DD224950A1 - TEST STRIPS FOR DETERMINING H LOW 2 O LOW 2 BZW. H LOW 2 O LOW 2-FABRIC MIXTURES - Google Patents

Abstract

Die Erfindung betrifft einen Teststreifen zur Bestimmung von H2O2 bzw. H2O2-bildenden Stoffgemischen, insbesondere von Glucose, Harnsaeure oder Cholesterol. Das Ziel besteht darin, die Anzahl farbbildender Bestandteile von Teststreifen zu verringern, die mehr als einen Farbkuppler enthalten. Das Ziel wird erfindungsgemaess dadurch erreicht, dass der Teststreifen neben den ueblichen Ingredenzien, wie z. B. Enzyme und oxydierbare p-Phenylendiaminderivate, unsymmetrische bifunktionelle Farbkuppler, deren funktionelle Gruppen eine unterschiedliche Kupplungsaktivitaet aufweisen, der allgemeinen Formel X-NH-Y; X-NH-Z; Y-NH-Z, wobei X Derivate des Acet- bzw. Benzoylessigester, Y Naphtholderivate und Z Pyrazolonderivate sind, enthaelt. Der Teststreifen wird in der medizinischen Diagnostik, in der chemischen und biochemischen Analytik eingesetzt.The invention relates to a test strip for the determination of H2O2 or H2O2-forming mixtures, in particular of glucose, uric acid or cholesterol. The goal is to reduce the number of color-forming constituents of test strips containing more than one color coupler. The object is inventively achieved in that the test strip in addition to the usual ingredients such. B. enzymes and oxidizable p-phenylenediamine, asymmetric bifunctional color couplers whose functional groups have a different coupling activity, the general formula X-NH-Y; X-NH-Z; Y-NH-Z, wherein X are derivatives of the acetyl or Benzoylessigester, Y naphthol derivatives and Z Pyrazolonderivate contains. The test strip is used in medical diagnostics, in chemical and biochemical analysis.

Description

Dr, KanrigDr, Kanrig

Or. UllraannOr. Ullraann

Dr. BrandstaedterDr. Brandstaedter

"Teststreifen zur Bestimmung von H₂O₂ bzw. H₂Q₂-bildend3n Stoffgemischen" "Test strips for the determination of H ₂ O ₂ or H ₂ Q ₂ -bildend3n mixtures"

Anwendungsgebist der ErfindungApplication of the invention

Die Erfindung betrifft einen ein- oder mehrschichtigen Teststreifen zur fotoraetrischen» vorzugsweise aber zur visuellen Bestimmung von H₂O₂,, Peroxiden und H„Q,,-bildenden Stoffgenischen,, insbesondere zum Nachweis von Glucose, Harnsäure oder Cholesterol, bei denen HpO₂ als Produkt gebildet wird. Der Einsatz ist in der klinischen Diagnostik raöglich,, z, 3* zur Bestimmung von Glukose mittels GOD., insbesondere zu Prophylaxe und Therapie des Diabetes inellitus,. desweiteren in der chemischen und biochemischen Analytik, in der Produktion für Meß- und Kontrollzwecke sowie in der Nahrungsgütervvirtschaft,. der mikrobiologischen Industrie und der Landwirtschaft ·The invention relates to a monolayer or multilayer test strip for the photoreactive, but preferably for the visual, determination of H ₂ O ₂ peroxides and H ₂ O-forming substances, in particular for the detection of glucose, uric acid or cholesterol, in which HpO ₂ is formed as a product. The use is in the clinical diagnostics possible z, 3 * for the determination of glucose by means of GOD, in particular for the prophylaxis and therapy of diabetes inellitus. furthermore in chemical and biochemical analysis, in production for measuring and control purposes as well as in the food industry. the microbiological industry and agriculture ·

Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions

Der Nachweis von H₂O₂ bzw. von HpO₂-bildenden Stoffgemischen ist für die medizinische Diagnostik, die Fermentationsindustrie und andere Produktionsbereiche sowie für die chemische und biochemische Analytik von Interesse. Die routinemäßigen Bestimmungsverfahren z. B. in der mikrobiologischen Industrie sind zeit- und raaterialaufwendig.The detection of H ₂ O ₂ or of HpO ₂ -forming substance mixtures is of interest for medical diagnostics, the fermentation industry and other production areas as well as for chemical and biochemical analysis. The routine determination method z. B. in the microbiological industry are time consuming and raaterialaufwendig.

Mit den bekannten Teststreifen (WP 145 423, WP 135 243, WP 140 175, US-PS 4 042 335, US-PS 4 050 398), die aus mit Indikatorlösungen getränktem Vliesmaterial bzw. aus bekannten schichtbildenden Systemen der Filmindustrie bestehen _r in dieWith the known test strips (WP 145 423, WP 135 243, WP 140 175, US-PS 4,042,335, US-PS 4,050,398) provided with indicator solutions soaked non-woven material or from known film-forming systems of the film industry _r are made in the

die Nachweisreagentien eingebettet sind, lassen sich insbesondere visuelle Bestimmungen der Konzentration von Inhaltsstoffen über die Variation der Farbtiefe des Indikators bei gleichem Farbton durchführen. Machteilig für diese Systeme ist die geringe Auflösung des Auges bei relativ großen Farbtiefen. Ein weiterer Nachteil der meisten handelsüblichen Teststreifen.ist die Inkonstanz des Farbstoffes, was zur Folge hat, daß ein vorgegebenes Zeitregime bei der Handhabung einzuhalten ist und damit der Einsatz durch ungeschultes Personal nur bedingt möglich ist.the detection reagents are embedded, in particular visual determinations of the concentration of ingredients can be carried out on the variation of the color depth of the indicator with the same hue. Part of the complexity of these systems is the low resolution of the eye with relatively large color depths. Another disadvantage of most commercial Teststreifen.ist is the inconsistency of the dye, which has the consequence that a predetermined time regime is to be observed in the handling and thus the use of untrained personnel is possible only conditionally.

Teststreifen (Deutsches Gesundheitswesen _24 (1969) 1368, Deutsches Gesundheitswesen 2Λ (1969) 1372), die durch Einfärbung des Beobachtungsuntergrundes' eine Farbtonänderung in Abhängigkeit von der Analytkonzentration aufweisen, zeigen diese Farbtcnänderung nur in unzureichendem Ausmaß, oft verbunden mit einer Inkonstanz des Farbstoffes, Teststreifen (Otsch. raed.. Wsch« 107 (1932) 1346, Diabetes 51, Suppl. 2 (1932), 105», Lanzet I (1980),. 653), die einen relativ differenzierten Nachweis in Abhängigkeit von der Analytkonzentration durch verschiedenfarbige isolierte Testbezirke auf dem Teststreifen ermöglichen, haben einen komplizierten Aufbau.Test strips (German Health Care _24 (1969) 1368, German Health Care 2Λ (1969) 1372), which have a change in hue depending on the analyte concentration due to coloring of the observation background, show this color change only to an insufficient extent, often with an inconsistency of the dye. Teststrips (Otsch. Raed. Wsch. 107 (1932) 1346, Diabetes 51 , Suppl. 2 (1932), 105, Lanzet I (1980), 653), which show a relatively differentiated detection as a function of the analyte concentration by different-colored To enable isolated test districts on the test strip have a complicated structure.

Es wurde bereits vorgeschlagen. Teststreifen mit 2 Farbkupplern zu verwenden, wobei sich die Kupplsrkomponenten entweder in einer Schicht oder in beiden Schichten befinden. Dieser Streifen.-beruht auf unterschiedlichen Reaktionsgeschwindigkeiten bzw. auf unterschiedlichen Konzentrationen der beiden Kuppler und ermöglicht eine deutliche Differenzierung interessierender Konzentrationsbereiche des Analyten. Die Einstellung des Konzentrationsverhältnisses der beiden Kuppler ist jedoch mit einem gewissen Aufwand verbunden.It has already been proposed. Use test strips with 2 color couplers, with the coupler components either in one layer or in both layers. This strip is based on different reaction rates or on different concentrations of the two couplers and allows a clear differentiation of concentration ranges of interest of the analyte. However, the adjustment of the concentration ratio of the two couplers is associated with a certain effort.

Ziel der ErfindungObject of the invention

Das Ziel der Erfindung besteht darin,, die Anzahl farbbildender Bestandteile in Teststreifen und damit die Zahl aer notwendigen Schichten zu verringern, ohne auf den Farbtonvaechsei in Abhängigkeit von der Konzentration der zu bestimmenden Substanz zu verzichten.The aim of the invention is to ,, to reduce the number of color-forming components into test strips and therefore the number aer necessary layers, without sacrificing the Farbtonvaechsei depending on the concentration of the substance to be determined.

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Aufgabe der Erfindung ist es, unter Verringerung der Anzahl der farbbildenden Bestandteile einen Teststreifen zu schaffen, mit dem H-O» bzw. H^O^-bildende Stoffgeniische, insbesondere Glukose,; Harnsäure und Cholesterol in biologischen Flüssigkeiten bestimmt «erden könnenThe object of the invention is to provide a test strip while reducing the number of color-forming constituents, with the H-O »or H ^ O ^ -bildliche Stoffgeniische, especially glucose ,; Uric acid and cholesterol can be determined in biological fluids

Dar erfindungsgemäße Teststreifen, ds'r substrat'spezif ische' ⁱ"ⁱ2⁰2""^erzeu^^enc^^{e unc}^ i-UCU-übertragende Enzyme, oxydierbare p-Phenylendiaminderivate und Farbkuppler, die ein- oder mehrschichtig mit Gelatine als Bindemittel auf transparente oder nichttransparente-Träger-aufgebracht sind, enthält,: ist dadurch gekennzeichnet, daS _;ai_s Kuppler oifun.ktionelle .Farbkuppler mit unterschiedlicher Kupplungsaktivität der beiden kupplungsfähigen Gruppen der allgemeinen Formeln X-NH-Y, X-NH-Z und Y-NH-Z eingesetzt werden, wobeiDar test strip according to the invention, ds'r substrat'spezif ic ^{'i "i} 2 ⁰ 2"^"erzeu ^ ^enc ^ ^e ^ i ^{unc-UCU-transferring} enzymes, oxidizable p-phenylenediamine derivatives and color couplers, the one or more layers with gelatin as a binder transparent or non-transparent carrier are applied, includes ,: is characterized in _that; ai _s couplers oifun.ktionelle .Farbkuppler with different coupling activity of the two is capable of coupling groups of the general formulas X-NH-Y, X-NH-Z and Y -NH-Z are used, wherein

0 1/0 1 /

X = R₁-C-CH₀-C-X = R ₁ -C-CH ₀ -C-

1 „ d 1 " d

oderor

odarodar

SO-H , ³ oder SO-H, ³ or

OHOH

oderor

OHOH

ChLChL

₂ a S₃ = R₄ = H, SO₃H ₅ ..« H, SO₃H, .Br ₂ a S ₃ = R ₄ = H, SO ₃ H ₅ .. «H, SO ₃ H, .Br

R₅ = H, BrR ₅ = H, Br

Z =Z =

R₇ = CH₃, C₂H₅,R ₇ = CH ₃ , C ₂ H ₅ ,

Ro = H, SO^H, Br •»0 ^Ro = H, SO ^ H, Br • »0 ^

oderor

C6C6

Cici

Bei der Herstellung des Teststreifens werden alle Ingredenzien in Gelatine-Lösung eingearbeitet und nach üblichen Verfahren auf eine flexible,, folienartige _t; transparente oder nichttransparente Unterlage ein- oder mehrschichtig aufgetragen, wobei die Gesamtschichtdicke ca. 100 ,um nicht überschreitet »Beim Auftragen einer - beispielsweise glucosehaltigen - Flüssigkeit entsteht unter Wirkung des Enzyms Glucoseoxidase Wasserstoffperoxid, das unter Mitwirkung von Peroxidase das p-Phenylendiaminderivat oxydiert. Dieses Oxydationsprodukt bildet mit dem anwesenden unsymmetrischen bifunktionellen Kuppler,, wobei die beiden funktionellen Gruppen eine unterschiedliche Kupplungsaktivität aufweisen, einen diffusionsfesten Farbstoff- dessen Farbton und Farbtiefe von der Konzentration des zu bestimmenden Stoffes und vom eingesetzten Kuppler abhängt..In the preparation of the test strip, all ingredients are incorporated into gelatin solution and applied by conventional methods to a flexible, sheet-like _t; transparent or non-transparent substrate applied in one or more layers, the total layer thickness being approx. 100, not exceeding »When applying a liquid, for example glucose-containing, hydrogen peroxide is produced under the action of the enzyme glucose oxidase, which oxidizes the p-phenylenediamine derivative in cooperation with peroxidase. This oxidation product forms with the present unbalanced bifunctional coupler, wherein the two functional groups have a different coupling activity, a diffusion-resistant dye- whose hue and color depth on the concentration of the substance to be determined and the coupler used depends.

Der entstandene Farbstoff absorbiert entsprechend der chemischen Konstition des chromophoren KupplersysteinsThe resulting dye absorbs according to the chemical constitution of the chromophoric Kupplersysteins

- im. .bläuen.-und roten Teil des Spektrums entsprechend der allgemeinen Formel X-NH-Y: bisfunktionelle Kuppler, .aus Derivaten des Acetessigesterbzri Benzoylessigester und des Naphthols bzw. Phenols- in the. .Blueuen- and red part of the spectrum according to the general formula X-NH-Y: bisfunctional couplers .from derivatives of acetoacetate bzri Benzoylessigester and naphthol or phenol

- im blauen und grünen Bereich des Spektrums entsprechend der allgemeinen Formel X-NH-Z: bisfunktionelle Kuppler aus Derivaten des Acetessigester bzw. Benzoylessigester und 3-Amino-pyrazolonen oder- In the blue and green region of the spectrum according to the general formula X-NH-Z: bisfunctional couplers from derivatives of the acetoacetic ester or Benzoylessigester and 3-amino-pyrazolones or

- im grünen und roten Wellenbereich entsprechend der allgemeinen Formel Y-NH-Z: bisfunktionelis Kuppler aus Derivaten des 3-Araino-pyrazolon und des Naphthols bzw. Phenols oder 8-Hydroxychinolins.- In the green and red wave range according to the general formula Y-NH-Z: bisfunktionelis couplers from derivatives of 3-araino-pyrazolone and naphthol or phenol or 8-hydroxyquinoline.

Die Farbverschiebungen werden durch die unterschiedliche Reaktivität der kupplungsaktiven Teilkomponenten des öisfunktionellen Kupplers verursacht, die durch Substitution des Wasserstoffs an der aktiven Methylengruppe im Ringsyst-em durch Br, Ci oder So,H gezielt' beeinflußt werden kann.The color shifts are caused by the different reactivity of the coupling-active subcomponents of the oleo-functional coupler, which can be specifically influenced by substitution of the hydrogen on the active methylene group in the ring system by Br, Ci or So, H '.

Ausführungsbeispieleembodiments Beispiel 1 . Example 1 .

50 ml einer 9 %i.gen Gelatinelösung, die 1 ramol N,H -Dimethylp-Phenylendiaroin als Farbentwickler und 2 mmol l-Hydroxy-8-(benzoylessigesteraraid)~naphthalin-5-sulfonsäure als bis funktioneilen Gelb- und Blaugrünkuppler sowie die Enzyme Glucoseoxidase und Peroxidasa enthalten, werden auf einer transparenten Celluloseacetatfolie aufgetragen. Der pH-Wert der Lösung beträgt 7,0. Als Schutzschicht wird ein überzug mit gehärteter Gelatine aufgetragen,50 ml of a 9% gelatin solution containing 1 mmol of N, H- dimethylp-phenylenediaroin as color developer and 2 mmol of 1-hydroxy-8- (benzoylacetic ester) naphthalene-5-sulfonic acid as a bis-functional yellow and cyan coupler and the enzymes Glucose oxidase and peroxidase are applied to a transparent cellulose acetate film. The pH of the solution is 7.0. As a protective layer, a coating with hardened gelatin is applied,

Oer trockene Teststreifen wird durch Glucoselösungen zunehmender Konzentration von Gelb über Grün nach Slaugrün verfärbt . .Oer dry test strips are discolored by glucose solutions of increasing concentration of yellow over green to slug green. ,

Dia Konzentrationsbestiramung der Glucose kann visuell durch Vergleich, mit Farbkoraperatoren und photoraetrisch bei 2 Wellenlängen in kommerziellen Spektrophotornatern durchgeführt werden.Dia concentration determination of glucose can be performed visually by comparison, with color modifiers and photoradically at 2 wavelengths in commercial spectrophotornates.

Beispiel.2 - 11Example.2 - 11

Gemäß-der Verfahrensweise im Beispiel 1 wird der genannte Gelb-3laugrün-Kuppler durch folgende kuppelnde Verbindungen ersetzt: .According to the procedure of Example 1, said yellow-lauryl coupler is replaced by the following coupling compounds:.

2. l-Hydroxy-y-iacetessigsäureamid)- naphthalin-3-sulfonsäure2. l-hydroxy-y-acetoacetamide) - naphthalene-3-sulfonic acid

3. l-Hydroxy-S-^acetessigsäureamid)- naphthalin-3,6-disulfonsäure3. l-hydroxy-S- ^ acetoacetic acid amide) - naphthalene-3,6-disulfonic acid

4. I-Hydroxy-S-Xacetsssigsäureamid)- naphtnalin-5—sulfonsäure4. I-hydroxy-S-Xacetsssigsäureamid) - naphthalen-5-sulfonic acid

5* l-Hydroxy-o-(acetassigsäurearaid)- naphthalin-3-sulfonsäure5 * l-Hydroxy-o- (acetoacetic acid raping) -naphthalene-3-sulfonic acid

6. l-Hydroxy-2- siethyl-6-{ acetessigsäureamid)- benzol 7.. 1-Hy d r oxy-7 - (benzoy lass igsä u reamid)-na ph t haiin-3-sulf onsäure6. 1-Hydroxy-2-ethyl-6- (acetoacetamide) -benzene 7-1-Hydroxy-7-benzoic acid amide) -phthalic acid-3-sulfonic acid

8. l-Hydroxy-8-(benzoylessigsäureamid)-naphthalin-3,5-di-8. l-hydroxy-8- (benzoylacetic acid amide) -naphthalene-3,5-di-

sulfonsäura 9* l-Hydroxy-8-(benzoylessigsäureamid)-naphthalin-5-sulfon-sulfonic acid 9 * l-hydroxy-8- (benzoylacetic acid amide) -naphthalene-5-sulfone

säure 10« l-iHydroxy-6-(benzoylessigsäureamid)-naphthalin-3-sulfon-acid 10'-1-hydroxy-6- (benzoylacetic acid amide) -naphthalene-3-sulfone

säure 11. 1-Hydroxy-2-raethy1-6-(benzoylessigsäureamid)-benzolacid 11. 1-Hydroxy-2-hydroxyethyl 6- (benzoylacetamide) benzene

Beispiel 12Example 12

Zur Bestimmung von Glucose in biologischen Flüssigkeiten wird ein transparenter Filmstreifen nach folgendem Verfahren hergestellt : · Eine 7 %ige Gelatinelösung mit 1*5 nmol l-Phenyl-(Acstessigsäurea.mid)-4-brom-4,5,-dihydro-pyrazol-5-on als bis funktional· le.r .Gelbpurpurkuppler*. 3 .cjmol ...eines Derivates der p-Phenylendiaminreihe sowie Glucoseoxidase und Peroxidase und einem Gelatine vernetzenden Mittel zur Erhöhung der Naßfestigkeit werden vergossen und getrocknet.For the determination of glucose in biological fluids, a transparent film strip is prepared according to the following procedure: A 7% gelatin solution containing 1 × 5 nmol 1-phenyl- (ac-4-acylmethyl) -4-bromo-4,5, -dihydro-pyrazole 5-on as functional to neutral yellow magenta coupler *. 3 .Cjmol ... a derivative of the p-phenylenediamine series and glucose oxidase and peroxidase and a gelatin-crosslinking agent to increase the wet strength are poured and dried.

Mit steigendem Glucosegehalt in der Analysenprobe ,werden Farbänderungen von Gelb über Purpur nach Rot beobachtet«As the glucose level in the analytical sample increases, color changes from yellow to purple to red are observed «

Beispiel 13 - 24. Example 13 - 24 .

Gemäß der Verfahrensweise im Beispiel 12 wird der genannte Gelb-Purpur-Kuppler durch folgende kuppelnde Verbindungen ersetzt: .13. l-Methyl-3-(acetessigsäureamid)-4,5-dihydrapyrazol-5-onFollowing the procedure of Example 12, said yellow-magenta coupler is replaced by the following coupling compounds: .13. l-methyl-3- (acetoacetamide) -4,5-dihydrapyrazol-5-one

14. l-Äthyl-3-(acetessigsäur3amid)-4,5-dihydropyrazol-5-on14. 1-Ethyl-3- (acetoacetic acid amide) -4,5-dihydropyrazol-5-one

15. 1-Pheny1-3-(acetessigsäureamid)-4_r5-dihydropyrazol-5-on15. 1-Pheny1-3- (acetoacetic acid amide) -4 _r 5-dihydropyrazol-5-one

16. l-(2,4,6-Trichlorphenyl)-3-(acetessigsäureamid)-4,5-dihydropyrazol-5-on16. 1- (2,4,6-trichlorophenyl) -3- (acetoacetic acid amide) -4,5-dihydropyrazol-5-one

17. l-Methyl-3-(acetessigsäureamid)-4-sulfo-4-j5-dihydropy razol-5-on17. l-Methyl-3- (acetoacetic acid amide) -4-sulfo-4-j5-dihydropyrazol-5-one

18. l-Äthyl-3-(acetessigsäureamid)-4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-on18. 1-Ethyl-3- (acetoacetic acid amide) -4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-one

19« l>-Phenyl-3-(acetessigsäursamid)-4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-on19 "-phenyl-3- (acetoacetic acid amide) -4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-one

20. 1-(2,4,6-Trichlorphenyl)-(ac3tessigsäureamid)-4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5~on20. 1- (2,4,6-trichlorophenyl) - (ac-3-aceto-amide) -4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-one

21. l-Methyl-3-(acetessigsäureamid)-4-Brom-4,5-dihydropyra~ zol-5-on21. 1-Methyl-3- (acetoacetic acid amide) -4-bromo-4,5-dihydropyrazol-5-one

22. l-Äthyl-3-{acetessigsäureamid)-4-Bro(n-4,5-dihydropyrazol~5-on22. 1-Ethyl-3- {acetoacetic acid amide) -4-Bro (n-4,5-dihydropyrazole ~ 5-one

23· l-Phenyl-3-(acetessigsäureamid)-4~8rom-4,,5-dihydropy ra-23 · 1-phenyl-3- (acetoacetic acid amide) -4 ~ 8rom-4,, 5-dihydropyrazine

zoI-5-on 24. l-(2„.4_#5-Trichlorphenyl)-3-(acetessigsäureaniid)-4-arora-4„5-dihydropyrazol-5-onzoI-5-one 24. 1 - (2 ".4 _# 5-Trichlorophenyl) -3- (acetoacetic anhydride) -4-arora-4" 5-dihydropyrazol-5-one

oder analog zu den vorher angeführten Beispielen anstelle der Derivate der Acetessigsäure durch Derivate der Senzoylessigsäure,., wobei entsprechend den unterschiedlichen Aktivitäten der Kuppler Farbtiefe und Farbton variieren.or analogously to the examples given above, instead of the derivatives of acetoacetic acid by derivatives of Senzoylessigsäure,., Wherein vary according to the different activities of the coupler color depth and hue.

Beispiel 25Example 25

Zur Bestimmung von Harnsäure wird ein Teststreifen nach der herkömmlichen Beschichtungstechnologie aus einer Gelatinelösung», die die aktiven Zusätze enthält, auf Fotorohpapier hergestellt,For the determination of uric acid, a test strip according to the conventional coating technology is prepared from a gelatin solution containing the active additives on photographic paper,

Oie Schicht enthält 0^5 mtnol l-Phenyl-3-(5-hydroxy-8-broinchinolin-6-carbamido)-4_r5-dihydro-pyrazol-5-on als bisfunktionellen Kuppler und 1 ramol fJjNjDiäthyl-p-phenylendiamin sowie Uricase und Peroxidase.Oie layer contains 0 ^ 5 mtnol l-phenyl-3- (5-hydroxy-8-broinchinolin-6-carbamido) -4 _r 5-dihydro-pyrazol-5-one as a bifunctional coupler and 1 ramol fJjNjDiäthyl-p-phenylenediamine, and Uricase and peroxidase.

Auf die; Reaktionsschicht wird eine zusätzliche Schutzschicht von gehärteter Gelatine aufgetragen und ein Schicht-pH von 8 eingestellt. Bei'Einwirkung von Harnsäure ändert sich in Abhängigkeit von der Konzentration die Farbe von Purpur über Blau-Grün nach Blau.On the; Reaction layer is coated with an additional protective layer of hardened gelatin and a layer pH of 8 is set. When uric acid is used, the color changes from purple to blue over blue-green depending on the concentration.

Beispiel 26 - 36Example 26 - 36

Gemäß der Verfahrensweise im Beispiel 25 wird der genannte Purpur-Blaugrün-Kuppler durch folgende kuppelnde Verbindungen ersetzt:Following the procedure of Example 25, said magenta cyan coupler is replaced by the following coupling compounds:

26. l-Phenyl-3-(1-hydroxy-naphthalin-2-carbatnido)-4,5-dihydropyrazol-5-on26. 1-Phenyl-3- (1-hydroxy-naphthalene-2-carbatnido) -4,5-dihydropyrazol-5-one

27. l-Phenyl-3-(1-hydroxy-naphthalin-2-carbamido)^-brora^,5-dihydropyrazol-5-on27. 1-Phenyl-3- (1-hydroxy-naphthalene-2-carbamido) - brora ^, 5-dihydropyrazol-5-one

28. l-Phenyl-3-(l-hydroxy-naphtbalin-2-carbaraido)-4-sulfo-4»5-dihydropyrazol-5-on28. 1-Phenyl-3- (1-hydroxy-naphthbaline-2-carbaraido) -4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-one

29. l-Phenyl-3-(5-hydroxy-8-bromchinolin-6-carbaraido)-4-brom-4_r5-dihydropyrazol-5-on29 l-Phenyl-3- (5-hydroxy-8-bromoquinoline-6-carbaraido) -4-bromo-4 _r 5-dihydropyrazol-5-one

30. l-Phenyl-3-(5-hydroxy-8-brorachinolin-6-carbamido}~4-sulfo-4„5-dihydropyrazol-5-on30. 1-Phenyl-3- (5-hydroxy-8-bromoquinoline-6-carbamido) -4-sulfo-4 "5-dihydropyrazol-5-one

31. 1-Pheny1—3-(5-hydroxychinolin-6-carbarnido)-A₁ 5-dihydropy razol-5-on31. 1-Pheny1-3- (5-hydroxyquinoline-6-carbarnido) -A ₁ 5-dihydropy razol-5-one

32. l-Phenyl-3-(5-hydroxychinolin-6-carbaroido)-4-brom-4,5-dihydropyrazol-5-on32. 1-Phenyl-3- (5-hydroxyquinoline-6-carbaroido) -4-bromo-4,5-dihydropyrazol-5-one

33. 1-Pheny1-3-(5-hydroxychinolin-6-carbaraido)-4-sulf0-4,5-dihydropyrazol-5-on33. 1-Pheny1-3- (5-hydroxyquinoline-6-carbaraido) -4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-one

34. l-Phenyl-3-(2-hydroxy-3-raethyl-benzaraid)-4,5-dihydropyrazol-5-on34. 1-Phenyl-3- (2-hydroxy-3-ethylbenzadiazido) -4,5-dihydropyrazol-5-one

35. l-Phenyl-3-(2-hydroxy-3-msthyl-benzaniid)-4-broin-4,.5-dihydropy razol-5-on35. 1-Phenyl-3- (2-hydroxy-3-methyl-benzimidide) -4-broin-4, 5-dihydropyrazol-5-one

36· l-Phenyl-3-{2-hydroxy-3-methyl-benzaraid)-4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-on36 × 1-phenyl-3- {2-hydroxy-3-methylbenzaraid) -4-sulfo-4,5-dihydropyrazol-5-one

wobei außerdem die 1-Pheny!gruppe im 4,5-dihydropyrazolon-5-on-lRing durch Methyl-, Äthyl- und 2,4,5-Trichlorphsny!gruppen ausgetauscht werden kann.in addition, the 1-phenyl group in the 4,5-dihydropyrazolone-5-one ring can be replaced by methyl, ethyl and 2,4,5-trichlorophyllene groups.

Claims (1)

£rfindungsanspruch£ rfindungsanspruch Teststreifen zur Bestimmung von Glucose, Harnsäure und/oder Cholesterol auf der Grundlage der Wirkung substratspezifischer H-Op-erzeugender und HpQp-übertragender Enzyme,, oxydierbarer p-Phenylendiaminderivaten und Farbkupplern, die ein- oder mehrschichtig mit Gelatine als Bindemittel auf transparente oder nichttransparente Träger aufgebracht sind, dadurch gekennzeichnet, daß der Teststreifen als Kuppler bisfunktioneile Farbkuppler mit unterschiedlicher Kupplungsaktivität der beiden kupplungsfähigen Gruppen der allgemeinen Formel X-NH-Y, X-NH-Z und Y-NH-Z enthält, wobeiTest strips for the determination of glucose, uric acid and / or cholesterol on the basis of the effect of substrate-specific H-Op-generating and HpQp-transmitting enzymes, oxidizable p-phenylenediamine derivatives and color couplers which are mono- or multi-layered with gelatin as a binder on transparent or non-transparent carriers are applied, characterized in that the test strip contains as a coupler bisfunktioneile color coupler with different coupling activity of the two coupling-capable groups of the general formula X-NH-Y, X-NH-Z and Y-NH-Z, where 0 110 11 χ = R-C -CH₀- C-1 II 2χ = RC -CH ₀ - C-1 II 2 oderor -* oder- * or OHOH oderor oderor R₂= R₃= R₄= H, SO₃HR ₂ = R ₃ = R ₄ = H, SO ₃ H R₅= H, 3O₃H, BrR ₅ = H, 3O ₃ H, Br R,= H, 3rR, = H, 3r -ΛΛ --ΛΛ - *+ * + R.R. R_Q= H, SO-H, BrR _Q = H, SO-H, Br oderor CLCL b w b w