DD205696A1 - METHOD OF PREPARING AN ANTHRACYCLINE ANTIBIOTICUM AND ITS AGLYCONE - Google Patents

Abstract

DIE ERFINDUNG BEZIEHT SICH AUF VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG EINES ANTHRACYCLIN-ANTIBIOCUMS SOWIE AGLYKONS, DIE FUER DIE CHEMOTHERAPIE VON TUMOR-, VIRUS- UND DURCH BAKTERIENHERVORGERUFENEN ERKRANKUNGEN BEI MENSCH UND NUTZTIER VON POTENTIELLEM NUTZEN SIND. INSBESONDERE BETRIFFT DIE ERFINDUNG EIN VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG DES BISHER NICHT VERFUEGBAREN ANTIBIOTICUMS BETA-RHODOMYCIN L, SEINER SALZE SOWIE SEINER HYDROLYTISCHEN ABBAUPRODUKTE UNTER VERWENDUNG EINES NEUEN MIKROORGANISMUS, DER NACH INTERSPEZIFISCHER REKOMBINATION ERHALTEN UND ALS STREPTOMYCES VIOLACEUS SUBSP. IREMYCETICUS, STAMM ZIMET 43678, BEZEICHNET WURDE. ZIEL DER ERFINDUNG IST DIE GEWINNUNG EINES ANTHRACYCLIN-ANTIBIOTICUMS MIT POTENTIELL CANCEROSTATISCHEN EIGENSCHAFTEN SOWIE SEINER HYDROLYTISCHEN ABBAUPRODUKTE ALS AUSGANGSSUBSTRATE FUER MUTASYNTHESE UND HALBSYNTHESE, UM DIE PALETTE DERARTIGER PHARMAKA ZU ERWEITERN. DIE AUFGABE WIRD DADURCH GELOEST, DASS DURCH AEROBE SUPMERSFERMENTATION DES NEUEN MIKROORGANISMUS ZIMET 43678 IN MEDIEN MIT GEEIGNETEN C-, N-QUELLEN UND MINERALSALZEN BETA-RHODOMYCIN L GEBILDET, MIT GEEIGNETEN METHODEN AUS MYCEL UND KULTURFILTRAT ISOLIERT UND NACHFOLGEND GEREINIGT UND GEGEBENENFALLS HYDROLISIERT WIRD.The invention relates to processes for the production of an anthracycline antibiotic and aglycone which are useful for the chemo-therapy of tumorous, viral and bacterial-induced diseases in humans and mammalian pots of potentials. More particularly, the invention relates to a process for the preparation of the previously non-available antibiotic BETA-RHODOMYCIN L, ITS SALTS, AND ITS HYDROLYTIC DEGRADATION PRODUCTS USING A NEW MICROORGANISM RECEIVED AFTER INTERSPECIFIC RECOMBINATION AND CONTAINING STREPTOMYCES VIOLACEUS SUBSP. IREMYCETICUS, TRIBUTE ZIMET 43678, WAS DESIGNATED. OBJECTIVE OF THE INVENTION IS THE EXPLOITATION OF AN ANTHRACYCLIN ANTIBIOTICUM WITH POTENTIALLY CANCEROSTATIC PROPERTIES AND ITS HYDROLYTIC DEGRADATION PRODUCTS AS THE OUTPUT SUBSTRATES FOR MUTASYNTHESIS AND HALF-SYNTHESIS TO EXPAND THE PALETTE OF SUCH PHARMAKA. THE TASK IS ESTABLISHED THAT THE AEROBE SUPERMERSFERMENTATION OF THE NEW MICRO-ORGANISM ZIMET 43678 IN MEDIA COMPOSES BETA-RHODOMYCIN L WITH APPROPRIATE C, N-SOURCES AND MINERAL SALTS, ISOLATED WITH METHODS OF MYCEL AND CULTURAL FILTRATE, AND THEN HYDROLISED IF NECESSARY.

Description

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Titel der ErfindungTitle of the invention

Verfahren zur Herstellung eines Anthracyclin-Antibioticums sowie seines AglykonsProcess for the preparation of an anthracycline antibiotic and its aglycone

Anwendungsgebiet -der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung einer antibiotisch wirksamen Substanz sowie deren Derivate, die bei der Chemotherapie von Tumor-, Virus- und durch Bakterien hervorgerufenen Erkrankungen bei Mensch und Nutztier von potentiellem Nutzen sind· Insbesondere betrifft die Erfindung die Gewinnung eines neuen Anthracyclin-Antibioticums, das als Beta-Ehodomycin 1 bezeichnet wird, seiner Salze, sowie seines Aglykone·The invention relates to a process for the preparation of an antibiotically active substance and its derivatives, which are of potential use in the chemotherapy of tumor, virus and bacterial diseases in humans and livestock. In particular, the invention relates to the production of a new anthracycline Antibiotics referred to as beta-ehodomycin 1, its salts, and its aglycone

Charakteristik der bekannten technischen LösungCharacteristic of the known technical solution

Anthracyclinon-Glykoside stellen antibiotisch wirksame Verbindungen dar, deren chromophorer Molekülteil ein 7»8,9,10-tetrahydrotetracenchinon (5*12) darstellt, das mit Zuckern, bevorzugt Aminozuckern, verbunden ist (Brockmann, H., 1963* lortschr. Ohem. Organ, Naturstoffe, 21, 121). Je nach Stellung der peri-ständigen OH-Gruppen am Aglykon werden verschiedene Anthracyclinone unterschieden, die als Glykoside die Bezeichnung Anthracycline tragen und nur in dieser 3?orm biologisch aktiv sind» Mehr als 50 Anthracyclin-Antibiotica sind bisher beschrieben, wovon die Mehrzahl Gemische von schwer voneinander trennbaren Einzelkomponenten darstellen· 2 Anthracyclin-Antibiotica (Doxorubicin-US Patent 3 590 028; Daunorubicin-GB-Patent 1 003 383) sind auf Grund ihrer chemotherapeutischen ?fi.rksamkeit gegen akute Leukämien und solide Tumoren des Menschen bereits klinisch eingesetzt* EinAnthracyclinone glycosides are antibiotically active compounds whose chromophoric moiety is a 7,8,9,10-tetrahydrotetraquinone (5 * 12) linked to sugars, preferably amino sugars (Brockmann, H., 1963 * loc. Organ, natural products, 21, 121). Depending on the position of the peri-permanent OH groups on the aglycone, a distinction is made between various anthracyclinones which carry the name anthracycline as glycosides and are only biologically active in this 3 'orm. More than 50 anthracycline antibiotics have been described hitherto, the majority of which are mixtures of 2 Anthracycline Antibiotics (Doxorubicin US Patent 3,590,028; Daunorubicin UK Patent 1,003,383) are already clinically used because of their chemotherapeutic efficacy against acute leukemias and solid human tumors

uaa . 8 -a-uaa. 8 -a

wesentliches Problem bei der krebschemotherapeutischen Anwendung von Anthracyclin-Antibiotica resultiert aus deren allgemeiner, hämatologischer, digestiver und kardialer Toxizität, die eine umfassendere Anwendung in der Tumorchemotherapie einschränkt und z, B· bei Herzkranken zur Kontraindikation führt» Da sich die Herztoxizität der Anthracycline als besonders störend erwiesen hat, werden ständig neue Derivate bereits bekannter Verbindungen hergestellt und hinsichtlich einer verringerten Toxizität untersucht· Ein Nachteil ist, daß zur Gewinnung chemisch modifizierter Anthräcyclin-Antibiotica zwar chemische Methoden wie Total- und Partialsynthese sowie biochemische Methoden zur enzymatischen Konversion verfügbar sind, deren Anwendung jedoch zu einer unzureichenden Ökonomie der Produktherstellung führt, die eine großtechnische Herstellung dieser Derivate nicht gestattet· Bei den bisher bekannten mikrobiologischen Herstellungsverfahren für Anthräcyclin-Antibiotica werden bevorzugt Gemische chemisch ähnlicher Anthracycline gewonnen, die aus den Mono-, Di-, Tri- oder Polysacchariden unterschiedlicher und bisher unter großtechnischen Bedingungen praktisch nicht trennbarer Aglykone (Anthracyclinone) bestehen·. Das bringt Standardisierungsprobleme für das Bndprodukt mit sich, wenn in Abhängigkeit vom Fermentationsver-' lauf Verschiebungen qualitativer und quantitativer Art im Vielkomponenten-Gemisch auftreten·A major problem in the use of anthracycline antibiotics in cancer chemotherapy results from their general, hematological, digestive and cardiac toxicity, which restricts their broader application in tumor chemotherapy and leads to contraindication in cardiac patients. "Since the cardiac toxicity of anthracyclines is particularly disturbing A drawback is that although chemical methods such as total and partial synthesis and biochemical methods for enzymatic conversion are available for the production of chemically modified anthriccline antibiotics, their application is still available leads to an insufficient economics of product production, which does not allow large-scale production of these derivatives · The hitherto known microbiological production process for Anthräcyclin-Antibiotica be It is preferred to obtain mixtures of chemically similar anthracyclines which consist of the mono-, di-, tri- or polysaccharides of different aglycones (anthracyclinones) which have hitherto been virtually impossible to separate under industrial conditions. This brings standardization problems for the Bendprodukt with it when, depending on the Fermentationsver- 'shifts shifts of a qualitative and quantitative nature occur in the multi-component mixture ·

Anthracyclinon-Glykoside, deren Aglykone dem beta-Rhodomycinon zugeordnet werden können, sind bisher lediglich mit Hilfe der Arten Streptomyces purpurascens (Brockmann, Waehneldt und ITiemeyer, 1969. Tetrahedr« Lett·, (6), 4-15; Brockmann, Scheffer-und Stein, 1973· Tetrahedr. Lett,, (38), 3699; Brockmann und Greve, 1975. Tetrahedr.'Lett., (11), " 831), Streptomyces bobiliae (Biedermann und Bräuninger, 1972. Pharmazie, 22, 782), Streptomyces griseoruber 4620 (Podojil, Blumauerova, Prikrylova, Vanek, Gauze und Maksimova, 1980. Polia Microbio l'i, 2£_t 464), Streptomyces violaceus (Fleck^ Strauß, Koch, Kramer und Prauser, 1974· Z· AlIg. Mikrobiol., 14, 551), Streptomyces roseoviolaceus A 529 (IK) 13O8I) COtL₁ loshimoto und Matsuzawa, 1980. J. Antibv, 22t 1331)Anthracyclinone glycosides, whose aglycones can be assigned to beta-rhodomycinone, have hitherto been obtained only with the help of the species Streptomyces purpurascens (Brockmann, Waehneldt and ITiemeyer, 1969. Tetrahedr "Lett", (6), 4-15, Brockmann, Scheffer and Stein, 1973 · Tetrahedron Lett ,, (38), 3699, Brockmann and Greve, 1975. Tetrahedr. 'Lett., (11), "831), Streptomyces bobiliae (Biedermann and Bräuninger, 1972. Pharmacy, 22, 782). , Streptomyces griseoruber 4620 (Podojil, Blumauerova, Přikrylová, Vanek, Gauze and Maksimova, 1980. Polia Microbio l'i, 2 £ _t 464), Streptomyces violaceus (Fleck ^ Strauss, cook, Kramer and Prauser, 1974 · Z · Alig. Microbiol., 14 , 551), Streptomyces roseoviolaceus A 529 (IK) 13 O8I) COtL ₁ loshimoto and Matsuzawa, 1980. J. Antibv, 22t 1331)

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auf fermentativem Wege sowie durch Biosynthese und Glykosidierung von beta-Bhodomycinon mittels einer Aclacinomycin-Mangelmutante als Gemische oder als Minorkomponenten mit unbekannter chemotherapeutischer Aktivität erhalten worden. Die beta-Shodomycinon-Glykoside, die bisher beschrieben wurden, sind im Zusammenhang mit der Gewinnung und Strukturaufklärung des biologisch inaktiven be ta-Hhodomycino ns in sehr geringen Mengen isoliert, worden. Angaben zu den physikochemischen Eigenschaften der beta-Rhodomycinon-Glykoside sind nicht oder nur unvollständig vorhanden*- Angaben zur biologischen Wirkung der Einzelkomponenten wie antimikrobielle, antivirale, cytostatische und cancerostatische bzw. toxische liegen bisher nicht vor«by fermentative route as well as by biosynthesis and glycosidation of beta-Bhodomycinon by means of an aclacinomycin-deficient mutant as mixtures or as minor components with unknown chemotherapeutic activity. The beta-shodomycinone glycosides described so far have been isolated in very small quantities in connection with the recovery and structure elucidation of the biologically inactive beta-thiodomycin. Information on the physicochemical properties of beta-rhodomycinone glycosides is incomplete or incomplete * - Information on the biological effect of the individual components such as antimicrobial, antiviral, cytostatic and cancerostatic or toxic are not yet available «

Ziel der ErfindungObject of the invention

Die Erfindung dient der Herstellung eines neuen Anthracyclin-Antibioticums sowie seines Aglykons wie auch der Salze des Antibioticums, um die aufgeführten Nachteile bisher bekannter Verfahren zu vermeiden und die Palette potentiell cancerostatisch, virostatisch u.ad antimikrobiell wirksamer Anthracycline durch einen Vertreter, der eine Einzelkomponente darstellt, zu erweitern, sowie um'die hydrolytischen Abbauprodukte als Ausgangssubstrat für die Mutasynthese und Halbsynthese neuer Anthracyclin-Antibiotica verwenden zu können·The invention serves to produce a new anthracycline antibiotics and its aglycones as well as the salts of the antibiotic to avoid the disadvantages of previously known methods and the range of potentially cancerostatic, virostatic u.ad antimicrobial anthracycline by a representative, which represents a single component and to use the hydrolytic degradation products as a starting substrate for mutasynthesis and semisynthesis of novel anthracycline antibiotics.

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein technologisch einfaches Verfahren anzugeben, das es gestattet, das neue Anthracyclin-Antibioticum Beta-Hhodomycin I mit Hilfe eines Mikroorganismus aus leicht zugänglichen und billigen Einsatzstoff en in guten Ausbeuten herzustellen»The invention has for its object to provide a technologically simple method that allows the new anthracycline antibiotic beta-Hhodomycin I using a microorganism from easily accessible and cheap starting material in good yields produce »

Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß unter aeroben und sterilen Kulturbedingungen in einem flüssigen Nährmedium mit entsprechenden Kohlenstoff-, Stickstoff-Quellen und Mineralsalzen ein neuer Mikroorganismus oder seine Varianten gezüchtet werden* Der neue MkroOrganismus,According to the invention the object is achieved in that a new microorganism or its variants are bred under aerobic and sterile culture conditions in a liquid nutrient medium with corresponding carbon, nitrogen sources and mineral salts. The new microorganism,

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der in diesem Verfahren Anwendung findet, wurde durch interspezifische Hybridisierung von genetisch markierten und im Sekundärstoffwechsel geblockten Mutanten des Violamycin-Bildners, Streptomyces violaceus, Stamm IMET JA 6844 (beschrieben in der DDR-Patentschrift 100 494) und des Turimycin-Bildners, Streptomyces hygroscopicus,. Stamm IMBT JA 6599 ("beschrieben der DDR-Patentschrift 84 450) gewonnen und in der ZIMET-Hinterlegungsstelle für Mikroorganismen, Jena-DDR, unter der Nummer ZIMST 43 678 deponiert» In seinen morphologischen Eigenschaf ten entspricht der Beta-Rhodomycin I-Bildner ZIMBT 43 dem Stamm ZIMET 43 615, äer in äer DDR-Patentschrift 140 672 sowie von Schlegel und fleck 198O (Z. AlIg· Mikrobiol*, 2O₃ 527 bis 53O) als Streptomyces violaceus subsp« iremyceticus beschrieben wurde·.which is used in this method, was characterized by interspecific hybridization of genetically-labeled and secondary metabolism-blocked mutants of the violamycin-forming agent, Streptomyces violaceus , strain IMET JA 6844 (described in the GDR patent 100 494) and the turimycin former, Streptomyces hygroscopicus , , Stamm IMBT JA 6599 ("described the DDR patent 84 450) won and deposited in the ZIMET depository for microorganisms, Jena-GDR, under the number ZIMST 43 678.» In its morphological properties corresponds to the beta-rhodomycin I-formers ZIMBT 43 strain ZIMET 43 615, in addition to DDR patent specification 140 672 as well as from Schlegel and speck 198O (Z. AlIg · microbiol *, 2O ₃ 527 to 53O) as Streptomyces violaceus subsp iremyceticus .

Danach gehört der Beta-Rhodomycin I-Bildner ZIMET 43 678 zur Gattung Streptomyces und entspricht der Diagnose von Stre-ptomyces violaceus (Rossi-Doria 1891, Krassilnikov 1941, Waksman 1953) wie sie nach Untersuchung des Neo-Type-Stammes ISP 5082 (= INMI-1, RIA 656, ATCC 15 888) im "International Streptomyces Project" von Shirling and Gottlieb (Int· J, syst, Bact,_? 19« 497/1969) gegeben wird. Der Beta-Rhodomycin I-Bildner ZIMST 43 678 ist durch Selektionsprozesse aus einer Population der interspezifischen Rekombinante ZIMST 43 615 hervorgegangen und unterscheidet sich von der Ausgangsrekombinate in der Bildung von Anthracyclin-Antibiotica. Während die Ausgangsrekombinante ZIMBT 43 615 das Anthracyclin-Antibioticum Iremycin (= 10-<*^-rhodosaminyl)-y-rhodoHycinon (DDR-Patentschrift ~140 672) bildet, wird durch die selektierte Mutante ZIMET 43 678 das Anthracyclin-Antibioticum Beta-Rhodomycin I synthetisiert·According to this, the beta-rhodomycin I-formner ZIMET 43,678 belongs to the genus Streptomyces and corresponds to the diagnosis of Streptomyces violaceus (Rossi-Doria 1891, Krassilnikov 1941, Waksman 1953) as described after examination of the Neo-Type strain ISP 5082 (= INMI-1, RIA 656, ATCC 15888) (the "International Streptomyces Project" of Shirling and Gottlieb Int J ·, syst, _Bact,? 19 "497/1969) is given. The beta-rhodomycin I generator ZIMST 43,678 has been produced by selection processes from a population of the interspecific recombinant ZIMST 43,615 and differs from the parent recombinates in the formation of anthracycline antibiotics. While the initial recombinant ZIMBT 43 615 forms the anthracycline antibiotic iremycin (= 10 - <-> - rhodosaminyl) -y-rhodoHycinon (DDR patent ~ 140 672), the selected mutant ZIMET 43 678, the anthracycline antibiotic beta-rhodomycin I synthesized ·

Die Kultivierung des Stammes ZIMET 43 678 sowie seiner Mutanten und Varianten erfolgt unter aeroben Bedingungen. An Erde lyophil getrocknetes Sporenmaterial bzw. Mycelfragmente werden in geeignete Agarnährböden und nachfolgend in flüssige, vorher,, sterilisierte Nährmedien geimpft und das entstehende Mycel wird in an sich bekannter Weise bei einer Temperatur zwischen 25 und 37 ^C (vorzugsweise 28 ⁰C) über einen Zeit-The cultivation of the strain ZIMET 43 678 and its mutants and variants takes place under aerobic conditions. Spore material or mycelial fragments dried on soil lyophilically are inoculated into suitable agar media and subsequently into liquid, previously sterilized nutrient media and the resulting mycelium is applied in a manner known per se at a temperature between 25 and 37 ° C. (preferably 28 ^° C.) Time-

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raum von 2 bis 6 Tagen, vorzugsweise 4 Tagen, bei einer Acidität kultiviert, die zu Beginn, des Fermentationsprozesses zwischen pH 6,2 und pH 7*0 und am Ende des Prozesses zwischen pH 7j5 urid pH 8,3 liegt* Das Nahrmediuia besteht aus Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie aus anorganischen Salzen* Als Kohlenstoffquellen können Stärke, Glukose, Glyzerin, Mannit, Dextrin, Saccharose, Sojaöl und Sojamehl verwendet werden. Als Stickstoffquellen kommen außer den oben erwähnten stickstoffhaltigen Substraten auch .Trockenhefe, Fleischpepton und Oasein in Präge· Gute Ergebnisse können bei Zusatz von Mineralsalzen erzielt werden· Letztere begünstigen den Verlauf der Fermentation in Abhängigkeit vom eingesetzten Nährmedium· In komplexen Medien, die verschiedene Mehle enthalten, haben sich Zusätze von Kalziumkarbonat, Na-Phosphat bzw. Kalium-Phosphat als vorteilhaft erwiesen* Die Fermentation des Bildners ZIMBT 43 678 kann in Steilbrustflaschen und Rundkolben verschiedenen Inhalts,, im Glasfermenter sowie in V2A-Stahltanks durchgeführt werden«from 2 to 6 days, preferably 4 days, cultivated at an acidity of between pH 6.2 and pH 7 * 0 at the beginning of the fermentation process and between pH 7j5 and pH 8.3 at the end of the process * The nutrient medium persists from carbon and nitrogen sources as well as from inorganic salts * The carbon sources that can be used are starch, glucose, glycerine, mannitol, dextrin, sucrose, soybean oil and soybean meal. In addition to the nitrogenous substrates mentioned above, nitrogenous sources also include .dried yeast, meat peptone and oasein in embossing · Good results can be achieved with the addition of mineral salts · The latter promote the course of the fermentation depending on the nutrient medium used · In complex media containing various flours Additions of calcium carbonate, sodium phosphate or potassium phosphate have proven to be advantageous * Fermentation of the ZIMBT 43 678 can be carried out in breast bottles and round-bottomed flasks of different contents "in a glass fermenter and in V2A steel tanks"

Die Isolierung des Beta-Rhodomycin-I wird in der Weise durchgeführt,, daß das Antibioticum aus dem KuIturfiltrat mit organischen, mit Wasser nicht oder nur wenig mischbaren, und aus dem Mycel mit organischen, mit Wasser mischbaren und anschließend mit Wasser nicht oder nur wenig mischbaren Lo.*- sungsmitteln extrahiert, nach Konzentrieren der Extrakte mit einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel reextrahiert, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, vom Lösungsmittel durch Destillieren im Vakuum befreit, durch Versetzen mit Petroläther unter Rühren ausgefällt, vom Lösungsmittel durch Filtration befreit, mit Petroläther gewaschen, nachfolgend getrocknet, anschließend in niederen Alkoholen gelöst,, der getrocknete Rückstand mit Wasser versetzt und bei pH 8,0 mit Chloroform extrahiert, die Chloroformphase- abgetrennt, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, im Vakuum zur Trockne gebracht und auf üblichem lege säulenchromatographisch an Kieselgel gereinigt wird*The isolation of the beta-Rhodomycin-I is carried out in such a way that the Antibioticum from the KuIturfiltrat with organic, immiscible with water or only slightly miscible, and from the mycelium with organic, water-miscible and then with water or little miscible solvents, reextracted after concentrating the extracts with a water-immiscible solvent, dried over anhydrous sodium sulfate, freed of the solvent by distillation in vacuo, precipitated by stirring with petroleum ether with stirring, the solvent removed by filtration, with petroleum ether washed, subsequently dried, then dissolved in lower alcohols, the dried residue is treated with water and extracted at pH 8.0 with chloroform, the chloroform phase- separated, dried over anhydrous sodium sulfate, brought to dryness in vacuo and put on usual column chromatography on silica gel cleaned wi rd *

Beta-Rhodomycin I ist eine rotbraune, aus Chloroform/Petroläther auskristallisierende Substanz, die sich gut in nie«Beta-Rhodomycin I is a reddish-brown substance that crystallizes out of chloroform / petroleum ether, and that does not deteriorate well. "

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deren Alkoholen und Chloroform, dagegen nur mäßig in Wasser und Petroläther löst. Das basische Antibioticum besitzt Indikatoreigenschaften und ist in sauren Lösungen rotgelb, in alkalischen blauviolett. Aus dem hochaufgelösten Massenspektrum erhält man für das Molekülion !U⁺JmZz 543,2124 und damit die Summenformel ^σ2^33¹¹⁰IO C^theorei3isch: 543,2104). Beta-Rhodomycin I bildet bei der Umsetzung mit einer äquivalenten Menge methanolischer Salzsäure in Chloroform/Äther^ ein kristallines Hydrochlorid mit der Summenformel G^gH-,JTO/jq^HCI und einem 3Pp*. von 179 "bis 181 *C* Das Hydrochlorid ist im Gegensatz zum basischen Antibioticum gut löslich in Wasser, dagegen nahezu unlöslich in Chloroform und Äther« Sowohl das basische Antibioticum als auch sein Hydrochlorid stellen entsprechend ihres dünnschichtchromatographischen Yerhaltens auf Kieselgel-Platten in verschiedenen Fließsystemen und bei unterschiedlichen pH-Werten definierte, chemisch reine Sinzelkomponenten dar·'their alcohols and chloroform, on the other hand dissolves only moderately in water and petroleum ether. The basic antibiotic has indicator properties and is red-yellow in acidic solutions, in alkaline blue-violet. From the high-resolution mass spectrum one obtains for the molecular ion! U ⁺ JmZz 543,2124 and thus the empirical formula ^σ 2 ^ 33 ¹¹⁰ IO C ^theorei3i sch: 543,2104). Beta-rhodomycin I forms in the reaction with an equivalent amount of methanolic hydrochloric acid in chloroform / ether ^ a crystalline hydrochloride with the empirical formula G ^ gH-, JTO / jq ^ HCl and a 3Pp *. from 179 "to 181 * C * In contrast to the basic antibiotic, the hydrochloride is readily soluble in water, but almost insoluble in chloroform and ether. Both the basic antibiotic and its hydrochloride, according to their thin-layer chromatography on silica gel plates in various flow systems and defined at different pH values, chemically pure Sinzelkomponenten is'

Bei Hydrolyse mit verdünnter Säure in der Wärme liefert das Anthracyclin-Antibioticum ein wasserunlösliches Aglykon und eine wasserlösliche Zuckerkomponente· Durch vergleichende dünnschichtchromatographische und verschiedene spektroskopische Untersuchungen (UY/YIS-, IR-, MS-, "¹H-, ^G-NMB-Spektroskopie) konnte das Aglykon als Beta-Rhodomycinon (Brockmann und Franck, 1955· Chenu Ber», 88, 1792) und die Zuckerkomponente als L-Hhodosamin (Brockmann, Spohler und Waehneldty 1963. Chern, Ber., ^6, 2925) identifiziert werden, so daß es sich bei dem hergestellten Beta-Rhodomycin I um ein Rhodosaminyl-beta-rhodomycinon handelt*Upon hydrolysis with dilute acid in the heat, the anthracycline antibiotic provides a water-insoluble aglycone and a water-soluble sugar component. By comparative thin layer chromatographic and various spectroscopic studies (UY / YIS, IR, MS, " ¹ H, ^ G NMB). Spectroscopy), the aglycone could be identified as beta-rhodomycinone (Brockmann and Franck, 1955 Chenu Ber, 88, 1792) and the sugar component as L-hodosamine (Brockmann, Spohler and Waehneldty 1963 Chern, Ber., 6, 2925) so that the produced beta-rhodomycin I is a rhodosaminyl-beta-rhodomycinone *

Die in Abb. 1 dargestellte Struktur des Antibioticums Beta-Shodomycin I wurde durch säurehydrolytischen Abbau und Identifizierung der Abbauprodukte sowie durch umfassende spektroskopische Untersuchungen am intakten Antibioticum-Molekül als 7-(et -L-Rhodosaminyl)-beta-rhodomycinon gesichert und ist möglicherweise mit dem in der Literatur beschriebenen Rhodomycin B (Beta-Rhodomycin I) (Brockmann und Patt, 1955. Chem· Ber·, 88 ^ 1455) identisch· Spektros«-The structure of the antibiotic beta-shodomycin I shown in Fig. 1 was secured by acid hydrolysis degradation and identification of the degradation products as well as comprehensive spectroscopic studies on intact Antibioticum molecule as 7- (et -L-Rhodosaminyl) -beta-rhodomycinon and may be with identical to the rhodomycin B (beta-rhodomycin I) described in the literature (Brockmann and Patt, 1955. Chem. Ber., 88, 1455). "Spektros"

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kopische Daten zum Bhodomycin B liegen bisher in der Literatur nicht vor. .Kopod data for Bhodomycin B are not available in the literature. ,

Wichtige physicocheinische Parameter des Beta-P-hodomycin I sowie seines Aglycons sind:Important physicochemical parameters of beta-P-hodomycin I and its aglycone are:

(Gyolohexan/Gnloroforiii) mn: 234,255,294,471,483,(Gyolohexane / Gnloroforiii) mn: 234,255,294,471,483,

500,516,534500,516,534

~¹ ~ ¹

IH ^³* cm~¹i 3450(0H) ;2770,2817(H(GH₃)₂) j 1597 (H. .....00IH ^ ³ * cm ~ ¹ i 3450 (0H); 2770.2817 (H (GH ₃ ) ₂ ) j 1597 (H. ..... 00

^max Ghinon) ^Max Ghinon)

MS m/a : Mt 543 (G₂₈H₃₃ITO₁₀); 386t (Aglyfcon, G₂₀H₁₃O₈)MS m / a: Mt 543 (G ₂₈ H ₃₃ ITO ₁₀ ); 386t (Aglyfcon, G ₂₀ H ₁₃ O ₈ )

175* (Zucker, O₈H₁₇NO,,) 158* (Zucfcer175 * (sugar, O ₈ H ₁₇ NO ,,) 158 * (Zucfcer

¹H-HMR (GDGl₃ <f): 7,90 dd (Je?,3 und 1,8 Hz,H-i); 7,70 t ¹ H-HMR (GDGl ₃ <f): 7.90 dd (Je, 3 and 1.8 Hz, Hi); 7,70 t

(J=7,3 Hz,H-2) 7,31 dd (J=7,3 und 1,8 Hz,H-3); 4,91 s(J = 7.3 Hz, H-2) 7.31 dd (J = 7.3 and 1.8 Hz, H-3); 4.91 s

(H-IO)₅ 5,17 int (W 7 Hz,H-7); 1,40 d (J=6,1 Hz,3H,(H-IO) ₅ 5.17 int (W 7 Hz, H-7); 1.40 d (J = 6.1 Hz, 3H,

6' "Me ) ; 2,23 s (6H,3¹-Hme)₅ 5,51 mt (W-6 Hz, H-1«);6 '"Me); 2.23 s (6H, 3 ¹ -Hme) ₅ 5.51 mt (W-6 Hz, H-1");

¹J_{0 H} = 171,9 Hz₁H₅G-I¹ (oC-Glykos.) ¹³G (ODOIo): ¹ J _{0 H} = 171.9 Hz ₁ H ₅ GI ¹ (oC-glycos.) ¹³ G (ODOIo):

GWLtom-iTr. Ghem_eVerschiebung (ppm) G-Atom-Nr. Ohem.Yersch_< (vvm) GWLtom-iTr. Ghem _e Displacement (ppm) G-Atom-Nr. Ohem.Yersch _< (vvm)

1 119,71 119.7

2 137,12 137,1

3 125,13 125.1

4 162,74 162,7

5 190,9 .6 156,75 190.9 .6 156.7

7 70,87 70.8

8 30,48 30.4

9 71,99 71.9

10 65,910 65.9

11 157,211 157,2

12 186,412,186.4

4a4a 115,4115.4 5a5a 112,5112.5 6a6a 135,0135.0 10a10a 138,5138.5 11a11a 111,5111.5 12a12a 133,3133.3 1^f 1 ^f 101,4101.4 2*2 * 28,728.7 3¹ 3 ¹ 59,559.5 4^J 4 ^y 66,766.7 5¹ 5 ¹ 66,766.7 6^J 6 ^y 17,017.0

241 03 9 8 -^β-241 03 9 8 - ^β -

G-Atom-Nr· Ghem.Verschiebung (ppm) G-Atom-Nr· Ghem.Versch·G-Atom-Nr · Ghem.Merschiebung (ppm) G-Atom-Nr · Ghem.Versch

(ppm)(Ppm)

13 32,9 NMe₂ 42,013 32.9 NMe ₂ 42.0

14 6,514 6.5

Sowohl, frische Fermentationslösungen des 3eta-Rhodomycin I-Bildners, ZIMET 43 678, als auch das aus ihnen isolierte Beta-Ehodomycin I besitzen antibiotische Aktivität· Wie typisch für die bisher bekannten Anthracyclin-Antibiotica, wird auch vom Beta-Shodomycin I bevorzugt das Wachstum.von grampositiven Bakterien und Mycobakterien gehemmt ·. Gegen Vertreter der Hefen und filamentösen Pilze läßt sich demgegenüber keine wachstumshemmende Aktivität feststellen··Both, fresh fermentation solutions of the 3eta-Rhodomycin I generator, ZIMET 43,678, as well as the beta-Ehodomycin I isolated from them have antibiotic activity · As is typical of the previously known anthracycline antibiotics, the growth of beta-Shodomycin I is also preferred .from Gram-positive bacteria and mycobacteria. In contrast, no growth-inhibiting activity can be detected against representatives of the yeasts and filamentous fungi.

Bei der Bestimmung der antibakteriellen Wirksamkeit von Beta-Ehodomycin I im Vergleich zur entsprechenden Wirksamkeit der klinisch als Krebschemotherapeutica eingesetzten Anthracyclin-Antibiotica' Daunorubicin und Doxorubicin ergab sich, daß die. in Wasser löslichen Hydrochloride unter standardisierten Bedingungen gegen Bacillus, subtilis ASGG 66.33 folgende Aktivitätsunterschiede aufweisen:.When determining the antibacterial efficacy of beta-ehodomycin I in comparison with the corresponding efficacy of the anthracycline antibiotic 'daunorubicin and doxorubicin used clinically as cancer chemotherapeutics, it was found that the. in water-soluble hydrochlorides under standardized conditions against Bacillus, subtilis ASGG 66.33 have the following differences in activity:.

Anthracyclin-Antibiotica Aktivität in ProzentAnthracycline antibiotic activity in percent

Iremycin 100Iremycin 100

Beta-Ehodomycin I 2SOBeta-Ehodomycin I 2SO

Doxorubicin 57QDoxorubicin 57Q

Daunorubicin 798Daunorubicin 798

Im Vergleich zu dem cytostatisch und cancerostatisch wirksamen Violamycin A (Ehodosaminyl-Derivat des Aglykongemisches Violamycinon, DDE-Patent 100 494) zeigt Beta Hhodomycin I qualitativ vergleichbare Wirkungen bezüglich der Wechselwirkung mit der DIIA in vitro und dem DHA«Stoffwechsel in der Zelle, der für die cytostatische Wirkung der Anthracyclin-rAntibiotica an Mikroorganismen und Säugerzellen sowie für die cancerostatische Wirkung im 'Tierexperiment verantwortlich gemacht werden* Beta-Hhodomycin I unter-drücktIn comparison to the cytostatic and cancerostatic effective violamycin A (ehodosaminyl derivative of the aglycongemic violamycinone, DDE patent 100 494), beta-hhodomycin I exhibits qualitatively comparable effects with respect to the interaction with the DIIA in vitro and the DHA metabolism in the cell used for the cytostatic effect of the anthracycline antibiotics on microorganisms and mammalian cells as well as the cancerostatic effect in the animal experiment are blamed * beta-Hhodomycin I suppressed

241039 8241039 8

zudem in selektiver Weise die Vermehrung von DNA-Viren in gras*· negativen Bakterien (z.B.. von temperenten Lambda-Phagen in Bscherichia coli O 600) bei Konzentrationen, die nicht gleichzeitig den Stoffwechsel und die Vermehrung der Wirtszellen beeinträchtigen.in addition, the multiplication of DNA viruses in grassy bacteria (eg of temperate lambda phages in Bscherichia coli O 600) at concentrations which do not simultaneously impair the metabolism and the multiplication of the host cells.

Beta-Rhodomycin I erwies sich am P 388-Modell als antileukämisch wirksam* Die maximale Wirkung "beträgt 4-5,4- % Verlängerung der Überiebenszeit bei einer Dosis von 2 mg/kg (9 Applikationen)»,Beta-rhodomycin I was found to be antileukemic in the P388 * The maximum effect is "4-5.4% prolonged over-duration at a dose of 2 mg / kg (9 applications)",

6 Die Leukämie wurde bei diesen Untersuchungen mit 10 Zellen aus dem Ascites leukämischer Mäuse am 7· 'lag nach der vorangehenden Transplantation übertragen* Die Haltung der P 388« Zeil-Linie erfolgte auf Musen des InzuchtStammes DBA/2 Jena, die experimentelle Prüfung dagegen auf ABD2I?^-Hybriden beiderlei Geschlechts* Beta-Hhodomycin I wurde täglich einmal vom 1e bis 4·· und vom 7· bis 11. Tag nach der Tumorübertragung intraperitoneal appliziert« Lösungen von Beta-Bhodo« mycin I-Hy&rochlorid wurden je einmal für die ersten 4- und die folgenden 5 Injektionen hergestellt und über die entsprechenden Zeiträume bei 4 ⁰O im Dunkein aufbewahrt« De- ' taillierte Angaben zu den Testbedingungen sind von Gutsche et al· beschrieben (Arch, f· Geschwulstforschg·, ^t₃ 5 (1981), 394-404; Folia haematologica, 108, 5 (1981), 647-651; Pharmazie (1982), 00, 000-000 (im Druck)·6 The leukemia was in these studies with 10 cells from the ascites of leukemic mice on 7 · 'lag transferred after the previous transplantation * The attitude of the P 388 Zeil line was on muses of the inbred strain DBA / 2 Jena, the experimental test on ABD2I? ^ - hybrids of both sexes * Beta-Hhodomycin I was administered intraperitoneally once daily from 1e to 4 ·· and from 7 · to 11 days after tumor transplantation. "Solutions of beta-Bhodo" mycin-1-hyroride were used once each for the first 4 and the following 5 injections prepared and stored over the corresponding periods of time at 4 ⁰ O in Dunkein "de- 'waisted information on test conditions are of Gutsche et al described · (Arch, f · Geschwulstforschg · t ^ ₃ 5 ( 1981), 394-404; Folia haematologica, 108, 5 (1981), 647-651; Pharmacy (1982), 00, 000-000 (in print)

Beta-Hhodomycin I kann als' ein bisher nicht verfügbares Anthracyclin-Antibioticum angesehen werden, dessen "biologische Wirkung eine potentielle Anwendung als Ghemotherapeuticum gegen Tumor-, Virus- und durch Bakterien hervorgerufene Erkrankungen bei Mensch und Hutztier ermöglichen.Beta-Hhodomycin I can be regarded as 'a hitherto unavailable anthracycline antibiotics, the' biological effect of a potential application as Ghemotherapeuticum against tumor, virus and caused by bacteria diseases in humans and Hutztier.

Ausführungsbeispieleembodiments

1· Zwei 500-ml-Steilbrustflaschen enthalten je 80 ml des folgenden Vorzuchtmediums:1 · Two 500 ml steep breast bottles each contain 80 ml of the following pre-treatment medium:

Glucose 1,5 % Sojamehl 1,5 % Na-ChIorid 0,5 %Glucose 1.5% Soya Meal 1.5% Na Chloride 0.5%

24103 9 8 -«>-24103 9 8 - «> -

Ga-Karbonat 0,1 % Ga carbonate 0.1 %

-. primäres .. -. primary ..

K-Phosphat 0,03 % K-phosphate 0.03 %

in Leitungswasserin tap water

Sterilisation: 35 Min. bei 110 ⁰O. Acidität nach Sterilisation liegt bei pH 6,3· Jede Steilbrustflasche wird mit einer Sporen- oder Mycelsuspension des Beta-Shodomycin I-Bildners 43 673 beimpft, welche mit steriler, isotonischer Kochsalzlösung von einer im Reagenzglas auf folgendem Anzucht-Nahrboden gezüchteten, 10 bis 14 Tage alten Kultur des Beta-Hhodomycin I-Bildners hergestellt wird:Sterilization: 35 min. At 110 ⁰ O. acidity after sterilization is at pH 6.3 · Each Reagent bottle is inoculated with a spore or mycelium suspension of the beta Shodomycin I-generator 43673 which with sterile, isotonic saline solution of a test tube grown culture of the beta-hhodomycin I-builder grown on the following seedlings soil: 10 to 14 days old culture:

Hafermehl 1,0 % Oatmeal 1.0 %

Haferflockenoatmeal

gemahlen 1,0 %ground 1.0%

Agar-Agar 2*0 %Agar-agar 2 * 0%

in Leitungswasser Sterilisation: 35 Min· bei 120 ⁰C, natursauer* Die beimpften Vorzuchtkultüren werden 48 Std. bei 28 ⁰C auf einem Schüttelgerät mit einer Frequenz von 180 U/min bebrütet« 8 ml einer so bebrüteten Vorzuchtkultur dienen zur Beimpfung von 500 ml-Steilbrustflaschen, die je 80 ml des folgenden Produktionsmediums enthalten:in tap water sterilization: 35 min. · at 120 ⁰ C, nature except * The inoculated Vorzuchtkultüren 48 h at 28 ⁰ C on a shaker at a frequency of 180 rev / min incubated «8 ml of a so incubated Vorzuchtkultur are used to inoculate 500 ml Partial breast bottles, each containing 80 ml of the following production medium:

Glucose 3,0 %Glucose 3.0%

Sojamehl 1,0 % Soybean meal 1.0 %

ITa-GhIorid . 0,,5 %ITa-GhIorid. 0, 5%

Ga-Karbonat 0,3 % Ga carbonate 0.3 %

in Leitungswasserin tap water

Sterilisation: 35 Min. bei 115 ⁰O* Die Acidität beträgt nach Sterilisation pH 6,3·- Die (Temperatur während der fermentation liegt bei 28 ⁰G und die Schüttelfrequenz bei 180 TJ/min«Sterilization: 35 min. At 115 ^° C. * The acidity after sterilization is pH 6.3 · The temperature during fermentation is 28 ^° C. and the shaking frequency is 180 TJ / min «

Man verfährt wie im Beispiel 1 mit dem Unterschied, daß das Produktionsmedium folgende Zusammensetzung hat:The procedure is as in Example 1 with the difference that the production medium has the following composition:

Glukose 3,0 % Glucose 3.0 %

Sojamehl 3,0 % Soybean meal 3.0 %

ITa-ChIorid 0,3 %ITa-Chloride 0.3%

Ca-Karbonat 0_t3 % Ca carbonate 0 _t 3 %

241039 8241039 8

in Leitungswasserin tap water

Sterilisation: 35 Min· "bei 115 ⁰Ci" Die Acidität liegt nach dem Sterilisieren bei pH 6,2»Sterilization: 35 minutes · "at 115 ⁰ C" The acidity is after sterilization at pH 6.2 "

Mit einer Kultur des Beta-Rhodomycin I-Bildners von einem festen Nährboden wie in Beispiel 1 beschrieben, beimpft man 80 ml. des in Beispiel 1 angeführten flüssigen Vbrzucht-Mediums.» welches in einer 500 ml-Steilbrustflasche enthalten ist. Man bebrütet 4-8 Std· bei 28 ⁰G auf einem Schüttelgerät mit einer Schüttelfrequenz von 180 U/min* 12 ml der so erhaltenen Kulturbrühe dienen zur Beimpfung von 400 ml des gleichen Vorzucht-Mediums, welches in einem 2 1-Glaskolben enthalten ist,. Man bebrütet weitere 24- Std.,· bei 28 ⁰G bei einer Schüttelfrequenz von 180 U/min», ehe die so erhaltenen 400 ml Kulturbrühe zur Beimpfung von 20 1 des im Beispiel 1 beschriebenen Produktions-Mediums dienen* Letzteres ist in einem 32 1-Glasfermenter enthalten. Während der Fermentation, die mit einer Rührgeschwindigkeit von 400 U/min* und mit einer Luftzufuhr von 15 l/min* ausgeführt wird, kann die Schaumbildung durch Zusatz kleiner Mengen von Sonnenblumenöl oder anderer^ silikonhaltiger Schaumschutzmittel kontrolliert werden« 210 1. auf diese Weise gewonnene Kulturlösung werden mit Salzsäure auf pH 4,0 eingestellt und nach Separieren des Mycels werden 19»8 kg Mycel und 155 1 Kulturfiltrat erhalten« Danach werden die 155 1 Kulturfiltrat mit Natronlauge auf pH 7j5 eingestellt und mit 100 1 Butanol ausgerührt., Der so erhaltene Butanolestrakt wird anschließend bis zum Farbumschlag mit Salzsäure angesäuert und im Vakuum auf 1/25 des Ausgangsvolumens eingeengt,. Aus dem Bndkonzentrat läßt sich unter Zufügen des 3-fachen Volumens an Petroläther das Rohprodukt A 43 678 ausfällen, mit Petroläther waschen und unter vermindertem Druck im Exsikkator über konz. Schwefelsäure trocknen* . With a culture of the beta-Rhodomycin I-formers from a solid medium as described in Example 1, inoculated 80 ml. Of the cited in Example 1 liquid Vbrzucht medium. "Which is contained in a 500 ml Steilbrustflasche. One incubated 4-8 hr · at 28 ⁰ G on a shaker with a shaking frequency of 180 rev / min * are used 12 ml of the culture broth thus obtained to inoculate 400 ml of the same Vorzucht medium contained in a 2 1 glass flask . The mixture is incubated for a further 24 h, at 28 ^° C. at a shaking frequency of 180 rpm, before the resulting 400 ml of culture broth are used to inoculate 20 l of the production medium described in Example 1. The latter is in a 32 1 glass fermenter included. During the fermentation, which is carried out with a stirring speed of 400 rpm and with an air supply of 15 l / min *, foaming can be controlled by the addition of small quantities of sunflower oil or other silicone-containing antifoaming agent "210 1. in this way The culture solution obtained is adjusted to pH 4.0 with hydrochloric acid and, after separating the mycelium, 19.8 kg of mycelium and 155 l of culture filtrate are obtained. Thereafter, the 155 l culture filtrate are adjusted to pH 7 j5 with sodium hydroxide solution and stirred with 100 l of butanol Butanolestrakt obtained is then acidified until the color change with hydrochloric acid and concentrated in vacuo to 1/25 of the initial volume,. From the Bndkonzentrat can be precipitated with the addition of 3 times the volume of petroleum ether, the crude product A 43 678, wash with petroleum ether and concentrated under reduced pressure in a desiccator over. Dry sulfuric acid *.

Von 19*8 kg Mycel werden mit 70 1 Methanol ein erster und zweiter Extrakt hergestellt, wobei vor der 2« Extraktion dem Methanol 300 ml Salzsäure (1:1 mit WasserOf 19 * 8 kg of mycelium, 70 l of methanol are used to prepare a first and second extract, with 300 ml of hydrochloric acid (1: 1 with water

verdünnt) zugesetzt werden* Die erhaltenen Methanolextrakte werden filtriert, mit Natronlauge auf pH 6,0 eingestellt, vereinigt und im Vakuum eingeengt· Das wässrige Methanolextrakt-Konzentrat des Mycels wird bei pH 7 bis pH 9 mit Butanol erschöpfend extrahiert, wobei für 5 1 des Mycelextrakt-Eonzentrates 5 1 Wasser und 5 1 Butanol eingesetzt werden· Nach Abtrennen der die Pigmente enthaltenden Butanol-Phase wird letztere mit Salzsäure wieder angesäuert, nachfolgend wird konzentriert, mit Petroläther ausgefällt, gewaschen und im Vakuum über konz. Schwefelsäure getrocknet. Die Ausbeute an Rohprodukt A 4-3 678 beträgt 55 g·The methanol extracts obtained are filtered, adjusted to pH 6.0 with sodium hydroxide solution, combined and concentrated in vacuo. The aqueous methanol extract concentrate of the mycelium is exhaustively extracted at pH 7 to pH 9 with butanol, with 5 l of the After separating the butanol phase containing the pigments, the latter is re-acidified with hydrochloric acid, subsequently concentrated, precipitated with petroleum ether, washed and concentrated in vacuo over conc. Dried sulfuric acid. The yield of crude product A 4-3 678 is 55 g ·

10 g Rohprodukt A 43 -678 werden in 50 ml Methanol aufgenommen, mit 1 1 Wasser versetzt, mit NaHCOo auf pH 7j9 eingestellt und erschöpfend (3 mal) mit Chloroform extrahiert· Die .Chloroformphase wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, abfiltriert und unter vermindertem Druck bei 20 ⁰O zur Trockne eingeengt· Man erhält 3,1 g Anthracyclin-Rohprodukt _r Zur Abtrennung des Beta-Rhodomycin I wird das Rohprodukt in Chloroform aufgenommen und 2 mal an Kieselgel (NaHCO^,-gepuffert - 0,05 bis 0,2 mm) mit CHCl₃-CHCWAceton=:80;20 -CHClosAceton:Methanol=80i20:6 und anschließend an Kieselgel (0,05 bis 0,2) mit"CHCl₃:Methanol:H₂0=70i2€i:2 chromatografiert; und aus Chloroförm/Petroläther in reiner Porm isoliert·" Die Ausbeute beträgt 130 mg Beta-Rhodomycin_el· Das entspricht einer Ausbeute von 3>5 g reines Beta-Hhodo— mycin I pro mr Permentationsflüssigkeit*10 g of crude product A 43-678 are taken up in 50 ml of methanol, treated with 1 1 of water, adjusted to pH 7j9 with NaHCO 3 and extracted exhaustively (3 times) with chloroform. The chloroform phase is separated off, washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate , filtered off and concentrated under reduced pressure at 20 ⁰ O to dryness · 3.1 g of anthracycline crude product _r To separate the beta-rhodomycin I, the crude product is taken up in chloroform and twice on silica gel (NaHCO ^ - buffered - 0 , 05 to 0.2 mm) with CHCl ₃ -CHCWAceton =: 80; 20 -CHClosAcetone: methanol = 80i20: 6 and then on silica gel (0.05 to 0.2) with "CHCl ₃ : methanol: H ₂ 0 = 70i2 € i: 2 chromatographed and isolated from chloroform / petroleum ether in pure Porm · "The yield is 130 mg of beta-rhodomycin _e l · This corresponds to a yield of 3> 5 g of pure beta-Hhodomycin I per mr of the perfluid *

4\4 \ 11 \ \\\ >> rr rc ο-rc ο- JJ —· ν- · ν H - λH - λ Seta -Seta - O =O = y —y - — It- - It- V / / \ \ίV / / \\ ί νν }} ν·ν · ΛΛ -ξ-ξ -§.-§.

Claims (1)

U 3 a 8 -¹³-U 3 a 8 - ¹³ - SrfindungsanspruchSrfindungsanspruch Verfahren zur Herstellung eines Anthracyclin-Antibioticums sowie seines Aglycons, dadurch gekennzeichnet, daß ein neuer Mikroorganismus-, Streptomyces violaceus subsp. iremyceticus, Stamm ΖΙΜΞΤ 43 678, unter aeroben Bedingungen in flüssigen Nährmedien, die eine Kohlenstoff- und Stickstoffquelle sowie Mineralsalze enthalten, bei einer Temperatur zwischen 25 und 37 ⁰C während eines Zeitraumes von 2 bis 6 Tagen kultiviert wird und das gebildete Anthracyclin-Antibioticum Beta-Hhodomycin I sowohl aus dem Mycel als auch aus dem Eulturfiltrat bei einer Acidität zwischen pH 3 und. pH 9 mittels üblicher Lösungsmittel extrahiert, nachfolgend mit üblichen Methoden konzentriert, ausgefällt und chromatogfafisch gereinigt oder mit anorganischen bzw· organischen Sauren in seine Salze übergeführt oder durch SäurehydroIyse in sein Aglykon umgewandelt wird«Process for the preparation of an anthracycline antibiotic and its aglycone, characterized in that a new microorganism, Streptomyces violaceus subsp. iremyceticus , strain ΖΙΜΞΤ 43,678, under aerobic conditions in liquid nutrient media containing a source of carbon and nitrogen as well as mineral salts, cultivated at a temperature between 25 and 37 ^° C for a period of 2 to 6 days, and the anthracycline antibiotic beta formed -Hodomycin I from both the mycelium and from the culture filtrate at an acidity between pH 3 and. Extracts pH 9 using conventional solvents, then concentrated by conventional methods, precipitated and purified by chromatography, or converted into its salts with inorganic or organic acids or converted into its aglycone by acid hydrolysis. Hierzu 1 Seite Formeln·1 page formulas ·