CZ55099A3 - Antithrombotic azacycloalkyl alkanoyl peptides and pseudopeptides - Google Patents

Abstract

Stabilní krystalická forma antitrombotické sloučeninyN-[N- [N-(4-piperid-4-yl)butanoyl-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]- (L)-p-cyklohexylalaninamidu, způsoby přípravy této stabilní krystalické formy, meziprodukty a farmaceutické prostředky sjejich obsahema též způsoby ameziprodukty pro přípravu sloučeniny obecného vzorce II, ve kterémΛ B, Z, E1, E2, G, R, m, n a p majísoecifický význam.Stable crystalline form of antithrombotic compoundN- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl-N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -p-cyclohexylalaninamide, methods of making this stable crystalline forms, intermediates and pharmaceutical compositions also containing processes and intermediates for preparation the compounds of formula (II) in which B, Z, E1, E2, G, R, m, n and p have a specific meaning.

Description

Antitrombotické azacykloalkylalkanoylové peptidy a pseudopeptidyAntithrombotic azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides

Oblast technikyTechnical field

Tento vynález se týká nehygroskopické stabilní krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)~N-ethylglycyl] - (L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu obecného vzorce I.The present invention relates to a non-hygroscopic stable crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide of formula I .

(I)(AND)

Tato sloučenina vykazuje antitrombotické působení »This compound shows antithrombotic activity »

♦ včetně inhibice agregace krevních destiček a vytváření trombů u savců a je použitelná při prevenci a léčbě trombózy spojené s chorobnými stavy, jako je infarkt myokardu, mrtvice, periferní arteriální onemocnění a disseminovaná intravaskulární koagulace.♦ including inhibiting platelet aggregation and thrombus formation in mammals, and is useful in the prevention and treatment of thrombosis associated with disease states such as myocardial infarction, stroke, peripheral arterial disease and disseminated intravascular coagulation.

Navíc se tento vynález týká způsobu přípravy krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl] - (L)-β-cyklohexylalaninamidu, jeho farmaceutických prostředků a meziproduktů.In addition, the present invention relates to a process for preparing the crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide, its pharmaceutical compositions and intermediates.

Navíc se tento vynález týká meziproduktů použitelných pro přípravu tetraazacykloalkylalkanoylových peptidových či pseudopeptidových sloučenin.In addition, the present invention relates to intermediates useful for the preparation of tetraazacycloalkylalkanoyl peptide or pseudopeptide compounds.

Hemostáza, biochemie srážení krve, je mimořádně složitým jevem, při které normální celková krev a tělesná tkáň spontánně zastavují krvácení z poraněných cév. Účinná hemostáza vyžaduje společné působení cévních, destičkových a plazmatických faktorů stejně tak jako kontrolních mechanismů bránících nadměrnému srážení. Závady, nedostatečná množství či nadměrná množství kterékoliv z těchto složek mohou vést k hemoragickým či trombotickým následkům.Hemostasis, the biochemistry of blood coagulation, is an extremely complex phenomenon in which normal whole blood and body tissue spontaneously stop bleeding from injured blood vessels. Effective haemostasis requires the co-action of vascular, platelet and plasma factors as well as control mechanisms to prevent excessive clotting. Defects, insufficient amounts or excessive amounts of any of these components may lead to hemorrhagic or thrombotic consequences.

Adheze destiček, rozprostírání a agregace na extracelulárních matricích jsou ústřední děje při vytváření trombu. Tyto děje se zprostředkovávají skupinou adhezivnich glykoproteinů, to jest fibrinogenu, fibronektinu a von Willebrandova faktoru. Fibrinogen je kofaktorem agregace destiček, zatímco fibronektin podporuje připojení destiček a rozprostírání a von Willebrandův faktor je důležitý při připojování destiček a jejich rozprostírání na subendoethelových matricích. Místa vazby pro fibrinogen, fibronektin a von Willebrandův faktor jsou na bílkovinném komplexu membrány destiček známém jako glykoprotein Ilb/IIla.Platelet adhesion, spreading and aggregation on extracellular matrices are central processes in thrombus formation. These events are mediated by a group of adhesive glycoproteins, i.e. fibrinogen, fibronectin, and von Willebrand factor. Fibrinogen is a cofactor for platelet aggregation, while fibronectin promotes platelet attachment and spreading, and von Willebrand factor is important in platelet assembly and spreading on subendoethel matrices. The binding sites for fibrinogen, fibronectin and von Willebrand factor are on the platelet membrane protein complex known as glycoprotein IIb / IIIa.

Adhesivní glykoproteiny, jako je fibrinogen, se neváží na normální destičky ve stavu klidu. Avšak jakmile se destička aktivuje agonistou, jako je trombim nebo adenosindifosfát, destička mění svůj tvar a tím pravděpodobně zpřístupňuje vazebné místo GPIIb/IIIa pro fibrinogen. Sloučeni·* ©· · · © © · © • * © • · © ©· ···· na, která je předmětem tohoto vynálezu, blokuje fibrinogenový receptor a proto vykazuje výše popsanou antitrombotickou účinnost.Adhesive glycoproteins, such as fibrinogen, do not bind to normal platelets at rest. However, once the platelet is activated by an agonist such as thrombim or adenosine diphosphate, the platelet changes its shape, thereby likely opening up the GPIIb / IIIa binding site for fibrinogen. The compound of the present invention blocks the fibrinogen receptor and therefore exhibits antithrombotic activity as described above.

Tato přihláška je částečným pokračováním současně projednávané US přihlášky č. 08/476 750 registrované 7. června 1995, která je pokračováním přihlášky současně projednávané US přihlášky č. 08/628 648 registrované 17. října 1994, která je částečným pokračováním současně projednávané US přihlášky US č. 08/138 820 registrované 15. října 1993, od které se nyní upouští.This application is a partial continuation of the co-pending U.S. application Ser. No. 08 / 476,750, filed on June 7, 1995, which is a continuation of the co-pending US application No. 08/628,648, filed October 17, 1994, which is a partial continuation of the co-pending US application. No. 08/138 820, filed October 15, 1993, now abandoned.

Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Bylo pozorováno, že přítomnost Arg-Gly-Asp (RGD) je nezbytná pro fibrinogen, fibronektin a von Willebrandův faktor při jejich interakci s receptorem buněčného povrchu [E. Ruoslahti, Pierschbacher, Cell, 44. 517-518 (1986)].Zdá se, že funkce fibrinogenu při připojování destiček se též účastní další dvě aminokyselinové sekvence, jmenovitě sekvence Gly-Pro-Arg a dodekapeptidová sekvence His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val. Ukázalo se, že krátké syntetické peptidy obsahující RGD nebo dodekapeptid váží destičkový receptor GPIIb/IIIa a inhibují kompetitivně vazbu fibrinogenu, fibronektinu a von Willebrandova faktoru a rovněž inhibují agregaci aktivovaných destiček [Plow a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 82, 8057-8061 (1985), Ruggeri a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 5708-5712 (1986), Ginsberg a kol., J. Biol. Chem., 260, 3931-3936 (1985) a Gartner a kol., J. Biol. Chem., 260. 11, 891-894 (1987)].It has been observed that the presence of Arg-Gly-Asp (RGD) is essential for fibrinogen, fibronectin and von Willebrand factor in their interaction with the cell surface receptor [E. Ruoslahti, Pierschbacher, Cell, 44, 517-518 (1986)] Two other amino acid sequences, namely the Gly-Pro-Arg sequence and the His-His-Leu-Gly dodecapeptide sequence, also appear to be involved in the function of fibrinogen in the attachment of platelets. -Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val. Short synthetic peptides containing RGD or dodecapeptide have been shown to bind to the platelet GPIIb / IIIa receptor and to competitively inhibit fibrinogen, fibronectin, and von Willebrand factor binding as well as inhibit aggregation of activated platelets [Plow et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 82, 8057-8061 (1985), Ruggeri et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 5708-5712 (1986), Ginsberg et al., J. Biol. Chem., 260, 3931-3936 (1985) and Gartner et al., J. Biol. Chem., 260, 11, 891-894 (1987)].

Tjoeng a kol. popisují v US patentech č. 5 037 808 » « · · · · · · · · · «·« · < * * · » ·· · «· !« * · ··.: * · ♦ f · © ··· · · · · ··« 9 9 '»9 9 999 9 9 9 9 a 4 879 313, že indolylové sloučeniny obsahující guanidinoalkanoylové a guanidinoalkenoyl-aspartylové zbytky jsou inhibitory agregace destiček.Tjoeng et al. disclose in U.S. Pat. No. 5,037,808, "", "", "", "", "", and "". And 9,879,313 that indolyl compounds containing guanidinoalkanoyl and guanidinoalkenoyl aspartyl residues are platelet aggregation inhibitors.

US patent č. 4 992 463 (Tjoeng a kol.), vydaný 12. února 1991, zveřejňuje genericky, že řada arylových a aralkylguanidinoalkylových peptidových mimetických sloučenin vykazuje inhibici agregace destiček a uveřejňuje specificky řadu mono- a dimethoxyfenylových peptidových mimetických sloučenin a bifenylalkylových peptidových mimetických sloučenin.U.S. Patent No. 4,992,463 (Tjoeng et al.), Issued February 12, 1991, discloses generically that a number of aryl and aralkylguanidinoalkyl peptide mimetics exhibit inhibition of platelet aggregation and disclose specifically a series of mono- and dimethoxyphenyl peptide mimetics and biphenylalkyl peptide mimetics. compounds.

US patent č. 4 857 508 (Adams a kol.), vydaný 15. srpna 1989, uveřejňuje genericky, že řada guanidinoalkylových peptidových derivátů obsahujících terminální aralkylové substituenty vykazuje inhibici agregace destiček a tento patent specificky uveřejňuje řadu O-methyltyrosinových, bifenylových a naftylových derivátů obsahujících terminální amidovou funkční skupinu.U.S. Patent No. 4,857,508 to Adams et al., Issued Aug. 15, 1989, discloses generically that a number of guanidinoalkyl peptide derivatives containing terminal aralkyl substituents exhibit platelet aggregation inhibition, and this patent specifically discloses a series of O-methyltyrosine, biphenyl, and naphthyl derivatives. containing a terminal amide functional group.

D. M. Haverstick a kol. popisují v Blood 66 (4), 946-952 (1985), že řada syntetických peptidů včetně arg-gly-asp-ser a gly-arg-gly-asp-ser je schopná inhibice agregace destiček indukované trombinem.D. M. Haverstick et al. disclose in Blood 66 (4), 946-952 (1985) that a variety of synthetic peptides including arg-gly-asp-ser and gly-arg-gly-asp-ser are capable of inhibiting thrombin-induced platelet aggregation.

E. F. Plow a kol. uvádějí v Proč. Nati. Acad. Sci. USA 79. 3711-3715 (1982), že tetrapeptidový glycyl-L-prolyl-L-arginyl-L-prolin inhibuje vazbu fibrinogenu na lidské destičky.E. F. Plow et al. in Why. Nati. Acad. Sci. USA 79, 3711-3715 (1982), that the tetrapeptide glycyl-L-prolyl-L-arginyl-L-proline inhibits fibrinogen binding to human platelets.

Francouzská patentová přihláška č. 86/17507 registrovaná 15. prosince 1986 uveřejňuje, že tetra-, penta- a hexapeptidové deriváty obsahující sekvenci -arg-gly-asp- jsouFrench Patent Application No. 86/17507, filed December 15, 1986, discloses that tetra-, penta- and hexapeptide derivatives containing the sequence -arg-gly-asp- are

použitelné jako antitrombotické prostředky.useful as antithrombotic agents.

US patent č. 4 683 291 (Zimmerman, a kol.), vydaný 28. července 1987, uveřejňuje, že peptidy obsahující šest až čtyřicet aminokyselin zahrnujících sekvenci -arg-gly-aspjsou inhibitory vazby destiček.U.S. Patent No. 4,683,291 (Zimmerman, et al.), Issued July 28, 1987, discloses that peptides of six to forty amino acids comprising the sequence -arg-gly-asp are platelet binding inhibitors.

Publikace evropských patentových přihlášek č.European patent application publication no.

319 506, vydaná 7. června 1989, uveřejňuje, že několik tetra-, penta- a hexapeptidových derivátů obsahujících sekvenci -arg-gly-asp- jsou inhibitory agregace destiček.No. 319,506, issued June 7, 1989, discloses that several tetra-, penta-, and hexapeptide derivatives containing the sequence -arg-gly-asp- are platelet aggregation inhibitors.

Cyklické peptidové analogy obsahujíc! zbytek Gly-Asp se uvádějí jako antagonisté receptorů fibrinogenu v US patentu Č. 5 023 233.Cyclic peptide analogs containing 1 &apos; the Gly-Asp residue is reported to be fibrinogen receptor antagonists in U.S. Patent No. 5,023,233.

Peptidy a pseudopeptidy obsahující aminové, guanidinové, imidazoloylové a/nebo amidinoalkanoylové a alkenoylové zbytky se popisují jako antitrombotické prostředky v projednávaných přihláškách US č. 07/677 006, 07/534 385 a 07/460 777 registrovaných 28. března 1991, 7. června 1990 a 4. ledna 1990 stejně tak jako v US patentu č. 4 952 562 a v mezinárodní přihlášce č. PCT/US90/05448 registrované 25. září 1990, které všechny přísluší stejnému přihlašovateli jako tento vynález.Peptides and pseudopeptides containing amine, guanidine, imidazoloyl and / or amidinoalkanoyl and alkenoyl residues are disclosed as antithrombotic agents in the copending US applications 07/677 006, 07/534 385 and 07/460 777 filed March 28, 1991, June 7, 1991 1990 and January 4, 1990, as well as US Patent No. 4,952,562 and International Application No. PCT / US90 / 05448, filed September 25, 1990, all of which belong to the same applicant as the present invention.

Peptidy a pseudopeptidy obsahující aminové, guanidinoalkylové a alkenylbenzoylové, fenylalkanoylové a fenylalkenoylové zbytky se popisují jako antitrombotické prostředky v podané přihlášce US č. 07/475 043, registrované 5. února 1990 a v mezinárodní přihlášce č. PCT/US91/02471, registrované 11. dubna 1991, publikované jako mezinárodní publikace č. WO 92/13117 vydaná 29. října 1992, příslušející stejnému • «» * · · · · · • · Φ *· · · · '♦ tt · · « ··· ·· 4 · » · » »« · Μ · ♦ ί·' · · 9 9 ·Peptides and pseudopeptides containing amine, guanidinoalkyl and alkenylbenzoyl, phenylalkanoyl and phenylalkenoyl residues are described as antithrombotic agents in US Application Serial No. 07/475,043, filed Feb. 5, 1990, and International Application No. PCT / US91 / 02471, filed 11. Apr. 1991, published as International Publication No. WO 92/13117, published Oct. 29, 1992, belonging to the same 4 &lt; tb &gt; ______________________________________ &lt; tb &gt; · · »Ί ί 9 · 9 9 ·

9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 i 9 9 99 9 99 99 přihlašovateli jako tento vynález.9 9 9 i 9 9 99 9 99 99 to the applicant as the present invention.

Alkanoylové a substituované alkanoylové a substituované alkanoylazacykloalkylformylové deriváty kyseliny aspartové se uvádějí jako inhibitory agregace destiček v US patentu č. 5 053 392 registrovaném 1. prosince 1989 příslušejícím stejnému přihlašovateli a stejnému vynálezci jako tento vynález.The alkanoyl and substituted alkanoyl and substituted alkanoylazacycloalkylformyl derivatives of aspartic acid are disclosed as platelet aggregation inhibitors in U.S. Patent No. 5,053,392, filed December 1, 1989, belonging to the same applicant and the same inventor as the present invention.

N-substituované azacykloalkylkarbonylové cyklické deriváty kyseliny aminoacylaspartové se uvádějí jako antitrombotika v US patentu č. 5 064 814 registrovaném 5. dubna 1990 od stejných vynálezců, který přísluší stejnému přihlašovateli jako tento vynález. Deriváty kyseliny azacykloalkylformylglycylaspartové se uvádějí jako antitrombotika v US patentu č. 5 051 405 registrovaném 10. října 1989 a příslušejícím stejnému přihlašovateli jako tento vynález.N-substituted azacycloalkylcarbonyl cyclic aminoacylaspartic acid derivatives are disclosed as antithrombotics in U.S. Patent No. 5,064,814, filed April 5, 1990 by the same inventors to the same Applicant as the present invention. Azacycloalkylformylglycylaspartic acid derivatives are disclosed as antithrombotics in U.S. Patent No. 5,051,405, filed October 10, 1989 and assigned to the same Applicant as the present invention.

Evropská patentová přihláška 0 479 481 publikovaná 8. dubna 1992 uveřejňuje azacykloalkylalkanoylové glycylové aspartylové aminokyseliny jako antagonisty fibrinogenových receptorů.European Patent Application 0 479 481 published April 8, 1992 discloses azacycloalkylalkanoyl glycyl aspartyl amino acids as fibrinogen receptor antagonists.

Evropská patentová přihláška 0 478 362 publikovaná 1. dubna 1992 uveřejňuje azacykloalkylalkanoylové peptidylové β-alaniny jako antagonisty fibrinogenových receptorů.European Patent Application 0 478 362 published April 1, 1992 discloses azacycloalkylalkanoyl peptidyl β-alanines as fibrinogen receptor antagonists.

Publikace patentové přihlášky PCT č. W095/10295 uveřejňuje azacykloalkylalkanoylové peptidy a pseudopeptidy obecného vzorce II i :PCT Publication No. WO95 / 10295 discloses azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides of formula II i:

• * φφφ φ φ ♦ ’ . !• * φφφ φ φ ’’. !

• φ φ φφ φ «#• φ φ φφ φ «#

ο ιιο ιι

-NH-CH-C-Z ι-NH-CH-C-Z1

CH₂COOH (ΐΐ) zejména Ν-[Ν-[Ν-(4-piperid—4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamid, které inhibují agregaci destiček a vytváření trombů u savců a jsou použitelné při prevenci a léčbě trombózy. N-[N-[N-(4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl ]-(L) -aspartyl ]--(L) -B-cyklohexylalaninamid připravený podle publikace patentové přihlášky PCT č. WO95/10295 je amorfní, hygroskopický a je fyzikálně nestabilní, neboť absorbuje vlhkost. Publikace patentové přihlášky PCT č. W095/10295 neuveřejňuje nehygroskopickou stabilní krystalickou formu N-[N-[N-(4-piperíd-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu.CH ₂ COOH (ΐΐ) especially Ν- [Ν- [Ν- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide, which inhibit aggregation platelets and thrombus formation in mammals and are useful in the prevention and treatment of thrombosis. N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide prepared according to PCT Publication No. WO95 / 10295 is amorphous, hygroscopic and is physically unstable as it absorbs moisture. PCT Publication No. WO95 / 10295 does not disclose a non-hygroscopic stable crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) - β-cyclohexylalaninamide.

Publikace patentové přihlášky č. WO95/10295 též popisuje, že azacykloalkanoylové peptidy a pseudopeptidy se obecně připraví standardním způsobem syntézy peptidu v pevné fázi či v roztoku s použitím výchozích materiálů a/nebo přímo dostupných meziproduktů od společností dodávajících chemikálie, jako je Aldrich nebo Sigma [H. Paulsen, G. Merz, V. Weichart Solid-Phase Synthesis of O-Glycopeptide Sequences, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 27 (1988), H. Mergler, R. Tanner, J. Gosteli a P. Grogg Peptide Synthesis by a Combi♦ » ·» · · · ·Patent Application Publication No. WO95 / 10295 also discloses that azacycloalkanoyl peptides and pseudopeptides are generally prepared by standard solid or solution peptide synthesis using starting materials and / or directly available intermediates from chemical supply companies such as Aldrich or Sigma [ H. Paulsen, G. Merz, V. Weichart Solid-Phase Synthesis of O-Glycopeptide Sequences, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 27 (1988), H. Mergler, R. Tanner, J. Gosteli, and P. Grogg Peptide Synthesis by a Combi.

nation of Solid-Phase and Solution Methods I: A NewNation of Solid-Phase and Solution Methods I: A New

Acid-Labile Anchor Group for the Solid-Phase Synthesis of Fully Protected Fragments. Tetrahedron letters, 29, 4005 (1988), Merrifield, R. B., Solid Phase Peptide Synthesis after 25 Years: The Design and Synthesis of Antagonists of Glucagon, Makromol. Chem. Macromol. Symp., 19, 31 (1988)]. Dále publikace patentové přihlášky PCT č. W095/10295 uveřejňuje přípravu amorfní a hygroskopické formy N~[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu sekvenční syntézou C-terminální aminokyseliny, jak ukazuje schéma I.Acid-Labile Anchor Group for Solid-Phase Synthesis of Fully Protected Fragments. Tetrahedron letters, 29, 4005 (1988); Merrifield, R. B., Solid Phase Peptide Synthesis after 25 Years: The Design and Synthesis of Antagonists of Glucagon, Makromol. Chem. Macromol. Symp., 19, 31 (1988)]. Furthermore, PCT Patent Application Publication No. WO95 / 10295 discloses the preparation of an amorphous and hygroscopic form of N - [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L). ) -β-cyclohexylalaninamide by sequential synthesis of the C-terminal amino acid as shown in Scheme I.

Schéma IScheme I

OO

II spojemII spojem

P.-NH-CH-C-OH + HN¹ i i ch₂-c-op₂ P.-NH-CH-C-OH + HN ¹ ii ch ₂ -c-op ₂

OO

E'E'

CH iCH i

FF

G'·G'·

OO

IIII

E'E'

Ρ,-NH-CH-C —N—CHΡ, -NH-CH-C — N — CH

CH₂-C-OP₂ F ii O —ξθχ.......GCH ₂ -C-OP ₂ F ii O —ξθχ ....... G

O E' deprotekce II I —-NH₂-CH-C—N— CHOE 'deprotection II I-NH ₂ -CH-C-N-CH

CH₂-C-OP₂ F ii OCH ₂ -C-OP ₂ F ii O

O . .O. .

, ₄ II 1) spojeni, ₄ II 1) connection

P₃*N—tCH₂j— c-OH -:-)P ₃ * N — tCH ₂ j — c-OH - :-)

I ' ' p ₂) deprotekce ₂ ) deprotection

B(B)

OO

IIII

H-N-{CH^-C -NH-CH-C B ^P 'HN- {CH 2 -C -NH-CH-C B ^P '

E'E'

NCH i ch₂-c-op₂ f ii *NCH i ch ₂ -c-op ₂ f ii *

A'AND'

N-^CH₂J—C -OHN- (CH _{2) 3} -C-OH

1) spojení1) connection

2) deprotekce2) deprotection

R· _AZR · _A Z

NO O O E ^CH₂)—C— N-^CH₂)- C - NH -CH - C — N^Π B ^P CH₂COOH •CH ·NO OOe ^ _CH2) -C- N = CH ₂₎ - C - NH-CH - C - N B ^{P Π} CH ₂ COOH · • CH

• «I »· >' · ♦ · · • 4 4• «4»

4· 4 4 4 • · 44 · 4 4 4 • 4

4 ··· ·4 ··· ·

4 4 4 • · 4 4 • 4 4 · • · · 4 • 4 · 4 • 4 «·4 4 4 • 4 4 4 4 4 4 4 4 4

Publikace přihlášky PCT č. WO95/10295 neuveřejňuje tvorbu tetraazacykloalkylalkanoylových peptidů a pseudopeptidů ani konkrétně N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)~N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu z centrálního di(pseudopeptidu či peptidu), kde Να C-terminální konce centrálního di(pseudopeptidu či peptidu) jsou oba připojeny na pseudoaminokyseliny a/nebo aminokyseliny s vytvořením tetraazacykloalkyl-alkanoylových peptidů a pseudopeptidu.PCT Publication No. WO95 / 10295 does not disclose the formation of tetraazacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides nor specifically N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide from a central di (pseudopeptide or peptide), wherein the Να C-terminal ends of the central di (pseudopeptide or peptide) are both attached to pseudo amino acids and / or amino acids to form tetraazacycloalkyl-alkanoyl peptides and pseudopeptide.

Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Tento vynález se týká nehygroskopické stabilní krystalické formy N-[N- [N-( 4-piper.id~4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu obecného vzorce I.The present invention relates to a non-hygroscopic stable crystalline form of N- [N- [N- (4- (piperidin-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide Formula I.

(I)(AND)

Tato sloučenina vykazuje antitrombotické působení včetně inhibice agregace destiček a vytváření trombů u savců a je použitelná při prevenci a léčbě trombózy spojené s cho- 10 « * · · · r · · · · • · « « » * · 9 9 • · · « • · * · * · · • · 9 9 9 9This compound exhibits antithrombotic activity, including inhibition of platelet aggregation and thrombus formation in mammals, and is useful in the prevention and treatment of thrombosis associated with cholera. • 9 9 9 9

9 9 9 99

9 9 9 9 « · · · · • · · · 99 9 9 9 9

99 9 9 9 99 robnými stavy, jako je infarkt myokardu, mrtvice, periferní arteriální onemocnění a disseminovaná intravaskulární koagulace. Tento vynález se též týká farmaceutického prostředku obsahujícího nehygroskopickou stabilní krystalickou formu N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)-butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexyl- alaninamidu a meziproduktů této sloučeniny.99 9 9 9 99 conditions such as myocardial infarction, stroke, peripheral arterial disease and disseminated intravascular coagulation. The present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising a non-hygroscopic stable crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) -butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β -cyclohexyl-alaninamide and intermediates thereof.

Tento vynález se též týká způsobů přípravy tetraazacykloalkylalkanoylpeptidových nebo pseudopeptidových sloučenin obecného vzorce IIThe present invention also relates to processes for the preparation of tetraazacycloalkylalkanoyl peptide or pseudopeptide compounds of formula II

OO

IIII

NH-CH-C-Z iNH-CH-C-Z i

ch₂cooh (II) ve kterémch ₂ cooh (II) in which

A je atom vodíku,A is a hydrogen atom,

B je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, alkylarylová skupina nebo alkylaralkylová skupina.B is alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, alkylaryl, or alkylaralkyl.

r · ♦ * * · ♦ · « ι : :,: : .· _e: .. , ·«· · · · ···· • · · · * · · · · · · · · «φr · ♦ * * · ♦ ·::,::. · _e : .., · «· · · · ···· · · · · · · ·

COGCOG

CH ^Xc2CH ^X c2

3θ3θ

Ε^χ je atom vodíku,Ε ^χ is a hydrogen atom,

Ε² je boční řetězec přirozené α-aminokyseliny připojený na uhlík a, atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, substituovaná arylová skupina, aralkylová skupina, substituovaná aralkylová skupina, heterocyklylová skupina, substituovaná heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, substituovaná heterocyklylalkylová skupina nebo Ε^Ί a E² spolu s atomy dusíku a uhlíku, ke kterým jsou připojeny, vytvářejí azacykloalkanový 4-, 5-, 6- nebo 7-členný kruh,Ε ² is a natural α-amino acid side chain attached to carbon and, hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, substituted aryl, aralkyl, substituted aralkyl, heterocyclyl, substituted a heterocyclyl group, a heterocyclylalkyl group, a substituted heterocyclylalkyl group or Ε ^Ί and E ² together with the nitrogen and carbon atoms to which they are attached form an azacycloalkane 4-, 5-, 6- or 7-membered ring,

G je skupina OR¹ nebo NR^XR²,G is OR ¹ or NR ^X R ² ,

R¹ a R² jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, alkylarylová skupina nebo alkylaralkylová skupina,R ¹ and R ² are independently hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, alkylaryl or alkylaralkyl;

R je atom vodíku, alkylová skupina, arylová skupina nebo aralkylová skupina, m je 1 až 5, ··· ο» · · · · · • · · » · · · 9» · ·· · ·«· · · · · · · » • · · · · * · · «·· · » « 9 η je 0 až 6 a p je 1 až 4 a konkrétně pro přípravu nehygroskopické stabilní krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)-butanoyl)-N-ethylglycyl]~R is hydrogen, alkyl, aryl or aralkyl, m is 1 to 5, m is 1 to 5, 9 is 9, 9 is 9 9 η is 0 to 6 and p is 1 to 4, and in particular for the preparation of a non-hygroscopic stable crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4)] (yl) -butanoyl) -N-ethylglycyl] -

-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu.- (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide.

Tento vynález se týká sloučeniny obecného vzorceThe present invention relates to a compound of formula

Π θ E¹ E² OΠ E ¹ E ² O

P²'-,^(CH₂)p-JL_HN_c_HJl_^-CH-C-G ^B CH₂CO₂P¹ (VII) ve kteréP ² '-, ^ (CH ₂ ) p -JL _{HN -} c _{H J 1} - ^ - CH-CG ^B CH ₂ CO ₂ P ¹ (VII) in which

B je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, alkylarylová skupina nebo alkylaralkylová skupina,B is alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, alkylaryl or alkylaralkyl,

E¹ je atom vodíku,E ¹ is a hydrogen atom,

E³ je boční řetězec přirozené α-aminokyseliny připojený na uhlík a, atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina,E ³ is a side chain of a natural α-amino acid attached to a carbon α, a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a cycloalkylalkyl group,

·· ·· ·· ·· • * · * » ♦ ♦ · • · · · · · · • «* · 9 · ♦ · · • · · ♦ · ♦ · ·· · ·· · «· «· alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, substituovaná arylová skupina, aralkylová skupina, substituovaná aralkylová skupina, heterocyklylová skupina, substituovaná heterocyklylová skupina, heterocyklylakylová skupina, substituovaná heterocyklylalkylová skupina nebo E^x a E² spolu s atomy dusíku a uhlíku, ke kterým jsou připojeny, vytvářejí azacykloalkanový 4-, 5-, 6- nebo 7-členný kruh,· Yk c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c a group, alkylcycloalkylalkyl, aryl, substituted aryl, aralkyl, substituted aralkyl, heterocyclyl, substituted heterocyclyl, heterocyclylalkyl, substituted heterocyclylalkyl, or E ^x and E ² together with the nitrogen and carbon atoms to which they are attached, form an azacycloalkane 4-, 5-, 6- or 7-membered ring,

G je skupina 0R^x nebo NR^XR², ri _a j_sou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, alkylarylová skupina nebo alkylaralkylová skupina, p je 1 až 4,G is OR ^x or NR ^x R ² , r 1 _and j _are independently hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, alkylaryl or alkylaralkyl, p is 1 to 4,

P^x je skupina chránící kyselinu labilní při hydrogenaci aP ^x is a hydrogenation labile acid protecting group a

P² ’ je P² nebo TFA.H- aP ² 'is P ² or TFA.H- a

P² je skupina chránící amin labilní v kyselém prostředí.P ² is an acid labile amine protecting group.

Přehled obrázků ve výkresechOverview of drawings in drawings

Obr. 1 představuje záznam rentgenové práškové difrakce pro vzorek nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu připraveného v přík14Giant. 1 is an X-ray powder diffraction pattern for a sample of a non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide prepared in Example 14

• 9 99» 9 » φ• 9 99 9 9

9 9 9 9 9 ·9 9 9 9 9 ·

999« 99 9 9 ladu 13, způsob A.999 99 99 9 9 lade 13, method A.

Obr. 2 představuje záznam rentgenové práškové difrakce vzorku nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl] - (L) -β-cyklohexylalaninamidu připraveného v příkladu 13, způsob B(a) .Giant. 2 is an X-ray powder diffraction pattern of a sample of a non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide prepared in Example 13, Method B (a).

Obr. 3 představuje záznam rentgenové práškové difrakce vzorku nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl] — f L) — -β-cyklohexylalaninamidu připraveného v příkladu 13, způsob B(b).Giant. 3 is an X-ray powder diffraction pattern of a sample of a non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide prepared in Example 13, Method B (b).

Obr. 4 představuje záznam rentgenové práškové difrakce vzorku hygroskopické krystalické formy Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]—(L)— -aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu připraveného podle popisu v příkladu 14.Giant. 4 is an X-ray powder diffraction pattern of a sample of hygroscopic crystalline form of Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide prepared as described in Example 14.

Obr. 5 představuje záznam rentgenové práškové difrakce vzorku nehygroskopické krystalické formy Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu připraveného podle popisu v příkladu 14.Giant. 5 is an X-ray powder diffraction pattern of a sample of a non-hygroscopic crystalline form of Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide prepared as described in Example 14.

Obr. 6 představuje isotermický mikrokalorimetrický záznam tepelného výkonu jako funkce času pro tři různé pokusy provedené podle popisu v pokusu 15. Pokusy sledují tepelnou aktivitu různých krystalických forem N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu při expozici různým parám rozpouštědel. Stopa (A) na obr. 6 ukazuje, že při expozici hygroskopického • 99 • · 99··Giant. 6 is an isothermal microcalorimetric record of heat output as a function of time for three different experiments performed as described in Experiment 15. The experiments monitor the thermal activity of various crystalline forms of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl] -N- ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide when exposed to various solvent vapors. The trace (A) in Figure 6 shows that when exposed to hygroscopic • 99 • · 99 ··

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu připraveného podle příkladů 5 až 11 80% relativní vlhkosti (nasycený roztok chloridu draselného) při teplotě 40 °C po dobu 30 h dochází k silně exotermnímu ději, při kterém se hygroskopická forma sloučeniny převádí na její nehygroskopickou formu. Stopa (B) na obr. 6 ukazuje, že nedochází k žádnému exotermnímu konverznímu ději při expozici hygroskopického N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl] - (L) -β-cyklohexylalaninamldu připraveného podle přikladu 5 až 11 parám methanolu při 40 °C (jiného rozpouštědla než je voda, ve kterém je tato sloučenina rozpustná), a že tedy methanol nepodporuje mobilitu v rámci krystalů umožňující převedení na nehygroskopickou formu. Stopa (C) na obr. 6 ukazuje, že nenastává žádná exotermní konverze při expozici nehygroskopického N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu připraveného podle příkladu 13 při 80% relativní vlhkosti a 40 °C, takže nehygroskopická forma této sloučeniny se nepodrobuje za těchto podmínek konverzi, to jest je stabilní formou.N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide prepared according to Examples 5 to 11 of 80% relative humidity ( saturated potassium chloride solution) at 40 ° C for 30 h, a strongly exothermic event occurs in which the hygroscopic form of the compound is converted to its non-hygroscopic form. Trace (B) in Figure 6 shows that there is no exothermic conversion event upon exposure to hygroscopic N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl ] - (L) -β-Cyclohexylalaninamide prepared according to Example 5 to 11 vapors of methanol at 40 ° C (solvent other than water in which the compound is soluble) and thus methanol does not support crystal mobility allowing conversion to non-hygroscopic form . Trace (C) in Figure 6 shows that there is no exothermic conversion upon exposure to non-hygroscopic N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - The (L) -B-cyclohexylalaninamide prepared according to Example 13 at 80% relative humidity and 40 ° C, so that the non-hygroscopic form of this compound is not subjected to conversion under these conditions, i.e. it is a stable form.

Obr. 7 znázorňuje isotermní mikrokalorimetrický záznam tepelného výkonu jako funkce času pro tři různé pokusy provedené podle popisu v pokusu 15. Pokusy sledují tepelnou aktivitu konverze hygroskopické krystalické formyGiant. 7 depicts an isothermal microcalorimetric recording of heat output as a function of time for three different experiments performed as described in Experiment 15. The experiments follow the thermal activity conversion of the hygroscopic crystalline form

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu na jeho nehygroskopickou formu při expozici 80% relativní vlhkosti při teplotě 40 °C, 50 °C a 60 °C. Tento obrázek ukazuje, že konverze probíhá zhruba po dobu 24 h při teplotě 40 °C po dobu 6,5 h při teplotě 50 °C a po dobu 3 h při teplotě 60 °C.N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide to its non-hygroscopic form when exposed to 80% relative humidity at 40 ° C, 50 ° C and 60 ° C. This figure shows that the conversion proceeds for about 24 h at 40 ° C for 6.5 h at 50 ° C and for 3 h at 60 ° C.

Obr. 8 představuje isotermní mikrokalorimetrický graf • φ • · • · ► 4 9·· tepelného výkonu jako funkce času pro čtyři různé pokusy provedené podle popisu pokusu 15. Pokusy sledují tepelnou aktivitu konverze hygroskopické krystalické formy Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu na jeho nehygroskopickou formu při expozici 65% relativní vlhkosti, 75% relativní vlhkosti, 80% relativní vlhkosti a 100% relativní vlhkosti při teplotě 60 °C. Význačným rysem obr. 8 je, že vyšší relativní vlhkosti poskytují rychlejší konverzi. Dalším význačným rysem je, že konverze na nehygroskopickou formu této sloučeniny nastává při 100% relativní vlhkosti a teplotě 60 °C bez přechodu na kapalnou fázi, který nastává u hygroskopické formy při teplotě místnosti. Na základě těchto výsledků se očekává, že konverze nehygroskopické formy je mnohem rychlejší než přechod hygroskopické formy na kapalnou fázi při 60 °C.Giant. 8 is an isothermal microcalorimetric graph of thermal power as a function of time for four different experiments performed as described in Experiment 15. The experiments monitor the thermal activity conversion of the hygroscopic crystalline form Ν- [Ν- [N- (4- piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide to its non-hygroscopic form when exposed to 65% RH, 75% RH, 80% RH, and 100% % relative humidity at 60 ° C. A notable feature of Fig. 8 is that higher relative humidity provides faster conversion. Another notable feature is that conversion to the non-hygroscopic form of this compound occurs at 100% relative humidity and 60 ° C without the transition to the liquid phase that occurs in the hygroscopic form at room temperature. Based on these results, it is expected that the conversion of the non-hygroscopic form is much faster than the transition of the hygroscopic form to the liquid phase at 60 ° C.

Obr. 9 představuje srovnání procentických hmotnostních přírůstků proti procentické relativní vlhkosti vynesených pro hygroskopickou (_H) a nehygroskopickou (.) formu N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu při 25 °C při procesu probíhajícím podle popisu v pokusu 16. Obr. 9 znázorňuje, že hygroskopické forma vychytává více vody než nehygroskopické forma se vzrůstající relativní vlhkostí a s výraznějším účinkem při relativních vlhkostech převyšujících 60 %. Dále obr. 9 ukazuje, že u hygroskopické formy sloučeniny nedochází k desorbci na její původní hmotnostní procento, zatímco u nehygroskopické formy sloučeniny k takové desorbci dochází .Giant. 9 is a comparison of percent weight gains relative to percent relative humidity plotted for the hygroscopic ( _H ) and non-hygroscopic (.) Form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide at 25 ° C in the process as described in experiment 16. FIG. 9 shows that the hygroscopic form takes up more water than the non-hygroscopic form with increasing relative humidity and with a more pronounced effect at relative humidity exceeding 60%. In addition, Figure 9 shows that the hygroscopic form of the compound does not desorb to its original weight percent, while the non-hygroscopic form of the compound does not desorb.

Následuje podrobný popis vynálezu.A detailed description of the invention follows.

• · · · · · Μ • · · ♦ · · 9 φ • · · · 9 · · • · · ♦ · 9 · · • · · « · · · ·· · ·· * · » 9 99 φ 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

Následující pojmy tak, jak se užívají výše i v celém textu tohoto vynálezu, mají následující význam, pokud se neuvádí jinak.The following terms as used hereinabove and throughout the present invention have the following meanings unless otherwise indicated.

Následující zkratky, které se zde používají, zahrnují:The following abbreviations are used here:

BOC (terc.butyloxykarbonyl), CBZ (benzyloxykarbonyl), Gly (glycin), Asp (kyselina aspartová), Obzl (benzyloxy), TFA (kyselina trifluoroctová), Cha (β-cyklohexylalanin), EtOAc (ethylacetat), DMF (dimethylformamid), DCC (dicyklohexylkarbodiimid) , HOBT (hydroxybenzotriazol), TBTU (2-lII-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumtetrafluoroborat), DI (deionizovaná voda), PNP (p-nitrofenol), PFP (pentafluorfenol), DCU (dicyklohexylmočovina), NMM (N-methylmorfolin), MTBE (methyl-terč.butylether)), RíI (relativní vlhkost), THF (tetrahydrofuran), PipBu (kyselina 4-pipe.ridinmáselná) a PipBuen [kyselina (4-piperidin)butylidenylkarboxylová] je sloučenina vzorceBOC (t-butyloxycarbonyl), CBZ (benzyloxycarbonyl), Gly (glycine), Asp (aspartic acid), Obzl (benzyloxy), TFA (trifluoroacetic acid), Cha (β-cyclohexylalanine), EtOAc (ethyl acetate), DMF (dimethylformamide) , DCC (dicyclohexylcarbodiimide), HOBT (hydroxybenzotriazole), TBTU (2-III-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate), DI (deionized water), PNP (p-nitrophenol), PFP ( pentafluorophenol), DCU (dicyclohexylurea), NMM (N-methylmorpholine), MTBE (methyl-tert-butyl ether)), RI (relative humidity), THF (tetrahydrofuran), PipBu (4-piperidobutyric acid) and PipBuen [acid ( 4-Piperidin-butylidenylcarboxylic acid] is a compound of formula

co₂hco ₂ h

Pojem pacient zahrnuje člověka i jiné savce.The term patient includes both human and other mammals.

Farmaceuticky přijatelná sůl znamená formu soli mateřské sloučeniny obecného vzorce I, která je pro pacienta poměrně neškodná, podává-li se v terapeutických dávkách, takže prospěšné farmaceutické vlastnosti mateřské sloučeniny I nejsou narušeny vedlejšími účinky, které by se daly při18 • 9« *9 99 99 99Pharmaceutically acceptable salt means a salt form of the parent compound of formula (I) which is relatively harmless to the patient when administered at therapeutic doses so that the beneficial pharmaceutical properties of the parent compound (I) are not impaired by the side effects that would result from 99 99

9 9 · 9 9 9 9 99 99 9 · 9 9 9 9 99

999 99 9 9999999 99 9,999

9 * 9 9 9 99 99 99 9 9 99 99 9

999 999 9999999 999 9999

999 99 99 9999 99 99 psát přítomnosti iontu této formy soli. Farmaceuticky přijatelná sůl též zahrnuje zwitterion nebo vnitřní sůl sloučeniny obecného vzorce I.999 99 99 9999 99 99 to write the presence of an ion of this salt form. The pharmaceutically acceptable salt also includes a zwitterion or inner salt of a compound of Formula I.

Alkylová skupina znamená nasycenou alifatickou uhlovodíkovou skupinu, která může být přímá či rozvětvená a může mít zhruba 1 až zhruba 20 atomů uhlíku v řetězci. Rozvětvená znamená, že se k lineárnímu alkylovému řetězci připojuje nižší alkylová skupina, jako je methylová skupina, ethylová skupina či propylová skupina. Preferovanými přímými či rozvětvenými alkylovými skupinami jsou nižší alkylové skupiny, což jsou alkylové skupiny majicí od 1 do zhruba 10 atomů uhlíku. Nejpreferovanější nižší alkylové skupiny mají od 1 do zhruba 6 atomů uhlíku.Alkyl means a saturated aliphatic hydrocarbon group which may be straight or branched and may have about 1 to about 20 carbon atoms in the chain. Branched means that a lower alkyl group such as a methyl group, an ethyl group or a propyl group is attached to the linear alkyl chain. Preferred straight or branched alkyl groups are lower alkyl groups, which are alkyl groups having from 1 to about 10 carbon atoms. Most preferred lower alkyl groups have from 1 to about 6 carbon atoms.

Cykloalkylová skupina znamená nasycenou karbocyklickou skupinu mající jeden či více kruhů a zhruba 3 až zhruba 10 atomů uhlíku. Preferované cykloalkylové skupiny zahrnují cyklopropylovou skupinu, cyklobutylovou skupinu, cyklopentylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu, cykloheptylovou skupinu a dekahydronaftylovou skupinu.Cycloalkyl means a saturated carbocyclic group having one or more rings and about 3 to about 10 carbon atoms. Preferred cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl and decahydronaphthyl.

Cykloalkylalkylová skupina znamená alkylovou skupinu substituovanou cykloalkylovou skupinou. Preferované cykloalkylalkylové skupiny zahrnují cyklopentylmethylovou skupinu, cyklohexylmethylovou skupinu, cyklohexylethylovou skupinu, dekahydronaft-l-ylmethylovou skupinu a dekahydronaft-2-ylmethylovou skupinu.Cycloalkylalkyl means an alkyl group substituted with a cycloalkyl group. Preferred cycloalkylalkyl groups include cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl, cyclohexylethyl, decahydronaphth-1-ylmethyl and decahydronaphth-2-ylmethyl.

Alkylcykloalkylová skupina znamená cykloalkylovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou. Příklady alkylcykloalkylových skupin zahrnují 1-, 2-, 3- nebo 4-methylnebo ethyl-cyklohexylovou skupinu.Alkylcycloalkyl means a cycloalkyl group substituted with an alkyl group. Examples of alkylcycloalkyl groups include 1-, 2-, 3- or 4-methyl or ethyl-cyclohexyl.

© © ·· ···· ·· »· • · · © • · · · © · · · • · · © ©· ·©© © ·· ······ · · · · · · · · · · · · © · · ©

Alkylcykloalkylalkylová skupina znamená alkylovou skupinu substituovanou alkylcykloalkylovou skupinou. Příklady alkylcykloalkylových skupin zahrnují 1-, 2-, 3- nebo 4-methyl- nebo ethylcyklohexylmethylovou skupinu nebo 1-,Alkylcycloalkylalkyl means an alkyl group substituted with an alkylcycloalkyl group. Examples of alkylcycloalkyl groups include 1-, 2-, 3- or 4-methyl- or ethylcyclohexylmethyl or 1-,

2-, 3- nebo 4-methyl- nebo ethylcyklohexylovou skupinu.2-, 3- or 4-methyl- or ethylcyclohexyl.

Azacykloalkan znamená nasycený alifatický kruh obsahující atom dusíku. Preferované azacykloalkany zahrnují pyrolidin a piperidin.Azacycloalkane means a saturated aliphatic ring containing a nitrogen atom. Preferred azacycloalkanes include pyrrolidine and piperidine.

Přírodní α-aminokyseliny znamenají glycin, alanin, valin, leucin, isoleucin, serin, threonin, fenylalanin, tyrosin, tryptofan, cystein, methionin, prolin, hydroxyprolin, kyselinu aspartovou, asparagin, glutamin, kyselinu glutamovou, histidin, arginin, ornithin a lysin.Natural α-amino acids mean glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan, cysteine, methionine, proline, hydroxyproline, aspartic acid, asparagine, glutamine, glutamic acid, histidine, arginysine, ornithine and lnithine .

α-uhlíkový boční řetězec přírodních a-amínokyselin znamená zbytek, který substituuje α-uhlík přírodní α-aminokyseliny. Příklady α-uhlíkových bočních řetězců přírodních α-aminokyselin zahrnují isopropylovou skupinu, methylovou skupinu a karboxymethylovou skupinu pro valin, alanin respektive kyselinu aspartovou.The α-carbon side chain of natural α-amino acids means a residue that substitutes the α-carbon of the natural α-amino acid. Examples of α-carbon side chains of natural α-amino acids include isopropyl, methyl and carboxymethyl for valine, alanine and aspartic acid, respectively.

Termín skupina chránící amin znamená snadno odstranitelnou skupinu, o které je v oboru známo, že chrání aminoskupinu proti nežádoucí reakci během syntézy a kterou lze selektivně odstranit. Použití skupin chránících amin je v oboru dobře známo pro ochranu skupin proti nežádoucím reakcím v průběhu syntézy a mnohé z těchto chránících skupin jsou známé například z monografie T. H. Greene a P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydáni,The term amine protecting group means an easily removable group known in the art to protect the amino group against an undesired reaction during the synthesis and which can be selectively removed. The use of amine protecting groups is well known in the art for protecting groups against unwanted reactions during synthesis, and many of these protecting groups are known, for example, from T. H. Greene and P. G. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Ed.

John Wiley & Sons , New York (1991), které se zde zahrnujeJohn Wiley & Sons, New York (1991), which is incorporated herein

formou odkazu. Preferované skupiny chránící amin jsou acylová skupina včetně formylové skupiny, acetylové skupiny, chloracetylové skupiny, trichloracetylové skupiny, o-nitrofenylacetylové skupiny, o-nitrofenoxyacetylové skupiny, trifluoracetylové skupiny, acetoacetylové skupiny, 4-chlorbutyrylové skupiny, isobutyrylové skupiny, o-nitrocinnamoylové skupiny, pikolinoylové skupiny, acylisothiokyanatové skupiny, aminokaproylové skupiny, benzoylové skupiny a podobně a acyloxyskupina včetně methoxykarbonylové skupiny, 9-fluorenylmethoxykarbonylové skupiny,by reference. Preferred amine protecting groups are acyl, including formyl, acetyl, chloroacetyl, trichloroacetyl, o-nitrophenylacetyl, o-nitrophenoxyacetyl, trifluoroacetyl, acetoacetyl, 4-chlorobutyryl, isobutyryl, o-nitrocinnamoyoyl, o-nitrocinnamoyoyl groups acylisothiocyanate, aminocaproyl, benzoyl, and the like, and acyloxy including methoxycarbonyl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl,

2,2,2-trifluorethoxykarbonylové skupiny, 2-trimethylsilylethoxykarbonylové skupiny, vinyloxykarbonylové skupiny, allyloxykarbonylové skupiny, terc.butyloxykarbonylové skupiny (BOC), 1,1-dimethylpropinyloxykarbonylové skupiny, benzyloxykarbonylové skupiny (CBZ), p-nitrobenzyloxykarbonylové skupiny, 2,4-dichlorbenzyloxykarbonylové skupiny a podobně.2,2,2-trifluoroethoxycarbonyl, 2-trimethylsilylethoxycarbonyl, vinyloxycarbonyl, allyloxycarbonyl, tert-butyloxycarbonyl (BOC), 1,1-dimethylpropinyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl (CBZ), p-nitrobenzenzyl dichlorobenzyloxycarbonyl groups and the like.

Pojem skupina chránící amin labilní v kyselém prostředí znamená skupinu chránící amin, jak se definuje výše, kterou lze snadno odstranit zpracováním kyselinou, avšak vůči jiným činidlům zůstává relativně stabilní. Preferovanou skupinou chránící amin labilní v kyselém prostředí je terč.butoxykarbonyl (BOC).The term acid labile amine protecting group means an amine protecting group, as defined above, which can be easily removed by acid treatment, but remains relatively stable to other agents. A preferred acid labile amine protecting group is tert-butoxycarbonyl (BOC).

Pojem skupina chráníc! amin labilní při hydrogenaci znamená skupinu chránící amin, jak se definuje výše, kterou lze snadno odstranit hydrogenaci a přitom je relativně stabilní vůči jiným činidlům. Preferovanou skupinou chránící amin labilní při hydrogenaci je benzyloxykarbonylové skupina (CBZ).The term group protecting! Hydrogen labile amine means an amine protecting group as defined above that is readily removed by hydrogenation while being relatively stable to other agents. A preferred hydrogenation labile amine protecting group is benzyloxycarbonyl (CBZ).

Pojem skupina chránící kyselinu znamená snadno • ♦· ·· ·· AA Α· • A A A A A A · A A A ·The term acid protecting group means easily A A A A A A A A A A

AAA · · · AAAAAAA · AAAA

A · AAA A A AA AA A AAA AAA AAAAAAA AAA AA AAA AAA AAA AAAA

AAA AA AA AAAA AA AA odstranitelnou skupinu, o které je v oboru známo, že chrání karboxylovou skupinu (-CO__H) proti nežádoucí reakci v průběhu syntézy a kterou lze selektivně odstranit. Použití skupin chránících karboxylovou skupinu je v oboru dobře známo a jsou známé mnohé takové chránící skupiny uvedené například v T. H. Greene a P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydání, John Wiley & Sons, New York (1991), které se zde zahrnují formou odkazu. Příklady skupin chránících karboxylovou kyselinu zahrnují estery, jako je methoxymethylester, methylthiomethylester, tetrahydropyranylester, benzyloxymethylester, substituovaný a nesubstituovaný fenacylester, 2,2,2-trichlorethylester, terc.butylester, cinnamylester, substituovaný a nesubstituovaný benzylester, trimethylsilylester a podobně a amidy a hydrazídy včetně Ν,Ν-dimethylamidu, 7-nitroindolylamidu, hydrazidu,AAA AA AA AAAA AA AA a removable group known in the art to protect a carboxyl group (-CO__H) against an undesired reaction during synthesis and which can be selectively removed. The use of carboxyl protecting groups is well known in the art, and many such protecting groups are known, for example, from TH Greene and PGM Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition, John Wiley & Sons, New York (1991), which are incorporated herein by reference. include by reference. Examples of carboxylic acid protecting groups include esters such as methoxymethyl ester, methylthiomethyl ester, tetrahydropyranyl ester, benzyloxymethyl ester, substituted and unsubstituted phenacylester, 2,2,2-trichloroethyl ester, tert-butyl ester, cinnamyl ester, substituted and unsubstituted benzyl ester, and the like and trimethylsilyl esters and trimethylsilyl esters. Ν, Ν-dimethylamide, 7-nitroindolylamide, hydrazide,

N-fenylhydrazidu a podobně.N-phenylhydrazide and the like.

Termín skupina chránící kyselinu labilní při hydrogenaci znamená skupinu chránící kyselinu, jak se definuje výše, kterou lze snadno odstranit hydrogenací a přitom zůstává relativně stabilní při působení jiných činidel. Preferovanou skupinou chránící kyselinu labilní při hydrogenací je benzylová skupina.The term hydrogenating labile acid protecting group means an acid protecting group as defined above that can be easily removed by hydrogenation while remaining relatively stable under the action of other agents. A preferred hydrogenating labile acid protecting group is benzyl.

Arylová skupina znamená fenylovou skupinu nebo naftylovou skupinu.Aryl means phenyl or naphthyl.

Substituovaná arylová skupina znamená fenylovou skupinu nebo naftylovou skupinu substituovanou jedním nebo více substituenty arylové skupiny, které mohou být stejné nebo rozdílné, kde substituent arylové skupiny zahrnuje alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, arylovou skupinu, aralkylovou skupinu, hydroxylovou skupinu, alkoxyskupinu, aryloxyskupinu, aralkoxyskupinu, hydroxyalkylovou skupinu, acylovou skupinu, formylovou skupinu, karboxyskupinu, alkenoylovou skupinu, aroylovou skupinu, atom halogenu, nitroskupinu, trihalomethylovou skupinu, kyanoskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu, aryloxykarbonylovou skupinu, aralkoxykarbonylovou skupinu, acylaminoskupinum, aroylaminoskupinu, karbamoylovou skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu, dialkylkarbamoylovou skupinu, arylkarbamoylovou skupinu, aralkylkarbamoylovou skupinu, alkylsulfonylovou skupinu, alkylsulfinylovou skupinu, arylsulfonylovou skupinu, aralsulfinylovou skupinu, aralkylsulfonylovou skupinu, aralakylsulfinylovou skupinu nebo skupinu -NR^R^, kde R_& a R_te jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, arylová skupina nebo aralakylová skupina.Substituted aryl means a phenyl group or a naphthyl group substituted with one or more aryl group substituents, which may be the same or different, wherein the aryl group substituent comprises an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, an aralkyl group, a hydroxyl group, an alkoxy group, an aryloxy group. , aralkoxy, hydroxyalkyl, acyl, formyl, carboxy, alkenoyl, aroyl, halogen, nitro, trihalomethyl, cyano, alkoxycarbonyl, aryloxycarbonyl, aralkoxycarbonyl, aylaminocarbamino, aylamino, arylcarbamoyl, aralkylcarbamoyl, alkylsulfonyl, alkylsulfinyl, arylsulfonyl, aralsulfinyl, aralkylsulfonyl, arylalkyl a sulfinyl group or -NR R wherein R and R _{& te} are each independently hydrogen, alkyl, aryl or aralakylová group.

Aralkylová skupina znamená alkylovou skupinu substituovanou arylovým radikálem. Preferované aralkylové skupiny zahrnují benzylovou skupinu, nafth-l-ylmethylovou skupinu, naft-2-ylmethylovou skupinu a fenethylovou skupinu.Aralkyl means an alkyl group substituted with an aryl radical. Preferred aralkyl groups include benzyl, naphth-1-ylmethyl, naphth-2-ylmethyl, and phenethyl.

Substituovaná aralkylová skupina znamená aralkylovou skupinu substituovanou na arylové části jedním nebo více substituenty arylové skupiny.Substituted aralkyl means an aralkyl group substituted on the aryl moiety with one or more aryl group substituents.

Heterocyklylová skupina znamená 4- až 15-členný monocyklický nebo multicyklický kruhový systém, ve kterém jeden nebo více atomů v kruhu je jiným prvkem než uhlík, například atom dusíku, kyslíku či síry. Preferované heterocyklylové skupiny zahrnují pyridylovou skupinu, pyrimidylovou skupinu a pyrrolidylovou skupinu.Heterocyclyl means a 4- to 15-membered monocyclic or multicyclic ring system in which one or more of the ring atoms is other than carbon, such as nitrogen, oxygen or sulfur. Preferred heterocyclyl groups include pyridyl, pyrimidyl and pyrrolidyl.

Substituovaná heterocyklylová skupina znamená heterocyklylovou skupinu substituovanou jedním nebo více substi23 • ·· «< ·· 99 99Substituted heterocyclyl means a heterocyclyl group substituted with one or more substituents 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9

999 99 99 9999 99 99 tuenty arylové skupiny.999 99 99 9999 99 99 aryl groups.

Heterocyklylalkylová skupina” a substituovaná heterocyklylalkylová skupina znamená alkylovou skupinu, která je substituovaná heterocyklylovou skupinou respektive sub* stituovanou heterocyklylovou skupinou.Heterocyclylalkyl and substituted heterocyclylalkyl means an alkyl group which is substituted with a heterocyclyl group and a substituted heterocyclyl group, respectively.

- Hygroskopičnost znamená sorpci se získáním množství či stavů vody dostatečných pro ovlivnění fyzikálních a chemických vlastností látky (red. J. Swarbrick a J. C. Boylan, Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, sv. 10, str. 33).- Hygroscopicity means sorption to obtain water quantities or states sufficient to affect the physical and chemical properties of the substance (ed. J. Swarbrick and J. C. Boylan, Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, vol. 10, p. 33).

Dále se popisují preferovaná ztělesnění tohoto vynálezu.Preferred embodiments of the invention are described below.

Preferovanou sloučeninou připravenou podle tohoto vynálezu popisuje vzorec II, ve kterém E² je atom vodíku, alkylová skupina, hydroxymethylová skupina, 1-hydroxyethylová skupina, merkaptomethylová skupina, 2-methylthioethylová skupina, karboxymethylová skupina, 2-karboxyethylová skupina, 4-aminobutylová skupina, 3-guanidinopropylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, substituovaná arylová skupina, aralkylová skupina, substituovaná aralkylová skupina, heterocyklyl ová skupina, substituovaná heterocyklylová skupina, heterocyklylakylová skupina, substituovaná heterocyklyalkylová skupina nebo E¹ a E² spolu s atomy dusíku a uhlíku, kterými jsou E¹ a E² připojeny, vytvářejí 4-, 5-, 6- nebo 7-členný azacykloalkanový kruh s podmínkou, že heterocyklylalkylová skupina je jiná než indol-3-ylmethylová skupina.A preferred compound prepared in accordance with the present invention provides formula II wherein E ² is hydrogen, alkyl, hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, mercaptomethyl, 2-methylthioethyl, carboxymethyl, 2-carboxyethyl, 4-aminobutyl, 3-guanidinopropyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, substituted aryl, aralkyl, substituted aralkyl, heterocyclyl alkyl group, a substituted heterocyclyl group heterocyklylakylová, substituted heterocyklyalkylová group or E ¹ and E ² together with the nitrogen and carbon atoms to which E ¹ and E ^{2 are} attached form a 4-, 5-, 6- or 7-membered azacycloalkane ring with the proviso that the heterocyclylalkyl group is other than the indol-3-ylmethyl group.

Preferovanější sloučeninu připravenou podle tohoto «000 vynálezu popisuje obecný vzorec II, ve kterém E² je atom vodíku, alkylová skupina, hydroxymethylová skupina,A more preferred compound prepared according to this invention describes the general formula II in which E ² is a hydrogen atom, an alkyl group, a hydroxymethyl group,

1- hydroxyethylová skupina, merkaptomethylová skupina,1-hydroxyethyl, mercaptomethyl,

2- methylthioethylová skupina, karboxymethylová skupina,2-methylthioethyl, carboxymethyl,

2- karboxyethylová skupina, 4-aminobutylová skupina,2-carboxyethyl, 4-aminobutyl,

3- guanidinopropylová skupina, cykloakylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, substituovaná arylová skupina, aralkylová skupina, substituovaná aralkylová skupina nebo E¹ a E² spolu s atomem dusíku a uhlíku, kterým jsou připojeny, vytvářejí 4-, 5-, 6- nebo 7-členný azacykloalkanový kruh.3-guanidinopropyl, cycloacyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, substituted aryl, aralkyl, substituted aralkyl, or E ¹ and E ² together with the nitrogen and carbon atom to which they are attached form 4- , 5-, 6- or 7-membered azacycloalkane ring.

Ještě preferovanější sloučenina připravená podle tohoto vynálezu se popisuje v obecném vzorci II, ve kterém E² je atom vodíku, alkylová skupina, hydroxymethylová skupina,An even more preferred compound prepared according to the present invention is described in formula II wherein E ² is hydrogen, alkyl, hydroxymethyl,

1- hydroxyethylová skupina, merkaptomethylová skupina,1-hydroxyethyl, mercaptomethyl,

2- methylthioethylová skupina, karboxymethylová skupina,2-methylthioethyl, carboxymethyl,

2- karboxyethylová skupina, 4-aminobutylová skupina,2-carboxyethyl, 4-aminobutyl,

3- guanidinopropylová skupina, cykloakylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupin nebo E¹ a E² spolu s atomy dusíku a uhlíku, kterými jsou připojeny, vytvářejí 4-, 5-, 6- nebo 7-členný azacykloalkanový kruh.3-guanidinopropyl, cycloacyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl or E ¹ and E ² together with the nitrogen and carbon atoms to which they are attached form a 4-, 5-, 6- or 7-membered azacycloalkane ring.

Další preferovaná sloučenina připravená podle tohoto vynálezu se popisuje v obecném vzorci II, ve kterém B je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina nebo alkylcykloalkylalkylová skupina.Another preferred compound prepared according to the invention is described in formula II wherein B is alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl or alkylcycloalkylalkyl.

Zvláštní případ sloučeniny připravené podle tohoto vynálezu se popisuje v obecném vzorci Ila.A particular case of a compound prepared according to the invention is described in the general formula IIIa.

* · · 9i • · β · · · · · 4 4 · • * · » 4 4 r• β · « · · • · · * · · · ····* 4i • 4i • 4i • 4 4 r • 4 4 r • β · 4 · 4

II IIII II

NH-CH-C-NH—CH-C i INH-CH-C-NH-CH-Cl

CH₂COOH J (Ila) ve kterémCH ₂ COOH J (IIIa) wherein

B je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, alkylarylová skupina nebo alkylaralkylová skupina,B is alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, alkylaryl or alkylaralkyl,

J je atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, substituovaná arylová skupina, aralkylová skupina nebo substituovaná aralkylová skupina,J is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, substituted aryl, aralkyl or substituted aralkyl,

L je skupina OR¹ nebo NR^R²,L is OR ¹ or NR ¹ R ² ,

R¹ a R² jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, ♦ · * · · · e · · · 4 » · · t ft ·· 9 · · · · ♦ · · G · · · « · « ♦ * * · * · · · f ·· ř ♦ · · ··· i··· ··· ·· *♦ ···· >9 »· alkylarylová skupina nebo alkylaralkylová skupina, m je 1 až 5, n je 2 až 6 a p je 1 nebo 2.R @ ¹ and R @ ² independently of one another are hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, 4 &lt; tb &gt; · 9 · · · G · G · «* ♦ * * * * * * * * * f * f f * * * * * * An alkylaryl group or an alkylaralkyl group, m is 1 to 5, n is 2 to 6, and p is 1 or 2.

Preferovanějším zvláštním ztělesněním je sloučenina připravená podle tohoto vynálezu popisovaná obecným vzorcem IIa, ve kterémA more preferred particular embodiment is a compound prepared according to the invention described by the general formula IIa in which

B je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina nebo alkylcykloalkylalkylová skupina,B is an alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl or alkylcycloalkylalkyl group,

J je atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina nebo alkylcykloalkylalkylová skupina, m je 3 a n je 3 nebo 4.J is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl or alkylcycloalkylalkyl, m is 3 and n is 3 or 4.

Dalším preferovaným zvláštním ztělesněním je sloučenina připravená podle tohoto vynálezu popsaná obecným vzorcem Ha, ve kterémAnother preferred particular embodiment is the compound prepared according to the invention described by the general formula IIa in which

B je alkylová skupina,B is an alkyl group,

J je alkylová skupina, cykloalkylová skupina nebo cykloalkylalkylová skupina,J is alkyl, cycloalkyl or cycloalkylalkyl,

R^x a R² jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina nebo alkylcykloalkylalkylová skupina, m je 3, n je 3 nebo 4 a p je l.R ¹ and R ² are independently hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl or alkylcycloalkylalkyl, m is 3, n is 3 or 4 and p is 1.

Dalším preferovaným zvláštním ztělesněním je sloučenina připravená podle tohoto vynálezu popsaná obecným vzorcem Ha, která je N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamid.Another preferred particular embodiment is a compound prepared according to the invention described by the general formula IIa, which is N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - ( L) -β-cyclohexylalaninamide.

Dalším ztělesněním tohoto vynálezu je vytvoření stabilní nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu. Podle tohoto vynálezu lze tuto sloučeninu použít pro vývoj stabilního prostředku obsahujícího tuto sloučeninu. Stabilní nehygroskopická krystalická forma N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu má též vysokou teplotu tání a nevykazuje žádnou snahu absorbovat vodu. Stabilní forma též vykazuje jedinečnou a neočekávanou stabilitu vůči vlivům vlhkosti a teploty, které jsou nadměrné ve srovnání s vlivy, se kterými se setkáváme při přepravě, přípravě dávkové formy nebo dlouhodobé dopravě či skladování. Tyto vlastnosti též umožňují přípravu dávkové formy. Převedení na stabilní formu též nevede ke ztrátě materiálu či jeho čistoty a neovlivňuje nepříznivě vlastnosti částic.A further embodiment of the present invention is the formation of a stable non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide. According to the present invention, the compound can be used to develop a stable composition comprising the compound. The stable non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide also has a high melting point and does not show no effort to absorb water. The stable form also exhibits a unique and unexpected stability to the effects of humidity and temperature, which is excessive compared to the effects encountered in transportation, dosage form preparation or long-term shipping or storage. These properties also allow the preparation of the dosage form. Conversion to a stable form also does not lead to material loss or purity and does not adversely affect particle properties.

’ ^{w w} » » 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 ♦ »·· · · 9 9 9 9 · « · 999 I 9 9 i * ·« ·· 9999 *4 9«' ^ww »» 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 ♦ »·· · · 9 9 9 9 · · · 999 I 9 9 i * · 9 · 9999 * 4 9«

Preferovaným ztělesněním podle tohoto vynálezu je sloučenina obecného vzorce VII, ve kterém je alkylová skupina,A preferred embodiment of the present invention is a compound of formula (VII) wherein the alkyl group is

E⁰ je atom vodíku,E ⁰ is a hydrogen atom,

Eje cykloalkylalkylová skupina, je NR^R²,E is cycloalkylalkyl, NR 1 R ² ,

R¹ a R² jsou atomy vodíku aR ¹ and R ² are hydrogen atoms and

Dalším preferovaným ztělesněním podle tohoto vynálezu je sloučenina obecného vzorce VII, ve kterém je ethylová skupina, je atom vodíku,Another preferred embodiment of the present invention is a compound of formula VII wherein the ethyl group is hydrogen,

Eje cyklohexylmethylová skupina, je NR^aR²,E is cyclohexylmethyl, ^and R is NR ^2,

R¹ a R² jsou atomy vodíku a je 1.R ¹ and R ² are hydrogen atoms and is 1.

Dalším preferovaným ztělesněním podle tohoto vynálezu je sloučenina obecného vzorce VII, ve kterém • * » · ···» « f ' ' » » · · · · i » · » < * * · 9 9 i · · ₉ » · · 9 · · 9 9 9A further preferred embodiment of the present invention is a compound of formula VII wherein * • »· ···» «f '» »· · · · i» · »<* i · 9 9 ₉ ·» · 9 · 9 9 9

9» 9 999 99 999 9 999 99 99

B(B)

E^x E ^x

E² E ²

GG

R¹ R ¹

PP

P^x P ^x

P² jeP ² is

B(B)

E¹ E ¹

E² E ²

GG

R¹ R ¹

PP

P³je ethylová skupina, je atom vodíku, je cyklohexylmethylová skupina, je NR^XR², a R² jsou atomy vodíku, je 1, je benzylová skupina a je skupina TFA.H-.P ³ is ethyl, is hydrogen, is cyclohexylmethyl, is NR ^X R ² , and R ² are hydrogen, is 1, is benzyl, and is TFA.H-.

Dalším preferovaným ztělesněním podle tohoto vynálezu sloučenina obecného vzorce VII, ve kterém je ethylová skupina, je atom vodíku, je cyklohexylmethylová skupina, je skupina NR^XR², a R² jsou atomy vodíku, je 1/ je benzylová skupina aAnother preferred embodiment of the invention is a compound of formula VII wherein ethyl is hydrogen, is cyclohexylmethyl, is NR ^X R ² , and R ² are hydrogen, is 1 / is benzyl and

P² je terč.butoxykarbonylová skupina.P ² is a tert-butoxycarbonyl group.

Je třeba uvažovat, že tento vynález pokrývá všechny kombinace preferovaných sloučenin, preferovaných ztělesnění a zvláštních ztělesnění, jak se zde definují.It is to be understood that the present invention covers all combinations of preferred compounds, preferred embodiments, and particular embodiments as defined herein.

Sloučenina podle tohoto vynálezu je použitelná ve formě volné báze nebo kyseliny, jeji zwitteriontové soli nebo ve formě její farmaceuticky přijatelné soli. Veškeré formy spadají do rámce tohoto vynálezu.The compound of the present invention is useful in the form of the free base or acid, its zwitterionic salt, or its pharmaceutically acceptable salt. All forms are within the scope of this invention.

Pokud je sloučenina podle tohoto vynálezu substituovaná bázickým zbytkem, vytvoří se kyselá adiční sůl, která je vhodnější pro použití a v praxi použiti této soli odpovídá použiti formy vhodné báze. Kyselina, kterou lze použit pro přípravu kyselé adiční soli, přednostně zahrnuje takovou kyselinu, která v kombinaci s volnou bází poskytuje farmaceuticky přijatelnou sůl, to jest sůl, jejíž aniont je netoxický pro pacienta při farmaceutických dávkách soli, takže prospěšné inhibiční účinky na agregaci destiček a vytváření trombů, které jsou charakteristické pro volnou bázi, nejsou porušeny vedlejšími účinky, které lze přisoudit aniontu.When a compound of the invention is substituted with a basic moiety, an acid addition salt is formed which is more suitable for use and in practice the use of this salt corresponds to the use of a suitable base form. The acid that can be used to prepare the acid addition salt preferably comprises one which, in combination with the free base, provides a pharmaceutically acceptable salt, i.e. a salt whose anion is non-toxic to the patient at pharmaceutical salt doses, so that beneficial inhibitory effects on platelet aggregation and the formation of thrombi that are characteristic of the free base are not impaired by side effects attributable to the anion.

I když se preferují farmaceuticky přijatelné soli těchto bázických sloučenin, lze použít veškeré kyselé adiční soli jako zdroje formy volné báze dokonce i když se daná sůl jako taková požaduje pouze jako meziprodukt, například když se sůl tvoří pouze pro účely čištění a identifikace nebo když se používá jako meziprodukt při přípravě farmaceuticky přijatelné soli způsoby iontové výměny. Farmaceuticky přijatelné soli v rámci tohoto vynálezu jsou ty, které se odvozují od následujících kyselin: minerální kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečnáAlthough pharmaceutically acceptable salts of these basic compounds are preferred, all acid addition salts can be used as a source of the free base form even when the salt as such is only required as an intermediate, for example when the salt is formed solely for purification and identification purposes or when used. as an intermediate in the preparation of a pharmaceutically acceptable salt by ion exchange methods. Pharmaceutically acceptable salts within the scope of the present invention are those derived from the following acids: mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid

Α· ♦ * ~ 31 ί. :Α · ♦ * ~ 31 °. :

► »· *» · • · * · · 9 · · «► · 9 9 9 · «

I ι a kyselina sulfamová a organické kyseliny jako je kyselina octová, kyselina citrónová, kyselina mléčná, kyselina vinná, kyselina malonová, kyselina methansulfonové, kyselina ethansulfonová, kyselina benzensulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina cyklohexylsulfamová, kyselina chinová a podobně. Odpovídající kyselé adiční soli zahrnují následující: hydrohalidy, například hydrochlorid a hydrobromid, sulfáty, fosfáty, nitráty, sulfamaty, acetaty, citráty, laktaty, tartaraty, malonaty, oxalaty, salicylaty, propionaty, sukcinaty, fumaraty, maleaty, methylen-bis-B-hydroxynaftoaty, gentisaty, mesylaty, isothionaty a di-p-toluoyltartratmethansulfonaty, ethansulfonaty, benzensulfonaty, p-toluensulfonaty, cyklohexylsulfamaty a chinaty.And sulfamic acid and organic acids such as acetic acid, citric acid, lactic acid, tartaric acid, malonic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, cyclohexylsulfamic acid, quinic acid and the like. Corresponding acid addition salts include the following: hydrohalides, for example, hydrochloride and hydrobromide, sulfates, phosphates, nitrates, sulfamates, acetates, citrates, lactates, tartarates, malonates, oxalates, salicylates, propionates, succinates, fumarates, maleate, methylene-bis-B- hydroxynaphthoates, gentisates, mesylates, isothionates and di-p-toluoyltartrate methanesulfonates, ethanesulfonates, benzenesulfonates, p-toluenesulfonates, cyclohexylsulfamates and quinates.

V souladu s další vlastností tohoto vynálezu se kyselé adiční soli sloučeniny podle tohoto vynálezu připraví reakcí volné báze s příslušnou kyselinou použitím či adaptací známých metod. Adiční soli sloučeniny podle tohoto vynálezu se například připraví rozpuštěním volné báze ve vodném či vodnoalkoholovém roztoku nebo v jiných vhodných rozpouštědlech obsahujících příslušnou kyselinu a izolací soli odpařením roztoku nebo reakcí volné báze a kyseliny v organickém rozpouštědle a v tomto případě se sůl separuje přímo nebo se může obdržet odpařením roztoku.According to another feature of the invention, the acid addition salts of the compound of the invention are prepared by reacting the free base with the appropriate acid using or adapting known methods. For example, addition salts of a compound of this invention are prepared by dissolving the free base in an aqueous or aqueous alcoholic solution or other suitable solvents containing the appropriate acid and isolating the salt by evaporating the solution or reacting the free base and acid in an organic solvent. obtained by evaporating the solution.

Kyselé adiční soli sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou regenerovat se solí s použitím či adaptací známých metod. Například lze mateřské sloučeniny podle tohoto vynálezu regenerovat z jejich kyselých adičních solí zpracováním bázickými prostředky například vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného nebo vodným roztokem amoniaku.Acid addition salts of a compound of the invention may be regenerated with a salt using or adaptation of known methods. For example, the parent compounds of the present invention can be regenerated from their acid addition salts by treatment with basic means, for example, aqueous sodium bicarbonate solution or aqueous ammonia solution.

Je-li sloučenina podle tohoto vynálezu substituovanáWhen the compound of the invention is substituted

• «« • © · • «« • © · • · · © • · · * • · · © • · · * ©· ♦ © « © · ♦ © « • · © • · © • © · • © · • · · • · · • » * © • »* © © · · · · · © · · · · · * · * ·

kyselým zbytkem, mohou se vytvořit bázické adiční soli, které představují jednoduchou a vhodnější formu pro použiti a v praxi použití této formy soli odpovídá použití formy volné kyseliny. Báze, které lze použít pro přípravu těchto bázických adičních solí, zahrnují přednostně ty, které v kombinaci s volnou kyselinou poskytují farmaceuticky přijatelné soli, to jest soli, jejichž kationty jsou netoxické pro živočišný organismus ve farmaceutických dávkách soli, takže prospěšné inhibiční účinky na agregaci destiček a vytváření trombu charakteristické pro volnou kyselinu, nejsou narušeny vedlejšími účinky, které lze připsat kationtům. Farmaceuticky přijatelné soli zahrnující například soli alkalických kovů a kovů alkalických zemin v rámci tohoto vynálezu jsou soli odvozené od následujících bází: hydrid sodný, hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid vápenatý, hydroxid hlinitý, hydroxid lithný, hydroxid hořečnatý, hydroxid zinečnatý, hydroxid amonný, ethylendiamin,acid addition moieties may be formed which represent a simple and more convenient form for use, and in practice the use of this salt form corresponds to the use of the free acid form. Bases that can be used to prepare these base addition salts preferably include those which, in combination with the free acid, provide pharmaceutically acceptable salts, i.e., salts whose cations are non-toxic to the animal in pharmaceutical doses of salt, so that beneficial inhibitory effects on platelet aggregation and the formation of the thrombus characteristic of the free acid is not impaired by side effects attributable to cations. Pharmaceutically acceptable salts including, for example, the alkali metal and alkaline earth metal salts within the scope of this invention are those derived from the following bases: sodium hydride, sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, aluminum hydroxide, lithium hydroxide, magnesium hydroxide, zinc hydroxide, ammonium hydroxide, ethylenediamine,

N-methyl-glukamin, lysin, arginin, ornithin, cholin,N-methyl-glucamine, lysine, arginine, ornithine, choline,

N,N'-dibenzylethylen-diamin, chloroprokain, diethanolamin, prokain, N-benzylfenethylamin, diethylamin, piperazin, tris(hydroxymethyl)-aminomethan, tetramethylammoniumhydroxid a podobně.N, N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, diethanolamine, procaine, N-benzylphenethylamine, diethylamine, piperazine, tris (hydroxymethyl) aminomethane, tetramethylammonium hydroxide and the like.

Kovové soli sloučenin podle tohoto vynálezu se mohou obdržet stykem hydridu, hydroxidu, karbonátu či podobné reaktivní sloučeniny zvoleného kovu ve vodném či organickém rozpouštědle s formou vodné kyseliny sloučeniny. Použitým vodným rozpouštědlem může být voda nebo směs vody s organickým rozpouštědlem, přednostně s alkoholem, jako je methanol či ethanol, ketonem, jako je aceton, alifatickým etherem jako je tetrahydrofuran nebo esterem, jako je ethylacetát. Tyto reakce se normálně provádějí při teplotě prostředí, avšak v případě požadavku se mohou provádět při zahřívání.The metal salts of the compounds of this invention may be obtained by contacting a hydride, hydroxide, carbonate or similar reactive compound of the selected metal in an aqueous or organic solvent with the aqueous acid form of the compound. The aqueous solvent used may be water or a mixture of water and an organic solvent, preferably an alcohol such as methanol or ethanol, a ketone such as acetone, an aliphatic ether such as tetrahydrofuran, or an ester such as ethyl acetate. These reactions are normally carried out at ambient temperature, but can be carried out under heating if desired.

• • 0 » 0 » 9 9 9 9 0 9 0 9 • » • » 9 0 * 9 0 * 9 9 • • • 0 • 0 9 9 • • • · • · * 0 * 0 0 0 • • 0 0 9 9 9 9 • • 0. 0 0. 0 0 0 9 0 9- 0 9 0 0 9 0 9- 0 8 0 0 » « · »» «· 0 0 * • · 9 0 * • 9 0 « ♦ · « ♦ · • • 0 9 0 9 0 9 0 9

Aminové soli sloučenin podle tohoto vynálezu se mohou obdržet stykem aminu ve vodném či organickém rozpouštědle s formou vodné kyseliny sloučeniny. Vhodným vodným rozpouštědlem je voda a směsi vody s alkoholy, jako je methanol či ethanol, ethery, jako je tetrahydrofuran, nitrily, jako je acetonitril nebo ketony, jako je aceton. Soli aminokyselin se mohou připravit podobným způsobem.The amine salts of the compounds of this invention can be obtained by contacting an amine in an aqueous or organic solvent with the aqueous acid form of the compound. A suitable aqueous solvent is water and mixtures of water with alcohols such as methanol or ethanol, ethers such as tetrahydrofuran, nitriles such as acetonitrile or ketones such as acetone. Amino acid salts can be prepared in a similar manner.

Bazické adiční soli sloučenin podle tohoto vynálezu se mohou regenerovat ze solí aplikací či adaptací známých metod. Například se může mateřská sloučenina podle tohoto vynálezu regenerovat ze své bázické adiční soli zpracováním kyselinou, například kyselinou chlorovodíkovou.The base addition salts of the compounds of this invention can be regenerated from the salts by application or adaptation of known methods. For example, the parent compound of the invention may be regenerated from its base addition salt by treatment with an acid, such as hydrochloric acid.

Soli sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou kromě svého použití jako vlastních aktivních sloučenin využít pro čištění sloučenin, například s použitím rozdílů v rozpustnosti mezi solí a mateřskou sloučeninou, vedlejším produktem a/nebo výchozími materiály způsoby dobře známými tomu, kdo má zkušenost v oboru.The salts of the compound of the invention may be used in addition to their use as their own active compounds for purification of the compounds, for example using differences in solubility between the salt and the parent compound, by-product and / or starting materials by methods well known to those skilled in the art.

Sloučenina podle tohoto vynálezu může obsahovat asymetrická centra. Tato asymetrická centra mohou být nezávisle na sobě v konfiguraci R nebo S. Pro toho, kdo má zkušenost v oboru, bude též zřejmé, že určité sloučeniny obecného vzorce I mohou vykazovat geometrickou isomerii. Geometrické isomery zahrnují formy cis a trans sloučenin podle tohoto vynálezu s alkenylovými zbytky. Tento vynález zahrnuje jednotlivé geometrické isomery a stereoisomery a jejich směsi .The compound of the invention may contain asymmetric centers. These asymmetric centers may independently be in the R or S configuration. Those skilled in the art will also appreciate that certain compounds of Formula I may exhibit geometric isomerism. Geometric isomers include cis and trans forms of the compounds of this invention with alkenyl residues. The present invention includes the individual geometric isomers and stereoisomers and mixtures thereof.

Tyto isomery lze separovat ze směsí použitím či • * ’ » · t · · φ · • · * * « * · · · 9 « 9 » · · · · * «·«« • · · * *· · * «· · · · * · · · · » »··« ♦ *· ·· »· «··· φ · «» adaptací známých metod, například chromatografických způsobů a rekrystalizačnich způsobů, nebo se mohou připravit odděleně z příslušných isomerů svých meziproduktů, například aplikací či adaptaci zde popsaných způsobů.These isomers can be separated from the mixtures by using either 9 * 9 * 9 * 9 * 9 * 9 * 9 * 9 * 9 * 9 By adapting known methods, such as chromatographic methods and recrystallization methods, or can be prepared separately from the corresponding isomers of their intermediates, for example by applying or adapting the methods described herein.

Patentové přihlášky US č. 08/138 820 a 08/476 750, které se zde zahrnují formou odkazu, popisují způsoby přípravy amorfní sloučeniny obecného vzorce II a zejména amorfní sloučeniny obecného vzorce I.US Patent Application Nos. 08/138 820 and 08/476 750, which are incorporated herein by reference, describe methods for preparing an amorphous compound of formula II, and in particular an amorphous compound of formula I.

Nový způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce II a zejména krystalické sloučeniny obecného vzorce I podle tohoto vynálezu se popisuje syntézou ukázanou ve schématu II, ve kterémThe novel process for the preparation of the compound of formula II and in particular the crystalline compound of formula I according to the invention is described by the synthesis shown in Scheme II,

B, E¹, E², G, R, m, n a p se definují výše aB, E ¹ , E ² , G, R, m, n and p are as defined above and

P¹ je skupina chránící kyselinu labilní při hydrogenací, jako je benzylová skupina,P ¹ is a hydrogenation labile acid protecting group such as a benzyl group,

P² je skupina chránící amin v labilním kyselém prostředí, jako je terc.butoxykarbonylová skupina (BOC) aP ² is an amine protecting group in a labile acidic environment such as a tert-butoxycarbonyl (BOC) group and

P³ je skupina chránící amin labilní při hydrogenací jako je benzyloxykarbonylová skupina (CBZ).P ³ is a hydrogenation labile amine protecting group such as benzyloxycarbonyl (CBZ).

Schéma IIScheme II

RP³'RP ³ '

R- 35 O OR-35 O O

P2-N-(CH₂)_P—COH + H₂N—CH-COHP2-N- _{(CH2) p} COH + H ₂ N-CH-COH

CH2CO2PCH2CO2P

Spojovací prostředekFastener

OO

JLJL

HN♦ · · » A A AAA* ♦ A · · A 9 I · AHN A · A A AAA * ♦ A · A 9 I · A

P²-N—(CH₂)_p BP ² -N- (CH ₂ ) _p B

TFA HN-(CH₂)_P TFA HN- (CH _{2) p}

B(B)

OO

JLJL

OO

JLJL

Spojovací prostředek _P2._N_(CH₂)pBFastener _P 2. _N _ (CH ₂ ) pB

Spojovací prostředek.Fastener.

E² O I l IIE ² OI II

-N —CH—C —G-N — CH — C — G

OO

IIII

-ch-co₂h-ch-co ₂ hrs

I ch₂co₂p¹ I ch ₂ co ₂ p ¹

HN— CHIHN— CHI

CH₂CO₂P¹ TFACH ₂ CO ₂ P ¹ TFA

HN— CHIHN— CHI

OO

JLJL

E¹ E² O I I 11E ¹ E ² OII 11

-N— CH—C —G ch₂co₂p¹ (—{<?<M-N — CH — C — G ch ₂ co ₂ p ¹ (- {? <M

OO

II p3II p3

N_^CH₂-^—C — OH _x S 5}N_ ^ _CH2 - ^ - C - OH 5 _x S}

CHz^—C —N— (CH₂)_p—ΜI-(9^<n>=) mCH ^ -C-N- (CH _{2) p} -ΜI- (9 ^<n> =) m

NΗΝ—CHO E¹ NΗΝ — CHO E ¹

E² OE ² O

I III II

-CH-C—G-CH-C-G

CH₂CO₂P¹ hydrogenace (například plynným vodíkem nebo chemickým přenosem)CH ₂ CO ₂ P ¹ hydrogenation (eg hydrogen gas or chemical transfer)

OO

II ^CH₂j—C-N-(CH₂)_P ^Π BII ^ CH ₂ j — CN- (CH ₂ ) _P ^Π B

OO

J-HN—CHIJ-HN — CHI

OO

ILIL

E¹ E² OE ¹ E ² O

I I III I II

N-CH-C—GN-CH-C-G

CH₂CO₂HCH ₂ CO ₂ H

• · · · • · > ·• · · ·

9 9 99 9 9

Během přípravy sloučeniny obecného vzorce II nebo jejího meziproduktu může být též žádoucí či nezbytné zabránění křížové reakci mezi chemicky aktivními substituenty přírodních aminokyselin nebo pseudoaminokyselin. Tyto substituenty lze chránit standardními blokujícími skupinami, které lze následně odstranit či zachovat podle požadavku způsoby známými pro obdržení žádaných produktů či meziproduktů (viz například Green Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1981). Selektivní protekce či deprotekce může být též nezbytnou či žádoucí pro umožnění přeměny či odstranění existujících substituentů nebo pro umožnění následné reakce pro získání konečného žádaného produktu.During the preparation of a compound of formula (II) or an intermediate thereof, it may also be desirable or necessary to avoid cross-reactions between chemically active substituents of natural amino acids or pseudoamino acids. These substituents can be protected by standard blocking groups which can subsequently be removed or maintained as desired by methods known to obtain the desired products or intermediates (see, for example, Green Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1981). Selective protection or deprotection may also be necessary or desirable to allow conversion or removal of existing substituents or to allow subsequent reaction to yield the final desired product.

Způsob schématu II je vyložen na příkladu přípravy sloučeniny obecného vzorce II, avšak je třeba uvažovat, že s použitím příslušných výchozích materiálů se připraví sloučenina obecného vzorce I. Při přípravě sloučeniny obecného vzorce I podle schématu II je B ethylová skupina, E je atom vodíku, F je cyklohexylmethylová skupina, G je aminoskupina, R je atom vodíku, m je 3, n je 3, p je 1, P^x je benzylová skupina, P³ je BOC a P³ je CBZ.The process of Scheme II is set forth by way of example of preparing a compound of formula II, but it is contemplated that using the appropriate starting materials, a compound of formula I is prepared. In preparing a compound of formula I of Scheme II, B is ethyl, E is hydrogen, F is cyclohexylmethyl, G is amino, R is hydrogen, m is 3, n is 3, p is 1, P ^x is benzyl, P ³ is BOC and P ³ is CBZ.

Alternativní způsob podle tohoto vynálezu pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I je stejný jako ve schématu II kromě toho, že se použije sloučenina obecného vzorce III, ve které se P³ definuje výše,An alternative process of the invention for the preparation of a compound of formula I is the same as in Scheme II except that a compound of formula III is used in which P ³ is as defined above,

OH (III) * ·· ·· ·· ·· • · · 4 4 · · 4 4 ·· · • · · · · · 4 4 · 4 • 4 · · · 4 4 · · · · « • · · · · 4 · · · · «·» 4· ·· ··«· ·· 44 místo sloučeniny obecného vzorce IV, ve které je atom vodíku, je 3, je 3, jelaOH (III) * 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 44 instead of a compound of formula IV in which the hydrogen atom is 3, is 3, is

ZJeZJe

(IV)(IV)

CBZ s obdržením meziproduktu obecného vzorce V, ve kterémCBZ to give an intermediate of formula V wherein

B je ethylová skupina,B is ethyl,

E^x je atom vodíku,E ^x is a hydrogen atom,

Φ φ φ φφφ « · • * φ · φ φ φφφ » φ φ φ φφφ φ φ φφφ φ φ φ φ φ φ φ φ • · φ φ φ φ φ φ • φ φ φ • · φ φ • φ φ φΦ φ φ «· φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ · · · · · · · · · · · · · · ·

Ε² jeΕ ² is

Ρ³— Ν — ΝI- ³ - ΝI

Β •(θΗ₂)ρΟΒ • (θΗ ₂ ) ρΟ

JLJL

Ε¹ Ε ¹

IAND

-με² ο-με ² ο

I III II

-CH-CG-CH-CG

CH₂CO₂P¹ (V) cyklohexylmethylová skupina,CH ₂ CO ₂ P ¹ (V) cyclohexylmethyl group,

G je aminoskupina,G is an amino group,

Ρ ϊθ 1,1 ϊθ 1,

P¹ je benzylová skupina aP ¹ is a benzyl group and

Pⁿ je CBZ.P ⁿ is CBZ.

Schéma II ukazuje způsob o pěti krocích pro přípravu sloučeniny podle tohoto vynálezu počínaje vytvořením centrálního dipeptidového meziproduktu podle tohoto vynálezu obecného vzorce VI, ve kterémScheme II shows a five step process for preparing a compound of the invention starting from the formation of the central dipeptide intermediate of the invention of formula VI, wherein:

Β, ρ, P² aΒ, ρ, P ² and

P²-N—(CH₂)p· fiP ² -N- (CH ₂ ) p · fi

(VI) se definují výše.(VI) are defined above.

V případě přípravy sloučeniny obecného vzorce I je centrálním dipeptidovým meziproduktem podle tohoto vynálezu BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-0H. Centrální dipeptidový meziprodukt se připraví bez ochrany volného zbytku karboxylové kyseliny.For the preparation of a compound of formula I, the central dipeptide intermediate of the present invention is BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) -0H. The central dipeptide intermediate is prepared without protecting the free carboxylic acid residue.

V kroku 2 schématu II se může připojení s vytvořením centrálního dipeptidu provést buď v dichlormethanu nebo ve směsích ethylacetatu s nebo bez dimethylformamidu jako pomocného rozpouštědla - a organických bází, jako je NMM a může se uskutečnit při teplotách od teploty místnosti zhruba do 40 °C. Aktivace aminokyseliny nebo pseudoaminokyseliny následujícího vzorce pro spojení se může uskutečnit s použitím υIn step 2 of Scheme II, the central dipeptide formation can be carried out either in dichloromethane or in ethyl acetate mixtures with or without dimethylformamide as a co-solvent - and organic bases such as NMM and can be performed at temperatures from room temperature to about 40 ° C. Activation of the amino acid or pseudo amino acid of the following coupling formula may be accomplished using υ

II p2__N_(CH₂)p--COHII p ₂ - _{N -} (CH ₂ ) p - COH

B neizolovaných aktivních esterů s p-nitrofenolem, pentafluorfenolem a N-hydroxysukcinimidem působením dicyklohexylkarbo40 *· ♦· 00 00 • » · 0 0 «· 0 • · · 0 0 0 0B non-isolated active esters with p-nitrophenol, pentafluorophenol and N-hydroxysuccinimide by treatment with dicyclohexylcarbone 40 00

9 9 ·»00 •0 0000 00 00 diimidu. Doby spojováni se pohybuji od 1 do zhruba 20 h. v závislosti na aminokyselinách či pseudoaminokyselinách, které se mají spojovat, aktivačním činidlu, rozpouštědlu a teplotě. Centrální dipeptidový produkt kroku 1 se nemusí izolovat. Reakční směs kroku 1 se obvykle promývá vodou či zředěnou vodnou kyselinou (například vodnou kyselinou chlorovodíkovou) a poté se používá přímo bez sušení v kroku 2.9 9 00 »00 00 00 00 00 diimide. Coupling times range from 1 to about 20 hours. Depending on the amino acids or pseudo amino acids to be coupled, the activating agent, the solvent and the temperature. The central dipeptide product of step 1 need not be isolated. The reaction mixture of step 1 is usually washed with water or dilute aqueous acid (e.g. aqueous hydrochloric acid) and then used directly without drying in step 2.

V případu použití aktivních esterů na bázi fenolu se centrální dipeptidový produkt extrahuje do alkalické vody z reakční směsi, poté se reextrahuje z okyseleného vodného roztoku zpět do organického rozpouštědla a roztok reaguje přímo jako v kroku 2.If active phenol-based esters are used, the central dipeptide product is extracted into alkaline water from the reaction mixture, then re-extracted from the acidified aqueous solution back to the organic solvent and the solution is reacted directly as in step 2.

Dipeptidový meziprodukt obecného vzorce VI se použije k přípravě tripeptidového meziproduktu podle tohoto vynálezu vzorce VII, ve kterém B, E¹ , E^:?, G, paThe dipeptide intermediate of formula (VI) is used to prepare the tripeptide intermediate of the invention of formula (VII), wherein B, E ¹ , E ² , R 2, R 2, R 2, R 2, R 2, R 2 and R ^{2 .} , G, pa

P²'P ² '

-N—(^CH₂)^ B-N- ^(C H ₂₎ ^ B

JIHER

ΜΙΜΟ E¹ E² O ¹ E ¹ E ² O

II ^{1 1 11 11 1 11}

CH—^u—N-CH-C—GCH- ^u- N-CH-C-G

CH₂CO₂P’ (VII)CH ₂ CO ₂ P '(VII)

P¹ se definují výše a P² * je P² nebo TFA.H-. Pokud P^2- je TFA.H-, potom symbol ”. představuje disociaci kyseliny trifluoroctové (TFA) s vytvořením F CCO ~ a H', při které H' protonuje terminální amin ve sloučenině obecného vzorce • · ·P ¹ is as defined above and P ² * is P ² or TFA.H-. If P ^2- is TFA.H-, then the symbol ”. represents the dissociation of trifluoroacetic acid (TFA) to form F CCO - and H ', in which H' protonates the terminal amine in the compound of formula

VII, to jest poskytuje sůl kyseliny trifluoroctová obecného vzorce Vila. V případě přípravy sloučeninyVII, i.e., it provides the trifluoroacetic acid salt of formula VIIa. In the case of compound preparation

CF3CO2CF3CO2

H₂N-{CH₂)pB •HNE¹ H ₂ N- (CH ₂ ) p _B • HNE ¹

IAND

-ΜΕ² -ΜΕ ²

IAND

CH· CH₂CO₂P¹ CH · CH ₂ CO ₂ P ¹

OO

II • CH—C—G (Vila) obecného vzorce I je tripeptidovým meziproduktem podle tohoto vynálezu P² ’ -N(Et)Gly-(L) -Asp(OBz.l) -(L) -Cha-NH^ .II-CH-C-G (VIIa) of formula I is a tripeptide intermediate of the invention P ² '-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBz.1) - (L) -Cha-NH 4.

V kroku 2 lze připojení aminokyseliny nebo pseudoaminokysel.iny k centrálnímu dipeptidu uskutečnit buď v dichlormethanu nebo ve směsi ethylacetatu a dimethylformamidu nebo tetrahydrofuranu při teplotě místnosti nebo při nižší teplotě. Aktivace centrálního dipeptidu následujícího vzorce pro spojování p2„N_(CH₂)pIn step 2, the coupling of the amino acid or pseudo amino acid to the central dipeptide can be carried out either in dichloromethane or in a mixture of ethyl acetate and dimethylformamide or tetrahydrofuran at room temperature or below. Activation of the central dipeptide of the following formula for the coupling of β ₂ N - (CH ₂ ) p

HN—CH—CO2H I . CH2CO2P¹ • · 9 99 99 99 99 · · 9 « 9 9 · · 9 · 9HN — CH — CO2H I. CH2CO2P ¹ 9 9 99 99 99 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9

999 9 9 9 9 9 9 9 «99 999 9999999 9 9 9 9 9 9 9 «99 999 9999

999 99 99 9999 99 9 9 se může uskutečnit s použitím neizolovaných aktivních esterů pentafluorfenolu nebo N-hydroxy-sukcinimidu působením dicyklohexylkarbodiimidu. Aktivace se též může uskutečnit s použitím isopropylchlorformiatu. Reakční doby se mění v závislosti na aminokyselinách či pseudoaminokyselinách, které se mají spojovat, na aktivačním činidlu, rozpouštědlu a teplotě a pohybují se od 1 do 20 h. Tripeptidový produkt se nemusí izolovat. Když se tripeptidový produkt neizoluje, promyje se reakční směs vodnou organickou bází, jako je vodný N-methylmorfolin a vodnou kyselinou, jako je vodný roztok kyseliny chlorovodíkové, a reaguje jako takový způsobem kroku 3 po vodném promytí a bez sušení.999 99 99 9999 99 9 9 can be carried out using non-isolated active pentafluorophenol or N-hydroxy succinimide esters by dicyclohexylcarbodiimide. Activation can also be accomplished using isopropyl chloroformate. The reaction times vary depending on the amino acids or pseudo amino acids to be coupled, the activating agent, the solvent and the temperature, and range from 1 to 20 hours. The tripeptide product need not be isolated. If the tripeptide product is not isolated, the reaction mixture is washed with an aqueous organic base such as aqueous N-methylmorpholine and an aqueous acid such as aqueous hydrochloric acid and reacted as such in step 3 after aqueous washing and without drying.

V kroku 3 schématu II se může odstranění chránící skupiny, jako je BOC, z tripeptidového produktu kroku 2 uskutečnit s použitím roztoku kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu nebo s použitím směsi kyseliny bromovodikové v kyselině octové a ethylacetátu. Reakce může probíhat zhruba při teplotě místnosti a reakce vyžaduje trvání 1 h (způsob s kyselinou bromovodíkovou) a zhruba 2 h (způsob s kyselinou trifluoroctovou). Produkt kyselé soli tripeptidu se izoluje filtrací jako krystalická pevná látka buď přímo z reakční směsi (způsob s kyselinou bromovodíkovou) nebo po částečném odstranění rozpouštědla destilací a přídavkem nepolárního rozpouštědla ke zbytku v reakční nádobě.In Step 3 of Scheme II, deprotection, such as BOC, from the tripeptide product of Step 2 can be accomplished using a solution of trifluoroacetic acid in dichloromethane or a mixture of hydrobromic acid in acetic acid and ethyl acetate. The reaction may be run at about room temperature and the reaction requires 1 hour (hydrobromic acid method) and about 2 hours (trifluoroacetic acid method). The acid salt of the tripeptide is isolated by filtration as a crystalline solid either directly from the reaction mixture (hydrobromic acid method) or after partial removal of the solvent by distillation and addition of a non-polar solvent to the residue in the reaction vessel.

Další způsob podle tohoto vynálezu se popisuje jako jednoduchý zřetězený způsob pro rychlou a jednoduchou příprávu TFA.H-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH^ z BOC-N(Et)Gly-OH, což je reakce prováděná v jedné nádobě zahrnující první dva spojovací kroky ve schématu II a zpracováni kyselinou trifluoroctovou. Obdrží se jednotlivě TFA.HN(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂, neboť krystalizuje • *· ·· ·· ·· · · · · · · • · · · · · • · · · · · · • · · 9 9 9Another method of the present invention is described as a simple chain method for the rapid and simple preparation of TFA. HN (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH4 from BOC-N (Et) Gly- OH, which is a one-pot reaction comprising the first two coupling steps in Scheme II and trifluoroacetic acid treatment. Receive individually TFA.HN (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) Cha-NH ₂ as gels • * ·· ·· ·· · · · · · · · • · · · 9 9 9

9 ·· 99 9 9999 ·· 99 9 999

9999

9 9 99 9 9

9 9 9 přímo z roztoku zřetězené reakce. Zřetězený způsob se vyhýbá odpovídajícím třem odděleným reakcím ve schématu II a řeší problém pro obdržení jednotlivé časově a cenově účinné syntézy, která je použitelná při výrobě.9 9 9 directly from the chain reaction solution. The chained process avoids the corresponding three separate reactions in Scheme II and solves the problem of obtaining a single time and cost effective synthesis that is useful in production.

Schéma II ukazuje tvorbu polypeptidu v opačném pořadí počínaje aminokyselinou s chráněnou aminoskupinou s následným postupným přídavkem ke karboxylovému konci oproti konvenčnímu pořadí, kterým se tvoří polypeptid následnými amidacemi na aminovém konci aminokyseliny s chráněným uhlíkovým koncem. Tento reverzní syntetický způsob podle tohoto vynálezu požaduje ochranu dusíku pouze u první aminokyseliny s umožněním použití od tohoto místa následných aminokyselin nemajících žádnou ochranu na konci s aminovou či karboxylovou skupinou (kromě funkčních skupin bočního řetězce). Tyto reverzní syntetické metody rovněž usměrňují tvorbu sloučeniny obecného vzorce II a zejména sloučeniny obecného vzorce I tím, že umožňuji použiti proudového způsobu výroby oproti vsádkovému typu normálně požadovanému v chemii peptidů. Nový přístup snižuje výrobní náklady odstraněním požadavků na nákup aminokyselin chráněných na aminovém konci. Nepožadují se žádná zvláštní vybavení, činidla či analytické způsoby.Scheme II shows the formation of the polypeptide in reverse order starting with the amino-protected amino acid followed by sequential addition to the carboxyl terminus versus the conventional order of forming the polypeptide by subsequent amidations at the amino-terminated amino-protected amino acid. This reverse synthetic method of the invention only requires nitrogen protection for the first amino acid, allowing use from this point of subsequent amino acids having no amino or carboxyl terminus protection (except for side chain functional groups). These reverse synthetic methods also direct the formation of the compound of formula (II), and in particular of the compound of formula (I), by allowing the use of a stream process over a batch type normally required in peptide chemistry. The new approach reduces manufacturing costs by eliminating the purchase requirements for amino-protected amino acids. No special equipment, reagents or analytical methods are required.

Dalším způsobem podle tohoto vynálezu je tvorba stabilního nehygroskopického krystalického N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-D-cyklohexylalaninamidu obdrženého reprodukovatělně novou přeměnou v pevné fázi z hygroskopického krystalického N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu připraveného způsobem popsaným ve schématu II a v uvedených alternativních reakčních krocích.Another method of the invention is the formation of a stable non-hygroscopic crystalline N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -D-cyclohexylalaninamide obtained reproducibly by a new solid-phase conversion from hygroscopic crystalline N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide prepared by as described in Scheme II and in these alternative reaction steps.

• 99 99 99 ··• 99 99 99 ··

9 · 9 9 99 9 9 99 99 · 9 9 99 9

999 99 9 9999 ·· 999 9 9 99 99 9999 99 9 9999 ··

9 9 999 99999,999,9999

999 99 99 9999 99 99999 99 99

Hygroskopická krystalická forma N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu je fyzikálně nestabilní a převádí se expozicí podmínkám vlhkosti a teploty na vysoce stabilní nehygroskopickou krystalickou formu N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu.The hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide is physically unstable and is converted by exposure to conditions humidity and temperature to a highly stable non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide.

Obecné podmínky podle tohoto vynálezu pro převedení hygroskopická krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu na vysoce stabilní nehygroskopickou krystalickou formu N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu se zajišťují za statických a dynamických podmínek.General conditions of the invention for converting the hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide to highly stable, non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide is provided under static and dynamic conditions.

Statický způsob podle tohoto vynálezu se popisuje jako statická konverze, neboť zahrnuje expozici hygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklo- hexylalaninamidu umístěné do nepohyblivé nádoby, jako jsou lahvičky či misky, určitým podmínkám teploty a vlhkosti v kontrolované klimatické komoře. Statická” konverze se provádí při teplotách a relativních vlhkostech pohybujících se.od zhruba 20 °C do zhruba 80 °C, v preferovaných případech při zhruba 40 °C až zhruba 80 “C a při 40 až 100 % relativní vlhkosti, přednostně při zhruba 65 až zhruba 80 % relativní vlhkosti.The static method of the invention is described as a static conversion since it involves exposing the hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - ( L) -β-cyclohexylalaninamide placed in a stationary vessel, such as a vial or dish, under certain temperature and humidity conditions in a controlled climate chamber. The static conversion is carried out at temperatures and relative humidities ranging from about 20 ° C to about 80 ° C, preferably at about 40 ° C to about 80 ° C and at 40 to 100% relative humidity, preferably at about 65 ° C to about 80 ° C. up to about 80% relative humidity.

Dynamický způsob podle tohoto vynálezu se popisuje jako dynamická konverze, neboť zahrnuje expozici hygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu při hladinách vlhkosti a teploty jako veThe dynamic process of the present invention is described as dynamic conversion since it involves exposing the hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - ( L) -B-cyclohexylalaninamide at humidity and temperature levels as in

9* 99 99 99 • 9 9999 99999 * 99 99 99 • 9 9999 9999

99 9 999999 9 9999

999 9 9 99 99 9999 99 9 99 99 9

999 9999999 9999

99 99 9999 99 99 statickém modelu, avšak za podmínek míchání včetně promíchávání hygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu v rotační odpařovací baňce nebo v cylindrické nádobě (v komoře s vlhkostí) za mícháni pomocí vrtulky.99 99 9999 99 99 static model but under mixing conditions including mixing of the hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - ( L) -B-cyclohexylalaninamide in a rotary evaporator flask or in a cylindrical vessel (in a humidity chamber) with stirring using a propeller.

Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Následující příklady slouží pro ilustraci a nemají omezovat rozsah tohoto vynálezu.The following examples serve to illustrate and not to limit the scope of the invention.

Pokud není uvedeno jinak, pocházejí údaje o hmotnostní spektrální analýze z provedení bombardování rychlými atomy s nízkým rozlišením na VG 70SE s vypočtenými hodnotami (M+H)·*·. Spektrální údaje nukleární magnetické resonance (NMR) se obdrží na Brucker ACF 300 v D_aO. Mžiková chromatografie se provádí na silikagelu. Vysokovýkonná kapalinová chromatografie (HPLC) se provádí na sloupcích s reverzní fázi C-18 s rozměrem částic mezi 8 a 15 μιη.Unless otherwise stated, mass spectral analysis data were derived from low-resolution fast-atom bombardment on VG 70SE with calculated (M + H) values. Nuclear magnetic resonance (NMR) spectral data was obtained on a Brucker ACF 300 in D _and O. Flash chromatography was performed on silica gel. High performance liquid chromatography (HPLC) is performed on C-18 reverse phase columns having a particle size between 8 and 15 μιη.

Pokud není uvedeno jinak, pocházejí grafy rentgenové práškové difrakční analýzy od použití difraktometru Siemens D5000 s radiačním zdrojem Cu (1,8 kw, 45 kV a 40 mA) pro snímání práškových vzorků. Vzorky se před měřením melou pro eliminaci účinku velikosti částice na intenzity píků. Do držáku vzorku 1,5 x 1 cm se umístí zhruba 60 mg vzorku a snímá se v rozmez! 3 až 40° 2 theta s velikostí kroku 0,04° a celkovou expozici 12 s na krok.Unless otherwise noted, X-ray powder diffraction analysis plots are derived from the use of a Siemens D5000 diffractometer with a Cu radiation source (1.8 kw, 45 kV, and 40 mA) for powder sample acquisition. The samples are ground prior to measurement to eliminate the effect of particle size on peak intensities. Approximately 60 mg of sample is placed in a 1.5 x 1 cm specimen holder and scanned in the range. 3 to 40 ° 2 theta with a step size of 0.04 ° and a total exposure of 12 s per step.

Příklad 1Example 1

Příprava BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH • · · 9 9 ·· ·· · · • · · · · · · · · 9 9 9 • 9 · ·· · ···· • · · · · · · · 9 9 9 9Preparation of BOC-N (Et) -Gly- (L) -Asp (OBzl) -OH 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 99 99 99 9999 99 99 (Krok 1 schématu II)9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 99 99 99 9999 99 99 (Step 1 of Scheme II)

Do baňky s kulatým dnem se třemi hrdly o obsahu 1 litr se umístí 51 g (0,25 mol) BOC-N(Et)Gly-OH, 35 g (0,25 mol) PNP, 400 ml ethylacetátu a 100 ml dimethylformamidu. Směs se míchá pro obdržení roztoku a ochladí na 4 až 6 °C.In a 1 liter three-necked round-bottomed flask was charged 51 g (0.25 mol) of BOC-N (Et) Gly-OH, 35 g (0.25 mol) of PNP, 400 ml of ethyl acetate and 100 ml of dimethylformamide. The mixture was stirred to obtain a solution and cooled to 4-6 ° C.

Po kapkách se přidává roztok 51,5 g (0,25 mol) dicyklohexylkarbodiimidu ve 125 ml ethylacetátu po dobu 10 min při udržování teploty od zhruba 5 °C do zhruba 8 °C. Po přidání veškerého dicyklohexylkarbodiimidu se chladící lázeň odstraní a směs se míchá po dobu 1,5 h a přitom se ohřeje na teplotu místnosti (20 až 22 °C). Během této doby se vytváří DCU ve formě pevné sraženiny. Úplnost tvorby esteru PNP se stanoví analytickou vysokovýkonnou kapalinovou chromatografil [vymizení BOC-N(Et)Gly-OH]. Reakční směs se zfiltruje a zbytek DCU se promyje podíly 2 až 50 ml ethylacetátu a podíly prošlé filtrem se přidají k filtrátu. DCU se odstraní.A solution of 51.5 g (0.25 mol) of dicyclohexylcarbodiimide in 125 ml of ethyl acetate is added dropwise over 10 min, maintaining the temperature from about 5 ° C to about 8 ° C. After all dicyclohexylcarbodiimide was added, the cooling bath was removed and the mixture was stirred for 1.5 h while warming to room temperature (20-22 ° C). During this time, DCU forms as a solid precipitate. The completeness of PNP ester formation is determined by analytical high performance liquid chromatography [disappearance of BOC-N (Et) Gly-OH]. The reaction mixture was filtered and the remainder of the DCU was washed with portions of 2 to 50 ml of ethyl acetate and the portions passed through the filter were added to the filtrate. The DCU is removed.

K míchanému zfiltrovanému roztoku se přidá 67 g (0,3 mol) H₂N-(L)-Asp(OBzl)-OH ve formě suspenze ve 150 ml (138 g, 1,36 mol) NMM. Směs se zahřívá na 38 až 40 °C a udržuje při této teplotě po dobu 41 h, což je doba, po které analytická vysokovýkonná kapalinová chromatografie ukazuje na úplnou spotřebu BOC-N(Et)Gly-OPNP. Reakční směs se ochladí na 25 °C a nezreagovaný H₂N-(L)-Asp(OBzl)-0H se odfiltruje. Roztok se ochladí a znovu zfiltruje pro obdržení dalších 1,2 g [21,7 g zpětného získání, 11,2 g představuje přidaný 20% přebytek a 10,5 g (0,047 mol) představuje nezreagovanou látku].To the stirred filtered solution was added 67 g (0.3 mol) of H ₂ N- (L) -Asp (OBzl) -OH as a suspension in 150 ml (138 g, 1.36 mol) of NMM. The mixture is heated to 38-40 ° C and maintained at this temperature for 41 h, which is the time for which analytical high performance liquid chromatography indicates complete consumption of BOC-N (Et) Gly-OPNP. The reaction mixture was cooled to 25 ° C and unreacted H ₂ N- (L) -Asp (OBzl) -0H was filtered off. The solution is cooled and re-filtered to give an additional 1.2 g [21.7 g recovery, 11.2 g is an added 20% excess and 10.5 g (0.047 mol) is unreacted].

Zfiltrovaný roztok se extrahuje ve Squibbově nálevce o obsahu 2 litry s jedním podílem 500 ml deionizované vody a následujícími dvěma podíly 250 ml. Spojený vodný roztok se ·· • ·# *· ·· ·<The filtered solution is extracted in a 2 liter Squibb funnel with one portion of 500 ml deionized water followed by two portions of 250 ml. The combined aqueous solution was

·· · · ···· <*··· » · · · · · ···· • · ··· · · ·· · · · • · · ··· ···· ··· ·· ·· ·«·· ·· ·· extrahuje 3 podíly po 300 ml směsi MTBE/ethylacetat pro odstraněni zbytkového PNP (1:1) (analýza vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií vykazuje pouze stopové zbytky).····························································· Extract 3 portions of 300 mL of MTBE / ethyl acetate to remove residual PNP (1: 1) (HPLC analysis shows only trace residues).

Poté se ochladí na 5 °C a okyselí z pH 8,9 na pH 1,79 přidáváním 150 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové po kapkách. Okyselený vodný roztok se extrahuje dvěma podíly 200 ml ethylacetátu. Analýza pevné fáze vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií nevykazuje žádný zbytkový žádaný produkt. Ethylacetatové extrakty se spojí, vysuší síranem horečnatým, zfiltrují a odpaří na rotační odparce při 35 °C. Výsledná světle oranžová olejovitá kapalina se čerpá při 35 °C pro maximální odstraněni zbytkového rozpouštědla se získáním 85,68 g BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH ve formě olejovité kapaliny (21,3 mmol, výtěžek 85,5 %, bez korekce na zbytkové rozpouštědlo).It is then cooled to 5 ° C and acidified from pH 8.9 to pH 1.79 by dropwise addition of 150 ml of concentrated hydrochloric acid. The acidified aqueous solution was extracted with two 200 mL portions of ethyl acetate. Solid phase high performance liquid chromatography analysis showed no residual desired product. The ethyl acetate extracts were combined, dried (MgSO4), filtered and rotary evaporated at 35 ° C. The resulting pale orange oily liquid was pumped at 35 ° C to maximize residual solvent removal, yielding 85.68 g of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) -OH as an oily liquid (21.3 mmol, yield 85.5%, without correction for residual solvent).

Charakterizace:Characterization:

NMR (250 MHz): 7,3 ppm (s), 5,1 ppm (s), 3,3 ppm(dg), 3,0 (dq), 1,4 ppm (s), 1,1 (t)NMR (250 MHz): 7.3 ppm (s), 5.1 ppm (s), 3.3 ppm (dg), 3.0 (dq), 1.4 ppm (s), 1.1 (t )

MS: M = 408, M+l - 409 pozorOV.MS: M = 408, M + 1-409 observed.

Vysokovýkonná kapalinová chromatografie: 90,79A % (3,87A % p-nitrofenol, bez korekce na e)High performance liquid chromatography: 90.79A% (3.87A% p-nitrophenol, no correction for e)

Elementární analýza: C H NO:H,N,C 57,54,Elemental analysis: C H NO: H, N, C 57.54,

-² 20 28 2 Ύ ' ' Π&.2.&Ζ . ' '- ² 20 28 2 Ύ '' Π & .2. & Ζ. ''

C 58,81.C, 58.81.

Příklad 2Example 2

Příprava BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (Krok 2 schématu II)Preparation of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ (Step 2 of Scheme II)

4 4« 4 4 « • 4 • 4 44 44 44 44 4« 4 « ·· 4 4 ·· 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 • · 4 • · 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 444 44 444 44 • 4 • 4 4444 4444 44 44 44 44

Způsob AMethod A

Isopropylchlorformiatový způsobIsopropylchloroformate process

Jeden ekvivalent BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH se rozpustí v ethylacetátu (6 až 8 objemů, 1:6,5 hm:obj) a udržuje se při teplotě mezi -15 až 0 °C. Přidá se NMM (1 ekvivalent) při udržování při teplotě zhruba od -15 °C do zhruba 0 °C. Isopropylchlorformiat (1 až 1,1 ekvivalentu) se přidá do roztoku chráněného dipeptidu při teplotě mezi -15 a 0 °C. Reakční směs se udržuje při teplotě mezi -15 °C a 0 °C po dobu 2 až 5 min. Roztok H₂N-(L)-Cha-NH₂ (1 ekvivalent) v tetrahydrofuranu (10 objemů, 1:10 hm:obj) se přidá k ochlazenému roztoku dipeptidu s udržováním teploty při zhruba -15 °C až zhruba 0 °C. Reakční směs se sleduje vzorky odebranými v průběhu procesu pomocí vysokovýkonné kapalinové chromatografie v době 15 min, 1 h a 2 h pro vyhodnocení úplnosti reakce. (Reakce je úplná, pokud množství pozorovaného dipeptidu je menší než 10 % na základě vyhodnocení plochy při analýze vysokovýkonnou kapalinovou chromátograf ií) .One equivalent of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) -OH is dissolved in ethyl acetate (6-8 volumes, 1: 6.5 wt / vol) and maintained at a temperature between -15 to 0 ° C. NMM (1 equivalent) is added, maintaining it at a temperature of about -15 ° C to about 0 ° C. Isopropyl chloroformate (1 to 1.1 equivalents) is added to the protected dipeptide solution at a temperature between -15 and 0 ° C. The reaction mixture is maintained at a temperature between -15 ° C and 0 ° C for 2 to 5 min. A solution of H ₂ N- (L) -Cha-NH ₂ (1 equivalent) in tetrahydrofuran (10 volumes, 1:10 wt: vol) is added to the cooled dipeptide solution maintaining the temperature at about -15 ° C to about 0 ° C . The reaction mixture is monitored by samples taken during the process by high performance liquid chromatography at 15 min, 1 h and 2 h to evaluate the completion of the reaction. (The reaction is complete if the amount of dipeptide observed is less than 10% based on the area evaluation in high performance liquid chromatography analysis).

BOC-tripetidový produkt se sráží přímo z reakčního roztoku a oddělí se filtrací z reakční směsi, promyje se ethylacetátem (2x, 1 objem, hm:obj) a suší ve vakuu. Obvyklé výtěžky jsou vyšší než 60 % s čistotami více než 90A %, <1A % epimerního diastereoisomeru kyseliny aspartové.The BOC-tripetide product precipitates directly from the reaction solution and is collected by filtration from the reaction mixture, washed with ethyl acetate (2x, 1 volume, w / v) and dried in vacuo. Typical yields are greater than 60% with purities greater than 90A%, < 1A% of the epimeric diastereoisomer of aspartic acid.

Resuspenzace v ethylacetátu poskytuje konečné výtěžky okolo 60 % BOC-N-(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₃ a zlepšuje čistotu na >95A % se snížením diastereoisomeru na <0,5 %.Resuspension in ethyl acetate provides final yields of about 60% BOC-N- (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₃ and improves purity to> 95A% with a diastereoisomer reduction to <0.5 %.

• «· * · ·· · 4 4 4• «4 3 4

4 4 · · 4 4 4 · · · 44 4 · · 4 4 · · · 4

4 4 «4 · 4444 • » · »·« 2··· ·»· ·· ·· ···· ·3 ··4 4 «4 · 4444 •» 2 3 4

Pro specifický případ isopropylchlorformiatového způsobu, při kterém se postupuje podle obecného způsobu příkladu A s použitím 4,55 g (8,1 mmol) BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH je množství připraveného BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ 3,26 g (čistota 97,9A %, 0,3A % diastereoisomeru), teoretický výtěžek 70 %.For the specific case of the isopropyl chloroformate process, following general procedure of Example A using 4.55 g (8.1 mmol) of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) -OH, the amount of BOC- N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) _Cha-NH2 (3.26 g, 97.9% purity, 0.3A% diastereomer), theoretical yield 70%.

Způsob BMethod B

Způsob komplexu pentafluorfenol-DCCMethod of pentafluorophenol-DCC complex

Pentafluorfenol (PFP, 2'9 ekvivalentů) a dicyklohexylkarbodiimid (1 ekvivalent) se rozpustí v ethylacetátu (5 objemů’ 1:5 hm:obj) při teplotě místnosti a ochladí na teplotu mezi -15 a 0 °C. Jeden ekvivalent BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH se rozpustí v ethylacetátu (6 objemů, 1:6 hm:obj) a smísí s jedním ekvivalentem H_aN-(L)-Cha-NH^, který se předtím rozpustí v dimethylformamidu (10 objemů, 1:10 hm:obj). Roztok dipeptid/H₂N-(L)-Cha-NH_a se přidává po kapkách do roztoku pentafluorfenolu a dicyklohexylkarbodiimidu s udržováním teploty mezi -15 a 0 °C. Reakční směs se udržuje při teplotě mezi 15 a 22 °C po dobu 5 až 16 h s kontrolou vzorků v průběhu procesu pomocí vysokovýkonné kapalinové chromatografie odebraných v časech 1, 2, 3, 4al6h pro vyhodnoceni skončeni reakce. (Reakce je skončena, pokud je množství pozorovaného dipeptidu nižší než 2 % na základě analýzy plochy vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií.Pentafluorophenol (PFP, 2'9 equivalents) and dicyclohexylcarbodiimide (1 equivalent) were dissolved in ethyl acetate (5 volumes 1: 5 w / v) at room temperature and cooled to between -15 and 0 ° C. One equivalent of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) -OH was dissolved in ethyl acetate (6 volumes, 1: 6 w / v) and treated with one equivalent of H _and N- (L) -Cha- NH 4, which was previously dissolved in dimethylformamide (10 volumes, 1:10 w / v). The dipeptide / _H2 N- (L) -Cha-NH _and added dropwise to a solution of pentafluorophenol and dicyclohexylcarbodiimide maintaining the temperature between -15 and 0 ° C. The reaction mixture is maintained at a temperature of between 15 and 22 ° C for 5-16 hours with control of the samples during the process by high performance liquid chromatography collected at times 1, 2, 3, 4, 16h to evaluate the completion of the reaction. (The reaction is complete when the amount of dipeptide observed is less than 2% based on area analysis of high performance liquid chromatography.

Reakční směs se zfiltruje a filtrační koláč (DCU) se promyje ethylacetátem (2x 0,5 objemů, hm:obj). Filtrát se zpracuje vodou (10 objemů, 1:10 hm:obj) a vodná vrstva se odstraní. Ethylacetatová vrstva se promyje vodou (lx 5 objemů: 1:5 hm:obj). Ethylacetatová vrstva se ochladí pro vysrá50The reaction mixture was filtered and the filter cake (DCU) was washed with ethyl acetate (2 x 0.5 volumes, w / v). The filtrate was treated with water (10 volumes, 1:10 w / v) and the aqueous layer was removed. The ethyl acetate layer was washed with water (1 x 5 volumes: 1: 5 w / v). The ethyl acetate layer was cooled to precipitate

* • * · * • * · • · ♦ • · ♦ • » • • » • © © • © • · • © • · • · © • · © ♦ ♦ • • 4 · 4 · • • • · • · • • • • • • • • « « • • • • • • < < • · • · • • • • © © • • © © • • • • a and ·· « ·· « • · • · • · • · • · · · • · · · « · «· • © • ©

žení produktu, který se filtruje a promyje ethylacetátem (2x 0,4 objemy, 1:0,4 hm:obj). Izolované molární výtěžky >60 % s obvyklou čistotou >90A %, s 1 až 4A % epimerního diastereomeru kyseliny aspartové.The product was filtered and washed with ethyl acetate (2 x 0.4 volumes, 1: 0.4 w / v). Isolated molar yields > 60% with usual purity > 90A%, with 1-4A% epimeric diastereomer of aspartic acid.

Resuspenzace ethylacetátu poskytuje konečné výtěžky okolo 60 % BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₃ a zlepšuje čistotu na >99A % se snížením diastereomeru na <0,5 %.Resuspension of ethyl acetate provides final yields of about 60% BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₃ and improves purity to> 99A% with a diastereomer reduction to <0.5%.

Při specifickém případu způsobu komplexu pentafluorfenol-DCC s použitím obecného způsobu B a 10 g (24,5 mmol) BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH je množství připraveného BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ 8,15 g (čistota 99A %, 0,49A % diastereomeru), teoretický výtěžek 59 %.In a specific case of the pentafluorophenol-DCC complex process using general method B and 10 g (24.5 mmol) of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) -OH is the amount of BOC-N (Et) Gly prepared. - (L) -Asp (OBzl) - (L) _Cha-NH2 (8.15 g, 99A% pure, 0.49% diastereomer), a 59% theoretical yield.

Způsob CMethod C

Způsob hydroxybenzotriazolu (HOBT)/2-(ΙΗ-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumtetrafluorboratu (TBTU)Method of hydroxybenzotriazole (HOBT) / 2- (ΙΗ-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate (TBTU)

Jeden ekvivalent BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH se rozpustí v dimethylformamidu (9 až 10 objemů, 1:10 hm:hm) a udržuje se při teplotě okolí. K tomuto roztoku se přidá H₂N-(L)-Cha-NH₂ (1 ekvivalent) a hydroxybenzotriazol (HOBT, ekvivalent). Výsledný roztok se ochladí na zhruba 0 °C až zhruba 10 °C a přidá se NMM (1 až 1,1 ekvivalentu).One equivalent of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) -OH was dissolved in dimethylformamide (9-10 volumes, 1:10 wt: wt) and maintained at ambient temperature. To this solution was added H ₂ N- (L) -Cha-NH ₂ (1 equivalent) and hydroxybenzotriazole (HOBT, equivalent). The resulting solution was cooled to about 0 ° C to about 10 ° C and NMM (1 to 1.1 equivalents) was added.

Spojovací prostředek, 2-(ΙΗ-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumtetrafluorborat (1 až 1,1 ekvivalentu) se rozpustí v dimethylformamidu (4 až 5 objemů, 1:5 hm:hm) k roztoku chráněného dipeptidu při teplotě 0 °C až zhruba 10 °C. Tento roztok se míchá při zhruba 10 °C až zhruba 25 °C po dobu zhruba 3 h tak dlouho, až analýza vysokovýkonnou • · « * · ·> · · · ·The coupling agent, 2- (ΙΗ-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate (1 to 1.1 equivalents) was dissolved in dimethylformamide (4 to 5 volumes, 1: 5 w / w) to of a protected dipeptide solution at a temperature of 0 ° C to about 10 ° C. This solution is stirred at about 10 ° C to about 25 ° C for about 3 hours until the high throughput analysis is performed.

9 9 9 9 0 0 0 9 9 ft · 9 9 9 0 9 · 99 9 9 9 0 0 0 9 9 ft · 9 9 9 0 9 · 9

V 9 9 9 9 ti 0 0 0 9 0 · 0 9 9 0 9 9 9 • ·» ·· » ·· · · « · · kapalinovou chromatografii ukazuje skončení reakce (méně než 2 % výchozího materiálu podle plochy). Reakční směs se přidá k míchané směsi 5% vodného roztoku chloridu sodného (zhruba 4 objemy proti objemu reakční směsi) a ethylacetátu (zhruba 2 objemy proti objemu reakční směsi). Fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje dalším podílem ethylacetátu (zhruba 1,5 objemu proti objemu reakční směsi). Organické fáze se spojí a postupně promyjí vodným 0,5 N roztokem kyseliny citrónové (zhruba 0,6 až 0,7 objemů proti objemu organické fáze), 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x 0,6 až 0,7 objemu proti objemu organické fáze při každém promytí) a 25% vodným roztokem chloridu sodného (zhruba 0,3 až 0,4 objemu proti objemu organické fáze). Výsledná organická fáze se odpaří na zhruba 1/4 až 1/2 objemu za sníženého tlaku při zhruba 30 až 50 °C a k tomuto teplému roztoku se přidá stejný objem heptanu. Směs se míchá a ponechá ochladit na zhruba 0 °C až zhruba 20 °C pro vysrážení žádaného tripeptidu. Tato tuhá látka se zfiltruje, promyje směsi ethylacetátu a heptanu a vysuší. Obvyklý výtěžek je větší než 60 % s obvyklou čistotu větší než 95,7A % a hladinami epimernlho diastereomeru kyseliny aspartové < 2A %.The liquid chromatography shows the completion of the reaction (less than 2% of the starting material by area). The reaction mixture was added to a stirred mixture of 5% aqueous sodium chloride solution (about 4 volumes against the volume of the reaction mixture) and ethyl acetate (about 2 volumes against the volume of the reaction mixture). The phases were separated and the aqueous phase was extracted with an additional portion of ethyl acetate (about 1.5 volumes vs. volume of the reaction mixture). The organic phases are combined and washed sequentially with an aqueous 0.5 N citric acid solution (about 0.6 to 0.7 volumes versus the volume of the organic phase), a 10% aqueous sodium bicarbonate solution (2x 0.6 to 0.7 volumes versus the volume of organic) phase with each wash) and 25% aqueous sodium chloride solution (about 0.3 to 0.4 volumes vs. volume of the organic phase). The resulting organic phase is evaporated to about 1/4 to 1/2 volume under reduced pressure at about 30 to 50 ° C and an equal volume of heptane is added to this warm solution. The mixture is stirred and allowed to cool to about 0 ° C to about 20 ° C to precipitate the desired tripeptide. The solid was filtered, washed with a mixture of ethyl acetate and heptane and dried. Typical yield is greater than 60% with a typical purity greater than 95.7A% and epimeric diastereomer levels of aspartic acid <2A%.

Při použití specifického příkladu způsobu HOBT/TBTU, kdy se dodržuje obecný postup s použitím 10 g (24,5 mmol) BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(0Bzl)-OH se připraví 9,3 g BOC-N(Et)-Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (čistota 96,IA %, 1,77A % diastereomeru Asp), 67,7 % teoretického výtěžku.Using a specific example of the HOBT / TBTU procedure, following the general procedure using 10 g (24.5 mmol) of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (0Bzl) -OH, 9.3 g of BOC- N (Et) -Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ (purity 96, IA%, 1.77A% of the diastereomer Asp), 67.7% of theory.

Hmotnostní spektrometrie: M 560,7, M+l 561 vyp pozor*Mass Spectrometry: M 560.7, M + 1561 off Caution *

Teplota tání 182,17 (DSC) ¹H NMR (δ proti TMS, D6 DMSO): 0,89 m (IH), 0,94 • «· «· ·· ·* ·· • · · « 9 9 9 9 · · · « φ φ φ 9 9 9 9 9 9 9Melting point 182.17 (DSC) ¹ H NMR (δ vs. TMS, D6 DMSO): 0.89 m (1H), 0.94 9 9 9 9 · · · Φ φ φ 9 9 9 9 9 9 9

9 · · * 9 · · · · · · • 9 · 9 9 9 9 9 9 99 · 9 9 9 9 9 9 9 9

999 99 99 9999 ·9 ·· m (1Η), 1,0 dt (2H), 1,15 m (2H), 1,06-1,3 m (4H), 1,36 d (9H), 1,4-1,74 m (6H), 2,65 m (1H), 2,85, m (1H), 3,18, m (2H), 3,75, d (2H), 4,2, S (1H), 4,66, d (1H), 5,08, s (2H), 7,02, s (1H), 7,18, d (1H), 7,36, s (5H), 7,88, dd (1H), 8,24, dd (1H).999 99 99 9999 · 9 ·· m (1Η), 1.0 dt (2H), 1.15 m (2H), 1.06-1.3 m (4H), 1.36 d (9H), 1 4-1.74 m (6H), 2.65 m (1H), 2.85, m (1H), 3.18, m (2H), 3.75, d (2H), 4.2, S (1H), 4.66, d (1H), 5.08, s (2H), 7.02, s (1H), 7.18, d (1H), 7.36, s (5H), 7.88, dd (1H), 8.24, dd (1H).

Příklad 3Example 3

Příprava TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (Krok 3 schématu II)Preparation of TFA-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ (Step 3 of Scheme II)

BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ se rozpustí v dichlormethanu (zhruba 1:12 hm/hm) a k roztoku se přidá kyselina trifluoroctová při teplotě okolí. Roztok se poté míchá tak dlouho, až vysokovýkonná kapalinová chromatografie ukazuje ukončení reakce (3 až 5 h). Roztok se odpaří zhruba na jednu polovinu objemu při 40 až 45 °C. K tomuto teplému roztoku se přidá MTBE [zhruba 1:10 hm/hm proti BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂] při udržování teploty větší než 40 °C. Směs se pomalu ochladí zhruba na 5 °C a míchá po dobu 1 h pro zajištění úplné krystalizace. Výsledná tuhá látka se zfiltruje a promyje ochlazeným MTBE. Tuhé látky se vysuší za sníženého tlaku a analyzují na obsah TFA.-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (HPLC analýza hm/hm). Výtěžek je obecně téměř kvantitativní, čistota vyšší než 95A %.BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ was dissolved in dichloromethane (about 1:12 w / w) and trifluoroacetic acid was added at room temperature. The solution was then stirred until high performance liquid chromatography indicated completion of the reaction (3-5 h). Evaporate the solution to about one-half the volume at 40 to 45 ° C. To this warm solution is added MTBE [about 1:10 w / w vs BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ ] maintaining a temperature greater than 40 ° C . The mixture is slowly cooled to about 5 ° C and stirred for 1 h to ensure complete crystallization. The resulting solid was filtered and washed with cooled MTBE. The solids were dried under reduced pressure and analyzed for TFA.-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ content (HPLC w / w analysis). The yield is generally almost quantitative, purity greater than 95A%.

Hmotnostní spektrometrie: 460 (volná báze),Mass Spectrometry: 460 (free base),

M+l : 461 pozorM + 1: 461 ca

Elementární analýza: Η, N, F, C 54,35, nalez. 53,82.Elemental analysis: Η, N, F, C 54.35, found. 53.82.

··

• ·· • 4 4 4 4 • 4 4 • 4 4 4 4 4 4 4 ? 4 4 4? 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 • «. • «. 4 4 σ σ « « ♦) ♦) • 4 • 4 4 4 4 4 • 4 • 4 4 4 • • 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 • · 4 «V • · 4 «V • 4 • 4 • 4 4 4 • 4 4 4 4 4 4 4

^XH NMR (5 proti TMS), D⁶ DMSO): 0,9, m (2H), 1,15, t (6H), 1,5, m (1H), 1,5-1,8, m (6H) , 2,65, dd (1H), 2,9 , m (3H), 3,7, S (2H), 3,9, m (2H), 4,2, m (1H), 4,75, m (1H), 5,1, s (2H), 7,0, s (1H), 7,15, S (1H), 7,2, s (5H), 8,13, d (1H), 8,7-8,8, m (3H). ¹ H NMR (δ vs. TMS), D ⁶ DMSO): 0.9, m (2H), 1.15, t (6H), 1.5, m (1H), 1.5-1.8, m (6H), 2.65, dd (1H), 2.9, m (3H), 3.7, S (2H), 3.9, m (2H), 4.2, m (1H), 4 75, m (1H), 5.1, s (2H), 7.0, s (1H), 7.15, S (1H), 7.2, s (5H), 8.13, d ( 1H), 8.7-8.8, m (3H).

^X3C NMR (význačné signály, S proti TMS, D6 DMSO): 10,76, 25,49, 25,68, 25,96, 31,66, 33,07, 33,36, 36,25, 38,59, 41,88, 47,02, 49,40, 50,47, 65,71, 127,81-128,34, 135,82, 165,10, 169,34, 173,79. ^X3 C NMR (notable signals, δ vs. TMS, D6 DMSO): 10.76, 25.49, 25.68, 25.96, 31.66, 33.07, 33.36, 36.25, 38.59 , 41.88, 47.02, 49.40, 50.47, 65.71, 127.81-128.34, 135.82, 165.10, 169.34, 173.79.

Specifické příklady deprotekce ukazuje tabulka A.Specific examples of deprotection are shown in Table A.

Tabulka ATable A

Lab. Množství Výtěžek a čistota A % příklad (BOC-N(Et)Gly-(L)- (TFA.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂) -Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH^)Lab. Yield and purity A% Example (BOC-N (Et) Gly- (L) - (TFA.N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ ) -Asp ( OBzl) - (L) -Cha-NH4)

Příklad 7,5 g (13,3 mmol) 1Example 7.5 g (13.3 mmol) 1

7,4 g (12,9 mmol) 97% výtěžek, čistota 98,8A %7.4 g (12.9 mmol) 97% yield, 98.8A purity

PříkladExample

6,53 g (11,6 mmol) 6,4 g (11,1 mmol) 96% výtěžek, čistota 98,47A %6.53 g (11.6 mmol) 6.4 g (11.1 mmol) 96% yield, purity 98.47A%

Příklad 4Example 4

Příprava CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH^ (Krok 4 schématu II)Preparation of CBZ-PipBu-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH4 (Step 4 of Scheme II)

Připraví se suspenze zhruba ekvimolárních množství TFA.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂, CBZ-PipBu a TBTU v ethylacetátu, dimethylformamidu a vodě (100:8:4 obj/obj, zhruba 11:1 celkový obj/hm proti TFA.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂). Tato suspenze se ochladí na 0 až 10 °C a přidají se zhruba 3 až 4 ekvivalenty NMM. Tato směs se ponechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se tak dlouho, až HPLC ukáže skončení reakce (1 až 3 h, během této doby se objeví roztok). Přidá se voda (2- až 3násobek původního množství přidané vody) a fáze se ponechají oddělit. Vodná fáze se zachová a organická fáze se promyje dvěma dalšími podíly vody. Kombinované vodné podíly z promytí se zpětně extrahují ethylacetátem a kombinované organické fáze se promyjí 25% vodným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se odpaří za sníženého tlaku na zhruba 1/2 objemu a přidá se MTBE (zhruba 1/2 obj/obj proti roztoku objemu). Tato směs se ponechá krystalizovat (několik hodin) a tuhé látky se oddělí filtrací, promyjí ochlazenou směsí ethylacetátu a MTBE. Tuhé látky se vysuší za sníženého tlaku. Obsah CBZ-PipBu.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ se analyzuje vysokovýkonnou kapalinovou chromatografii hm/hm. Výtěžek je obecně vyšší než 80 %, čistota vyšší než 95A %.Prepare a suspension of approximately equimolar amounts of TFA. N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ , CBZ-PipBu and TBTU in ethyl acetate, dimethylformamide and water (100: 8: 4 v / v) 11: 1 total v / v against TFA. N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ ). This suspension is cooled to 0-10 ° C and about 3-4 equivalents of NMM are added. The mixture was allowed to warm to room temperature and stirred until HPLC indicated completion of the reaction (1-3 h, during which time a solution appeared). Add water (2 to 3 times the original amount of added water) and allow the phases to separate. The aqueous phase is maintained and the organic phase is washed with two additional portions of water. The combined aqueous washes were back-extracted with ethyl acetate and the combined organic phases were washed with 25% aqueous sodium chloride solution. The organic phase is evaporated under reduced pressure to about 1/2 volume and MTBE (about 1/2 vol / vol vs. volume solution) is added. This mixture was allowed to crystallize (several hours) and the solids were collected by filtration, washed with a cooled mixture of ethyl acetate and MTBE. The solids were dried under reduced pressure. The content of CBZ-PipBu.N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ was analyzed by high performance liquid chromatography wt / wt. The yield is generally higher than 80%, the purity higher than 95A%.

Při specifickém případu výše popsané přípravy s dodržováním obecného způsobu kroku 4 s použitím 7,25 g TFA.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ se získá 7,9 g CBZ-PipBu.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (čistota vyšší než 99A %, 0,08A % diastereomeru při Asp), teoretický výtěžek 84 %.In the specific case of the above preparation following the general procedure of Step 4 using 7.25 g of TFA. N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ yielded 7.9 g of CBZ N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ (purity &gt; 99A%, 0.08A% diastereomer at Asp), theoretical yield 84%.

Elementární analýza: C Η N O ^χ 41 57 S nalez. 65,38.Elemental analysis: C Η NO ^χ 41 57 S found. 65.38.

Η, N, C, 65,84,Η, N, C, 65.84,

Hmotnostní spektrometrie: M 747, M+l 748.MS: M 747, M + 1748.

vyp pozorturn off

Teplota tání: 101,6 °C (DSC).101.6 ° C (DSC).

^H NMR (S proti TMS, CDC1₃): 0,88, m (1H), 0,98, m (1H), 1,13 (2H), 1,23, m (6H), 1,4, m (1H), 1,62-1,76, m (8H), 1,86, qd (1H), 2,35, t (1H), 2,74, dd (2H), 3,25, dd (1H), 3,47, q (2H), 3,7, d (1H), 3,84, d (1H), 4,15, ds (2H), 4,5, qd (1H), 4,68, dt (1H), 5,07, d (1H), 5,14 bd (2H), 5,16, d (1H), 7,28-7,39, m (10H), 7,57, dd (1H).1 H NMR (δ vs. TMS, CDCl ₃ ): 0.88, m (1H), 0.98, m (1H), 1.13 (2H), 1.23, m (6H), 1.4, m (1H), 1.62-1.76, m (8H), 1.86, qd (1H), 2.35, t (1H), 2.74, dd (2H), 3.25, dd (1H), 3.47, q (2H), 3.7, d (1H), 3.84, d (1H), 4.15, ds (2H), 4.5, qd (1H), 4 68, dt (1H), 5.07, d (1H), 5.14 bd (2H), 5.16, d (1H), 7.28-7.39, m (10H), 7.57 dd (1 H).

¹³C NMR (í proti TMS, CDC1₃): [význačné píky] 66,93 (oba benzylové uhlíky), 127,78-128,64 (oba fenylové kruhy), 155,249, 170,00, 170,24, 171,69, 174,27, 175,21 (všechny karbonylové uhlíky). ¹³ C NMR (δ against TMS, CDCl ₃ ): [prominent peaks] 66.93 (both benzyl carbons), 127.78-128.64 (both phenyl rings), 155.249, 170.00, 170.24, 171, 69, 174.27, 175.21 (all carbonyl carbons).

Příklad 5Example 5

Příprava hygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyk1ohexyla1an inamidu (Krok 5 schématu II)Preparation of the hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexyl alanine (Step 5 of Scheme II)

Směs CBZ-PipBu.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂, formiatu amonného a 10% palladia na uhlíku ve směsi alkoholu a vody 20:1 [10:1 obj/hm proti CBZ-PipBu.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH_a] se připraví. Tato směs se zahřívá na 40 až 50 °C a míchá se tak dlouho, až HPLC ukazuje skončení reakce (1 až 2 h). Směs se ochladí na teplotu místnosti a zfiltruje pro odstranění katalyzátoru. Výsledný roztok se zahřívá na 40 až 50 °C a přidá se aceton (objem zhruba rovný objemu filtrovanému roztoku) a roztok se ponechá ochladit na • ·· ···· ·· 99 • · · 9 · «· 9 9 9 · 9Mixture of CBZ-PipBu.N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ , ammonium formate and 10% palladium on carbon in alcohol: water 20: 1 [10: 1 vol (wt) against CBZ-PipBu. N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH _a ] was prepared. The mixture was heated to 40-50 ° C and stirred until HPLC indicated completion of the reaction (1-2 h). The mixture was cooled to room temperature and filtered to remove the catalyst. Heat the resulting solution to 40-50 ° C and add acetone (volume roughly equal to the volume of the filtered solution) and allow the solution to cool to 99-9 ° C.

999 99 9 99·· • 9 ··· 9 · ·· ·· ·999 99 9 99 ··· 9 ··· 9 · ·· ·· ·

999 999 9 · 9 ·999 999 9 · 9 ·

999 99 99 ···· · · ·· až 40 °C. Směs se naočkuje N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl )-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidem a při teplotě místnosti (několik hodin) krystalizuje hygroskopická forma N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu.999 99 99 Up to 40 ° C. The mixture was seeded with N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide and at room temperature (several hours) the hygroscopic form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide crystallizes.

Tuhá látka se oddělí filtraci pod vrstvou dusíku a promyje acetonem. Dále se tuhá látka vysuší za sníženého tlaku a analyzuje na obsah hygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu (analýza vysokovýkonnou kapalinovou chromatografii hm/hm). Výtěžek je obecně větší než 85 %, čistota vyšší než 95A %.The solid was collected by filtration under a nitrogen pad and washed with acetone. Next, the solid is dried under reduced pressure and analyzed for the content of the hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide (HPLC analysis w / w). The yield is generally greater than 85%, purity greater than 95A%.

Při specifickém případu výše popsané přípravy s dodržením obecného způsobu kroku 5 a s použitím 5 g CBZ-PipBu.N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ se získá 3,1 g hygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu ve formě bílé tuhé látky (čistota 99,6A %) se stechiometrickým výtěžkem 89,4 %.In the specific case of the above-described preparation in complying with the general method Step 5, and 5 g of CBZ-PipBu.N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) _Cha-NH2 3.1 g of hygroscopic crystalline forms of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide as a white solid (purity 99, 6A%) with a stoichiometric yield of 89.4%.

Ostatní sloučeniny připravené podle příkladů 1 až 5 výše, avšak s použitím příslušných výchozích materiálů zahrnují následující:Other compounds prepared according to Examples 1 to 5 above, but using the appropriate starting materials, include the following:

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-valin,N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl] -N-ethylglycyl] aspartyl] -valine,

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-D-valin,N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -D-valine,

N-[N-[N-(3-piperid-4-yl)propanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-valin, • φ φ ·» φ φ φ φ · φ φφφφ φφ»» φφφ» φφφ φφ φ φφφφ φφφ φφφ φφφφ φφφ φφ φφ φφφφ φφ φφN- [N- [N- (3-piperid-4-yl) propanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -valine; φφφ φφ φφφφφφφ φφφφφφφφφφ

Ν-[Ν-[Ν-(5-piperid-4-yl)pentanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-valin,Ν- [Ν- [Ν- (5-piperid-4-yl) pentanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -valine,

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-L-a-cyklohexylflycin,N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -L-.alpha.-cyclohexylflycine,

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-norleucin,N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl] -N-ethylglycyl] aspartyl] -norleucine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-L-α-(2,2-dimethyl)prop-3-yl-glycin,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -L-α- (2,2-dimethyl) prop-3-yl-glycine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-L-B-dekahydronafth-l-yl-alaninN - [N - [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -L-β-decahydronaphth-1-yl-alanine

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-L-α-(2-cyklohexylethyl)glycin,N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl] -N-ethylglycyl] aspartyl] -L-α- (2-cyclohexylethyl) glycine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-fenylalanin,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] phenylalanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-L-B-naft-l-yl-alanin,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -L-β-naphth-1-yl-alanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-L-B-nafth-2-yl-alanin, ethylester Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl ]aspartyl]-L-B-cyklohexylalaninu,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -LB-naphth-2-yl-alanine ethyl ester Ν- [Ν - [N- (4-piperid) -4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -LB-cyclohexylalanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-L-B-c i s-dekahydronaft-2-yl-alanin, • ·· ·♦ · · · · ·# ·· · t · * » · · · t « • · · · · · ···· • · ··· · · · · · · · • · * · · · ···· ··· *« *· ···· ·· «· kyselina Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-a-aminocyklohexankarboxylováΝ- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -LB 15 -decahydronaphth-2-yl-alanine, · T t t t t t t t t t t t t t t t t t t t «« «« «« Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -α-aminocyclohexanecarboxylic acid

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-cyklohexyl-D-alanin,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-cyclohexyl-D-alanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-dekahydronaft-l-yl-alanin, ethylamid Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl ]aspartyl]-β-cyklohexylalaninu,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-decahydronaphth-1-yl-alanine, ethylamide Ν- [Ν- [N- (4-piperid) -4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-cyclohexylalanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-cyklooktylalanin,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-cyclooctylalanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-cyklohexylmethylalaninamid,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-cyclohexylmethylalaninamide,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-adamant-l-yl-alanin,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-adamant-1-yl-alanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-(1,2,3,4)-tetrahydronafth-5-yl-alanin,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β- (1,2,3,4) -tetrahydronaphth-5-yl-alanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-(4-cyklohexyl)cyklohexylalanin,Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β- (4-cyclohexyl) cyclohexylalanine,

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-cykloheptylalanin,N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl] -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-cycloheptylalanine,

Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-cyklooktylalaninamid, • · · · · ·· ·· ·· • · · · · ·· · · « · · • · · ·· · · · · · • · ··· · · < · · · · • · · · · · · · · · ··· ·« ·· ···· ·· ··Ν- [Ν- [N- (4-Piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-cyclooctyl-alaninamide, · · · · · · · · · · · «· · <<<<<<<·« «« «« «« <«« «« « ·

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-α-cyklohexylpropylglycin,N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl] -N-ethylglycyl] aspartyl] - [alpha] -cyclohexylpropylglycine,

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-β-cyklooktylmethylalanin,N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] aspartyl] -β-cyclooctylmethylalanine,

N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]aspartyl]-B-cyklopentylalanin a ethylester N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl ]aspartyl]-β-cyklohexylmethylalaninu.N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl] -N-ethylglycyl] aspartyl] -B-cyclopentylalanine and N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl] ethyl ester (N-ethylglycyl] aspartyl] -β-cyclohexylmethylalanine.

Příklad 6Example 6

Příprava 4-N-CBZ-piperidonuPreparation of 4-N-CBZ-piperidone

Směs 40 kg N-benzyloxykarbonyloxysukcinimidu a 26 kg (175 mol) 4-piperidon.HCI.H^O v 38,8 kg vody a 88 kg tetrahydrofuranu se míchá při 15 °C ± 5 °C do úplného rozpuštění (zhruba po dobu 15 min). NMM (22,8 kg) se přidá k míchané směsi (exotermní reakce) při udržování teploty při nebo pod 20 °C. Směs se míchá při 20 °C ± 5 °C po dobu 2,5 h a po této době ukazuje vysokovýkonná kapalinová chromatografie na ukončeni reakce. Směs se zředí 115,2 kg MTBE a 38,8 kg vody a míchá se při 20 °C ± 5 °C po dobu 5 min. Míchání se zastaví, vrstvy se ponechají oddělit a vodná (spodní) vrstva se odstraní do odpadu. Organická vrstva se promyje 2x 129,6 kg vody [míchejte po dobu 5 min, oddělte fáze, odstraňte do odpadu vodnou (spodní) fázi]. Organická vrstva se promyje 5,2 kg chloridu sodného v 46,8 kg vody [míchejte po dobu 5 min, oddělte fáze, odstraňte do odpadu vodnou (spodní) vrstvu]. Organická vrstva se zpracuje 11,5 kg síranu hořečnatého při míchání po dobu lha poté se směs zfiltruje. ReakčníA mixture of 40 kg of N-benzyloxycarbonyloxy-succinimide and 26 kg (175 mol) of 4-piperidone.HCl.H2O in 38.8 kg of water and 88 kg of tetrahydrofuran is stirred at 15 DEG C. ± 5 DEG C. until complete dissolution (about 15 minutes). min). NMM (22.8 kg) is added to the stirred mixture (exothermic reaction) while maintaining the temperature at or below 20 ° C. The mixture was stirred at 20 ° C ± 5 ° C for 2.5 h, after which time high performance liquid chromatography showed completion of the reaction. The mixture was diluted with 115.2 kg MTBE and 38.8 kg water and stirred at 20 ° C ± 5 ° C for 5 min. Stirring is stopped, the layers are allowed to separate and the aqueous (bottom) layer is discarded. Wash the organic layer with 2 x 129.6 kg of water [stir for 5 min, separate the phases, discard the aqueous (lower) phase]. Wash the organic layer with 5.2 kg of sodium chloride in 46.8 kg of water [stir for 5 min, separate the phases, discard the aqueous (lower) layer]. The organic layer was treated with 11.5 kg of magnesium sulfate with stirring for 1 h and then the mixture was filtered. Reaction

nádoba se promyje 8 kg MTBE (zfiltruje, filtrát se spojí s hlavním filtrátem, celkový obsah vody filtrátu: 0,52 %). Objem směsi se sníží na polovinu destilací při sníženém tlaku při teplotě 30 °C. Vakuum se nahradí atmosférou vodíku a zbytek se ochladí na 20 °C (obsah vody zbytku v nádobě: 0,43 %). Zbytek se zředí 57,6 kg MTBE, poté se objem směsi opět sníží o polovinu destilací za sníženého tlaku při 30 ^CTC. Vakuum se nahradí atmosférou dusíku a směs se ochladí na 20 °C (obsah vody zbytku v nádobě: 0,25 %). To se opakuje ještě 5x. Konečný zbytek v nádobě se zředí 28,8 kg MTBE a míchá po dobu 5 min a poté se zjišťuje obsah vody a obsah 4-N-CBZ-piperidonu (voda: 0,05 %, 4-N-CBZ-piperidon rozbor hm/hm: 22,66 hmotnostních procent, 35,36 kg, 155 mol, stechiometrický výtěžek 88,6 %).rinse the vessel with 8 kg of MTBE (filter, combine filtrate with main filtrate, total filtrate water content: 0.52%). The volume of the mixture was reduced by half by distillation under reduced pressure at 30 ° C. Replace the vacuum with a hydrogen atmosphere and cool the residue to 20 ° C (water content of the residue in the vessel: 0.43%). The residue was diluted with 57.6 kg of MTBE, then mixture volume is again reduced by half by distillation under reduced pressure at 30 DEG C. ^CT vacuum released with nitrogen and the mixture was cooled to 20 ° C (water content of the residue in the vessel: 0.25% ). This is repeated 5 more times. The final residue in the vessel was diluted with 28.8 kg MTBE and stirred for 5 min before the water content and 4-N-CBZ-piperidone content (water: 0.05%, 4-N-CBZ-piperidone assay wt / wt) were determined. wt: 22.66 weight percent, 35.36 kg, 155 mol, stoichiometric yield 88.6%).

Příklad 7Example 7

Příprava PipBuPreparation of PipBu

Za podmínek promývání dusíkem a míchání se připraví roztok 53,5 kg 3-karboxypropyltrifenylfosfoniumbromidu v 230,1 kg 1,2-dimethoxyethanu. Během 35 min se přidává kalium-terc.butoxid/tetrahydrofuran (20 hmotnostních procent, 141,8 kg roztoku) při teplotě 24 až 28 °C. Směs se míchá při této teplotě po dobu 0,5 h a po této době ukazuje vysokovýkonná kapalinová chromatografie na ukončení reakce. Míchaná směs se ochladí na 10 °C ± 2 °C, poté se ke směsi přidá 96,45 kg (titr: 1,15 M) 4-CBZ-piperidonu v MTBE během 40 min, takže teplota směsi zůstává při 12 °C ± 2 °C. Směs se míchá při této teplotě po dobu 10 min, poté se zahřívá na 20 °C + 2 °C a míchá při této teplotě po dobu 2 h. K míchané směsi se přidá roztok 22,5 kg koncentrované vodné kyseliny chlorovodíkové ve 245,6 kg vody tak, aby se směs udržovalaA solution of 53.5 kg of 3-carboxypropyltriphenylphosphonium bromide in 230.1 kg of 1,2-dimethoxyethane was prepared under nitrogen purging and stirring conditions. Potassium tert-butoxide / tetrahydrofuran (20 weight percent, 141.8 kg of solution) was added over 35 min at 24-28 ° C. The mixture was stirred at this temperature for 0.5 h, after which time high performance liquid chromatography showed completion of the reaction. The stirred mixture is cooled to 10 ° C ± 2 ° C, then 96.45 kg (titer: 1.15 M) of 4-CBZ-piperidone in MTBE is added to the mixture over 40 min so that the temperature of the mixture remains at 12 ° C ± Noc: 4 ° C. The mixture was stirred at this temperature for 10 min, then heated to 20 ° C + 2 ° C and stirred at this temperature for 2 h. To the stirred mixture was added a solution of 22.5 kg of concentrated aqueous hydrochloric acid in 245.6 kg water to maintain the mixture

• 9 9 9 • 9 9 9 99 ♦ 99 ♦ • 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • • 9 9 1 1 • 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 « « 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 99 9 9 9 9

při teplotě 20 °C ± 2 °C, konečné pH je 0,5. Směs se extrahuje za míchání 214,0 kg methyl-terc.butyletheru. Míchání se zastaví, vyčká se oddělení fází a vodná vrstva (spodní) se odstraní do odpadu. Organická fáze se promyje 133,75 kg vody [míchejte po dobu 5 min, oddělte, odstraňte do odpadu vodnou (spodní) vrstvu], poté 10,7 kg 50% roztoku hydroxidu sodného ve 126,8 kg vody [míchejte po dobu 10 min, oddělte vrstvy, odstraňte do odpadu organickou (svrchní) vrstvu]. Vodná vrstva se promyje 2x 123,05 kg ethylacetátu [míchejte po dobu 5 min, oddělte vrstvy, odstraňte do odpadu organickou (svrchní) vrstvu]. K míchané vodné vrstvě se přidá 13,1 kg koncentrované vodné kyseliny chlorovodíkové do dosažení pH 2,5 až 3,5 (konečné pH 2,82) a směs se extrahuje 123,05 kg ethylacetátu [míchejte po dobu 5 min, oddělte vrstvy, odstraňte do odpadu vodnou (spodní) vrstvu). Ethylacetatový roztok se promyje 133,75 kg vody [míchejte po dobu 5 min, oddělte vrstvy, odstraňte do odpadu vodnou (spodní) vrstvu], poté analyzujte (hm/hm) na obsah CBZ-PipBuen [celková hmotnost: 194,86 kg, 17,05 % CBZ-PipBuen [(33,22 kg, 108 mol) stechiometrický výtěžek 87,9 %].at 20 ° C ± 2 ° C, the final pH is 0.5. The mixture is extracted with stirring 214.0 kg of methyl tert-butyl ether. Stirring is stopped, phase separation is waited and the aqueous (bottom) layer is discarded. The organic phase is washed with 133.75 kg of water [stir for 5 min, separate, discard the aqueous (bottom) layer), then 10.7 kg of 50% sodium hydroxide solution in 126.8 kg of water [stir for 10 min , separate the layers, discard the organic (top) layer in the waste]. The aqueous layer was washed with 2 x 123.05 kg of ethyl acetate [stir for 5 min, separate the layers, discard the organic (top) layer]. To the stirred aqueous layer was added 13.1 kg of concentrated aqueous hydrochloric acid to pH 2.5 to 3.5 (final pH 2.82) and the mixture was extracted with 123.05 kg of ethyl acetate [stir for 5 min, separate the layers, remove the aqueous (bottom) layer into the waste). The ethyl acetate solution is washed with 133.75 kg of water [stir for 5 min, separate the layers, discard the aqueous (bottom) layer], then analyze (w / w) for CBZ-PipBuen content [total weight: 194.86 kg, 17.05% CBZ-PipBuen [(33.22 kg, 108 mol) stoichiometric yield 87.9%].

Ethylacetatový roztok PipBuen spolu s 6,6 kg 5% palladia na uhlíku (50 hmotnostních procent vody) se naplní za míchání do tlakové nádoby z nerezivějící oceli, poté se směs zahřeje na 55 °C ± 2 °C. Přidá se formiat draselný (38,2 kg) rozpuštěný v 66,4 kg vody tak, aby teplota reakční směsi zůstávala na 55 °C ± 2 °C (zhruba v průběhu 30 min). Směs se míchá při 55 °C ± 2 °C po dobu 2 h, což je doba, po které je reakce ukončena (zjištění na základě vysokovýkonné kapalinové chromatografie). Do reakční nádoby se přidá 6,6 kg celitu a 33,2 kg vody, směs se míchá a poté zfiltruje. Reakční nádoba se promyje 33,2 kg vody (zfiltruje a přidá se do hlavního filtrátu). Filtrát se umístí do nové nádoby,The PipBuen ethyl acetate solution together with 6.6 kg of 5% palladium on carbon (50 weight percent water) are charged with stirring to a stainless steel pressure vessel, then heated to 55 ± 2 ° C. Potassium formate (38.2 kg) dissolved in 66.4 kg of water was added so that the temperature of the reaction mixture remained at 55 ° C ± 2 ° C (about 30 min). The mixture is stirred at 55 ° C ± 2 ° C for 2 h, which is the time the reaction is complete (as determined by HPLC). 6.6 kg of Celite and 33.2 kg of water were added to the reaction vessel, stirred and then filtered. The reaction vessel was washed with 33.2 kg of water (filtered and added to the main filtrate). Place the filtrate in a new container,

9 9 9 9 9 · 9 • 9 9 9 9 9 9 ·· 9999 99 99 ochladí na 20 až 25 °C, vyčká se do oddělení vrstev a organická vrstva se odstraní do odpadu. Vodná vrstva se okyselí 52,1 kg koncentrované vodné kyseliny chlorovodíkové na pH 2 až 3 (konečné pH 2,82), poté se extrahuje 4x 129,5 kg methylenchloridu [míchejte po dobu 5 min, oddělte vrstvy, odstraňte do odpadu organickou (spodní) vrstvu]. Vodná fáze se upraví na pH 6,1 přídavkem za míchání 17,85 kg 50% vodného hydroxidu sodného. Směs se zfiltruje s obdržením 224 kg roztoku obsahujícího 17,6 kg (103 mol) 4-(3¹-karboxypropyl)piperidinu.9 9 9 9 9 · 9 • 9 9 9 9 9 9 ·· 9999 99 99 to cool to 20 to 25 ° C, wait for layer separation and remove the organic layer for waste. The aqueous layer is acidified with 52.1 kg of concentrated aqueous hydrochloric acid to pH 2-3 (final pH 2.82), then extracted 4 x 129.5 kg of methylene chloride [stir for 5 min, separate the layers, discard with organic (bottom). ) layer]. The aqueous phase was adjusted to pH 6.1 by addition of stirring with 17.85 kg of 50% aqueous sodium hydroxide. The mixture was filtered to give 224 kg of a solution containing 17.6 kg (103 mol) of 4- (3 ¹ carboxypropyl) piperidine.

Příklad 8Example 8

Příprava CBZ-PipBuPreparation of CBZ-PipB

224 kg roztoku 4-(3'-karboxypropyl)piperidinu ve vodném hydroxidu sodném se spojí s 55,3 kg tetrahydrofuranu a směs se ochladí za míchání na 8 °C ± 2 °C. Přidá se NMM (20,9 kg) při udržování teploty menší než 10 °C. Po přidání se teplota upraví na 8 °C ± 2 °C, poté se přidá 25,7 kg l-(benzyloxokarbonyl)sukcinimidu rozpuštěného ve 49,8 kg tetrahydrofuranu v průběhu 1 h při udržování teploty na méně než 15 °C. Reakční směs se ukončí (kontrola analytickou vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií) po 3 h při 10 až 15 °C. Přidá se koncentrovaná vodná kyselina chlorovodíková (29,9 kg) pro úpravu pH na 2,5 až 3,5 (konečné pH 3,3) a poté se přidá 61,4 kg MTBE a směs se míchá po dobu 5 min. Míchání se ukončí, vyčká se do oddělení vrstev a vodná (spodní) vrstva se oddělí (odpad). Vrstva MTBE se promyje třemi podíly 83,1 kg vody (10 min, poté 5 min a 5 min míchání), vodná vrstva se ponechá oddělit a odstraní se (odpad) v každém případě. Roztok 8,3 kg 50% vodného hydroxidu sodného v 95,7 kg vody se přidá bez míchání, po skončení přidává» ·· · 9 • •9 ·· • 9 ···· ní se směs smíchá po dobu zhruba 5 min. Míchání se ukončí, vyčká se do oddělení fází a organická (vrchní) fáze se oddělí a odloží do odpadu. Vodná vrstva se vrátí do reakční nádoby a extrahuje 2x 38,4 kg methyl-terc.butyletheru [míchání 5 min, oddělení vrstev, odstranění organické (vrchní) vrstvy do odpadu]. Tento krok se opakuje s použitím 18,5 kg methyl-terč.butyletheru. Vodná vrstva se vrátí do reakční nádoby, okyselí na pH 2,5 až 3,5 (konečné pH 3,37) 9,9 kg koncentrované vodné kyseliny chlorovodíkové. Směs se extrahuje 76,4 kg methyl-terč.butyletheru [míchání 5 min, oddělení vrstev, spodní (vodná) vrstva se oddělí do odpadu]. Organická vrstva se promyje (5 min míchání) roztokem 1,1 kg hydrogenuhličitanů sodného ve 12,4 kg vody [míchání 5 min, oddělení vrstev, odstranění vodné (spodní) vrstvy do odpadu], poté 41,5 kg vody (míchání 5 min, oddělení vrstev, odstranění vodné (spodní) vrstvy do odpadu]. Reakční nádoba se umístí pod snížený tlak a těkavá rozpouštědla se odstraňují při 55 °C do skončení proudu destilátu. Přidá se toluen (32,4 kg) a směs se destiluje za atmosferického tlaku do ukončení proudu destilátu, zatímco teplota vsádky stoupá na 90 až 95 °C. Poté se směs ochladí na 30 až 35 °C, do reakční nádoby se přidá heptan (56,85 kg) (dvě fáze), směs se zahřívá na 90 až 95 °C (jedna fáze) potom se znovu ochladí na 38 až 42 °C. Naočkují se krystaly CBZ-PipBu a produkt krystalizuje ze směsi v průběhu 1 h. Pevná látka se oddělí filtrací a promyje 19,35 kg směsi toluen/heptan 1:2 a poté 33,4 kg heptanu. Filtrační koláč se vysuší ve vakuu při 40 °C (do ztráty sušením 0,13 %) s obdržením 22,4 kg (72,96 mol, stechiometrický výtěžek z 4-piperidonu 42 %) CBZ-PipBu.224 kg of a solution of 4- (3'-carboxypropyl) piperidine in aqueous sodium hydroxide was combined with 55.3 kg of tetrahydrofuran and the mixture was cooled to 8 ° C ± 2 ° C with stirring. NMM (20.9 kg) is added while maintaining a temperature of less than 10 ° C. After the addition, the temperature is adjusted to 8 ° C ± 2 ° C, then 25.7 kg of 1- (benzyloxycarbonyl) succinimide dissolved in 49.8 kg of tetrahydrofuran is added over 1 hour while maintaining the temperature at less than 15 ° C. The reaction mixture was terminated (analytical HPLC) for 3 h at 10-15 ° C. Concentrated aqueous hydrochloric acid (29.9 kg) was added to adjust the pH to 2.5-3.5 (final pH 3.3), then 61.4 kg MTBE was added and the mixture was stirred for 5 min. Stirring is terminated, waiting for layer separation and the aqueous (bottom) layer separated (waste). The MTBE layer was washed with three portions of 83.1 kg water (10 min, then 5 min and 5 min stirring), the aqueous layer was allowed to separate and discarded (waste) in each case. A solution of 8.3 kg of 50% aqueous sodium hydroxide in 95.7 kg of water is added without stirring, after completion the mixture is mixed for about 5 min. Stirring is terminated, waiting for phase separation and the organic (top) phase is separated and discarded. The aqueous layer is returned to the reaction vessel and extracted with 2 x 38.4 kg of methyl tert-butyl ether [stirring for 5 min, separating the layers, removing the organic (top) layer to waste]. This step was repeated using 18.5 kg of methyl tert-butyl ether. The aqueous layer is returned to the reaction vessel, acidified to pH 2.5-3.5 (final pH 3.37) with 9.9 kg of concentrated aqueous hydrochloric acid. The mixture was extracted with 76.4 kg of methyl tert-butyl ether [stirring for 5 min, separation of layers, bottom (aqueous) layer separated to waste]. The organic layer was washed (5 min stirring) with a solution of 1.1 kg of sodium bicarbonate in 12.4 kg of water [stirring for 5 min, separating the layers, removing the aqueous (bottom) layer to waste], then 41.5 kg of water (stirring for 5 min The reaction vessel was placed under reduced pressure and the volatile solvents were removed at 55 ° C until the distillate stream was complete, toluene (32.4 kg) was added and the mixture was distilled at atmospheric pressure. The mixture was cooled to 30-35 ° C, heptane (56.85 kg) was added to the reaction vessel (two phases), and the mixture was heated to 90-95 ° C. to 95 [deg.] C. (one phase) then recooled to 38 to 42 [deg.] C. CBZ-PipBu crystals were seeded and the product crystallized from the mixture over 1 h. The solid was collected by filtration and washed with 19.35 kg toluene / heptane. 1: 2 and then 33.4 kg of heptane The mixture was dried under vacuum at 40 ° C (until loss by drying 0.13%) to give 22.4 kg (72.96 mol, stoichiometric yield from 4-piperidone 42%) of CBZ-PipBu.

Příklad 9Example 9

Příprava CBZ-PipBuenuPreparation of CBZ-PipBuen

K suspenzi 82 g 3-karboxypropyl-trifenylfosfoniumbromidu ve 407 ml 1,2-diethoxyethanu se při 14 °C přidává v průběhu 25 min 220 g 20% (hm) kalium terc.butoxid v tetrahydrofuranu při udržování teploty reakční směsi 24 až 28 °C. Směs se míchá po dobu 1 h, ochladí na 10 °C, poté se přidává v průběhu 30 min roztok 52,5 g 4-N-CBZ-piperidonu ve 246 ml terc.butyl-methyletheru při pokračujícím chlazení. Po skončení přidávání se směs při teplotě 12 °C po dobu 10 min, poté se ohřeje na 20 “C a míchá se po dobu dalších 30 min. Reakční směs se zpracuje 410 ml 1 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové po dobu 10 min, zředí 328 ml terc.butyl-methyletheru a poté se oddělí fáze. Organická fáze se promyje 205 ml vody, poté 210 ml 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného. Vrstva hydroxidu sodného, která obsahuje produkt, se sbírá odděleně, promyje 3 podíly po 189 g ethylacetátu, okyselí na pH 3,48 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a poté se extrahuje 189 ml ethylacetátu. Ethylacetátová vrstva se oddělí, promyje 211 ml vody a poté se suší po dobu 30 min 10 g síranu horečnatého, zfiltruje a odpaří ve vakuu. Olejovitý zbytek (50,7 g) se krystalizuje ze směsi toluen/heptan s obdržením celkového množství 29,46 g CBZ-PipBuenu (výtěžek 50,9 %, čistota zhruba 95A %).To a suspension of 82 g of 3-carboxypropyl-triphenylphosphonium bromide in 407 ml of 1,2-diethoxyethane at 14 ° C was added 220 g of 20% (w / w) potassium tert-butoxide in tetrahydrofuran over 25 minutes while maintaining the reaction mixture temperature 24-24 ° C. . The mixture was stirred for 1 h, cooled to 10 ° C, then a solution of 52.5 g of 4-N-CBZ-piperidone in 246 mL of tert-butyl methyl ether was added over 30 min with continued cooling. After the addition was complete, the mixture was stirred at 12 ° C for 10 min, then warmed to 20 ° C and stirred for an additional 30 min. The reaction mixture was treated with 1 N aqueous hydrochloric acid (410 mL) for 10 min, diluted with tert-butyl methyl ether (328 mL), and then the phases were separated. The organic phase is washed with 205 ml of water, then 210 ml of 1 N aqueous sodium hydroxide solution. The sodium hydroxide layer containing the product was collected separately, washed with 3 x 189 g of ethyl acetate, acidified to pH 3.48 with concentrated hydrochloric acid, and then extracted with 189 ml of ethyl acetate. The ethyl acetate layer was separated, washed with 211 mL of water, and then dried for 30 min with 10 g magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuo. The oily residue (50.7 g) was crystallized from toluene / heptane to give a total amount of 29.46 g CBZ-PipBuen (yield 50.9%, purity about 95A%).

Hmotnostní spektrometrie: M 303, M+l 304.MS: M 303, M + 1 304.

vyp ^XH NMR: (S proti TMS, CDC1₃) 2,2, t (2H), 2,25, t (2H), 2,35, m (4H), 3,45, m (4H), 5,15, s (2H), 5,2, m (1H), 7,33, 2 (5H).OFF ^X H NMR: (S against TMS, CDC1 ₃₎ 2.2, t (2H), 2.25 t (2H), 2.35 m (4H), 3.45 m (4H), 5 15, s (2H), 5.2, m (1H), 7.33, 2 (5H).

^X3C NMR (6 proti TMS, CDCl_a) 22,43, 28,2, 34,26, ^X3 C NMR (6 against TMS, CDCl _a) 22.43, 28.2, 34.26,

35,66, 44,88, 45,74, 67,20, 122,02, 127,83, 127,95, 128,45, 128,69, 128,90, 136,17, 136,72, 155,34, 178,39.35.66, 44.88, 45.74, 67.20, 122.02, 127.83, 127.95, 128.45, 128.69, 128.90, 136.17, 136.72, 155, 34, 178.39.

• ·· ·· ·· ·· ·· • · · · · · · · · * · · • · · ·· · · · · · • · · · · · ···· ··· ·· «* ···« ·* ··• ···························· ··· «· * ··

Příklad 10Example 10

Příprava CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH^ (Alternativní krok 4 schématu II)Preparation of CBZ-PipBuen-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH4 (Alternative Step 4 of Scheme II)

CBZ-PipBuen (70 g, 0,23 mol) a dimethylformamid (230 ml) se přidá do plášťové baňky o obsahu 1 litr a míchá se při chlazení na 0 °C, poté se najednou přidá TBTU (74,9 g, 0,23 mol). Teplota se udržuje na 0 °C a započne přidávání diisopropylethylaminu (61,9 g, 0,61 mol). Po 45 min se přidá TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (138,7 g, 0,24 mol) ve formě roztoku v dimethylformamidu (230 ml). pH se upraví na 7 až 8 přídavkem diisopropylethylaminu (45 ml) a směs se ponechá ohřát na teplotu okolí. Po 2 h je reakce ukončena (ověřeno analýzou pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie). Směs se nalije do vody (2,5 litru) a extrahuje ethylacetatem (1 litr). Vodná fáze se zpětně extrahuje ethylacetatem (0,3 litru). Organické vrstvy se spojí, promyjí vodným roztokem kyseliny citrónové (5 hmotnostních procent, 2x 1 litr), promyjí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (5 hmotnostních procent, 2x 1 litr) a promyjí vodou (2 litry) . Ethylacetatová vrstva se přenese do baňky o obsahu 2 litry a přidává se heptan (500 ml) při míchání pro ovlivnění krystalizace. Pevná látka se získá odsáváním na Buchnerově nálevce, promyje směsí ethylacetat/heptan (2:1 obj/obj, 1 litr) a vysuší do konstantní hmotnosti s obdržením CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (143,2 g,CBZ-PipBuen (70 g, 0.23 mol) and dimethylformamide (230 mL) were added to a 1 L jacketed flask and stirred while cooling to 0 ° C, then TBTU (74.9 g, 0, 23 mol). The temperature is maintained at 0 ° C and diisopropylethylamine (61.9 g, 0.61 mol) is added. After 45 min, TFA-N (Et) -Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ (138.7 g, 0.24 mol) was added as a solution in dimethylformamide (230 mL). . The pH was adjusted to 7-8 by addition of diisopropylethylamine (45 mL) and allowed to warm to ambient temperature. After 2 h, the reaction is complete (verified by HPLC analysis). The mixture was poured into water (2.5 L) and extracted with ethyl acetate (1 L). The aqueous phase was back extracted with ethyl acetate (0.3 L). The organic layers were combined, washed with aqueous citric acid (5 weight percent, 2 x 1 liter), washed with aqueous sodium bicarbonate solution (5 weight percent, 2 x 1 liter), and washed with water (2 L). The ethyl acetate layer was transferred to a 2 L flask and heptane (500 mL) was added with stirring to effect crystallization. The solid was collected by suction on a Buchner funnel, washed with ethyl acetate / heptane (2: 1 v / v, 1 liter) and dried to constant weight to give CBZ-PipBuen-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ (143.2 g,

0,19 mol, výtěžek 83 %).0.19 mol, yield 83%).

Elementární analýza: C Η N 0 , ·* 4 X 55 5 *7 nalez. 65,53, Η, N.Elemental analysis: C Η N 0, · * 4 X 55 5 * 7 found. 65.53, Η, N.

C: vypočteno 66,02 • ·> ·· ·· ·· ·· • · · · 9 9 9 9 9 9 9 9C: calculated 66.02 • 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 « · · 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9

999 99 ·· «··· ·· 99995 99 ·· «··· ·· 99

Hmotnostní spektrometrie: M 745,91, M+l 746.MS: M 745.91, M + 1746.

^VYP pozor· ^LH NMR (S proti TMS, CDC1 ): 0,86, qd (1H), 0,98, qd ^The YP careful ^L · H nmr (against TMS, CDC1): 0.86 qd (1H), 0.98, qd

(1H) , (1H), 1,16, 1,16, t t (2H), 1,24, dt (2H), 1.24, dt (6H), (6H), 1,37, 1,37, m (1H), m (lH), m (4H) m (4H) , 1,86 , 1.86 qd (1H), 2,2 bd (4H) qd (1H), 2.2 bd (4H) , 2,35 , 2.35 , m (1H) m (1H) (2H) , (2H), 2,74, 2,74, dd dd : (1H), 3,07, m : (1H), 3.07, m (4H), (4H), 3,52, 3,52, d (1H), d (1 H), (1H), (1H), 4,12, 4,12, q q (1H), 4,49, qd (1H), 4.49, qd (1H), (1H), 4,68, 4,68, dt (1H) dt (1H) (1H), (1H), 5,14, 5.14, s with (1H), 5,16, d (1H) 5.16 d (1H) , (1H), 5,22, 5,22, t (2H), t (2H), (1H), (1H), 7,28, 7,28, d d (1H), 7,26, s (1H), 7.26, s (5H) , (5H), 7,35, 7.35, s (5H), s (5H), (1H). (1H). ^X3C NMR (S proti TMS, ^{X 3} C NMR (δ vs. TMS, CDC1 3 CDC1 3 ): 14, ): 14, 15, 22,6 15, 22.6 25,61, 25,61, 26,03 26.03 r r 26,45, 28,20, 26.45, 28.20, 31,71, 31,71, 32,89 32.89 , 33,80, , 33,80, 34,00, 34,00, 35,63 35.63 r r 38,37, 44,79, 38.37, 44.79, 45,13, 45,13, 45,65 45.65 , 50,23, , 50,23, 60,40, 60,40, 66,87 66.87 f F 67,06, 76,50, 67.06 76.50 77,13, 77,13, 77,77 77.77 , 122,46 , 122.46

7,56, d7.56, d

127,80-128,60, 135,15, 155,19, 170,11, 170,20, 171,61, 173,76, 175,35.127.80-128.60, 135.15, 155.19, 170.11, 170.20, 171.61, 173.76, 175.35.

Příklady 11Examples 11

Příprava hygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu (Alternativní krok 5 schématu II)Preparation of the hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide (Alternative Step 5 of Scheme II)

CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (140 g, 0,19 mol), formiat amonný (61 g, 0,96 mol) a 10% palladium na uhlíku (50 % vlhkosti, typ degussa, 28 g) se přidá do plášťové baňky o obsahu 5 litrů. Přidá se ethylalkohol (200°, 1260 ml), isopropanol (70 ml) a voda (deionizovaná, 70 g). Tato směs se zahřívá na 40 až 50 °C a míchá se • 9CBZ-PipBuen-N (Et) -Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ (140 g, 0.19 mol), ammonium formate (61 g, 0.96 mol) and 10 % palladium on carbon (50% moisture, degussa type, 28 g) is added to a 5 liter jacketed flask. Ethanol (200 °, 1260 mL), isopropanol (70 mL) and water (deionized, 70 g) were added. The mixture was heated to 40-50 ° C and stirred

99 9· 99 9«99 9 · 99 9 «

999 9 9 99 9 9 99 ·999 9 9 99 9 9 99 ·

999 99 9 9999999 99 9,999

999 9 9 99 99 9999 99 9 99 99 9

999 999 999· • 99 99 ·· 9999 99 VI tak dlouho, až vysokovýkonná kapalinová chromatografie ukazuje na ukončení reakce (5 h). Směs se ochladí na teplotu místnosti a zfiltruje pro odstraněni katalyzátoru. Výsledný roztok se zahřívá na 40 až 50 °C a přidá se aceton (zhruba stejný objem proti filtrovanému roztoku) a roztok se ponechá ochladit na 35 až 40 °C. Směs se naočkuje N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycylJ — (L)-aspartyl] - (L)-β-cyklohexylalaninamidem a z ní krystalizuje hygroskopická forma N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklo- hexylalaninamidu při ochlazení na teplotu místnosti (několik h). Pevná látka se oddělí sáním na Buchnerově nálevce pod vrstvou dusíku, koláč se promyje acetonem a vysuší na vzduchu do konstantní hmotnosti s obdržením N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-Ν-ethylglycyl ]-(L) -aspartyl ]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu (84,3 g,999 999 999 · 99 99 ·· 9999 99 VI until high performance liquid chromatography indicates completion of the reaction (5 h). The mixture was cooled to room temperature and filtered to remove the catalyst. Heat the resulting solution to 40-50 ° C and add acetone (about equal volume against the filtered solution) and allow the solution to cool to 35-40 ° C. The mixture was seeded with N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide and the hygroscopic form of N- [N] crystallized therefrom. - [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide upon cooling to room temperature (several hours). The solid was collected by suction on a Buchner funnel under a nitrogen blanket, the cake was washed with acetone and air dried to constant weight to give N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -Ν-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide (84.3 g,

0,16 mol, výtěžek 84,8 %, větší než 95A %).0.16 mol, yield 84.8%, greater than 95A%).

Příklad 12Example 12

Zřetězená příprava TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (Alternativní kroky 1 až 3 schématu II)Chained Preparation of TFA-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ (Alternative Steps 1 to 3 of Scheme II)

Baňka o obsahu 500 ml s připojeným čidlem teploty se naplní BOC-N(Et)-Gly (20,3 g, 0,1 mol), N-hydroxysukcinimidem (11,5 g, 0,1 mol) a dichlormethanem (200 ml). Směs se míchá při mírné rychlosti a do výsledného roztoku se přidá dicyklohexylkarbodiimid (20,6 g, 0,1 mol) v jednom podílu ve formě tuhé látky. Tento roztok se míchá po dobu 1 h, přičemž se zaznamenává mírný exotermní průběh (teplota vzrůstá z 20 ^OC na 28 °C) a vysráží se DCU. Výsledná suspenze se filtruje ve vakuu s použitím Buchnerovy nálevky a filtračního papíru Whatman 1. Koláč se promyje dichlormethanem (2 x 25 ml).A 500 mL flask with attached temperature sensor was charged with BOC-N (Et) -Gly (20.3 g, 0.1 mol), N-hydroxysuccinimide (11.5 g, 0.1 mol) and dichloromethane (200 mL). ). The mixture was stirred at moderate speed and dicyclohexylcarbodiimide (20.6 g, 0.1 mol) was added in one portion as a solid to the resulting solution. This solution was stirred for 1 h, recording the mild exothermic (temperature rise from 20 ° ^C to 28 ° C) and DCU precipitates. The resulting suspension was vacuum filtered using a Buchner funnel and Whatman 1 filter paper. The cake was washed with dichloromethane (2 x 25 mL).

«· ·«· ·

Filtráty se vrátí do původní baňky o obsahu 500 ml a poté se postupně přidává (L)Asp(OBzl) (22,3 g, 0,1 mol), NMM (33,8 ml, 0,3 mol) a dimethylformamid (80 g, 1,01 mol). Po míchání po dobu 2 h při teplotě místnosti je vytváření BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl) ukončeno (sledování pomocí vysokovýkonné kapalinové chromatografie). Reakční směs se vylije do extrakční nálevky obsahující ledovou vodu (100 ml) Směs se okyselí kyselinou chlorovodíkovou (36%, 25 ml) do dosažení pH 1. Vrstvy se rozdělí a dichlormethanová vrstva se promyje ledovou vodou (100 ml) a fáze se rozdělí (pH vodné fáze 3 až 4). Dichlormethanová vrstva se vrátí do původní baňky o obsahu 500 ml, která se postupně naplní NH₂-(L)-Cha-NH₂ (17 g, 0,1 mol), N-hydroxysukcinimidem (11,5 g, 0,1 mol) a dicyklohexylkarbodiimidem (20,6 g, 0,1 mol) v jednom podílu, každá látka v tuhé formě. Po míchání po dobu 2 h při teplotě místnosti je vytváření BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ ukončeno (sledování pomocí vysokovýkonné kapalinové chromatografie) a DCU se odfiltruje ve vakuu s použitím Buchnerovy nálevky s filtračním papírem Whatman 1. Filtrační koláč se promyje dichlormethanem (2 x 25 ml). Filtrát se přenese do extrakční nálevky a promyje deionizovanou vodou (200 ml) obsahující N-methylmorfolin (15 ml, pH 8 až 9). Fáze se rozdělí a dichlormethanová vrstva se opět promyje vodou (deionizovaná, 2 x 150 ml). Dichlormethanová fáze se promyje 150 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové (pH 1). Fáze se rozdělí a dichlormethanová vrstva se promyje deionizovanou vodou (200 ml, pH 3). Dichlormethanový roztok BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ se vrátí do čisté baňky o obsahu 500 ml a poté se přidá kyselina trifluoroctová (100 ml). Po míchání po dobu 2 h při teplotě místnosti je vytváření TFA.HN(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ ukončeno (sledování vysokovýkovýkonnou kapalinovou chromatografii). Reakční směs se destiluje ve vakuu pro odstraněni dichlor• «Ε • · methanu a většiny kyseliny trifluoroctové. Potom se přidá MTBE (500 ml) a směs se naočkuje pro uskutečnění krystalizace produktu. Směs se filtruje ve vakuu pomocí Buchnerovy nálevky s filtračním papírem Whatman 1. Filtrační koláč se promyje MTBE (2 x 25 ml) a vysuší na vzduchu s obdržením TFA.HN(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH₂ (46,8 g, výtěžek 81,5 %) ve formě bílé tuhé látky (čistota >97A %, <0,2A % diastereomeru D-Asp).The filtrates were returned to the original 500 mL flask, followed by the sequential addition of (L) Asp (OBzl) (22.3 g, 0.1 mol), NMM (33.8 mL, 0.3 mol) and dimethylformamide (80 mL). g, 1.01 mol). After stirring for 2 h at room temperature, the formation of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) is complete (monitoring by high performance liquid chromatography). The reaction mixture was poured into an extraction funnel containing ice water (100 mL). The mixture was acidified with hydrochloric acid (36%, 25 mL) until pH 1. The layers were separated and the dichloromethane layer was washed with ice water (100 mL) and the phases separated ( pH of the aqueous phase 3 to 4). The dichloromethane layer was returned to the original 500 mL flask, which was gradually charged with NH ₂ - (L) -Cha-NH ₂ (17 g, 0.1 mol), N-hydroxysuccinimide (11.5 g, 0.1 mol) ) and dicyclohexylcarbodiimide (20.6 g, 0.1 mol) in one portion, each in solid form. After stirring for 2 h at room temperature, the formation of BOC-N (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH _{2 is} complete (HPLC) and the DCU is filtered off under vacuum. using a Buchner funnel with Whatman filter paper 1. The filter cake was washed with dichloromethane (2 x 25 mL). The filtrate was transferred to an extraction funnel and washed with deionized water (200 mL) containing N-methylmorpholine (15 mL, pH 8-9). The phases were separated and the dichloromethane layer was washed again with water (deionized, 2 x 150 mL). The dichloromethane phase was washed with 150 ml of 1 N hydrochloric acid solution (pH 1). The phases were separated and the dichloromethane layer was washed with deionized water (200 mL, pH 3). Dichloromethane solution of BOC-N (Et) -Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH ₂ was returned to a clean 500 mL flask and then trifluoroacetic acid (100 mL) was added. After stirring for 2 h at room temperature, the formation of TFA.HN (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L) -Cha-NH _{2 was} complete (high performance liquid chromatography monitoring). The reaction mixture was distilled under vacuum to remove dichloromethane and most trifluoroacetic acid. MTBE (500 mL) was then added and the mixture seeded to crystallize the product. Filter the mixture in vacuo using a Buchner funnel with Whatman 1 filter paper. The filter cake was washed with MTBE (2 x 25 mL) and air dried to give TFA.HN (Et) Gly- (L) -Asp (OBzl) - (L 1 -Cha-NH ₂ (46.8 g, 81.5% yield) as a white solid (purity> 97A%, <0.2A% of D-Asp diastereomer).

Příklad 13Example 13

Příprava nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamiduPreparation of a non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide

Způsob AMethod A

Statická konverzeStatic conversion

Hygroskopická krystalická forma N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu (7,45 kg) se mele v kladivovém mlýnu. Výsledná tuhá látka, 7,35 kg se umístí do misky sušárny z nerezavějící oceli (90 x 28 cm) a ta se zakryje perforovanou hliníkovou fólií. Miska se potom uzavře ve vlhkostní komoře (LUNAIRE Humidity Cabinet model, č. modelu CEO 941W-3) a komora se udržuje uzavřená v průběhu konverzního procesu kromě odebírání vzorků pro analýzu. Komora se nastaví na 40 % relativní vlhkosti a 60 °C a udržuje se na těchto hodnotách po dobu 1 h. Poté se komora upraví na 80 % relativní vlhkosti a 60 °C a udržuje se při těchto hodnotách po dobu 12 h. Odebere se vzorek po 18 h při 80 % při relativní vlhkosti a 60 °C a ověří se rentgenovou práškovou difrakčníThe hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide (7.45 kg) is ground. in a hammer mill. The resulting solid, 7.35 kg, was placed in a stainless steel oven tray (90 x 28 cm) and covered with perforated aluminum foil. The dish is then sealed in a moisture chamber (LUNAIRE Humidity Cabinet model, model No. CEO 941W-3) and the chamber is kept closed during the conversion process in addition to sampling for analysis. The chamber is set at 40% relative humidity and 60 ° C and maintained at these values for 1 h. Then the chamber is adjusted to 80% relative humidity and 60 ° C and maintained at these values for 12 h. after 18 h at 80% RH and 60 ° C and verified by X-ray powder diffraction

4 · · 4 · · • · »4 4 4 4 4 4 • 9 • 9 • 4 0 • 4 0 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 · 4 · 4 · 4 4 · 4 4 4 « 4 4 « « 4 «4 4 · 4 · • · · • · · 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 44 4 4 44 4 4 4444 4 4444 <4 <4 4 4 4 4

analýzou pro zjištění konverze nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu. Vlhkostní komora se znovu uzavře a nastaví na 40 % relativní vlhkosti a 60 °C a udržuje se na těchto hodnotách po dobu 2 h. Komora se znovu nastaví na podmínky okolí, poté se miska vyjme z komory a nehygroskopická krystalická forma N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu se obdrží v množství 7,2 kg (výtěžek 96,6 %). Ověření konverze se provede na základě rentgenového práškového difrakčního grafu (obr. 1). Výsledky rentgenové práškové difrakce jsou též v tabulce jako hodnoty vzrůstajícího úhlu difrakce (2Θ), odpovídající interplanární vzdálenosti krystalu (d) v jednotkách nm, impulsů za s (Cps) a relativní intenzity vrcholu (%) (tabulka 1).analysis to determine the conversion of the non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide. The humidity chamber is resealed and maintained at 40% RH and 60 ° C for 2 h. The chamber is reset to ambient conditions, then the dish is removed from the chamber and the non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide is obtained in an amount of 7.2 kg (yield 96.6%). Verification of the conversion was performed on the basis of an X-ray powder diffraction pattern (FIG. 1). X-ray powder diffraction results are also shown in the table as increasing diffraction angle (2Θ) values, corresponding to the interplanar crystal distance (d) in nm, pulses per second (Cps), and relative peak intensity (%) (Table 1).

• * • 4 *4

• 44• 44

- 71 4 4 4 ι ::- 71 4 4 4

4 4 44 4444 44

IAND

Tabulka 1Table 1

-N- -N- 2Θ 2Θ ---d--- --- d --- ---Cps--- --- Cps --- — ·—’ ··“ ““ —“ - · - ’··" "" - " 1 1 5,065 5,065 1,74314 1.74314 86,00 86.00 5,82 5.82 2 2 6,323 6,323 1,39672 1,39672 248,00 248.00 16,78 16.78 3 3 7,518 7,518 1,17489 1.17489 221,00 221.00 14,95 14.95 4 4 8,163 8,163 1,08222 1.08222 496,00 496,00 33,56 33.56 5 5 8,780 8,780 1,00633 1,00633 155,00 155.00 10,49 10.49 6 6 10,383 10,383 0,85125 0.85125 218,00 218,00 14,75 14.75 7 7 11,351 11,351 0,77886 0.77886 112,00 112.00 7,58 7.58 8 8 12,596 12,596 0,70218 0.70218 999,00 999.00 67,59 67.59 9 9 13,858 13,858 0,63852 0.63852 316,00 316.00 21,38 21.38 10 10 15,191 15,191 0,58274 0.58274 1338,00 1338,00 90,53 90.53 11 11 16,476 16,476 0,53759 0.53759 481,00 481,00 32,54 32.54 12 12 16,745 16,745 0,52901 0.52901 556,00 556,00 37,62 37.62 13 13 17,980 17,980 0,49294 0.49294 679,00 679.00 45,95 45.95 14 14 18,572 18,572 0,47735 0.47735 1079,00 1079.00 73,00 73.00 15 15 Dec 18,799 18,799 0,47165 0.47165 1230,00 1230,00 83,22 83.22 16 16 19,147 19,147 0,46315 0.46315 1229,00 1229,00 83,15 83.15 17 17 19,619 19,619 0,45211 0.45211 1380,00 1380,00 93,37 93.37 18 18 20,200 20,200 0,43924 0.43924 1246,00 1246,00 84,30 84.30 19 19 Dec 20,466 20,466 0,43360 0.43360 1478,00 1478,00 100,00 100.00 20 20 May 20,870 20,870 0,42528 0.42528 1088,00 1088.00 73,61 73.61 21 21 21,625 21,625 0,41061 0.41061 584,00 584,00 39,51 39.51 22 22nd 22,088 22,088 0,40210 0.40210 891,00 891.00 60,28 60.28 23 23 22,840 22,840 0,38903 0.38903 613,00 613.00 41,47 41.47 24 24 23,947 23,947 0,37129 0.37129 597,00 597,00 40,39 40.39 25 25 24,569 24,569 0,36203 0.36203 680,00 680,00 46,01 46.01 26 26 25,608 25,608 0,34757 0.34757 506,00 506,00 34,24 34.24 27 27 Mar: 27,015 27,015 0,32978 0.32978 1100,00 1100,00 74,42 74.42 28 28 27,837 27,837 0,32022 0.32022 420,00 420,00 28,42 28.42 29 29 27,967 27,967 0,31877 0.31877 400,00 400.00 27,06 27.06 30 30 29,255 29,255 0,30502 0.30502 536,00 536,00 36,27 36.27 31 31 29,689 29,689 0,30066 0.30066 603,00 603,00 40,80 40.80 32 32 30,665 30,665 0,29130 0.29130 518,00 518,00 35,05 35.05 33 33 31,318 31,318 0,28538 0.28538 451,00 451,00 30,51 30.51 34 34 31,894 31,894 0,28036 0.28036 533,00 533,00 36,06 36.06 35 35 33,370 33,370 0,26829 0.26829 518,00 518,00 35,05 35.05 36 36 33,562 33,562 0,26679 0.26679 552,00 552,00 37,35 37.35 37 37 33,919 33,919 0,26407 0.26407 581,00 581.00 39,31 39.31 38 38 34,840 34,840 0,25730 0.25730 561,00 561.00 37,96 37.96 39 39 35,789 35,789 0,25069 0.25069 559,00 559.00 37,82 37.82 40 40 35,940 35,940 0,24967 0.24967 560,00 560,00 37,89 37.89 41 41 36,780 36,780 0,24416 0.24416 740,00 740.00 50,07 50.07 42 42 37,042 37,042 0,24249 0.24249 736,00 736.00 49,80 49.80 43 43 37,959 37,959 0,23684 0.23684 683,00 683.00 46,21 46.21 44 44 39,017 39,017 0,23066 0.23066 643,00 643.00 43,50 43.50

• · « • *• · «•

Způsob ΒMethod Β

Dynamické podmínkyDynamic conditions

a. Konverze formya. Form Conversion

Hygroskopická krystalická forma N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu (50 g) se umístí do kalibrovaného válce 400 ml (výška náplně 6 cm) na kruhový držák vybavený mechanickou míchačkou. Přístroj se umístí do komory s řízenou vlhkostí (LUNAIRE Humidity Cabinet, model č. CEO 941W-3). Míchání se nastaví na frekvenci otáčení 275 min^-1 a teplota a relativní vlhkost se upraví během 30 min na 60 °C a 40 %. Sloučenina se udržuje za těchto podmínek po dobu 1 h, poté se podmínky změní v průběhu 45 min na 80 % relativní vlhkosti/60 °C. Sloučenina se poté udržuje při těchto podmínkách po dobu 16 h před novým nastavením komory na 40 % relativní vlhkosti/60 °C a při těchto podmínkách se komora udržuje po dobu 3,25 h. Poté se umožní návrat sloučeniny k podmínkám okolí (výška náplně 4 cm), náplň se poté vyjme z válce s obdržením nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl ]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu (výtěžek >95 %). Ověření konverze se provede rentgenovou práškovou difrakčni analýzou (obr. 2). Výsledky rentgenové práškové difrakce jsou též v tabulce jako hodnoty rostoucího úhlu difrakce (2Θ), odpovídající interplanární vzdálenosti krystalu v jednotkách nm, četnosti impulsů za s (Cps) a relativní intenzity vrcholu (%) (tabulka 2) .The hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide (50 g) is placed in a calibrated 400 ml cylinders (6 cm fill height) per round holder equipped with a mechanical mixer. The instrument is placed in a humidity controlled chamber (LUNAIRE Humidity Cabinet, Model No. CEO 941W-3). Agitation was set at a speed of 275 min ^-1, and the temperature and relative humidity are adjusted over 30 min at 60 ° C and 40%. The compound is maintained under these conditions for 1 h, then the conditions are changed to 80% RH / 60 ° C over 45 min. The compound is then held under these conditions for 16 h before the chamber is reset to 40% RH / 60 ° C and the chamber is maintained for 3.25 h under these conditions. The compound is then allowed to return to ambient conditions (filling height 4). cm), the cartridge is then removed from the cylinder to give a non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) - β-cyclohexylalaninamide (yield> 95%). Verification of conversion was performed by X-ray powder diffraction analysis (Fig. 2). X-ray powder diffraction results are also shown in the table as increasing diffraction angle (2Θ) values, corresponding to the interplanar crystal distance in nm, pulse rate per second (Cps), and relative peak intensity (%) (Table 2).

i · · h e>i · · h e>

• « · · « I < · · « · » · • a · 9 · · •99 99 99 9999• “I” and “9” 99 99 99 9999

Tabulka 2Table 2

-N- -N- 2Θ 2Θ ____d ___ _d ---Cps--- --- Cps --- ---%--- ---% --- 1 1 5,186 5,186 1,70268 1,70268 196,00 196.00 8,43 8.43 2 2 6,371 6,371 1,38615 1,38615 722,00 722,00 31,07 31.07 3 3 7,570 7,570 1,16689 1.16689 516,00 516,00 22,20 22.20 4 4 8,232 8,232 1,07323 1.07323 1094,00 1094.00 47,07 47.07 5 5 8,817 8,817 1,00206 1,00206 257,00 257.00 11,06 11.06 6 6 10,428 10,428 0,84761 0.84761 365,00 365,00 15,71 15.71 7 7 11,377 11,377 0,77714 0.77714 129,00 129,00 5,55 5.55 8 8 11,600 11,600 0,76223 0.76223 117,00 117.00 5,55 5.55 9 9 12,667 12,667 0,69828 0.69828 1805,00 1805,00 77,67 77.67 10 10 13,913 13,913 0,63599 0.63599 551,00 551,00 23,71 23.71 11 11 14,398 14,398 0,61468 0.61468 178,00 178.00 7,66 7.66 12 12 15,226 15,226 0,5844 0.5844 2285,00 2285,00 98,32 98.32 13 13 16,538 16,538 0,53557 0.53557 861,00 861.00 37,05 37.05 14 14 16,773 16,773 0,52814 0.52814 929,00 929.00 39,97 39.97 15 15 Dec 18,019 18,019 0,49190 0.49190 1132,00 1132,00 48,71 48.71 16 16 18,672 18,672 0,47483 0.47483 1871,00 1871,00 80,51 80.51 17 17 18,815 18,815 0,47125 0.47125 2052,00 2052,00 88,30 88.30 18 18 19,204 19,204 0,46178 0.46178 2071,00 2071,00 89,11 89.11 19 19 Dec 19,654 19,654 0,45132 0.45132 2226,00 2226,00 95,78 95.78 20 20 May 20,237 20,237 0,43845 0.43845 1939,00 1939,00 83,43 83.43 21 21 20,523 20,523 0,43240 0.43240 2324,00 2324,00 100,00 100.00 22 22nd 20,934 20,934 0,42400 0.42400 1656,00 1656,00 71,26 71.26 23 23 21,691 21,691 0,40938 0.40938 923,00 923.00 39,72 39.72 24 24 22,143 22,143 0,40112 0.40112 1411,00 1411,00 60,71 60.71 25 25 22,910 22,910 0,38786 0.38786 994,00 994.00 42,77 42.77 26 26 24,007 24,007 0,37037 0.37037 964,00 964.00 41,48 41.48 27 27 Mar: 24,642 24,642 0,36097 0.36097 991,00 991.00 42,64 42.64 28 28 25,642 25,642 0,36097 0.36097 991,00 991.00 42,64 42.64 29 29 27,070 27,070 0,32913 0.32913 1687,00 1687,00 72,59 72.59 30 30 27,855 27,855 0,32002 0.32002 688,00 688.00 29,60 29.60 31 31 29,497 29,497 0,30258 0.30258 843,00 843.00 36,27 36.27 32 32 29,497 29,497 0,30013 0.30013 878,00 878.00 37,78 37.78 33 33 30,751 30,751 0,29051 0.29051 809,00 809.00 34,81 34.81 34 34 31,916 31,916 0,28017 0.28017 821,00 821.00 35,33 35.33 35 35 33,982 33,982 0,26360 0.26360 882,00 882.00 37,95 37.95 36 36 35,200 35,200 0,25475 0.25475 865,00 865.00 37,22 37.22 37 37 36,001 36,001 0,24926 0.24926 841,00 841.00 36,19 36.19 38 38 36,927 36,927 0,24322 0.24322 1106,00 1106,00 47,59 47.59 39 39 38,389 38,389 0,23429 0.23429 968,00 968.00 41,65 41.65

b. Konverze formyb. Form conversion

Hygroskopická krystalická forma N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu (370 g) se naplní do rotační odpařovací baňky o obsahu 2 litry. Baňka se umístí na rotační odparku (Heidolph UV 2002) a ponoří do lázně (Heidolph MR 2002) předehřáté na 58 °C. Aparatura se umístí do vakua 6 kPa (60 mbar) s využitím vakuového čerpadla (Divatrion DVÍ), potom se vakuum přeruší kontrolovaným způsobem pro umožněni vytvoření vlhké atmosféry do oddělené zahřívané baňky s obsahem vody. Spuštění vlhké atmosféry se kontroluje aparaturou pro kontrolu vlhkosti (Vausalo Humiditique and Temperature Traumettor) pro obdržení relativní vlhkosti v aparatuře 79 % [13 až 18 kPa (130 až 180 mbar) vnitřního tlaku]. Rotační odpařovací nádoba se poté otáčí při rychlosti otáčení 145 až 160 min^-1 po dobu 5 h při udržování lázně zhruba na 60 °C a relativní vlhkosti v nádobě 71 až 79 %. Poté se vakuum přeruší s vpuštěním dusíku, nádoba a její obsah se ponechá ochladit na teplotu okolí a produkt se odebere s obdržením nehygroskopické krystalické formy Ν-[Ν-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl ]—(L)-β-cyklohexylalaninamidu. Druhý podíl 317 g hygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butano-yl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu se zpracuje podobně s obdržením nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu. Ověření konverze se provede rentgenovou práškovou difrakční analýzou (obr. 3). Tyto dva podíly spolu poskytují 667 g nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu (celkový výtěžek 97 %). Ověření konverze se provede rentge- 75The hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide (370 g) is charged to rotary 2 liter evaporating flasks. The flask is placed on a rotary evaporator (Heidolph UV 2002) and immersed in a bath (Heidolph MR 2002) preheated to 58 ° C. The apparatus is placed under a vacuum of 60 mbar using a vacuum pump (Divatrion DVI), then the vacuum is interrupted in a controlled manner to allow the formation of a humid atmosphere in a separate heated water-containing flask. The triggering of the humid atmosphere is controlled by a Vausalo Humiditique and Temperature Traumettor to obtain a relative humidity in the 79% apparatus [13-18 kPa (130-180 mbar) of internal pressure]. Rotary evaporator vessel is then rotated at a speed of 145 to 160 min ^-1 for 5 hours while maintaining the bath at about 60 ° C and relative humidity in the container 71 to 79%. Thereafter, the vacuum is interrupted with nitrogen injection, the vessel and its contents are allowed to cool to ambient temperature, and the product is collected to obtain a non-hygroscopic crystalline form of Ν- [Ν- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl 1 - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide. A second crop of 317 g of the hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butano-yl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide is treated with similarly to obtain a non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide. The conversion was verified by X-ray powder diffraction analysis (Fig. 3). Together, these two fractions provide 667 g of a non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide ( total yield 97%). Verification of the conversion is performed by an x-ray

• · • · • · • · ·· ·· « · «· • *» · • * »· • • • • • * • * • · • · • • • • • · · • · · • • • • • • • · • · • • • • • • • · · • · · • • • • • • • · • · • • • • « · · · «· · · • • • • ·♦. ·· · ♦. ·· « · «· • 4 • 4

novou práškovou difrakční analýzou (obr. 3). Výsledky rentgenové práškové difrakce jsou též v tabulce jako hodnoty vzrůstajícího úhlu difrakce (2Θ), odpovídající interplanární vzdálenosti krystalu (d) v nanometrech (nm), četnosti impulsů za s (Cps) a relativní intenzity vrcholu (%) (tabulka 3).by new powder diffraction analysis (Fig. 3). X-ray powder diffraction results are also shown in the table as increasing diffraction angle (2Θ) values, corresponding to the interplanar crystal distance (d) in nanometers (nm), pulse rate s (Cps) and relative peak intensity (%) (Table 3).

• ·• ·

Tabulka 3Table 3

-N- -N- 2Θ 2Θ ---a— ---and- ---Cps--- --- Cps --- W. — — W. - - 1 1 5,124 5,124 1,72309 1.72309 180,00 180.00 10,17 10.17 2 2 6,328 6,328 1,39565 1.39565 408,00 408,00 23,05 23.05 3 3 7,574 7,574 1,16623 1,16623 305,00 305.00 17,23 17.23 4 4 8,191 8,191 1,07851 1,07851 556,00 556,00 31,41 31.41 5 5 8,797 8,797 1,00432 1,00432 166,00 166.00 9,38 9.38 6 6 10,398 10,398 0,85004 0.85004 244,00 244,00 13,79 13.79 7 7 12,628 12,628 0,70040 0.70040 1198,00 1198,00 67,68 67.68 8 8 13,871 13,871 0,63791 0.63791 353,00 353,00 19,94 19.94 9 9 15,218 15,218 0,58172 0.58172 1543,00 1543,00 87,18 87.18 10 10 15,723 15,723 0,56317 0.56317 187,00 187.00 10,56 10.56 11 11 16,538 16,538 0,53558 0.53558 589,00 589.00 33,28 33.28 12 12 16,751 16,751 0,52882 0.52882 621,00 621,00 35,08 35.08 13 13 18,024 18,024 0,49175 0.49175 869,00 869.00 49,10 49.10 14 14 18,640 18,640 0,47563 0.47563 1156,00 1156,00 65,31 65.31 15 15 Dec 18,809 18,809 0,47141 0.47141 1241,00 1241,00 70,11 70.11 16 16 19,191 19,191 0,46210 0.46210 1521,00 1521,00 85,93 85.93 17 17 19,659 19,659 0,45120 0.45120 1413,00 1413,00 79,83 79.83 18 18 20,865 20,865 0,44064 0.44064 1303,00 1303,00 73,62 73.62 19 19 Dec 20,495 20,495 0,43299 0.43299 1770,00 1770,00 100,00 100.00 20 20 May 20,865 20,865 0,42539 0.42539 1120,00 1120,00 63,28 63.28 21 21 21,616 21,616 0,41077 0.41077 683,00 683.00 38,59 38.59 22 22nd 22,113 22,113 0,40166 0.40166 919,00 919.00 51,92 51,92 23 23 22,950 22,950 0,38719 0.38719 697,00 697,00 39,38 39.38 24 24 24,117 24,117 0,36871 0.36871 659,00 659.00 37,23 37.23 25 25 24,618 24,618 0,36132 0.36132 716,00 716.00 40,45 40.45 26 26 25,644 25,644 0,34709 0.34709 662,00 662.00 37,40 37.40 27 27 Mar: 26,297 26,297 0,33862 0.33862 486,00 486,00 27,46 27.46 28 28 27,052 27,052 0,32934 0.32934 1270,00 1270,00 71,75 71.75 29 29 27,960 27,960 0,31885 0.31885 518,00 518,00 29,27 29.27 30 30 29,640 29,640 0,30115 0.30115 705,00 705,00 39,38 39.38 31 31 30,744 30,744 0,29058 0.29058 695,00 695,00 39,27 39.27 32 32 33,465 33,465 0,26755 0.26755 697,00 697,00 39,38 39.38 33 33 33,840 33,840 0,26467 0.26467 764,00 764,00 43,16 43.16 34 34 35,812 35,812 0,25053 0.25053 736,00 736.00 41,58 41.58 35 35 36,811 36,811 0,24396 0.24396 858,00 858.00 48,47 48.47 36 36 37,076 37.076 0,24228 0.24228 919,00 919.00 51,92 51,92 37 37 38,185 38,185 0,23549 0.23549 870 870 49,15 49.15 38 38 39,622 39,622 0,22728 0.22728 882,00 882.00 49,83 49.83

• 9 · · · · ««• 9 · · ·

9 9 9 9 ··· • · · 9 9 9 · • 9 9 r · 99 ·9 9 9 9 ··· • · · 9 9 9 · · 9 9 · 99 ·

9 9 9 9 9 *9 9 9 9 9

9999 99 999999 98 99

Přiklad 14Example 14

Rentgenové práškové difrakční grafy vzorku N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu v jeho hygroskopické krystalické formě a po převedení na nehygroskopickou krystalickou formuX-ray powder diffraction plots of a sample of N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide in its hygroscopic crystalline form and after conversion to a non-hygroscopic crystalline form

Vzorek hygroskopického krystalického N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu se připraví podle příkladu 5 nebo 11 a převede na odpovídající nehygroskopickou krystalickou formu podle způsobu příkladu 13. Grafy rentgenové práškové difrakce hygroskopické krystalické formy a nehygroskopické krystalické formy jsou na obr. 4 a 5. Výsledky rentgenové difrakce hygroskopické krystalické formy a nehygroskopické krystalické formy jsou též v tabulce jako hodnoty rostoucího úhlu difrakce (2Θ), odpovídající interplanární vzdálenosti krystalu (d) v nanometrech (nm), četnosti impulsů za s (Cps) a relativní intenzity vrcholu (%) v tabulkách 4 respektive 5.A sample of hygroscopic crystalline N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide was prepared according to Example 5 or 11 and The X-ray powder diffraction graphs of the hygroscopic crystalline form and the non-hygroscopic crystalline form are shown in Figures 4 and 5. The X-ray diffraction results of the hygroscopic crystalline form and the nonhygroscopic crystalline form are also in the table as values of increasing diffraction angle ( 2Θ), corresponding to the interplanar crystal distance (d) in nanometers (nm), the pulse rate per second (Cps) and the relative peak intensity (%) in Tables 4 and 5, respectively.

A A Α· AA «Α • · « A A A A • · AAAA A * A A A A A • · A * A AA A A A A A A A A A A A A A A A

A* AAAA AA AA* AAAA AA AA

Tabulka 4Table 4

-N- 2Θ-N- 2Θ

-d--- ---Cps----d --- --- Cps ---

1 1 5,073 5,073 1,74037 1,74037 2 2 6,451 6,451 1,36905 1.36905 3 3 7,837 7,837 1,12712 1.12712 4 4 8,491 8,491 1,04049 1,04049 5 5 9,699 9,699 0,91119 0.91119 6 6 10,488 10,488 0,84278 0.84278 7 7 11,570 11,570 0,76423 0.76423 8 8 12,550 12,550 0,70474 0.70474 9 9 13,576 13,576 0,65168 0.65168 10 10 15,327 15,327 0,57763 0.57763 11 11 15,790 15,790 0,56080 0.56080 12 12 16,179 16,179 0,54739 0.54739 13 13 16,770 16,770 0,52824 0.52824 14 14 17,085 17.085 0,51856 0.51856 15 15 Dec 17,750 17,750 0,49927 0.49927 16 16 18,151 18,151 0,48835 0.48835 17 17 18,504 18,504 0,47909 0.47909 18 18 19,323 19,323 0,45897 0.45897 19 19 Dec 19,714 19,714 0,44996 0.44996 20 20 May 20,545 20,545 0,43194 0.43194 21 21 21,388 21,388 0,41510 0.41510 22 22nd 22,381 22,381 0,39691 0.39691 23 23 22,870 22,870 0,38852 0.38852 24 24 23,640 23,640 0,37604 0.37604 25 25 23,841 23,841 0,37292 0.37292 26 26 24,048 24,048 0,36976 0.36976 27 27 Mar: 24,746 24,746 0,35949 0.35949 28 28 25,200 25,200 0,35311 0.35311 29 29 25,792 25,792 0,34513 0.34513 30 30 26,266 26,266 0,33901 0.33901 31 31 26,959 26,959 0,33045 0.33045 32 32 27,426 27,426 0,32494 0.32494 33 33 27,967 27,967 0,31876 0.31876 34 34 29,020 29,020 0,30744 0.30744 35 35 29,922 29,922 0,29837 0.29837 36 36 30,970 30,970 0,28851 0.28851 37 37 31,552 31,552 0,28332 0.28332 38 38 33,338 33,338 0,26854 0.26854 39 39 34,838 34,838 0,25731 0.25731 40 40 35,873 35,873 0,25012 0.25012 41 41 36,107 36,107 0,24855 0.24855 42 42 37,162 37,162 0,24174 0.24174 43 43 38,509 38,509 0,23359 0.23359 44 44 39,701 39,701 0,22684 0.22684

1487,00 1487,00 86,50 86.50 447,00 447,00 26,00 26,00 411,00 411,00 23,91 23.91 602,00 602,00 35,02 35.02 93,00 93.00 5,41 5.41 421,00 421,00 24,49 24.49 92,00 92.00 5,35 5.35 411,00 411,00 23,91 23.91 760,00 760,00 44,21 44.21 606,00 606,00 35,25 35.25 456,00 456,00 26,53 26.53 346,00 346,00 20,13 20.13 938,00 938.00 54,57 54.57 685,00 685,00 39,85 39.85 924,00 924.00 53,75 53.75 741,00 741,00 43,11 43,11 593,00 593,00 34,50 34.50 930,00 930.00 54,10 54.10 792,00 792,00 46,07 46.07 1719,00 1719,00 100,00 100.00 897,00 897.00 52,18 52.18 373,00 373,00 21,70 21.70 258,00 258,00 15,01 15.01 563,00 563,00 32,75 32.75 680,00 680,00 39,56 39.56 623,00 623,00 36,24 36.24 338,00 338.00 19,66 19.66 366,00 366,00 21,29 21.29 590,00 590,00 34,32 34.32 731,00 731.00 42,52 42.52 555,00 555,00 32,29 32.29 769,00 769,00 44,74 44.74 528,00 528,00 30,72 30.72 771,00 771,00 44,85 44.85 491,00 491,00 28,56 28.56 384,00 384.00 22,34 22.34 510,00 510.00 29,67 29.67 627,00 627,00 36,47 36.47 520,00 520,00 30,25 30.25 653,00 653,00 37,99 37.99 639,00 639.00 37,17 37.17 683,00 683.00 39,73 39.73 775,00 775.00 45,08 45.08 784,00 784,00 45,61 45.61

♦♦

• · »· * · · ·• · »

9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 • · 9 9 9 9 9 9 · 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 99 9 9 9 999 9 99

Tabulka 5Table 5

-N- -N- 2Θ 2Θ ---d— --- d— ---Cps--- --- Cps --- ---%--- ---% --- 1 1 5,152 5,152 1,71371 1.71371 123,00 123.00 7,34 7.34 2 2 6,386 6,386 1,38287 1.38287 483,00 483.00 28,84 28.84 3 3 7,580 7,580 1,16540 1.16540 389,00 389,00 23,22 23.22 4 4 8,225 8,225 1,07410 1.07410 752,00 752,00 44,90 44.90 5 5 8,801 8,801 1,00390 1,00390 180,00 180.00 10,75 10.75 6 6 10,408 10,408 0,84928 0.84928 276,00 276,00 16,48 16.48 7 7 12,660 12,660 0,69863 0.69863 1399,00 1399,00 83,52 83.52 8 8 13,914 13,914 0,63594 0.63594 391,00 391,00 23,34 23.34 9 9 15,251 15,251 0,58047 0.58047 1675,00 1675,00 100,00 100.00 10 10 16,541 16,541 0,53548 0.53548 608,00 608,00 36,30 36.30 11 11 16,771 16,771 0,52818 0.52818 652,00 652,00 38,93 38.93 12 12 18,047 18,047 0,49112 0.49112 775,00 775.00 46,27 46.27 13 13 18,676 18,676 0,47472 0.47472 1078,00 1078.00 64,36 64.36 14 14 18,902 18,902 0,46910 0.46910 1099,00 1099.00 65,61 65.61 15 15 Dec 19,182 19,182 0,46231 0.46231 1151,00 1151,00 68,72 68.72 16 16 19,697 19,697 0,45035 0.45035 1164,00 1164,00 69,49 69.49 17 17 20,240 20,240 0,43838 0.43838 1049,00 1049.00 62,63 62.63 18 18 20,568 20,568 0,43147 0.43147 1403,00 1403.00 83,76 83.76 19 19 Dec 20,933 20,933 0,42403 0.42403 1024,00 1024.00 61,13 61.13 20 20 May 21,684 21,684 0,40951 0.40951 569,00 569.00 33,97 33.97 21 21 22,122 22,122 0,40150 0.40150 746,00 746.00 44,54 44.54 22 22nd 22,970 22,970 0,38685 0.38685 564,00 564,00 33,67 33.67 23 23 24,080 24,080 0,36927 0.36927 546,00 546,00 32,60 32.60 24 24 24,218 24,218 0,36720 0.36720 556,00 556,00 33,19 33.19 25 25 24,694 24,694 0,36023 0.36023 618,00 618.00 36,90 36.90 26 26 25,680 25,680 0,34662 0.34662 510,00 510.00 30,45 30.45 27 27 Mar: 26,400 26,400 0,33732 0.33732 403,00 403,00 24,06 24.06 28 28 27,105 27,105 0,32871 0.32871 1093,00 1093.00 65,25 65.25 29 29 27,929 27,929 0,31920 0.31920 450,00 450,00 26,87 26.87 30 30 29,360 29,360 0,30395 0.30395 555,00 555,00 33,13 33.13 31 31 29,724 29,724 0,30031 0.30031 595,00 595,00 35,52 35.52 32 32 30,340 30,340 0,29435 0.29435 429,00 429,00 25,61 25.61 33 33 30,693 30,693 0,29105 0.29105 552,00 552,00 32,96 32.96 34 34 31,353 31,353 0,28507 0.28507 476,00 476,00 28,42 28.42 35 35 31,822 31,822 0,28098 0.28098 531,00 531,00 31,70 31.70 36 36 32,006 32,006 0,27940 0.27940 545,00 545,00 32,54 32.54 37 37 32,885 32,885 0,27213 0.27213 485,00 485,00 28,96 28.96 38 38 33,508 33,508 0,26722 0.26722 547,00 547,00 32,66 32.66 39 39 34,040 34,040 0,26316 0.26316 606,00 606,00 36,18 36.18 40 40 34,839 34,839 0,25730 0.25730 580,00 580,00 34,63 34.63 41 41 35,998 35,998 0,24928 0.24928 596,00 596,00 35,58 35.58 42 42 36,680 36,680 0,24480 0.24480 629,00 629,00 37,55 37.55 43 43 36,948 36,948 0,24309 0.24309 727,00 727,00 43,40 43.40 44 44 37,197 37,197 0,24152 0.24152 703,00 703.00 41,97 41.97 45 45 39,602 39,602 0,22739 0.22739 697,00 697,00 41,61 41.61

Příklad 15Example 15

Isotermní mikrokalorimetrické experimenty na hygroskopické a nehygroskopické krystalické formě N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamiduIsothermal microcalorimetric experiments on the hygroscopic and non-hygroscopic crystalline form of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide

Isotermní mikrokalorimetrické experimenty na hygroskopickém a nehygroskopickém N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-B-cyklohexylalaninamidu se provádějí s použitím termometrického monitoru tepelné aktivity (TAM). Konverze různých krystalických forem v pevném stavu se studují expozicí těchto forem různým vlhkostem nebo parám rozpouštědla při různých teplotách. Používají se nasycené roztoky následujících solí pro obdržení různých vlhkostí: chlorid draselný (relativní vlhkost 80 %), chlorid sodný (relativní vlhkost 75 %) a bromid sodný (relativní vlhkost 65 %). Množství těchto forem zhruba 100 mg se naváží do skleněné ampule TAM a do této ampule se umístí mikrohygrostat obsahující roztok nasycené soli (přebytek tuhé látky) nebo organické rozpouštědlo. Ampule se uzavře, umožní se vyrovnání na teplotu experimentu a ponoří se do polohy měření v TAM. Na referenční straně se umístí stejný systém obsahující promytý mořský písek místo testovaného vzorku. Tepelný výkon (μϊΐ) se měří jako funkce času (obr. 6 až 8).Isothermal microcalorimetric experiments on hygroscopic and non-hygroscopic N- [N- [N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide were performed using Thermometric Thermal Activity Monitor (TAM). Solid state conversions of different crystalline forms are studied by exposing these forms to different moisture or solvent vapors at different temperatures. Saturated solutions of the following salts are used to obtain different moisture contents: potassium chloride (80% RH), sodium chloride (75% RH) and sodium bromide (65% RH). An amount of these forms of about 100 mg is weighed into a TAM glass vial and a microhygrostat containing a saturated salt solution (excess solid) or organic solvent is placed in the vial. The vial is sealed, allowed to equilibrate to the temperature of the experiment, and immersed in the TAM measurement position. The same system shall be placed on the reference side containing the washed sea sand instead of the test sample. The heat output (μϊΐ) is measured as a function of time (Figs. 6 to 8).

Příklad 16Example 16

Isotermy sorpce vlhkosti hygroskopické a nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl]-(L)-β-cyklohexylalaninamidu ·· » · · ♦ · · • · · · • ♦ · • ·Moisture sorption isotherms of hygroscopic and non-hygroscopic crystalline forms of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -β-cyclohexylalaninamide ·· » · · · · · · · · · · · · · · ·

9999

9 9 · • 9 9 99 9

9 9 99 9 9

9 9 99 9 9

Isotermy sorpce vlhkosti hygroskopické a nehygroskopické krystalické formy N-[N-[N-(4-piperid-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl]-(L)-aspartyl] - (L)-B-cyklohexylalaninamidu se obdrží na vahách pro stanovení vlhkosti VTI MB 300G. Pokusy se prováděj! buď podrobením zhruba 15 mg krystalické formy vzrůstajícím a klesajícím krokům relativní vlhkosti v % a sledováním hmotnostního přírůstku (v každém rovnovážném kroku) jako funkce relativní vlhkosti v % (obr. 9) nebo udržováním vzorku krystalické formy při konstantní vlhkosti a sledováním hmotnostního přírůstku jako funkce času.Moisture sorption isotherms of the hygroscopic and non-hygroscopic crystalline forms of N- [N- [N- (N- (4-piperid-4-yl) butanoyl) -N-ethylglycyl] - (L) -aspartyl] - (L) -B-cyclohexylalaninamide moisture balance VTI MB 300G. Attempts are made! either subjecting about 15 mg of the crystalline form to increasing and decreasing relative humidity steps in% and monitoring the weight gain (in each equilibrium step) as a function of relative humidity in% (Fig. 9), or keeping the crystal form sample at constant humidity and monitoring the weight gain as a function time.

Sloučenina obecného vzorce II vykazuje užitečné farmakologické působení a v souladu s tím se používá jako složka farmaceutických prostředků při léčbě nemocných trpících určitými patologickými stavy.The compound of formula II exhibits useful pharmacological action and is accordingly used as a component of pharmaceutical compositions in the treatment of patients suffering from certain pathological conditions.

Tento vynález se též zaměřuje na způsob léčby nemocného trpícího stavy, které lze zlepšit nebo kterým lze zabránit podáním inhibitoru agregace destiček inhibicí vazby fibrinogenu na aktivované destičky a dalších adhezivnich glykoproteinů, které se účastní agregace destiček a srážení krve. Dále se tento vynález zaměřuje na způsobe prevence či léčby trombózy související s určitými chorobnými stavy, jako je infarkt myokardu, mrtvice, periferní arteriální onemocnění a disseminovaná intravaskulární koagulace u lidí a jiných savců.The present invention is also directed to a method of treating a patient suffering from conditions that can be improved or prevented by administering a platelet aggregation inhibitor by inhibiting fibrinogen binding to activated platelets and other adhesive glycoproteins involved in platelet aggregation and blood coagulation. Further, the present invention is directed to methods of preventing or treating thrombosis associated with certain disease states such as myocardial infarction, stroke, peripheral arterial disease, and disseminated intravascular coagulation in humans and other mammals.

Pojem léčba je třeba zde chápat tak, že zahrnuje profylaktickou léčbu stejně tak jako léčbu stavů, které již nastaly.The term treatment is to be understood herein to include prophylactic treatment as well as treatment of conditions that have already occurred.

• φ • Φ φφ φφ • φφφ φφφφ • · · φφφφ • · · φ φ φ φ φ· φφφφ φφ φφ• Φ φ φ φ φ · · · · · · · · · · · ·

Rozsah tohoto vynálezu též zahrnuje farmaceutické složení obsahující farmaceuticky přijatelné množství alespoň jedné sloučeniny obecného vzorce I ve spojení s farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou či pomocnou látkou.The invention also encompasses a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable amount of at least one compound of Formula I in association with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.

V praxi se sloučeniny či prostředky pro léčbu podle tohoto vynálezu mohou podávat jakýmikoliv vhodnými způsoby, například místně, inhalací, parenterálně, rektálně či perorálně, avšak přednostně se podávají perorálně.In practice, the compounds or compositions for treatment of the invention may be administered by any suitable means, for example topically, by inhalation, parenterally, rectally or orally, but preferably administered orally.

Sloučenina obecného vzorce II se může předkládat ve formách umožňujících podávání nejvhodnější cestou a tento vynález se též vztahuje k farmaceutickým složením obsahujícím alespoň jednu sloučeninu podle tohoto vynálezu, které jsou vhodné pro použití v humánním či veterinárním lékařství . Tyto prostředky se mohou připravovat konvenčními způsoby s použitím jednoho či více přijatelných adjuvantů či pomocných látek. Adjuvanty zahrnují mimo jiné rozpouštědla, sterilní vodná prostředí a různá netoxická organická rozpouštědla. Tato složení se mohou předkládat ve formě tablet, pilulek, tobolek, granulí, prášků, vodných roztoků či suspenzí, roztoků pro injekce, elixírů, sirupů a podobně a mohou obsahovat jednu či více látek zvolenou ze skupiny zahrnující sladidla, příchutě, barviva, stabilizátory či konzervační prostředky pro obdržení farmaceuticky přijatelných přípravků.The compound of formula (II) may be presented in forms suitable for administration by the most suitable route, and the present invention also relates to pharmaceutical compositions comprising at least one compound of the invention that are suitable for use in human or veterinary medicine. These compositions can be prepared by conventional methods using one or more acceptable adjuvants or excipients. Adjuvants include, but are not limited to, solvents, sterile aqueous media, and various non-toxic organic solvents. These compositions may be presented in the form of tablets, pills, capsules, granules, powders, aqueous solutions or suspensions, injectable solutions, elixirs, syrups, and the like, and may contain one or more of a sweetening, flavoring, coloring, stabilizing or preservatives for obtaining pharmaceutically acceptable compositions.

Volba vehikula a obsah aktivní látky ve vehikulu se obecně stanoví v souladu s rozpustností a chemickými vlastnostmi produktu a s konkrétním režimem podávání a opatřeními, která je třeba plnit ve farmaceutické praxi. Například pomocné látky, jako je laktóza, citrát sodný, uhličitan vápenatý, dihydrát hydrogenfosforečnanu vápenatého a rozvolňo83 • * · · ♦ · · ·· 9 9 •9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9The choice of vehicle and the active ingredient content of the vehicle is generally determined in accordance with the solubility and chemical properties of the product and the particular mode of administration and the precautions to be taken in pharmaceutical practice. For example, excipients such as lactose, sodium citrate, calcium carbonate, dibasic calcium phosphate dihydrate and disintegrating agent 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9

999 99 99 9999 99 99 vadla, jako je škrob, kyselina alginová a určité komplexní křemičité gely spojené s mazivy, jako je stearát hořečnatý, laurylsulfat sodný a mastek se mohou použít pro přípravu tablet. Pro přípravu tobolek je výhodné použít laktózu a vysokomolekulární polyethylenglykoly. Při použití vodných suspenzi mohou obsahovat emulgačni prostředky či prostředky umožňující tvorbu suspenze. Lze též použít zřeďovadla, jako je sacharóza, ethanol, polyethylenglykol, propylenglykol, glycerol a chloroform nebo jejich kombinace, stejně tak jako jiné látky.Excipients such as starch, alginic acid and certain complex silica gels associated with lubricants such as magnesium stearate, sodium lauryl sulfate and talc may be used to prepare tablets. For the preparation of capsules, it is preferable to use lactose and high molecular weight polyethylene glycols. When aqueous suspensions are used, they may contain emulsifying or suspending agents. Diluents such as sucrose, ethanol, polyethylene glycol, propylene glycol, glycerol and chloroform, or combinations thereof, as well as other substances may also be used.

Pro parenterální podávání se používají emulze, suspenze či roztoky sloučenin podle tohoto vynálezu v rostlinném oleji, například sezamovém oleji, podzemnicovém oleji či olivovém oleji nebo vodně-organické roztoky, jako je voda a propylenglykol, organické estery, které lze podávat v injekci, jako je ethyloleat stejně tak jako sterilní vodné roztoky farmaceuticky přijatelných solí. Roztoky solí přípravků podle tohoto vynálezu lze též použít pro podávání v intramuskulární či subkutánní injekci. Vodné roztoky, které též zahrnují roztoky solí v čisté destilované vodě, se mohou použít pro intravenózní podávání s podmínkou, že se jejich pH vhodně upraví, že jsou rozumně pufrované a že je zaručená jejich izotonická koncentrace použitím dostatečného množství glukózy či chloridu sodného a že se sterilizují zahříváním, ozařováním a/nebo mikrofiltrací.For parenteral administration, emulsions, suspensions or solutions of the compounds of this invention in vegetable oil, for example, sesame oil, peanut oil or olive oil, or aqueous-organic solutions such as water and propylene glycol, organic esters which can be injected, such as ethyloleate as well as sterile aqueous solutions of pharmaceutically acceptable salts. The salt solutions of the compositions of the invention may also be used for administration by intramuscular or subcutaneous injection. Aqueous solutions, which also include solutions of salts in pure distilled water, may be used for intravenous administration provided that their pH is appropriately adjusted, that they are reasonably buffered and that their isotonic concentration is guaranteed by the use of sufficient glucose or sodium chloride and that sterilize by heating, irradiation and / or microfiltration.

Lokální podáváni, gely (na bázi vody či alkoholu), krémy a masti obsahující sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou použít. Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být též součástí gelu či matricové báze pro aplikaci náplasti, která by umožňovala řízené uvolňování sloučeniny pro přechod transdermální bariérou.Topical administration, gels (water or alcohol based), creams and ointments containing the compounds of this invention can be used. The compounds of this invention may also be part of a gel or matrix base for the application of a patch that would allow the controlled release of the compound to cross the transdermal barrier.

Pevné přípravky pro rektální podávání zahrnují čípky připravené v souladu se známými způsoby a obsahuji alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce II.Solid formulations for rectal administration include suppositories prepared in accordance with known methods and containing at least one compound of Formula II.

Procentický obsah účinné složky v prostředku podle tohoto vynálezu se může měnit takovým způsobem, že prostředek obsahuje podíl vhodné dávky. Obvykle lze podávat zhruba současně několik jednotkových dávkových forem. Požadovanou dávku může stanovit lékař či kvalifikovaný odborník a závisí na požadovaném léčebném účinku, způsobu podávání a trvání léčby a na stavu nemocného. Dávkový režim při provádění způsobu podle tohoto vynálezu je takový, který zajišťuje maximální terapeutickou odpověď v obdržení zlepšení a poté minimální efektivní hladinu poskytující úlevu. Obecně může být perorální dávka mezi zhruba 0,1 mg/kg a zhruba 100 mg/kg přednostně mezi 0,1 mg/kg až 20 mg/kg a nejlépe mezi 1 mg/kg a 20 mg/kg a intravenózní dávka zhruba 0,1 Mg/kg až zhruba 100 Mg/kg, přednostně mezi 0,1 mg/kg až 50 mg/kg.The percentage of active ingredient in the composition of the invention may be varied in such a way that the composition contains a proportion of the appropriate dose. Usually, several unit dosage forms may be administered simultaneously. The desired dose may be determined by a physician or a skilled artisan, and will depend upon the desired therapeutic effect, the mode of administration and the duration of treatment, and the condition of the patient. The dosage regimen in practicing the method of the invention is one that provides a maximum therapeutic response in receiving improvement and thereafter a minimum effective level providing relief. In general, the oral dose may be between about 0.1 mg / kg and about 100 mg / kg, preferably between 0.1 mg / kg to 20 mg / kg and most preferably between 1 mg / kg and 20 mg / kg and an intravenous dose of about 0, 1 Mg / kg to about 100 Mg / kg, preferably between 0.1 mg / kg to 50 mg / kg.

V každém konkrétním případu lze dávky stanovit v souladu s faktory, které charakterizují pacienta, který se má léčit, jako je stáří, hmotnost, celkový zdravotní stav a další charakteristiky, které mohou ovlivnit účinnost sloučeniny podle tohoto vynálezu.In each particular case, dosages may be determined in accordance with factors that characterize the patient to be treated, such as age, weight, general health, and other characteristics that may affect the efficacy of the compound of the invention.

Dále lze podávat sloučeninu obecného vzorce II tak často, jak je třeba, pro obdržení požadovaného terapeutického účinku. Někteří nemocní mohou vykazovat rychlou odpověď na vyšší nebo nižší dávku a mohou shledávat mnohem slabší udržovací dávky jako přiměřené. Pro jiné nemocné může být nezbytným použít dlouhodobou léčbu při frekvenci 1 až 4 perorálních dávek denně, přednostně jednou až dvakrát denně v souladu s fyziologickými požadavky každého konkrétního pa85 · · · * 4 · 4 4 4 4Further, a compound of Formula II may be administered as often as necessary to obtain the desired therapeutic effect. Some patients may show a rapid response to a higher or lower dose and may find much weaker maintenance doses adequate. For other patients, it may be necessary to use long-term treatment at a frequency of 1 to 4 oral doses per day, preferably once to twice a day, in accordance with the physiological requirements of each particular pa85.

4··» 4 4 4 4 44444 ·· »4 4 4 4444

444 44 4 4444444 44 4 4445

444 4 4 44 44 4444 4 4

444 444 4444444 444 4444

444 44 44 4444 44 44 cienta. Obecně se může aktivní přípravek podávat perorálně jednou až čtyřikrát denně. Pro jiné pacienty bude ovšem nezbytné předepisovat ne více než jednu či dvě dávky denně.444 44 44 4444 44 44 In general, the active agent may be administered orally one to four times daily. However, for other patients it will be necessary to prescribe no more than one or two doses per day.

Sloučenina obecného vzorce II vykazuje význačné farmakologické aktivity podle zkoušek popsaných v literatuře, jejichž výsledky lze uvažovat v korelaci s farmakologickou aktivitou u lidí a jiných savců. Následující výsledky farmakologických zkoušek in vitro a in vivo jsou typické pro charakterizaci sloučeniny obecného vzorce II.The compound of formula II exhibits remarkable pharmacological activities according to the literature tests, the results of which can be considered correlated with the pharmacological activity in humans and other mammals. The following in vitro and in vivo pharmacological test results are typical for the characterization of a compound of Formula II.

Následující farmakologické zkoušky vyhodnocují inhibiční účinnost sloučeniny obecného vzorce II při agregaci destiček zprostředkované fibrinogenem, vazbu fibrinogenu na destičky stimulované trombinem a inhibici agregace destiček indukované ADP ex-vivo a výsledky těchto zkoušek korelují s inhibičnlmi vlastnostmi sloučeniny obecného vzorce II in vivo.The following pharmacological assays evaluate the inhibitory potency of the compound of formula II in fibrinogen-mediated platelet aggregation, the binding of fibrinogen to platelets stimulated by thrombin and the inhibition of platelet aggregation ex-vivo induced by ADP, and the results correlate with the inhibitory properties of the compound of formula II in vivo.

Test agregace destiček je založen na popisu v Blood 66 (4), 946-952 (1985). Test vazby fibrinogenu je v podstatě test, který popsali Z. M. Ruggeri a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 83, 5708-5712 (1986) a E. F. Plow a kol., Proč. Nati. Acad. Sci., USA, 82, 8057-8061 (1985). Test inhibice agregace destiček indukované ADP ex-vivo je založen na způsobu Zuckera Platelet Inhibition Measured by the Photoelectric Method”, Methods in Enzymology 169. 117-133 (1989).The platelet aggregation assay is based on the description in Blood 66 (4), 946-952 (1985). The fibrinogen binding assay is essentially an assay described by Z. M. Ruggeri et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 83, 5708-5712 (1986) and E. F. Plow et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82: 8057-8061 (1985). The ex-vivo-induced inhibition of ADP-induced platelet aggregation is based on the method of Zucker's Platelet Inhibition Measurement by the Photoelectric Method, Methods in Enzymology 169: 117-133 (1989).

Test agregace destičekPlatelet aggregation test

Příprava fixovaných aktivovaných destičekPreparation of fixed activated platelets

Destičky se izolují z koncentrátů lidských destičekPlates are isolated from human platelet concentrates

·· ·· • · · · • · ··· ·· · · · · · · ·

9· ·· • · · · • · · · • · · · ·· ·· s použitím způsobu gelové filtrace jak popisuje G. A. Marguerie a kol., J. Biol. Chem., 254, 5357-5363 (1979) a Z. M. Ruggeri a kol., J. Clin. Invest., 72, 1-12 (1983). Destičky se suspendují při koncentraci 2 x 10⁸ buněk/ml v modifikovaném pufru Tyrodeho bez vápníku obsahujícím koncentrace chloridu sodného 127 mM, chloridu hořečnatého 2 mM, hydrogenfosforečnanu sodného 0,42 mM, hydrogenuhličitanu sodného 11,9 mM, chloridu draselného 2,9 mM, glukózy 5,5 mM, HEPES 10 mM při pH 7,35 a 0,35 % lidského serumalbuminu (HSA). Tyto promyté destičky se aktivují přídavkem lidského a-trombinu při konečné koncentraci 2 jednotky/ml a poté inhibitoru trombinu 1-2581 při konečné koncentraci 40 μΜ. K aktivovaným destičkám se přidá paraformaldehyd do konečné koncentrace 0,50 % a směs se inkubuje při teplotě místnosti po dobu 30 min. Fixované aktivované destičky se poté sbírají centrifugacl při 650 g po dobu 15 min. Pelety destiček se promyjí čtyřikrát Tyrodeho pufrem s 0,35 % HSA a resuspendují na 2 x 10^s buněk/ml ve stejném pufru.9 using a gel filtration method as described by GA Marguerie et al., J. Biol. Chem., 254, 5357-5363 (1979) and ZM Ruggeri et al., J. Clin. Invest., 72: 1-12 (1983). Plates are suspended at a concentration of 2 x 10 ⁸ cells / ml in modified calcium-free Tyrode buffer containing sodium chloride 127 mM, magnesium chloride 2 mM, sodium hydrogen phosphate 0.42 mM, sodium bicarbonate 11.9 mM, potassium chloride 2.9 mM glucose 5.5 mM, HEPES 10 mM at pH 7.35 and 0.35% human serum albumin (HSA). These washed plates are activated by the addition of human a-thrombin at a final concentration of 2 units / ml followed by a thrombin inhibitor 1-2581 at a final concentration of 40 μΜ. To the activated plates, paraformaldehyde is added to a final concentration of 0.50% and the mixture is incubated at room temperature for 30 min. The fixed activated plates are then collected by centrifugation at 650 g for 15 min. Platelet pellets are washed four times with Tyrode's buffer with 0.35% HSA, and resuspended to 2 x ¹⁰ cells / ml in the same buffer.

Agregace destičekPlatelet aggregation

Fixované aktivované destičky se inkubují s vybranou dávkou sloučeniny, která se má zkoušet na inhibici agregace destiček, po dobu 1 min a agregace se zahájí přídavkem lidského fibrinogenu do konečné koncentrace 250 μg/ml. Zařízení pro profilaci agregace destiček model PAP-4 se používá pro zaznamenání agregace destiček. Rozsah inhibice agregace se vyjadřuje v procentech rychlosti agregace pozorované za nepřítomnosti inhibitoru. Poté se vypočítá IC , to jest množství inhibitoru požadované pro snížení rychlosti agregace o 50 %, pro každou sloučeninu /viz například E. F. Plow a kol., Proč. Nati. Acad. Sci., USA, 82, 8057-8061 (1985)/.Fixed activated platelets are incubated with the selected dose of compound to be tested for inhibition of platelet aggregation for 1 min and aggregation is initiated by the addition of human fibrinogen to a final concentration of 250 µg / ml. The PAP-4 platelet aggregation profiling device is used to record platelet aggregation. The extent of inhibition of aggregation is expressed as a percentage of the rate of aggregation observed in the absence of inhibitor. IC is then calculated, i.e. the amount of inhibitor required to reduce the aggregation rate by 50%, for each compound (see, for example, E. F. Plow et al., Proc. Nati. Acad. Sci., USA, 82, 8057-8061 (1985)].

·· ·· > · · 1 ·· ···»·· ··· · · · · · · · · · ·

Test vazby fibrinogenuFibrinogen Binding Assay

Destičky se zbaví složek plazmy promytím na albuminovém gradientu hustoty podle P. N. Walshe a kol., Br. J. Haematol., 281-296 (1977) v modifikaci V. Trapani a Lombardo a kol., J. Clin. Invest., 76, 1950-1958 (1985). V každé experimentální směsi destiček v modifikovaném Tyrodeho pufru [Z. M. Ruggeri a kol., J. Clin. Invest., 72, 1-12 (1983)] se provádí stimulace lidským a-trombinem při 22 až 25 °C po dobu 10 min (3,125 χ 10¹¹ destiček na litr a trombin v koncentraci 0,1 jednotek NIH/ml). Přidá se hirudin v 25-násobném přebytku (jednotka/jednotka) v průběhu 5 min před přidáním fibrinogenu značeného ¹²⁵I a sloučeniny, která se má testovat. Po těchto přídavcích je konečný počet destiček ve směsi 1 x 10^i:L/litr. Po inkubaci po dobu dalších 30 min při 22 až 25 °C se oddělí vázané a volné ligandy centrifugací 50 μΐ směsi přes 300 μΐ 20% sacharózy při 12000 g po dobu 4 min. Peleta destiček se poté oddělí od zbytku směsi pro stanovení radioaktivity navázané na destičky. Nespecifická vazba se měří ve směsích obsahujících přebytek neznačeného ligandu. Při analýze vazebných křivek Scatchardovou analýzou se nespecifická vazba získává jako parametr zjištěný proložením z isotermy vazby pomocí počítačového programu [P. J. Munson, Methods Enzymol., 92, 542-576 (1983)]. Pro stanovení koncentrace každé sloučeniny potřebné k inhibici vazby 50 % fibrinogenu na destičky stimulované trombinem (ICso) se každá sloučenina testuje při 6 nebo více koncentracích s fibrinogenem značeným ¹²⁵I při 0,176 μιηοΐ/litr (60 μg/ml). ICso se získá vynesením zbytkové fibrinogenové vazby proti logaritmu koncentrace sloučeniny ve vzorku.Platelets are deprived of plasma components by washing on an albumin density gradient according to PN Walsh et al., Br. J. Haematol., 281-296 (1977) modified by V. Trapani and Lombardo et al., J. Clin. Invest., 76, 1950-1958 (1985). In each experimental plate mixture in modified Tyrode buffer [ZM Ruggeri et al., J. Clin. Invest., 72, 1-12 (1983)] is stimulated with human α-thrombin at 22-25 ° C for 10 min (3.125 χ 10 ¹¹ platelets per liter and thrombin at a concentration of 0.1 NIH / ml). Add hirudin in a 25-fold excess (unit / unit) over 5 min before adding ¹²⁵ L-labeled fibrinogen and the compound to be tested. After these additions, the final number of platelets in the mixture is 1 x 10 ^{1: L} / liter. After incubation for an additional 30 min at 22 to 25 ° C, bound and free ligands are separated by centrifuging 50 μΐ of the mixture over 300 μΐ 20% sucrose at 12000 g for 4 min. The plate pellet is then separated from the remainder of the plate bound radioactivity mixture. Non-specific binding is measured in mixtures containing an excess of unlabeled ligand. In binding curve analysis by Scatchard analysis, non-specific binding is obtained as a parameter determined by fitting from the isotherm of binding using a computer program [PJ Munson, Methods Enzymol., 92, 542-576 (1983)]. To determine the concentration of each compound required to inhibit the binding of 50% fibrinogen to thrombin-stimulated platelets (IC 50), each compound is tested at 6 or more concentrations with ¹²⁵ I-labeled fibrinogen at 0.176 μιηοΐ / liter (60 μg / ml). IC 50 is obtained by plotting residual fibrinogen binding against the logarithm of the compound concentration in the sample.

Inhibice agregace destiček indukované ADP ex-vivo • ·· *· ·· ·· ·· ·· · · · · · · ♦«·· • · · · · · · · · · ·· ··· · « · · · · · • · · · · · ···· ··· ·· ·· ···· ·· ··Inhibition of ADP-induced platelet aggregation ex-vivo · · dest-P--♦-------ex-ex---ex · · · · · · · · · · · · · · · · ·

Experimentální protokolExperimental protocol

Kontrolní vzorky krve se obdrží 5 až 10 min před podáním zkoušené sloučeniny psím křížencům o hmotnosti 10 až 20 kg. Sloučenina se podává sondou do žaludku ve vodném prostředí nebo perorálně v želatinové tobolce. Poté se odebírají vzorky krve v 30-min intervalech po dobu 3 h a poté po 6, 12 až 24 h po podání. Každý vzorek krve se obdrží z vény na hlavě a odebere se přímo do plastikové injekční stříkačky obsahující jeden díl 3,8% roztoku citrátu sodného na devět dílů krve.Control blood samples are obtained 5 to 10 min before administration of the test compound to canine hybrids weighing 10 to 20 kg. The compound is administered by gavage in an aqueous medium or orally in a gelatin capsule. Blood samples are then taken at 30-min intervals for 3 h and then at 6, 12-24 h after administration. Each blood sample is taken from the vein on the head and collected directly into a plastic syringe containing one part of a 3.8% sodium citrate solution per nine parts of blood.

Agregace psích destiček ex vivoEx vivo dog platelet aggregation

Vzorky krve se centrifugují při frekvenci otáčení 1000 min^-1 po dobu 10 min pro obdržení krevní plazmy bohaté destičkami (PRP). Po odstranění PRP se vzorek centrifuguje po dobu dalších 10 min při frekvenci otáčení 2000 min^-1 pro obdržení plazmy chudé destičkami (PPP). Počítání destiček v PRP se provede s použitím Coulterova čítače (Coulter Electronics, Hialeah, FL). Pokud je koncentrace destiček v PRP vyšší než 300000 destiček/μΐ, potom se PRP zředí PPP pro úpravu počtu destiček na 300000 destiček/μΐ. Alikvoty PRP (250 μΐ) se poté umístí do silikonovaných skleněných kyvet (7,25 x 55 mm, Bio/Data Corp., Horsham, PA). Poté se k PRP přidá epinephrin (konečná koncentrace 1 μΜ) a provede se inkubace po dobu 1 min při 37 °C. Poté se k PRP přidá stimulátor agregace destiček ADP s konečnou koncentrací 10 μΜ. Agregace destiček se sleduje spektrofotometricky s použitím agregometru s transmisí světla (Bio/Data Platelet Aggregation Profiler, Model PAP-4, Bio/Data Corp., Horsham, PA). Pro testování sloučeniny se rychlost změny (směrnice) transmitance světla a maximální transmitance světla (maxi89 • ·· ·· ·· ·· ·· • ••4 44·· ···· ··· ·· · ·«·· • · ··· 4 * ·· ·· · ··· ··· ···· ··· ·· ·· ·«·€ ·· ·· mální agregace) zaznamená v duplikátních vzorcích. Údaje o agregaci destiček se uvedou jako pokles v procentech (střední hodnota ± SEM) směrnice nebo maximální agregace ve srovnání s údaji obdrženými z kontrolní PRP, která se připraví z krevních vzorků obdržených před podáním zkoušené látky.Blood samples are centrifuged at 1000 rpm ^-1 for 10 minutes to obtain platelet-rich plasma (PRP). After removal of the PRP, the sample is centrifuged for an additional 10 min at a speed of 2000 min ^-1 to obtain platelet poor plasma (PPP). Platelet counting in the PRP is performed using a Coulter counter (Coulter Electronics, Hialeah, FL). If the platelet concentration in the PRP is greater than 300,000 platelets / μΐ, then the PRP is diluted with PPP to adjust the platelet count to 300,000 platelets / μΐ. PRP (250 μΐ) aliquots are then placed in siliconized glass cuvettes (7.25 x 55 mm, Bio / Data Corp., Horsham, PA). Epinephrine (final concentration 1 μΜ) is then added to the PRP and incubated for 1 min at 37 ° C. Thereafter, an ADP platelet aggregation stimulator with a final concentration of 10 μΜ is added to the PRP. Platelet aggregation is monitored spectrophotometrically using a light transmitting aggregometer (Bio / Data Platelet Aggregation Profiler, Model PAP-4, Bio / Data Corp., Horsham, PA). For compound testing, the rate of change (slope) of the light transmittance and the maximum light transmittance (maxi89) is 4 444. 4 * ····················································· () · aggregate) is recorded in duplicate samples. Platelet aggregation data shall be reported as a percentage decrease (mean ± SEM) of the slope or maximum aggregation compared to data obtained from a control PRP prepared from blood samples received prior to test substance administration.

Sloučenina obecného vzorce II vykazuje význačnou aktivitu v předchozích testech a uvažuje se za užitečnou při prevenci a léčbě trombózy v souvislosti s určitými chorobnými stavy. Antitrombotická aktivita v rozboru agregace psích destiček ex vivo je schopna předpovídat takovou aktivitu u lidí [viz např. J. L. Catalfamo a W. Jean Dodds Isolation of Platelets from Laboratory Animals, Methods Enzymol.,The compound of formula II exhibits significant activity in previous assays and is believed to be useful in the prevention and treatment of thrombosis associated with certain disease states. Antithrombotic activity in an ex vivo platelet aggregation assay is capable of predicting such activity in humans [see, e.g., J.L. Catalfamo and W.J. Dodds Isolation of Platelets from Laboratory Animals, Methods Enzymol.,

169, díl A, 27 (1989)]. Výsledky testování sloučeniny obecného vzorce II výše popsanými způsoby se uvádějí v tabulce 6 níže. V tabulce se též uvádějí výsledky komparativních testů 4-4(piperidyl)butanoylglycylaspartyltryptofanu, to jest sloučeniny uveřejněné v publikaci evropské patentové přihlášky č. 0 479 481.169, Vol. A, 27 (1989)]. The results of testing the compound of formula II as described above are shown in Table 6 below. The table also shows the results of comparative tests of 4-4 (piperidyl) butanoylglycylaspartyltryptophan, i.e. the compounds disclosed in European Patent Application Publication No. 0 479 481.

• · ·· · · · 0 «··· • · · · · « · 0 ·• · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·

Tabulka 6Table 6

Sloučenina příkladuExample compound

č.C.

Inhibice agregace fixovaných destiček (Ιϋ_5ομΜ) Dávka (mg/kg)Inhibition of fixed platelet aggregation (Ιϋ _5ο μΜ) Dose (mg / kg)

Inhibice agregace destiček indukované ADP ex vivo % inhibice agregace destiček ex vivo po perorálnim podáníInhibition of ADP-induced platelet aggregation% Inhibition of platelet aggregation ex vivo after oral administration

0,097 (Sloučenina 0,047 EPA 481)0.097 (Compound 0.047 EPA 481)

lh lh 3h 3h 6h 6h 12h 12h 24h 24h 5 5 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 98 98 50 50 5 5 53 53 <20 <20

Ten, kdo má zkušenost v oboru, snadno ocení, že tento vynález je dobře přizpůsoben svému záměru a obdržení zmíněných výsledků a výhod. Sloučeniny , prostředky a způsoby, které se zde popisují, se předkládají jako případy preferovaných ztělesnění nebo se zamýšlejí jako příklady a nejsou určeny jako omezení rozsahu tohoto vynálezu.One of ordinary skill in the art will readily appreciate that the present invention is well adapted to its intent and to obtain the aforementioned results and advantages. The compounds, compositions and methods described herein are presented as examples of preferred embodiments or intended as examples and are not intended to limit the scope of the invention.

Claims (5)

1. Sloučenina obecného vzorce VIIA compound of formula VII O O Ε¹ E² OOO Ε ¹ E ² O P²'-N—(CH₂)p—U—hn—CH—“—N CH—C—GP ² '-N - (CH ₂ ) p - U - hn - CH - "- N CH - C - G A i ^B ch₂co₂p' ve kterémA i ^B ch ₂ co ₂ p 'in which B je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, alkylarylová skupina nebo alkylaralkylová skupina,B is alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, alkylaryl or alkylaralkyl, E^r je atom vodíku,E ^r is a hydrogen atom, E² je alfa-uhlíkový boční řetězec přirozené alfa-aminokyseliny, atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, substituovaná arylová skupina, aralkylová skupina, substituovaná aralkylová skupina, heterocyklylová skupina, substituovaná heterocyklylová skupina, heterocyklylakylová skupina, substituovaná heterocyklylalkylová skupina nebo E¹ a E² spolu s atomy dusíku a uhlíku, ke kterým jsou E^x a E² připojeny, vytvářejí azacykloalkanový 4-, 5-, 6- nebo 7-členný kruh,E ² is the alpha-carbon side chain of the natural alpha-amino acid, hydrogen atom, alkyl group, cycloalkyl group, cycloalkylalkyl group, alkylcycloalkyl group, alkylcycloalkylalkyl group, aryl group, substituted aryl group, aralkyl group, substituted aralkyl group, heterocyclyl group, substituted heterocyclyl group a group, heterocyclylalkyl, substituted heterocyclylalkyl, or E ¹ and E ² together with the nitrogen and carbon atoms to which E ^x and E ^{2 are} attached form an azacycloalkane 4-, 5-, 6- or 7-membered ring, G je skupina OR¹ nebo NR^R²,G is OR ¹ or NR ¹ R ² , R¹ a R² jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, alkylcykloalkylová skupina, alkylcykloalkylalkylová skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, alkylarylová skupina nebo alkylaralkylová skupina, p je 1 až 4,R ¹ and R ² are independently hydrogen, alkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkylcycloalkyl, alkylcycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, alkylaryl, or alkylaralkyl, p is 1-4, P¹ je skupina chránící kyselinu labilní při hydrogenaci aP ¹ is a hydrogenation labile acid protecting group and P² * je P² nebo skupina TFA.H- aP ² * is P ² or a TFA.H- group P² je skupina chránící amin labilní v kyselém prostředí.P ² is an acid labile amine protecting group. 2. Sloučenina podle nároku 1, ve kteréThe compound of claim 1, wherein B je alkylová skupina,B is an alkyl group, E¹ je atom vodíku,E ¹ is a hydrogen atom, E² je cykloalkylalkylová skupina,E ² is a cycloalkylalkyl group, G je skupina NR^R²,G is NR 1 R ² , R^x a R² jsou atomy vodíku a p je 1.R ^x and R ² are hydrogen atoms and p is 1. 3. Sloučenina podle nároku 2, ve které • · « φ · · «φφ φφ φφ φ φφφ φφφ φφφ · φφφ φφ φφ φφφφ φ ·Compound according to claim 2, in which: · «· φ · φ φφφφφφφφφφφφφφφφφφφφ φφφφφφφφ Β je ethylová skupina aEthyl is an ethyl group and E² je cyklohexylraethylová skupina.E ² is a cyclohexylraethyl group. 4. Sloučenina podle nároku 3, ve které p¹ je benzylová skupina aA compound according to claim 3, wherein p ¹ is a benzyl group a P² je skupina TFA.H-.P ² is a TFA.H- group. 5. Sloučenina podle nároku 3, ve které p¹ je benzylová skupina aA compound according to claim 3, wherein p ¹ is a benzyl group a P² je terc.butoxykarbonylová skupina.P ² is a t-butoxycarbonyl group.