CZ384899A3 - Use of active substances and pharmaceutical preparation containing thereof - Google Patents
Use of active substances and pharmaceutical preparation containing thereof Download PDFInfo
- Publication number
- CZ384899A3 CZ384899A3 CZ19993848A CZ384899A CZ384899A3 CZ 384899 A3 CZ384899 A3 CZ 384899A3 CZ 19993848 A CZ19993848 A CZ 19993848A CZ 384899 A CZ384899 A CZ 384899A CZ 384899 A3 CZ384899 A3 CZ 384899A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- leptin
- active
- inhibiting
- salts
- fractions
- Prior art date
Links
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims description 16
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 claims abstract description 141
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 claims abstract description 140
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 claims abstract description 140
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 claims abstract description 137
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 59
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 36
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 36
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 36
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 34
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 32
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 claims description 31
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 29
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 27
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 25
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 25
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 25
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 25
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 25
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 claims description 23
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 23
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 23
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 claims description 22
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 claims description 22
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 21
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 20
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 20
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 102100025087 Insulin receptor substrate 1 Human genes 0.000 claims description 16
- 101710201824 Insulin receptor substrate 1 Proteins 0.000 claims description 16
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 16
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 claims description 15
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 11
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000008747 mitogenic response Effects 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 8
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 7
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 6
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 claims description 2
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 claims description 2
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 claims description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 claims 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 17
- 102100031775 Leptin receptor Human genes 0.000 description 16
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 12
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 11
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 11
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- -1 His Chemical compound 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 7
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 6
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 5
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 5
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000009433 Insulin Receptor Substrate Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010034219 Insulin Receptor Substrate Proteins Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 3
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N Asn-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101001063991 Homo sapiens Leptin Proteins 0.000 description 2
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 2
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 2
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N Met-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 2
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 2
- 102000049953 human LEP Human genes 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 125000000972 4,5-dimethylthiazol-2-yl group Chemical group [H]C([H])([H])C1=C(N=C(*)S1)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- KBIWNQVZKHSHTI-UHFFFAOYSA-N 4-n,4-n-dimethylbenzene-1,4-diamine;oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O.CN(C)C1=CC=C(N)C=C1 KBIWNQVZKHSHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N Asp-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- WXDRGWBQZIMJDE-ULQDDVLXSA-N Leu-Phe-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O WXDRGWBQZIMJDE-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N Lys-Asp-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N Met-Met Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCSC ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Natural products OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 241000157426 Pernis Species 0.000 description 1
- JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N Phe-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- VQBLHWSPVYYZTB-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CO)N VQBLHWSPVYYZTB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 102220497176 Small vasohibin-binding protein_T47D_mutation Human genes 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N Trp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)N)C(O)=O)=CNC2=C1 NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N 0.000 description 1
- CGDZGRLRXPNCOC-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CGDZGRLRXPNCOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N Tyr-Trp Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C([O-])=O)C1=CC=C(O)C=C1 BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001621 anti-mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010983 breast ductal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001734 carboxylic acid salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229960000587 glutaral Drugs 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 description 1
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 1
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 229940118526 interleukin-9 Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N lutein Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\[C@H]1C(C)=C[C@H](O)CC1(C)C KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N 0.000 description 1
- 229960005375 lutein Drugs 0.000 description 1
- ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N 0.000 description 1
- 235000012680 lutein Nutrition 0.000 description 1
- 239000001656 lutein Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108700010839 phage proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035924 thermogenesis Effects 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N trans-lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 108010045269 tryptophyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N xanthophyll Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C=C(C)C(O)CC2(C)C FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/2264—Obesity-gene products, e.g. leptin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Předložený vynález se vztahuje na leptin, cytokin produkovaný adipocytyj θ ovlivňující různé druhy buněk a tkání. Mnohem podrobnější popis předloženého vynálezu se týká nové aplikace leptinu v oblasti onkologie.The present invention relates to leptin, a cytokine produced by adipocytes δ affecting various types of cells and tissues. A much more detailed description of the present invention relates to a new application of leptin in the field of oncology.
Leptin, od adipocytů odvozený cytokin,. regulující tělesnou hmotnost, byl identifikován pozičním klonováním murinového ob genuj ( Zhang se sp.;; 1994); s bylo prokázáno, že ovlivňuje jak příjem potravy,, tak thermogeneziJ ( Campfield se sp.; 1 995; Collins se sp.J 1996; Halaas se sp.J 1995J Pelleymounter se sp.;, 1995*,- Weigle se sp.J 1995 ).Leptin, an adipocyte-derived cytokine. regulating body weight, was identified by positional cloning of the murine gene (Zhang et al . ; 1994); s has been shown to affect both food intake and thermogenesis (Campfield et al. 1,995; Collins et al. 1996; Halaas et al. 1995J Pelleymounter et al., 1995 * Weigle et al. 1995).
Vysoká afinita leptinových vazebných paloh byls lokalizována v choroides plexusj ( cévnětka)J expresivním klonováním cD.N& z uvedené tkáně předpokládaným receptorem, ( OB-S); (Tartaglia se sp.; 1995 ).The high affinity of the leptin binding decks was located in the choroides plexus (J) by expression cloning of cD.N ' from said tissue by the predicted receptor, (OB-S); (Tartaglia et al .; 1995).
Známá působení leptinu jsou zprostředkovány jeho receptorem v hypothalamu. Exprese leptinových receptorů se vyskytujeThe known actions of leptin are mediated by its receptor in the hypothalamus. Leptin receptor expression occurs
i. v dalších orgánech,, zejména v ledvinách,, plicích, a játrech; ( Cioffi se sp.J 1996; Lee se sp.; 1996J Tartaglia se sp.;i. in other organs, particularly in the kidneys, lungs, and liver; (Cioffi et al. 1996; Lee et al .; 1996J Tartaglia et al .;
1995 ). Kromě toho se různý repertoár variací receptorového sestřihu ( receptor -splice),, líšieích se v jejich cytoplazmatické doméně, se u myší projevuje expresí specifickým tkáňovým způsobemj ( Lee se sp.j 1996 ). Proto, kromě kontroly příjmu potravy a tělesné teploty, může leptin vykazovat delší1995). In addition, a different repertoire of receptor splice variations, differing in their cytoplasmic domain, is expressed in mice by specific tissue expression (Lee et al. 1996). Therefore, in addition to controlling food intake and body temperature, leptin may show longer
fyziologické funkce.physiological functions.
I když je leptin produkován adipocyty, nedávné zjištění korelace mezi přebytkem tuku, a vysokými hladinami leptinu v séru,, bylo v rozporu s názorem, že leptin redukuje příjem potravy a tělesnou hmotnostJ( Considin se sp.; 1996; Frederick se sp.J 1995; Lonnquist se sp,; 1995J Msffei se sp,; 1995 )♦ Tato korelace, a spolehlivé doložení vtahů mezi obezitou, a rezistencí vůči inzulínu; ( Felber a GolayJ 1995 ); naznačily,. že leptin může modulovat inzulínem regulované odpovědi.Although leptin is produced by adipocytes, the recent finding of a correlation between excess fat and high serum leptin levels contradicts the view that leptin reduces food intake and body weight (Considin et al .; 1996; Frederick et al. 1995) ; Lonnquist et al, 1995J Msffei et al, 1995) ♦ This correlation, and reliable correlation between obesity and insulin resistance; (Felber and Golay, 1995); suggested. that leptin can modulate insulin-regulated responses.
Ve skutečnosti bylo ale nedávno oznámeno, že leptin signifikantně redukuje bazální a s inzulínem redukovanou tyrosinovou fosforylaci inzulínového receptorového substrétu-1 ( IRSí-1 )»»Toto působení leptinu na IRS-1 fosforylaci bylo spe· cifické, protože tyrosinová fosforylace beta-řetězce inzulino· vého receptorů; (IR), nebyla potlačena·,/ Cohen se sp.; 1996).In fact, however, it has recently been reported that leptin significantly reduces the basal and insulin-reduced tyrosine phosphorylation of insulin receptor substrate-1 (IRS1-1) »» receptor; (IR) was not suppressed., / Cohen se sp .; 1996).
Tyrosinová fosforylace IRS-1 s kinázou IR je klíčovým stupněm’ v rámci inzulínové receptořové signální kaskádyř vedoucí ku četným známým působením inzulínu; ( Araki se sp.;Tyrosine-phosphorylation of IRS-1 by the IR kinase is a key step "in the insulin receptor signaling cascade, leading to numerous of the known insulin; (Araki et al .;
1994rjCheatham a Kahn, 1995J Myers se sp.; 1994; í^yers se sp. 1994· Myers a White; 1993J Rose se sp.J 1994; Tamemoto se sp. 1994J White a Kahn; 1994).1994rj Cheatham and Kahn, 1995J Myers et al .; 1994; iers y sp. 1994 Myers and White; 1993J Rose et al. J 1994; Tamemoto se sp. 1994J White and Kahn; 1994).
Směr signálního působení IRS-1 je zprostředkován několika asociovanými proteiny, z nichž jeden je GRB-2 ~ protein vá zajíci se na receptor růstového faktoru-2 = growth-factor receptor associated binding protein-r2;( Che8tham a Kahn;1995).The signaling direction of IRS-1 is mediated by several associated proteins, one of which is a GRB-2-protein binding to the growth factor-2 receptor (Che8tham and Kahn; 1995).
Inzulihový receptor; (IR); je pogažován za metabolický receptor, zprostředkující působení inzulínu na howeostázu glu kosy„ 8 jako takový je vylučován na terminálně odlišných tkáních, jako je na př. adipózní ( tuková) tkáň; játra; a svaly. Četné studie však prokázaly, že IR je silně účinný mitogenický receptor in vitro a in vivo v případě, kdy je vylučován v tumorových buňkách.Insulin receptor; (IR); it is thought to be a metabolic receptor that mediates insulin action on glucose howeostasis 8 as such is secreted on terminally different tissues such as adipose (adipose) tissue; liver; and muscles. However, numerous studies have shown that IR is a potent mitogenic receptor in vitro and in vivo when secreted in tumor cells.
- 3····· ·· · · · · · ·· · ···« ···· • · · · · ···* • · ··· ······ • · · · · · · · · ···· ·« ··· 9 9 9 9- 3 ··············································· · · · · ··· · «··· 9 9 9 9
Funkční inzulínové receptory byly na příklad identifikovány v několika liniích rakoviny prsu, jak bylo zjištěno tyrosinovou fosforylací inzulínového receptoru, při reakci na léčbu inzulínem* Kromě toho zprostředkovává inzulínový receptor v tědftto buňkách mitogenickou odpověň, jak bylo zjištěno inkorporací /%/4ťt^ymidinu^ ( Milazzo se sp.; 1997J Milazzo se sp.J 1992 ).Functional insulin receptors, for example, have been identified in several breast cancer lines, as determined by insulin receptor tyrosine phosphorylation, in response to insulin therapy. In addition, the insulin receptor mediates a mitogenic response in these cells as determined by incorporation of /% / 4? Milazzo et al .; 1997J Milazzo et al. 1992).
Až dosud nebylo popsáno použití leptinu v oblasti onkologie obecně,·, a zejména leptin nebyl popsán jako použitelný pro inhibici proliferace búněk, zejména proliferace rokovinných buněk.To date, the use of leptin in the field of oncology in general has not been described, and in particular leptin has not been described as being useful for inhibiting cell proliferation, in particular the proliferation of rococo cells.
Předmětem předloženého vynálezu je použití leptinu jako inhibitoru buněčné proliferace,. na příklad použití leptinu, jako inhibitoru proliferace rakovinných buněk.It is an object of the present invention to use leptin as an inhibitor of cell proliferation. for example, the use of leptin as an inhibitor of cancer cell proliferation.
Btelším cílem vynálezu je použití samotného leptinu,, nebo jeho kombinace s dalšími therapeutickými látkami, pro léčbu různých maligních bujení.A more general object of the invention is to use leptin alone, or a combination thereof with other therapeutic agents, for the treatment of various malignant growths.
BalŠím cílem předloženého vynálezu je použití leptinu; leptinových fúzních proteinů; leptinových^muteinů| agonistů leptinového receptoru, účinných fragmen^voe^iioS-iv ze zmíněných složekj. účinných analog nebo derivátů jakékoliv ze zmíněných složek; a solí,, jakékoliv ze zmíněných složek; a směsí jakékoliv ze zmíněných složek;pro léčbu různých typů maligního bujením »··· ·· · ·· • · · · · · · φ · · · · ·A further object of the present invention is to use leptin; leptin fusion proteins; leptin ^ muteins | leptin receptor agonists, effective fragments of the β-IV from said components. active analogs or derivatives of any of said components; and salts thereof, any of said components; and mixtures of any of the foregoing, for the treatment of various types of malignant growth.
Dalším předmětem předloženého vynálezu je použití farmaceutických prostředků, obsahujících jeden, nebo více leptinů* leptinových fúzních proteinů; leptinových muteinů, agonistů leptinového receptoru, účinných fregmen^S^gafeíoliv ze zmíněných složek, účinných analog nebo derivátů jakékoliv ze zmíněných složek* a solí jakékoliv ze zmíněných složek;., pro léčbu různých typů maligního bujení.It is a further object of the present invention to use pharmaceutical compositions comprising one or more leptins * leptin fusion proteins; leptin muteins, leptin receptor agonists, active frigens of any of said components, active analogs or derivatives of any of said components, and salts of any of said components, for the treatment of various types of malignant growth.
Další cíle předloženého vynálezu jsou uvedeny dále* nebo budou snadno petrné z následujícího popisu sOther objects of the present invention are set forth below or will readily be read in the following description p
Předložený vynález se týká použití leptinu jako inhibitoru buněčné proliferace. Leptin může být použitelný buč samotný,, nebo v kombinaci s jinými therapeutickými látkami,, nebo postupy, pro léčbu různých typů maligního bujení.The present invention relates to the use of leptin as an inhibitor of cell proliferation. The leptin may be useful either alone, or in combination with other therapeutic agents, or procedures, to treat various types of malignant growth.
Výhodné provedení vynálezu spočívá v použití leptinu pro inhibici proliferace buněk humánního karcinomu prsu. Proliferace mnohých' typů tumorových buněk je zvýšena za přítomnosti různých růstových faktorů, jako je na příklad inzulín; a IGF-1; ( inzulínu podobný růstový faktor-1 ). Stimulační růstové působení inzulínu a IGF-1 na buňky je zprostředkováno, alespoň zčásti j, prostřednictvím dráhy IRS-1/GRB-2 ( Myers se sp. J 1993 ).A preferred embodiment of the invention is the use of leptin to inhibit the proliferation of human breast cancer cells. Proliferation of many types of tumor cells is enhanced in the presence of various growth factors, such as insulin; and IGF-1; (insulin-like growth factor-1). The stimulatory growth action of insulin and IGF-1 on cells is mediated, at least in part, by the IRS-1 / GRB-2 pathway (Myers et al. J 1993).
Tato dráha je inhibována s leptinem.This pathway is inhibited with leptin.
Kromě toho je IKS-1 substrátem pro receptorové kinázy dalších růstových faktorů* a cytokinů,, včetně IL-4J ( interleukin-4); a IL—9J,( interleukin-9); ( Pernis se sp.J 1995J Yih se sp.* 1995J Yin se sp.J 1994 ).In addition, IKS-1 is a substrate for receptor growth kinases and other cytokines, including IL-4J (interleukin-4); and IL-9J, (interleukin-9); (Pernis et al. J 1995J Yih et al * 1995J Yin et al 1994).
feeptin může tudíž inhibovat mitogenické odpovědi některých, nebo všech zmíněných růstových faktorů a cytokinů*, stejně jako ostatních růstových faktorů, a tedy inhibovat proliferaci různých typů tumorových buněk.feeptin may therefore inhibit the mitogenic responses of some or all of these growth factors and cytokines *, as well as other growth factors, and thus inhibit the proliferation of different types of tumor cells.
Příklady zahrnují inhibici proliferace indukované s IGF-1;Examples include inhibition of IGF-1-induced proliferation;
a s inzulínem indukovanou proliferací buněčných T-47D a MCF7 linií humánní rakoviny prsu.and insulin-induced proliferation of human T-47D and MCF7 cell lines of human breast cancer.
Předložený vynález ae také týká použití leptinu, leptinových fúzníeh proteinů,, leptinových muteinů, agonistů leptinového receptorů,, nebo účinných fragmentů a frakcí jakékoliv. ze zmíněných složek,, nebo solí jakékoliv ze zmíněných složek,, stejně jako farmaceutických prostředků, obsahujících leptin, leptinové fúzní proteiny,, leptinové muteiny,, agonisty leptinového receptorů,, účinné fragmenty nebo frakce, jakékoliv ze zmíněných složek^ nebo sole· jakékoliv ze zmíněných složek,, pro léčbu různých typů maligního bujení»The present invention also relates to the use of leptin, leptin fusion proteins, leptin muteins, leptin receptor agonists, or active fragments and fractions of any. of said components or salts of any of said components, as well as pharmaceutical compositions comprising leptin, leptin fusion proteins, leptin muteins, leptin receptor agonists, active fragments or fractions, any of said components or salts of any of of these ingredients, for the treatment of various types of malignant growth »
Mnohemr specifičtěji se předložený vynález týká použití účinné látky, vybrané ze skupiny obsahující leptin,. leptinové fúzní proteiny,, leptinové muteinym agonisty leptinového receptoru, účinné fragmenty nebo frakce jakékoliv ze zmíněných složek* účinná analóga nebo deriváty jakékoliv ze zmíněných složek,, sole jakékoliv ze zmíněných složek, a směsi jakékoliv ze zmíněných složek,, jako inhibitoru proliferace tumorových buněk-í»More particularly, the present invention relates to the use of an active agent selected from the group consisting of leptin. leptin fusion proteins, leptin mutein leptin receptor agonists, active fragments or fractions of any of the foregoing * active analog or derivatives of any of the foregoing, salts of any of the foregoing, and mixtures of any of the foregoing, as an inhibitor of tumor cell proliferation and"
Provedení výše zmíněných aspektů předloženého vynalezu zahrnuje::Embodiments of the above aspects of the present invention include:
H) -Použití účinné látky jako inhibitoru buněčné proliferace pro léčbu maligního bujení u savcůH) -Use of the active ingredient as an inhibitor of cell proliferation for the treatment of malignant growth in mammals
II) Použití účinné látky jako inhibitoru tumorů, závislých na růstovém faktorůII) Use of the active ingredient as an inhibitor of growth factor-dependent tumors
TTTT) Použití účinné látky jako inhibitoru proliferace buněk humánního karcinomu prsu.TTTT) Use of the active ingredient as an inhibitor of human breast cancer cell proliferation.
IW) Použití účinné látky pro léčbu humánních karcinomu prsu.IW) Use of the active substance in the treatment of human breast cancer.
- 6, • 0 0 · · · · ·· ··· ·· ··- 6, • 0 0 · · · · · · · ·
V) Použití účinné látky jako inhibitoru růstového stimulačního působeni inzulínu; a IGP-1J na tumorové buňky, zprostředkované, alespoň z části, drahou inzulínového receptorového substrátu Ί;( IRS-1/GRB-2 ).V) Use of the active ingredient as an inhibitor of insulin growth stimulatory action; and IGP-1J to tumor cells, mediated, at least in part, by the insulin receptor substrate Ί pathway (IRS-1 / GRB-2).
VI) Použití účinné látky jako inhibitoru mitogenních odpovědí v tumorových buňkách, vůči jedné, nebo více receptorových kinázj růstových faktorů; a cytokinů, ze skupiny obsahující IL-4a IL-9J pro všechny,, u kterých IRS-1 je substrátem;, pro léčbu tumorů..VI) Use of the active agent as an inhibitor of mitogenic responses in tumor cells, against one or more receptor growth factor kinases; and cytokines, from the group comprising IL-4 and IL-9J for all, wherein IRS-1 is a substrate for the treatment of tumors.
VII) Použití účinné látky jako inhibitoru bazální; s IGF-Ti indukované; a s inzulínem indukované proliferace tumorových buněJž pro léčbu humánních rakovin prsu.VII) Use of the active ingredient as a basal inhibitor; IGF-Ti induced; and insulin-induced proliferation of tumor cells for the treatment of human breast cancers.
VIII) Použití účinné látky, kde výše zmíněná účinná látky je leptin, a leptin je použit jako inhibitor, nebo pro léčbu.VIII) Use of an active ingredient, wherein said active ingredient is leptin, and the leptin is used as an inhibitor or for treatment.
Podobně se předložený vynález týká také účinné látky, zvo· lené ze skupiny, obsahující leptin^ leptinové fúzní proteiny, leptinové muteiny; agonisty leptinového receptorů; účinné fragmenty, nebo frakce jakékoliv ze zmíněných složekj; účinná analoga nebo deriváty jakékoliv ze zmíněných složek; sole jakékoliv ze zmíněných složek; a směsí jakékoliv ze zmíněných složek, pro použití při výrobě léčiva,určeného pro inhibici proliferace tumorových buněk.Similarly, the present invention also relates to an active agent selected from the group consisting of leptin-leptin fusion proteins, leptin muteins; leptin receptor agonists; active fragments, or fractions of any of said components ; active analogs or derivatives of any of said components; salts of any of said components; and mixtures of any of said components, for use in the manufacture of a medicament for inhibiting the proliferation of tumor cells.
Provedení z tohoto aspektu vynálezu zahrnuje t* • · · · ·An embodiment of this aspect of the invention includes:
- 7 H) Použití účinné látky pro výrobu léčiva,, určeného pro léčbu maligního bujení u savců*- 7 H) Use of the active substance in the manufacture of a medicament for the treatment of malignant growth in mammals *
ΙΕ) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pto inhibici tumorů závislých na růstovém faktoru*Use of the active substance in the manufacture of a medicament for the inhibition of growth factor-dependent tumors *
IIE) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro inhibici proliferace buněk humánního karcinomu prsu*IIE) Use of the active substance in the manufacture of a medicament for the inhibition of human breast cancer cell proliferation *
IV) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro léčbu humánních karcinomů prsu.IV) Use of the active ingredient in the manufacture of a medicament for use in the treatment of human breast cancers.
V) Použití účinné látky pro výrobu léčiva,určeného pro inhibici růstového stimulačního působení IGF-1J a inzulínu; na tumorových buňkách, zprostředkovaného alespoň zčásti,, drahou IRS-1/GRB.-2*V) Use of an active ingredient for the manufacture of a medicament for inhibiting the growth stimulatory action of IGF-1J and insulin; on tumor cells, mediated at least in part by the IRS-1 / GRB.-2 pathway
VI) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro inhibici mitogenních odpovědí v tumorových buňkách, vůči jedné, nebo více receptorových kinázj růstových faktorů; a cytokinůj ze skupiny, obsahující IGF-1; IL-4} a IL-9J pro všechny, u kterých je IRS-t substrátem; pro léčbu tumorů,VI) Use of an active ingredient in the manufacture of a medicament for inhibiting mitogenic responses in tumor cells to one or more receptor growth factor kinases; and a cytokine from the group comprising IGF-1; IL-4} and IL-9J for all where the IRS-t is a substrate; for the treatment of tumors,
VII) Použití účinné látky pro výrobu léčiva,, určeného pro inhibici bazálníj a IGF-1 indukované; a s inzulínem indukované,, proliferace tumorových buněk; pro léčbu humánních rakovin prsu*VII) Use of an active ingredient for the manufacture of a medicament for inhibiting basal and IGF-1 induced; and insulin-induced tumor cell proliferation; for the treatment of human breast cancers *
VIIE) Použití účinné látky, kde účinnásložka je leptin; a leptin je použit pro výrobu výše zmíněného léčiva.VIIE) Use of the active ingredient wherein the active ingredient is leptin; and leptin is used for the manufacture of the aforementioned medicament.
Podobně i z jiného aspektu,, se předložený vynález týká farmaceutického prostředku, obsahujícího jako účinnou složku účinnou látku, a farmaceuticky vhodný nosič, ředidlo, nebo pomocnou látku, určeného pro.inhibici proliferade tumorových buněk.Similarly, in another aspect, the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising the active ingredient as an active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient for inhibiting tumor cell proliferation.
Z tohoto aspektu provedení vynálezu zahrnuje :In this aspect, embodiments of the invention include:
I) (Farmaceutický prostředek určený pro léčbu maligního bujení u savců.I) (A pharmaceutical composition for treating malignant growth in mammals.
II) Farmaceutický prostředek určený pro inhibici tumorů závislých na růstovém faktoru.II) A pharmaceutical composition for inhibiting growth factor dependent tumors.
III) Farmaceutický prostředek, určený pro inhibici proliferace buněk humánního karcinomu prsu;, a tudíž i pro léčbu humánního karcinomu prsu.III) A pharmaceutical composition for inhibiting the proliferation of human breast cancer cells; and hence for treating human breast cancer.
IV) Farmaceutický prpstředek, určený pro inhibicu růstového stimulačního působení IGF-1J a inzulinuj na tumorových buňkách; a zprostředkovanou alespoň zčásti, drahou IRS-1/ GBR-2.IV) A pharmaceutical composition for inhibiting the growth stimulatory action of IGF-1J and insulin on tumor cells; and mediated at least in part, by the IRS-1 / GBR-2 pathway.
V) Farmaceutický prostředek, určený pro inhibici mitogenních odpovědí v tumorových buňkách,, vůči jedné nebo více receptorových kinázj růstových faktorů; a cytokinů, ze skupiny,, obsahující IL-4J a IL-9J pro všechny, u kterých je IRS-1 substrátem, a tudíž i pro léčbu tumorů»V) A pharmaceutical composition for inhibiting mitogenic responses in tumor cells to one or more growth factor receptor kinases; and cytokines, from the group comprising IL-4J and IL-9J, for all of whom the IRS-1 is a substrate and therefore for the treatment of tumors »
VI) Farmaceutický prpstředek, určený pro inhibici bazální, a s IGF-1 indukované a s inzulínem indukované prolifereceVI) Pharmaceutical composition for inhibiting basal, IGF-1-induced and insulin-induced proliferation
- 9 tumorových buněk; a tudíž i pro léčbu humánních rakovin prdu.9 tumor cells; and hence also for the treatment of human breast cancers.
VII) Farmaceutický prostředek,, ve kterém účinná složka je leptin.VII) A pharmaceutical composition wherein the active ingredient is leptin.
Předložený vynález se také týká postupu pro léčbu tumorů u savců, nebo pro inhibici proliferace tumorových buněk u savců, zahrnujícího aplikaci fertn&ceutického prostředku pacientovi, dle předloženého vynálezu, jak je poznamenáno výše„ ve vhodné lékové formě;- a vhodnými způsoby aplikace.The present invention also relates to a method for treating tumors in a mammal, or for inhibiting the proliferation of tumor cells in a mammal, comprising administering a fertile agent to a patient according to the present invention, as noted above, "in a suitable dosage form;
Takové lékové.· formy; a způsoby aplikace, jsou obvykle určovány praktickými lékaři; po následném vyšetření pacienta,Such dosage forms; and methods of administration are usually determined by the practitioner; after subsequent examination of the patient,
Ost8tní aspekty a provedení předloženého vynálezu, jsou vysvětleny, nebo budou snadno patrné z následujícího podrobného popisu vynálezu,.Other aspects and embodiments of the present invention are explained or will be readily apparent from the following detailed description of the invention.
ίαία
Obrázek 1 )Figure 1)
Demonstruje závislost proliferace T-47D buněk na inzulínu, jak bylo zjištěno barvením s MTT = (3-/4,5-dimethylthiazol2-yl/-2,3-difenylte trazoliumbromid)jDemonstrates insulin dependence of T-47D cell proliferation as determined by staining with MTT = (3- / 4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,3-diphenylthrazolium bromide).
Obrázek 2)Figure 2)
Demonstruje závislost proliferace T-47D buněk na IGF-1 *t jak bylo zjištěno barvením a MTT.It demonstrates the dependence of T-47D cell proliferation on IGF-1 * t as determined by staining and MTT.
Obrázek 3)Figure 3)
Demonstruje inhibici s inzulínem indukované proliferace T-47D buněk v 10%ním sáru hovězího zárodkuj( FBS)J murinovým leptinem, jak bylo zjištěno barvením a MTT.It demonstrates inhibition of insulin-induced proliferation of T-47D cells in 10% bovine fetal bovine (FBS) serum by J murine leptin as determined by staining and MTT.
Obrázek 4)Figure 4)
Demonstruje inhibici s inzulínem indukované proliferace T-47D buněk ve 2%ním FBSJ murinovým leptinem, jak bylo zjištěno barvením s krystalovou violetí.Obrázek 5)Demonstrates the inhibition of insulin-induced proliferation of T-47D cells in 2% FBSJ murine leptin as determined by crystal violet staining. Figure 5)
Demonstruje inhibici proliferace T-47D buněk ve 10%ním FBSJ murinovým leptinem, jak bylo zjištěno barvením s MTT.It demonstrates inhibition of T-47D cell proliferation in 10% FBSJ murine leptin as determined by staining with MTT.
Obrázek 6)Figure 6)
Demonstruje inhibici s IGF-1 indukované proliferace T-47D buněk ve 2%ním FBS; purinovým leptinem, jak bylo zjištěno barvením s krystalovou violetí.Demonstrates inhibition of IGF-1 induced T-47D cell proliferation in 2% mu FBS; purine leptin as determined by crystal violet staining.
Obrázek 7)Figure 7)
Demonstruje inhibici s IGF-1 indukované proliferace T-47D buněk ve 2%ním FBS;, humánním leptinem, jak bylo zjištěno,barvením s krystalovou violetí.It demonstrates the inhibition of IGF-1 induced T-47D cell proliferation in 2% human FBS; by human leptin, as found by crystal violet staining.
Obrázek 8)Figure 8)
Demonstruje inhibici s inzulínem indukované proliferace MCF7 buněk;, v séru prostém mediu, murinovým leptinem, jak bylo zjiš těno barveném s krystalovou vi&letí,.It demonstrates inhibition of insulin-induced proliferation of MCF7 cells in serum-free medium, murine leptin, as found stained with crystal virus.
Obrázek 9)Figure 9)
Demonstruje inhibici s IGF-1 indukované proliferace MCF7 buněk, v séru prostém mediu, s murinovým leptinem, jak bylo zjiě těno barvením s krystalovou violetí.It demonstrates the inhibition of IGF-1-induced proliferation of MCF7 cells, in serum-free medium, with murine leptin as seen by crystal violet staining.
Předložený vynález ae týká použití leptinu jako inhibitoru proliferace tumorových buněk.The present invention relates to the use of leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation.
charakteristické,. Že buněčné linie humánního původu, odvozené od různých typů tumorů, mohou být kultivovány v kulturách za přítomnosti růstového media,doplněného sérem hovězího zárodku;( FBS); v objemové koncentraci cca 10%. Za uvedených podmínek je buněčná proliferace dále definována jako ,,bazální buněčná proliferace”. Růst četných tumorových linií je signifikantně zvýšen v případě, kdy jsou ku výše zmíněnému kultivačnímu mediu,-' doplněném sérem, přidány různé růstové faktory, jako na př. inzulín; epidermélní růstový faktor, nebo IGF-1.characteristic ,. That human-derived cell lines derived from different tumor types can be cultured in cultures in the presence of growth medium supplemented with bovine serum (FBS); 10% by volume. Under these conditions, cell proliferation is further defined as "basal cell proliferation". The growth of numerous tumor lines is significantly increased when various growth factors, such as insulin, are added to the aforementioned culture medium supplemented with serum. epidermal growth factor, or IGF-1.
Po přidání leptinu do růstového media v rozmezí nanomolárních koncentrací od 3 do 600; snižuje se bazální buněčná proliferace; a buněčná proliferace’, závislá na růstovém faktoru.After addition of leptin to the growth medium in the nanomolar concentration range from 3 to 600; basal cell proliferation decreases; and growth factor-dependent cell proliferation.
Výsledky pokusů s buněčnými kulturami, uvedeným v rámci příkladů, publikovanými dále, naznačují použitelnost leptinu pro inhibici růstu různých typů tumorů,, a leptin může být tudíž použitelný pro léčbu různých typů maligního bujení..The results of the cell culture experiments exemplified below illustrate the usefulness of leptin for inhibiting the growth of different tumor types, and leptin may therefore be useful for the treatment of various types of malignant growth.
V rámci výhodného provedenipředloženého vynálezu,, je leptin používán pro inhibici proliferace buněk rakoviny prsu.In a preferred embodiment of the present invention, leptin is used to inhibit the proliferation of breast cancer cells.
V případě, že je leptin přidán ku kulturám T-47D buněk humánního karcinomu mléčných vývodů prsu; ( American Type Cultur Collection; RockvilleJ MDJ kmen číslo ATCC HTB 133 ); je rozsah jejich proliferace potlačen.When leptin is added to T-47D cultures of human breast duct carcinoma cells; (American Type Cultur Collection; RockvilleJ MDJ strain number ATCC HTB 133); their proliferation is suppressed.
Podobně i v případě, kdy je leptin přidán ku kulturám MCF7 buněk humánního adenokarcinomu prsu; ( American Type cultur Collection; Rockville; MD; číslo ATCC HTB 22 ); je rozsah jejich přoliferace redukován. Leptin inhibuje jak bazálnír tak i s IGF-1 indukovanou proliferaci,. tak i s inzulínem indukovanou proliferaci T-47D; a MCF7 buněk.Similarly, when leptin is added to MCF7 cultures of human breast adenocarcinoma cells; (American Type Cultur Collection; Rockville, MD; ATCC HTB Number 22); the extent of their proliferation is reduced. Leptin inhibits both basal r and IGF-1-induced proliferation. both insulin-induced T-47D proliferation; and MCF7 cells.
Leptin může být tedy specificky použitelný pro léčbu karcinomů prsu.Thus, leptin may be specifically useful for the treatment of breast cancers.
• · • · • · • · ·· • · • 9 • ·• 9 • 9
Růstové stimulační působení inzulínu a IGP-1 na buňky, je zprostředkováno alespoň zčásti,, prostřednictvím tyrosinové fosforylace IRS-1J a následnou asociací IRS-1; a GRB-2J která má za následek mitogenní odpověá. Antimitogenní působení leptinu může být důsledkem jeho schopnosti redukovat bazální; inzulínem indukovanou, a s IGP-1 indukovanou, tyrosinovou fosforylaci IRS-1; mající za následek snížení vazeb GRB-2 ku IRS-1Kromě toho je IRS-1 substrátem receptorových kináz,, ostat nich růstových faktorů a cytokinů; včetně IL-4 a IL-9;(Pernis se sp.; 1995J Yin se sp.*, 1995; Yin se sp.*, 1994 )·The growth stimulatory action of insulin and IGP-1 on cells is mediated at least in part by tyrosine phosphorylation of IRS-1J and subsequent association of IRS-1; and GRB-2J which results in a mitogenic response. The antimitogenic action of leptin may be due to its ability to reduce basal; insulin-induced, and IGP-1-induced, tyrosine phosphorylation of IRS-1; resulting in a decrease in GRB-2 binding to IRS-1 In addition, IRS-1 is a substrate for receptor kinases, other growth factors and cytokines; including IL-4 and IL-9; (Pernis et al .; 1995J Yin et al., 1995; Yin et al., 1994) ·
Leptin může tudíž inhibovat mítogenické odpovědi některých, nebo všech zmíněných růstových faktorů, a cytokinů; a stejná jako ostatních mitogenů, a tím tedy i inhibovat proliferaci různých typů tumorových buněk.Thus, leptin may inhibit the pathogenic responses of some or all of said growth factors and cytokines; and the same as other mitogens, thereby inhibiting proliferation of various types of tumor cells.
Předložený vynález se dále vztahuje na leptinové deriváty a analoga, včetně leptinových fúzních proteinů; leptinových muteinůj agonistů leptinového receptorů,, nebo účinných fragmentů nebo frakcí zmíněných složek*,, a solí zmíněných složek,, a farmaceutických prostředků, obsahujících leptin; leptinové fúzní proteiny; leptinové muteiny;, agonisty leptinového receptoru, účinné frakce zmíněných složek,, nebo soievzfeíněných složek, pro léčbu různých typů rakovin.The present invention further relates to leptin derivatives and analogs, including leptin fusion proteins; leptin muteins of leptin receptor agonists, or active fragments or fractions of said components and salts of said components, and pharmaceutical compositions comprising leptin; leptin fusion proteins; leptin muteins; leptin receptor agonists, an effective fraction of said components, or of said compounds, for the treatment of various cancers.
V předloženém textu používaný výraz ,,muteiny”; se vztahuje na analoga leptinu; ve kterých jeden,, nebo více zbytků aminokyseliny, je nahražen odlišnými zbytky aminokyseliny,, nebo jsou vypuštěny;, nebo jeden, nebo více zbytků aminokyseliny, jsou připojeny ku původní sekvenci leptinu,, aniž dochází ku významné změně účinnosti výsledných produktů, ve srovnání s divokými typy leptinu, nebo jeho účinných fragmentů, nebo frakcíZmíněné muteiny jsou připravovány známými synthetickými postupy, a/nebo polohově směrovanými technikami mutagenéze, ·· 99As used herein, the term "muteins"; refers to leptin analogs; in which one or more amino acid residues is replaced by different amino acid residues or deleted, or one or more amino acid residues are attached to the original leptin sequence, without significantly altering the efficacy of the resulting products as compared to wild type leptin, or active fragments thereof, or fractions thereof. Muteins are prepared by known synthetic procedures and / or site directed mutagenesis techniques.
9 99 9
- 14 ·♦·· nebo nějakými jinými, známými vhodnými technikami.,- 14 · ♦ ·· or by some other known techniques,
Jakýkoliv . z těchto muteinů,, má/ výhodnou sekvenci aminokyselin, dostatečně duplicitní k leptinu,, takže v podstatě vykazuje podobné působení jako leptinr nebo jeho účinné fragmenty,, nebo frakce.Any . of these muteins, has / preferably an amino acid sequence sufficiently duplicate to leptin such that it exhibits substantially similar activity to leptin r or active fragments thereof, or fractions.
Lze tedy pomocí rutinního experimentování posoudit„ zda nějaký určitý mutein( na příklad jednoduchlou metodou buněčné proliferacekterý blokuje buněčnou proliferaci, vykazuje dostatečnót^účinnost leptinu, a proto tedy alespoň jedno? z popfeaných použití. leptinu; a tedy v podstatě i podobnou účinnost.Thus, one may judge by routine experimentation whether any particular mutein (for example, by a simple cell proliferation method that blocks cell proliferation, exhibits sufficient leptin activity, and therefore at least one of the leptin uses described), and thus substantially similar activity.
V rámci výhodného provedení je každý tahový mutein,, alespoň ze 40%*, identický nebo homologický se sekvencí jednoho z leptinů.In a preferred embodiment, each tensile mutein, at least 40% *, is identical or homologous to the sequence of one of the leptins.
Mnohem výhodněji vykazuje alespoň 50,0%; alespoň 60,0%; alespoň 70,0%; alespoň 80,0%; nebo nejvýhodněji alespoň 90,0% identity,, nebo homologie.More preferably, it has at least 50.0%; at least 60.0%; at least 70.0%; at least 80.0%; or most preferably at least 90.0% identity, or homology.
Muteiny leptinu,. nebo jeho účinné fragmenty,, nebo frakce mohou být proto použity dle předloženého vynálezu, nebo kódování nukleové kyseliny, včetně konečného uspořádání, odpovídajícího v podstatě sekvencím jako substituce peptidů,, nebo nukleotidů, které mohou být rutině získávány, bez zbytečného experimentování, jedním z běžných postupů v této oblasti, založeném na poznatcích a pokynech, uvedených v předloženém textu.Lutein muteins ,. or active fragments thereof, or fractions thereof may therefore be used according to the present invention, or encoding a nucleic acid, including a finite sequence corresponding essentially to sequences as peptide substitutions, or nucleotides, which can be routinely obtained without undue experimentation, by one of the conventional procedures in this area, based on the knowledge and guidance given in the present text.
Podrobnější popis chemie proteinů, a struktur; je uveden v následujících odborných publikacích; citovaných dále v literárních odkazech; t.j. Schulz G.E., se sp.; Principles of Protein Strueture; Springer-Verlag; New York; 1978; a Creighton T.E.; Proteins Strueture and Molecular PropertiesJ W.H. Freeman CO.;, San Francisco, 1983 ), • · ♦· » · · 1 » · · 1A more detailed description of protein chemistry and structures; it is listed in the following specialist publications; cited below in references; i.e. Schulz G.E., sp .; Principles of Protein Strueture; Springer-Verlag; New York; 1978; and Creighton T.E .; Proteins Strueture and Molecular Properties J. W.H. Freeman CO., San Francisco, 1983), 1
- 15 Popis substitucí sekvencí nukleotidů, jako jsou na př. preference kodónů; viz Ausubel se sp.J paragrafy A. 1.1. - A. 124; ( viz literární odkazy uvedené dále), a Sambrook se sp»< Current Protocols in Molecular BiologyJ Interscience, N.Y.; paragrafy 6.2L a 6.4J ( 1987,, 1992 ); u dodatků Ca®.Description of nucleotide sequence substitutions, such as codon preferences; see Ausubel et al., paragraph A. 1.1. - A. 124; (See references cited below), and Sambrook et al., Current Protocols in Molecular Biology J. Interscience, N.Y .; paragraphs 6.2L and 6.4J (1987, 1992); for Ca® supplements.
Výhodné změny muteinů, týkající se předloženého vynálezu, jsou ty, které jsou známy jako , „konzervativní ’’ substituce. Konzervativní substituce aminokyselin leptinových polypeptidů, nebo prpteinů, nebo jejich účinných fragmentů, nebo frakcí, mohou zahrnovat synonymníaminokyseliny; včetně skupin,, které mají dostatečně podobné fyzikálně-chemické vlastnosti;, takže suhstituce mezi členy skupiny ochrání biologickou funkci molekuly.Preferred mutein changes related to the present invention are those known as " conservative " substitutions. Conservative amino acid substitutions of leptin polypeptides, or proteins, or active fragments or fractions thereof, may include synonymous amino acids; including groups having sufficiently similar physicochemical properties, so that substitution between members of the group will protect the biological function of the molecule.
GranthamJ Scienoe^ VPl.~185 strany 862-864^/4974/½Grantham J. Scienoe ^ VP1. ~ 185 pages 862-864 ^ / 4974 / ½
Je zřejmé, že zabudování, nebo vypuštění aminokyseliny, m$že být také reaJLizováno ve výše definovaných sekvencích, aniž dochází ku změnám jejich funkce, zejména když zabudování, nebo vypuštění, zahrnuje pouze malý počet aminokyselin; na př. méně než 30J a výhodně méně než 10J a není spojeno s vypuštěním, nebo nahražením aminokyselin.,, které jsou kritické pro funkční konformaci; na příklad zbytky cysteinu.It will be appreciated that incorporation or deletion of an amino acid can also be realized in the sequences defined above without altering their function, particularly when incorporation or deletion involves only a small number of amino acids; e.g., less than 30 J and preferably less than 10 J and is not associated with the deletion or replacement of amino acids that are critical to functional conformation; for example cysteine residues.
Anfinsen; ,,Principles That Govern The Folding of Protein Chains; Science; Vol. 181; strany 223 - 230;: ( 1973).Anfinsen; ,, The Principles That Govern The Protein Chains; Science; Vol. 181; pages 223-230; (1973).
Proteiny,, a muteiny, produkované takovým vypuštěním, nebo zabudováním ; jsou v rámci předloženého vynálezu uvedeny.Proteins, and muteins produced by such deletion or incorporation; are within the scope of the present invention.
Výhodné jsou skupinyjsynonymních aminokyselin, uváděné dále v Tabulce i).Preferred are the synonymous amino acid groups listed in Table i) below.
Výhodnější jsou skupiny synonymních aminokyselin, uváděné dále v Tabulce II).More preferred are the synonymous amino acid groups listed below in Table II).
Nejvýhodnější jsou skupiny synonymních aminokyselin, uváděné dále v Tabulce III)..Most preferred are the synonymous amino acid groups listed in Table III below.
» er«« tt · ·· φ» • · 9 ···· « « * « • · 9 · · · · » ·Er t t t t 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
TABULKA 1-55.TABLE 1-55.
Výhodné skupiny synonymních aminokyselin :Preferred groups of synonymous amino acids:
Trp Trp;Trp Trp;
• t · ··• t · ··
·· ·*··»' • ♦ · · · * · ·1· «0 ·*·· · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·
TABULKA IL)TABLE IL)
Výhodnější skupiny synonymních aminokyselin; zMore preferred groups of synonymous amino acids; of
toto·· •to • to • · · «ι • to· · • «to to • «· · • to totothis • to • to • to • to this
TABULKA lil)TABLE lil)
Nejvýhodnější skupiny synonymních aminokyselin :Most preferred groups of synonymous amino acids:
Aminokyselina:Aminoacid:
SerSer
Arg ^euArg ^ eu
ProFor
ThrThr
AlaAla
ValWall
GlyGly
IleIle
PhePhe
TyrTyr
ČJysČJys
HisHis
GinGin
AsnAsn
LysLys
AspAsp
GluGlu
MetMet
TrpTrp
Šynonymní skupinaA synonymous group
Ser*,Ser *,
Arg;Arg;
Leu, Ile, Met;Leu, Ile, Met;
ProJProJ
Thr*,Thr *,
Ala;Ala;
Val;Wall;
Gly*,Gly *,
Ile, Met, LeuJ Phe*,Ile, Met, LeuJ Phe *
Tyr;Tyr;
Cys, Ser; hís;Cys, Ser; hís;
Gin;Gin;
AsnJAsnJ
Lys*,Lys *,
Asp;Asp;
giu;giu;
Met,, Ile, Leu; Met*, • · • · • ·Met, Ile, L eu; Met *,
- t9 Příklady provádění substitucí aminokyselin v proteinech, které mohou být použity pro získání muteinů leptinu,, nebo jeho účinných frakcí, v rámci použití předloženého vynálezu,, včetně jakýchkoliv známých metodických kroků, uvedených na př. v US patentech EE 33,653*,, 4,959,314; 4,,588.585; a 4,737.462; (Mark se sp. )J 5,116,943; ( Koths se sp. ); 4,965.195^ ( Namen se sp. )J 4,879,111; ( Ghang se sp. )J a 5,017,691;(Lee se sp. );* θ lysinem substituované proteiny; uvedené v US ρβtentu číslo 4,904,584;( Shaw se sp. ),Examples of making amino acid substitutions in proteins that can be used to obtain leptin muteins, or active fractions thereof, within the scope of the present invention, including any known method steps, such as those disclosed in, for example, U.S. Pat. ; 4, 588,585; and 4,737,462; (Mark et al.) J 5,116,943; (Koths se sp.); 4,965,195- (Namen se sp.) J 4,879,111; (Ghang with sp.) J and 5,017,691; (Lee with sp.); * Θ lysine substituted proteins; listed in U.S. Patent No. 4,904,584 (Shaw se sp.),
V rámci jiného výhodného provedení předloženého vynálezu, má jakýkoliv muteim leptinu„ nebo jeho účinná frakce,, určené pro použití dle předloženého vynálezu, sekvenci aminokyselin, v podstatě odpovídající sekvenci leptinu.In another preferred embodiment of the present invention, any leptin muteim "or effective fraction thereof" to be used according to the present invention has an amino acid sequence substantially corresponding to the leptin sequence.
Výraz ,, v podstatě odpovídající je uvažován pro souhrné proteiny, s menšími změnami,, vzhledem ku sekvenci přirozeného proteinu; které neovlivňují základní charakteristiky přirozených proteinů, pokud jejich schopnost inhibovat buněčnou proliferaci,, je zajímavá.The term "substantially corresponding" is intended for summary proteins, with minor changes, relative to the natural protein sequence; which do not affect the essential characteristics of natural proteins if their ability to inhibit cell proliferation is of interest.
Typ změn, obecně uvažovaných a zahrnutých do výrazového vyjádření ,,, v podstatě odpovídající jsou takové, které by mohly vyplývat z konvenčních technik mutagenéze DNA kódující leptin, a resultUjící do několika mál® modifikací a prozkoumání ( screening) žádané účinnosti způsobem; diskutovaným výše.The type of changes generally contemplated and included are essentially those that could result from conventional leptin-encoding DNA mutagenesis techniques resulting in several modifications and screening of the desired efficacy; discussed above.
Muteiny, v souhlase s předloženým vynálezem, se týkají proteinů Z8kódovvných s nukleovou kyselinou, jako na příklad a DNA;, nebo RNA;, které hybridizují DNA nebo RNA, kódujících za striktních podmínek leptin; v souhlase s předloženým vynálezem. Takový typ nukleové kyseliny by mohl být nejvhodnějším kandidátem pro určení,, zda kóduje polypeptid, který vykazuje dle předloženého vynálezu, funkční účinnost leptinu.Muteins, in accordance with the present invention, relate to nucleic acid Z8 proteins such as DNA and RNA which hybridize to DNA or RNA encoding leptin under stringent conditions; in accordance with the present invention. Such a type of nucleic acid could be the most suitable candidate for determining whether a polypeptide that exhibits the present invention encodes the functional efficacy of leptin.
Výraz ,„striktní podmínky, se vztahuje na hybridizaciThe term "strict conditions" refers to hybridization
á následné podmínky promýván!, které jsou v rámci odborné praxe konvenčně označovány jako , „striktní ♦which are conventionally referred to as "strict" in practice
Viz také Ansubel ae sp.J Current Protocols in Molecular BiologyJ Interscience„ N.Y.; paragrafy 6.3. a 6.4. J(1987,See also Ansubel et al., J. Current Protocols in Molecular Biology J. Interscience "N.Y .; paragrafy 6.3. and 6.4. J (1987)
1992); a Sambrook se sp.J viz výše.1992); and Sambrook et al., supra.
Bez omezení zahrnují příklady ,,striktních podmínek” podmínky promývání při teplotách 12,0 - 20,0°e; nižších než předpokládaná teplota studovaného hybridu; na př. 2 x SSC; a 0,5%Without limitation, examples of "stringent conditions" include washing conditions at temperatures of 12.0-20.0 ° e; lower than expected temperature of the hybrid being studied; eg 2 x SSC; and 0.5%
SDS po dobu 5 minut; 2 x SSC β 0,10% SDS po dobu 15 minut;SDS for 5 minutes; 2 x SSC β 0.10% SDS for 15 minutes;
0,1 x SSC a 0,5% SDS při teplotě 37,O°C po dobu 30 - 60 minut; a poté 0,1 x SSC a 0,5% SDS při teplotě 68,0°C; po dobu 30 60 minut.0.1 x SSC and 0.5% SDS at 37.0 ° C for 30-60 minutes; followed by 0.1 x SSC and 0.5% SDS at 68.0 ° C; for 30 60 minutes.
Běžný odborný přístup v této oblasti předpokládá^ že ,,.striktní podmínky záleží také naudéle© sekvence DNA; prób oligo nukleotidů; ( na příklad 10 až 40 baží), nebo smíšených přóbách oligonukleotidů.Conventional approaches in the art assume that stringent conditions also depend on the next DNA sequence; probes oligo nucleotides; (e.g., 10 to 40 bases), or mixed probes of oligonucleotides.
V případě použití smíšených prób je výhodné použít tetramethylamoniumchlorid; ( TMAC); místo SSC. Viz také Ausubel; citovaný výše.If mixed probes are used, it is preferred to use tetramethylammonium chloride; (TMAC); instead of SSC. See also Ausubel; cited above.
Výraz ,, leptinové fúzní proteiny”; nebo jednodušeji ,,fúzní proteiny, se vztahuje na poíypeptid, obsahující leptin,. nebo jeho účinné frakce, nebo muteiny zmíněných složek, zfázované s jiným proteinem, který vykazuje delší dobu zádrže v tělních tekutinách. Leptin, nebo jeho účinné frakce, mohou být fúzovány s jímým proteinem, polypeptidem. nebo podobně.The term "leptin fusion proteins"; or more simply, fusion proteins refer to a leptin-containing polypeptide. or an active fraction thereof, or muteins of said components, phased with another protein that exhibits a longer residence time in body fluids. The leptin, or active fractions thereof, may be fused to its protein, polypeptide. or similarly.
Výraz ,,sole, uváděný v předloženém textu, se vztahuje jak na sole karboxylových skupin·,' tak kyselé adiční sole aminových skupin leptinu, jeho účinných frakcí;, muteinů; nebo jeho leptinových fúzních proteinů.The term "salts" as used herein refers to both the carboxylic acid salts and the acid addition salts of the amine groups of leptin, its active fractions, muteins; or leptin fusion proteins thereof.
Sole karboxylové skupiny áiohou být připraveny pomocí běžně známých postupů v této oblasti;, a zahrnují anorgsnické sole; na příklad sodné;, vápen^W^v^elezité; nebo zinkové sole,, a podobně^ a sole s organickým bázemi; připravovanými na př.Salts of the carboxyl group may be prepared by methods known in the art, and include inorganic salts; for example, sodium; lime; or zinc salts, and the like, and salts with organic bases; prepared for ex.
a aminy} jako je na příklad triethenolamin;, arginin; nebo lysin, piperidin; prokainf a podobně.and amines} such as triethenolamine; arginine; or lysine, piperidine; procainf and the like.
Kyaelé adiční sole zahrnují na příklad sole s minerálními kyselinami, jako je na příkliad kyselina chlorovodíková, nebo sírová; a sole s organickými kyselinami; jako je na příklad kyselina octová; a oxalová}( ethandiová kyselina).Acid addition salts include, for example, salts with mineral acids such as, for example, hydrochloric acid or sulfuric acid; and salts with organic acids; such as acetic acid; and oxalic} (ethanedioic acid).
Všechny takové sole musí vykazovat v podstatě podobnou účinnost jako leptin}, nebo jeho účinné frakce.All such salts must exhibit substantially similar activity to leptin or its active fractions.
,,Funkční deriváty; výraz používaný v předloženém textu,, se vztahuje na deriváty leptinuj nebo jeho účinné fragmenty; nebo frakce; 8 jeho muteiny; a leptinové fúzní proteiny, které mohou být připraveny z funkčních skupin,, které se vyskytují jako vedlejší řetězce na zbytcích} nebo N-J nebo C-} terminálních skupinách, běžně známými postúpy, a jsou zahrnuty do předloženého vynálezu, pokud zpstavají stále farmaceuticky akceptovatelné, což na příklad znamemá, že nenarušují účinnost proteinu, který je v podstatě svou účinností podobný leptinu; a nevykazují ve farmacutickém prostředku, který jej obsahujeT toxické působení.Functional derivatives; as used herein, refers to leptinate derivatives or active fragments thereof; or a fraction; 8 its muteins; and leptin fusion proteins, which may be prepared from functional groups that occur as side chains on residues or NJ or C-} terminal groups, by known methods, and are included in the present invention as long as they still remain pharmaceutically acceptable, which means, for example, that they do not interfere with the activity of a protein that is substantially similar to leptin; and do not exhibit a T- toxic effect in a pharmaceutical composition comprising it.
Tyto deriváty mohou zahrnovat na příklad polyethylanglykolové postranní řetězce,, které mohou maskovat antigenní polohy}, a zvyšovat působení leptinu;, nebo jeho účinných frakcí v tělesných tekutinách.Such derivatives may include, for example, polyethylene glycol side chains, which may mask antigenic positions, and enhance the action of leptin or its active fractions in body fluids.
Jiné deriváty zahrnují alifatické estery karboxylových skupin; amidy karboxylových skupin, získané reakcí s amoniakem; nebo s primárními,, nebo sekundárními aminy.Other derivatives include aliphatic esters of carboxyl groups; amides of carboxyl groups obtained by reaction with ammonia; or with primary, or secondary amines.
N-acylové deriváty volných aminoskupin zbytků aminokyselin se připraví s acylovými podíly} ( na př, alkanoylovér nebo karbocyklické aroylové skupiny); nebo O-acylové deriváty volných hydroxylových skupin}( napřáklad serylové}. nebo threonylové zbytky); připravené s acylovými podíly.N-acyl derivatives of free amino groups of the amino acid residues are prepared with acyl portions} (for instance, r alkanoyl or carbocyclic aroyl groups); or O-acyl derivatives of free hydroxyl groups (e.g., seryl} or threonyl residues); prepared with acyl moieties.
,,Aktivní fragmenty nebo frakce leptinuj leptinových • · • ·,, Active fragments or fractions leptin leptin •
- 22 muteinů, fúzních proteinů; uváděných v předloženém vynálezu, sé^týkají jakéhokoliv fieagmentu,, nebo prekurzorů polypetidového řetězce leptinu,, nebo fúzních proteinů, obsahujících takový fragment samotného leptinu, nebo s asociovanými tyolekulamí^zbytků, spojených s výše zmíněnými složkami; jako jsou na příklad cukerné,, nebo fosfátové zbytky; nebo shluky, jakéhokoliv ze zmíněných drivátů; za předpokladu,, že frakce vykazuje významně podobnou účinnost a leptinem.- 22 muteins, fusion proteins; disclosed in the present invention are any fusion or precursors of the leptin polypeptide chain or fusion proteins comprising such a fragment of leptin alone, or associated thyolytic residues associated with the above components; such as sugar or phosphate residues; or clusters of any of the foregoing; provided that the fraction exhibits significantly similar potency and leptin.
Předložený vynález se dále týká přirozených a synthetických agonistů leptinového receptorů, které jsou z hledisek svých vlastností schopné inhibovat buněčnou proliferaci, významně podobnou leptinu.. Takový typ agonistů může být vybrán z knihovny peptidů; knihovny analog peptidů; nebo knihovny náhodných organických molekul». Výběr se provádí postupy, běžně známými odborníkům v příslušné oblasti; hlavně na základě vybraných agonistů vázat se ku leptinovému receptorů..The present invention further relates to natural and synthetic leptin receptor agonists which, in view of their properties, are capable of inhibiting leptin-like cell proliferation. Such type of agonists may be selected from a peptide library; peptide analog libraries; or a library of random organic molecules ». Selection is accomplished by procedures well known to those skilled in the art; mainly on the basis of selected agonists to bind to leptin receptors.
Na příklad knihovna náhodných peptidů může být připravena jako prokaryotická exprese plasmidů,, vykazujících kódování DNA u náhodných peptidů, připojených ku proteinu-nosiči.For example, a library of random peptides can be prepared as prokaryotic expression of plasmids displaying DNA encoding of random peptides attached to a carrier protein.
Další příklad zahrnuje fágový rozvinutý systém, ve kterém expresivní systém představuje fág, obsahující DNA' kódující náhodný- peptlá;, zabudovaný do jednoho z fágových proteinů. Kódované fágy pro agonisty fúzních peptidů:, nebo antagonistů, jsou izolovány; z knihovny fágů; t.j.panorámováním nad povrchy obalenými s leptinovými receptory. Vázané fágy jsou izolovány’, a poté amplifikovány v bakteriích.· ^ěkolik sérií panorámovaní-amplifikací je obvykle zepotře· bí pro získání fágů vylučujících fúzní peptidy, které mají vysokou afinitu pro leptinové receptory. Izolovaný fág je poté amplifikaván,, a je určena sekvence kódující DNA pro peptid..Another example includes a phage deployed system in which the expression system is a phage containing DNA encoding random peptides incorporated into one of the phage proteins. Encoded phages for fusion peptide agonists, or antagonists, are isolated; from a phage library; i.e., panning over surfaces coated with leptin receptors. Bound phages are isolated and then amplified in bacteria. Several series of panning-amplifications are usually required to obtain phages secreting fusion peptides having high affinity for leptin receptors. The isolated phage is then amplified and the DNA coding sequence for the peptide is determined.
Alternativně lze běžnými postupy, známými odborníkům; vAlternatively, conventional methods known to those skilled in the art may be used; in
I « · · · · ··I «· · · ···
- 23 příslušné oblasti, připravit knihovny náhodných peptidů,, nebo knihovny jiných molekul,, synthesou pevné fáze na polymerních perličkách. Perličky s peptidem,, nebo jinou molekulou, vykazující afinitu pro leptinový receptor,, jsou vybrány z knihovnyJ na příklad vazbou značeného leptinového receptorů; na příklad fluorescencí značeného leptinovho receptorů.23 to prepare a library of random peptides, or libraries of other molecules, by solid phase synthesis on polymer beads. Beads with a peptide, or other molecule having affinity for the leptin receptor, are selected from a library, for example, by binding labeled leptin receptors; for example, fluorescently labeled leptin receptors.
Kladně reagující perličky jsou shromážděny;, a je určena struktura peptidů, nebo jiné molekuly, zachycených na perličce.. V případě,, že perlička je nosičem peptidur je stanovena sekvence peptidů analysou sekvence proteinu.Positive beads are then picked ;, and is determined by the structure of the peptide or other molecule present on the bead ,, .. If the bead carries a peptide R peptide sequence is determined Analysis of the protein sequence.
V případě, že perlička je typická pro náhodné organické molekuly z knihovny, potom je molekula z perličky odštěpena, a její struktura je určena běžnými postupy, známými odborníkům v příslušné oblasti, jako je například hmotnostní spektrometrie; nukleární magnetická rezonance; a podobně»When the bead is typical of random organic molecules from the library, the bead molecule is cleaved, and its structure is determined by conventional techniques known to those skilled in the art, such as mass spectrometry; nuclear magnetic resonance; etc"
Pro další studie jsou potom uvažovány peptidy, identifikované na základě jejich afinity ku leptinovému receptorů; a poté jsou dále tříděny na základě schopností inhibovat proliferace už výše zmíněným způsobem.For further studies, peptides identified by their affinity for leptin receptors are then contemplated; and then sorted further on the basis of their ability to inhibit proliferation in the aforementioned manner.
' Keptin, jeho účinné frakce;, leptinové muteiny;, leptinové fúzní proteiny; agonisté leptinového receptorů; a jejich sole; funkční deriváty; a účinné fragmenty nebo frakce zmíněných sloučenin, indikovaný pro léčbu různých typů maligního bujení, jsou proto výhodné pro léčbu tumorů závislých na růstovém faktoru; a ještě výhodnější pro léčbu karcinomu prsu»Keptin, its active fractions, leptin muteins, leptin fusion proteins; leptin receptor agonists; and salts thereof; functional derivatives; and effective fragments or fractions of said compounds, indicated for the treatment of various types of malignant growth, are therefore advantageous for the treatment of growth factor-dependent tumors; and even more beneficial for the treatment of breast cancer »
Předložený vynález se dále vztahuje na použití farmaceutických prostředků,, obsahujících farmaceuticky vhodný nosič a leptin,. zahrnutý do vynálezu,, nebo jeho účinné muteiny, fúzní proteiny,, agonisty leptinového receptorů, a jejich sole·,, funkční deriváty; nebo jejich účinné frakce»The present invention further relates to the use of pharmaceutical compositions comprising a pharmaceutically acceptable carrier and leptin. encompassed by the invention, or its active muteins, fusion proteins, leptin receptor agonists, and salts thereof, functional derivatives; or their active fractions »
Farmaceutické prostředky,, týkající se vynálezu,, lze pro • · · ·The pharmaceutical compositions of the invention may be
léčebnou aplikaci připravit smíšením leptinu,, nebo jeho derivátů, nebo agonistů leptinového receptorů; s fyziologicky vhodnými nosičií a/nebo stabilizátory^ a/nebo pomĎcnými látkami,, a připravenými v lékové formě; na příklad lyofilizaci v ampulce..to prepare the therapeutic application by mixing leptin, or derivatives thereof, or leptin receptor agonists; with physiologically acceptable carriers and / or stabilizers and / or excipients and formulated; for example, lyophilization in an ampoule.
Způsob?. aplikace může být realizován bučí jakýmkoliv akceptovatelným postupem aplikace u podobných látek;, a bude záležet na podmínkách léčby; na příklad intravenózně;, subkuténěj, lokální injekcí; nebo povrchovou aplikací;, nebo kontimuální infúzí; atd.Way?. administration may be accomplished by either any acceptable route of administration for similar agents; and will depend upon the conditions of treatment; for example intravenously; subcutaneously by local injection; or by topical application; or by continuous infusion; etc.
Množství účinné sloučeniny, která má být aplikována; záleží na způsobu.^aplikace; nemoci, která má být léčena,, a stavu pacienta.Amounts of active compound to be administered; depends on the method of application; the disease to be treated, and the condition of the patient.
Na příklad lokální injekce vyžaduje, na základě tělesné hmotnosti, menší množství proteinu;, než intravenózní infúze. Typická účinná množství leptinu, která msjí být aplikována injekčněj se pohybují v rozmezí 0,1 - 1000 mikrogramů/ kg tělesné hmotnosti;, a výhodně v rozmezí od 1,0 do 10,0 mikrogr8mů/kgFor example, local injection requires, based on body weight, less protein than intravenous infusion. Typical effective amounts of leptin to be injected are in the range of 0.1-1000 micrograms / kg body weight; and preferably in the range of 1.0-10.0 micrograms / kg.
Účinná množství derivátů leptinu a agonistů leptinového receptorů mohou být na molární bázi v podstatě stejná; jako u leptinu..Effective amounts of leptin derivatives and leptin receptor agonists may be substantially the same on a molar basis; like leptin ..
Leptin může být aplikován pacientům trpících rakovinou, na příklad injekčně; 8 to buá samotný,, nebo v kombinaci s ostatními therapeutickými látkami; nebo v kombinaci s ostatními therapeutickými postupy»Leptin can be administered to cancer patients, for example by injection; It is either alone or in combination with other therapeutic agents; or in combination with other therapies »
Vynález může být také demonstrován následujícími, neomezujícími Příklady, publikovanými na dalších stranách» • · · ·The invention may also be illustrated by the following, non-limiting Examples, published on other pages.
- 25; ___2-S-.2-S_®_É-£-S_í___Y_y_2_á_l_e_z_u- 25; ___ 2-S-.2-S_®_É- £ -S_ ___ Y_y_2_á_l_e_z_u
Příklad 1 )Example 1)
Stanovení buněčné proliferace barvením s MTT.Determination of cell proliferation by staining with MTT.
R'-. e a g e ni s ::R'-. e a g e s ::
MTT zásobní roztok :MTT Stock Solution:
(3-/4,ř5-dime thyIthia zol-2-yl/-2,5-difenylte tra zolium bromid J 5,0 mg/mlJ ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku,který je uchováván před použitím při teplotě minus 20,0°C.(3/4, R 5 thyIthia dimethyl benzimidazol-2-yl / 2,5-diphenyl tra zolium bromide J 5.0 mg / MLJ in phosphate buffered saline which is kept prior to use at a temperature of minus 20.0 Deň: 32 ° C.
Rozpouštědlo :Solvent:
Koncentrovaná kyselina chlorovodíková;( 450 mikrolitrů; ve 100,0 mlj 2-propanolu.Concentrated hydrochloric acid (450 microliters; in 100.0 ml of 2-propanol).
Postup::Method::
Kultura rostoucích buněk na destičkách opatřených 96 jamkami; za přítomnosti růstových stimulátorů; a růstových inhibitorů.Growing cell culture on 96-well plates; in the presence of growth promoters; and growth inhibitors.
V požadovaném čase se přidá do každé z jamek destičky 10 mikrolitrů roztoku MTT; a inkubuje se 2,5 až 3,0 hodiny; při teplotě 37,0°C.At the desired time, 10 microliters of MTT solution is added to each well of the plate; and incubating for 2.5 to 3.0 hours; at 37.0 ° C.
Po odsátí supernatantu za vakua, pomocí čisté kalibrované jehlyj se přidá 100,0 mikrolitrů rozpouštědla;( jehož příprava je popsána teýše)J a odečte se absorbance pomocí odečítacího zařízení destiček; při použití filtru 570 nmj a po ode čtení pozadí při 630 nm.After aspirating the supernatant under vacuum, using a clean calibrated needle, add 100.0 microliters of solvent (as described above) J and read the absorbance using a plate reader; using a 570 nmj filter and after reading the background at 630 nm.
Příklad 2)Example 2)
Stanovení buněčné proliferace barvením a krystalovou violetí.Determination of cell proliferation by staining and crystal violet.
P o a t u p i:P o a t u at:
Kultura rostoucích buněk v destičkách opatřených 96 jamkami, za přítomnosti různých růstových stimulátorů; a růstových inhibitorů.Culture of growing cells in 96-well plates in the presence of various growth stimulators; and growth inhibitors.
V požadovaném čase se přidá do každé jednotlivé jamky destiček 40 mikrolitrů 1 2,5% glutar aldehydu;;.·( .40 mikrolitrů), a destičky se inkubují po dobu 30,0 minut, při teplotě místnosti.At the desired time, 40 microliters of 2.5% glutar aldehyde (40 microliters) is added to each well of the plates, and the plates are incubated for 30 minutes at room temperature.
Poté byla destička promyta s vodou,, vysušena a bylo přidáno 0,10 mlj 0,1%ního roztoku ( vodného) krystalové violeti. Mikrodestička byla poté dále inkubována po dobu 30,0 minut; promyta s vodou, a odečtěna při 540 nm; s odečtěným pozadím při 630 nm.The plate was washed with water, dried and 0.10 ml of a 0.1% (aqueous) crystal violet solution was added. The microplate was then further incubated for 30.0 minutes; washed with water, and read at 540 nm; with background reading at 630 nm.
Příklad 3)Example 3)
Stanovení na' inzulínu závislé proliferaci T47D buněkDetermination of insulin-dependent proliferation of T47D cells
Humánní buňky T-47D ( Americká sbírka typových kultur = American Type Culture Collection; Rockville;, MDJ kmen číslo ATCC HTB 133 ); byly naočkovány do 96 jamek destiček v koncentraci 3 x 10^ buněk/ml; v DMEM; e 10% séra hovězího zárodku (FBS); v množství 0,1 ml; v každé j^raky..Human T-47D cells (American Type Culture Collection; Rockville ;, MDJ strain number ATCC HTB 133); were seeded into 96 well plates at a concentration of 3 x 10 6 cells / ml; in DMEM; e 10% bovine serum (FBS); in an amount of 0.1 ml; in every j ^ cray ..
Poté, co byl do různých jamek přidán ve zvyšujících se koncentracích humánní inzulín; byly destičky inkubovány poHuman insulin was added at increasing concentrations to different wells; Plates were incubated after
- 27 9· • 9 9· dobu 72 hodin;, a počty buněk byly poté stanoveny barvením s MTTJ ( viz Obrázek 1)J publikovaný dále ).72 hours; and cell counts were then determined by staining with MTTJ (see Figure 1) J published below).
Výsledky jsou propočteny z průměrů 8 replikací. Na základě rozsahu buněčné proliferace, jak je demonstrováno dále na Obrázku 1)J byla pro další studie použita koncentrace 50 nřá/ml IGF-I»Results are calculated from averages of 8 replications. Based on the extent of cell proliferation, as demonstrated below in Figure 1), a concentration of 50 µg / ml IGF-I was used for further studies »
P ř í k 1 a d 4)Example 1 a d 4)
Stanovení na IGF-1 závislé proliferace T-47D buněkDetermination of IGF-1 dependent proliferation of T-47D cells
Do destiček, opatřených 96 jamkami,, byly naočkovány hu* 5 mánní T-47D buňky v koncentraci 3 x 10 buněk/ml v DMEM, a 10% séra hovězího zárodkuj( FBS),, v množství 0,1 ml v každé jamce.In 96-well plates, hu * 5 man T-47D cells were seeded at a concentration of 3 x 10 cells / ml in DMEM, and 10% bovine serum (FBS) at 0.1 ml in each well.
Poté, co byl do různých jamek přidán ve zvyšujících ae koncentracích IGF-I , byly destičky inkubovány po dobu 3 dnůj a počet buněk byl stanoven barvením s MTT,( Viz také ObrázekAfter being added to different wells at increasing and e concentrations of IGF-I, the plates were incubated for 3 days and the cell count was determined by staining with MTT (See also Figure
2), publikovaný dále).2), published below).
Výsledky jsou propočteny z průměru 8 replikací. Na základě rozsahu buněčné proliferace; jak je demonstrováno dále na Obrázku 2)*, byla pro další studie použita koncentrace 50 ng/ml.Results are calculated from an average of 8 replications. Based on the extent of cell proliferation; as demonstrated in Figure 2) * below, a concentration of 50 ng / ml was used for further studies.
Příklad 5)Example 5)
Inhibice inzulínem indukované proliferace T-47D buněk leptinem .* * ···· ·♦«· . · .·· ···· • . *·· ······ ** .······Inhibition of insulin-induced proliferation of T-47D cells by leptin. ·. ·· ···· •. * ·· ······ **. ······
... · ·· ··· ·· ··... · ·· ··· ·· ··
- 28 Buňky T-47HJ ( 3 x 10^ buněk/ ml ); v DMEM; doplněném 10% séra hovězího zárodku, ( FBS); byly naočkovány do dešti-;· ček opatřených 96 jamkami; ( 0„1 ml v každé jednotlivé jamce). Poté byly buňky smíchány s inzulínem; ( 50 ntí);: buá za přítomnosti, nebo absence určených koncentrací murinového leptinu. Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37,O°o; v atmosféře 5%niho oxidu uhličitého; po dobu 48 hodin.28 T-47HJ cells (3 x 10 6 cells / ml); in DMEM; supplemented with 10% bovine serum, (FBS); they were inoculated into rain wells with 96 wells; (0.1 ml in each well). The cells were then mixed with insulin; (50 min); : Either in the presence or absence of the indicated concentrations of the murine leptin. Plates were then incubated at 37.0 ° C; in an atmosphere of 5% low carbon dioxide; for 48 hours.
Poté byly buňky obarveny s MTT. Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní + chybouJ( SEJ n - 8 ).The cells were then stained with MTT. Data are expressed with mean standard + error J (SEJ n - 8).
Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhifeoval s in zulinem indukovanou proliferaci.The results indicate that leptin significantly inhibited inulin-induced proliferation.
Viz Obrázek 3); publikovaný dále.See Figure 3); published below.
Buňky T-47H; ( 3 x 10^ buněk/ml ); v DMEM,. doplněném s 10% séra hovězího zárodku;( FBS); byly naočkovány do destiček, opatřených 96 jamkami; (0,1 ml v každé jednotlivé jamce).T-47H cells; (3 x 10 6 cells / ml); in DMEM ,. supplemented with 10% bovine serum (FBS); were seeded in 96-well plates; (0.1 ml in each well).
Po uplynutí jednoho dne bylo medium nahrazeno s DMEM; dodoplněném s 2% séra hovězího zárodku;( FBS); a po uplynutí dal· šího dne, byly buňky smíchány s inzulínem;( 50 ntt)J buá za přítomnpsti,, nebo absence určených koncentrací murihového leptinu,’ ve směsi DMEMJ a 2% séra hovězího zárodkuí FBS).After one day, the medium was replaced with DMEM; supplemented with 2% bovine serum (FBS); and after the next day, cells were mixed with insulin (50 ntt) either in the presence or absence of determined concentrations of murih leptin (in a mixture of DMEMJ and 2% FBS bovine serum).
Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37,O°C; v atmosféře 5%ního oxidu uhličitého*, po dobu 48 hodin. Buňky byly poté obarveny s krystalovou violetí. Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou;’standardní + chybou( + SE, n = 8 ).Plates were then incubated at 37.0 ° C; in an atmosphere of 5% carbon dioxide * for 48 hours. The cells were then stained with crystal violet. Data is expressed with an average + standard error (+ SE, n = 8).
Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhiboval s inzulínem indukovanou buněčnou proliferaci.The results show that leptin significantly inhibited insulin-induced cell proliferation.
Viz Obrázek 4); publikovaný dále.See Figure 4); published below.
Příklad 6) • · · ·Example 6) • · · ·
Inhibice s IGF-I indukované proliferace T-47D buněk leptineá.Inhibition of IGF-I-induced proliferation of T-47D cells by leptinia.
Buňl^r T-47DJ, ( 3 x 10^ buněk/ml );v DMEMJ doplněném s 10% séra hovězího zárodku;(FBS)\ byly naočkovány do destiček, opatřených 96 jamkamiJ v množství 0,1 ml v každé jednotlivé jamce,, a poté byly smíchány a 50 ng/mi; IGF-I, za příromnosti nebo absence určených koncentrací murinového leptinu. Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37,θ°0· v atmosféře 5% oxidu uhličitého, po dobu 48 $odin.T-47DJ cells (3 x 10 6 cells / ml) in DMEMJ supplemented with 10% bovine serum (FBS) were inoculated into 96-well plates at 0.1 ml in each individual well, and then mixed with 50 ng / ml; IGF-I, in the presence or absence of determined concentrations of murine leptin. Then, the plates were incubated at 37 ° C in 5% carbon dioxide atmosphere for 48 hours.
Poté byly buňky obarveny s ΜΤΤ» Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní chybou + SEJ( n = 8 ).Cells were then stained with ΜΤΤ »Data are expressed with mean standard error + SEJ (n = 8).
Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhiboval s IGF-I indukovanou proliferaci buněk.The results show that leptin significantly inhibited IGF-I-induced cell proliferation.
Viz Obrázek 5); publikovaný dále.See Figure 5); published below.
Buňky T-47D.; ( 3 x 10^ buněk/ml ); v DMEMJ doplněném s 10% séra hovězího zárodku (FBS); byly naočkovány do destiček, opatřených 96 jamkami* v množství 0,1 ml v každé jednotlivé jamce»T-47D cells; (3 x 10 6 cells / ml); in DMEMJ supplemented with 10% bovine serum (FBS); were inoculated into 96-well plates * 0.1 ml in each well »
Po uplynutí jednoho dne, bylo medium nahrazeno a DMEMJ doplněném s 2% FBS, a po uplynhtí dalšího dne,, byly buňky smíchány s 50,0 ng/ml IGE-IJ bučí za přítomnosti,, nebo absence určených koncentrací murinového leptinu* ve směsi DMEM s 2% séra hovězího zárodku;( FBS).After one day, the medium was replaced with DMEMJ supplemented with 2% FBS, and after the next day, cells were mixed with 50.0 ng / ml IGE-IJ either in the presence or absence of determined concentrations of murine leptin * in the mixture DMEM with 2% bovine serum (FBS).
Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37,0°C,, v atmosféře 5%ního oxidu uhličitého, po dobu 48 hodin. Poté byly buňky obarveny s krystalickou violetí» Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní + chybou ( SEJ n = 8 ).The plates were then incubated at 37.0 ° C, 5% carbon dioxide for 48 hours. Cells were then stained with crystalline violet »Data are expressed with mean standard + error (SEJ n = 8).
Z výsledků vyplývá,, že leptin signifikantně inhiboval s IGF-I indukovanou buněčnou proliferaci.The results indicate that leptin significantly inhibited IGF-I-induced cell proliferation.
Viz Obrázek 6), publikovaný dále.See Figure 6), published below.
- • fc- • fc
Buňky T-47DJ ( 3 x 10^ buněk/ml )J v DMEM; doplněném s 10% séra hovězího zárodkuj(FBS), byly naočkovány do destiček, opatřených 96 jamkami; v množství 0,1 ml v každé jednotlivé jamce.T-47DJ cells (3 x 10 6 cells / ml) J in DMEM; supplemented with 10% bovine serum (FBS) were inoculated into 96-well plates; 0.1 ml in each well.
Po uplynutí jednoho dne, bylo medium nahraženo s DMEMJ doplněném s 2% séra FBSJ a po uplynuti dalšího dne, byly buňky smíchány s 50 ng/ml IGF-IJ za přítomnosti; nebo absence určených koncentrací humánního leptinu; ve směsi DMEM 2% FBS.After one day, the medium was replaced with DMEMJ supplemented with 2% FBSJ serum and after the next day, cells were mixed with 50 ng / ml IGF-IJ in the presence of; or absence of determined concentrations of human leptin; in DMEM 2% FBS.
Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37,0°G v atmosféře 5% ního oxidu uhličitého, po dobu 48 hodin. Poté byly buňky obarveny s krystalovou violetí. Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní chybou + SE ( n = 8 )..The plates were then incubated at 37.0 ° C in 5% carbon dioxide for 48 hours. The cells were then stained with crystal violet. Data are expressed with mean standard error + SE (n = 8).
Z výsledků vyplývá,, že leptin signifikantně inhibovel s IGF-I indukovanou buněčnou proliferaci»The results indicate that leptin significantly inhibited IGF-I induced cell proliferation »
Viz Obrázek 7), publikovaný dále.See Figure 7), published below.
Příklad 8)Example 8)
Inhibice s inzulínem indukované proliferace MCF-7 buněk leptinemInhibition of insulin-induced proliferation of MCF-7 cells by leptin
Buňky· MÓF7 humánního adenokarcinomi^prsu^. ( 3 x 10^ buněk/ml )j ( Americká sbírka typových kultur = American Type Culture Collectionj RockvilleJ MDJ kmen číslo HTB 22 )J doplněné a 6%Human adenocarcinoma breast cells. (3 x 10 ^ cells / ml) j (American Type Culture Collectionj RockvilleJ MDJ strain number HTB 22) J supplemented with 6%
FBSJ byly naočkovány do destiček, opatřených s 96 jamkami',, v množství 0,1 ml; v každé jednotlivé jamce..FBSJs were seeded in 96-well plates at 0.1 ml; in each well.
Po uplynutí jednoho dne bylo medium nahraženo s DMEM; za absence séra. Po uplynutí dalšího dne byly buňky smíchány s 50 nM inzulínu, bučí zs přítomnosti, nebo absence určených koncentrací murinového leptinu,v séru prostém mediu»After one day, the medium was replaced with DMEM; in the absence of serum. After the next day, the cells were mixed with 50 nM insulin, either from the presence or absence of determined concentrations of murine leptin, in serum-free medium »
Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37,O°C v atmosféře 5%ního oxidu uhličitého; po dobu ¢8 hodin.* Poté bylyPlates were then incubated at 37.0 ° C in an atmosphere of 5% carbon dioxide; for ¢ 8 hours
- 31 buňky obarveny s krystalovou violetí. Údaje jsou vyjádřeny a průměrnou standardní chybou + SEJ( n = 8 ).31 cells stained with crystal violet. Data are expressed with mean standard error + SEJ (n = 8).
Z výsledků vyplývá,, že leptin signifikantně inhiboval s inzulínem indukovanou buněčnou proliferaci.The results indicate that leptin significantly inhibited insulin-induced cell proliferation.
Viz Obrázek.8); publikovaný dále.See Figure 8); published below.
Příklad 9)Example 9)
Inhibice IGF-I indukované proliferace MCF7 buněk s leptinem.Inhibition of IGF-I induced proliferation of MCF7 cells with leptin.
Buňky MCF-7 humánního' adenokarcinomu Prsu; v DMEM; doplněném s 10% séra hovězího zárodku;( F^S)J byly naočkovány do destiček opatřených 96 jamkami; ( 3 x 10'buněk /mi; v množství 0,1 ml v každé jednotlivé jamce..MCF-7 human 'P RSU adenocarcinoma; in DMEM; supplemented with 10% bovine serum; (F ^ S) J were seeded into 96-well plates; (3 x 10 ' cells / ml; 0.1 ml in each well).
Po uplynutí jednoho dne bylo medium nahraženo sérum prostým mediem; a po uplynutí dalšího dne, byly buňky smíchány s 50 ng/mi; IGF-IJ buá za přítomnosti, nebo absence určených koncentrací murinového leptinu; v séru prostém mediu.After one day, the medium was replaced with serum-free medium; and after the next day, cells were mixed with 50 ng / ml; IGF-IJ is either in the presence or absence of determined concentrations of murine leptin; in serum-free medium.
Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37,0°c; v atmosféře 5%ního oxidu uhličitého, po dobu 96 hodin. Poté byly buňky obarveny s krystalovou viletí. Údaje jsou vyjádřeny s poměrnou standardní chybou +SE;(n=8).Plates were then incubated at 37.0 ° C; in an atmosphere of 5% carbon dioxide for 96 hours. The cells were then stained with a crystal violet. Data are expressed with relative standard error + SE; (n = 8).
Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhiboval s inzulínem indukovanou buněčnou proliferaci.The results show that leptin significantly inhibited insulin-induced cell proliferation.
Viz Obrázek 9), publikovaný dále.See Figure 9), published below.
« ··* • · · · • · · · • · · · * • · ♦ · ·« ··· · • * * * «« ««
Haag- B.;Haag-B .;
- 32 Odkazy na odbonnou literaturu ::- 32 References:
1) Araki E.J Lipas M.A.; Patti M.E.J Bruning J.C r.J Johnson R.S.J a Kahn C.R,1) Araki E.J. Lipas M.A .; Patti M.E.J Bruning J.C.J Johnson R.S.J and Kahn C.R,
Alternativě pathway ůf insulin signaling in mice with tsrgeted disruption of the IRS-1 gene.(viz komentář). Nátuře, 372; strana 186 - 19OJ/1994/.Alternatively, pathway to insulin signaling in mice with a disruptive disruption of the IRS-1 gene (see comment). Nature, 372; pp. 186-19OJ (1994).
2) Ausubel F.M. se sp..2) Ausubel F.M. se sp ..
Edice Current Protocols in Molecular BiologyCurrent Protocols Edition in Molecular Biology
3) ©ampfield I.A.; Smith F.J.J Guisez Y,J Devos R; a Burn P, Recombinant mouše OB protein. Evidence for a peripheral signál linking adiposity and centrál neural networks. Science, 169, 546 - 549‘„/1 995/.·3) © ampfield I.A .; Smith F.J.J Guisez Y, J Devos R; and Burn P, a Recombinant fly OB protein. Evidence for a peripheral signal linking adiposity and central neural networks. Science, 169, 546-549.
4) Cheatham B. a Kahn C.R.4) Cheatham B. and Kahn C.R.
Insulin section and insulin signaling network.Insulin section and insulin signaling network.
Enóocr. *ev.; 16J strana 1 17 - 142*,/1995/.Enóocr. * ev .; 16J page 1 17-142 *, (1995).
5( Cioffi J.A.; Shafer A.W.; Zupancic T.J.; Smith-Gbur J.J Mikhail A.; Platika D.J a Snodgrass H.R.5 (Cioffi, J.A .; Shafer, A.W .; Zupancic, T.J .; Smith-Gbur, J.J. Mikhail A., Platika, D.J, and Snodgrass, H.R.
Novel B219/0B receptor informs,. Possible role of leptin in hematopoiesis and reproduction.Novel B219 / 0B receptor informs ,. Possible role of leptin in hematopoiesis and reproduction.
Nátuře MedicineJ 2*, 585 - 589;/1996/„Nature MedicineJ 2 *, 585-589; / 1996 / "
6) Cohen B.J, Novick D. a Rubinstein M.6) Cohen B.J, Novick D. and Rubinstein M.
Modulation of insulin activities by leptin.Modulation of insulin activities by leptin.
Science; 274J 1185 - 1188; /1996/.Science; 274J 1185-1188; (1996).
7) Collins S.J Kuhn C.M.; Petro A.E.; Swick A.G.; Chrunyk B.A.; a Surwit R.S.7) Collins S.J. Kuhn C.M .; Petro A.E .; Swick A.G .; Chrunyk B.A .; and Surwit R.S.
Role of leptin in fat regulation.Role of leptin in fat regulation.
^ature*, 380; 677;/1996/.^ ature *, 380; 677 (1996).
- 33 8) Cinsidine R.V.J Sinhe M.K.; Heimman M.L.J Kriaucinas A.; Stephens T.W.; Nyce M.R.; Ohannesian J.P.\ Marco C.C.; Mckee L.J.J, Bauer T.L.\ a Caro J.P.- 33 8) Cinsidine R.V.J Sinhe M.K .; Heimman M. L. Kriaucinas A .; Stephens T.W .; Nyce M.R .; Ohannesian J.P. \ Marco C.C .; McKee L.J., Bauer T.L., and Caro J.P.
Sérum immunoreactive leptin concentrations in normalweight and obese humans.Serum immunoreactive leptin concentrations in normal weight and obese humans.
N.Engl.J.Med.; 334*, 292 - 295; /1996/.N.Engl.J.Med .; 334 *, 292-295; (1996).
9) Pelber J.P.; a Golay A*9) Pelber J.P .; and Golay A *
Regulation of nutrient metabolism and energy expenditure. Metabolism; 44', Suppl. 2J str. 5 - 9J/1995/.Regulation of nutrient metabolism and energy expenditure. Metabolism; 44 ', Suppl. 2J pp. 5-9J (1995).
10) Frederich R.C.J. Hamann A.J, Anderson S.; Lollmann B.;10) Frederich R.C.J. Hamann A.J., Anderson S .; Lollmann B .;
LowelJ B.B.; a Flier J.S.LowelJ B.B .; and Flier J.S.
Leptin levels reflect body lipid csntent in mice. Evidence for diet-induced resistance to leptin eetion.Leptin levels reflect body lipid in mice. Evidence for diet-induced resistance to leptin eetion.
Nátuře Med,; 1; 1311 - 1314J/1995/.Nature Med ,; 1; 1311-1334J (1995).
11) Halaas J.L.; Gajiwala K.S.; Maffei M.; Cohen S.L.; Chait B.T.; Rabinowitz DůJ Lallone R.L.J Burley S.K.J a Friedman J.M.11) Halaas, J.L .; Gajiwala K.S .; Maffei M .; Cohen S.L .; Chait B.T .; Rabinowitz CJ Lallone R.L.J Burley S.K.J and Friedman J.M.
Weight-reducing effects of the plasma protein encoded by the obese gene. Viz komentář.Weight-reducing effects of plasma protein encoded by the obese gene. See comment.
Scinece;. 269J strana 543 - 546J/1995/.Scinece ;. 269J page 543-546J (1995).
12) Lee G.H.; Proenca R.; Montez J.M.* Carroll K.M.;, Darvishzadeh J.G.\ Lee J.I.; a Friedman J.M.12) Lee, G.H .; Proenca R .; Montez, J. M. * Carroll, K. M., Darvishzadeh, J. G., Lee, J.I .; and Friedman J.M.
Abnormal splicing of the leptin receptor in diabetic moce. NatureJ 379; 632 - 635J /1996/.Abnormal splicing of leptin receptor in diabetic moce. NatureJ 379; 632-635J (1996).
13) Lonnquist F.; Arner P.J Nordfors I., a Schalling M, Overexpression of the obese (ob) gene in adipose tissue of humen obese subjects.13) Lonnquist F .; Arner P.J Nordfors I., and Schalling M, Overexpression of the obese (ob) gene in adipose tissue of human obese subjects.
Nátuře Med.’, 1J 950 - 953J/1995/.Nature Med., 1J 950-953J (1995).
• ·• ·
14) Meffei M.J Halaas J.J Ravussin E.J Pratley R.E.J Lee G.H,J Zhang Y.J Fei H.J Kim S.J Lallone R.J Ranganathan S.JKern P.A. a Friedman J.M.,14) Meffei M.J Halaas J.J Ravussin E.J Pratley R.E.J Lee G.H, J Zhang Y.J Fei H.J Kim S.J Lallone R.J Ranganathan S.JKern P.A. and Friedman J.M.,
Leptin levela in human and rodent. Messurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduces subjeets. Nsture Med.J 1J 1155 - 1161J/1995/.Leptin levela in human and rodent. Messaging of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduced subjects. Nsture Med. J 1J 1155 - 1161J (1995).
15) Milazzo G.J, Sciatta L, J Papa V.J Goldfine I.D. a Vignari S, ASPB-10 insulin induction of increaseé mitogenic responses and phenotypic changes in humen breast epithelial cella: Evidence for enhanced ínteraction with the insulinlike growth factor-1 receptor.15) Milazzo G.J, Sciatta L, J Papa V.J Goldfine I.D. and Vignari S, ASPB-10 insulin induction of increased mitogenic responses and phenotypic changes in the human breast epithelial cell: Evidence for enhanced interaction with the insulin-like growth factor-1 receptor.
16) Milazzo G.J Giorgino F.J Damante G.J Sung C.J Stampfer M.R.J Vigneri R.J Goldfine I.J a Belfiore A.16) Milazzo G.J Giorgino F.J Damante G.J Sung C.J Stampfer M.R.J Vigneri R.J Goldfine I.J and Belfiore A.
Insulin receptor expression in human breast cancer cell lineš.Insulin receptor expression in human breast cancer cell line.
Cancer, 52, 3924 - 393OJ/1992/.Cancer, 52, 3924-393 (1992).
17) Myers M.G.Jr.J Sun X.J.J Cheetham B.J Jachna B.R.J Glasheen E.M.J Backer J.M.J a White M.F.17) Myers M.G.Jr.J Sun X.J.J Cheetham B.J Jachna B.R.J Glasheen E.M.J Backer J.M.J and White M.F.
IRS-1 is a eommon element in insulin and insulin like growth fector-1 signaling to the phosphatidylinositolIRS-1 is an eommon element in insulin and insulin like growth fector-1 signaling to phosphatidylinositol
3- kiněse.3- kiněse.
EndocrinologyJ 132J strana 1421 - 1430^/1993/.Endocrinology J 132J page 1421 - 1430 ^ (1993).
18) Myers M.G.Jr.J Sun X.J.J a White M.F.18) Myers M.G.Jr.J. Sun X.J.J and White M.F.
The IRS-1 signaling systém.The IRS-1 signaling system.
Trends Biochem Sci.J 19J strana 289 - 293J /1994/.Trends Biochem Sci.J 19J page 289-293J (1994).
19) Myers M.G.JJr.J Wang L.M.J Sun X.J.J Zhang Y.J Yenush L.J Schlessinger J.J Pierce J.,H.J a White M.F.19) Myers M.G.JJr.J Wang L.M.J Sun X.J.J Zhang Y.J Yenush L.J Schlessinger J.J Pierce J., H.J and White M.F.
Role of IRS-1/GRB-2 complexes in insulin signaling.Role of IRS-1 / GRB-2 complexes in insulin signaling.
Mol.uell Biol.J 14J, strana 3577 - 3587J/1994/.Mol. in ell Biol. J 14J, pp. 3577-3587J (1994).
- 35 20) Myers M..G.- Jr.J a White M.F,- 35 20) Myers M..G.- Jr.J and White M.F,
The new elements of insulin signaling. Insulin receptor substráte-1 and proteine with SH2 domains.The new elements of insulin signaling. Insulin receptor substrate-1 and protein with SH2 domains.
Diabetes 42j strans 43 - 5O;/1993/.Diabetes 42j strans 43-550 (1993).
21) Pelleymounter M.A.; Culleň M.J.; Baker M.B.; Heeht R.; Winters D.;, Boone T, a Collins F.21) Pelleymounter M.A .; Cullen M.J .; Baker M.B .; Heeht R .; Winters D., Boone T, and Collins F.
Effects of the obese gene product on body weight regulation in ob/ob mice.( Viz komentář ).Effects of the obese gene product on body weight regulation in ob / ob mice. (See comments).
Science; 269J strana 540 - 543J/1995/.Science; 269J page 540-543J (1995).
22) Permis A.J Witthuhn B.; Keegan A.D.J Nelms K.J Garfein E.J Ihle J.N.J Paul W.E.J Pierce J.H.J a Rothman P.22) Permis A.J. Witthuhn B .; Keegan A.D.J Nelms KJ Garfein E.J Ihle J.N.J Paul W.E.J Pierce J.H.J and Rothman P.
Interleukin 4 signals through two related pathways.Interleukin 4 signals via two related pathways.
Proč.Nati.Acad.Sci. USA;92J 7971 - 7975J/1995/.Proc.Nati.Acad.Sci. USA; 92J 7971-7975J (1995).
23) Rose D.W.; Saltiel A.R.J Mejumd8r M. J Decker S.J.J a Olefsky J.M.23) Rose D.W .; Saltiel A.R.J Mejumd8r M.J. Decker S.J.J and Olefsky J.M.
Insulin receptor substrate-1 is required for insulinmeóieted mitogenic signál transduction.Insulin receptor substrate-1 is required for insulin-mediated mitogenic signal transduction.
Proč.Nati.Acad.Sci. USA;91J strana 797 - 801J/1994/.Proc.Nati.Acad.Sci. USA, 91J page 797-801J (1994).
24) Sambrook se sp.24) Sambrook se sp.
Molecular cloning: A Eaborstory M8nU8ij Cold Spring HarborJ N.Y.Molecular cloning: Eaborstory M 8nU8 ij Cold Spring HarborJ NY
25) Tamemoto H. J Kadowaki T.J Tobě K.J Yagi T.J Sekura H.J Hayakawa T.J Terauehi Y.J Uaki K.; Aburagi Y.J Satoh S. se sp.25) Tamemoto H.J. Kadowaki T.J. To You K.J. Yagi T.J. Sekura H.J. Hayakawa T.J. Terauehi Y.J. Uaki K .; Aburagi Y.J Satoh S. with sp.
Insulin resistsnce and growth ietardation in mice lacking insulin receptor substrate-1 ,.( Viz komentář ).Insulin resistances and growth ietardation in mice lacking insulin receptor substrate-1 (See Comment).
^aturej 372J strana 182 - 186;/1994/.(ature 372J page 182-186; 1994).
- 36 26) Tartaglia L.A.; Dembski M.;, Weng X,J Deng N.H.J Culpepper J.J, Devos R.J Richarda G.J.; Campfield L.A.; Clark F.T.; Deeds J.; Muir C.J Sanker S,; Moriarty A.J Moore K.J.; Smutko J.S.J Mays G.G.; Woolf E.A.; Monroe C.A. a Tepper- 36 26) Tartaglia L.A .; Dembski M., Weng X, J Deng, N.H.J Culpepper J.J, Devos R.J Richard G.J .; Campfield L.A .; Clark F.T .; Deeds J .; Muir C.J Sanker S .; Moriarty A.J. Moore K.J .; Smutko J. S. J. Mays G.G .; Woolf E.A .; Monroe C.A. and Tepper
R.I.R.I.
Identification and expression cloning of leptin receptor. OB-R.Identification and expression cloning of leptin receptor. GIANT.
CellJ 83J 1263 - 1271',/1995/.CellJ 83J 1263-1271 (1995).
27) Weigle D.S.J Bukowski T.R. J, Foster D.C.J Holderman S.J Kramer J.M.; Lasser G.J Loftonday C.E.J Prunkard D.E.; Raymond C. a Kuijper J.L.27) Weigle D.S.J Bukowski T.R. J, Foster, D.C.J Holderman, S.J Kramer, J.M .; Lasser G.J. Loftonday C.E.J. Prunkard D.E .; Raymond C. and Kuijper J.L.
Recombinant ob protein reduces feeding and body weight in the ob/ob mouše·Recombinant ob protein in the ob / ob fly ·
J.Clin.Invest.J96J 2065 - 2O7O;/1995/.J. Clin. Invest. J96J 2065-2707 (1995).
28) White M.F, a Kahn C.R.28) White M.F. and Kahn C.R.
The insulin signaling systém.The insulin signaling system.
J.Biol.Chem.; 269; strana 1 - 4J/1994/.J.Biol.Chem .; 269; page 1-4J (1994).
29) Yin T.G,; Keller S.R.J Quelle F.W.J Witthuhn B.A.; Tseng M.L.S.J Lienhard G.E.J Ihle J.N.; a Yang Y.C. Interleukin-9 induces tyrosine phosphorylstion on insulin receptor substrate-1 via JAK tyrosine kinases. J.Biol.Chem.; 270J 20497 - 2O5O3J/1995/.29) Yin T.G.; Keller S.R.J Quelle F.W.J Witthuhn B.A .; Tseng M.L.S.J Lienhard G.E.J Ihle J.N .; and Yang Y.C. Interleukin-9 induces tyrosine phosphorylstion on insulin receptor substrate-1 via JAK tyrosine kinases. J.Biol.Chem .; 270J 20497-2O5O3J (1995).
30) Yin T.G.; Tsang M.L.S.J a Yang Y.C.30) Yin T.G .; Tsang M.L.S.J and Yang Y.C.
JAK-1 kinase forms complexes with interleukin-4 receptor and 4PS/insulin receptor substrate-1-like protein and is activeted by interleukin-4 and interleukin-9 in T-lvmphocytes.JAK-1 kinase forms complexes with interleukin-4 receptor and 4PS / insulin receptor substrate-1-like protein and are activated by interleukin-4 and interleukin-9 in T-1mphocytes.
J.Biol.Chem.; 269J 26614 - 26617/1994/.J.Biol.Chem .; 269J 26614-26617 (1994).
31) Zhang Y.; Proence R.J Maffei M.; Barone M.\ Leopold L.;31) Zhang Y .; Proence R.J. Maffei M .; Barone M. \ Leopold L .;
. a Friedman J.M.. and Friedman J.M.
Positional cloning of the mouše obese gene and its human homologue.Positional cloning of the fly obese gene and its human homologue.
NatureJ 372J 425 - 432J/1994/.NatureJ 372J 425-432J (1994).
Claims (17)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IL12073397A IL120733A0 (en) | 1997-04-29 | 1997-04-29 | Leptin as an inhibitor of cell proliferation |
PCT/IL1998/000196 WO1998048831A1 (en) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ384899A3 true CZ384899A3 (en) | 2000-06-14 |
CZ299872B6 CZ299872B6 (en) | 2008-12-17 |
Family
ID=11070075
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ0384899A CZ299872B6 (en) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Pharmaceutical composition |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7109159B1 (en) |
EP (1) | EP0981365B1 (en) |
JP (1) | JP4330662B2 (en) |
KR (1) | KR100507731B1 (en) |
CN (1) | CN1168497C (en) |
AR (1) | AR012626A1 (en) |
AT (1) | ATE283702T1 (en) |
AU (1) | AU742927B2 (en) |
BG (1) | BG63490B1 (en) |
CA (1) | CA2288238A1 (en) |
CZ (1) | CZ299872B6 (en) |
DE (1) | DE69827942T2 (en) |
EA (1) | EA002353B1 (en) |
EE (1) | EE04801B1 (en) |
ES (1) | ES2232944T3 (en) |
HK (1) | HK1028350A1 (en) |
HU (1) | HUP0002427A3 (en) |
IL (2) | IL120733A0 (en) |
NO (1) | NO322304B1 (en) |
NZ (1) | NZ500589A (en) |
PL (1) | PL195275B1 (en) |
PT (1) | PT981365E (en) |
SK (1) | SK284848B6 (en) |
UA (1) | UA66793C2 (en) |
WO (1) | WO1998048831A1 (en) |
ZA (1) | ZA983608B (en) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7208572B2 (en) | 1998-08-21 | 2007-04-24 | Albany Medical College | Leptin-related peptides |
US6777388B1 (en) | 1998-08-21 | 2004-08-17 | Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. | Leptin-related peptides |
US20050272652A1 (en) | 1999-03-29 | 2005-12-08 | Gault Victor A | Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity |
IL132312A0 (en) * | 1999-09-05 | 2001-03-19 | Yeda Res & Dev | Use of leptin in inhibition of endothelial cell proliferation |
US8076288B2 (en) | 2004-02-11 | 2011-12-13 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides having glucose lowering activity |
CN1961000B (en) | 2004-02-11 | 2011-05-04 | 安米林药品公司 | Hybrid polypeptides with selectable properties |
US7863240B2 (en) * | 2004-10-08 | 2011-01-04 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods and uses of leptin in hepatocellular carcinoma |
US8969291B2 (en) | 2004-10-08 | 2015-03-03 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods for decreasing leptin levels or activity for treating inflammation |
CA2597649A1 (en) | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Gip analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
US8263545B2 (en) | 2005-02-11 | 2012-09-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
CA2617649A1 (en) | 2005-08-11 | 2007-02-22 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides with selectable properties |
BRPI0614649A2 (en) | 2005-08-11 | 2011-04-12 | Amylin Pharmaceuticals Inc | hybrid polypeptides with selectable properties |
US8716220B2 (en) * | 2005-09-07 | 2014-05-06 | Nikolaos Tezapsidis | Leptin compositions and methods for treating progressive cognitive function disorders resulting from accumulation of neurofibrillary tangles and amyloid beta |
US8227408B2 (en) * | 2005-09-07 | 2012-07-24 | Neurotez, Inc. | Leptin as an anti-amyloidogenic biologic and methods for delaying the onset and reducing Alzheimer's disease-like pathology |
US8497240B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-07-30 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties |
CN103694337B (en) * | 2008-02-08 | 2016-03-02 | Ambrx公司 | Modified leptin polypeptide and its purposes |
CA2725143A1 (en) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Neurotez, Inc. | Methods for treating progressive cognitive disorders related to neurofibrillary tangles |
US20100316639A1 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-16 | Genentech, Inc. | Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy |
TWI824372B (en) | 2015-10-12 | 2023-12-01 | 美商再生元醫藥公司 | Antigen-binding proteins that activate the leptin receptor |
MA45801B1 (en) | 2016-11-08 | 2021-11-30 | Regeneron Pharma | Antigen-binding proteins that are leptin receptor antagonists |
MA51289A (en) | 2017-12-18 | 2021-03-24 | Regeneron Pharma | BISPECIFIC ANTIGEN BINDING MOLECULES BINDING TO THE LEPTIN RECEPTOR AND / OR GP130, AND THEIR METHODS OF USE |
MX2020010547A (en) | 2018-04-06 | 2020-11-06 | Regeneron Pharma | A leptin receptor agonist antibody for use in treating a metabolic dysfunction or hypoleptinemia. |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL324284A1 (en) * | 1995-06-30 | 1998-05-11 | Lilly Co Eli | Methods of treating diabetes |
AU7072896A (en) * | 1995-09-19 | 1997-04-09 | Eli Lilly And Company | Dna encoding medicinal proteins |
EP1731164A1 (en) * | 1996-01-23 | 2006-12-13 | Indevus Pharmaceuticals, Inc. | Methods for using the obese gene and its gene product to stimulate hematopoietic development |
-
1997
- 1997-04-29 IL IL12073397A patent/IL120733A0/en unknown
-
1998
- 1998-04-26 WO PCT/IL1998/000196 patent/WO1998048831A1/en active IP Right Grant
- 1998-04-26 CZ CZ0384899A patent/CZ299872B6/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 KR KR10-1999-7009705A patent/KR100507731B1/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 UA UA99116415A patent/UA66793C2/en unknown
- 1998-04-26 PT PT98917580T patent/PT981365E/en unknown
- 1998-04-26 EE EEP199900510A patent/EE04801B1/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 SK SK1471-99A patent/SK284848B6/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 NZ NZ500589A patent/NZ500589A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 JP JP54678798A patent/JP4330662B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 AT AT98917580T patent/ATE283702T1/en active
- 1998-04-26 AU AU70762/98A patent/AU742927B2/en not_active Ceased
- 1998-04-26 DE DE69827942T patent/DE69827942T2/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 CA CA002288238A patent/CA2288238A1/en not_active Abandoned
- 1998-04-26 CN CNB988066920A patent/CN1168497C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 PL PL98336582A patent/PL195275B1/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 ES ES98917580T patent/ES2232944T3/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 HU HU0002427A patent/HUP0002427A3/en unknown
- 1998-04-26 EA EA199900981A patent/EA002353B1/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 US US09/403,897 patent/US7109159B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 EP EP98917580A patent/EP0981365B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-29 AR ARP980102003A patent/AR012626A1/en unknown
- 1998-04-29 ZA ZA983608A patent/ZA983608B/en unknown
-
1999
- 1999-10-25 BG BG103832A patent/BG63490B1/en unknown
- 1999-10-28 NO NO19995267A patent/NO322304B1/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-28 IL IL132633A patent/IL132633A/en not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-12-07 HK HK00107866A patent/HK1028350A1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ384899A3 (en) | Use of active substances and pharmaceutical preparation containing thereof | |
JP5290966B2 (en) | Stabilized insulin-like growth factor polypeptide | |
AU2008257448B9 (en) | Unacylated ghrelin as therapeutic agent in the treatment of metabolic disorders | |
BRPI0615538A2 (en) | fusion protein, isolated nucleic acid, vector, host cell, method of producing a polypeptide, pharmaceutical composition, food composition, method for reducing body weight, method for treating diabetes, method for increasing the average life of a peptide or a recombinant therapeutic protein in a subject, a method for increasing the efficacy of a peptide or a therapeutic protein, a method for treating diabetes or reducing body weight. | |
KR20120082909A (en) | Synthetic myostatin peptide antagonists | |
KR20010033297A (en) | Pharmaceutical compositions containing the long pentraxin PTX3 | |
US20140038887A1 (en) | Glial cell line derived neurotrophic factor, obesity, and obesity-related diseases and conditions | |
JPWO2003078460A1 (en) | Peptide, pharmaceutical composition containing the peptide, and pharmaceutical composition for cancer treatment | |
US10682393B2 (en) | Glial cell line derived neurotrophic factor, obesity, and obesity-related diseases and conditions | |
MXPA99009972A (en) | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation | |
CN111944035A (en) | FGF4 and application thereof | |
JP4583763B2 (en) | Cleaved 24 kDa basic fibroblast growth factor | |
CN115957301A (en) | Cell secretion factor for promoting myocardial infarction repair and application | |
US20040151693A1 (en) | Use of mullerian inhibiting substance and interferon for treating tumors |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20130426 |