CZ702889A3 - Agent for controlled release of polypeptides - Google Patents
Agent for controlled release of polypeptides Download PDFInfo
- Publication number
- CZ702889A3 CZ702889A3 CS897028A CS702889A CZ702889A3 CZ 702889 A3 CZ702889 A3 CZ 702889A3 CS 897028 A CS897028 A CS 897028A CS 702889 A CS702889 A CS 702889A CZ 702889 A3 CZ702889 A3 CZ 702889A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- somatotropin
- composition
- buffer
- glycerol
- weight percent
- Prior art date
Links
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 9
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 title description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 136
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 100
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 100
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 35
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims abstract description 31
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims abstract description 31
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 155
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical group Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 claims description 11
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 11
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 claims description 9
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 claims description 8
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 6
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 claims description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims description 4
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Polymers OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 3
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- JNYAEWCLZODPBN-UHFFFAOYSA-N 2-(1,2-dihydroxyethyl)oxolane-3,4-diol Polymers OCC(O)C1OCC(O)C1O JNYAEWCLZODPBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- JNYAEWCLZODPBN-CTQIIAAMSA-N sorbitan Polymers OCC(O)C1OCC(O)[C@@H]1O JNYAEWCLZODPBN-CTQIIAAMSA-N 0.000 claims description 2
- LIWMQSWFLXEGMA-WDSKDSINSA-N Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N LIWMQSWFLXEGMA-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- BYMMIQCVDHHYGG-UHFFFAOYSA-N Cl.OP(O)(O)=O Chemical compound Cl.OP(O)(O)=O BYMMIQCVDHHYGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- RKUNBYITZUJHSG-UHFFFAOYSA-N Hyosciamin-hydrochlorid Natural products CN1C(C2)CCC1CC2OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 RKUNBYITZUJHSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000001980 alanyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims 1
- XMLNCADGRIEXPK-KUMOIWDRSA-M chembl2146143 Chemical compound [Br-].O([C@H]1C[C@H]2CC[C@@H](C1)[N+]2(C)C)C(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 XMLNCADGRIEXPK-KUMOIWDRSA-M 0.000 claims 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 48
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 31
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 25
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 22
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 20
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 20
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 20
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 20
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 16
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 11
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 11
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 11
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 10
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 9
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 9
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 8
- -1 fomaran Chemical compound 0.000 description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 6
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 6
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 5
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 4
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002357 osmotic agent Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000000806 elastomer Substances 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 244000203593 Piper nigrum Species 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000002744 anti-aggregatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- MVXVYAKCVDQRLW-UHFFFAOYSA-N azain Natural products C1=CN=C2NC=CC2=C1 MVXVYAKCVDQRLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 239000012059 conventional drug carrier Substances 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M dihydrogenphosphate Chemical compound OP(O)([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 239000012433 hydrogen halide Substances 0.000 description 1
- 229910000039 hydrogen halide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229950003188 isovaleryl diethylamide Drugs 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 108010066090 neutral insulin Proteins 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001139 pH measurement Methods 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012994 photoredox catalyst Substances 0.000 description 1
- 229920000580 poly(melamine) Polymers 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- CMDGQTVYVAKDNA-UHFFFAOYSA-N propane-1,2,3-triol;hydrate Chemical compound O.OCC(O)CO CMDGQTVYVAKDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQCBIMOYRRMVNA-UHFFFAOYSA-N propane-1,2,3-triol;hydrochloride Chemical compound Cl.OCC(O)CO NQCBIMOYRRMVNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229960004532 somatropin Drugs 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229920003048 styrene butadiene rubber Polymers 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004416 thermosoftening plastic Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- CRKADHVTAQCXRA-UHFFFAOYSA-K trisodium;phosphate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O CRKADHVTAQCXRA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- CYHOMWAPJJPNMW-JIGDXULJSA-N tropine Chemical class C1[C@@H](O)C[C@H]2CC[C@@H]1N2C CYHOMWAPJJPNMW-JIGDXULJSA-N 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0002—Galenical forms characterised by the drug release technique; Application systems commanded by energy
- A61K9/0004—Osmotic delivery systems; Sustained release driven by osmosis, thermal energy or gas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
- i -
Tento vynález se týká podávání somatotropinú kontrolovaným uvolňováním po prodlouženou dobu» zvláště pak zlepšeného prostředku pro kontrolované uvolňování somatotropinú určeného pro živočichy· V odborné literatuře jsou popsány různé methody prodlouženého uvolňováni parenterálně podávaného somatotropi-nu· Aby byl takový systém efektivní, musí vyhovovat několika kriteriím· Zaprvé, rychlost uvolňování musí být dostatečně rychlá pro to, aby došlo k žádanému biologickému účinku·
Za druhé, rychlost uvolňování musí být dostatečně pomalá, aby se zabránilo předávkování hostitele nebo mrhání účinným proteinem· Za třetí, množství dávky musí být postačující pro to, aby se zajistilo dodávání proteinu po celou prodlouženou dobu, po kterou dochází k uvolňování rychlostí adekvátní pro žádaný biologický účinek· Za čtvrté, objem musí být natolik dostatečně malý, aby byl vhodný pro paren-terálni podáváni·
Jelikož každý polypeptid je jiný, např· ve své trojrozměrné struktuře a svými interakcemi s jinými látkami, je nemožné předpovědět dosažitelnost prodlouženého efektivního uvolňování s velkou násadou polypeptidu ve vhodném vehiknlu· 7 mnoha případech se musí vyvinout prostředky s takovým prodlouženým uvolňováním, aby se biologické aktivity póly— peptidu sodáhlo užitečným a ekonomickým způsobem·
Jedním z přístupů k získáni kontrolovaného uvolňování je formulovat somatotropin do prostředku ve formě injekto-vatelné nebo implantovatelné matrice» která zpomaluje rychlost» kterou je polypeptid asimilován do obklopujících tělových kapalín· Mezi takové methody patří disperse somato-tropinu v biokompatibilnim oleji» popřípadě za přítomnosti antihydratačního činidla (viz Evropská patentová přihláška č· 177 478 publikovaná 9· dubna 1986·) Somatotropin byl zkomplexován s ve vodě rozpustnými nebo s vodou dispergova-telnýmí uhlovodíkovými polymery» jako je například dextrin» dextran a různé bobové gumy.· Tento komplex se podává paren·· terálně jako roztok» disperse nebo pasta (viz Evropská patentová přihláška č· 193 917» publikovaná 10« září 1986)·
Somatotropin byl formulován také společně s cholesterolem a vytlačen do formy matrice implantu (viz například USA patent č. 4 452 775 (Kent, vydaný 5* července j&4))· USA patent č. 4 836 736 (Azain a spol·)» vydaný 5· září 1989» popisuje implantovatelné pelety nebo tablety» které se připravuji lisováním somatotropinu v nepřítomnosti vazebného činidla nebo matrice·
Jinými prostředky pro podávání polypeptidu kontrolova- - 3 ným uvolňováním je použití nádobky nebo čerpadla obsahujícího formulaci polypeptidu· Pro kontinuální podávání biologicky aktivního materiálu byly navrženy rázné typy infusních zařízeni· Jedním typem implantovatelného čerpadla je osmo-tická nádobka s osmotickým čerpadlem a formulaci účinného činidla uvnitř rigidní polopropustné membrány v kterou proniká voda z obklopujících tkání· Pronikající voda způsobuje» že osmotické činidlo zvětšuje svůj objem» vytlačuje účinné činidlo z uzávěry a uvolňuje ho tak» aby mohlo být absorbováno hostitelem· Mezi příklady implatovatelných osmotických nádobek patři ty» které jsou popsány v USA patfígtu č. 3 995 632 (Nakano a spol·1), USA patentu Č· 3 84-5 770 (Thes^ves spol*) a USA patentu č· 3 760 805 (Higuehi)· Nádobka popsaná flekaném má v dolní části jedno odděleni obsahující osmotické činidlo» v horní části nádobky je druhé oddělení s účinnou složkou a obě odděleni jsou oddělena pohyblivou barierou nebo pístem· Jak se osmotické činidlo expanduje» vytlačuje pist do druhého odděleni a tím vytlačuje účinnou složka výstupním otvorem·
Tento typ uspořádáni bude dále označován jako "vytěsáovaci • * typ" (vytlačovací typ) implantátu nebo nádobky· Tato ná— • * dobka» popsaná Higjtchim» obsahuje účinnou složka ve flexibilním sáčku spojeném s výstupním otvorem uzávěrem» který obsahuje osmotické činidlo· Pronikáním vody osmotické činidlo expanduje» sáček se skládá a vytlačuje tak účinnou - 4 složku z výchozího otvoru· Tento typ uspořádání bude dále označován jako implantát nebo nádobka "typu skládatelného sáčku"· Byla navržena různá jiná infusní zařízenít zvláště pro podávání insulinu* Některá jsou implantovatelná a některá jsou určena pro externí nošeni s kanulou pro infusi aktivního materiálu do tělových kapalin·)
Ve kterékoliv z těchto infusnich nádob je účinná složka přítomna v disponibilním prostředku, který může být vodný nebo nevodný· V případě somatotropinu je dodáváni takovým infusním systémem spojeno s těžkostmi· Somatotropiny v molekulárních modifikacích mohou být biologicky neúčinné· Molekuly somatotropinu mají například tendenci tvořit dimery a agregáty, které nejsou bioaktivni. Tato tendence je obvykle urychlována přítomnosti vody· Navíc bylo zjištěno, že tendence k dimerizaci nebo agregaci stoupá, jestliže je protein v mobilní fázi, jako například v roztoku, přítomen ve vysoké koncentraci· Tvorba dimerů a agregátů se zvyšuje také se zvýšenými teplotami, jako je například teplota živočichů do nichž se nádobka implantuje· Koncentrované směsi tohoto typu, který je žádoucí pro parenterální podávání, mají maximální citlivost na to, aby došlo ke ztrátě bioaktivity· Mnoho proteinových hormonů má navíc ještě omezenou rozpustnost ve vodě· Přítomnost pevných částeček hormonu v prostředku nebo jejich tvorba srážením během dodávacího procesu může - 5 - snížit dostupnost hormonu čerpadlem napojeným výstupní trubkou· Jedním ze způsobů, jak se vyhnout těmto problémům, je použit relativně zředěnou koncentraci účinného polypeptidu v prostředku· Tento přistup byl použit například při vývoji prostředku pro podáváni insulinu infuanimi zařízeními· Takové prostředky obsahovaly relativně nízké koncentrace insulinu. V odborné literatuře se odráží časté úsilí vyvinout prostředky pro dodávání proteinových hormonů toho typu, který podléhá agregaci· Například Grodsky a spol.: USA patent č· 4 371 523 popisuje přípravu vodného prostředku, který obsahuje činidlo snižující agregaci insulinu· Antia·· gregačjdm činidlem je sloučenina, která má dvě karboxylové skupiny a alespoň jednu aminovou skupinu, zvláště výhodnými jsou kyselina glutamová a asparagová· Toto činidle se smíchá s insulinem ve vodném systému a pH se upraví na asi isoelektrický bod proti-agregačniho činidla.
Blackshear a spol·' v USA patentu č. 4 439 181 popisují smícháni glycerolu nebo jiného polyolu s vodným roztokem hormonu před zavedením tohoto roztoku do systému dodávaeiho léčivo·’ Glyeerol nebo jiný polyol se přidává v takovém množství, které je dostatečné pro to, aby zabránilo srážení proteinu během dlouhodobého skladování· Proteinový/polyolový - 6 - roztok se injekčně dodá do tlakového reservoáru pro skladování léčiva implatovaného infusního čerpadla· Pracovní příklady této specifikace popisují prostředky obsahující insulin·
Hasegawa a spol. v USA patentu č· 4 675 134 popisuje interferonové prostředky pro léčení virových onemocněni· Prostředky obsahují 15 až 60 % cukerných alkoholů se třemi nebo více hydroxy 1 ovými skupinami (s výhodou s glycerinem) , organický pufr pro udržování pH na hodnotě 3 až 6, konvenční farmaceutický nosič nebo ředidlo a $inné množství lidského interferonu· Jako stabilizátor může prostředek obsahovat také aniontové povrchově aktivní Činidlo nebo albumin· Pufrem může být citran, jantaran, vínan, fomaran, glukonan, ščavelan nebo octan*! Je uvedeno, že anorganické pufry, jako je například fosforečnan, nezlepšují stabilitu interferonu·
Wigness a spol· v publikaci PCT VO 85/02118 popisuji použití glycerolu pro zabráněni sráženi proteinů, jako například hormonů, v systémech dodávajících léčivo, což závisí na kapalnosti infusního roztoku· Pro udržení pH roztoku proteinu na optimální hodnotě v rozmezí jedné jednotky pE se používá pufr, jako je například fosforečnanový pufr, čímž se zachovává bioaktivita proteinu. Je uvedeno, že optimálním pH pro sulfatovaný Isftalln je 3,5 a pro 7 standardní neutrální insulin 7*4·· Tím se vyhneme isoelektric-kérnu bodu insulinu (5 »40» který způsobuje vysrážení, a alkalickému pH (většímu než 8,0), které způsobuje děna tura c i proteinu· Příklad 1 tohoto spisu popisuje prostředek, který obsahuje 20 až 40 jednotek (přibližně 1 až 2 mg) vepřového insulinu v ml, 0,2 % fenolu, 12 mM hydrogenuhličitanu sodné-ho a 80 objemových jednotek (%) glycerolu. Popsané prostředky jsou uzpůsobeny pro dodáváni implantovatelným čerpadlem infuse· I když tento specifický objem je omezen na insulin· tento spis uvádí, že se se stejnými problémy srážlivosti potýkají i jiné infusovatelné proteiny včetně růstového hormonu, glukagonu a podobných·
Mezi několika předměty tohoto vynálezu lze uvést nalezeni disponibilního prostředku přizpůsobeného pro dlouhodobé podáváni soaatotropinu z implantovatelné nádobky, jako je napřiklad osmotická nádobka, dále pak získání takového prostředku, který obsahuje podstatnou koncentraci somatotropinu, získáni takového prostředku, v němž somatotropin zůstává chemicky stabilní, ďbaktivní a fyzikálně stabilní, během dlouhodobého skladováni se nesráží a zůstává chemicky stabilní, bioaktivni a fyzikálně stabilní za tělesné teploty po celou dobu, po kterou je žádoucí prodloužené podáváni, a konečně i získáni takového prostředku, který je snadno disponibilní při tělesné teplotě·
Dalším předmětem tohoto vynálezu je získáni způsobu přípravy prostředku podle vynálezu·
Stručně řečeno je tedy tento vynález směrován k disponibilnímu somatotropinovému prostředku, který se vyznačuje tím, že obsahuje alespoň asi 10 % bioaktivního somatotro-pinu, s výhodou hovězího nebo vepřového somatotropinu, účinné množství stabilizujícího polyolu, který má tři hydro-xylové skupiny, jako je například glycerol nebo tris(hy-droxymethyl)aminomethan, a dostatečná množství pufru, který zajišťuje pH v rozmezí, v němž si somatotropin uchovává svoji bioaktivitu po dobu dostatečnou pro účinné používání prostředku při prodlouženém podávání somatotropinu živočichům. V jednom z výhodných uspořádáni má prostředek pH mezi 4,5 a bučí mezi asi 7 nebo isoelektrickým bodem somatotropinu, který je větší. Mezi výhodné pufry patří hydrochlorid histidinu, pufr s fosforečnanem alkalického kovu, hydrochlorid tris(hydroxymethy 1)aminomethanu a citra-nový pufr nebo jakýkoliv jiný pufr, který poskytuje žádané pH. Prostředek může obsahovat také smáčeci činidlo, které zlepšuje rychlost, kterou je somatotropin zahrnut do směsi.
Tento vynález se dále týká způsobu podávání somatotropinu živočichům, vyznačující se tím, že zahrnuje infusi (do živočicha) shora popsaného prostředku po jistou dobu·' - 9 - Dále se tento vynález týká způsobu přípravy somatotro*· pinových prostředků tím, že se smíchá polyol s vodným roztokem pufru, popřípadě i povrchově aktivním činidlem, které smáčí somatotropin s excipientem, dokud prostředek nevytvoří jedinou fázi.
Obrázky 1 a 2 jsou schei^bické nákresy implantovatel·· ných osmoticky ovládaných inrusních zařízeni·4 Obrázky í, 6, 7 a 8 graficky ukazuji výsledky studie růstu krys z pří*· kladů 2, 5 a 6. Obrázky 4 a 5 graficky ukazuji výsledky studií tvorby dimeru/agregátu z příkladu 3# Obrázek 9 graficky ukazuj výsledky studia produkce mléka z příkladu 10«
Somatotropiny připravené rekombinaci se typicky is^žují a čistí za alkalických podmínek· Vodné roztoky somatotropinů mohou být proto alkalické díky přítomnosti zbylého alka Hebkého pufru, jako je například hydrogenuhličitan sodný·
Bylo ukázáno, že takové vodné roztoky mají podstatnou bio·· aktivitu· Zatímco zředěné roztoky somatotropinů mohou být stálé při vysokéa pH, somatotropinové roztoky při vysokém pU mají tendenci vykazovat alespoň nějakou chemickou nestabilitu, zvláště při vysokých koncentracích· Somatotro— pin má tendenci tvořit dimery a agregáty, jimž často chybí bioaktivita neaglomerováného proteinového hormonu·! 10 - 1 když bylo zjištěno, že chemickou stabilitu somato-tropinů lze zvýšit snížením pil vodného systému, optimální chemické stability se obvykle dosáhne při pH relativně blízkém isoelektrickému bodu, kdy je rozpustnost proteinu minimální· Důsledkem je , že roztoky, které mají uspokojivou chemickou stálost, jsou typicky fyzikálně nestálé, tj« protein má tendenci se srážet, zatímco roztoky při pH, při němž si uchovávají vysokou rozpustnost, jsou typicky chemicky nestálé, tj. velmi rychle s časem ztrácejí svoji bioaktivitu·
Podle tohoto vynálezu bylo objeveno, že fyzikální stálost, chemická stálost a bioaktivita disponibilního somatotropinového prostředku obsahujícího vysoký podíl somatotropinu se může zachovat tím, že se do prostředku zahrne podstatný podíl polyolu, při čemž se pufrovánim udržuje pH systému na hladině, při které je inhibována dimerizace a agregace· Rozpustnost proteinového hormonu se dosáhne i při pH v relativní blízkosti isoelektrického bodu· Prostředky podle vynálezu obsahující podstatné podíly somatotropinu, vykazují v podstatě tu biologickou aktivitu, jako na počátku přípravy, uchovávají si úroveň bioaktivity dokonce i po dlouhodobém skladováni a nemají tendenci k tomu, aby se somatotropin srážel z kapalné ráze· Disponibilní prostředky podle vynálezu jsou přizpůsobeny pro kontro— 11 - lované uvolňování z infusní nádobky, zvláště z osmotické nádobky« ťodle tohoto vynálezu byly efektivně formulovány razně sómatotropiny. Mezi somatotropiny použitelné podle tohoto vynálezu patři ptačí somatotropiny pro léčeni kuřat, krocanů a podobně, vodné somatotropiny pro léčení ryb a podobně a zvláště savčí somatotropiny pro léčení lidí, prasat, ovci, koz a podobných. Zvláště užitečné jsou hovězí somatotropiny a vepřové somatotropiny.
Vzhledem k možnostem přípravky dostatečných množství somatotropinu, je výhodné použít techniky rekoadinantní DNA pro přípravu somatotropinu mikrobielní expresí. Techniky rekombinantni DMA také umožňuji přípravu variant, které bud jsou podobné nebo odlišné, ve srovnání se sekvencemi přirozeně se vyskytujících somatotropinů. Sekvence v přírodě se vyskytujících somatotropinů hovězích a vepřových uvádí Seeburg a spol.'t DNA gQJtl 37 až 45 (1983)t ©°ž 3© zde uváděno jako odkaz.
Mezi příklady variant hovězího somatotropinu patři, ale nejsou na ně omezeny, polypeptidy s následujícími sekvencemi aminokyselin s nespecifikovanými zbytky aminokyselin, které jsou podobné přirozeně se vyskytujícíma sóma— totropinu: -12-
NH2-met-phe(l)-pro(2) .......leu(126) .......phe(190)-C00H
NH2—met—phe(l)—pro(2)«r. · · · · .val(126) ······ .phe(l90)—1COOH
NH^-ala-phe(1)-pro( 2 )..... .val(126) phe(190)-COOH
NH2-ala-phe(l)-pro(2).......leu(126) ...... ,phe(190)«»000H
NHg-phe (1) -pro ( 2 ) ...........leu(126).......phe( 190)'-COOH
NHg-phe (1) -pro ( 2 )...........val(126).......phe(190)-C00H
NHg-me t-a sp-glu-phe (1) -pro (2) ·. .leu(126) .. ,phe( 190) -COOH NH2~met-asp-glu-phe(1)-pro(2).. .val(126).. .phe(190)-C00H
NH2-met(4)-ser(5) ··..··........ .leu(126) ·. ,phe(190)-C00H
NH2-met(4)-ser(5) ........Ieu(l26) · · .phe(190)-CÓ0H
NH2-met-phe(10) ..........leu(126) ·· .phe(190)—COOH
NH2«me t—phe C10 ) ................val(126) .. .phe(190)-C00H
První varianta ve shora uvedeném seznamu, s methiony— lovým zbytkem na N-konci a leucylovým zbytkem v poloze 126, je zde označována jako methionylový hovězí somato-tropin nebo · Třetí varianta ve shora uvedeném se znamu s alanylovým zbytkem na N-konci a valylovým zbytkem v poloze 126 je zde označována jako alanyl-valylový hovězí somatotropin nebo "alanval BST" či "A-BST”. • «* <* ·
Mezi příklady variant vepřového somatotropinu patří, ale nejsou na ně omezeny, polypeptidy s následujícími sek» vencemi aminokyselin s nespecifikovanými zbytky aminokyselin, které jsou podobné přirozeně se vyskytujícímu somatotropinu: - 13 ~
HH2-ala-plie(l)...............phe(190)-C00H
NILý-met—phe(l)........ •phe(190)"^'00H
NHg-tfiětM-proO) ...............phe(190)-C00H
NH2-met-leu(6)...............phe(190)-C00H
HH2-met-ser(8)...............phe(190)-C00H
NH2-met-phe(10) ·....··.......phe(190)-C00H
První varianta ve shora uvedeném seznamu s alanylovým zbytkem na N-konci je zde označována jako alanylový vepřový somatotropin nebo "APS". Druhá varianta ve shora uvedeném • Λ seznamu je zde označována jako methionylový vepřový sóma·· totropin nebo "MPS".
l* A
Je třeba tomu rozumět tak» že během exp^rese nebo po expresi může být odstraněn také další methionylový zbytek na N-konci shora popsaných variant. Je třeba tomu rozumět také tak» že může být vynechána jedna nebo více aminokyselin z následující sekvence —glu—arg-ela—tyr—ile—pro—glu (což jsou členové 32 až 38 shora uvedených řad hovězího a vepřového somatotropinu. Tento typ deleoe je popsán v evropských patentových přihláškách číslo 282 318 a 282 319» což jsou přihlášky publikované 14. září 1988. Mohou se používat i jiné delečni varianty se somatotropinovou aktivitou» jako je například delece aminokyselin 32 až 45.
Nejaktivnějšími somatotropiny pro podávání jako pro- - 14 - středky podle vynálezu jsou ty somatotropiny, které na N-kon-ci máji jinou skupinu mež methionin. Zatímco některé N-methi-onyl-somatotropiny vykazují významně sníženou bioaktivitu v pufrovaném polyolovém prostředku, APS a A-BST jsou výhodné somatotropiny·
Pojem "stabilizující polyol" znamená jakýkoliv polyol se třemi hydroxylovými skupinami, které udržují somatotro-pin ve fyzikálně stabilním prostředku, tj. somatotropin se nesráži v nežádoucím množství po rozumně dlouhé době skladování nebo během podávání. Výhodným polyolem je ggfícerol.
Lze však použít i jiné polyoly, jako je například tris-(hydroxymethyl)aminomethan.
Fysiologicky kompatibilní (slučitelný) pufr se do pro- v
středku zahrnuje proto, aby reguloval pH prostředku v rozmezí, ve kterém je somatotropin bioaktivní. Hodnota pH prostředku by obecně měla být mezi minimem asi 4,5, s výhodou 5» ještě výhodněji 5,7, a maximem větším než asi 7 a asi is&ektrickým bodem somatotropinu· Isoelektrický bod pro APS je 7,6, pro MPS 7,3 a pro A-BST 8,6. Tyto isoelek-trické body se pro standardní monomerní formy získávají při přípravě těchto somatotropinů ve větších množstvích. Iso*· elektrické body jiných variant, jiných derivátů a jiných forem se mohou stanovovat standardními technikami· Pro APS - 15 - je optimální pH v rozmezí od asi 6,1 do 7,0 a pro A-BST je optimální jbH asi 6,1 až asi 7,5· I když lze používat různé pufry, s výhodou používaným pufrem je fosforečnan alkalického kovu. Aby došlo k pufrování v žádoucí oblasti pH, je zvláště výhodné, jestliže pufr obsahuje v podstatě dihydrogenfos-forečnan, jako je například dihydrogenfosforečnan sodný nebo draselný· Jiným účinným pufrem pro regulaci pH v žádoucí oblasti je hydrogenhalogenid histidinu, například jako je hydrochlorid histidinu· Dalšími pufry, které udržují toto rozmezí pH, jsou citranové pufry a adiční soli kyseliny s tris(hydroxymethyl)aminomethanem, jako je napři» klad hydrochloridová sůl. Tyto tri(hydroxymethyl)aminometha-nové soli také obsahují hydroxylové skupiny a mohou tedy působit za některých okolností jako stabilizující polyoly· Používat se může jakýkoliv jiný pufr, který je schopen udržovat pH v žádoucím rozmezí· Mělo by být poznamenáno, že přímé měřeni pH prostředku podle tohoto vynálezu nemusí být ve všech případech praktické· Aby bylo možné provádět praktická měřeni, lze do asi 10 ml vody dát malé množství (například kapku) prostředku a stanovit pH výsledné směsi· Předpokládá se, že skutečné pH prostředku je blízké tomuto měření, ale ve všech případech tomu bude rozuměno tak, že pH změřené při takovém zředěni, je pro účely tohoto vynálezu považováno jako pH vykazované samotným prostředkem· - 16
Aby se podpořilo smáčení somatotropinu pufrovým/poly-olovým pomocným činidlem (excipientem) během přípravy prostředku, zahrnuje se s výhodou do prostředku smáčecí činidlo, jako je například neiontové povrchově aktivní smáčecí činidlo· Takové povrchově aktivní činidlo také inhibuje pěnění· Zvláště výhodným neiontovým povrchově aktivním činidlem je polyethoxylovaný ester sorbitanu, jako je například tri- (polyoxyethylen)ester monooleanu sorbitanu, jako je napři-• klad ten, který se prodává pod obchodním označením Tveen 80 (1C1 Amerg/xas lne·)·
Hlavní výhodou použití pufrovaného polyolového excipi-entu pro somatotropin je vysoká možnost naplnění dosažitelná díky vysoké rozpustnosti somatotropinu v prostředku, který také obsahuje významnou frakci vody, pH udržované pufrem inhibuje tvorbu dimerů a jiných agregátů· 1 když nebylo definováno, jestli je somatotropin v pravém roztoku nebo v koloidním roztoku, somatotropin se nesráŽi ani se nijak jinak neodddluje od excipientu, a to a$ už stáním nebo vlivem pohybu prostředku výpustním otvorem infusního Čerpadla· Somatotropin je v prostředku obsažen v koncentraci alespoň asi 10 hmotnostních procent, s výhodou alespoň asi 15 hmotnostních procent, výhodněji v koncentraci alespoň asi 20 hmotnostních procent, ještě výhodněji alespoň asi 25 hmotnostních procent nebo cBconce 50 hmotnostních pro-» cent· Koncentrace somatotropinu se může pohybovat až asi 17 kolem 45 hmotnostní cit procent, s výhodou až asi 40 hmotnostních procent, výhodněji až asi 35 hmotnostních procent. Koncentrace polyolu může být alespoň asi 20 hmotnostních procent nebo 23 hmotnostních procent a může dosáhnout až 80 hmotnostních procent nebo 70 hmotnostních procent nebo 60 hmotnostních procent nebo 30 hmotnostních procent nebo 40 hmotnostních procit. Relativně vysoký obsah glycerolu dále zajišťuje bakteriostatickou účinnost prostředku. Obvykle se předpokládá, že bakteriostatická účinnost je dána tehdy, jestliže excipient obsahuje alespoň asi 50 % glycerolu. S výhodou prost&dek dále obsahuje smáčecí činidlo, jako je například neiontové povrchově aktivní činidlo v optimálních koncentracích asi 0,07 hmotnostního procenta nebo asi 0,5 hmotnostního procenta a asi 0,7 hmotnostního procenta nebo 1 hmotnostní procento nebo někdy 2 hmotnostní procenta neiontového povrchově aktivního činidla· Vyjma puřru, který v případě fosforečnanového pufru může typicky obsahovat 4 až 7 hmotnostních procent, zbytek prostředku typicky tvoří voda. Výhodný prostředek obsahuje alespoň asi 7 hmotnostních procent vody, výhodněji asi 15 hmotnostních procent vody, ještě výhodněji mezi asi 25 hmotnostními procenty a asi 35 hmotnostními procenty vody.
Prostředek je obvykle čistá homogenní jednotná fáze. Prostředek se jeví jako pevná nebo polopevná látka při - 18 - typické teplotě skladování asi 4 °C. Za tělesné teploty živočicha se viskosita prostředku sníží tak, že prostředek je za této teploty kapalný· Prostředek je tedy disponibilním prostředkem, aniž by byl snadno kapalný za všech teplot· Změny viskosity prostředku, ke kterým dochází s teplotou mohou být ilustrovány viskositou prostředku, který obsahuje 33 % APS, 33,5 % glycerolu a 33»5 % 1M pufru dihydrogen-fosforečnanu sodného· Tento prostředek při 10 °C má viskositu větší než 2 000 000 centipoise, při 25 °C asi 215 000 centipoise a při 37 °C asi 23 000 centipoise· V relativně zředěných roztocích podle vynálezu je koncentrace somatotropinu pod asi 25 %· Je žádoucí, aby se hmotnostní poměr jak k vodě tak k pufru udržoval konstantní· To se děje tak, že se podíly polyolu zvýší s tím jak koncentrace somatotropinu klesá· Například bylo zjištěno, že v 10% APS roztoka obsahujícím á4 % glycerolu dochází k vysrážení jistých množství APS, ale prostředek obsahující 78 % glycerolu byl fyzikálně stabilní· S výhodou se při koncentraci somatotropinu pod 25 % udržuje hmotnostní poměr somatotropinu k vodě v rozmezí mezi asi 0,9 a asi 1,1 a hmotnostní poměr somatotropinu k fosforečnanovému pufru v romezí mezi asi 5>5 a asi 7· Je výhodné, aby (vedle případného smáčecího činidla) tyto prostředky s méně než 25 % somatotropinu doplňoval v podstatě polyol· - 19 -
Jakmile se koncentrace somatotropinu zvýší nad 25 %» poměry vody a pufru k somatotropinu se s výhodou sniž! se zvýšením koncentrace somatotropinu tak, aby se koncentrace polyolu udržovala tak vysoko jak je to praktické· Obsah pólyolu je však limitován viskositou· Maximální koncentrace polyolu pro prostředky, které obsahují více než 25 % hormonu, je asi 40 až 45 %· Vyšší koncentrace polyolu s sebou nesou výhodu fyzikální stability, ale vedou k takové viskositě, která ztěžuje zacházeni sj^středkem,
Chemická stabilita prostředků podle vynálezu se během skladováni uchovává v takovém rozmezí, které je dáno kombinacemi teploty a doby skladování· Za teploty místnosti mohou být například optimální APS prostředky skladovány šest nebo více měsíců aniž by došlo k detegovatelné ztrátě bioaktivity· Při tělesné teplotě dochází k jisté ztrátě bioaktivity, ale rychlost této ztráty je mírná a lineární s časem. Prostředky si plně uchovávají adekvátní bioakti— vitu po mnohem delší doby, než které jsou zapotřebí pro většinu aplikací· Tyto prostředky jsou užitečné pro získání známých biologických účinků, kterých lze dosáhnout podáváním soaatotropinů· Mezi takové biologické účinky « patří zvýšení produkce mléka u laktujících savců, zvýšení efektivnosti potravy, zvýšení růstu, zvýšení mateřského pa·· renchymn a zlepšení poměru tuku ke svalům· Těchto výsledků - 20 - se dosahuje podle toho, kolik sómatotropinu se podává, podle stavu laktace a stavu růstu živočicha (například jestli laktuje, jestli je těhotný a podobně)· Tento vynález zajišťuje že po jediném podáni dojde ke kontrolovanému uvolňování trvajícímu, asi šest či více týdnů·
Způsobem podle tohoto vynálezu se kapalný excipient připravuje smícháním polyolu s pufrem· Boztok pufru má počáteční pH s výhodou v rozmezí od asi 4,0 do až asi 4,4. Pufr s výhodou obsahuje dihy drogenfosforečnan alkalického kovu, ne jvýhodněji v koncentraci 0,5 až 2M ve vodném roztoku před tím, než se smíchá s polyolem· Před tím, než se polyol smíchá s roztokem pufru, s výhodou se do polyolu zahrne aniontové smáčecí činidlo· Kapalný excipient se typicky sterilizuje, například sterilní filtrací a sterilní zfiltrovaný excipient (doplňkové činidlo) se pak ohřeje tak, aby se smíchal se somatotropinem· V jednom uspořádání postupu podle vynálezu se práškovaný somatotropin vnese do sterilního kapalného excipientu· Avšak před tím, než se práškovaný somatotropin vnese do kapaliny, s výhodou se smočí excipientem· To se může udělat rozmanitými způsoby· Například lze paužít míchání v nádobce, která má pecičkové míchadlo. V takovém případě se veškerá kapalina mechanicky míchá rychlostí, která 21 - na povrchu způsobuje vlny, které podporuji smáčeni prášku, ale menši rychlosti než takovou, která by způsobila vtahováni vzduchových bublinek do kapaliny· S tím, jak se prášek smáči na povrchu excipientu, tvoři se "khémová vrstva" ve Λ 0 vrstvě, v niž je smáčený prášek vtahován do kapaliny· Mícháni slouži k tomu, aby se smáčený prášek dále dispergoval v kapalině, kde se rozpouští a tvoří tak prostředek podle vynálezu* V jiném uspořádání může k mícháni docházet v otáčející se lahvi nebo v otáčejícím se bubnu· Lze používat jakýkoliv způsob mícháni· Výhodný je takový způsob, při němž dochází k minimálnímu střihu a tedy k minimalizaci zavzdušnění· Odstraněni vnesených plynů do prostředku se provádí tak, že se prostředek ponechá bez mícháni za zvýšené teploty tak dlouho, dokud se vnesený vzduch neodstraní·
Prostředek podle tohoto vynálezu se může podávat jakýmkoliv typem infUsniho dodávacího zařízeni* Výhodná jsou implantovatelná dodávací zařízeni· Zvláště výhodná jsou oemoticky řízená různá implantovatelná dodávací zařízení·
Je důležité, aby somatotropinový prostředek byl chráněn . před kontaminaci tělesnými kapalinami obklopujícími implantovat elné čerpadlo· Toho lze dosáhnout tím, že se prostředek umístí do disponibilní komory, která je efektivně nepropustná pro okolní kapaliny· - 22 -
Obrázky 1 a 2 ilustrují dvě konfigurace implantovatelných osmoticky řízených nádobek·
Obrázek 1 ukazuje průřez nádobkou vytlačovacího typu· (1 a 2} V tomto typu nádobky stěny nádobky tvoří pevnou strukturu, která obklopuje sekci tvořenou dvěma komorami 3 a 5» které jsou odděleny pístem 4* Komůrka 5 s osmotickým motorem obsahuje osmoticky účinné činidlo, jako je například ve vodě rozpustná sůl nebo nasycený roztok ve vodě rozpustné soli, ve vodě nabobtnaj^ polymer nazývaný hydrogel nebo kombinaci hydrogelu a ve vodě rozpustné soli· Příklady osmoticky účinných činidel jsou uvedeny v USA patentech 3 995 632 (Kákáno a spol.) a 4 327 725 (Cortese a spol·), které jsou zde zahrnuty jako odkaz· Je výhodné, jestliže osmoticky aktivní Činidlo je buú hydrogel nebo směs hydrogelu a ve vodě rozpustné soli· Alespoň část stěny 2 obklopující komůrku s osmotickým motorem musí být propustná pro vodu, aby se umožnilo vnikáni vody do komůrky s osmotickým motorem·
Vhodné materiály pro polopropustnou stěnu zahrnují materiály známé odborníkům jako osmotícké nebo reversní osmotické membrány, z nichž mnohé jsou popsány Cortesem a spol·
Jakmile voda pronikne do komůrky s osmotickým motorem, velikost komůrky se zvětší a tlačí píst 4 do komůrky 3 s příslušným činidlem· Prostředek podle tohoto vynálezu je obsažen v komůrce s příslušným činidlem a tak, jak píst postupuje, - 23 je vytlačován otvorem 6, Píst může být vyroben z jakékoliv vhodné látky, jako je například vosk nebo elastomer, který je deformovatelný tak, že si s tím, jak postupuje, udržuje kontakt s nádobkou stěny, aby se zabránilo kontaktu mezi somatotropinovým prostředkem a osmotickým motorem. Stěna konicky s příslušným činidlem by měla být nepropustná nebo v podstatě nepropustná pro vodu, aby chránila somatotropi-nový prostředek před kontaminaci obklopujícími tělesnými kapalinami, které mohou být škodlivé pro stabilitu prostředku· Nepropustnost lze dosáhnout zkonstruováním stěn z nepropustných materiálů, vložením nepropustné látky nebo aplikací nepropustného povlaku· Mezi representativní polymery, kterými lze toho dosáhnout, patři nepropustný polyethylen, póly te tra fluor ethylen, polyuhličitan, polystyren, polyamid, polyformaldehyd, polymelamin-formaldehyd, poly-sulfon, styrenbutadíenová guma, nepropustný polyurethan, polypropylen, póly viny lchlorid a podobné·
Obrázek 2 představuje nádobku typu skládatelného sáčku, který je komerčně dostupný od Alza Corporation pod obchodním názvem álzetf^ Osmotic Pump· Somatotropinový prostředek 13 je obsažen v nepropustném flexibilním sáčku 12, Tento sáček je uvnitř pevné polopropustné stěny 11. Mezi sáčkem a stěnou je osmoticky účinné čerpadlo 14· Jakmile voda z obklopujících tělních kapalin pronikne stěnou osmoticky účinné čerpadlo nabývá na objemu a způsobuje tak - 24 - skládání sáčku a vytlačování somatotropinového prostředku trubicí 15* Vše se sestaví a uzavře uzávěrem 16 a příčkou 17· Vnější membrána je ze směsi celulosových esterů.· Skládatelný sáček je z termoplastického uhlovodíkového elastomeru·
Odborníkům jsou známy i jiné typy implantovatelných osmotických nádobek a jiné typy infusních čerpadel.
Kapacity nádobky, koncentrace somatotropinu v prostředku podle tohoto vynálezu a rychlost uvolňování prostřed·· ku z nádobky mohou být řízeny tak, aby se dosáhlo žádané rychlosti po žádanou dobu· Výhodné rychlosti podáváni zá* leží na typu biologické odpovědi, která je požadována, na vývojovém stadiu a velikosti živočicha· Například, pro dospívající prasata jsou výhodnými rychlostmi podáváni rychlosti v rozmezí od asi 0,5 mg somatotropinu na den do asi 10 mg somatotropinu za den, výhodněji od asi 1 mg do asi 5 mg somatotropinu za den· Výhodnými rychlostmi podávání u dobytka pro zvýšení laktace nebo zvýšeni růstu a nebo zvýšení efektivnosti potravy je rozmezí od asi 2 mg do asi 60 mg somatotropinu za den, výhodněji od asi 5 mg do asi 25 mg somatotropinu za den. Efektivního podávání lze dosáhnout u dospívajících prasat po dobu asi šesti nebo více týdnů a u dobytka po dobu deseti až dvanácti nebo více týdnů. - 25 - Následující příklady ilustrují tento vynález. Příklad 1
Excipient (doplňkové činidlo) se připraví tak, že se do vody dá tolik mohohydrátu dihydrogenfosforečnanu sodného aby se získal l,OM roztok dihydrogenfosforečnanu sodného, jehož pH je v rozmezí od 4 do 4,8. K tomuto pufru se přidají glycerol a Tween 80 v takových dávkách, aby se získal excipient, který obsahuje 1% Tween, 49,5% glycerol a 49,5% 1»0M roztok fosforečnanu sodného.
Pomoci tohoto excipientu se připraví v injekčních stříkačkách serie prostředků APS/fosforečnan/glycerol. Při přípravě každého prostředku se do válce injekční stříkačky s odstraněným pístem naváží prášek APS. Do stříkačky se přidá předem stanovené množství ecipientu, vloží se píst a většina vzduchu se vytlačí ze stříkačky· Injekční stříkačka se pak nechá otáčet rychlostí dvě až tři otáčky za minutu, za teploty místnosti a/nebo se umísti na několik hodin do inkubátoru o teplotě 37 °C· Tvorbě roztoku se napomůže přidáním Tweenu 80« Podobným způsobem se připraví serie prostředků v pecičkovém mísiči. K optimálnímu míchání dochází^ehdy, když rychlost mícháni je taková, aby l se na povrchu kapaliny tvořily vlny, ale natolik nízká, aby docházelo k minimálnímu vnášeni vzduchu do roztoku· - 26 - Příklad 2 Připraví se vodný prostředek APS obsahující 30 hmotnost- bý. nich procent APS, 33 »5 hmotnostní/procenta glycerolu, 33,5 hmotnostních procent vody a dostatečné množství hydrochlo— ridu histidinu (asi 3 hmotnostní procenta)· Získá ae tak prostředek o pH přibližně 6,0, Pro srovnání se připraví následující roztoky, které obsahují: 30 % APS ve vodě, 30 % APS ve vodě obsahující dostatečné množství hydrochloridu histidinu jako pufru o pH 6,0, 30 % APS ve vodě obsahující dostatečné množství hsústidinové base tak, aby se získal roztoáyípH 8,5» 30 % APS v 50^ glycerolu· Celkový roztok tedy obsahuje 30 % APS, 35 % glycerolu a 35 % vody. Všechny roztoky byly skladovány čtyři dny při teplotě 37 °C* Potom byla pomocí HPLC zjišťována tvorba dimeru. Tvorba velkých množství dimeru ukazovala na nedostatek chemické stability. U všech roztoků byla visuálně sledována kalnost, což ukazuje na srážení prostředku a tedy na nedostatečnou fyzikální stabilitu. Výsledky těchto testů jsou uvedeny v následující tabulce 1.
Tabulka 1 voda HUSTOT ve vodě His-base 50^ gly-ve vodě cerol ve vodě lís-HCl' v 50# glycerolu pH 9,5 6,0 8,5 9,5 6,0 % dimeru (HPLC) 46,7 3,5 27,4 36,0 2,1 fyzikální ..... v. - .» . ·* stabilita + - + + + chemická stabilita mm + — — + + znamená, že prostředek vykazuje dobrou stabilitu - znamená, že prostředek vykazuje špatnou stabilitu
Bioaktivity prostředků jUfla/histidin«HGl/voda a APS/his-tidin.HCl/glycerol/voda byly stanovovány biotestem na dospělých krysích samicích· Podle testovacího protokolu byla dospělým krysím samicím Harlan, Sprague-Dawley (220 g) implantována Alzetova čerpadla, která obsahovala roztok, který byl testován· Objem roztoku v čerpadle byl u všech krys stejný· Potom byl sledován přírůstek hmotnosti u krys, kterým byla implantována čerpadla obsahující dva těsto·» váné roztoky· Výsledky těchto testů jsou uvedeny na obrázku 3· 1 když oba roztoky byly chemicky stabilní, jak ukazují data z tabulky 1, kombinace s glycerolem vykazuje lepší fyzikální stabilitu a VŠ& dlouhodobou bioaktivitu· Příklad 3
Byl připraven vodný prostředek APS obsahující přibližně 30 hmotnostních procent APS, 34,7 hmotnostního procenta glycerolu, 29,2 hmotnostního procenta vody, 0,7 hmotnostního procenta Tveenu 80 a takové množství dihydrogenfosforečnanu sodného (asi 4,8 hmotnostního procenta), které zajistí, aby prostředek měl pH přibližně 6,°· Pro srovnání se připra·» \s ví roztoky obsahující* 30 % APS ve vodě, 30 % APS a 0,5M dihydrogenfosforečnan sodný ve vodě, 30 % APS a 1,0M dihydro— genfosforečnan áodný ve vodě· Všechny roztoky byly skladovány 27 čtyři dny při teplotě 37 °C. Potom byla pomoci HPLC stanovována tvorba dimeru· U všech roztoků byly zjišťována zaka-lenost, která ukazuje na nedostatečnou fyzikální stabilitu roztoka. Výsledky těchto testů a pH hodnoty příslušných roztoků jsou uvedeny v následující tabulce 2. (Tabulka 2 voda 0,5H NaKL ve vodě 1,0M NaPO. 50 % 1,0M NaPO. ve vodě* v 50 % glycerolu PH 9,5 6,7 6,3 6,5 % dimeru (HPLO) 46,7 3,3 3,3 1,4 fyzikální stabilita + Ml - +
Souhrn různých testovaných excipientů, tvorba dimerů a fyzikální stav každého prostředku jsou uvedeny v následující tabulce 3· (Tabulka 3
Stabilita vodných prostředků
náplň APS · (.%) excipient doba skla dová ní 00 % dimeru podle HPLC pH fyzikální stav 10 voda 0 0,9 9,5 CS 20 voda 0 1,6 9,5 CS 30 voda 0 4,1 9,5 C§ 15 voda 24 13,3 9,5 CŠ 30 voda 24 30,0 9,5 CS 30 50?S glycerol 24 19,2 9,5 CS - 28 -
Tabulka 3 (pokračování)
30 3% hydrochlorid histidinu ve vodě 24 1,9 6,0 PPT 30 3% histidin.HCl ve vodě (upraveno pH)· 24 44,6 9,5 CS 30 voda 96 4-6,7 9,5 CS 30 3% hydrochlorid histidinu ve vodě 96 3,5 6,0 PPT 30 3% baze histidinu ve vodě 96 27,4 8,5 CS 30 3% hydrochlorid histidinu v 30% glycerolu- 96 2,1 6,0 CS 30 1,0M Naiy^ 96 3,3 6,3 PPT 36 0,5M NaHgPO^ 96 3,3 6,7 PPT 30 50% Ι,ΟΜ'ΝβΗ^ΡΟ. v 50% glycerolu 96 1,4 6,5 CS CS znamená čistý roztok nebo sirup PPT znamená vy sráženo (nikoliv fyzikálně nestálý) Přiklad 4
Byly připraveny tři prostředky, které obsahovaly 30 % APS, 30 % excipientu glycerol » voda a tolik dihydro·· genfosforečnanu sodného nebo hydrogenfosforečnanu sodného, aby pH výsledného roztoka bylo 6,3, 7,3 nebo 9*5· Všechny tyto prostředky byly skladovány 14 dnů při teplotě 39 °C. 29 -
Chromatograficky byla stanovena procenta dimeru pro každý prostředek. Prostředek o pH 6,5 obsahoval 2,9 % dimeru, prostředek o pH 7,3 obsahoval 10,6 % dimeru a prostředek o pH 9,5 obsahoval 73 dimeru. Byly připraveny dva prostředky, jeden obsahoval 30 % APS, 5 % dihydrogenfosforeč-nanu sodného, 35 % glycerolu a 30 % vody a měl pH 6,4, druhý obsahoval 30 % APS, 3 % hydrochloridu histidinu, 33>5 % glycerolu a 33,5 % vody a měl pH 6. Tyto prostředky byly testovány na dlouhodobou stabilitu při 4 °C, 22 °C, 37 °0 a 45 °C. Na obrázku 4 je vynesena tvorba dimeru jako funkce času pro prostředek fosforečnan/glycerol a na obrázku 5 pro prostředek histidin/glycerol. Tyto testy ukázaly, že prostředek fosforečnan/glycerol je lepší· Prostředek hydrochlorid histidinu/glycerol byl účinný pro zachováni stability APS, ale nebyl tak účinný jako prostředek fosfo-rečnan/glycerol a časem poněkud žloutl. Příklad 5
Byl připraven prostředek, který obsahuje 30 % APS, 5 % dihydrogenfosforečnanu sodného, 35 % glycerolu a 30 % vody a jehož pH bylo 6,4. Tento prostředek byl skladován za teploty místnosti různou dobu, načež byl testován bio— testem na krysách podle příkladu 2. Přerovnání byla použita kontrola, kdy krysám nebyl podán žádný hormon a další kontrola s čerstvě připraveným roztokem APS/foíorečnan/gly— cerol. Výsledky těchto biotestů jsou uvedeny na obrázku 6. - 30 -
Podobné biotesty byly prováděny na podobném vzorku APS/fosforečnan/glycerol, který byl skladován v rozmezí od čtyř do pěti měsíců za různých teplot· Výsledky těchto biotestů jsou uvedeny na obrázku 7. Příklad 6
Byly připraveny prostředky, které obsahuji 1,5 %, 3,0 %, 6,0 % a 30 % APS· Prostředek $e 30 % APS byl připraven smícháním APS s excipientem, kterým byl roztok 50% glycerolu a 50% ΪΜ NaHgPO^ ve vodě· Ostatní prostředky byly připraveny zředěním tohoto 30% prostředku s dalším glycerolem· Tyto koncentrace byly vypočteny tak, aby se jimi dosáhlo dávkováni 1, 2, 4,5 a 22,5 Kg APS na den, pokud se používá osmotická nádobka Alzetf^, model 2ML4·
Byla použita také osmotická nádobka "vy tlač ovací ho typu'*, • * která dodávala 1,3 až 1,6 mg APS denně po dobu 42 dnů·
Eaždý tento systém byl testován růstem krys· Výsledky jsou uvedeny na obrázku 8. Přiklad 7
Byl připraven prostředek, který obsahuje 30 % APS, 3 % hydrochloridu histidinu, 33,5 % glycerolu a 33,5 % vody, který měl pH asi 6,0. Tento prostředek byl podáván skupině křížených vepřů 200^ul osmotickou nádobkou AlzetfS^ po dobu 14 dnů· Rychlost podávání byla 3,6 mg APS za den. - 31 -
Naplněná nádobka byla subkutánně implantována do zadní části ucha, druhá nádobka byla implantována 14 dhů později· U každého vepře byl zaznamenáván průměrný denní pří— (PC) růstek (ADG) a průměrná denní spotřeba potravy a pro každého vepře byla vypočtena efektivita potravy (EE) jako poměr FC/ADG· Cím nižší byla hodnota efektivity potravy, tím vyšší byla efektivita potravy· Průměrné výsledky u testovaných vepřů během testovacího období 28 dnů jsou uvedeny v tabulce 4 spolu s výsledky pro podobnou negativní skupinu vepřů, kterým nebyl podán žádný hormon a pro podobnou positivní skupinu vepřů, kterým byly podávány denní dávky injekcí 3»6 mg APS ve 25mM roztoku hydrogenuhličitanu sodného o pH 9,5.
Tabulka 4 ~ negativní positivní vepři, jim£ kontrola kontrola byl podáván (bez po— (denní prostředek • dávání) .injekce) dny 1 až 14 ADG (kg/den) PC (kg/den) FE - 0,64 2,67 4,22 0,67 1,92 3,02 0,60 1,85 3,27 dny 15 až 28 ADG (kg/den) PC (kg/den) EE . 0,75 2,66 3,64 0,66 1,76 2,71 0,58 1,68 3,4*9 dny 1 až 28 ADG (kg/den) PC (kg/den) EE · 0,59 2,66 3,89 0,66 1.84 2.84 0,60 1,75 3,17 - 32 -
Zlepšená efektivita potravy a zvýšeného hodnoty insulinu podobného růstového faktoru I, které byly pozorovány 15· a 29· den, potvrzují, že APS byl efektivně dodáván během čtrnáctidenního období implantace. Příklad 8
Sedmi skupinám po deseti zkřížených vepřích byl podáván APS· Používané prostředky obsahovaly následující množství APS a 1M dihydrogenfosforečnanu sodného ve vodě* 1,5 % APS v 1,8% fosforečnanovém roztoku, 5,0 % APS v 5,5% fosforečnanovém roztoku, 6,0 % APS v 7,0% fosforečnanovém roztoka, 15 % APS v 17»5% fosforečnanovém roztoka a 50 % APS ve 55% fosforečnanovém roztoka· Pro doplnění každého prostředku byl použit glycerol. Nádobky dodávaly prostředek v dostatečných množstvích, které zaručovaly indikované denní dávky·! Existovaly dvě kontrolní skupiny vepřů, Jedna, kterým nebylo podáváno nic (negativní kontrola), a druhá skupina, které byly podávány 2 mg na den (injekčně) APS v pufru hydrogenuhličitanu sodného o pH 9,5 * n ... (positivní kotrola)· Prvá aplikace byla prováděna implantátem vytlačovacího typu, aplikace 2 až 7 byly podávány 2ml osmotickými nádobkami Alzet^) po dobu čtyř týdnů. Při aplikaci 6 a 7 byly na počátku 5· týdne implantovány dvoutýdenní osmotické nádobky Alzetf®^ s prostředky APS vypočtenými tak, aby se udržovala indikovaná denní dávka· Procentuální náplně APS a výsledné denní dávky byly následující i - 33
Aplikace číslo: Popis aplikace: 1 ....... 1,3 až 1,3 mg/den, nádobka vytlačovacího typu, náplň 30 % 2 ....... 1 mg/den, nádobka Alzet, nápln 1,5 % 3 ...... 2 mg/den, nádobka Alzet, nápln 3*0 % 4 ...... 3 mg/den, nádobka Alzet, náplň 4,5 % 3 ..... 4 mg/den, nádobka Alzet, náplň 6,0 % 6 ·...... 10 mg/den, nádobka Alzet, náplň 15,0 % 7 ······· 20 mg/den· nádobka Alzet, náplň 3°,0 %
Aplikace č. 1 byla prováděna po dobu šesti týdnů, aplikace č. 2 až 5 po dobu piti týdnů a aplikace 6 a 7 byly prováděny po dobu 6 týdnů· Hodnoty ADG, PC a PE těchto aplikací jsou uvedeny v tabulce 5 spolu se srovnáními s negativními a positivními kontrolami· - 35 -Tabulka 5 (pokračováni)
KS oo EN VO KS O vO Ol ON 00 EN ON Co vO 4· ' ts KS 00 H vO •k kk kk «» «k •k «k «k «k m «k O rH N O H OJ : O H CM : 00 · ON ON o Ol Ol · US US IN sí· sá· * rH rH US KS EN 00 vo ES Co vO 00 oo KS k m *k « kk kk kk kk 4k kk o rH CO o r—1 <M : O H KS : o rH CM : o O ON oo KS 00 ON rH US ON EN EN •k kk «k <k kk •k US o KS KS o CM CM : EN co ON KS ON Q ON 4" US o O O •k m •k kk •k «k Φ íj" O KS KS rH KS KS >o CU d- US CO US VO Φ O- 3- CO ON KS o m «* •k «k kk m CD KS O KS Ol · O KS KS M rH •H rH rH US CO EN vo US oa CO rH vO 00 o co <0 tk •k kk m - «k •k CVI o KS 4· · O KS KS rH KS ks KS rH rH Ol sj- (N ON VO 00 KS H 00 VO 00 ON H 4· ‘ OO EN «k •k kk kk «k •k «k «k kk kk H O KS VO o KS 5f · O ΡΛ KS o KS Ή q co > H 3 -P f H & •tH -P co es & & KS : CVI : rH ON H KS : Ol EN KS O á ' 8 VO ON o y «k kk kk - «k «k » m m «k • ·* •k AM o CVI KS · O KS KS : rH CM Ol : rH CM Ή £3 CD > •H O -P t£S ON vO US Λ S KS KS Ol : u> ON 03.-P co 5" O US ON KS VO : 00 KS bo a m kk « kk * m «k kk «k «1 kk Φ D O KS 4· 5 o KS EN o KS KS o KS £3 Λ t VO 1 US CÍ3 Q vO H § rH £3 o M £3 s o ta £3 o a £3 s P ® <5 P< Φ *4 S Φ <u 1*4 PĚ| Φ f*4 Ό Ό Ό '!>» H>s H>s H>5 -P -P -P -P 2,97 3,71 2,49 2,59 - 34 - Α Η d £3 Λ 10 4" V0 4 ' 4 A A A σν A H ΕΝ ΕΝ 4- · Φ H kk CO H σν OO kk kk m > ·» (M : » kk •k kk ΕΝ ο Η CM : O CVJ O CM CM : O O Η Α ΕΝ VO cr\ A H 00 σν o ΙΑ •4^ ΕΝ IN vO - « O co co co «» m kk kk CM · kk kk m kk V0 Ο Η ΟΙ : O rH rH r—1 rH o CVI Α 00 H CM : σν σν iH CM (Μ (Ο Α CO VO O co A o O •k m kk m kk m «k kk Α Η CM CVJ · o CM A O CM A : H OJ Η νΟ A 4 H A Q 00 ο CVJ (Α Α H O σν ON O 4- · © ρ—I Α ·» ·* kk kk kk *k « 4· Η (Μ (Μ : r—1 A CM : O A A · o Ή >ο © ΕΝ 4f 4* : CO CM CO H σν Λ ! A ο Η Φ 4· : <JV H 4· : o 4· C-- <Β » kk m ·» kk m «k m kk kk $ Α Η CM CM · O A A · H A A O Ή Η α 00 IN « 8 (Ν σν & co CO A H A σν e£ rH CM · VO vO kk ·» η m m • •k kk kk CM Η CVI Α O A A o CM A O Lf\ οο Ο 8 A O EN A H A Η C0 νΟ kk CM H σν O CM EN 4» m kk o kk «k kk «k kk kk Η Η CVI CM : A 4* : o A A : O Ή d <0 00 (VI : Η Ο •Ρ d (Ν OJ A 00 & 8 A σν & A vO 00 EN CM co ιΗ -Ρ kk ·» m kk m kk «k •k kk m 09 d Η CM CM : H CM : o CM CM ; o Ο Ο Ρ,Μ «Η d ® > Η Ή Ορ d «ο-ρ Φ οd.4
o rH & rH σν H cm σν o co iH rH © 4 O o σν o EN «k m kk •k kk kk kk kk kk kk H A KN ϊ O A 4- · H CM A : O 3,74 3,07 3,40 3,30 3,93 3,43 3,08 2,17 2,57 4,82 4,64 5,48 4,72 6,32 4,25 3,22 2,69 2,96 rH CM : A 4" cg cg CÍJ S2 d Ρ p & q d P o fa d P O M d P O O ^ Ř P -* φ <a fa Pei <D •4 PM S Φ «3 fa fa xí xi xJ '}>s '^S 'l>s P •P -P +3 - 36 -
Aplikace číslo 1, 6 a 7 vykazovaly efektivní uvolňování aktivního APS po dobu celých 6 týdnu těchto aplikací· Aplikace c* 4 a 5 vykazovaly efektivní uvolňováni aktivního APS po dobu více než 5 týdnů, těchto aplikací· Aplikace č· 2 a 3 byly blízko prahu, při kterém lze účinnost pozorovat·
Stabilita různých prostředků používaných v této studii byla pozorována inkubací v uzavřené injekční stříkačce 7# a 28· den při · 37 °C· docenta dimeru přítomného v prostřed- s· ' cích byla stanovována chromátograficky· Výsledky jsou souhrnně uvedeny v tabulce 6*í
Tabulka 6 nápln APS (%) % dimeru po 7 dnech % dimeru po 28 dnech 1,5 7,6 12,3 3,0 3,7 6,1 4,5 2,6 4,5 6,0 2,2 3,4 15.0 30.0 1,3 2,6 3,o 5,3 Příklad 9
Na skupinách (šesti) po devíti dospívajících vepřech byl srovnáván účinek podávání APS v různých dávkách a v různých prostředcích, při čemž všechny prostředky byly podávány osmotickou nádobkou vytlačovacího typu· Podávané prostředky obsahovaly 30 % APS, který byl podáván takovou rychlostí, aby - 37 - denní dávka byla 2 mg/kg· Jeden prostředek obsahoval 30 % APS, 35 % glycerolu a 35 % 1M vodného dihydrogenfosfo-rečnanu sodného· Jiný prostředek obsahoval 15 % APS·' Dva pro. středky byly připraveny podobným způsobem s obsahem 30 % APS, ale obsahovaly dále 0,07 % a 0,70 % Tweenu 80 (smáčecí činidlo)· Pátý prostředek obsahoval 40 % APS a 0,6 % Tweenu 80 v excipientu fosforečnan/glycerol· Podle indikovaných denních dávek byla implantována jedna nebo dvě nádobky·· Aplikace byly následující: číslo aplikace: popis aplikace: 1 2 mg/den, fosforečnan/glycerol, 1 nádobka (30 % náplně) 2 3 mg/den, fosforečnan/glycerol, 1 nádobka (30 % náplně) a 1 nádobka (15 % náplně) 3 4 mg/den, fosforečnan/glycerol, 2 nádobky (obě po 30 % náplně) 4 jako č·' 1, ale s 0,07 % Tweenu 80 5 jako č· 1, ale s 0,70 % Tweenu 80 6 2,8 mg/den, fosforečnan/glycerol + 0,6 % Tweenu 80, 1 nádobka (40 % náplně)
Studie byly prováděny po dobu šesti týdnů (s výjimkou t aplikace č· 2, která byla ukončena po 3 týdnech)· Výsledky ADG, FC a SB jsou uvedeny níže v tabulce 7» jsou srovnány s negativní kontrolní skupinou, které nebyl podán žádný - 38 - APS, a s positivní kontrolní skupinou, které byly podávány 2 mg/den denními injekcemi APS v hydrogenuhličitanovém pufru o pH 9,5·
Tabulka 7 negativní positiv- aplikace číslot kontrola ní kontrola 12 3 4-56 týden 1 ADG PC PE 0,76 5,14 4,18 1,18 3,04 2,63 1,07 0,99 1,03 1,03 1,14· 1,¾ 2l42 2,38 2,25 2,78 2,62 2,85 2,30 2,43 2,22 2,71 2,36 2,5* týden 2 ADG· PC PE 0,89 3,32 3,87 0,93 2,75 3,03 0,77 0,89 0,76 0,78 0,80 0,76 2,38 2^44 2,24 2,59 2,60 2,6| 3Íl8 2^98 3,21 4,16 3,36 3,63 týden 5 ADG PC PE 0,84 3.59 4.59 0,94 3,10 3,34 0,92 0,78 0,73 0,89 0,93 0»84 2,98 2^81 2>5 3,08 3,10 2,90 3,22 3,94 4,52 3,76 3,50 3,52 týden 4 ADG-PC PE 0,74 3,50 5,05 0,85 3,21 3,84 0,65 - 0,8» 0,71 0,63 0,8» 3.15 - 2,8» 3.16 3,15 f»96 5,1? - 3Í91 *,56 5,02 3,6» týden 5 ADG PC PE 0,84 3,61 4,44 0,94 3,41 3,69 O 8¾ - 1,05 0,68 1,01 0,90 3 io - 3l69 3*»» 3I52 3,51 »’,16 - 3,55 »,»» 3,5? *>°5 týden 6 ADG PC PE 0,84 3,70 4,57 0,91 3,27 3,76 q qj m 1,04 1,01 0,87 0,95 - Í!o5 3,70 3,60 3,75 I|o5 : 3> },B2 »’,23 *,13 týden 1-6 ADG · PC PE 0,82 3,4-9 4,25 0,95 3,13 3,30 0 88 - 0,92 ο,θ» 0,89 0,90 ,Ί 2I99 3,08 3,11 3,¾ |;|S _ 3,2* 3,68 3,51 3,*7 - 39 -
Na konci studie byl isolován obsah, nádobek, které obsahovaly 30 % APS ve fosforečnanu s glycerolem a analyzován na obsah dimeru/agregátu· Obsah dimeru/agregátu byl menší než 10 % vzhledem k celkovému obsahu isolovaného sómat o tropinu· To ukazuje na dobrou stabilitu během doby podávání prostředku· Po třech týdnech a na konci studie všechny aplikace fosforečnan/glycerol (č· 1 až 6) vedly hl&Ajjib' ke zvýšení pepřového somatotropinu a insulinu podobného růstového faktoru 1 v oběhu. To je další důkaz 42-denního podáváni bioaktivního APS· Příklad 10
Byly prováděny studie, které měly zjistit účinek podávání N-alanyl hovězího somatotropinu (A-BST) a. prostředku tohoto hormonu ve fosforečnan/glycerolovém excipientu obsaženém v osmotickém čerpadle na laktaci* 37 vícepárových lektajících krav Holstein mezi 93· a 252· dnem laktace bylo rozděleno do 5 skupin· Těmto kravám byl aplikován A-BST několika různými postupy. Podle jednoho postupu se A-BST rozpustí v 70mM pufru hydro genuhlič i tanu sodného a podává se buď jako denní injekce v dávce 9,0 mg na injekci nebo dvakrát denně v dávce 4,5 mg na injekci· A-BST byl podáván implantací buď osmotickou nádobkou Alzetf®^ typ 2002 po dobu 14 dnů nebo osmotickou nádobkou - 40 -
Abetf*^ typ 2ML4 po dobu 28 dnů.· Nádobka 2002 byla naplněna prostředkem, který obsahoval 25 % A-BST, 45,8 % glycerolu, 28,6 % jednomolárního dihydrogenfosforečnanu sodného a 0,6 % Tweenu 80, Tři nádobky 2002 byly implantovány čtrnáctidenně se čtrnáctidenní dávkou 126 mg A-BST· Nádobky 2ML4 byly naplněny prostředkem, který obsahoval 15 % A-BST, 67,2 % glycerolu, 17,4 % jednomolárního dihydrogenfosforečnanu sodného a 0,4 % Tweenu 80· Nádobka 2ML4 byla implantována na počátku studia· Její nominální dávka po dobu studia byla 252 mg.
Po dobu studia byla studována a sledována produkce mléka krav· Zvýšeni produkce mléka u krav, kterým byl aplikován prostředek, ve srovnání s kontrolními kravami (obojí v kg/den a jako % zvýšení) je uvedeno v tabulce S a na obrázku 9·
Tabulka 8 týden nádobka Alžet in.iekce • - - 14 dnů 2002 28 dnu 2HL4 -'3. mg Ix/den 4.5 mg lx/den kg/den % * kK/den , % kg/den %_ kg/den % 1 2,7 8,5 3,5 11,0 4,2 13,2 4,1 12,9 2 6,5 21,6 6,3 20,9 8,3 27,6 7,5 24,9 3 5,3 18,0 5,3 18,0 7,4 25,1 6,4 21,7 4 6,3 21,9 4*3 14,9 6,6 22,9 4,3 16,7 1-4 5,3 17,6 5,0 16,6 6,8 22,6 5,8 19,3 - 3 ·· 6,2 21,8 4,9 17,3 4,4 15,5 3,2 11,3 1-5 5,5 18,5 5,0 16,8 6,3 21,2 5,3 17*8 - 41 -
Produkce mléka se rychle zvýšila vlivem injekčně podávaného A.BST a tato odpověň se udržovala po období 4 týdnů. Změny v produkci mléka byly u krav s aplikovanými nádobkami Alzet méně rychlé než při injekcích, ale velikost odpovědi získaná ve čtvrtém týdnu byla podobná. Výtěžky mléka během 5. týdne zůstaly ve skupině s implantovanými nádobkami Alzet na hodnotě čtyř týdnů, což znamená, že A-BST zůstává bioaktivní in vivo alespoň po dobu 35 dnů. Příklad 11
Byly připraveny četné prostředky s APS s uvedenou náplní APS a s uvedeným excipientem. Byly stanoveny pH a množství dimeru u každého prostředku. Prostředky byly skladovány při 39 °C. Množství dimeru bylo stanovováno HPLC po 14, 28 a 43 dnech. Po 43 dnech byla stanovena také čirost prostředků. Prostředky a výsledky jsou uvedeny v tabulce 9·
Tabulka 9 náplň čirost po 45 •dnech excipient (doplň. činidlo) · .. Pn % dimeru čistý dnů:ϊ¥-23—55 w 33 % 33 % l,OM HaHpPO. 6,53 33 % glyceroln 1 %-Tweenu 80’ 4*»3 8,9 12,6 17,2 čistý 33 % 33 % 1,0M NaH^PO. 6,53 16.5 % vody . .. 16.5 % glycerólu' 1 % Tweenu 80 4,5 8,5 11,7 17,2 mírně zaka lený 33 * 67 % 1,0M tris+ 7,16 1,9 20,6 30,3 37,7 čirý - 42 -.
Tabulka 9 (pokračováni) 33 % 33 % tris+HCl 6,34 3Λ 9,6 14,3 19,6 jasný 33 % vody .. 33 % 67 % 2,0M tris+6,60 3,9 13,7 20,3 26,9 jasný
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY 1. Disponibilní somatotropinový prostředek, vyznačují-cí se tím, že obsahuje alespoň asi 10 procent bioaktivního somatotropinu, efektivní množství stabilizujícího polyolu a množství pufru, které postačuje k touni, aby pH bylo v takovém rozmezí, při němž si somatotropin zachovává svoji bioaktivitu po dobu, která je poíačující pro efektivní použití prostředku pro prodloužené podávání somatotropinu živočichům· 2»! Prostředek podle bodu 1, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň asi 15 hmotnostních procent bioaktivního somatotropinu· 3· Prostředek podle bodu 1, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň asi 20 hmotnostních procent bioaktivního somatotropinu· 4· Prostředek podle bodu 1, vyznačující se tím, že somatotropin je vybrán ze skupiny sestávající z hovězího somatotropinu a vepřového somatotropinu· 5· Prostředek podle bodu 4, vyznačující se tím, že se jako somatotropin používá N-alanyl-somatotropin. 6· Prostředek podle bodu 5* vyznačující se tím, že somatotropin je vybrán ze skupiny sestávající z ala-val 44 - hovězího somatotropinu a alany1 vepřového somatotropinu· 7· Prostředek podle bodu 1, vyznačující se tím, že stabilizující polyol je vybrán ze skupiny sestávající z glycerolu a tris(hydroxymethyl)aminomethanu. 8· Prostředek podle bodu 1, vyznačující se tím, že stabilizující polyol obsahuje od asi 20 do 80 hmotnostních procent prostředku· 9· Prostředek podle bodu 1, vyznačující se tím, že prostředek vykazuje pH mezi asi 4,3 a buď asi 7 nebo asi isoelektrickým bodem somatotropinu, který je větší· 10· prostředek podle bodu 9, vyznačující se tím, že pufr je vybrán ze skupiny sestávající z hydrochloridu his-tidinu a fosforečnanu alkalického kovu· 11· Prostředek podle 6odu 1, vyznačující se tím, že dále obsahuje smáčecí činidlo·
- 12. Prostředek podle bodu 11, vyznačující se tím, že se jako smáčecí činidlo používá neiontové povrchově aktivní Činidlo· 13· Prostředek podle bodu 12, vyznačující se tím, že se jako neiontové povrchově aktivní činidlo používá poly-ethoxylovaný ester sorbitanu· 45 - 14· Disponibilní somatotropinový prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň asi 10 hmotnostních procent bioaktivního somatotropinu, od asi 20 % do asi 80 % stabilizujícího polyolu a dostatečné množství pufru tak, aby prostředek vykazoval pH mezi asi 4,5 a buá asi 7 nebo asi isoelektrickým bodem somatotropinu, který je vetší· 15· Prostředek podle bodu 14, vyznačující se tím, že se jako stabilizující polyol používá glycerol· 16· Prostředek podle bodu 14, vyznačující se tím, že pufr je vybrán ze skupiny sestávající z hydrochloridu histídinu a fosforečnanu alkalického kovu· 17· Prostředek podle bodu 14, vyznačující se tím, že sóma to tropin je vybrán ze skupiny sestávající z hovězího somatotropinu a vepřového somatotropinu· 18· Prostředek podle bodu 17, vyznačující se tím, že somatotropin je vybrán ze skupiny sestávající z ala-val hovězího somatotropinu a alMyl vepřového somatotropinu· 19· Prostředek podle bodu 14, vyznačující se tím, že dále obsahuje smáčecí činidlo· 20· Disponibilní somatotropinový. prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň asi 10 hmotnostních % — 46 — bioaktivniho hovězího nebo vepřového somatotropinu, od asi 20 % do asi 80 % glycerolu a dostatečné množství pufru tak, aby prostředek vykazoval pH mezi asi 4,5 a bud asi 7 nebo asi isoelektrickým bodem somatotropinu, který je větší·
- 21, Způsob podávání somatotropinu živočichům, vyznačující se tím, že se po jistou dobu infusí podává živočichům somatotropinový prostředek obsahující alespoň asi 10 hmotnostních procent bioaktivniho somatotropinu, efektivní množstv^stabilizujícího polyolu a dostatečné množství pufru, kterým se dosáhne pH v oblasti, v niž si somatotropin zachovává svoji bioaktivitu po dobu infuse· 22· Způsob podáváni somatotropinu živočichům, vyznačující se tím, že se jistou dobu infusí podává živočichům somatotropinový prostředek obsahující asi 10 hmotnostních procent bioaktivniho somatotropinu, od asi 20 % do asi 80 % stabilizujícího polyolu a dostatečné množství pufru tak, aby prostředek vykazoval pH mezi asi 4,5 a bud asi 7 nebo asi isoelektrickým bodem somato— tropinu, který je větší, 23· Zp^uob podáváni somatotropinu živočichům, vyznačující se tím, že se po jistou dobu infusí podává živočichům somatotropinový prostředek obsahující alespoň asi 10 bioaktivniho hmotnostních procexrfyliověziho nebo vepřového somatotro- pinu, od asi 20 % do asi 80 % glycerolu a dostatečné množství pufru tak, aby prostředek vykazoval pH mezi asi 4,5 a bučf asi 7 nebo asi isoelektriclsým bodem somatotropinu, který je větší· Zastupuje P/TEMTSHíVřS PR/H Jívr nsi.á 1293 / Prsíti 4
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US28368588A | 1988-12-13 | 1988-12-13 | |
| US42168189A | 1989-10-18 | 1989-10-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ702889A3 true CZ702889A3 (en) | 1995-01-18 |
Family
ID=26962178
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS897028A CZ702889A3 (en) | 1988-12-13 | 1989-12-12 | Agent for controlled release of polypeptides |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0374120A3 (cs) |
| JP (1) | JPH02204418A (cs) |
| KR (1) | KR920005660B1 (cs) |
| CN (1) | CN1043631A (cs) |
| AU (1) | AU4617689A (cs) |
| BR (1) | BR8906435A (cs) |
| CA (1) | CA2005226A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ702889A3 (cs) |
| DK (1) | DK626089A (cs) |
| HU (1) | HUT52395A (cs) |
| IL (1) | IL92662A0 (cs) |
| NZ (1) | NZ231730A (cs) |
| PT (1) | PT92548A (cs) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5981485A (en) * | 1997-07-14 | 1999-11-09 | Genentech, Inc. | Human growth hormone aqueous formulation |
| US5861166A (en) * | 1991-03-12 | 1999-01-19 | Alza Corporation | Delivery device providing beneficial agent stability |
| MX9201040A (es) * | 1991-03-12 | 1992-09-01 | Alza Corp | Dispositivo de administracion en relacion al espacio y la estabilidad. |
| DK204791D0 (da) * | 1991-12-20 | 1991-12-20 | Novo Nordisk As | Hidtil ukendt farmaceutisk praeparat |
| AU667503B2 (en) * | 1991-12-20 | 1996-03-28 | Novo Nordisk Health Care Ag | A stabilized pharmaceutical formulation comprising growth hormone and histidine |
| US6022858A (en) * | 1991-12-20 | 2000-02-08 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation of human-growth hormone pretreated with zinc salt |
| DK136492D0 (da) * | 1992-11-10 | 1992-11-10 | Novo Nordisk As | A pharmaceutical formulation |
| US5849700A (en) * | 1991-12-20 | 1998-12-15 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation |
| US5849704A (en) * | 1991-12-20 | 1998-12-15 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation |
| US5198422A (en) * | 1992-06-11 | 1993-03-30 | Smithkline Beecham Corporation | Stabilized somatotropin for parenteral administration |
| BR9307361A (pt) * | 1992-11-03 | 1999-06-01 | Procter & Gamble | Limpeza com tensoativos de cadeia curta |
| ZA949350B (en) | 1994-01-25 | 1996-05-24 | Upjohn Co | Aqueous prolonged release formulation |
| US5672357A (en) * | 1994-07-01 | 1997-09-30 | Monsanto Company | Method and device for implantation of large diameter objects in bovines |
| US5595752A (en) * | 1994-07-01 | 1997-01-21 | Monsanto Company | Increasing dressing percentage and carcass weight in finishing beef cattle |
| US5654278A (en) * | 1994-10-13 | 1997-08-05 | Novo Nordisk A/S | Composition and method comprising growth hormone and leucine |
| US5547696A (en) * | 1994-10-13 | 1996-08-20 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation |
| US5631225A (en) * | 1994-10-13 | 1997-05-20 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation |
| US5705482A (en) * | 1995-01-13 | 1998-01-06 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation |
| US5552385A (en) * | 1995-06-05 | 1996-09-03 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation |
| US5904935A (en) * | 1995-06-07 | 1999-05-18 | Alza Corporation | Peptide/protein suspending formulations |
| AUPN801296A0 (en) * | 1996-02-12 | 1996-03-07 | Csl Limited | Stabilised growth hormone formulation and method of preparation thereof |
| US20070179096A1 (en) | 1996-04-24 | 2007-08-02 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical Formulation |
| ZA9711731B (en) * | 1996-12-31 | 1998-07-01 | Monsanto Co | Aqueous glycerol formulations of somatotropin |
| EP0880969A1 (en) * | 1997-05-28 | 1998-12-02 | Applied Research Systems ARS Holdings N.V. | Pharmaceutical compositions of peptides having low solubility in physiological medium |
| US6245740B1 (en) | 1998-12-23 | 2001-06-12 | Amgen Inc. | Polyol:oil suspensions for the sustained release of proteins |
| WO2000038652A1 (en) * | 1998-12-23 | 2000-07-06 | Amgen Inc. | Polyol/oil suspensions for the sustained release of proteins |
| KR100890679B1 (ko) | 2000-02-24 | 2009-03-26 | 일라이 릴리 앤드 캄파니 | 소마토트로핀의 지속적인 방출을 위한 비수성 주사제제들 |
| KR20030023878A (ko) | 2000-06-26 | 2003-03-20 | 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 | 소마토트로핀의 지속적인 방출을 위한 계면활성제 함유비수성 제제들 |
| US6664234B1 (en) | 2000-06-30 | 2003-12-16 | Monsanto Technology Llc | Non-aqueous injectable formulation preparation with pH adjusted for extended release of somatotropin |
| US20030089447A1 (en) * | 2001-11-06 | 2003-05-15 | Kenneth Molee | Soft absorbent garment made with discretely coated elastic elements, and system and method for making a soft absorbent garment |
| ITMI20021684A1 (it) * | 2002-07-29 | 2004-01-29 | Therapicon Srl | Composizione farmaceutica di peptide nasale |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3987790A (en) * | 1975-10-01 | 1976-10-26 | Alza Corporation | Osmotically driven fluid dispenser |
| WO1985002118A1 (en) * | 1983-11-21 | 1985-05-23 | Regents Of The University Of Minnesota | A buffered polyol-hormone mixture for use in chronic parenteral hormone administration |
| US4917685A (en) * | 1986-05-16 | 1990-04-17 | International Minerals & Chem. Corp. | Delivery device for the administration of stabilized growth promoting hormones |
| US4855141A (en) * | 1988-03-25 | 1989-08-08 | Alza Corporation | Device comprising means for protecting and dispensing fluid sensitive medicament |
-
1989
- 1989-12-11 EP EP19890870204 patent/EP0374120A3/en not_active Ceased
- 1989-12-12 KR KR1019890018386A patent/KR920005660B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-12-12 CZ CS897028A patent/CZ702889A3/cs unknown
- 1989-12-12 DK DK626089A patent/DK626089A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-12-12 JP JP1322452A patent/JPH02204418A/ja active Pending
- 1989-12-12 CN CN89109801A patent/CN1043631A/zh active Pending
- 1989-12-12 AU AU46176/89A patent/AU4617689A/en not_active Abandoned
- 1989-12-12 HU HU896513A patent/HUT52395A/hu unknown
- 1989-12-12 NZ NZ231730A patent/NZ231730A/xx unknown
- 1989-12-12 IL IL92662A patent/IL92662A0/xx unknown
- 1989-12-12 CA CA002005226A patent/CA2005226A1/en not_active Abandoned
- 1989-12-12 PT PT92548A patent/PT92548A/pt not_active Application Discontinuation
- 1989-12-13 BR BR898906435A patent/BR8906435A/pt not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0374120A3 (en) | 1991-07-31 |
| AU4617689A (en) | 1990-06-21 |
| HUT52395A (en) | 1990-07-28 |
| HU896513D0 (en) | 1990-02-28 |
| CN1043631A (zh) | 1990-07-11 |
| DK626089D0 (da) | 1989-12-12 |
| NZ231730A (en) | 1991-10-25 |
| BR8906435A (pt) | 1990-08-28 |
| JPH02204418A (ja) | 1990-08-14 |
| IL92662A0 (en) | 1990-08-31 |
| KR910007542A (ko) | 1991-05-30 |
| PT92548A (pt) | 1990-06-29 |
| DK626089A (da) | 1990-06-14 |
| EP0374120A2 (en) | 1990-06-20 |
| KR920005660B1 (ko) | 1992-07-13 |
| CA2005226A1 (en) | 1990-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ702889A3 (en) | Agent for controlled release of polypeptides | |
| KR100616793B1 (ko) | 겔 조성물 및 방법 | |
| US8496943B2 (en) | Non-aqueous single phase vehicles and formulations utilizing such vehicles | |
| US7037516B2 (en) | Non-aqueous surfactant-containing formulations for extended release of somatotropin | |
| CZ815687A3 (cs) | Nevodný prostředek na somatotropinové bázi | |
| US20030211974A1 (en) | Gel composition and methods | |
| NZ215730A (en) | Sustained-release peptide compositions containing proteins as carriers | |
| US6664234B1 (en) | Non-aqueous injectable formulation preparation with pH adjusted for extended release of somatotropin | |
| US7048938B2 (en) | Non-aqueous injectable formulations for extended release of somatotropin | |
| EP0285286A1 (en) | Method for stabilising proteins | |
| Cady et al. | Controlled delivery of somatotropins |