Glutamin oft, daß die Peptidharze wegen intermolekularer Ausbildung von Wasserstoffbrücken nicht mehr quellen, was schlechte Kupplungsausbeuten zur Folge hat. Diese Nachteile können durch Schutz der Carbamoylgruppen von Asparagin und Glutamin vermieden werden. Gebräuchlicherweise verwendet man 4,4'-Dimethoxy-diphenyl-methyl iui-[4-methoxy-phenyll-methyl, 4,4'-Dimethoxybenzhydryl, abjekürzt Mbh) oder 2,4,6-Trimethoxy-benzyl (abgekürzt: Tmob) als Schutzgruppe.The amide groups of the amino acids asparagine and glutamine often lead to undesirable side reactions in peptide synthesis, e.g. Dehydration to the nitrile, intramolecular cyclization to the imide and, in the case of glutamine, pyrrolidone formation. In addition, it is often observed in solid phase synthesis with glutamine that the peptide resins do not swell due to intermolecular hydrogen bond formation, resulting in poor coupling yields. These disadvantages can be avoided by protecting the carbamoyl groups of asparagine and glutamine. Customarily, 4,4'-dimethoxy-diphenyl-methyl-iui- [4-methoxy-phenyl-methyl, 4,4'-dimethoxybenzhydryl, abbreviated Mbh) or 2,4,6-trimethoxybenzyl (abbreviated to Tmob) is used as protecting group.

Ziel der ErfindungObject of the invention

Nun wurde jedoch von den Erfindern der vorliegenden Erfindung gefunden, daß die bisher bekannten Carbamoyl-Schutzgruppen bei ihrer Abspaltung in bestimmten Fällen selbst unerwünschte Nebenroaktionen verursachen. Die bei der acidolytischen Abspaltung gebildeten Carbokationen reagieren nämlich sehr leicht und in irreversibler Weise mit Tryptophan. Ausgehend von diesem Befund, det als ihr Ausgangspunkt gewissermaßen Teil der vorliegenden Erfindung ist, bestand die Aufgabe der vorliegenden Erfindung nun darin, eine Carbamoyl-Schutzgruppe zu finden, bei der die genannten Nebenreaktionen nicht auftreten, und entsprechend geschützte Aminosäurederivate herzustellen.However, it has now been found by the inventors of the present invention that the carbamoyl protecting groups hitherto known in their elimination in certain cases themselves cause undesirable side-reactions. The carbocations formed in the acidolytic cleavage namely react very easily and in an irreversible manner with tryptophan. Based on this finding, det as their starting point is part of the present invention, the object of the present invention was to find a carbamoyl protecting group in which said side reactions do not occur, and to produce correspondingly protected amino acid derivatives.

Darlegung der ErfindungPresentation of the invention

Die Erfindung betrifft zur Herstellung von Verbindungen der Formel I,The invention relates to the preparation of compounds of the formula I,

IlIl

R₁-NH-HC-C-O-R₂ R ₁ -NH-HC-COR ₂

I (I)I (I)

(CH₂)_n (CH ₂ ) _n

O=C-NH-R₃ O = C-NH-R ₃

worin η für 1 oder 2 steht, R) Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe, R₂ Wasserstoff oder eine Carboxylschutzgruppe und R3 Triphenylmethyl,4-Monomethoxy-trityl oder 4,4'-Dimethoxy-trityl bedeuten, von Salzen von solchen Verbindungen mit einer salzbildenden Gruppe und reaktionsfähigen Carbonsäurederivaten von solchen Verbindungen der Formel I, worin R] für eine Aminoschutzgruppe und R₂ für Wasserstoff stehen. Die Konfiguration am asymmetrischen HC-Atom ist (D, L), (D) oder vorzugsweise (L).wherein η is 1 or 2, R) is hydrogen or an amino-protecting group, R _{2 is} hydrogen or a carboxyl-protecting group and R _{3 is} triphenylmethyl, 4-monomethoxy-trityl or 4,4'-dimethoxy-trityl, of salts of such compounds having a salt-forming group and reactive carboxylic acid derivatives of those compounds of formula I wherein R] is an amino-protecting group and R _{2 is} hydrogen. The configuration at the asymmetric HC atom is (D, L), (D) or preferably (L).

Die Verbindungen der Formel I sind bei der Peptidsynthese ohne alkylierende Wirkung auf die Indolseitenkette von Tryptophan. Sie sind außerdem leichter zugänglich, besser löslich in organischen Lösungsmitteln und ihre Amidschutzgruppe kann leichterThe compounds of formula I are in the peptide synthesis without alkylating effect on the indole side chain of tryptophan. They are also more accessible, more soluble in organic solvents, and their amide protecting group can be lighter

mit Trifluoressigsäure abgespalten werden als in analogen Verbindungen, worin R₃ für 2,4,6-Trimethoxy-benzyl (Tmob) oder Di-(4-methoxy-phenyl)-methyl (Mbh) steht. Zum Beispiel betragen die Halbwertszeiten von Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Tmob)-OH und Fmoc-Gln(Mbh)-OH bei dor Spaltung in Trifluoressigsäure-1,2-Dichlorethan (1:1) bei 22⁰C 2, 9 beziehungsweise 27 Minuten.are cleaved with trifluoroacetic acid as in analogous compounds wherein R _{3 is} 2,4,6-trimethoxy-benzyl (Tmob) or di- (4-methoxyphenyl) methyl (Mbh). For example, the half-lives of Fmoc-Gln (Trt) -OH, Fmoc-Gln (Tmob) -OH and Fmoc-Gln (Mbh) -OH in cleavage in trifluoroacetic acid-1,2-dichloroethane (1: 1) are 22 ⁰ C 2, 9 or 27 minutes.

Die reaktionsfähigen Carbonsäurederivate der Verbindungen der Formel I sind unter Kupplungsbedingungen, das heißt in Gegenwart von Kupplungskatalysatoren, wie 1-Hydroxy-IH-benztriazol (HOBt), und in Gegenwart von Lösungsmitteln, die üblicherweise für Kupplungsreaktionen bei der Peptidsynthese verwendet werden, z. B. Dimethylacetamid (DMA) und i,2-Dichlor-ethan (DIEA), deutlich stabiler als analoge Verbindungen, worin R₉ Wasserstoff bedeutet. Zum Beispiel betragen die Zerfall-Halbwertszeiten von Fmoc-Asn-O-Tcp und Fmoc-Asn-O-Pfp (Fmoc = 9-Fluorenyl-methoxy-carbonyl, Pfp = Pentafluorphenyl, Tcp = 2,4,5-Trichlor-phenyl) in DMA + 1 Äquivalent HOBt + 1,7 Äquivalente DIEA nur 2 Minuten beziehungsweise sogar weniger als 1 Minute, während die analogen Verbindungen, worin R₃ einen Tritylrest bedeutet, unter den gleichen Bedingungen vollkommen stabil sind.The reactive carboxylic acid derivatives of the compounds of formula I are under coupling conditions, that is in the presence of coupling catalysts such as 1-hydroxy-IH-benzotriazole (HOBt), and in the presence of solvents commonly used for coupling reactions in peptide synthesis, e.g. As dimethylacetamide (DMA) and i, 2-dichloro-ethane (DIEA), much more stable than analogous compounds, wherein R _{9 is} hydrogen. For example, the decay half-lives of Fmoc-Asn-O-Tcp and Fmoc-Asn-O-Pfp (Fmoc = 9-fluorenylmethoxycarbonyl, Pfp = pentafluorophenyl, Tcp = 2,4,5-trichlorophenyl) are in DMA + 1 equivalent HOBt + 1.7 equivalents DIEA only 2 minutes, or even less than 1 minute, while the analogous compounds wherein R _{3 is} a trityl group are perfectly stable under the same conditions.

Überraschenderweise verlangsamen die raumfüllenden Tritylschutzgruppen die Kupplungsreaktionen nicht, sondern haben praktisch keinen Einfluß auf die Kupplungsgeschwindigkeit.Surprisingly, the space-filling trityl protecting groups do not slow down the coupling reactions, but have virtually no effect on the coupling speed.

Schutzgruppen, ihre Einführung und Abspaltung sind beispielsweise beschrieben in „Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London, New York 1973, und in „Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4. Auflage, Bd. 15/1, Georg-Thieme-Vorlag, Stuttgart 1974 sowie in Theodora W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York ' 981. Charakteristisch für Schutzgruppen ist, daß sie leicht, d. h. ohne r!aß unerwünschte Nobenreaktionen stattfinden, z.B. solvolyrisch, reduktiv, photolytisch oder auch unter physiologischen Bedingungen abspaltbar sind. Eine geschützte Aminogruppe Ri-NH kann z. B. in Form einer leicht spaltbaren Acylamino-, Arylmethylamino-, verätherten Mercaptoamino-, 2-Acyl-niederalk-1 -enyl-amino- oder Silyl-aminogruppe vorliegen.Protecting groups, their introduction and cleavage are described for example in "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London, New York 1973, and in "Methods of Organic Chemistry", Houben-Weyl, 4th Edition, Vol. 15/1, Georg-Thieme-Vorlag, Stuttgart 1974; and Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis," John Wiley & Sons, New York, 981. Protecting groups are characterized by being light, that is, without any unwanted noise reactions For example, a protected amino group R 1 -NH 3 may be in the form of an easily cleavable acylamino, arylmethylamino, etherified mercaptoamino, 2-acyl, lower alk-1-enyl, for example solvolly, reductively, photolytically or under physiological conditions amino or silyl-amino group present.

In einer entsprechenden Acylaminogruppe ist Acyl beispielsweise der Acylrest einer organischen Carbonsäure mit z. B. bis zu 18 Kohlenstoffatomen, insbesondere einer gegebenenfalls, z. B. durch Halogen oder Aryl, substituierten Alkancarbonsäure oder gegebenenfalls, z. B. durch Halogen, Niederalkoxy oder Nitro, substituierten Benzoesäure, oder eines Kohlensäurehalbesters. Solche Acylgruppen sind beispielsweise Niederalkanoyl, wie Formyl, Acetyl oder Propionyl, Halogenniederalkanoyl, wie 2-Halogenacetyl, insbesondere 2-Chlor-, 2-Brom-, 2-lod-, 2,2,2-Trifluor- oder 2,2,2-Trichloracetyl, gegebenenfalls, z.B. durch Halogen, Niederalkoxy oder Nitro substituiertes Benzoyl, z. B. Benzoy1,4-Chlorbenzoyl, 4-Methoxybenzoyl oder 4-Nitrobenzoyl, oder in 1-Stellung des Niederalkylrestes verzweigtes oder in 1- odor 2-Stellung geeignet substituiertes Niederalkoxycarbonyl, insbesondere tert.-Niederalkoxycarbonyl, z. B. tert.-Butyloxycar'jonyl, Arylmethoxycarbonyl mit einem oder zwei Arylresten, die vorzugsweise gegebenenfalls, z. B. durch Niederalkyl, insbesondere tert.-Niederalkyl, wie tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Hydroxy, Halogen, z.B. Chlor, und/oder Nitro, mono- oder polysubstituiertes Phenyl darstellen, wie gegebenenfalls substituiertes Benzyloxycarbonyl, z. B. 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, oder substituiertes Diphenylmethoxycarbonyl, z. B. Benzhydryloxycarbonyl oder Di-(4-methoxyphenyl)-methoxycarbonyl, Aroylmethoxycarbonyl, worin die Aroylgruppe vorzugsweise gegebenenfalls, z. B. durch Halogen, wie Brom, substituiertes Benzoyl darstellt, z. B. Phonacyloxycarbonyl, 2-Halogen-niederalkoxycarbonyl, z.B. 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, 2-Bromethoxycarbonyl oder 2-lodethoxycarbonyl, oder 2-(trisubstituiertes SilyD-ethoxycarbonyl, worin die Substituenten unabhängig voneinander je einen gegebenenfalls substituierten, z. B. durch Niederalkyl, Niederalkoxy, Aryl, Halogen oder Nitro substituierten, aliphatischen, araliphatischen, cycloaliphatischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffrest mit bis zu 15 C-Atomen, wie entsprechendes, gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Phenylniederalkyl, Cycloalkyl oder Phenyl, bedeuten, z. B. 2-Triniederalkylsilylethoxycarbunyl, wie 2-Trimethylsilylethoxycarbonyl oder 2-(Di-n-butyl-methyl-silyl)-ethoxycarbonyl, oder 2-Triaryisilylethoxycarbonyl, wie 2-Triphenylsilylethoxycarbonyl.In a corresponding acylamino group acyl, for example, the acyl radical of an organic carboxylic acid with z. B. up to 18 carbon atoms, in particular an optionally, for. B. by halogen or aryl, substituted alkanecarboxylic acid or optionally, for. Example by halogen, lower alkoxy or nitro, substituted benzoic acid, or a carbonic monoester. Such acyl groups are, for example, lower alkanoyl, such as formyl, acetyl or propionyl, halo-lower alkanoyl, such as 2-haloacetyl, in particular 2-chloro, 2-bromo, 2-iodo, 2,2,2-trifluoro or 2,2,2 Trichloroacetyl, optionally, for example halo, lower alkoxy or nitro substituted benzoyl, e.g. B. Benzoy1,4-chlorobenzoyl, 4-methoxybenzoyl or 4-nitrobenzoyl, or in the 1-position of the lower alkyl or branched in 1-odor 2-position suitably substituted lower alkoxycarbonyl, especially tert-Niederalkoxycarbonyl, z. B. tert-Butyloxycar'jonyl, arylmethoxycarbonyl with one or two aryl radicals, which are preferably optionally, for. By lower alkyl, especially tert-lower alkyl, such as tert-butyl, lower alkoxy, such as methoxy, hydroxy, halogen, e.g. Chloro, and / or nitro, mono- or polysubstituted phenyl, such as optionally substituted benzyloxycarbonyl, z. 4-nitrobenzyloxycarbonyl, or substituted diphenylmethoxycarbonyl, e.g. B. Benzhydryloxycarbonyl or di- (4-methoxyphenyl) methoxycarbonyl, Aroylmethoxycarbonyl, wherein the aroyl group is preferably optionally, for. B. represented by halogen, such as bromine, substituted benzoyl, z. , Phononyloxycarbonyl, 2-halo-lower alkoxycarbonyl, e.g. 2,2,2-Trichloroethoxycarbonyl, 2-bromoethoxycarbonyl or 2-iodoethoxycarbonyl, or 2- (trisubstituted Silyd-ethoxycarbonyl wherein each of the substituents independently represents an optionally substituted one, for example substituted by lower alkyl, lower alkoxy, aryl, halogen or nitro , aliphatic, araliphatic, cycloaliphatic or aromatic hydrocarbon radical having up to 15 carbon atoms, such as corresponding, optionally substituted lower alkyl, phenyl-lower alkyl, cycloalkyl or phenyl, for example 2-tri-lower alkylsilylethoxycarbunyl, such as 2-trimethylsilylethoxycarbonyl or 2- (di-) n-butyl-methyl-silyl) -ethoxycarbonyl, or 2-triaryisilylethoxycarbonyl such as 2-triphenylsilylethoxycarbonyl.

Weitere, als Aminoschutzgruppen R₁ in Frage kommende Acylreste sind auch entsprechende Reste organischer Phosphor-, Phosphon- oder Phosphinsäuren, wie Diniederalkylkphosphoryl, z. B. Dimethylphosphoryl, Diethylphosphoryl, Di-npropylphosphoryl oder Diisopropylphosphoryl, Dicycloalkylphosphoryl, z.B. Dicyclohexylphosphoryl, gegebenenfalls substituiertes Diphenylphosphoryl, z.B. Diphenylphosphoryl, gegebenenfalls, z.B. durch Nitro substituiertes Di-(phenylniederalkyl)-phosphoryl, z.B. Dibenzylphosphoryl oder Di-(4-nitrobenzyl)-phosphoryl, gegebenenfalls substituiertes Phenyloxyphenyl-phosphonyl, z. B. Phenyloxyphenyl-phosphonyl, Diniederalkylphosphinyl, z. B. Diethylphosphinyl, oder gegebenenfalls substituiertes Diphenylphosphinyl, z. B. Diphenylphosphinyl.Further acyl radicals which are suitable as amino protecting groups R ₁ are also corresponding radicals of organic phosphoric, phosphonic or phosphinic acids, such as diloweralkylphosphoryl, for example. As dimethylphosphoryl, diethylphosphoryl, di-npropylphosphoryl or diisopropylphosphoryl, dicycloalkylphosphoryl, for example dicyclohexylphosphoryl, optionally substituted diphenylphosphoryl, for example diphenylphosphoryl, optionally, for example by nitro-substituted di- (phenyl lower alkyl) phosphoryl, eg dibenzylphosphoryl or di- (4-nitrobenzyl) phosphoryl optionally substituted phenyloxyphenyl phosphonyl, e.g. Phenyloxyphenyl phosphonyl, dilower alkyl phosphinyl, e.g. B. diethylphosphinyl, or optionally substituted diphenylphosphinyl, z. B. diphenylphosphinyl.

In einer Arylmethylaminogruppe, die eine Mono-, Di- oder insbesondere Triarylmethylaminogruppe darstellt, sind die Arylreste insbesondere gegebenenfalls substituierte Phenylreste. Solche Gruppen sind beispielsweise Benzyl-, Diphenylmethyl- und insbesondere Tritylamino.In an arylmethylamino group which represents a mono-, di- or especially triarylmethylamino group, the aryl radicals are in particular optionally substituted phenyl radicals. Such groups are for example benzyl, diphenylmethyl and especially tritylamino.

Eine verätherte Mercaptogruppe in einer mit einem solchen Rest geschützten Aminogruppe ist in erster Linie Arylthio oder Arylniederalkylthio, worin Aryl insbesondere gegebenenfalls, z. B. durch Niederalkyl, wie Methyl oder tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Halogen, wie Chlor, und/oder Nitro substituiertes Phenyl ist. Eine entsprechende Aminoschutzgruppe ist z.B. 2-Nitrophenylthio.An etherified mercapto group in an amino group protected with such a radical is primarily arylthio or Arylniederalkylthio, wherein aryl is in particular optionally, for. B. is substituted by lower alkyl, such as methyl or tert-butyl, lower alkoxy, such as methoxy, halogen, such as chlorine, and / or nitro-substituted phenyl. A corresponding amino protecting group is e.g. 2-nitrophenylthio.

In einem als Aminoschutzgruppe verwendbaren 2-Acyl-niederalk-1-en-1-yl-rest ist AcyI z.B. der entsprechende Rest einer Niederalkancarbonsäure, einer gegebenenfalls, z. B. durch Niederalkyl, wie Methyl oder tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Halogen, wie Chlor, und/oder Nitro substituierten Benzoesäure, oder insbesondere eines Kohlensäurehalbesters, wie eines Kohlensäure-niederalkylhalbesters. Entsprechende Schutzgruppen sind in erster Linie 1-Niederalkanoyl-prop-1-en-2-yl, z.B. 1 -Acetyl-prop-1 -en-2-yl, oder 1 -Niederalkoxycarbonyl-prop-1 -en-2-yl, z. B. 1 -Ethoxycarbonyl-prop-1 -en-2-yl. Bevorzugte Aminoschutzgruppen sind Acylreste von Kohlensäurehalbestern, insbesondere tert.-Butyloxycarbonyl, gegebenenfalls, z. B. wie angegeben, substituiertes Benzyloxycarbonyl, z. B. 4-Nitro-benzyloxycarbonyl, oder Diphenylmethoxycarbonyl, oder 2-Halogen· niederalkoxycarbonyl, wie 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, oder Ally loxycarbonyl und diesem verwandte Schutzgruppen, oder vor allem 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl.In a 2-acyl-lower-alk-1-en-1-yl radical useful as an amino-protecting group, AcyI is e.g. the corresponding radical of a lower alkanecarboxylic acid, an optionally, z. B. by lower alkyl, such as methyl or tert-butyl, lower alkoxy, such as methoxy, halogen, such as chlorine, and / or nitro substituted benzoic acid, or in particular a carbonic monoester, such as a carbonic acid lower alkyl. Corresponding protecting groups are primarily 1-lower alkanoyl-prop-1-en-2-yl, e.g. 1-acetyl-prop-1 -ene-2-yl, or 1-lower alkoxycarbonyl-prop-1 -ene-2-yl, e.g. B. 1 -ethoxycarbonyl-prop-1 -ene-2-yl. Preferred amino protecting groups are acyl radicals of carbonic monoesters, especially tert-butyloxycarbonyl, optionally, for. B. as indicated, substituted benzyloxycarbonyl, z. For example, 4-nitro-benzyloxycarbonyl, or diphenylmethoxycarbonyl, or 2-halo · lower alkoxycarbonyl, such as 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, or Ally loxycarbonyl and related protecting groups, or especially 9-fluorenyl-methoxycarbonyl.

Carboxylschutzgruppen R₂ sind üblicherweise veresternde Gruppen, in erster Linie in 1-Stellung verzweigte oder in 1- oder 2-Stellung geeignet substituierte Niederalkylgruppen. Bevorzugte, in veresterter Form vorliegende Carboxylgruppen sind u.a. tert.-Niederalkoxycarbonyl, z. B. tert.-Butyloxycarbonyl, Arylmethoxycarbonyl mit einem oder zwei Arylresten, wobei diese gegebenenfalls z. B. durch Niederalkyl, wie tert.-Niederalkyl, z. B. tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Hydroxy, Halogen, z.B.Carboxyl protecting groups R ₂ are usually esterifying groups, branched or primarily in the 1-position suitable in the 1- or 2-substituted lower alkyl groups. Preferred, in esterified form carboxyl groups include tert-Niederalkoxycarbonyl, z. B. tert-butyloxycarbonyl, arylmethoxycarbonyl with one or two aryl radicals, these optionally being, for. B. by lower alkyl, such as tert-lower alkyl, z. B. tert-butyl, lower alkoxy, such as methoxy, hydroxy, halogen, for example

Chlor, und/oder Nitro, mono- oder polysubstituierte Phonylreste darstellen, wie gegobenonfalls, ζ. B. wie oben erwähnt, substituiertes Benzyloxycarbonyl, z. B. 4-Methoxybenzyloxycarbonyl oder 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, oder gegebenenfalls, z. B. wie oben erwähnt, substituiertes Diphenylmethoxycarbonyl, z. B. Diphenylmothoxycarbonyl oder Di-(4-methoxyphenyl)-methoxycarbonyl, i-Niederalkoxyniederalkoxycarbonyl.wieMethoxymethoxycarbonyl, 1-Methoxyethoxycarbonyloder 1-Ethoxymethoxycarbonyl, I-Niederalkylthioniederalkoxycarbonyl, wie 1-Methylthiomethoxycarbonyloder 1 -Ethylthioethoxycarboiiyl, Aroylmethoxycarbonyl, worin die Aroylgruppe gegebenenfalls, z. B. durch Halogen, wie Brom, substituiertes Benzoyl darstellt, ?.B. Phenacyloxycarbonyl, 2-Halogenniederalkoxycarbonyl, z.B. 2,2,2-Trichlorethoxyca· bonyl, 2-Bromethoxycarbonyl oder 2-lodethoxycarbonyl, den 2-(trisubstituiertes oilyD-ethoxycarbonyl, worin dij Substituenten. unabhängig voneinander je einen gegebenenfalls substituierten, z.B. durch Niederalkyl, Niederalkoxy, Aryl, Halogen, und/oder Nitro substituierten, aliphatischen, araliphatischen, cycloaliphatischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffrest, wie entsprechendes, gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Phenylniederalkyl, Cycloalkyl oder Phenyl, bedeuten, z. B. 2-Triniederalkylsilylethoxycarbonyl, 2-Trimethylsilylethoxycarbonyl oder 2-(Di-n-butyl-methylsilyl)-ethoxycarbonyl, oder 2-Triarylsilylethoxycarbonyl, wie2-Triphenylsilylethoxycarbonyl.Chlorine, and / or nitro, mono- or polysubstituted phonyl radicals represent, as gegobenonfalls, ζ. As mentioned above, substituted benzyloxycarbonyl, z. 4-methoxybenzyloxycarbonyl or 4-nitrobenzyloxycarbonyl, or optionally, e.g. As mentioned above, substituted diphenylmethoxycarbonyl, z. Diphenylmothoxycarbonyl or di- (4-methoxyphenyl) methoxycarbonyl, i-lower alkoxy-lower alkoxycarbonyl, such as methoxymethoxycarbonyl, 1-methoxyethoxycarbonyl or 1-ethoxymethoxycarbonyl, 1-lower alkylthio-lower alkoxycarbonyl such as 1-methylthiomethoxycarbonyl or 1-ethylthioethoxycarbonyl, aroylmethoxycarbonyl wherein the aroyl group is optionally substituted, e.g. B. substituted by halogen, such as bromine, substituted benzoyl, ?. Phenacyloxycarbonyl, 2-halo-lower alkoxycarbonyl, eg 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2-bromoethoxycarbonyl or 2-iodoethoxycarbonyl, the 2- (trisubstituted oilyDethoxycarbonyl, wherein each substituent independently of one another is optionally substituted, for example by lower alkyl Lower alkoxy, aryl, halogen, and / or nitro substituted, aliphatic, araliphatic, cycloaliphatic or aromatic hydrocarbon radical, such as corresponding optionally substituted lower alkyl, phenyl-lower alkyl, cycloalkyl or phenyl, for example 2-tri-lower alkylsilylethoxycarbonyl, 2-trimethylsilylethoxycarbonyl or 2 - (di-n-butyl-methylsilyl) -ethoxycarbonyl, or 2-triarylsilylethoxycarbonyl, such as 2-triphenylsilylethoxycarbonyl.

Bworzugte geschützte Carboxylgruppen cind tert.-Niederalkoxycarbonyl, wie tert.-Butoxycarbonvl, und in erster Linie gegebenenfalls, z.B. wie oben erwähnt, substituiertes Benzyloxycarbonyl, wie 4-Nitrobenzyloxycdrbonyl, oder Diphenylmethoxycarbonyl, und vor allem 2-(Trimethylsilyl)-ethoxycarbonyl.Preferred protected carboxyl groups are tert-lower alkoxycarbonyl such as tert-butoxycarbonyl, and especially optionally, e.g. As mentioned above, substituted benzyloxycarbonyl, such as 4-nitrobenzyloxycyrbonyl, or diphenylmethoxycarbonyl, and especially 2- (trimethylsilyl) -ethoxycarbonyl.

Eine salzbildende Gruppe in einer Verbindung der Formel I ist z.B. eine freie Aminogruppe (Rj = H) oder eine freie Carboxylgruppe (R₂ = H). Die Verbindungen der Formel I, worin Ri Wasserstoff bedeutet, können Säureadditionssalze bilden, z.B. mit anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure, oder mit geeigneten organischen Carbonoder Sulfonsäuren, z. B. Trifluoressigsäure. Die Verbindungen der Formel I, worin R₂ Wasserstoff bedeutet, können Metall- oder Ammoniumsalze bilden, z.B. Alkalimetall- oder Erdalkalimetallsalze, z.B. Natrium-, Kalium-, Magnesium- oder Calciumsalze, oder Saize mit Ammoniak oder geeigneten organischen Aminen, wobei in erster Linie aliphatische, cycloaliphatische, cycloaliphatjsch-aliphatische oder araliphatische primäre, sekundäre oder tertiäre Mono-, Di- oder Polyamine, sowie heterocyclische Basen für die Salzbildung in Frage kommen, wie Niederalkylamine, z. B. Triethylamin, Hydroxyniederalkylamine, z. B. 2-Hydroxyethylamin, Bis-(2-hydroxyethyl)-amin, 2-Hydroxy-ethyl-diethyl-amin oder Tri-(2-hydroxyethyl)-amin, basische aliphatische Ester von Carbonsäuren, z. B. 4-Amino-benzoesäure-2-diethylaminoethylester, Niederalkylenamine, z. B. 1-Ethylpiperidin, Cycloalkylamine, z. B. Dieyclohexylamin, oder Benzylamine, z. B. Ν,Ν'-Dibenzylethylendiamin, ferner Basen vom Pyridintyp, z. B. Pyridin, Collidin oder Chinolin.A salt-forming group in a compound of the formula I is, for example, a free amino group (Rj = H) or a free carboxyl group (R ₂ = H). The compounds of the formula I in which R 1 is hydrogen may form acid addition salts, for example with inorganic acids, such as hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid, or with suitable organic carboxylic or sulfonic acids, for. B. trifluoroacetic acid. The compounds of the formula I in which R _{2 is} hydrogen may form metal or ammonium salts, for example alkali metal or alkaline earth metal salts, for example sodium, potassium, magnesium or calcium salts, or salts with ammonia or suitable organic amines, primarily aliphatic, cycloaliphatic, cycloaliphatic-aliphatic or araliphatic primary, secondary or tertiary mono-, di- or polyamines, as well as heterocyclic bases for salt formation come into question, such as lower alkylamines, z. Triethylamine, hydroxy-lower alkylamines, e.g. 2-hydroxyethylamine, bis (2-hydroxyethyl) amine, 2-hydroxyethyl-diethyl-amine or tri- (2-hydroxyethyl) -amine, basic aliphatic esters of carboxylic acids, e.g. B. 4-amino-benzoic acid 2-diethylaminoethyl, Niederalkylenamine, z. For example, 1-ethylpiperidine, cycloalkylamines, e.g. B. Dieyclohexylamin, or benzylamines, z. B. Ν, Ν'-dibenzylethylenediamine, also bases of the pyridine type, z. Pyridine, collidine or quinoline.

Verbindungen der Formel I, worin Ri und R₂ Wasserstoff bedeuten, können innere Salze bilden.Compounds of the formula I in which Ri and R _{2 are} hydrogen may form internal salts.

Diese Salze können unter anderem zur Isolierung oder Reinigung der Verbindungen der Formel I verwendet werden, worin Ri und/oder R₂ Wasserstoff bedeuten.These salts can be used, inter alia, for the isolation or purification of the compounds of the formula I in which Ri and / or R _{2 are} hydrogen.

Reaktionsfähige Carbonsäurederivate einer Verbindung der Formel I, worin R_t für eine Aminoschutzgruppe und R₂ für Wasserstoff stehen, sind in erster Linie reaktionsfähige aktivierte Ester oder reaktionsfähige Anhydride, ferner reaktionsfähige cyclische Amide.Reactive carboxylic acid derivatives of a compound of the formula I in which R _{t is} an amino-protecting group and R _{2 is} hydrogen are primarily reactive activated esters or reactive anhydrides, and also reactive cyclic amides.

Aktivierte Ester von Sauren sind insbesondere am Verknüpfungskohlenstoffatom des veresternden Restes ungesättigte Ester, z. B. vom Vinylester-Typ, wie eigentliche Vinylester (die man z. B. durch Umesterung eines entsprechenden Esters mit Vinylacetat erhalten kann; Methode des aktivierten Vinylesters), Carbamoylvinylester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem Isoxazoliumreagens erhalten kann; 1,2-Oxazolium- oder Woodward-Methode), oder 1-Niederalkoxyvinylester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem Niederalkoxyacetylen erhalten kann; Ethoxyacetylen-Methode), oder Ester vom Amidinotyp, wie Ν,Ν'-disubstituierte Amidinoester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem geeigneten Ν,Ν'-disubstituierten Carbodiimid, z.B. N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid, erhalten kann; Carbodiimid-Methode), oder Ν,Ν-disubstituierte Amidinoester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem Ν,Ν-disubstituierten Cyanamid erhalten kann; Cyanamid-Methode), geeignete Arylester, insbesondere durch elektronenanziehende Substituenten geeignet substituierte Phenylester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem geeignet substituierten Phenol, z. B. 4-Nitrophenol, 4-Methylsulfonyl-phenol, 2,4,5-Trichlorphenol, 2,3,4,5,6-Pentachlorphenol, 2,3,4,5,6-Pentafluorphenol oder 4-Phenyldiazophenol, in Gegenwart eines Kondensationsmittels, wie N,N'-Dicyclohexyl-carbodiimid, erhalten kann; Methode der aktivierten Arylester), Cyanmethylester (die man z. B. ddrch Behandeln der entsprechenden Säure mit Chloracetonitril in Gegenwart einer Base erhalten ^ann; Cyanmethylester-Methode), Thioester, insbesondere gegebenenfalls, z. B. durch Nitro, substituierte Phenyl-thioester (die man z.B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit gegebenenfalls, z.B. durch Nitro, substituierten Thiophenolen, u.a. mit Hilfe der Anhydrid- oder Carbodiimid-Methode, erhalten kann; Methode der aktivierten Thiolestor), Amino- oder Amidoester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einer N-Hydroxy-amino- bzw. N-Hydroxy-amido-Verbindung, z. B. N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid, N-Hydroxy-piperidin, N-Hydroxy-phthalimid, 1-Hydroxy-benztriazol oder 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazin, z. B. nach der Anhydrid- oder Carbodiimid-Methode, erhalten kann; Methode der aktivierten N-Hydroxyester) oder Silylester (die man z.B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem Silylierungsmittel, z. B. Hexamethyldisilazan, erhalten kann und die leicht mit Hydroxy-, nicht aber mit Aminogruppen reagieren). Anhydride von Säuren können symmetrische oder vorzugsweise gemischte Anhydride dieser Säuren sein, so z. B. Anhydride mit anorganischen Säuren, wie Säurehalogenide, insbesondere Säurechloride (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit Thionylchlorid, Phosphorpentachlorid oder Oxalylchlorid erhalten kann; Säurechloridmethode), A2ide (die man z. B. aus einem entsprechenden Säureester über das entsprechende Hydrazid und dessen Behandlung mit salpetriger Säure erhalten kann, Azidmethode), Anhydride mit Kohlensäurehalbderivaten, wie mit entsprechenden Estern, z. B. Kohlensäureniederalkylhalbestern (die man z.B. durch Behandeln der entsprechend· Säure m^;t Halogen-, wie Chlorameisensäure-niederalkylestern oder mit einem i-Niederalkoxycarbonyl^-niederalkoxy-i^-dihydro-chinolin, z. B. 1-Niederalkoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin, erhalten kann; Methode der gemischten O-Alkyl-kohlensäureanhydride), oder Anhydride mit dihalogenierter, insbesondere dichlorierter Phosphorsäure (die man z.B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit Phosphoroxyohlorid erhalten kann; Phosphoroxychloridmethode), oder Anhydride mit organischen Säuren, wie gemischte Anhydride mit organischen Carbonsäuren (die man z.B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem gegebenenfalls substituierten Niedcralkan- oder Phenylalkancarbonsäurehalogenid, z. B. Phenylessigsäure-, Pivalinsäure- oder Trifluoressigsäurechlorid erhalten kann; Methode der gemischten Carbonsäureanhydride) oder mitActivated esters of acids are especially at the linking carbon of the esterifying radical unsaturated esters, eg. Vinyl ester type, such as actual vinyl esters (which can be obtained, for example, by transesterification of a corresponding ester with vinyl acetate; activated vinyl ester method), carbamoylvinyl esters (obtained, for example, by treating the corresponding acid with an isoxazolium reagent 1,2-oxazolium or Woodward method), or 1-lower alkoxyvinyl ester (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with a lower alkoxyacetylene, ethoxyacetylene method), or amidino-type esters such as Ν, Ν 'disubstituted amidinoesters (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with a suitable Ν, Ν'-disubstituted carbodiimide, eg N.N'-dicyclohexylcarbodiimide, carbodiimide method), or Ν, Ν-disubstituted amidinoesters (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with a Ν, Ν-disubstituted cyanamide, cyanamide method), suitable aryl esters, in particular by electron-withdrawing substituents gee ignet substituted phenyl (which z. B. by treating the corresponding acid with a suitably substituted phenol, for. For example, 4-nitrophenol, 4-methylsulfonyl-phenol, 2,4,5-trichlorophenol, 2,3,4,5,6-pentachlorophenol, 2,3,4,5,6-pentafluorophenol or 4-phenyldiazophenol, in the presence a condensing agent such as N, N'-dicyclohexyl-carbodiimide; Activated aryl ester method), cyanomethyl esters (obtained, for example, by ddrch treating the corresponding acid with chloroacetonitrile in the presence of a base, cyanomethyl ester method), thioesters, in particular, if appropriate, e.g. Example, by nitro, substituted phenyl thioester (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with optionally, for example by nitro, substituted thiophenols, inter alia by means of the anhydride or carbodiimide method, method of activated thiolestor), amino or amido esters (which are obtained, for example, by treating the corresponding acid with an N-hydroxy-amino or N-hydroxy-amido compound, for example N-hydroxysuccinimide, N-hydroxy-5-norbornene-2, 3-dicarboximide, N-hydroxy-piperidine, N-hydroxy-phthalimide, 1-hydroxybenztriazole or 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine, for example according to the Anhydride or carbodiimide method, activated N-hydroxy ester method) or silyl ester (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with a silylating agent, for example hexamethyldisilazane, and which is readily hydrated with hydroxy but not with Reacting amino groups). Anhydrides of acids may be symmetrical or preferably mixed anhydrides of these acids, such. B. anhydrides with inorganic acids, such as acid halides, in particular acid chlorides (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with thionyl chloride, phosphorus pentachloride or oxalyl chloride, acid chloride method), A2ide (which, for example, from a corresponding acid ester on the corresponding hydrazide and its treatment with nitrous acid, azide method), anhydrides with carbonic acid half derivatives, as with corresponding esters, eg. B. Kohlensiederiederalkylhalbestern (which, for example, by treating the corresponding · acid m ^; t halogen, such as lower alkyl chloroformate or with a i-Niederalkoxycarbonyl ^ -niederalkoxy-i ^ -dihydro-quinoline, for example, 1-Niederalkoxycarbonyl-2 ethoxy-1,2-dihydroquinoline; method of mixed O-alkyl-carbonic anhydrides), or anhydrides with dihalogenated, in particular dichlorinated, phosphoric acid (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with phosphorus oxychloride, phosphorus oxychloride method), or anhydrides with organic Acids, such as mixed anhydrides with organic carboxylic acids (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with an optionally substituted Niedcralkan- or Phenylalkancarbonsäurehalogenid, eg., Phenylacetic acid, pivalic acid or Trifluoressigsäurechlorid, mixed carboxylic acid anhydrides method) or with

organischen Sulfonsäuren (die man z. B. durch Behandeln eines Salzes, wie eines Alkalimetallsalzes, der entsprechenden Säure, mit einem geeigneten organischen Sulfonsäurehalogenirf, wie Niederalkan- oder Aryl-, z.B. Methan- oder p-Toluolsulfonsäurechlorid, erhalten kann; Methode der gemischten Sulfonsäureanhydride), sowie symmetrische Anhydride (die man z.B. durch Kondensation der entsprechenden Säure in Gegenwart eines Carbodiimids oder von 1-Diethylaminopropin erhalten kann; Methode der symmetrischen Anhydride).organic sulfonic acids (which may be obtained, for example, by treating a salt such as an alkali metal salt, the corresponding acid, with a suitable organic sulfonic acid halide such as lower alkanoic or aryl, eg methane or p-toluenesulfonic acid chloride, mixed sulfonic acid anhydride method and symmetric anhydrides (which can be obtained, for example, by condensation of the corresponding acid in the presence of a carbodiimide or of 1-diethylaminopropyne; symmetrical anhydride method).

Geeignete cyclische Amide sind insbesondere Amide mit fünfgliedrigen Diazacyclen aromatischen Charakters, wie Amide mit Imidazolen.z.B. Imidazol (die man z.B. durch Behandeln der entsprechenden Saure mit Ν,Ν'-Carbonyldiimidazol erhalten kann; Imidazolid-Methode), oder Pyrazolen, z.B. 3,5-Dimothyl-pyrazGl (die man z.B. über das Sa'urehydraiid durch Behandeln mit Ace(ylaceton erhalten kann; Pyrazolid-Methode).Suitable cyclic amides are, in particular, amides having five-membered diazacycles of aromatic character, such as amides with imidazoles, for example. Imidazole (which may be obtained, for example, by treating the corresponding acid with Ν, Ν'-carbonyldiimidazole, imidazolide method), or pyrazoles, e.g. 3,5-Dimethyl-pyrazGl (which can be obtained, for example, via the sodium hydride by treatment with ace (ylacetone; pyrazolide method).

Die in diesem Text verwendeten Abkürzungen für die Aminosäuren sind die allgemein üblichen. So bedeuten Asp Asparaginsäure, Asn Asparagin, GIn Glutamin, Ser Serin, Leu Leucin, GIy, Glycin, l.ys Lysin, His Histidin, Pro Prolin Tyr Tyrosin, Trp Tryptophan, Arg Arginin, VaI Valin und Me isoloucin.The abbreviations used for the amino acids in this text are the common ones. Thus asp represent aspartic acid, asn asparagine, gin glutamine, ser serine, leucine, gly, glycine, lys lysine, his histidine, proline tyr tyrosine, trp tryptophan, arg arginine, val valine and me isoloucine.

in Übereinstimmung mit den international anerkannten Nomenklaturregeln bezeichnen in diesem Text üie Abkürzungen für die Aminosäuren, z. B. die obengenannten Abkürzungen, die freie Säure und, wenn nicht anders angegeben, die L-Konfiguration. Die a-Aminogruppe ist an der linken Seite der Abkürzung, die Carboxygruppe an der rechten Seite zu denken. Das Fehlen eines Η-Atoms in der a-Amino-Gruppe wird durch einen links an der Abkürzung für die Aminosäure stehenden Bindestrich, das Fehlen von zwei Η-Atomen durch zwei links stehende Bindestriche gekennzeichnet. Das Fehlen einer HO-Gruppe in der Carboxygruppe wird durch einen rechts stehenden Bindestrich ausgedrückt. Substituienten in der Seitenkette von Aminosäuren werden unmittelbar hinter das Aminosäuresymbol in Klammern gesetzt. Somit steht z.B. Z-Asn(Trt)-OH für die Verbindung der Formel la.in accordance with the internationally recognized nomenclature rules, this text refers to abbreviations for the amino acids, eg. As the abovementioned abbreviations, the free acid and, unless otherwise stated, the L-configuration. The a-amino group is on the left side of the abbreviation to think of the carboxy group on the right. The absence of a Η-atom in the a-amino group is indicated by a hyphen on the left of the abbreviation for the amino acid, the absence of two Η-atoms by two hyphens on the left. The absence of an HO group in the carboxy group is expressed by a hyphen on the right. Substituents in the side chain of amino acids are placed immediately after the amino acid symbol in parentheses. Thus, e.g. Z-Asn (Trt) -OH for the compound of formula Ia.

O OO O

Il (L) IIIl (L) II

C₆H₅-CH₂-O-C-NH-HC-C-OHC ₆ H ₅ -CH ₂ -OC-NH-HC-C-OH

I (la)I (la)

CH₂ O=C-NH-C(C₆Hs)₃ CH ₂ O = C-NH-C (C ₆ Hs) ₃

Die durch Verwendung der Verbindungen der Formel I bei der Peptidsynthese erzielten Vorteile sind im Beispielteil illustriert. So wird z. B. H-Gln-Gln-Gln-Gln-Gln-Ser-Leu-Gly-OH als Rohprodukt in einer Reinheit von 92% erhalten, wenn die Carbamoylgruppe der Gin-Reste bei der Herstellung durch Trityl geschützt wird. Ohne diesen Schutz bei der Merrifield-Synthese enthält das Rohprodukt nicht 92%, wie oben, sondern nur 30% des gewünschten Pioriukts.The advantages achieved by using the compounds of the formula I in the peptide synthesis are illustrated in the examples. So z. For example, H-Gln-Gln-Gln-Gln-Gln-Ser-Leu-Gly-OH is obtained as a crude product in a purity of 92% when the carbamoyl group of the gin residues is protected by trityl in the preparation. Without this protection in Merrifield synthesis, the crude product does not contain 92%, as above, but only 30% of the desired Pioriukts.

Die erhaltenen Rohprodukte aus den Synthesen von Fmoc-Lys-Gln-His-Asn-Pro-Lys-Tyr-Gln-Trp-Asn-OH mit Trityl-Schutz der Carbamuylgruppen von Asn und GIn (Rohprodukt A) einerseits und mit 2,4,6-Trimethoxy-benzyl-Schutz (Rohprodukt B) andererseits weisen etwa 95% des gewünschten Produkts in Rohprodukt A und nur etwa 8% des gewünschten Produkts in Rohprodukt B auf.The resulting crude products from the syntheses of Fmoc-Lys-Gln-His-Asn-Pro-Lys-Tyr-Gln-Trp-Asn-OH with trityl protection of the carbamuyl groups of Asn and GIn (crude product A) on the one hand and with 2,4 On the other hand, 6-trimethoxy-benzyl protection (crude B) has about 95% of the desired product in crude A and only about 8% of the desired product in crude B.

Die Verbindungen der Formel I können als Bausteine bei der Synthese von beliebigen Peptiden, die Glutamin- und/oder Asparaginreste enthalten, oder als Zwischenprodukte zur Herstellung dieser Bausteine verwendet werden. Zur Peptidsynthese nach Merrififild verwendet man diejenigen Verbindungen der Formel I, worin R₁ eine Aminoschutzgruppe, wie insbesondere 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl oder tert.-Hutyloxycaibonyl, R₂ Wasserstoff und R₃ Triphenylmethyl, 4-Monomethoxy-trityl oder 4,4'-Dimethoxy-trityl bedeuten, und reaktionsfähige Carbonsäurederivate davon.The compounds of formula I can be used as building blocks in the synthesis of any peptides containing glutamine and / or asparagine residues, or as intermediates for the preparation of these building blocks. For Merrififild peptide synthesis, use is made of those compounds of the formula I in which R _{1 is} an amino-protecting group, in particular 9-fluorenyl-methoxycarbonyl or tert-hutyloxycaibonyl, R _{2 is} hydrogen and R _{3 is} triphenylmethyl, 4-monomethoxy-trityl or 4,4'- Dimethoxy-trityl, and reactive carboxylic acid derivatives thereof.

Bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, worin R, Benzyloxycarbonyl, 9-Fluorenylmethoxycarbonyl, Allyloxycarbonyl oder tert.-Butyloxycarbonyl, R₂ Wasserstoff und R₃ Triphenylmethyl bedeuten.Preference is given to compounds of the formula I in which R, benzyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl, allyloxycarbonyl or tert-butyloxycarbonyl, R _{2 is} hydrogen and R _{3 is} triphenylmethyl.

Besonders bevorzugt sind die in den Beispielen beschriebenen Verbindungen der Formel I.Particular preference is given to the compounds of the formula I described in the examples.

Von den ohen näher beschriebenen reaktionsfähigen Carbonsäurederivaten sind besonders die 2 1,5-Trichlor-dhenylester, die Pentafluor-phenylester, die Ester mit 1-Hydroxybenztriazol, mit 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazin oder mit N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid, die Säurechloride und die symmetrischen Anhydride zu erwähnen, insbesondere solche reaktionsfähigen Carbonsäurederivate der vorstehend als bevorzugt herausgestellten Verbindungen der Formel I.Of the above-described reactive carboxylic acid derivatives, especially the 2 1,5-trichloro-phenyl esters, the pentafluorophenyl esters, the esters with 1-hydroxybenzotriazole, with 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2, 3-benzotriazine or with N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide, mention the acid chlorides and the symmetrical anhydrides, in particular those reactive carboxylic acid derivatives of the compounds of the formula I which have been found to be preferred above.

Überraschenderweise ist die erfindungsgemäße Amidschutzgruppe R₃ stabil bei der katalytischen Hydrierung unter Bedingungen, unter denen Benzyloxycarbonyl oder R₃ als Aminoschutzgruppen oder Benzyl als Carboxylschutzgruppe bereits abgespalten werden. Die Schutzgruppe R₃ kann z.B. mit Trifluoressigsäure-Wasser-1,2-Ethandithiol (90:5:5) im Temperaturbereich zwischen Raurr 'emperatur und +5O⁰C, z. B. bei +3O⁰C, abgespalten werden.Surprisingly, the amide protecting group R ₃ according to the invention is stable in the catalytic hydrogenation under conditions under which benzyloxycarbonyl or R _{3 are} already removed as amino-protecting groups or benzyl as carboxyl-protecting group. The protecting group R ₃ can be used, for example, with trifluoroacetic acid-water-1,2-ethanedithiol (90: 5: 5) in the temperature range between Raurr 'emperatur and + 5O ⁰ C, z. B. at + 3O ⁰ C, are cleaved.

Die Verbindungen der Formel I werden in an sich bekannter Weise hergestellt. Das erfindungsgemäße Herstellungsverfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß manThe compounds of the formula I are prepared in a manner known per se. The preparation process according to the invention is characterized in that

a) eine Verbindung der Formelll,a) a compound of Formelll,

IlIl

R₄-NH-HC-C-OR₂ R ₄ -NH-HC-C-OR ₂

(CH₂J_n O=C-NH₂ (CH ₂ J _n O = C-NH ₂

worin R₄ für Wasserstoff oder eine unter den Reaktionsbedingungen stabile Aminoschutzgruppe steht und η und R₂ die obengenannten Bedeutungen haben, mit einer Verbindung der Formel III,wherein R _{4 is} hydrogen or an amino protecting group which is stable under the reaction conditions and η and R _{2 have} the abovementioned meanings, with a compound of the formula III,

R₃-OH (III)R ₃ -OH (III)

worin Ra die obengenannte Bedeutung hat, umsetzt und aus dem erhaltenen Produkt diejenigen Schutzgruppen abspaltet, die nicht Bestandteil des gewünschten Endprodukts der Formel I sind, oderwherein Ra has the abovementioned meaning, and from the resulting product eliminates those protecting groups which are not part of the desired end product of formula I, or

b) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin Ri für eine Aminoschutzgruppe steht, in eine Verbindung der Formel IV,b) for the preparation of a compound of the formula I in which R 1 is an amino-protecting group, into a compound of the formula IV,

IlIl

H₂N-CH-C-OR₂ H ₂ N-CH-C-OR ₂

I (IV)I (IV)

(CH₂)_n (CH ₂ ) _n

O=C-NiI-R₃ O = C-NiI-R ₃

worin π, R₂ und R₃ die obengenannten Bedeutungen haben, eine Aminoschutzgruppe einführt, oderwherein π, R ₂ and R _{3 have} the abovementioned meanings, introduces an amino-protecting group, or

c) eine Verbindung der Formel V,c) a compound of the formula V,

IlIl

R₅-NH-HC-C-OR₆ R ₅ -NH-HC-C-OR ₆

I (V)I (V)

(CH₂)_n (CH ₂ ) _n

O=COHO = COH

worin η die obengenannte Bedeutung hat, Rs eine unter den Reaktionsbedingungen stabile Aminoschutzgruppe bedeutet und Re für eine unter den Reaktionsbedingungen stabile Carboxylschutzgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel Vl,wherein η has the abovementioned meaning, Rs is an amino-protecting group which is stable under the reaction conditions and Re is a carboxyl-protecting group which is stable under the reaction conditions, with a compound of the formula VI,

R₃-NH₂ (Vl)R ₃ -NH ₂ (VI)

worin R₃ die obengenannte Bedeutung hat, umsetzt und aus dem erhaltenen Produkt diejenigen Schutzgruppen abspaltet, die nicht Bestandteil des gewünschten Endprodukts der Formel I sind, und, wenn erwünscht, nach Durchführung eines der Verfahren a), b) oder c) eine erhaltene Verbindung der Formol I mit einer salzbildenden Gruppe in ihr Salz überführt oder ein erhaltenes Salz in die freie Verbindung überführt oder eine erhaltene Verbindung der Formel I, worin R) eine Aminoschutzgruppe und R₂ Wasserstoff bedeuten, in ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat überführt. Die obengenannten Verfahrensvarianten werden im folgenden näher erläutert: Verfahren a):wherein R _{3 has} the abovementioned meaning, and from the resulting product eliminates those protecting groups which are not part of the desired end product of the formula I, and, if desired, after carrying out one of the processes a), b) or c) a compound obtained the formol I is converted into its salt with a salt-forming group or a salt obtained in the free compound or a resulting compound of formula I, wherein R) is an amino protecting group and R _{2 is} hydrogen, converted into a reactive carboxylic acid derivative. The abovementioned process variants are explained in more detail below: Process a):

Verfahren a) wird in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, wie z.B. Essigsäure, in Gegenwart katalytischer Mengen einer wasserfreien starken Lewis-Säure, wie z. B. Bortrifluorid, Trifluormethansulfonsäure oder vorzugsweise Schwefelsäure, sowie in Gegenwart eines wasserentziehenden Mittels, wie z. B. Acetanhydrid, im Temperaturbereich zwischen etwa O⁰C und + 10O⁰C, vorzugsweise zwischen Raumtemperatur (etwa 2O⁰C) und +70^cC, z.B. bei +5O⁰C durchgeführt. Wenn R₄ Wasserstoff bedeutet, verwendet man zweckmäßigerweise mehr wasserfreie Schwefelsäure als im Fall, wo R₄ eine Aminoschutzgruppe bedeutet, z. 8.1,1 Äquivalente, und führt die Reaktion vorzugsweise bei etwa +6O⁰C durch, besonders, wenn man von Verbindungen der Formel Il ausgeht, worin R₄ für Wasserstoff und η für 1 stehjn.Process a) is carried out in a suitable organic solvent, such as acetic acid, in the presence of catalytic amounts of anhydrous strong Lewis acid, such as. As boron trifluoride, trifluoromethanesulfonic acid or preferably sulfuric acid, as well as in the presence of a dehydrating agent, such as. B. acetic anhydride, in the temperature range between about O ⁰ C and + 10O ⁰ C, preferably between room temperature (about 2O ⁰ C) and +70 ^c C, for example, carried out at + 5O ⁰ C. When R _{4 is} hydrogen, more anhydrous sulfuric acid is suitably used than in the case where R _{4 is} an amino-protecting group, e.g. 8.1,1 equivalents, and the reaction is preferably carried out at about + 6O ⁰ C, especially when starting from compounds of formula II wherein R ₄ is hydrogen and η for 1 stehjn.

Eine Aminoschutzgruppe R₄ ist eine unter sauren Bedingungen stabile Aminoschutzgruppe, wie z. B. Aüyloxycarbonyl, Trifluoracetyl oder vorzugsweise Benzyloxycarbcnyl oder 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl.An amino protecting group R ₄ is a stable under acidic conditions amino protecting group such. B. Ayloxycarbonyl, trifluoroacetyl or preferably Benzyloxycarbcnyl or 9-fluorenyl-methoxycarbonyl.

Wenn im gewünschten Endprodukt der Formel IR, und/oder R₂ für Wasserstoff stehen, müssen die Schutzgruppen R₄ und/oder R₂ abgespalten werden.If in the desired end product of the formula IR, and / or R _{2 are} hydrogen, the protecting groups R ₄ and / or R _{2 must be} removed.

Die meisten Carboxylschutzgruppen R₂ werden bereits unter den Reaktionsbedingungen abgespalten. Stabil sind lediglich Carboxy Ischutzgruppen R₂ wie Methyl, Ethyl oder Ally I, die ζ. Β. durch basenkatalysierte Hydrolyse abgespalten werden können. Trifluoracetyl als Aminoschutzgruppe R₄ wird durch milde alkalische Hydrolyse, z. B. mit wäßriger Ammoniaklösung, Natriumoder Bariumhydroxid oder mit basischen lorienaustauscherharzen abgespalten.Most of the carboxyl protecting groups R ₂ are already split off under the reaction conditions. Stable are merely carboxy Ischutzgruppen R ₂ as methyl, ethyl or Ally I, the ζ. Β. can be cleaved by base-catalyzed hydrolysis. Trifluoroacetyl as amino protecting group R ₄ is obtained by mild alkaline hydrolysis, e.g. B. cleaved with aqueous ammonia solution, sodium or barium hydroxide or with basic ion exchange resins.

Benzyloxycarbonyl als Aminoschutzgruppe R₄ wird durch Hydrierung in Gegenwart eines Palladium-auf-Kohle-Katalysators in wasserhaltiger, methanolischer, salzsaurer Lösung bei Raumtemperatur und Normaldruck abgespalten. 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl als Aminoschutzgruppe R₄ wird mittels Piperidin-Dimethylacetamid (1:4) bei Raumtemperatur abgespalten.Benzyloxycarbonyl as amino protecting group R ₄ is cleaved by hydrogenation in the presence of a palladium-on-carbon catalyst in aqueous, methanolic, hydrochloric acid solution at room temperature and atmospheric pressure. 9-fluorenyl-methoxycarbonyl as amino-protecting group R ₄ is cleaved off by means of piperidine-dimethylacetamide (1: 4) at room temperature.

Die Ausbeuten bei Verfahren a) betragen etwa 60-95% der TheorieThe yields in process a) are about 60-95% of theory

Verfahren b): Method b):

Verfahren b) wird in einem geeigneten, gegebenenfalls wasserhaltigen organischen Lösungsmittel oder Lösungsmittelgemisch im Temperaturbereich zwischen etwa O⁰C und +8O⁰C, vorzugsweise bei Raumtemperatur bis +5O⁰C, durchgeführt, wobei auch in Suspension gearbeitet werden kann. So kann man z. B. 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl als Aminoschutzgruppe R_t einführen, indem man eine Ausgangsverbindung der Formel IV in einem organischen Lösungsmittel, wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, in Gegenwart von Wasser und einer anorganischen Base, wie Natriumhydrogencarbonat oder Natriumhydroxid, sowie erforderlichenfalls von einem tertiären organischen Amin, wie Triethylamin, mit 9-Fluorenylmethyl-N-succinimidyl-carbonat umsetzt. Tert.-Butyloxycarbonyl als Aminoschutzgruppe R₁ kann man z. B. in 90%igem wäßrigen Tetrahydrofuran in Gegenwart von Triethylamin bei Raumtemperatur mit äquimolaren Mengen Di-tert.-butyl-dicarbonat einführen. Die Ausbeuten bei Verfahren b) betraget, etwa 90-99% der Theorie.Process b) is carried out in a suitable, optionally water-containing organic solvent or solvent mixture in the temperature range between about O ⁰ C and + 8O ⁰ C, preferably at room temperature to + 5O ⁰ C, which can also be carried out in suspension. So you can z. B. 9-fluorenyl-methoxycarbonyl as amino protecting group R _t introduce by reacting a starting compound of formula IV in an organic solvent such as tetrahydrofuran or dioxane, in the presence of water and an inorganic base such as sodium bicarbonate or sodium hydroxide, and, if necessary, a tertiary organic Amine, such as triethylamine, with 9-fluorenylmethyl-N-succinimidyl carbonate reacts. Tert.-Butyloxycarbonyl as amino protecting group R ₁ can be z. B. in 90% aqueous tetrahydrofuran in the presence of triethylamine at room temperature with equimolar amounts of di-tert-butyl dicarbonate introduce. The yields in process b) is about 90-99% of theory.

Im Unterschied zu Verfahren a) gestattet Verfahren b) die Einführung beliebiger Aminoschutzgruppen R₁.In contrast to process a), process b) allows the introduction of any desired amino protecting groups R ₁ .

Verfahrene):Muddled):

Verfahren c) wird in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, wie 1,2-Dichlor-ethan, im Temperaturbereich zwischen -2O⁰C und +7O⁰C, z. B. bei O⁰C, und vorzugsweise unter Schutzgas, 2.8. unter Argonatmosphäre, durchgeführt. Hierzu ist eine in situ Aktivierung der freien Carboxylgruppe im Ausgangsmaterial der Formel V, 1. B. mit Hilfe von 1 -Chlor-N,N,2-trimethyl-prop-1 enylamin, erforderlich. Die Ausbeuten bei Verfahren c) betragen etwa 40-70% der Theorie.Method c) is in a suitable organic solvent, such as 1,2-dichloro-ethane, in the temperature range between -2O ⁰ C and + 7O ⁰ C, z. B. at ^{0 0} C, and preferably under inert gas, 2.8. under an argon atmosphere. For this purpose, an in situ activation of the free carboxyl group in the starting material of formula V, 1 B. using 1-chloro-N, N, 2-trimethyl-prop-1 enylamine, required. The yields in process c) are about 40-70% of theory.

tine unter den Reaktionsbedingungen stabile Aminoschutzgruppe R₆ ist z. B. 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl. Eine unter den Reaktionsbedingungen stabile Carboxylschutzgruppe R₈ ist z. B. Benzyl.tine under the reaction conditions stable amino protecting group R ₆ is z. B. 9-fluorenyl-methoxycarbonyl. A stable under the reaction conditions carboxyl protecting group R ₈ is z. B. benzyl.

Die Abspaltung der Carboxyl- und/oder Aminoschutzgruppen, die nicht Bestandteil des gewünschten Endprodukts der Formel I sind, erfolgt in an sich bekannter Weise, z. B. mittels Solvolyso, insbesondere Hydrolyse, Alkoholyse oder Acidolyse, oder mittels Reduktion, insbesondere Hydrogenolyse oder chemische Reduktion, gegebenenfalls stufenweise oder gleichzeitig, wobei auch enzymatische Methoden verwendet werden können.The cleavage of the carboxyl and / or amino protecting groups, which are not part of the desired end product of formula I, is carried out in a conventional manner, for. Example by Solvolyso, in particular hydrolysis, alcoholysis or acidolysis, or by reduction, in particular hydrogenolysis or chemical reduction, optionally in stages or simultaneously, which also enzymatic methods can be used.

Insbesondere kann eine Benzylgruppe R6 durch Hydrierung in Gegenwart eines Palladium-auf-Kohle-Katalysators bei Raumtemperatur abgespalten werden, wobei 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl R₅ und die Schutzgruppe R3 erhalten bleiben. Die Abspaltung von 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl H₅ kann wie bei Verfahren a) beschrieben ausgeführt werden. Die Ausbeuten bei der Abspaltung der Schutzgruppen betragen etwa SO-99% der Theorie.In particular, a benzyl group R6 can be cleaved off by hydrogenation in the presence of a palladium on carbon catalyst at room temperature, whereby 9-fluorenyl-methoxycarbonyl R ₅ and the protecting group R3 are retained. The cleavage of 9-fluorenyl-methoxycarbonyl H ₅ can be carried out as described in process a). The yields in the deprotection are about SO-99% of theory.

Vorzugsweise stellt man die Verbindungen der Formel I nach den Verfahren b) und vor allem a) her.The compounds of the formula I are preferably prepared by the processes b) and above all a).

Zusatzoperationen: Salze von Verbindungen der Formel I mit salzbildenden Gruppen können in an sich bekannter Weise hergestellt werden. So kann man Salze von Verbindungen der Formel I mit sauren Gruppen durch Umsetzung mit einer geeigneten Base, z. B. durch Behandeln mit geeigneten Metallverbindungen, wie Alkalimetallsalzen von geeigneten organischen Carbonsäuren, z.B. dem Natriumsalz der a-Ethyl-capronsäure, oder mit geeigneten anorganischen Alkali- oder Erdalkalimetallsalze^ insbesondere solchen, die sich von einer schwachen und vorzugsweise flüchtigen Säure ableiten, z.B.Additional operations: Salts of compounds of the formula I with salt-forming groups can be prepared in a manner known per se. Thus, salts of compounds of formula I with acidic groups by reaction with a suitable base, for. By treating with suitable metal compounds, such as alkali metal salts of suitable organic carboxylic acids, e.g. the sodium salt of a-ethyl-caproic acid, or with suitable inorganic alkali or alkaline earth metal salts, especially those derived from a weak and preferably volatile acid, e.g.

Natriumhydrogencarbonat, oder mit Ammoniak oder einem geeigneten organischen Amin bilden, wobei man vorzugsweise stöchiometrische Mengen oder nur einen kleinen Überschuß des salzbildenden Mittels verwendet. Säureadditionssalze von Verbindungen der Formel I erhält man in üblicherweise, z.B. durch Behandeln mit einer Säure oder einem geeigneten Anionennustauschreagens. Innere Salze von Verbindungen der Formel I, welche z. B. eine freie Carboxylgruppe und eine freie Aminogruppe enthalten, können z. B. durch Neutralisieren von Salzen, wie Säureadditionssalzen, auf den isoelektrischen Punkt,Sodium bicarbonate, or with ammonia or a suitable organic amine, preferably using stoichiometric amounts or only a small excess of the salt-forming agent. Acid addition salts of compounds of the formula I are obtained in customary, e.g. by treatment with an acid or a suitable anion exchange reagent. Internal salts of compounds of the formula I, which z. B. contain a free carboxyl group and a free amino group, z. By neutralizing salts, such as acid addition salts, to the isoelectric point,

z. B. mit schwachen Basen, oder durch Behandeln mit flüssigen Ionenaustauschern gebildet werden. Die Salzbildung verläuft praktisch quantitativ.z. B. with weak bases, or by treatment with liquid ion exchangers are formed. Salt formation is virtually quantitative.

Salze können in üblicher Weise praktisch quantitativ in die freien Verbindungen überführt werden, Metall- und Ammoniumsalze, z.B. durch Behandeln mit geeigneten Säuren, und Säureadditionssalze, z.B. durch Bahandeln mit einem geeigneten basischen Mittel.Salts can be converted virtually quantitatively into the free compounds in a conventional manner, metal and ammonium salts, e.g. by treatment with suitable acids, and acid addition salts, e.g. by using a suitable basic agent.

Die Herstellung der reaktionsfähigen Carbonsäurederivate einer Verbindung der Formel I, worin Ri eine Aminoschutzgruppe und R₂ Wasserstoff bedeuten, erfolgt, wie bereits oben, bei der näheren Charakterisierung der reaktionsfähigen Carbonsäurederivate, beschrieben ist. Hierzu kann man z. B. von einer Verbindung der Formel I, worin Ri eine geeignete Aminoschutzgruppe und R₂ Wasserstoff bedeuten, ausgehen. Die Ausbeuten an reaktionsfähigem Carbonsäurederivat betragen etwa 85-98% der Theorie.The preparation of the reactive carboxylic acid derivatives of a compound of the formula I in which R 1 is an amino-protecting group and R _{2 is} hydrogen is carried out, as already described above, in the more detailed characterization of the reactive carboxylic acid derivatives. For this you can z. Example of a compound of formula I, wherein Ri is a suitable amino protecting group and R _{2 is} hydrogen, go out. The yields of reactive carboxylic acid derivative are about 85-98% of theory.

Die oben beschriebenen Verfahren, inklusive die Verfahren zur Abspaltung von Schutzgruppen und die zusätzlichen Verfahrensmaßnahmen, werden, wenn nicht anders angegeben, in an sich bekannter Weise, z. B. in An- oder Abwesenheit von vorzugsweise inerten Lösungs- und Verdünnungsmitteln, wenn notwendig, in Anwesenheit von Kondensationsmitteln oder Katalysatoren, bei erniedrigter oder erhöhter Temperatur, z. B. in einom Temperaturbereich von etwa -2O⁰C bis etwa 15O⁰C, insbesondere von etwa O⁰C bis etwa +70⁰C, vorzugsweise von etwa +10⁰C bis etwa +5O⁰C, hauptsächlich bei Raumtemperatur, in einem geeigneten Gefäß und erforderlichenfalls in einer Inertgas-, z. B. Stickstoffatmosphäre, durchgeführt.The methods described above, including the methods for deprotection and the additional process measures are, unless otherwise stated, in a conventional manner, for. B. in the presence or absence of preferably inert solvents and diluents, if necessary, in the presence of condensing agents or catalysts, at reduced or elevated temperature, for. B. einom temperature range of about -2O ⁰ C to about 15O ⁰ C, especially about ⁰ ° C to about +70 ⁰ C, preferably from about +10 ⁰ C to about + 5O ⁰ C, principally at room temperature, in a suitable vessel and if necessary in an inert gas, for. B. nitrogen atmosphere performed.

Dabei sind unter Berücksichtigung aller im Molekül befindlichen Substituen'en, wenn erforderlich, z. B. bei Anwesenheit leicht hydrolysierbar,er Reste, besonders schonende Reaktionsbedingungen, wie kurzo Reaktionszeiten, Verwendung von milden sauren oder basischen Mitteln in niedriger Konzentration, stöchiometrische Mengenverhältnisse, Wahl geeigneter Katalysatoren, Lösungsmittel, Temperatur- und/oder Druckbedingungen, anzuwendun.Taking into account all Substituen'en in the molecule, if necessary, z. B. in the presence of readily hydrolyzable, he residues, particularly mild reaction conditions, such as kurzo reaction times, use of mild acidic or basic agents in low concentration, stoichiometric proportions, choice of suitable catalysts, solvents, temperature and / or pressure conditions, to apply.

Die Erfindung betrifft auch diejenigen Ausführungsformen des Verfahrens, bei denen man von einer auf irgendeiner Stufe des Verfahrens als Zwischenprodukt erhältlichen Verbindung ausgeht und die fehlenden Verfahrensschritte durchführt oder das Verfahren auf irgendeiner Stufe abbricht oder einen Ausgangsstoff unter den Reaktionsbedingungen bildet oder in Form eines reaktionsfähigen Derivats oder Salzes verwendet. Dabei geht man vorzugsweise von solchen Ausgangsstoffen aus, die verfahrensgemäß zu den oben als besonders wertvoll beschriebenen Verbindungen führen.The invention also relates to those embodiments of the process starting from a compound obtainable as intermediate at any stage of the process and carrying out the missing process steps or breaking off the process at any stage or forming a starting material under the reaction conditions or in the form of a reactive derivative or Salt used. In this case, it is preferable to start from such starting materials, which according to the method lead to the compounds described above as being particularly valuable.

Die Verbindungen der Formel I, insbesondere die Verbindungen der Formel I, worin R| eine Aminoschutzgruppe, wie Benzyloxycarbonyl, Allyloxycarbcnyl, tert.-Butyloxycarbonyl oder insbesondere 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl, R₂ Wasserstoff und R₃ 4-Monomethoxytrityl, 4,4'-Dimethoxytrityl oder insbesondere Triphenylmethyl (Trityl) bedeuten, sowie die reaktionsfähigen Carbonsäurederivate dieser Verbindungen können z. B. zur Synthese von Peptiden, insbesondere an fester Phase, wie z.B. zur Merrifield-Synthese, sowie zor Synthese von Substanzen, die mindestens einen bivalenten Rest der Formel VII,The compounds of the formula I, in particular the compounds of the formula I in which R | an amino protecting group such as benzyloxycarbonyl, allyloxycarbycyl, tert-butyloxycarbonyl or especially 9-fluorenyl-methoxycarbonyl, R _{2 is} hydrogen and R _{3 is} 4-monomethoxytrityl, 4,4'-dimethoxytrityl or especially triphenylmethyl (trityl), and the reactive carboxylic acid derivatives of these compounds can z. Example, for the synthesis of peptides, in particular on a solid phase, such as for Merrifield synthesis, and zor synthesis of substances containing at least one bivalent radical of the formula VII,

-NH-HC-C-O--NH-HC-C-O-

I (VII)I (VII)

(CH₂)_n O=C-NII-R₃ (CH ₂ ) _n O = C-NII-R ₃

worin η für 1 oder 2 steht und R₃ Triphenylmethyl, 4-Monomethoxy-trityl oder 4,4'-Dimethoxy-trityl bedeutet, enthalten,in which η is 1 or 2 and R _{3 is} triphenylmethyl, 4-monomethoxy-trityl or 4,4'-dimethoxy-trityl,

verwendet werden. Bei diesen Substanzen handelt es sich in erster Linie um Peptidderivate, wie sie zum Beispiel bei der Peptidsynthese als Zwischenprodukte anfallen. Dementsprechend können diese Peptidderivate auch an ein Syntheseharz gebunden sein.be used. These substances are primarily peptide derivatives, such as those obtained in the peptide synthesis as intermediates. Accordingly, these peptide derivatives may also be linked to a synthetic resin.

Die nachfolgenden Beispiele il'ustrieren die Erfindung, ohne sie einzuschränken. Die Temperaturen sind in Grad Celsius angegeben.The following examples illustrate the invention without limiting it. The temperatures are given in degrees Celsius.

AbkürzungenAbbreviations tert.-Butyltert-butyl Bu.Bu. tert.-Butoxycarbony!tert-butoxycarbonyl! BocBoc Benzylbenzyl BzIBzl beziehungsweiserespectively bzw. =or = 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazinyl3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazinyl DhbtDhbt Fast atom bombardment MassespektrumFast atom bombardment mass spectrum FAB-MS =FAB-MS = 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl9-fluorenylmethoxycarbonyl Fmoc =Fmoc = HochdruckflüssigkeitschromatographieHigh Pressure Liquid Chromatography HPLC =HPLC = konzentriertconcentrated konz. =conc. = Pentafluor-phenylPentafluoro-phenyl Pfppfp c^.S^.e-Pentamethyl-chroman-e-sulfonylc ^ .S ^ .e-pentamethyl-chroman-e-sulfonyl Pm cPm c Schmelzpunktmelting point ?mp.? Mp. 2,4,5-Trichlor-phenyl2,4,5-trichloro-phenyl Tcptcp Tetrahydrofurantetrahydrofuran THFTHF 2,4,6-Trimethoxy-benzyl2,4,6-trimethoxy-benzyl Tmob =Tmob = Trityl (Triphenyl-methyl)Trityl (triphenylmethyl) TrtTrt Benzyloxycarbonylbenzyloxycarbonyl ZZ

Beispiel 1: Z-Asn(Trt)-OHExample 1: Z-Asn (Trt) -OH

Ein Gemisch von 13,3g Z-Asn-OH (5OmMoI), 26g Triphenylmethanol (10OmMoI), 150ml Essigsäure und 9,5ml (10OmMoI) Acetanhydrid wird bei 50°C 15 Minuten gerührt. Nach Zugabe von 0,25 konz. Schwefelsäure entsteht nach 5 Minuten eine klare, gelbe Lösung. Nach 1V2 Stunden wird abgekühlt und in 1,5 Liter Eiswasser ausgegossen. Der Niederschlag wird abfiltriert, gut mit Wasser gewaschen und in etwa 500ml Essigsäureethylester gelöst. Die organische Phase wird mit einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck auf 250g eingeengt. Das Z-Asn(Trt)-OH wird durch Zugabe von 125 ml Hexan zum Kristallisieren gebracht, Smp. 195-196°C.A mixture of 13.3 g of Z-Asn-OH (5OmMoI), 26 g of triphenylmethanol (10OmMoI), 150 ml of acetic acid and 9.5 ml (10OmMoI) acetic anhydride is stirred at 50 ° C for 15 minutes. After addition of 0.25 conc. Sulfuric acid is formed after 5 minutes, a clear, yellow solution. After 1V2 hours is cooled and poured into 1.5 liters of ice water. The precipitate is filtered off, washed well with water and dissolved in about 500 ml of ethyl acetate. The organic phase is washed with a saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to 250 g. The Z-Asn (Trt) -OH is crystallized by the addition of 125 ml of hexane, mp 195-196 ° C.

Beispiel 2: H-Asn(Trt*-OHExample 2: H-Asn (Trt * -OH

Eid«» Suspension von 10,2 gZ-Asn(Trt)-OH (2OmMoI) in 120 ml Methanol und 20 ml einnormaler wäßriger Chlorwasserstoffsäure wird in Gegenwart von 0,5g eines 10%igen Palladium-auf-Kohle-Katalysators bei Raumtemperatur und Normaldruck hydriert. Nach beendeter Wasserstoffaufnahme wird der Katalysator abfiltriert, mit Methanol ausgewaschen und das Filtrat unter vermindertem Druck auf ein Gewicht von 100g geeignet. Nach Zusatz von 2,8 ml Triethylamin (2OmMoI) wird weiter auf ein Gewicht von 50g eingeengt, der kristalline Niederschlag wird abfiltriert und mit einem 1:1-Gemisch von Mothanol und Wasser, dann mit Wasser chloridfrei gewaschen. Das H-Asn(Trt)-OH enthalt 0,5MoI Wasser und zersetzt sich langsam ab 220⁰C.Eid suspension of 10.2 gZ-Asn (Trt) -OH (2OmMoI) in 120 ml of methanol and 20 ml of a normal aqueous hydrochloric acid is in the presence of 0.5 g of a 10% palladium on carbon catalyst at room temperature and Normal pressure hydrogenated. After completion of the hydrogen uptake, the catalyst is filtered off, washed with methanol and the filtrate under reduced pressure to a weight of 100 g suitable. After addition of 2.8 ml of triethylamine (2OmMoI) is further concentrated to a weight of 50g, the crystalline precipitate is filtered off and washed free of chloride with a 1: 1 mixture of Mothanol and water, then with water. The H-Asn (Trt) -OH containing 0,5MoI water and gradually decomposed from 220 ⁰ C.

Beispiel 3: Fmoc-Asn(Trt)-OHExample 3: Fmoc-Asn (Trt) -OH

Eine Lösung von 3,8g H-Asn(Trt)-OH 0,5H₂O (1OmMoI) in 20ml Tetrahydrofuran, 10ml Wasser und 1,4ml Triethylamin (1OmMoI) wird unter kräftigem Rühren mit 3/g g-Fluorenylmethyl-N-succinimidyl-carbonat (1OmMoI) versetzt und gleichzeitig 1,4ml Triethylamin so zugetropft, daß der pH-Wert 8,3-8,7 beträgt. Nach 20 Minuten wird im Eisbad gekühlt, mit Essigsäureethylester und 25ml einer einmolaren wäßrigen Kaliumhydrogensulfatlösung versetzt. Die organische Phase wird mit Wasser sulfatfrei gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck auf etwa 50g eingeengt. Durch langsam^-.-! Zugeben von Diisopropylether kann das Fmoc-Asn(Trt)-OH kristallisiert werden, Smp. 210-211⁰C (unter Zersetzung;.A solution of 3.8 g of H-Asn (Trt) -OH 0.5H ₂ O (1OmMoI) in 20 ml of tetrahydrofuran, 10 ml of water and 1.4 ml of triethylamine (1OmMoI) is added with vigorous stirring with 3 / g g-fluorenylmethyl-N- succinimidyl carbonate (1OmMoI) and at the same time added dropwise 1.4 ml of triethylamine so that the pH is 8.3-8.7. After 20 minutes, the mixture is cooled in an ice bath, treated with ethyl acetate and 25 ml of a one-molar aqueous potassium bisulfate solution. The organic phase is washed free of sulfate with water, dried over sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to about 50 g. By slow ^ -.-! Adding diisopropyl ether can be crystallized, the Fmoc-Asn (Trt) -OH, mp. 210-211 ⁰ C (with decomposition ;.

Beispiel 4: Fmoc-Asn(Trt)-OHExample 4: Fmoc-Asn (Trt) -OH

Eine Suspension von 3,54g Fmoc-Asn-OH (1OmMoI) und 5,2g Triphenylmethanol (2OmMoI) in 30ml Essigsäure und 1,9ml Acetanhydrid (2OmMoI) wird 15 Minuten bei 5O⁰C gerührt, dann mit einer Lösung von 0,05ml konz. Schwefelsäure in 5ml Essigsäure versetzt. Nach etwa einer Stunde bei 5O⁰C bildet sich eine Lösung, und nach 1V2 Stunden beginnt sich ein Niederschlag zu bilden. Nach 3 Stunden wird die Suspension unter Eiskühlung langsam mit 200ml eiskaltem Wasser versetzt, kurz gerührt, der Niederschlag abfiltriert und gut mit Wasser gewaschen. Das feuchte Material wird in Essigsäureethylester gelöst, die organische Phase mit einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck einijRongt. Bevor das Produkt auszukristallisieren beginnt wird mit 1,2-Dichlorethan verdünnt, wieder eingeengt und durch 50g Kieselgel filtriert. Das überschüssige Triphenylmethanol wird mit 200ml 1,2-Dichlorethan eluiert, dann wird mit je 500ml eines 98:2- und eines 96:4-Gemisches von 1,2-Dichlorethan und Methanol Frnoc-Asn(Trt)-OH eluiert. Nach Eindampfen zur Trockne wird der Rückstand in 10ml Tetrahydrofuran gelöst, mit 30ml Essigsäureethylester versetzt, auf 20g eingeengt und durch Zusatz von Diisopropylether kristallisiert; das so erhältliche Fmoc-Asn(Trt)-OH schmilzt bei 210-211 °C (unter Zersetzung).A suspension of 3.54 g Fmoc-Asn-OH (1OmMoI) and 5.2 g triphenyl methanol (2OmMoI) in 30ml acetic acid and 1,9ml acetic anhydride (2OmMoI) is stirred for 15 minutes at 5O ⁰ C, then a solution of 0.05 ml conc. Sulfuric acid in 5 ml of acetic acid. After about one hour at 5O ⁰ C, a solution forms, and after 1 2 hours, a precipitate begins to form. After 3 hours, the suspension is added slowly under ice-cooling with 200 ml of ice-cold water, stirred briefly, the precipitate was filtered off and washed well with water. The wet material is dissolved in ethyl acetate, the organic phase washed with a saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate and concentrated under reduced pressure. Before the product begins to crystallize, it is diluted with 1,2-dichloroethane, reconcentrated and filtered through 50 g of silica gel. The excess triphenylmethanol is eluted with 200 ml of 1,2-dichloroethane, then eluted with 500 ml of a 98: 2 and a 96: 4 mixture of 1,2-dichloroethane and methanol Frnoc-Asn (Trt) -OH. After evaporation to dryness, the residue is dissolved in 10 ml of tetrahydrofuran, mixed with 30 ml of ethyl acetate, concentrated to 20 g and crystallized by the addition of diisopropyl ether; the Fmoc-Asn (Trt) -OH thus obtained melts at 210-211 ° C (with decomposition).

Beispiel 5: Fmoc-Asn(Trt)-OHExample 5: Fmoc-Asn (Trt) -OH

Eine Lösung von 0,69 g Fmoc-Asn(Trt)-OBzl in 10ml 9:1-Gemisches von Methanol und Wasser wird in Gegenwart von 0,07 g eines 10%igen Palladium-auf-Kohle-Katalysators bei Raumtemperatur und Normaldruck hydriert, bis im Dünnschichtchromatogramm (Lösungsmittel: 1:1-Gemisch von Toluol und Aceton) kein Ausgangsmaterial mehr sichtbar ist.A solution of 0.69 g of Fmoc-Asn (Trt) -OBzl in 10 ml of a 9: 1 mixture of methanol and water is hydrogenated in the presence of 0.07 g of a 10% palladium on carbon catalyst at room temperature and normal pressure until no starting material is visible in the thin-layer chromatogram (solvent: 1: 1 mixture of toluene and acetone).

Nach Abfiltrieren des Katalysators wird das Filtrat eingedampft, der Rückstand in einem 96:4-Gemisch von 1,2-Dichlorethan und Methanol gelöst und durch wenig Silikagel filtriert. Nach Eindampfen des Filtrats erhält man das Fmoc-Asn(Trt)-OH, Smp. 210-211⁰C (unter Zersetzung).After filtering off the catalyst, the filtrate is evaporated, the residue dissolved in a 96: 4 mixture of 1,2-dichloroethane and methanol and filtered through a little silica gel. After evaporation of the filtrate gives the Fmoc-Asn (Trt) -OH, mp 210-211 ⁰ C (with decomposition).

Das Ausgangsmaterial kann wie folgt erhalten werden: Stufe 5.1:1,12g H-Asp-OBzl (5mMol)und 1,05g Natriumhydrogoncarbonat werden in 25 ml eines 9:1 -Gemisches aus Dioxan und Wasser suspendiert, 1,85g ü-Fluorenylmethyl-N-succinimidyl-carbonatfostzugegeben und das Gemisch 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach Einengender Lösung wird mit Essigsäureethylester verdünnt, die organische Phase mit 0,5molarer wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung und Wasser gewaschen, dann über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Nach Zusatz von Petrolether kristallisiert Fmoc-Asp-OBzI aus.The starting material can be obtained as follows: Step 5.1: 1.12 g of H-Asp-OBzl (5 mmol) and 1.05 g of sodium hydrogone carbonate are suspended in 25 ml of a 9: 1 mixture of dioxane and water, 1.85 g of γ-fluorenylmethyl N-succinimidyl carbonate was added and the mixture stirred at room temperature for 15 hours. After concentration of the solution is diluted with ethyl acetate, the organic phase washed with 0.5molarer aqueous potassium hydrogen sulfate and water, then dried over sodium sulfate and concentrated. After addition of petroleum ether, Fmoc-Asp-OBzI crystallizes out.

Stufe 5.2: Eine Lösung von 2,09g Fmoc-Asp-OBzl in 20ml 1,2-Dichlorethan wird unter Rühren bei O⁰C und unter einer Argonatmosphäre mit 0,8 ml 1-Chlor-N,N,2-trimethylprop-1-enylamin (A. Devos et al., J. Chem. Soc, Commun., Bd. 1979, S. 1180) versetzt. Nach 10 Minuten wird eine Lösung von 1,2gTritylamin in 4ml 1,2-Dichlorethan zugegeben, dann 2 Stunden gerührt, mit Essigsäureethylester verdünnt und mit Wasser gowaschen. Die organische Phase wird getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird in Chloroform aufgenommen und an 250g Silikagel chromatographiert. Die den Fmoc-Asn(Trt)-OBzl enthaltenden Fraktionen worden vereinigt und eingedampft; das Produkt wird als amorpher Schaum erhalten.Step 5.2: A solution of 2.09 g Fmoc-Asp-OBzl in 20 ml of 1,2-dichloroethane is added under stirring at ⁰ ° C and under argon atmosphere with 0.8 ml of 1-chloro-N, N, 2-trimethylprop-1 Devol et al., J. Chem. Soc., Commun., 1979, p. 1180). After 10 minutes, a solution of 1,2g-tritylamine in 4 ml of 1,2-dichloroethane is added, then stirred for 2 hours, diluted with ethyl acetate and washed with water. The organic phase is dried and evaporated. The residue is taken up in chloroform and chromatographed on 250 g of silica gel. The fractions containing the Fmoc-Asn (Trt) OBzl were combined and evaporated; the product is obtained as an amorphous foam.

Beispiel 6: Z-GIn(TrI)-OHExample 6: Z-GIn (TrI) -OH

ein Gemisch von 2,8g Z-GIn-OH (1OmMoI), 5,2g Triphenylmethanol (2OmMoI) in 30ml Essigsäure wird mit 1,1 ml Essigsäureanhydrid (12mMol) versetzt und 15 Minuten bei 5O⁰C gerührt. Dann werden 0,05ml konz. Schwefelsäure (etwa ImMoI) zugegeben, wobei in wenigen Minuten eine klare, gelbe Lösung entsteht. Nach 2 Stunden wird die Lösung unter Rühren und Eiskühlung in 500ml Wasser eingetropft, der Niederschlag abfiltriert und gut mit Wasser gewaschen. Das feuchte Material wird in Essigsäureethylester gelöst, die wäßrige Phase abgetrennt, die organische Phase einmal mit einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck auf 20g eingeengt. Durch portionsweise Zugabe von Hexan wird das Z-GIn(TYt)-OH kristallisiert, Smp. 161-162°C.a mixture of 2.8 g of Z-GIn-OH (1OmMoI), 5.2 g of triphenylmethanol (2OmMoI) in 30 ml of acetic acid is treated with 1.1 ml of acetic anhydride (12 mmol) and stirred for 15 minutes at 5O ⁰ C. Then 0,05ml conc. Sulfuric acid (about ImMoI) was added, resulting in a clear, yellow solution in a few minutes. After 2 hours, the solution is added dropwise with stirring and ice cooling in 500 ml of water, the precipitate was filtered off and washed well with water. The moist material is dissolved in ethyl acetate, the aqueous phase separated, the organic phase washed once with a saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to 20g. The Z-GIn (TYt) -OH is crystallized by adding hexane in portions, mp 161-162 ° C.

Beispiel 7: H-GIn(TrI)-OHExample 7: H-GIn (TrI) -OH

Eine Suspension von 10,4g Z-GIn(TrI)-OH (2OmMoI) in 180ml eines 9:1-Gemisches von Methanol und Wasser und 20ml einnormaler wäßriger Chlorwasserstoffsäure wird bei Raumtemperatur und Normaldruck in Gegenwart von 0,5g eines 10%igen Palladium-auf-Kohle-Katalysators hydriert; nach beendeter WasseiStoffaufnahme ist das Ausgangsmaterial gelöst. Der Katalysator wird abfiltriert und mit Methanol gewaschen; das Filtrat wird auf 200g eingeengt und bei 60°C mit 2,8 ml Triethylamin (2OmMoI) versetzt, wobei das Produkt sofort zu kristallisieren beginnt. Man engt auf 100g ein, läßt einige Zeit bei etwa 4⁰C stehen, filtriert die Kristalle ab und wäscht mit einem Gemisch aus Methanol und Wasser chlorfrei. Das so erhältliche H-GIn(Tr^)-OH enthält 0,5 Mol Wasser und schmilzt bei 233°C (unter Zersetzung).A suspension of 10.4 g of Z-GIn (TrI) -OH (2OmMoI) in 180 ml of a 9: 1 mixture of methanol and water and 20 ml of normal aqueous hydrochloric acid at room temperature and atmospheric pressure in the presence of 0.5 g of a 10% palladium hydrogenated on carbon catalyst; after completion of WasseiStoffaufnahme the starting material is dissolved. The catalyst is filtered off and washed with methanol; the filtrate is concentrated to 200 g and at 60 ° C with 2.8 ml of triethylamine (2OmMoI), the product begins to crystallize immediately. It is concentrated to 100 g, allowed to stand for some time at about 4 ⁰ C, the crystals are filtered off and washed with a mixture of methanol and water without chlorine. The thus available H-GIn (Tr ^) - OH contains 0.5 mol of water and melts at 233 ° C (with decomposition).

Beispiel 8: Fmoc-Gln(Trt)-OHExample 8: Fmoc-Gln (Trt) -OH

Eine Lösung von 4g des Halbhydrates von H-GIn(TrI)-OH (1OmMoI) in 20ml Tetrahydrofuran und 10ml einnormaler wäßriger Natriumhydroxidlösung wird unter gutem Rühren mit 3,4g g-Fluorenylmethyl-N-succinimidyl-carbonat (1OmMoI) versetzt und gleichzeitig 1,4ml Triethylamin so zugetropft, daß der pH-Wert etwa 8,5 beträgt. Nach 20 Minuten wird im Eisbad gekühlt, mit Essigsäureethylester überschichtet und mit 25ml einmolarer wäßriger Kaliumhydrogensulfatlösung bis zu einem pH-Wert von 2-2,ΰ angesäuert. Die organis he Phase wird mit Wasser neutral gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck auf 30g eingeengt. Das Produkt wird durch portionenweise Zugabe von 35ml Diisopropylether zum Kristallisieren gebracht. Nach längerem Stehen in der Kälte wird das kristalline Material abfiltriert und einmal in einem 1:4-Gemisch von Essigsäureethylester und Diisopropylether und dreimal mit Diisopropylether gewaschen. Das Fmoc-Gln(Trt)-OH enthält auch nach längerem Trocknen im Hochvakuum bei 6O⁰C noch 0,5 Mol Diisopropylether, Smp. ab 125⁰C (langsames Schmelzen unter Abgabe von Diisopropylether).A solution of 4 g of the hemihydrate of H-GIn (TrI) -OH (1OmMoI) in 20 ml of tetrahydrofuran and 10 ml of normal aqueous sodium hydroxide solution is added with good stirring with 3.4 g of g-fluorenylmethyl-N-succinimidyl carbonate (1OmMoI) and simultaneously 1 , 4ml triethylamine is added dropwise so that the pH is about 8.5. After 20 minutes, cooled in an ice bath, covered with ethyl acetate and acidified with 25 ml of einmolarer aqueous potassium bisulfate solution to a pH of 2-2, ΰ. The organis he phase is washed neutral with water, dried over sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to 30g. The product is made to crystallize by adding 35 ml of diisopropyl ether portionwise. After prolonged standing in the cold, the crystalline material is filtered off and washed once in a 1: 4 mixture of ethyl acetate and diisopropyl ether and three times with diisopropyl ether. The Fmoc-Gln (Trt) -OH contains even after prolonged drying in a high vacuum at 6O ⁰ C or 0.5 mol of diisopropyl ether, mp. From 125 ⁰ C (slow melting with delivery of diisopropyl ether).

Beisiel 9: Fmoc-Gln(Trt)-OHExample 9: Fmoc-Gln (Trt) -OH

Ein Gemisch von 7,4 g Fmoc-Gln-OH (2OmMoI) und 10,4g Triphenylmethanol (4OmMoI) in 300ml Essigsäure wird 10 Minuten bei 100°C gerührt. Nach Zugabe von 0,1 ml konz. Schwefelsäure wird noch weitere 15 Minuten bei 100°C gerührt, wobei eine klare, gelbe Lösung entsteht. Diese wird unter vermindertem Druck bei 60°C eingedampft, und der Rückstand noch 10 Minuten unter vermindertem Druck getrocknet. Der feste Rückstand wird in 60ml Essigsäure bei 6O⁰C gelöst, während 20 Minuten bei 60°C belassen, dann mit 2ml Essigsäureanhydrid (2OmMoI) versetzt und nach 1 Stunde bei 60°C unter vermindertem Druck eingedampft. Der ölige Rückstand wird während 10 Minuten bei 60°C getrocknet, dann in 100ml Essigsäure gelöst und in 500ml eiskaltes Wasser eingetropft. Der Niederschlag wird abfiltriert, gut mit Wasser gewaschen und in Essigsäureethylester gelöst; die wäßrige Phase wird abgetrennt, und die organische Phase mit einer gesäugten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen über Natriumsulfat wird die organische Lösung zur Trockne eingedampft, der Rückstand wird in 50 ml 1,2-Dichlorethan gelöst und auf 100g Silikagrl gegeben; eluiert wird mit 1,2-Dichlorethan und 1,2-Dichlorethan enthaltend 2%, dann 4% Methanol. Die das Fmoc-Gln(Trt)-OH enthaltenden Fraktionen werden unter vermindertem Druck eingedampft, und das Produkt wird aus einem Gemisch von Essigsäureethylester und Diisopropylether kristallisiert, Smp. ab 125⁰C.A mixture of 7.4 g of Fmoc-Gln-OH (2OmMoI) and 10.4 g of triphenylmethanol (4OmMoI) in 300 ml of acetic acid is stirred at 100 ° C for 10 minutes. After addition of 0.1 ml of conc. Sulfuric acid is stirred for a further 15 minutes at 100 ° C, with a clear, yellow solution. This is evaporated under reduced pressure at 60 ° C, and the residue is dried for 10 minutes under reduced pressure. The solid residue is dissolved in 60 ml of acetic acid at 6O ⁰ C for 20 minutes, kept at 60 ° C, then treated with 2 ml acetic anhydride (2OmMoI) was added and evaporated after 1 hour at 60 ° C under reduced pressure. The oily residue is dried for 10 minutes at 60 ° C, then dissolved in 100 ml of acetic acid and added dropwise to 500 ml of ice-cold water. The precipitate is filtered off, washed well with water and dissolved in ethyl acetate; the aqueous phase is separated and the organic phase is washed with a suctioned aqueous sodium chloride solution. After drying over sodium sulfate, the organic solution is evaporated to dryness, the residue is dissolved in 50 ml of 1,2-dichloroethane and added to 100 g Silikagrl; eluted with 1,2-dichloroethane and 1,2-dichloroethane containing 2%, then 4% methanol. The fractions containing the Fmoc-Gln (Trt) -OH are evaporated under reduced pressure, and the product is crystallized from a mixture of ethyl acetate and diisopropyl ether, mp. From 125 ⁰ C.

Beispiel 10: H-Gln-Gln-Gln-Gln-Gln-Ser-Leu-Gly-OHExample 10: H-Gln-Gln-Gln-Gln-Gln-Ser-Leu-Gly-OH

Das Peptid wird zweimal mittels der Merrifield-Festphasensynthese hergestellt, wobei bei der einen Synthese Fmoc-Gln-OH und bei der anderen Fmoc-Gln(Trt)-OH verwendet wird.The peptide is prepared twice by Merrifield solid phase synthesis using Fmoc-Gln-OH in one synthesis and Fmoc-Gln (Trt) -OH in the other.

Ausgehend von 1 g sogenannten Fmoc-Gly-p-Benzyloxybenzylester-polystyrolharz (1 % vernetzt) der Firma Novabiochem (Läufelfingen, Schweiz), worin die Carboxylgruppe des Glycins, dessen Aminogruppe durch 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl (Fmoc) geschützt ist, mit 4-Methoxy-benzylalkohol verestert ist, wobei das Kohlenstoffatom der Methoxygruppe mit einem aromatischen Ring des zu 1 % mit Divinylbenzol vernetzten Polystyrolharzes, das gleichzeitig als Trägermaterial dient, verbundenStarting from 1 g of so-called Fmoc-Gly-p-Benzyloxybenzylester polystyrene resin (1% crosslinked) from Novabiochem (Läufelfingen, Switzerland), wherein the carboxyl group of glycine, whose amino group is protected by 9-fluorenyl-methoxycarbonyl (Fmoc), with 4 Methoxy-benzyl alcohol is esterified, wherein the carbon atom of the methoxy group with an aromatic ring of 1% with divinylbenzene crosslinked polystyrene resin, which also serves as a support material connected

ist, wird der Aufbau des Peptidmoleküls nach der Merrifield-Synthese durchgeführt. Dabei wird eine automatische Peptidsyntheseapparatur verwendet, die sich zur alternierenden Abspaltung der Aminoschutzgruppen, im vorliegenden Fall der Fmoc-Gruppe, und zur Ankupplung der N-Fmoc-geschützton Aminosäureverbindungen eignet. Im ersten Schritt wird dabei die Fmoc-Schutzgruppe im Fmoc-Gly-p-Benzyloxybenzylester-Polyslyrolharz entfernt und Fmoc-Leu-OH mit dem so erhaltenen H-Gly-p-Benzyloxybenzylester-Polystyrolharz gekuppelt, und dann die weiteren N-Fmoc-Aminosäuren stufenweise in der Reihenfolge Fmoc-Ser(But>-OH, dann entweder Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Gln-OH und Fmoc-Gln-OH, oder FmOC-GIn(Td)-OH, Fmoc-Gln(Trt>-OH, Fmoc-Gln(T:t)-O!i, Fmoc-Gln(Trt)-OH und Fmoc-Gln(Trt)-OH an das jeweils erhaltene Peptid/Harz-Zwischenprodukt gekuppelt. Die einzelnen Stufen werden nach folgendem Schema durchgeführt, wobei jeweils etwa 1OmI der Waschflüssigkeit verwendet und die einzelnen Operationen, falls nicht anders angegeben, bei Raumtemperatur durchgeführt werden und wobei das Reaktionsgomisch jeweils regelmäßig geschüttelt wird: Ausgehend von 1 g des oben beschriebenen Fmcc-Gly/Harz-Ausgangsmaterials (Beladung: 0,47mMol/g) werden die folgenden, sich für jede Stufe jeweils repetierenden Verfahrensschritte durchgeführt:is, the construction of the peptide molecule is carried out after the Merrifield synthesis. In this case, an automatic Peptidsyntheseapparatur is used, which is suitable for alternating cleavage of the amino protecting groups, in the present case the Fmoc group, and for coupling the N-Fmoc-protected amino acid compounds. In the first step, the Fmoc-protecting group in the Fmoc-Gly-p-benzyloxybenzyl ester polyslyrole resin is removed and Fmoc-Leu-OH is coupled with the thus obtained H-Gly-p-benzyloxybenzyl ester polystyrene resin, and then the other N-Fmoc amino acids stepwise in the order Fmoc-Ser (But> -OH, then either Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Gln-OH and Fmoc-Gln-OH, or FmOC-GIn ( Td) -OH, Fmoc-Gln (Trt> -OH, Fmoc-Gln (T: t) -O! I, Fmoc-Gln (Trt) -OH and Fmoc-Gln (Trt) -OH to the respective obtained peptide / The individual stages are carried out according to the following scheme, using in each case about 10 μl of the washing liquid and the individual operations, unless otherwise stated, are carried out at room temperature and the reaction mixture is shaken regularly: starting from 1 g of the above described Fmcc-Gly / resin starting material (loading: 0.47 mmol / g) become the following, repeating each step for each stage Steps performed:

1. einmaliges Waschen während 0,8 Minuten mit Isopropanol;1. Wash once for 0.8 minutes with isopropanol;

2. dreimaliges Waschen während je 0,5 Minuten mit unter vermindertem Druck entgastem Dimethylacetamid (Dimethylaminfrei);2. washing three times for 0.5 minutes each with dimethylacetamide degassed under reduced pressure (dimethylamine-free);

3. fünfmaliges Behandeln während je 1,7 Minuten mit einem 1 ^-Gemisch von Piperidin und Dimethylacetamid (Abspaltung der Fmoc-Schutzgruppe);3. treating five times for 1.7 minutes each time with a 1 ^ mixture of piperidine and dimethylacetamide (cleavage of the Fmoc protecting group);

4. einmaliges Waschen während 0,8 Minuten mit Isopropanol;4. Wash once for 0.8 minutes with isopropanol;

5. dreimaliges Waschen während je 0,5 Minuten mit unter vermindertem Druck entgastem Dimethylacetamid (Dimethylaminfrei);5. Washing three times for 0.5 minutes each with dimethylacetamide degassed under reduced pressure (dimethylamine-free);

6. einmaliges Waschen während 0,8 Minuten mit Isopropanol;6. Wash once for 0.8 minutes with isopropanol;

7. dreimaliges Behandeln während je 1,7 Minuten mit einem 1:4-Gemisch von Piperidin und Dimethylacetamid (zur vollständigen Abspaltung der Fmoc-Schutzgruppe);7. treating three times for 1.7 minutes each with a 1: 4 mixture of piperidine and dimethylacetamide (to completely eliminate the Fmoc protecting group);

8. zweimaliges Waschen während je 0,5 Minuten mit unter vermindertem Druck entgastem Dimethylacetamid (Dimethylaminfrei);8. washing twice for 0.5 minutes each with dimethylacetamide degassed under reduced pressure (dimethylamine-free);

9. einmaliges Waschen während 0,8 Minuten mit Isopropanol;9. Wash once for 0.8 minutes with isopropanol;

10. sechsmaliges Waschen während je 0,5 Minuten mit unter vermindertem Druck entgastem Dimethylacetamid (Dimethylamin-frei);10. washing six times for 0.5 minutes each with dimethylacetamide degassed under reduced pressure (dimethylamine-free);

11. Zugabe des zwischenzeitlich bereitgestellten Kupplungsreagens (das wie folgt erhalten wird: Ein Gemisch von 1,^mMoI der jeweiligen Fmoc-L-Aminosäure, 1,4 mMol 1-Hydroxy-1H-benztriazol und 1,55mMol Diisopropylcarbodiimid in 4ml Dimethylacetamid (Dimethylamin-frei) wird während etwa 30 Minuten bei Raumtemperatur belassen und dann verwendet). Die Kupplungsreaktion selber dauert 60 Minuten bei Raumtemperatur;11. Addition of Intermediate Coupling Reagent (which is obtained as follows: A mixture of 1 mM of the respective Fmoc-L-amino acid, 1.4 mmol of 1-hydroxy-1H-benzotriazole and 1.55 mmol of diisopropylcarbodiimide in 4 ml of dimethylacetamide (dimethylamine -free) is left at room temperature for about 30 minutes and then used). The coupling reaction itself lasts for 60 minutes at room temperature;

12. einmalige Acetylierung während 5 Minuten mit einem 1:1:8-Gemisch von Acetanhydrid, Pyridin und Dimethylacetamid (Dimethylamin-frei);12. single acetylation for 5 minutes with a 1: 1: 8 mixture of acetic anhydride, pyridine and dimethylacetamide (dimethylamine-free);

13. dreimaliges WaschenwährendsjeO,5 Minuten mituntervermindertem Druck entgastem Dimethylacetamid (Dimethylaminfrei);13. washing three times, while for 5 minutes with undamped pressure degassed dimethylacetamide (dimethylamine-free);

14. einmaliges Waschen während 0,8 Minuten mit Isopropanol und14. Wash once for 0.8 minutes with isopropanol and

15. zweimaliges Waschen während 0,5 Minuten mit unter vermindertem Druck entgastem Dimethylacetamid (Dimethylaminfrei).15. Wash twice for 0.5 minutes with dimethylacetamide degassed under reduced pressure (dimethylamine-free).

Nach Ankupplung der letzten Aminosäure werden nochmals die obigen Behandlungsschritte 1-10 zwecks Abspaltung der Fmoc-Gruppe ausgeführt.After coupling of the last amino acid, the above treatment steps 1-10 are again carried out for the purpose of splitting off the Fmoc group.

Die Ausbeuten für jeden der letzten fünf Kupplungsschritte mit Fmoc-Gln-OH bzw. Fmoc-Gln(Trt)-OH werden anhand des mit der jeweiligen Abspaltung der Fmoc-Gruppe als Nebenprodukt gebildeten 1-(9-Fluorenylmethyl)-piperidins bestimmt. Hierzu werden jeweils die vereinigten Filtrate der Schritte 3-10 auf ein bestimmtes Volumen verdünnt und photometrisch im UV (λ,™ = 299,8nm,e = 7800) ausgewertet. Die Ausbeuten betragen für die Serie mit Fmoc-Gln-OH 99%,97%, 98%, 49%und 72%, für diejenige mit Fmoc-Gln(Trt)-OH 100%, 100%, 99%, 99% und 100%.The yields for each of the last five coupling steps with Fmoc-Gln-OH or Fmoc-Gln (Trt) -OH are determined on the basis of 1- (9-fluorenylmethyl) piperidine formed as a by-product with the respective cleavage of the Fmoc group. For this purpose, in each case the combined filtrates of steps 3-10 are diluted to a specific volume and evaluated photometrically in the UV (λ, λ = 299.8 nm, e = 7800). The yields for the series with Fmoc-Gln-OH are 99%, 97%, 98%, 49% and 72%, for those with Fmoc-Gln (Trt) -OH 100%, 100%, 99%, 99% and 100%.

Das Peptid wird durch Behandeln mit etwa 10ml eines (90:5:5)-Gemisches von Trifluoressigsäure, Wasser und 1,2-Ethandithiol wahrende Minuten von Harz abgespalten; das Reaktionsgemisch wird filtriert, das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt und das Peptid mit einem 1:1-Gemisch von Diisopropylether und Hexan ausgefällt und getrocknet. Durch die obengenannte Behandlung mit Trifluoressigsäure-Wasser-1,2-Ethandithiol werden teilweise bereits auch die Tritylgruppen (sofern vorhanden) und die tert.-Butylgruppe abgespalten. Diese Abspaltung wird durch 30minütiges Erwärmen der Peptidfällung auf 3O⁰C in Trifluoressigsäuro-Wasser-1,2-Pthandithiol (90:5:5) vervollständigt. Die erhaltenen Rohprodukte aus den Synthesen mit und ohne Trityl-Schutzgruppen werden im HPLC untersucht (Säule: Nucleosil 5C18, 250 χ 4,6mm; Laufmittel: A = 0,1 % Trifluoressigsäure in Wasser, B = 0,1 % Trifluoressigsäure in Acetonitril. Gradient: 0 bis 40% B in 30 Minuten; Fluß: 1 ml/Minute. Detektion: 215nm).The peptide is cleaved from resin by treating with about 10 ml of a (90: 5: 5) mixture of trifluoroacetic acid, water and 1,2-ethanedithiol for a few minutes; the reaction mixture is filtered, the filtrate concentrated under reduced pressure and the peptide precipitated with a 1: 1 mixture of diisopropyl ether and hexane and dried. By the above-mentioned treatment with trifluoroacetic acid-water-1,2-ethanedithiol, the trityl groups (if present) and the tert-butyl group are partly already split off. This cleavage is by 30 minutes heating the peptide precipitation onto 3O ⁰ C in Trifluoressigsäuro-water-1,2-Pthandithiol (90: 5: 5) completes. The resulting crude products from the syntheses with and without trityl protective groups are analyzed by HPLC (column: Nucleosil 5C18, 250 χ 4.6 mm, mobile phase: A = 0.1% trifluoroacetic acid in water, B = 0.1% trifluoroacetic acid in acetonitrile. Gradient: 0 to 40% B in 30 minutes, flow: 1 ml / minute, detection: 215nm).

Das gewünschte Titelprodukt weist eine Retentionszeit von 17,98 Minuten auf. Das HPLC-Profil des Rohprodukts aus der Synthese mit Trityl-Schutz der Glutaminreste weist neben dem Titelprodukt (92%) ein Signal (8%) bei einer Retentionszeit von 18,65 Minuten auf. Das HPLC-Profil des Rohprodukts aus der Synthese ohne Trityl-Schutz der Glutaminreste weist neben dem Titelprodukt (nur 30%) ein Signal (70%) mit einer Reteniionszeit von 18,38 Minuten auf.The desired title product has a retention time of 17.98 minutes. The HPLC profile of the crude product from the synthesis with trityl protection of the glutamine residues shows, in addition to the title product (92%), a signal (8%) with a retention time of 18.65 minutes. The HPLC profile of the crude product from the synthesis without trityl protection of the glutamine residues shows, in addition to the title product (only 30%), a signal (70%) with a retention time of 18.38 minutes.

Beispiel 11: H-Arg-Arg-Ser-Asn-Gln-Va^Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-lle-Val-Gln-Asn-lle-Gln-Gly-Arg-Arg-OH Das Titelpeptid wird zweimal nach dem im Beispiel 10 beschriebenen Syntheseschema hergestellt, erstens mit ungeschützten Fmoc-Asn-OH bzw. Fmoc-Gln-OH und zweitens mit Fmoc-Asn(Trt)-OH bzw. Fmoc-Gln(Tr1)-OH. Ausgehend von Fmoc-Arg(Pmc)-Harz (Novabiochem) werden nacheinander folgende Aminosäuren ankondensiert:Example 11: H-Arg-Arg-Ser-Asn-Gln-Va-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-ll-Val-Gln-Asn-Ile-Gln-Gly-Arg-Arg-OH The title peptide is extracted twice prepared according to the synthesis scheme described in Example 10, firstly with unprotected Fmoc-Asn-OH or Fmoc-Gln-OH and secondly with Fmoc-Asn (Trt) -OH or Fmoc-Gln (Tr1) -OH. Starting from Fmoc-Arg (Pmc) resin (Novabiochem), the following amino acids are condensed successively:

Fmoc-Arg(Pmc), Fmoc-Gly, Fmoc-Gln bzw. Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Ile, Fmoc-Asn bzw. Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Gln bzw. Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Val, Fmoc-Ile, Fmoc-Pro, Fmoc-Tyr(But), Fmoc-Asn bzw. Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Gln bzw. Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Ser(But), Fmoc-Val, Fmoc-Gln bzw. Fmoc-Gln(Trt), Fmoc-Asn bzw. Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Ser(But), Fmoc-Arg(Pmc) und Fmoc-Arg(Pmc).Fmoc-Arg (Pmc), Fmoc-Gly, Fmoc-Gln or Fmoc-Gln (Trt), Fmoc-Ile, Fmoc-Asn and Fmoc-Asn (Trt), Fmoc-Gln and Fmoc-Gln (Trt), respectively , Fmoc-Val, Fmoc-Ile, Fmoc-Pro, Fmoc-Tyr (But), Fmoc-Asn or Fmoc-Asn (Trt), Fmoc-Gln or Fmoc-Gln (Trt), Fmoc-Ser (But) , Fmoc-Val, Fmoc-Gln and Fmoc-Gln (Trt), Fmoc-Asn and Fmoc-Asn (Trt), Fmoc-Ser (But), Fmoc-Arg (Pmc) and Fmoc-Arg (Pmc).

Das Peptid wird nach Abspaltunrj der N-terminalen Fmoc-Gruppe während 8 Minuten mit Trifluoressigsäure-H₂O-1,2-Ethandithio! (90:5:5) vom Harz abgespalten und anschließend mit Triiluoressigsäure-H₂O-1,2-Ethandithiol-4-Methylmercaptophenol (90:5:3:2) während 90 Minuten bei 3O⁰C von den restlichen Schutzgruppen befreit. Das Rohprodukt aus der Synthese a (mit Trityl-Schutz) liefert im FAB-MS ein (M + ΗΓ-Signal bei 2414,1 (berechnetes Molekulargewicht: 2413,7). Dio HPLC-Profile (Säule: Nucleosil 7C18,125 x 4,6mm; Laufmittel: A = 0,1 %Trifluoressigsäure in W >sser; B = 0,1% Trifluoressigsäure in Acetonitril. Gradient: 0 bis 90% B in 30 Minuten, 1,5 ml/Minute. Detektion: Ül5nm) der Rohprodukte von beiden Synthesen (a: mit Trityl-Schutz bei Asn und GIn; b: ohne Trityl-Schutz bei Asn und GIn) sind in Figur 1 abgebildet. Darin gibt die Abszirsenskala die Retentionszeit in Minuten an.The peptide, after cleavage of the N-terminal Fmoc group for 8 minutes with trifluoroacetic acid H ₂ O-1,2-ethanedithio! (90: 5: 5) cleaved from the resin and then with Triiluoressigsäure-H ₂ O-1,2-ethanedithiol-4-methylmercaptophenol (90: 5: 3: 2) for 90 minutes at 3O ⁰ C of the remaining protecting groups. The crude product from synthesis a (with trityl protection) yields in FAB-MS an (M + ΗΓ signal at 2414.1 (calculated molecular weight: 2413.7) Dio HPLC profiles (column: Nucleosil 7C18, 125 × 4 , 6mm; eluent: A = 0.1% trifluoroacetic acid in excess, B = 0.1% trifluoroacetic acid in acetonitrile, gradient: 0 to 90% B in 30 minutes, 1.5 ml / minute, detection: 11 nm) Crude products from both syntheses (a: with trityl protection in Asn and GIn, b: without trityl protection in Asn and GIn) are depicted in Figure 1. Therein, the abscissa scale indicates the retention time in minutes.

Beispiel 12: Fmoc-Lys-Gln-Hls-Asn-Pro-Lys-Tyr-Gln-Trp-Asn-OHExample 12: Fmoc-Lys-Gln-Hls-Asn-Pro-Lys-Tyr-Gln-Trp-Asn-OH

Zu einer Suspension von 10g sogenannten 4-Benzyloxybenzylalkoholpolystyrol (0,78mMol OH/g; 1 % mit Divinylbenzol quervernetzt; die Phenylgruppon des Polystyrols sind in 4-Stellung durch 4-Hydroxymethylphenyloxymethyl substituiert; Novabiochem), 9,3g (15,GmMoI) Fmoc-Asn(Trt)-OH und 3,1 ml (38,5mMol) Pyridin in 60ml Dimethylacetamid werden 3,35ml (23,4mMol)2,6-Dichlor-benzoylchlorid(Fluka)in4 Portionen innerhalb von 5 Stunden zugegeben und 24 Stunden gerührt. Das Harz wild abfiltriert und sehr gut mit Methanol und 1,2-Dichlor-ethan ausgewaschen. Das Harz weist eine Beladung von 0,48mMol/g auf (photometrische Fmoc-Bestimmung). Die restlichen OH-Gruppen werden vor Beginn der Peptidsynthese 2 Stunden lang mit Acetanhydnd-Pyridin-Dimethylacetamid 1:1:8 acetyliert. In analoger Weise (Ersatz von Fmoc-Asn(Trt)-OH durch Fmoc-Asn(Tmob)-OH) stellt man ein Fmoc-Asn(Tmob)-Harzher. Dieses weist eine Beladung von 0,44 mMol/g auf. 0,5g Fmoc-Asn(Trt)-Harz (0,24mMol Asn) bzw. 0,5g Fmoc-Asn(Tmob)-Harz (0,22mMol Asn) werden nach dem im Beispiel 10 beschriebenen Syntheseschema nacheinander mit folgenden Aminosäuren gekuppelt: Fmoc -Trp, Fmoc-Gln(Trt) bzw. Fmoc-Gln(Tmob), Fmoc-Tyr(But), Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Pro, Fmoc-Asn(Trt) bzw. Fmoc-Asn(Tmob), Fmoc-His(Trt), Fmoc-Gln(Trt) bzw. Fmoc-Gln(Tmob), und l-moc-Lys(Boc).To a suspension of 10 g of so-called 4-benzyloxybenzyl alcohol polystyrene (0.78 mmol OH / g; 1% cross-linked with divinylbenzene; the phenyl group of the polystyrene are substituted in the 4 position by 4-hydroxymethylphenyloxymethyl, Novabiochem), 9.3 g (15, GmMoI) Fmoc -Asn (Trt) -OH and 3.1 ml (38.5 mmol) of pyridine in 60 ml of dimethylacetamide are added 3.35 ml (23.4 mmol) of 2,6-dichloro-benzoyl chloride (Fluka) in 4 portions over 5 hours and 24 hours touched. The resin filtered wild and washed very well with methanol and 1,2-dichloro-ethane. The resin has a loading of 0.48 mmol / g (photometric Fmoc determination). The remaining OH groups are acetylated with acetic anhydride-pyridine-dimethylacetamide 1: 1: 8 for 2 hours before starting the peptide synthesis. In an analogous manner (substitution of Fmoc-Asn (Trt) -OH by Fmoc-Asn (Tmob) -OH), a Fmoc-Asn (Tmob) resin is prepared. This has a loading of 0.44 mmol / g. 0.5 g of Fmoc-Asn (Trt) resin (0.24 mmol Asn) or 0.5 g of Fmoc-Asn (Tmob) resin (0.22 mmol Asn) are coupled successively with the following amino acids according to the synthesis scheme described in Example 10: Fmoc -Trp, Fmoc-Gln (Trt) and Fmoc-Gln (Tmob), Fmoc-Tyr (But), Fmoc-Lys (Boc), Fmoc-Pro, Fmoc-Asn (Trt) and Fmoc-Asn (Tmob ), Fmoc-His (Trt), Fmoc-Gln (Trt) and Fmoc-Gln (Tmob), respectively, and l-moc-Lys (Boc).

Die erhaltenen Peotid-Harze werden 15 Minuten mit Trifluoressigsäure-Dimethylsulfid- 1,2-Ethandithiul (77:20:3) geschüttelt, um das Peptid vom Harz abzuspalten. Die restlichen Fchutzgruppen werden dann mit Trifluuressigssure-Wasser-1,2-Ethandithiol (90:5:5) während 40 Minuten bei Raumtemperatur abgespalten.The resulting peptide resins are shaken for 15 minutes with trifluoroacetic acid-dimethylsulfide-1,2-ethanedithiul (77: 20: 3) to cleave the peptide from the resin. The remaining protecting groups are then cleaved with trifluoroacetic acid-water-1,2-ethanedithiol (90: 5: 5) for 40 minutes at room temperature.

Die erhaltenen Rohprodukte aus den Synthesen mit Trityl-Schutz an Asn und GIn (= Rohprodukt A¹ einerseits und mit Tmob-Srhutz an Asn und GIn (= Rohprodukt B) andererseits werden im HPLC untersucht (Sä jle: Nucleosil 5C18,250 x 4,6mm; Laufmittel: A = 0,1 %Trifluoressigsä'jre in Wasser, B = 0,1 % Trifluoressigsäure in Acetonitril Gradient: 0 bis 90% B in 30 Minute. 1 ml/Minute. Detektion: 215nm). Das gewünschte Titelprodukt weist eine Retenlionszeit von 29,8 Minuten auf. Das HPLC-Profil des Rohprodukts aus der Synthese mit Trityl-Schutz (Rohprodukt A) weist neben dem Titelprodukt (95%, (M + ΗΓ im FAB-MS = 1 565,4; berechnetes Molekulargewicht: 1 564,7) ßin Signal (5%) bei einer Retentionszeit von 30,9 Minuten fürThe crude products obtained from the syntheses with trityl protection on Asn and GIn (= crude product A ¹ on the one hand and with Tmob-Srhutz on Asn and GIn (= crude product B) on the other hand are investigated by HPLC (Sä jle: Nucleosil 5C18,250 x 4, Eluent: A = 0.1% trifluoroacetic acid in water, B = 0.1% trifluoroacetic acid in acetonitrile gradient: 0 to 90% B in 30 minutes, 1 ml / minute, detection: 215 nm) The HPLC profile of the crude product from the synthesis with trityl protection (crude product A) has, in addition to the title product (95%, (M + ΗΓ in the FAB-MS = 1 565.4, calculated molecular weight : 1 564.7) signal (5%) at a retention time of 30.9 minutes for

Fmoc-Lys-Gln-His-Asn-Pro-Lys-Tyr-Gln-TipiCfy -/ VOH)-Asn-OH auf.Fmoc-Lys-Gln-His-Asn-Pro-Lys-Tyr-Gln-TipiCfy- / VOH) -Asn-OH.

Das HPLC-Profil von Rohprodukt B (mit Tmob-Schutz) weist neben dem Signal für das Titelprodukt (nur etwa 8%) und dem obengenannten Signal (ca. 3%) mit der Retentionszeit von 309,9 Minuten ein Signal (89%) mit einer Retentionszeit von 33,7 Minuten fürThe HPLC profile of crude product B (with Tmob protection) shows, in addition to the signal for the title product (only about 8%) and the above-mentioned signal (about 3%) with the retention time of 309.9 minutes, a signal (89%). with a retention time of 33.7 minutes for

OCH-,OCH,

Fmoc-Lys-Gln-His-Asn-Pro-Lys-Tyr-Gln-TrpC CH₂ -^ ^x)- OCH₃ )-Asn-OHFmoc-Lys-Gln-His-Asn-Pro-Lys-Tyr-Gln-TrpC CH ₂ - ^ ^x ) - OCH ₃ ) -Asn-OH

OCH₃ OCH ₃

[(M + H)" im FA-MS = 1 745,6; berechnetes Molekulargewicht: 1 744,9) und weitere, sehr kleine Signale auf.[(M + H) "in FA-MS = 1 745.6, calculated molecular weight: 1 744.9) and other very small signals.

Beispiel 13: Fmoc-Asn(Trt)-OTcpExample 13: Fmoc-Asn (Trt) -OTcp

Eine Lösung von 1,5 g (2,51 mMol) Fmoc-Asn(Trt)-OH und 0,54g (2,75 mMol) 2,4,5-Trichlor-phenol in 10 ml Tetrahydrofuran wird auf O⁰C gekühlt. Man gibt 0,57g (2,75mMol) Dicyclohexyl-carbodiimid in fester Form zu und rührt während 30 Minuten bei O⁰C, 2 Stunden bei Raumtemperatur, nochmals 30 Minuten bei O⁰C und filtriert dann den gebildeten Dicyclohexylharnstoff ab. Aus dem Filtrat wird Fmoc-Asn(Trt)-OTcp durch Zugabe von POmI Hexan auskristallisiert; Smp. 133-135⁰C, (a)£° = +51,1° (THF).A solution of 1.5 g (2.51 mmol) of Fmoc-Asn (Trt) -OH and 0.54 g (2.75 mmol) of 2,4,5-trichloro-phenol in 10 ml of tetrahydrofuran is cooled to ⁰ ° C , Are added 0.57 g (2.75 mmol) of dicyclohexyl-carbodiimide in solid form and stirred for 30 minutes at ^{0 0} C, 2 hours at room temperature, another 30 minutes at ^{0 0} C and then filtered from the dicyclohexylurea formed. From the filtrate, Fmoc-Asn (Trt) -OTcp is crystallized by addition of POmI hexane; Mp. 133-135 ⁰ C, (a) £ ° = + 51.1 ° (THF).

Beispiel 14: Fmoc-Gln(Trt)-OTcpExample 14: Fmoc-Gln (Trt) -OTcp

10g (15,1 mMol) Fmoc-Gln(Trt)-OH x 0,5 Diisopropylether und 3,26g (16,6mMol) 2,4,5-Trichlor-phenol werden in 100ml Tetrahydrofuran gelöst und auf 0°C abgekühlt. Nach Zugabe von J,41 g (16,6mMol) Dicyclohexylcarbodiimid in fester Form wird 1 Stunde bei 0⁰C, 2 Stunden bei Raumtemperatur und nochmals 30 Minuten bei 0⁰C gerührt. Der auskristallisierte Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und aus dem Filtrat Fmoc-Gln(Trt)-OTcp durch Zugabe von 750 ml Petrolether als Gallerte ausgefällt, abfiltriert, getrocknet und aus Methylenchlorid-Hexan kristallisiert; Smp. = 166°C, (α)έ° = 16,1° (THF).10 g (15.1 mmol) of Fmoc-Gln (Trt) -OH x 0.5 diisopropyl ether and 3.26 g (16.6 mmol) of 2,4,5-trichloro-phenol are dissolved in 100 ml of tetrahydrofuran and cooled to 0 ° C. After addition of J, 41 g (16,6mMol) of dicyclohexylcarbodiimide in solid form for 1 hour at 0 ⁰ C, 2 hours at room temperature and another 30 minutes at 0 ⁰ C is stirred. The crystallized dicyclohexylurea is filtered off and precipitated from the filtrate Fmoc-Gln (Trt) -OTcp by adding 750 ml of petroleum ether as a gel, filtered off, dried and crystallized from methylene chloride-hexane; Mp = 166 ° C, (α) έ ° = 16.1 ° (THF).

Beispiel 15: Fmoc-Asn(Trt)-OPfpExample 15: Fmoc-Asn (Trt) -OPfp

1,5g (2,51 mMol) Fmoc-Aan(Trt)-OH werden in 15ml Tetrahydrofuran gelöst. Man gibt 0,51g (2,76mMol) Pentafluor-phenolzu, kühlt die Lösung auf O⁰C und fügt dann noch 0,57g (2,76mMol) Dicyclohexyl-carbodiimid in fester Form zu. Es wird während 30 Minuten bei 0⁰C, 2 Stunden bei Raumtemperatur und nochmal 30 Minuten bei 0°C gerührt. Der auskristallisierte Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert, das Filtrat zur Trockne eingeengt und mit 40ml Diisopropylether verrieben. Der pulvrige Rückstand wird abfiltriert, getrocknet und aus Methylenchlorid-Petrolether umkristallisiert. Man erhält Fmoc-Asn(Trt)-OPfp; Smp. 154-156°C,[a]g° = -7,8° (THF).1.5 g (2.51 mmol) of Fmoc-Aan (Trt) -OH are dissolved in 15 ml of tetrahydrofuran. Add 0.51 g (2.76 mmol) of pentafluorophenol, cool the solution to ⁰ ° C. and then add another 0.57 g (2.76 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide in solid form. The mixture is stirred for 30 minutes at 0 ⁰ C, 2 hours at room temperature and another 30 minutes at 0 ° C. The crystallized dicyclohexylurea is filtered off, the filtrate is concentrated to dryness and triturated with 40 ml of diisopropyl ether. The powdery residue is filtered off, dried and recrystallized from methylene chloride-petroleum ether. Fmoc-Asn (Trt) -OPfp is obtained; Mp 154-156 ° C, [a] g ° = -7.8 ° (THF).

Beispiel 16: Fmoc-Gln(Trt) -OPfpExample 16: Fmoc-Gln (Trt) -OPfp

1,5g (2,27mMol) Fmoc-Gin(Trt)-OH x 0,5 Oiisopropylether und 0,46g (2,BmMoI) Pentafluor-phenol werden in 35ml Essigsäureethylester gelöst, auf O⁰C gekühlt und unter Rühren mit 0,52g (2,5mMol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Man rührt während 1 Stunde bei O⁰C und 3 Stunden bei Raumtemperatur, filtriert das unlösliche Material ab und wäscht mit Tetrahydrofuran. Das Filtrat wird zur Trockne eingeengt und der Rückstand in 30 ml Tetrahydrofuran gelöst. Durch langsame Zugabe von Petrolether unter Rühren wird Fmoc-Gln(Trt)-OPfp kristallisiert; Smp. 185-187°C, [α)έ° = -16,4° (THF).1.5 g (2,27mMol) Fmoc-Gin (Trt) -OH x 0.5 Oiisopropylether and 0.46 g (2, BmMoI) pentafluoro-phenol are dissolved in 35 ml ethyl acetate, cooled to ⁰ C and with stirring, to 0, 52 g (2.5 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide were added. The mixture is stirred for 1 hour at ⁰ ° C. and 3 hours at room temperature, the insoluble material is filtered off and washed with tetrahydrofuran. The filtrate is concentrated to dryness and the residue dissolved in 30 ml of tetrahydrofuran. Slow addition of petroleum ether with stirring crystallizes Fmoc-Gln (Trt) -OPfp; Mp 185-187 ° C, [α] έ ° = -16.4 ° (THF).

Beispiel 17: Fmoc-Asn\Trt)-ODhbtExample 17: Fmoc-Asn \ Trt) -ODhbt

1,5g (2,51 mMol) Fmoc-Asn(Trt)-OH werden in 10ml Tetrahydrofuran gelöst und mit einer Lösung von 0,45g (2,76 mMol) 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazin in 5ml Dimethylformamid vermischt. Man kühlt auf 0⁰C, gibt 0,57g (2,76 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid in fester Form zu und rührt während 1 Stunde bei O⁰C, 3 Stunden bei Raumtemperatur und dann nochmals 1 Stunde bei O⁰C. Der ausgeschiedene Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert, das Filtrat zur Trockne eingeengt, der Rückstand mit 30ml Diisopropylether verrieben, abfiltriert und getrocknet. Das Rohprodukt wird durch Umfallen aus Methylenchlorid-Hexan gereinigt. Man erhält Fmoc-Asn(Trt)-ODhbt als amorphes Pulver; Smp. ca. 14O⁰C, Ia)I⁰ = -40,8° (THF).1.5 g (2.51 mmol) of Fmoc-Asn (Trt) -OH are dissolved in 10 ml of tetrahydrofuran and treated with a solution of 0.45 g (2.76 mmol) of 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo 1,2,3-benzotriazine mixed in 5 ml of dimethylformamide. It is cooled to 0 ⁰ C, 0.57g (2.76 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide in solid form and stirred for 1 hour at ^{0 0} C, 3 hours at room temperature and then again for 1 hour at ^{0 0} C. The precipitated dicyclohexylurea is filtered off, the filtrate was concentrated to dryness, the residue triturated with 30 ml of diisopropyl ether, filtered off and dried. The crude product is purified by reprecipitation from methylene chloride-hexane. Fmoc-Asn (Trt) -ODhbt is obtained as an amorphous powder; Mp ca. 14O ⁰ C, Ia) I ⁰ = -40.8 ° (THF).

Beispiel 18: Fmoc-Gln(Trt)-ODhbtExample 18: Fmoc-Gln (Trt) -ODhbt

1g (1,51 mMol)Fmoc-Uln(Trt)-OH x 0,5 Diisopropylether werden in 10ml Essigsäureethylester gelöst. Man gibt 0,27g (1,66mMol) 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazin in fein pulverisierter Form zu, und versetzt die Suspension nach Abkühlen auf O⁰C noch mit 0,34g (1,66mMol) Dicyclohexyl-carbodiimid in fester Form. Nach einstündigem Rühren bei O⁰C gibt man nochmals 10ml Essigsäureethylester zu, rührt während 3 Stunden bei Raumtemperatur, filtriert den Dicyclohexylharnstoff ab und wäscht mit Essigsäureethylester. Das Filtrat wird auf ca. 10ml konzentriert und daraus Fmoc-Gln(Trt)-ODhbt durch Zugabe von 50ml Petrolether auskristallisiert; Smp. 130-133°C, [a]g° = -53,7° (THF).1 g (1.51 mmol) of Fmoc-Uln (Trt) -OH x 0.5 diisopropyl ether are dissolved in 10 ml of ethyl acetate. 0.27 g (1.66 mmol) of 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine are added in finely pulverized form, and the suspension is still brought to 0 after cooling to ⁰ ° C. , 34g (1.66 mmol) of dicyclohexyl-carbodiimide in solid form. After stirring for ¹ hour at ^{0 0} C is added again 10ml ethyl acetate, stirred for 3 hours at room temperature, filtered from the dicyclohexylurea and washed with ethyl acetate. The filtrate is concentrated to about 10 ml and from it Fmoc-Gln (Trt) -ODhbt crystallized by adding 50 ml of petroleum ether; Mp 130-133 ° C, [a] g ° = -53.7 ° (THF).

Beispiel 19: H-Asn(Trt)-OH · 0,5H₂OExample 19: H-Asn (Trt) -OH. 0.5H ₂ O

20g (0,1515 Mol) H-Asn-OH und 78,8g (0,303 Mol) Trt-OH werden in 455ml Eisessig suspendiert. Man gibt 9,28ml (0,174 Mol) konzentrierte H₂SO₄ zu, gefolgt von 28,6ml (0,303 Mol) Acetanhydrid und rührt während 75 Minuten bei 60⁰C. Nach ca. 40-50 Minuten ist alles gelöst. Das Reaktionsprodukt wird durch langsames Eintragen in 910ml eisgekühltes H₂O ausgefällt. Anschließend wird der pH-Wert mit ca. 850 ml 10N NaOH auf ca. 6 gestellt. Nach ca. 1 Stunde Rühren bei O⁰C wird abfiltriert, mehrmals mit H₂O und dann mit Toluol gewaschen, bis kein Trt-OH mehr im Filtrat enthalten ist. Das erhaltene Titelprodukt zersetzt sich langsam ab 22O⁰C.20 g (0.1515 mol) of H-Asn-OH and 78.8 g (0.303 mol) of Trt-OH are suspended in 455 ml of glacial acetic acid. Priority 9,28ml (0.174 mol) of concentrated H ₂ SO ₄ to, followed by 28,6ml (0.303 mol) of acetic anhydride and stirred for 75 minutes at 60 ⁰ C. After 40-50 minutes everything is dissolved. The reaction product is precipitated by slow entry into 910 ml of ice-cooled H ₂ O. The pH is then adjusted to approx. 6 with approx. 850 ml 10N NaOH. After about 1 hour of stirring at ^{0 0} C is filtered off, washed several times with H ₂ O and then with toluene until Trt-OH is no longer contained in the filtrate. The title product obtained decomposes slowly from 22O ⁰ C.

Beispiel 20: ΒοExample 20: Βο

3,83g (1OmMoI) H-Asn(Trt)-OH · 0,5H₂O und 1,37ml (1OmMoI) Triethylamin werden in 38ml 90%igem Tetrahydrofuran gelöst. Man gibt 2,2 ml (10 mMol) Di-tert.-butyl-dicarbonat zu, gefolgt von weiteren 1,37 ml Triethylamin. Man läßt während 2'Λ Stunden bei Raumtemperatur reagieren und extrahiert dann mit 250ml Essigsäureethylester und 125 ml wäßriger einmolarer KHSO₄-Lösung. Die organische Phase wird neutral gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird aus Methanol-Essigsäureethylester-Hexan kristallisiert; Smp. des erhaltenen Titelprodukts: 201-203°C, [a)g° = -17,7° (THF).3.83 g (10 μmol) of H-Asn (Trt) -OH. 0.5H ₂ O and 1.37 ml (10 μmol) of triethylamine are dissolved in 38 ml of 90% tetrahydrofuran. 2.2 ml (10 mmol) of di-tert-butyl-dicarbonate are added, followed by another 1.37 ml of triethylamine. It is allowed to react for 2'Λ hours at room temperature and then extracted with 250 ml of ethyl acetate and 125 ml of aqueous one-molar KHSO ₄ solution. The organic phase is washed neutral, dried over Na ₂ SO ₄ and concentrated to dryness. The residue is crystallized from methanol-ethyl acetate-hexane; Mp of the title product obtained: 201-203 ° C, [a) g ° = -17.7 ° (THF).

Beispiel 21: Boc-Gln(Trt)-OHExample 21: Boc-Gln (Trt) -OH

3,98g (1OmMoI) H-GIn(Tn)-OH · 0,5H₂O und 1,38ml (1OmMoI) Triethylamin werden in 60ml 90%igem Tetrahydrofuran suspendiert, dann mit 2,28ml (10,2 mMol) (Boc)₂O und weiteren 1,38ml Triethylamin versetzt und während 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach ca. 30 Minuten ist alles klar in Lösung gegangen. Man verfährt weiter analog Beispiel 20, mit dem Unterschied, daß der Rückstand aus Methanol-CH₂CI₂-Petrolether kristallisiert wird; Smp. des erhaltenen Titelprodukts: ca. 112⁰C, la\l⁰ = -2± 1° (THF).3.98 g (10 mM) of H-GIn (Tn) -OH. 0.5H ₂ O and 1.38 ml (10 mM) of triethylamine are suspended in 60 ml of 90% tetrahydrofuran, then 2.28 ml (10.2 mmol) (Boc ) ₂ O and a further 1.38 ml of triethylamine and stirred for 2 hours at room temperature. After about 30 minutes, everything went clear. One further procedure analogous to Example 20, with the difference that the residue from methanol-CH ₂ CI ₂ -petroleum ether is crystallized; Mp of the title product obtained: approx. 112 ⁰ C, la \ l ⁰ = -2 ± 1 ° (THF).

Claims (41)

1. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I,1. A process for the preparation of a compound of the formula I, ilil R₁-NH-HC-C-O-R₂ R ₁ -NH-HC-COR ₂ I (I)I (I) (CH₂)_n (CH ₂ ) _n O=C-NH-R₃ O = C-NH-R ₃ worin η für 1 oder 2 steht, R₁ Wasserstoff oder eine Arninoschutzgruppe, R₂ Wasserstoff oder eine Carboxylschutzgruppe und R₃ Triphenylmethyl, 4-Monomethoxy-trityl oder 4,4'-Dimethoxy-trityl bedeuten, eines Salzes einer solchen Verbindung mit einer salzbildenden Gruppe oder eines reaktionsfähigen Carbonsäurederivats einer solchen Verbindung, worin R₁ für eine Aminoschutzgruppe und R₂ für Wasserstoff stehen, dadurch gekennzeichnet, daß manin which η is 1 or 2, R _{1 is} hydrogen or an amino protecting group, R _{2 is} hydrogen or a carboxyl protecting group and R _{3 is} triphenylmethyl, 4-monomethoxy-trityl or 4,4'-dimethoxy-trityl, a salt of such a compound having a salt-forming A group or a reactive carboxylic acid derivative of such a compound, wherein R _{1 is} an amino-protecting group and R _{2 is} hydrogen, characterized in that a) eine Verbindung der Formel II,a) a compound of the formula II, IlIl R₄-NH-HC-C-OR₂ R ₄ -NH-HC-C-OR ₂ I (inI (in (CH₂X,
O=C-NH₂ (CH ₂ X,
O = C-NH ₂ worin R₄ für Wasserstoff oder eine unter den Reaktionsbedingungen stabile Aminoschutzgruppe steht und η und R₂ die obengenannten Bedeutungen haben, mit einer Verbindung der Formel III,wherein R _{4 is} hydrogen or an amino protecting group which is stable under the reaction conditions and η and R _{2 have} the abovementioned meanings, with a compound of the formula III, R₃-OH (III)R ₃ -OH (III) worin R₃ die obengenannte Bedeutung hat, umsetzt und aus dem erhaltenen Produkt diejenigen Schutzgruppen abspaltet, die nicht Bestandteil des gewünschten Endprodukts der Formel I sind, oderwherein R _{3 has} the abovementioned meaning, and from the resulting product eliminates those protecting groups which are not part of the desired end product of the formula I, or b) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R₁ für eine Aminoschutzgruppe steht, in eine Verbindung der Formel IV,b) for the preparation of a compound of the formula I in which R _{1 is} an amino-protecting group, in a compound of the formula IV, IlIl H₂N-CH-C-OR₂ H ₂ N-CH-C-OR ₂ I ' (IV)I '(IV) (CH₂)_n (CH ₂ ) _n O=C-NH-R₃ O = C-NH-R ₃ worin n, R₂ und R₃ die obengenannten Bedeutungen haben, eine Aminoschutzgruppe einführt, oderwherein n, R ₂ and R _{3 have} the abovementioned meanings, introduces an amino-protecting group, or c) eine Verbindung der Formel V,c) a compound of the formula V, IlIl R₅-NH-HC-C-OR_{6 (v)} R ₅ -NH-HC-C-OR _{6 (v)} (CH₂),,(CH ₂ ) ,, O=C-OHO = C-OH worin η die obengenannte Bedeutung hat, R₅ eine unter den Reaktionsbedingungei stabile Aminoschutzgruppe bedeutet und R₆ für eine unter den Reaktionsbedingungen stabile Carboxylschutzgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel Vl,in which η has the abovementioned meaning, R ₅ denotes a stable amino-protecting group under the reaction conditions, and R _{6 represents} a carboxyl-protecting group which is stable under the reaction conditions, with a compound of the formula VI, R₇-NH₂ (Vl)R ₇ -NH ₂ (VI) worin R₃ die obengenannte Bedeutung hat, umsetzt und aus dem erhaltenen Produkt diejenigen Schutzgruppen abspaltet, die nicht Bestandteil der gewünschten Endprodukts der Formel I sind, und, wenn erwünscht, nach Durchführung eines der Verfahren a), b) oder c) eine erhaltene Verbindung der Formel I mit einer salzbildenden Gruppe in ihr Salz überführt oder ein erhaltenes Salz in die freie Verbindung überführt oder eine erhaltene Verbindung der Formel I, worin R₁ eine Aminoschutzgruppe und R₂ Wasserstoff bedeuten, in ein reaktionsfähiges Carbonsäurederiva* überführt.wherein R _{3 has} the abovementioned meaning, and from the resulting product eliminates those protecting groups which are not part of the desired end product of the formula I, and, if desired, after carrying out one of the processes a), b) or c) a compound obtained of the formula I is converted into its salt with a salt-forming group or a salt obtained is converted into the free compound or a resulting compound of formula I, wherein R _{1 is} an amino protecting group and R _{2 is} hydrogen, converted into a reactive carboxylic acid derivatives *. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der Formel II, worin R₄ für Benzyloxycarbonyl oder 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl steht, in einem geeigneten organischen Lösungsmittel in Gegenwart katalytischer Mengen einer wasserfreien starken Lewis-Säure und in Gegenwart eines wasserentziehenden Mittels zwischen +2O⁰C und +7O⁰C umsetzt.2. The method according to claim 1, characterized in that a compound of formula II, wherein R _{4 is} benzyloxycarbonyl or 9-fluorenyl-methoxycarbonyl, in a suitable organic solvent in the presence of catalytic amounts of anhydrous strong Lewis acid and in the presence of a dehydrating agent between + 2O ⁰ C and + 7O ⁰ C implemented. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R₁ eine Aminoschutzgruppe, R₂ Wasserstoff und R₃Triphenylmethyl,4-Monomethoxy-trityl oder 4,4'-Dimethoxy-trityl bedeuten, oder eines Metall- oder Ammonium'salzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.3. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of a compound of formula I, wherein R _{1 is} an amino protecting group, R _{2 is} hydrogen and R _{3 is} triphenylmethyl, 4-monomethoxy-trityl or 4,4'-dimethoxy-trityl, or a metal or ammonium salt thereof, characterized in that correspondingly substituted starting materials are used. 4. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R₁ Benzyloxycarbonyl, 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl, Allyloxycarbonyl oder tert.-Butyloxycarbonyl, R₂ Wasserstoff und R₃ Triphenylmethyl bedeuten, oder eines Metall- oder Ammoniumsalzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.4. The method of claim 1 or 2 for the preparation of a compound of formula I, wherein R _{1 is} benzyloxycarbonyl, 9-fluorenyl-methoxycarbonyl, allyloxycarbonyl or tert-butyloxycarbonyl, R _{2 is} hydrogen and R _{3 is} triphenylmethyl, or a metal or ammonium salt thereof , characterized in that correspondingly substituted starting materials are used. 5. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R₁ 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl bedeutet, oder eines Metall- oder Ammoniumsalzes einer solchen Verbindung, worin R₂ für Wasserstoff steht, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.5. The method according to claim 1 or 2 for preparing a compound of formula I, wherein R _{1 is} 9-fluorenyl-methoxycarbonyl, or a metal or ammonium salt of such a compound, wherein R _{2 is} hydrogen, characterized in that correspondingly substituted Starting materials used. 6. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von Benzyloxycarbonyl-Asn(triphenylmethyl)-OH oder eines Metall-oder Ammoniumsalzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.6. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of benzyloxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -OH or a metal or ammonium salt thereof, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 7. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl-Asn(triphenylmethyl)-OH oder eines Metall- oder Ainmoniumsalzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.7. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -OH or a metal or Ainmoniumsalzes thereof, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 8. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von H-Asn(triphenylmethy!)-OH oder eines Salzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmateriaiien verwendet.8. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of H-Asn (triphenylmethy!) - OH or a salt thereof, characterized in that one uses correspondingly substituted Ausgangsmateriaiien. 9. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von Tert.-butyloxycarbonyl-Asn(triphenylmethyl)-OH oder eines Salzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.9. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of tert-butyloxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -OH or a salt thereof, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 10. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von Benzyloxycarbonyl-Glnltriphdnylmethyl)-OH oder eines Metall-oder Ammoniumsalzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.10. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of benzyloxycarbonyl-Glnltriphdnylmethyl) -OH or a metal or ammonium salt thereof, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. ι.ι. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von 9-Fluorenyl-methoxy-carbonyl-Gln(triphenylmethyl)-Oh oder eines Metall- oder Ammoniumsalzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.Process according to claim 1 or 2 for the preparation of 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-Gln (triphenylmethyl) -Oh or a metal or ammonium salt thereof, characterized in that correspondingly substituted starting materials are used. 12. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von H-Gln(triphenylmethyl)-OH oder eines Salzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.12. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of H-Gln (triphenylmethyl) -OH or a salt thereof, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 13. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von Tert.-butyloxycarbonyl-Gln-(triphenylmethyl)-OH oder eines Salzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.13. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of tert-butyloxycarbonyl-Gln- (triphenylmethyl) -OH or a salt thereof, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 14. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung eines reaktionsfähigen Carbonsäurederivates einer Verbindung der Formel I, dadurch gekennzeichnet, daß man eine erhaltene Verbindung der Formel I, worin R₁ eine Aminoschutzgrupoe und R₂ Wasserstoff bedeuten, in ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat überführt.14. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of a reactive carboxylic acid derivative of a compound of formula I, characterized in that converting a compound of formula I, wherein R _{1 is} an amino protecting group and R _{2 is} hydrogen, converted into a reactive carboxylic acid derivative. 15. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung eines reaktionsfähigen Carbonsäurederivates einer Verbindung der Formel I in Form eines 2,4,5-Trichlor-phenylesters, Pentafluor-phenylesters, eines Säurechlorids, eines symmetrischen Anhydrids, eines Esters mit 1-Hydroxybenztriazol oder15. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of a reactive carboxylic acid derivative of a compound of formula I in the form of a 2,4,5-trichloro-phenyl ester, pentafluoro-phenyl ester, an acid chloride, a symmetrical anhydride, an ester with 1-hydroxybenzotriazole or eines Esters mit 3,4-Dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazin oder eines Esters mit N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid, dadurch gekonnzeichnet, daß man eine erhaltene Verbindung der Formel I, worin R₁ eine Aminoschutzgruppe und R₂ Wasserstoff bedeuten, in ein entsprechendes reaktionsfähiges Carbonsäurederivat überführt.an ester with 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine or an ester with N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide, characterized in that a compound obtained of formula I, wherein R _{1 is} an amino protecting group and R _{2 is} hydrogen, converted into a corresponding reactive carboxylic acid derivative. 16. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl-Asn(triphenylmethyl)-O-2,4,5-trichlorphenyl, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.16. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -O-2,4,5-trichlorophenyl, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 17. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von 9-Fluorenyl-methoxy-carbonyl-Gln(triphenylmethyl)-O-2,4,5-trichlorphenyl, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.17. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-Gln (triphenylmethyl) -O-2,4,5-trichlorophenyl, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 18. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von 9-Fluorenyl-methoxy-carbonyl-Asn(triphenylmethyl)-O-pentafluor-phenyl, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.18. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -O-pentafluor-phenyl, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 19. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von 9-Fluorenyl mothoxy-carbonyl-Gln(triphenylmethyl)-0-pentafluorphenyl, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.19. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of 9-Fluorenyl mothoxy-carbonyl-Gln (triphenylmethyl) -0-pentafluorophenyl, characterized in that one uses correspondingly substituted starting materials. 20. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von 9-Fluorenyl-methoxy-carbonyl-Asn(triphenylmethyl)-0-3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazinyl, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.20. The method according to claim 1 or 2 for the preparation of 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -0-3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazinyl, characterized in that correspondingly substituted starting materials are used. 21. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung von 9-Fluorenyl-methoxy-carbonyl-G ln(triphenylmethyl)-0-3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazinyl, dadurch gekennzeichnet, daß man entsprechend substituierte Ausgangsmaterialien verwendet.A process according to claim 1 or 2 for the preparation of 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-G ln (triphenylmethyl) -0-3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazinyl, characterized characterized in that one uses appropriately substituted starting materials. 22. Eine Verbindung der Formel I,22. A compound of the formula I, IlIl R₁-NH-HC-C-O-R₂ R ₁ -NH-HC-COR ₂ I (I)I (I) (CH₂)_n (CH ₂ ) _n O=C-NH-R₃ O = C-NH-R ₃ worin η für 1 oder 2 steht, R₁ Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe, R₂ Wasserstoff oder eine Carboxylschutzgruppe und R₃Triphenylmethyl, 4-Monomethoxy-trityl oder4,4'-Dimethoxy-trityl bedeuten, ein Salz einer solchen Verbindung mit einer salzbildenden Gruppe oder ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat einer solchen Verbindung der Formel I, worin R₁ für eine Aminoschutzgruppe und R₂ für Wasserstoff stehen.wherein η is 1 or 2, R _{1 is} hydrogen or an amino protecting group, R _{2 is} hydrogen or a carboxyl protecting group and R _{3 is} triphenylmethyl, 4-monomethoxy-trityl or 4,4'-dimethoxy-trityl, a salt of such a compound having a salt-forming group or a reactive carboxylic acid derivative of such a compound of formula I wherein R _{1 is} an amino protecting group and R _{2 is} hydrogen. 23. Eine Verbindung nach Anspruch 22 der Formel I, worin R₁ eine Aminoschutzgruppe, R₂ Wasserstoff und R₃Triphenylmethyl, 4-Monomethoxy-trityl oder4,4'-Dimethoxytrityl bedeuten, oder ein Metall- oder Ammoniumsalz davon.23. A compound according to claim 22 of the formula I, wherein R _{1 is} an amino protecting group, R _{2 is} hydrogen and R _{3 is} triphenylmethyl, 4-monomethoxy-trityl or 4,4'-dimethoxytrityl, or a metal or ammonium salt thereof. 24. Eine Verbindung nach Anspruch 22 der Formel I, worin R₁ Benzyloxycarbonyl, 9-Fluorenylmethoxycarbonyl, Allyloxycarbonyl oder tert.-Butyloxycarbonyl, R₂ Wasserstoff und R₃ Triphenylmethyl bedeuten, oder ein Metall- oder Ammoniumsalz davon.A compound according to claim 22 of formula I wherein R _{1 is} benzyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl, allyloxycarbonyl or tert-butyloxycarbonyl, R _{2 is} hydrogen and R _{3 is} triphenylmethyl, or a metal or ammonium salt thereof. 25. Eine Verbindung nach einem der Ansprüche 22-24 der Formel I, worin R₁ 9-Fluorenylmethoxycarbonyl bedeutet, oder ein Metall- oder Ammoniumsalz einer solchen Verbindung, worin R₂ für Wasserstoff steht.25. A compound according to any one of claims 22-24 of the formula I, wherein R ₁ signifies 9-fluorenylmethoxycarbonyl, or a metal or ammonium salt of such a compound, wherein R _{2 is} hydrogen. 26. Benzyloxycarbonyl-Asn(triphenylmethyl)-OH oder ein Metall- oder Ammoniumsalz davon nach Anspruch 22.26. Benzyloxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -OH or a metal or ammonium salt thereof according to claim 22. 27. 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl-Asn(triphenylmethyl)-OH oder ein Metall- oder Ammoniumsalz davon nach Anspruch 22.27. 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -OH or a metal or ammonium salt thereof according to claim 22. 28. H-Asn(triphenylmethyl)-OH oder ein SiIz davon nach Anspruch 22.28. H-Asn (triphenylmethyl) -OH or a SiIz thereof according to claim 22. 29. Tert.-butyloxycarbonyl-Asn(triphenylmethyl)-OH oder ein Salz davon nach Anspruch29. Tert-butyloxycarbonyl-Asn (triphenylmethyl) -OH or a salt thereof according to claim 30. Benzyloxycarbonyl-Gln(triphenylmethyl)-OH odereii, Metall-oder Ammoniumsalz davon nach Anspruch 22.30. Benzyloxycarbonyl-Gln (triphenylmethyl) -OH or diary, metal or ammonium salt thereof according to claim 22. 31. 9-Fluorenyl-methoxycarbonyl-Gln(triphenylmethyl)-0H oder ein Metall- oder Ammoniumsalz davon nach Anspruch 22.31. 9-fluorenyl-methoxycarbonyl-Gln (triphenylmethyl) -OH or a metal or ammonium salt thereof according to claim 22. 32. H-Gln(triphenylmethyl)-OH oder ein Salz davon nach Anspruch 22.32. H-Gln (triphenylmethyl) -OH or a salt thereof according to claim 22. 33. Tert.-butyloxycarbonyl-Gln(triphenylmethyl)-OH oder ein Salz davon nach Anspruch33. Tert-butyloxycarbonyl-Gln (triphenylmethyl) -OH or a salt thereof according to claim 34. Ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat nach Anspruch 22 einer der in den Ansprüchen 23-33 beanspruchten Verbindungen.34. A reactive carboxylic acid derivative according to claim 22 of any of the claims claimed in claims 23-33. 35. Ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat nach Anspruch 34 in Form eines 2,4,5-Trichlorphenylesters, Pentafluor-phenylesters, eines Säurechlorids, eine > symmetrischen Anhydrids, eines Esters mit 1-Hydroxybenztriazol oder eines Esters mit S^-Dihydro-S-hydroxy^-oxo-I^.S-benzotriazin oder eines Esters mit N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboximid.35. A reactive carboxylic acid derivative according to claim 34 in the form of a 2,4,5-trichlorophenyl ester, pentafluoro-phenyl ester, an acid chloride, a> symmetrical anhydride, an ester with 1-hydroxybenzotriazole or an ester with S ^ -dihydro-S-hydroxy ^ -oxo-I ^ .S-benzotriazine or an ester with N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide. 36. g-Fluorenyl-methoxycarbonyl-AsnUriphenylmethyll-O^AB-trichlorphenyl nach Anspruch 22.36. g-Fluorenyl-methoxycarbonyl-AsnUriphenylmethyll-O ^ AB-trichlorophenyl according to claim 22. 37. g-Fluorenyl-methoxycarbonyl-GlnUriphenylmethylJ-O^AS-trichlorphenyl nach Anspruch 22.37. g-Fluorenyl-methoxycarbonyl-GlnUriphenylmethylJ-O ^ AS-trichlorophenyl according to claim 22. 38. g-Fluorenyl-methoxycarbonyl-AsndriphenylmethyD-O-pentafluor-phenyl nach Anspruch 22.38. g-fluorenyl-methoxycarbonyl-AsndriphenylmethyD-O-pentafluor-phenyl according to claim 22. 39. Q-Fluorenyl-methoxycarbonyl-GlnltriphenylmethyD-O-pentafluor-phenyl nach Anspruch 22.39. Q-fluorenyl-methoxycarbonyl-GlnltriphenylmethyD-O-pentafluor-phenyl according to claim 22. 40. g-Fluorenyl-methoxycarbonyl-AsnltriphenylmethyD-O-S^-dihydro-S-hydroxy^-oxo-I^.S-benzotriazinyl nach Anspruch 22.40. g-Fluorenyl-methoxycarbonyl-AsnltriphenylmethyD-O-S ^ -dihydro-S-hydroxy ^ -oxo-l ^ .S-benzotriazinyl according to claim 22. 41. S-Fluorenyl-methoxycarbonyl-GlndriphenylmethyD-O-S^-dihydro-S-hydroxy^-oxo-i^^- benzotriazinyl nach Anspruch 22.41. S-fluorenyl-methoxycarbonyl-GlndriphenylmethyD-O-S ^ -dihydro-S-hydroxy ^ -oxo-i ^^ - benzotriazinyl according to claim 22.