CZ33324U1 - Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové - Google Patents
Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové Download PDFInfo
- Publication number
- CZ33324U1 CZ33324U1 CZ2019-36602U CZ201936602U CZ33324U1 CZ 33324 U1 CZ33324 U1 CZ 33324U1 CZ 201936602 U CZ201936602 U CZ 201936602U CZ 33324 U1 CZ33324 U1 CZ 33324U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- solution
- derivative
- chs
- hydrogels
- hydrogel
- Prior art date
Links
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 title claims description 116
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims description 105
- 125000004464 hydroxyphenyl group Chemical group 0.000 title claims description 42
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims description 17
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 claims description 88
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 claims description 78
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 76
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 claims description 75
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 15
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O tyraminium Chemical group [NH3+]CCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 12
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 10
- -1 salt ion Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 6
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- FMEVAQARAVDUNY-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminoethyl)phenol Chemical group NCCC1=CC=CC=C1O FMEVAQARAVDUNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 153
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 90
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 88
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 86
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 41
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 33
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 30
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 30
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 26
- 239000000463 material Substances 0.000 description 22
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 15
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 12
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- JISHRFRBEWKWJK-UHFFFAOYSA-N 6-amino-n-[2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]hexanamide Chemical compound NCCCCCC(=O)NCCC1=CC=C(O)C=C1 JISHRFRBEWKWJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 5
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 5
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 4
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- ZMASBEFBIXMNCP-UHFFFAOYSA-N borane;2-methylpyridine Chemical compound B.CC1=CC=CC=N1 ZMASBEFBIXMNCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 4
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 229960003732 tyramine Drugs 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N L-idopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N Tyramine Natural products NCCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 3
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminohexanoic acid Chemical compound CCCCC(N)C(O)=O LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 108050009363 Hyaluronidases Proteins 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 230000003416 augmentation Effects 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 2
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- UXBLSWOMIHTQPH-UHFFFAOYSA-N 4-acetamido-TEMPO Chemical group CC(=O)NC1CC(C)(C)N([O])C(C)(C)C1 UXBLSWOMIHTQPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUFDYIJGNPVTAY-UHFFFAOYSA-N 6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCCCC(O)=O RUFDYIJGNPVTAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000004896 Sulfotransferases Human genes 0.000 description 1
- 108090001033 Sulfotransferases Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N butane-1,1-diol Chemical compound CCCC(O)O CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 208000015100 cartilage disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 description 1
- 201000005043 chondromalacia Diseases 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N lidocaine hydrochloride monohydrate Chemical compound O.[Cl-].CC[NH+](CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000005297 material degradation process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
- C08J3/03—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media
- C08J3/075—Macromolecular gels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L101/00—Compositions of unspecified macromolecular compounds
- C08L101/12—Compositions of unspecified macromolecular compounds characterised by physical features, e.g. anisotropy, viscosity or electrical conductivity
- C08L101/14—Compositions of unspecified macromolecular compounds characterised by physical features, e.g. anisotropy, viscosity or electrical conductivity the macromolecular compounds being water soluble or water swellable, e.g. aqueous gels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Technické řešení se týká hydro gelu na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové ve směsi s chondroitin sulfátem se zlepšenou mírou degradace.
Dosavadní stav techniky
Kyselina hyaluronová (též hyaluronan, HA) je polysacharid ze skupiny glykosaminoglykanů, který se skládá z disacharidických jednotek složených z D-glukuronové kyseliny a Wacetyl-Dglukosaminu. Jedná se o polysacharid, který je snadno rozpustný ve vodném prostředí, kde v závislosti na molekulové hmotnosti a koncentraci vytváří viskózní roztoky až viskoelastické hydrogely. HA je přirozenou složkou mezibuněčné hmoty tkání. Vazbou na specifické povrchové buněčné receptory je molekula hyaluronanu schopna interagovat s buňkami ve svém okolí a regulovat jejich metabolické procesy (Xu, Jha et al. 2012). Z těchto důvodů jsou materiály obsahující hyaluronan případně jeho deriváty často využívány pro výrobu přípravků používaných v biomedicínských aplikacích. Hydrogely na bázi hyaluronanu v organismu podstupují přirozenou degradaci působením specifických enzymů (hyaluronidáz), popř. působením reaktivních forem kyslíku (ROS), díky čemuž dochází po jejich implantaci do organismu k jejich postupnému vstřebání (Stem, Kogan et al. 2007).
Pro dosažení mechanicky odolnějších materiálů a z důvodu zpomalení jejich biodegradace byla vyvinuta řada typů hydrogelů obsahujících kovalentně zesítěný hyaluronan. Takové hydrogely jsou využívány jako materiály pro viskosuplementaci synoviální tekutiny, augmentaci měkkých tkání, slouží jako podpůrné struktury pro kultivaci a implantaci buněk apod. (Tognana, Borrione et al. 2007, Buck li, Alam et al. 2009, Li, Raitcheva et al. 2012, Salwowska, Bebenek et al. 2016).
V minulosti byly rovněž vyvinuty různé typy derivátů hyaluronanu, které jsou schopny podstupovat přechod sol-gel za fyziologických podmínek in situ (Burdick and Prestwich 2011, Prestwich 2011). Pro tyto účely lze využít např. fenolické deriváty hyaluronanu. Calabro et al. (Calabro, Akst et al. 2008, Lee, Chung et al. 2008, Kurisawa, Lee et al. 2009) popisují ve spisech EP1587945B1 a EP1773943B1 postup přípravy fenolických derivátů hyaluronanu reakcí karboxylů přítomných ve struktuře D-glukuronové kyseliny hyaluronanu, s aminoalkyl-deriváty fenolu např. tyraminem. Produktem této reakce jsou amidy hyaluronanu (Darr and Calabro 2009).
Zesítění fenolických derivátů hyaluronanu může být iniciováno přídavkem peroxidázy (např. křenové peroxidázy) a zředěného roztoku peroxidu vodíku. Křenová peroxidáza (Horseradish peroxidase, HRP, E.C. 1.11.1.7) je v současné době využívána jako katalyzátor organických a biotransformačních reakcí (Akkara, Senecal et al. 1991, Higashimura and Kobayashi 2002, Ghan, Shutava et al. 2004, Shutava, Zheng et al. 2004, Veitch 2004). Hydrogely na bázi hydroxyfenylových derivátů hyaluronanu mohou být využívány jako injekčně aplikovatelné matrice pro řízené uvolňování biologicky aktivních látek nebo jako materiály vhodné pro kultivaci a implantaci buněk (Kurisawa, Lee et al. 2010). Wolfová et al. popisují ve spisu CZ303879 konjugát hyaluronanu a tyraminu obsahující alifatický linker vložený mezi řetězec polymeru a tyramin. Přítomnost alifatického linkeru umožňuje vyšší efektivitu síťovací reakce a dodává síti vyšší elasticitu.
Chondroitin sulfát (ChS) je dalším zástupcem glykosaminoglykanů, který je často využíván pro přípravu materiálů určených pro využití v léčbě degenerativních chorob, např. osteoartrózy (OA). Řetězec ChS je tvořen disacharidickými jednotkami složenými z Wacetylgalktozaminu (GalNAc)
- 1 CZ 33324 U1 a kyseliny iduronové (IdoA). Disacharidické jednotky ChS mohou být sulfatovány v poloze 4 a 6 GalNAc a popřípadě i v poloze 2 IdoA. Chondroitin sulfát je lineární, sulfatovaný a negativně nabitý glykosaminoglykan složený z opakujících se monomemích jednotek A-acetyl-Dgalaktosaminu a D-glukuronové kyseliny vzájemně propojených β(1—>3) a β(1—>4) Oglykosidickými vazbami (strukturní vzorec chondroitin sulfátu viz níže).
kde
R1 je H nebo Na,
R2 je H, O-SO2-OH nebo O-SO2-ONa
Zdrojem chondroitin sulfátu jsou živočišné pojivové tkáně, kde se váže na proteiny a tvoří tak součást proteoglykanů. Sulfatace chondroitinu se uskutečňuje pomocí sulfotransferáz v různých polohách a různém zastoupení. Jedinečný vzorec sulfatace jednotlivých poloh v polymerním řetězci kóduje specifickou biologickou aktivitu chondroitin sulfátu. Ten je důležitým stavebním blokem chrupavky v kloubech, kterým dodává odolnost v tlaku a obnovuje rovnováhu ve složení kloubového maziva (Baeurle S. A., Kiselev M. G., Makarova E. S., Nogovitsin E. A. 2009. Polymer 50: 1805). Chondroitin sulfát se společně s glukosaminem používá jako výživový doplněk na léčení, nebo také prevenci vzniku osteoartritidy u lidí (např. Flextor®, Advance Nutraceutics, Ltd.) nebo u zvířat (např. Gelorendog®, Contipro Pharma, Ltd.). Z farmaceutického hlediska se chondroitin sulfát považuje za léčivo se zpožděným nástupem účinku tlumení bolesti při degenerativním onemocnění kloubů (Aubry-Rozier B. 2012. Revue Médicale Suisse 14: 571).
In vitro a in vivo studie ukázaly, že ChS inhibuje účinek hyaluronidáz. Inhibiční účinek ChS na enzymy je způsoben tvorbou elektrostatických (iontových) interakcí. Také bylo prokázáno, že ChS je schopen zachycovat ROS a tím chránit před degradací složky extracelulární matrix (Bali, Cousse et al. 2001, Xiong and Jin 2007).
Využití kombinace hyaluronanu a chondroitin sulfátu pro přípravu prostředku pro ochranu lidských či živočišných buněk a tkání před traumatizací popisuje dokument EP0136782 (1983). Obdobně dokument US6051560 (1992) popisuje využití směsi hyaluronanu a chondroitin sulfátu jako viskosuplementačních materiálů během oftalmologických zákroků. Patent W0030417024 popisuje viskózní kompozici obsahující terapeuticky účinné množství směsi ChS a HA pro výrobu léčiv určených pro léčbu kloubů lidí s poškozením chrupavky způsobeným chondromalacií nebo OA stupně I a II, která využívá intraartikulární podání směsi. V patentové literatuře rovněž nalezneme dokumenty, které popisující prostředek pro parenterální podání vhodný pro prevenci a léčbu poškození kloubní chrupavky u lidí či zvířat, který se skládá z terapeuticky účinného množství chondroitin sulfátu, hyaluronanu a glukosaminu (W02004034980, 2002). Dokument EP2219595 popisuje formulaci na bázi polysacharidů, zejména glykosaminoglykanů, a jejich směsi s flavonoidy, která tvoří hydrogely s prodlouženou dobou biodegradace. Zmíněný dokument popisuje i hydrogel obashující hyaluronan, derivát hyaluronanu zesítěný butanediol 1,4-diglycidyl etherem a ChS, který vykazuje zvýšenou odolnost vůči degradaci působením enzymu hyaluronidázy.
Podstata technického řešení
Technické řešení se týká hydrogelu na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové, jehož podstatou je, že obsahuje molekuly hydroxyfenylového derivátu hyaluronové
-2CZ 33324 U1 kyseliny (HA-TA) nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl podle obecného vzorce I
kde n je v rozmezí 2 až 7500 a kde R1 je H+ nebo iont alkalické soli nebo soli alkalických zemin a R2 je OH nebo tyraminový substituent podle obecného vzorce II:
(Π), přičemž v rámci jedné molekuly hydroxyfenylového derivátu hyaluronové kyseliny nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli podle obecného vzorce I alespoň jeden R2 je tyraminový substituent podle obecného vzorce II a přičemž alespoň dva tyraminové substituenty podle obecného vzorce II jsou spojeny prostřednictvím kovalentní vazby v kterékoliv ortho poloze fenylových skupin, a dále obsahuje chondroitin sulfát nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl vybranou ze skupiny obsahující alkalické soli nebo soli alkalických zemin.
Alkalické soli nebo soli alkalických zemin hydroxyfenylového derivátu hyaluronové kyseliny podle obecného vzorce I nebo chondroitin sulfátu jsou s výhodou vybrány ze skupiny obsahující Na+, IC+, Ca2+, Mg2+.
Koncentrace chondroitin sulfátu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli je v rozsahu 0,5 až 50 mg/ml hydro gelu podle technického řešení, s výhodou v koncentraci 1 až 20 mg/1, výhodněji 5 mg/ml.
Obsah zesíťováného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu je v rozsahu 5 až 30 mg/ml, s výhodou 10 mg/ml hydrogelu podle technického řešení.
Podle dalšího výhodného provedení technického řešení hydrogel dále obsahuje kyselinu hyaluronovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl v koncentraci 1 až 20 mg/ml, s výhodou 5 až 10 mg/ml, výhodněji 5 mg/ml hydrogelu podle technického řešení.
Kovalentní vazba může být v rámci jedné molekuly derivátu kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce I v kterékoliv ortho poloze fenylových skupin alespoň dvou tyraminových substituentů obecného vzorce II, které se v této molekule nacházejí. Jedná se o takzvané intramolekulární zesíťování. Také může být kovalentní vazba v kterékoliv ortho poloze fenylových skupin alespoň dvou tyraminových substituentů obecného vzorce II, které se nacházejí v různých molekulách derivátu kyseliny hyaluronové podle obecného vzorce I. To představuje vzájemně propojenou síť mezi molekulami derivátu HA.
Příklad kovalentně zesítěného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu. (crossHA-TA) je schématicky ukázán níže viz vzorec III:
(ΙΠ)
Takové hydrogely podle technického řešení vykazují zvýšenou odolnost vůči biodegradačním pochodům vznikajícím působením hydrolytických enzymů a reaktivních forem kyslíku.
Podle výhodného provedení je střední molekulová (Mw) hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu podle obecného vzorce I v rozsahu 5 x 104 až 1,5 x 106 g.mol·1, s výhodou 2,5 x 105 až 1 x 106 g.mol1, výhodněji 8 xlO5 g.mol·1. Pije v rozsahu 1 až 3.
Podle dalšího provedení vynálezu je stupeň substituce (DS) hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu obecného vzorce I v rozsahu 0,5 až 10%, s výhodou 1 až 4%, výhodněji 1%.
Podle dalšího výhodného provedení je Mw chondroitin sulfátu rozsahu 5 x 103 až 95 x 103 g.mol· 1, dále výhodně 10 x 103 až 40 x 103 g.mol·1.
Podle výhodného provedení hydro gel obsahuje hyaluronan (HA) nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl o Mw v rozsahu 5 x 104 až 2,5 x 106 g.mol·1, s výhodou 1,5 xlO6 až 2,5 x 106 g.mol·1, výhodněji 2,0 x 106 g.mol·1.
Takové hydrogely podle technického řešení mohou být použity v kosmetice, medicíně a regenerativní medicíně, zejména pro přípravu materiálů pro regenerace tkáně, augmentace tkáně, přípravu scaffoldů pro tkáňové inženýrství, jako matrice pro řízené uvolňování biologicky aktivních látek a léčiv a viskosuplementaci synoviální tekutiny.
Stručný popis obrázků
Obr. 1: Porovnání rychlosti degradace roztoků HA s přídavkem ChS pomoci ROS
Obr. 2: Porovnání rychlosti degradace materiálů pomoci ROS
Obr. 3: Kumulativní degradace hydrogelu [%] BTH 30 U/mg
Příklady provedení technického řešení
DS = stupeň substituce = 100 % * molární množství modifikovaných disacharidických jednotek hyaluronanu / molární množství všech disacharadických jednotek derivátu hyaluronanu. Stupeň substituce byl stanoven pomocí *H NMR spektroskopií.
-4CZ 33324 U1
Hmotnostně střední molámí hmotnost (Mw) a index polydisperzity (PI) byly stanoveny metodou SEC-MALLS.
Infračervená spektra připravených derivátů byla získána metodou FT-IR.
Byl použit chondroitin sulfát ve farmaceutické kvalitě pro injekční podání od Bioiberica, ES.
Příklad 1
Syntéza tyraminováného derivátu HA (HA-TA)
Syntéza 6-amino-A-[2(4hydroxyfenyl)ethyl]hexanamidu
6-[(terc. butoxykarbonyl)amino]hexanová kyselina (1,00 g, 4,3 mmol) byla rozpuštěna v 50 ml tetrahydrofůranu (THF). K roztoku kyseliny byl přidán 1,1'karbodiimidazol (0,70 g, 4,3 mmol). Směs byla zahřívána na 50 °C po dobu šedesáti minut. Poté byla reakční nádoba promyta inertním plynem. K reakční směsi byl přidán tyramin (0,59 g, 4,3 mmol). Směs byla dále zahřívána další 2 hodiny. Poté byl destilací za sníženého tlaku odstraněn THF. Odparek byl rozpuštěn v 50 ml ethylacetátu. Roztok byl promyt 150 ml čištěné vody (rozděleno do tří dílů). Organická vrstva byla vysušena nad molekulovým sítem. Ethylacetát byl odstraněn destilací za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn v 50 ml MeOH a k roztoku byly přidány 2 ml trifluoroctové kyseliny (TFA). Roztok byl zahříván 6 hodin pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo bylo odstraněno destilací za sníženého tlaku. Odparek byl rozpuštěn v 50 ml ethylacetátu. Roztok byl promyt 150 ml čištěné vody (rozděleno do tří dílů). Organická vrstva byla vysušena nad molekulovým sítem. Ethylacetát byl odstraněn destilací za sníženého tlaku, m = 0,75 g (70 % teorie)
II NMR (D2O, ppm) δ: 1,17 (m, 2 H, y-CIF-hcxanovc kyseliny); l,48(m, 2 H, 3-CH2-hexanové kyseliny); 1,58 (m, 2 H, b-CIF-hcxanové kyseliny); 2,17 (t, 2 H, -CH2-CO-); 2,73 (m, 2 H, -CH2Ph); 2,91 (m, 2 H, -CH2-NH2); 3,42 (m, 2 H, -CH2-NH-CO-); 6,83 (d, 2 H, arom); 7,13 (d, 2 H, arom).
13C NMR(D20, ppm) δ: 24 (γ-C-hexanové kyseliny); 26 (δ-C-hexanové kyseliny); 33 (β-Chexanové kyseliny); 35 (-C-CO-); 39 (-C-NH2); 40 (C-Ph); 63 (-C-NH-CO-); 115 (C3 arom); 126 (Cl arom); 130 (C2 arom.); 153 (C4 arom); 176 (-CO-).
Příprava aldehydického derivátu (HA-CHO)
Hylauronan (10,00 g, Mw. = 2 x 106 g.mol1) byl rozpuštěn v 750 ml 2,5% (w/w) roztoku Na2HPO4 . 12 H2O. Roztok byl vychlazen na 5 °C. K vzniklému roztoku bylo přidáno 2,60 g NaBr a 0,05 g 4-acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-l-oxylu. Po důkladné homogenizaci roztoku byly k reakční směsi přidány 3 ml roztoku NaClO (10-15 % dostupného CI2). Reakce pokračovala za stálého míchání 15 min. Reakce byla ukončena přídavkem 100 ml 40% roztoku propan-2-olu. Produkt byl přečištěn ultrafiltrací a izolován precipitad propan-2-olem.
IČ (KBr): 3417, 2886, 2152, 1659, 1620, 1550, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038,945 ,893 cm1.
II NMR (D2O) δ: 2,01 (s, 3 H, CH3-), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomer), 4,54 (s, 1H anomer., -O-CH(OH)-), 5,27 (geminální glykol -CH-(OH)2).
a) Příprava tyraminováného derivátu HA s Ce spacerem (Mw « 3 x 105 g.mol1, DS ~ 2 %)
-5 CZ 33324 U1
Aldehydický derivát HA 3 x 105 g.mol1, DS = 9 %) (5,00 g) byl rozpuštěn v 500 ml demineralizované vody. Pomocí kyseliny octové bylo pH roztoku upraveno na 3. K roztoku HACHO byl přidán 6-amino-A-[2-(4-hydroxyfenyl)ethyl]hexanamid (meziprodukt (I)) (1,25 g, 5 mmol). Směs byla míchána 2 hodiny při laboratorní teplotě. Poté byl do reakční směsi přidán komplex pikolin-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Směs byla míchána dalších 12 hodin při laboratorní teplotě. Produkt byl přečištěn ultrafiltrací a izolován z retentátu precipitací propan-2-olem. Precipitát byl zbaven vlhkosti a zbytkového propan-2-olu sušením v horkovzdušné sušárně (40 °C, 3 dny).
IČ (KBr):: 3425,2893,2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038, 945,893 cm1.
II NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 Η, γ -CH2- aminohexanové kyseliny), 1,48 (m, 2 Η, δ -CH2aminohexanové kyseliny) 1,51 (m, 2 Η, β -CHz- aminohexanové kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-),
2,65 (m, 2H, PI1-CH2-), 2,73 (m, 2H, g-CIL- aminohexanové kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomer), 4,54 (s, 1H anomer., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom).
SEC MALLS: Mw - 2,78 x 105 g.mol1
DS CHNMR): 2,1 %
b) Příprava tyraminovaného derivátu HA s Ce spacerem (Mw « 8x 105 g.mol1, DS ~ 1 %) Aldehydický derivát HA (Mw ~ 8 x 105 g.mol1, DS ~ 5 %) (5,00 g) byl rozpuštěn v 500 ml demineralizované vody. Pomocí kyseliny octové bylo pH roztoku upraveno na 3. K roztoku HACHO byl přidán 6-amino-A-[2-(4-hydroxyfenyl)ethyl]hexanamid (meziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Směs byla míchána 2 hodiny při laboratorní teplotě. Poté byl do reakční směsi přidán komplex pikolin-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Směs byla míchána dalších 12 hodin při laboratorní teplotě. Produkt byl přečištěn ultrafiltrací a izolován z retentátu precipitací propan-2-olem. Precipitát byl zbaven vlhkosti a zbytkového propan-2-olu sušením v horkovzdušné sušárně (40 °C, 3 dny).
IČ (KBr):: 3425. 2893,2148, 1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236, 1204, 1154, 1078, 1038,945 ,893 cm1.
II NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 Η, γ -CH2- aminohexanové kyseliny), 1,48 (m, 2 Η, δ -CH2aminohexanové kyseliny) 1,51 (m, 2 Η, β -CH2- aminohexanové kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-),
2,65 (m, 2H, PI1-CH2-), 2,73 (m, 2H, g-CIL- aminohexanové kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomer), 4,54 (s, 1H anomer., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom).
SEC MALLS: Mw = 8,09 x 105 g.mol1
PS (ΊΙ NMR): 1,1 %
c) Příprava tyraminovaného derivátu HA s Ce spacerem (Mw « 1,5 x 106 g.mol1. DS « 0,5 %) Aldehydický derivát HA (Mw « 1,5 x 106 g.mol1, DS « 0,5 %) (5,00 g) byl rozpuštěn v 500 ml demineralizované vody. Pomocí kyseliny octové bylo pH roztoku upraveno na 3. K roztoku HACHO byl přidán 6-amino-A-[2-(4-hydroxyfenyl)ethyl]hexanamid (meziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Směs byla míchána 2 hodiny při laboratorní teplotě. Poté byl do reakční směsi přidán komplex pikolin-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Směs byla míchána dalších 12 hodin při laboratorní teplotě. Produkt byl přečištěn ultrafiltrací a izolován z retentátu precipitací propan-2-olem. Precipitát byl zbaven vlhkosti a zbytkového propan-2-olu sušením v horkovzdušné sušárně (40 °C, 3 dny).
IČ (KBr):: 3425, 2893, 2148,1660, 1620, 1549, 1412, 1378, 1323, 1236,1204, 1154, 1078, 1038, 945 ,893 cm1.
-6CZ 33324 U1
II NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 Η, γ -CHz- aminohexanové kyseliny), 1,48 (m, 2 Η, δ -CHzaminohexanové kyseliny) 1,51 (m, 2 Η, β -CHz- aminohexanové kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-),
2,65 (m, 2H, PI1-CH2-), 2,73 (m, 2H, s-CřL- aminohexanové kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomer), 4,54 (s, 1H anomer., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom).
SEC MALLS: Mw = 1,5 x 106 g.mol1
DS CHNMRl: 0,5 %
d) Příprava tyraminovaného derivátu HA s Ce spacerem (Mw ~ 5 x 104 g.mol1, DS « 10 %) Aldehydický derivát HA (Mw ~ 5 x l()4 g.mol1, DS « 10 %) (5,00 g) byl rozpuštěn v 500 ml demineralizované vody. Pomocí kyseliny octové bylo pH roztoku upraveno na 3. K roztoku HACHO byl přidán 6-amino-/V-[2-(4-hydroxyfenyl)ethyl]hexanamid (meziprodukt (I)) (0,625 g, 2,5 mmol). Směs byla míchána 2 hodiny při laboratorní teplotě. Poté byl do reakční směsi přidán komplex pikolin-boran (0,270 g, 2,5 mmol). Směs byla míchána dalších 12 hodin při laboratorní teplotě. Produkt byl přečištěn ultrafiltrací a izolován z retentátu precipitací propan-2-olem. Precipitát byl zbaven vlhkosti a zbytkového propan-2-olu sušením v horkovzdušné sušárně (40 °C, 3 dny).
IČ (KBr):: 3425, 2893, 2148, 1660,1620, 1549,1412, 1378,1323, 1236, 1204, 1154,1078, 1038, 945 ,893 cm1.
II NMR (D2O) δ: 1,25 (t, 2 Η, γ -CH2- aminohexanové kyseliny), 1,48 (m, 2 Η, δ -CH2aminohexanové kyseliny) 1,51 (m, 2 Η, β -CH2- aminohexanové kyseliny), 2,01 (s, 3 H, CH3-),
2,65 (m, 2H, Ph-CH2-), 2,73 (m, 2H, s-CH2- aminohexanové kyseliny), 3,37 - 3,93 (m, skelet hyaluronanu), 4,46 (s, 1H, anomer), 4,54 (s, 1H anomer., -O-CH(OH)-), 6,59 (d, 2H, arom.), 7,01 (d, 2H. arom).
SEC MALLS: Mw = 5 x 104 g.mol1
DS (111 NMR): 10%
Příklad 2
Příprava hydrogelů na bázi hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 20 mg/ml
Hydrogely byly připraveny smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, pro jejichž přípravu byl použit vodný roztok NaCl (9 g/1). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HA-TA o Mw = 2,78 x 105 g.mol1 a DS 2,1%. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 1).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP......................... | ...............0,48 U/ml | H2O2...................... | ..............2,0 mmol/1 |
| HA-TA................... | ..............20 mg/ml | HA-TA.................. | ..............20 mg/ml |
| NaCl........................ | ...............9 g/1 | NaCl...................... | ...............9 g/1 |
Tabulka 1: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu hydrogelů na bázi hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 20 mg/ml
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byly připraveny hydrogely s finálním složením, uvedeným v následující tabulce (Tabulka 2), kde crossHA-TA je kovalentně zesítěným hydroxyfenylovým derivátem hyaluronanu.
-7 CZ 33324 U1
| Složení hydrogelů HRP................................. | .........0,24 U/ml |
| crossHA-TA.................... | .......20 mg/ml |
| NaCl................................ | ............9 g/1 |
Tabulka 2: Finální složení hydrogelů na bází hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 20 mg/ml
Příklad 3
Příprava hydrogelů, obsahující ChS o koncentraci 0,5 mg/ml
Hydrogely byly připraveny smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, pro jejichž přípravu byl použit vodný roztok NaCl (9 g/1). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HATA o Mw = 2,78 x 105 g.mol·1 a DS 2,1% a ChS o Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol·1. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 3).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP........................... | ................0,48 U/ml | H2O2.......................... | ................2,0 mmol/1 |
| HA-TA....................... | ................20 mg/ml | HA-TA..................... | ................20 mg/ml |
| ChS........................... | ................0,5 mg/ml | ChS.......................... | ...............0,5 mg/ml |
| NaCl........................... | ................9 g/1 | NaCl.......................... | .................9 g/1 |
Tabulka 3: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu hydrogelů obsahující ChS o koncentraci 0,5 mg/ml
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byly připraveny hydrogely s finálním složením, uvedeným v následující tabulce (Tabulka 4), kde crossHA-TA je kovalentně zesítěným hydroxyfenylovým derivátem hyaluronanu.
| Složení hydrogelů | |
| HRP................................. | ..........0,24 U/ml |
| crossHA-TA.................... | ........20 mg/ml |
| ChS................................. | ............0,5 mg/ml |
| NaCl................................ | .............9 g/1 |
Tabulka 4: Finální složení hydrogelů obsahující ChS o koncentrací 0,5 mg/ml
Příklad 4
Příprava hydrogelů, obsahující ChS o koncentraci 3,3 mg/ml
Hydrogely byly připraveny smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, pro jejichž přípravu byl použit vodný roztok NaCl (9 g/1). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HATA o Mw = 2,78 x 105 g.mol1 a DS 2,1% a ChS o Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol·1. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 5).
-8CZ 33324 U1
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP........................... | .................0,48 U/ml | H2O2............................ | ............2,0 mmol/1 |
| HA-TA....................... | ................20 mg/ml | HA-TA........................ | ............20 mg/ml |
| ChS........................... | ................3,3 mg/ml | ChS............................. | ...........3,3 mg/ml |
| NaCl........................... | ................9 g/1 | NaCl............................ | ..............9 g/1 |
Tabulka 5: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu hydrogelů obsahující ChS o koncentraci 3,3 mg/ml
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byly připraveny hydrogely s finálním složením, uvedeným v následující tabulce (Tabulka 6), kde crossHA-TA je kovalentně zesítěným hydroxyfenylovým derivátem hyaluronanu.
| Složení hydrogelů | |
| HRP................................ | ..........0,24 U/ml |
| crossHA-TA.................... | ........20 mg/ml |
| ChS................................. | ............3,3 mg/ml |
| NaCl................................ | .............9 g/1 |
Tabulka 6: Finální složení hydrogelů obsahující ChS o koncentraci 3,3 mg/ml
Příklad 5
Příprava hydrogelů, obsahující ChS o koncentraci 10 mg/ml
Hydrogely byly připraveny smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, pro jejichž přípravu byl použit vodný roztok NaCl (9 g/1). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HATA o Mw = 2,78 x 105 g.mol1 a DS 2,1% a ChS o Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol1. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 7).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP........................... | .................0,48 U/ml | H2O2.......................... | ...............2,0 mmol/1 |
| HA-TA....................... | ................20 mg/ml | HA-TA...................... | ...............20 mg/ml |
| ChS........................... | .................10 mg/ml | ChS.......................... | ................10 mg/ml |
| NaCl........................... | .................9 g/1 | NaCl.......................... | .................9 g/1 |
Tabulka 7: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu hydrogelů obsahující ChS o koncentraci 10 mg/ml
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byly připraveny hydrogely s finálním složením, uvedeným v následující tabulce (Tabulka 8), kde crossHA-TA je kovalentně zesítěným hydroxyfenylovým derivátem hyaluronanu.
-9CZ 33324 U1
| Složení hydrogelů | |
| HRP................................ | .........0,24 U/ml |
| crossHA-TA.................... | .......20 mg/ml |
| ChS................................. | ...........10 mg/ml |
| NaCl................................ | ............9 g/1 |
Tabulka 8: Finální složení hydrogelů obsahující ChS o koncentraci 10 mg/ml
Příklad 6
Příprava hydrogelů, obsahující ChS o koncentraci 50 mg/ml
Hydrogely byly připraveny smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, pro jejichž přípravu byl použit vodný roztok NaCl (9 g/1). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HATA o Mw = 2,78 x 105 g.mol1 a DS 2,1% a ChS o Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol1. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 9).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP....................... | ....................0,48 U/ml | H2O2......................... | ................2,0 mmol/1 |
| HA-TA................... | ....................20 mg/ml | HA-TA..................... | ................20 mg/ml |
| ChS........................ | .....................50 mg/ml | ChS.......................... | ...............50 mg/ml |
| NaCl....................... | .....................9 g/1 | NaCl......................... | .................9 g/1 |
Tabulka 9: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu hydrogelů obsahující ChS o koncentraci 50 mg/ml
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byly připraveny hydrogely s finálním složením, uvedeným v následující tabulce (Tabulka 10), kde crossHA-TA je kovalentně zesítěným hydroxyfenylovým derivátem hyaluronanu.
| Složení hydrogelů | |
| HRP................................ | ..........0,24 U/ml |
| crossHA-TA.................... | ........20 mg/ml |
| ChS................................. | ............50 mg/ml |
| NaCl................................ | .............9 g/1 |
Tabulka 10: Finální složení hydrogelů obsahující ChS o koncentrací 50 mg/ml
Příklad 7
Příprava hydrogelů, obsahující HA o koncentrací 5 mg/ml
Příprava hydrogelů, obsahujících nezesítěnou kyselinu hyaluronovou zahrnovala 3 základní
- 10CZ 33324 U1 kroky:
1) Příprava hydrogelů obsahujícího zesítěný derivát crossHA-TA
Hydrogel obsahující zesítěný derivát crossHA-TA byl přípraven smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, které byly připraveny rozpuštěním jednotlivých složek ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HA-TA o Mw = 8,09 x 105 g.mol1 a DS 1,1 %. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 11).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP............................... | ........12,8 mU/ml | H2O2........................... | |
| HA-TA.......................... | ..........20 mg/ml | HA-TA....................... | .......20 mg/ml |
| NaCl.............................. | ..........8 g/1 | NaCl............................ | .......8 g/1 |
| KC1............................... | .........0,2 g/1 | KC1............................. | ........0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O........... | ..........2,85 g/1 | Na2HPO4.12H2O......... | ........2,85 g/1 |
| KH2PO4......................... | ..........0,2 g/1 | KH2PO4........................ | .......0,2 g/1 |
Tabulka 11: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu zesítěného derivátu crossHA-TA
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byl připraven hydrogel o složení uvedeném v následující tabulce (Tabulka 12).
| Složení zesítěného derivátu crossHA-TA | |
| HRP............................. | ...........0,24 U/ml |
| crossHA-TA............... | ......20 mg/ml |
| NaCl............................. | ...........8 g/1 |
| KC1.............................. | ............0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O.......... | ...........2,85 g/1 |
| KH2PO4........................ | ...........0,2 g/1 |
Tabulka 12: Složení zesítěného derivátu crossHA-TA
2) Příprava roztoku hyaluronanu
Roztok HA o koncentraci 5 mg/ml byl připraven rozpouštěním nativního hyaluronanu o Mw l,91xl06 g.mol1 v PBS.
3) Homogenizace hydrogelů a roztoku hyaluronanu
Finální hydrogel byl připraven smícháním zesítěného derivátu crossHA-TA a roztoku HA v poměru 1:1 s následnou homogenizaci směsi. Finální složení materiálu je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 13).
- 11 CZ 33324 U1
| Finální složení | |
| HRP.............................. | ..........0,12 U/ml |
| crossHA-TA.................. | ........10 mg/ml |
| HA................................ | ..........5 mg/ml |
| NaCl............................... | ..........8 g/1 |
| KC1............................... | ...........0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O........... | ..........2,85 g/1 |
| KH2PO4.......................... | ..........0,2 g/1 |
Tabulka 13: Finální složení hydrogelu, obsahující HA o koncentrací 5 mg/ml
Příklad 8
Příprava hydrogelů, obsahující HA o koncentraci 20 mg/ml
Příprava hydrogelů, obsahujících nezesítěnou kyselinu hyaluronovou zahrnovala 3 základní kroky:
1) Příprava hydrogelů obsahujícího zesítěny derivát crossHA-TA
Hydrogel obsahující zesítěný derivát crossHA-TA byl přípraven smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, které byly připraveny rozpuštěním jednotlivých složek ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HA-TA o Mw = 8,09 x 105 g.mol1 a DS 1,1 %. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 14).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP............................... | ........12,8 mU/ml | H2O2............................ | .......0,6 mmol/1 |
| HA-TA.......................... | ..........20 mg/ml | HA-TA........................ | .......20 mg/ml |
| NaCl.............................. | ..........8 g/1 | NaCl............................ | .......8 g/1 |
| KC1............................... | ...........0,2 g/1 | KC1............................. | ........0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O........... | ..........2,85 g/1 | Na2HPO4.12H2O......... | ........2,85 g/1 |
| KH2PO4......................... | ..........0,2 g/1 | KH2PO4....................... | .......0,2 g/1 |
Tabulka 14: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu zesítěného derivátu crossHA-TA
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byl připraven hydrogel o složení uvedeném v následující tabulce (Tabulka 15).
- 12CZ 33324 U1
| Složení zesítěného derivátu crossHA-TA | |
| HRP............................. | ...........0,24 U/ml |
| crossHA-TA................ | ......20 mg/ml |
| NaCl............................ | ...........8 g/1 |
| KC1.............................. | ............0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O......... | ..........2,85 g/1 |
| KH2PO4........................ | ...........0,2 g/1 |
Tabulka 15: Složení zesítěného derivátu crossHA-TA
2) Příprava roztoku hyaluronanu
Roztok HA o koncentraci 40 mg/ml byl připraven rozpouštěním nativního hyaluronanu o Mw 1,91 x 106 g.mol1 v fosfátovém pufru (PBS).
3) Homogenizace hydrogelu a roztoku hyaluronanu
Finální hydrogel byl připraven smícháním zesítěného derivátu crossHA-TA a roztoku HA v poměru 1:1 s následnou homogenizaci směsi. Finální složení materiálu je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 16).
Finální složení
HRP........................................0,12U/ml crossHA-TA..........................10 mg/ml
HA..........................................20mg/ml
NaCl8 g/1
KC1..........................................0,2 g/1
Na2HPO4.12H2O.....................2,85 g/1
KH2PO4....................................0,2 g/1
Tabulka 16: Finální složení hydrogelu, obsahující HA o koncentraci 20 mg/ml
Příklad 9
Příprava hydrogelů, obsahující HA o koncentraci 5 mg/ml a ChS o koncentraci 5 mg/ml
Příprava hydrogelů, obsahujících nezesítěnou kyselinu hyaluronovou a chondroitin sulfát zahrnovala 3 základní kroky:
1) Příprava hydrogelů obsahujícího zesítěny derivát crossHA-TA
- 13 CZ 33324 U1
Hydrogel obsahující zesítěný derivát crossHA-TA byl přípraven smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, které byly připraveny rozpuštěním jednotlivých složek ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HA-TA o Mw = 8,09 x 105 g.mol1 a DS 1,1 %. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 17).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP............................... | H202............................. | .......0,6 mmol/1 | |
| HA-TA........................... | ..........20 mg/ml | HA-TA....................... | .......20 mg/ml |
| NaCl............................... | ..........Bg/1 | NaCl............................ | .......Bg/1 |
| KC1............................... | ...........0,2 g/1 | KC1............................. | ........0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O............ | ..........2,85 g/1 | Na2HPO4.12H2O......... | ........2,85 g/1 |
| KH2PO4......................... | ..........0,2 g/1 | KH2PO4........................ | .......0,2 g/1 |
Tabulka 17: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu zesítěného derivátu crossHA-TA
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byl připraven hydrogel o složení uvedeném v následující tabulce (Tabulka 18).
| Složení zesítěného derivátu crossHA-TA | |
| HRP............................. | ...........0,24 U/ml |
| crossHA-TA................ | ......20 mg/ml |
| NaCl............................. | ............Bg/1 |
| KC1.............................. | ............0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O......... | ...........2,85 g/1 |
| KH2PO4........................ | ...........0,2 g/1 |
Tabulka 18: Složení zesítěného derivátu crossHA-TA
2) Příprava roztoku s obsahem hyaluronanu a chondroitin sulfátu
Roztok HA o koncentraci 10 mg/ml a ChS o koncentraci 10 mg/ml byl připraven rozpouštěním nativního hyaluronanu o Mw 1,91 x 106 g.mol1 a chondroitin sulfátu ChS o Mw =10x103 - 40 x 103 g.mol1 v fosfátovém pufru (PBS).
3) Homogenizace hydrogelů a roztoku s obsahem hyaluronanu a chondroitin sulfátu
Finální hydrogel byl připraven smícháním zesítěného derivátu crossHA-TA a roztoku HA a ChS v poměru 1:1 s následnou homogenizaci směsi. Finální složení materiálu je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 19).
Finální složení
HRP........................................0,12 U/ml
- 14CZ 33324 U1 crossHA-TA..........................10 mg/ml
HA..........................................5 mg/ml
ChS........................................5 mg/ml
NaCl.........................................Bg/1
KC1..........................................0,2 g/1
Na2HPO4.12H2O.....................2,85 g/1
KH2PO4....................................0,2 g/1
Tabulka 19: Finální složení hydrogelu, HA o koncentraci 5 mg/ml a ChS o koncentraci 5 mg/ml
Příklad 10
Příprava hydrogelů, obsahující HA o koncentraci 5 mg/ml a ChS o koncentraci 10 mg/ml
Příprava hydrogelů, obsahujících nezesítěnou kyselinu hyaluronovou a chondroitin sulfát zahrnovala 3 základní kroky:
1) Příprava hydrogelu obsahujícího zesítěný derivát crossHA-TA
Hydrogel obsahující zesítěný derivát crossHA-TA byl připraven smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, které byly připraveny rozpuštěním jednotlivých složek ve fosfátem pufrovaném iyziologickém roztoku (PBS). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HA-TA o Mw = 8,09 x 105 g.mol1 a DS 1,1 %. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 20).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP............................... | ........12,8 mU/ml | H2O2............................ | .......0,6 mmol/1 |
| HA-TA.......................... | ..........20 mg/ml | HA-TA........................ | .......20 mg/ml |
| NaCl.............................. | ..........8 g/1 | NaCl............................ | .......8 g/1 |
| KC1............................... | .........0,2 g/1 | KC1............................. | ........0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O........... | ..........2,85 g/1 | Na2HPO4.12H2O......... | ........2,85 g/1 |
| KH2PO4......................... | ..........0,2 g/1 | KH2PO4........................ | .......0,2 g/1 |
Tabulka 20: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu zesítěného derivátu crossHA-TA
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byl připraven hydrogel o složení uvedeném v následující tabulce (Tabulka 21).
- 15 CZ 33324 U1
| Složení zesítěného derivátu crossHA-TA | |
| HRP............................. | ...........0,24 U/ml |
| crossHA-TA................ | .......20 mg/ml |
| NaCl............................. | ...........8 g/1 |
| KC1.............................. | ............0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O.......... | ...........2,85 g/1 |
| KH2PO4........................ | ...........0,2 g/1 |
Tabulka 21: Složení zesítěného derivátu crossHA-TA
2) Příprava roztoku s obsahem hyaluronanu a chondroitin sulfátu
Roztok HA o koncentraci 10 mg/ml a ChS o koncentraci 20 mg/ml byl připraven rozpouštěním nativního hyaluronanu o Mw 1,91 x 106 g.mol1 a chondroitin sulfátu o Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mor1 v fosfátovém pufru (PBS).
3) Homogenizace hydrogelů a roztoku s obsahem hyaluronanu a chondroitin sulfátu
Finální hydrogel byl připraven smícháním zesítěného derivátu crossHA-TA a roztoku HA a ChS v poměru 1:1 s následnou homogenizaci směsi. Finální složení materiálu je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 22).
| Finální složení | |
| HRP.............................. | ..........0,12 U/ml |
| crossHA-TA.................. | .........10 mg/ml |
| HA................................ | .........5 mg/ml |
| ChS............................... | .........10 mg/ml |
| NaCl.............................. | ..........8g/l |
| KC1............................... | ...........0,2 g/1 |
| Na2HPO4.12H2O........... | ..........2,85 g/1 |
| KH2PO4......................... | ..........0,2 g/1 |
Tabulka 22: Finální složení hydrogelů, HA o koncentraci 5 mg/ml a ChS o koncentraci 10 mg/ml
Příklad 11
Příprava hydrogelů na bázi hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 5 mg/ml
Hydrogely byly připraveny smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, pro jejichž přípravu byl použit vodný roztok NaCl (9 g/1). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HATA o Mw = 1,5 x 106 g.mof1 a DS 0,5%. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 23).
- 16CZ 33324 U1
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP........................... | .................0,12 U/ml | H2O2......................... | ................0,5 mmol/1 |
| HA-TA....................... | ................5 mg/ml | HA-TA..................... | ................5 mg/ml |
| NaCl........................... | .................9 g/1 | NaCl.......................... | .................9 g/1 |
Tabulka 23: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu hydrogelů na bázi hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 5 mg/ml
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byly připraveny hydrogely s finálním složením, uvedeným v následující tabulce (Tabulka 24), kde crossHA-TA je kovalentně zesítěným hydroxyfenylovým derivátem hyaluronanu.
| Složení hydrogelů HRP.................................. | ........0,06 U/ml |
| crossHA-TA...................... | .........5 mg/ml |
| NaCl.................................. | ..........9 g/1 |
Tabulka 24: Finální složení hydrogelů na bázi hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 5 mg/ml
Příklad 12
Příprava hydrogelů na bázi hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 30 mg/ml
Hydrogely byly připraveny smícháním dvou prekurzorových roztoků A a B, pro jejichž přípravu byl použit vodný roztok NaCl (9 g/1). Pro přípravu prekurzorových roztoků byl použit hydroxyfenylový derivát HATA o Mw = 5 x 104 g.mol·1 a DS 10%. Složení roztoků je uvedeno v následující tabulce (Tabulka 25).
| Roztok A | Roztok B | ||
| HRP........................... | ................1,2 U/ml | H2O2........................ | ...............5 mmol/1 |
| HA-TA....................... | ...............30 mg/ml | HA-TA..................... | ................30 mg/ml |
| NaCl........................... | ................9 g/1 | NaCl.......................... | .................9 g/1 |
Tabulka 25: Složení prekurzorových roztoků pro přípravu hydrogelů na bázi hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 30 mg/ml
Smícháním roztoku A a roztoku B v poměru 1:1 byly připraveny hydrogely s finálním složením, uvedeným v následující tabulce (Tabulka 26), kde crossHA-TA je kovalentně zesítěným hydroxyfenylovým derivátem hyaluronanu.
Složení hydrogelů
HRP.......................................0,6 U/ml crossHA-TA...........................30 mg/ml
- 17 CZ 33324 U1
NaCl........................................9 g/1
Tabulka 26: Finální složení hydrogelů na bázi hydroxyfenylového derivátu HA-TA o koncentraci 30 mg/ml
Příklad 13
Degradace roztoků HA s přídavkem ChS pomoci ROS
Pro porovnání rychlosti degradace roztoků HA s ChS působením ROS byly připraveny roztoky hyaluronanu v fosfátovém pufru (PBS) s různou koncentraci ChS. Pro přípravu roztoků byla použita kyselina hyaluronová o Mw 1,91 x 106 g.mol1 a ChS o Mw = 10 x 103 - 40 x 103 g.mol1. Roztok A obsahoval 20 mg/ml HA, roztok B 20 mg/ml HA a 0,5 mg/ml ChS, roztok C 20 mg/ml HA a 1 mg/ml ChS, roztok D 20 mg/ml HA a 3 mg/ml ChS, roztok E 20 mg/ml HA a 5 mg/ml ChS, roztok E 20 mg/ml HA a 20 mg/ml ChS.
Provedení experimentu degradace
Rychlost degradace byla vyjádřena jako procentuální pokles viskozity roztoků při smykové rychlosti 0,1 s1 oproti počáteční hodnotě. Měření poklesu viskozity se provádělo na reometru Kinexus Malvern v konfiguraci cone-plate. Byl použit kužel o průměru 40 mm s vrcholovým úhlem 1°. Degradace materiálu probíhala v 10 ml stříkačkách, kde do 9 ml materiálu bylo přidáno 0,5 ml roztoku CuSO4 o koncentraci 0,25 mmol/1 a následně 0,5 ml roztoku H2O2 o koncentraci 2,5 mmol/1. Během probíhající degradace hydrogelů byly v předem daných časových intervalech odebírány vzorky materiálu, u kterých byla naměřena viskozita při teplotě 25 °C a smykové rychlosti 0,1 s1. Celková doba degradace činila 3 h.
Obr. 1 znázorňuje degradaci řetězců hyaluronanu, která je vyjádřena procentuálním poklesem viskozity roztoků v čase. Z Obr. 1 je vidět vliv koncentrace ChS na rychlost degradace hyaluronanu. Se zvyšující se koncentrací ChS klesá rychlost degradace HA působením ROS. Viskozita roztoku A, který neobsahoval ChS se po 3 hodinách poklesla o 97 % oproti počáteční hodnotě před degradaci, roztoku B (s přídavkem 0,5 mg/ml ChS) už o 89 %, roztoku C, do kterého bylo přidáno 1 mg/ml ChS o 84 %, roztoku D (20 mg/ml HA + 3 mg/ml ChS) o 46 %, roztoku E (20 mg/ml HA + 5 mg/ml ChS) o 25 % a roztoku F (20 mg/ml HA + 20 mg/ml ChS) pouze 08%.
Příklad 14
Degradace hydrogelů na bázi zesítěného derivátu crossHA-TA působením ROS
Pro porovnání rychlosti degradace hydrogelů působením ROS byly připraveny 3 typy materiálů.
Materiál A je roztok HA o koncentraci 20 mg/ml, který byl připraven rozpouštěním HA o Mw 1,91 x 106 g.mol1 v PBS.
Materiály B je směs zesítěného derivátu crossHA-TA a nezesítěné HA, který byl připraven dle příkladu 7.
Materiály C a D se skládaly z nezesítěné HA, CHS a crossHA-TA a byly připraveny podle příkladů 9 a 10.
Rychlost degradace byla vyjádřena jako procentuální pokles viskozity materiálů při smykové rychlosti 0,1 s1 oproti počáteční hodnotě. Měření poklesu viskozity se provádělo na reometru
- 18 CZ 33324 U1
Kinexus Malvern v konfiguraci cone-plate. Byl použit kužel o průměru 40 mm s vrcholovým úhlem 1°. Degradace materiálu probíhala v 10 ml stříkačkách, kde do 9 ml materiálu bylo přidáno 0,5 ml roztoku CuSO4 o koncentraci 0,25 mmol/1 a následně 0,5 ml roztoku H2O2 o koncentraci 2,5 mmol/1. Po určitých časech degradace se odebíraly vzorky, u kterých byla naměřena viskozita při teplotě 25 °C a smykové rychlosti 0,1 s1. Celková doba degradace činila 3 h. Z Obr. 2 je zřejmě, že přítomnost ChS v připravených hydrogelech (C - 5 mg/ml ChS; D - 10 mg/ml ChS) zvyšuje jejich odolnost vůči působení ROS.
Příklad 15
Enzymatická degradace hydrogelů na bázi zesítěného derivátu crossHA-TA
Pro zjištění vlivu přítomnosti ChS na rychlost degradace hydrogelů na bázi crossHA-TA působením bovinní testikulámí hyaluronidázy byly připraveny 3 typy hydrogelů:
A - hydrogely bez přídavku chondroitin sulfátu, které byly připraveny dle postupu v příkladu 2 B - hydrogely s přídavkem ChS o koncentraci 3,3 mg/ml, které byly připraveny dle postupu v příkladu 4
C - hydrogely s přídavkem ChS o koncentraci 10 mg/ml, které byly připraveny dle postupu v příkladu 5.
Rychlost degradace byla vyjádřena jako nárůst koncentrace produktů degradace, způsobené BTH, vyjádřený v procentech.
Hydrogely byly ponořeny do degradačního média (roztok hyaluronidázy BTH o aktivitě 30 U/mg v roztoku hovězího sérového albuminu (BSA) o koncentraci 0,1 mg/ml v 0,01 mol/1 octanovém pufiru (OP) pH 5,3). Degradace hydrogelů probíhala v inkubátoru při 37° C za současného míchání. Po určitých časových intervalech se odebíraly vzorky degradačního média s produkty degradace hydrogelů. Koncentrace disacharidických jednotek HA v degradačním médiu byla stanovena spektrofotometricky jako koncentrace Mačety Iglú kosami nu. Obr. 3 znázorňuje nárůst koncentrace degradačních produktů hydrogelů v médiu v čase. Z Obr. je zřejmé, že přítomnost ChS v hydrogelech na bázi crossHA-TA vede ke snížení rychlosti degradace materiálů působením hyaluronidázy.
Odkazy:
Aubry-Rozier B. 2012. Revue Médicale Suisse 14: 571
Akkara, J. A., K. J. Senecal and D. L. Kaplan (1991). Synthesis and characterization of polymers produced by horseradish peroxidase in dioxane. Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry 29(11): 1561-1574.
Bali, J.-P., H. Cousse and E. Neužil (2001). Biochemical basis of the pharmacologic action of chondroitin sulfates on the osteoarticular system. Seminars in Arthritis and Rheumatism 31(1): 58-68.
Baeurle S. A., Kiselev M. G., Makarova E, S., Nogovitsin E. A. 2009. Polymer 50: 1805
Buck li, D. W., M. Alam and J. Y. S. Kim (2009). Injectable fillers for facial rejuvenation: a review. Journal of Plastic. Reconstructive & Aesthetic Surgery 62(1): 11-18.
Burdick, J. A. and G. D. Prestwich (2011). Hyaluronic Acid Hydrogels for Biomedical Applications. Advanced Materials 23(12): H41-H56.
- 19CZ 33324 U1
Calabro, A., L. Akst, D. Alam, J. Chan, A. B. Darr, K. Fukamachi, R. A. Gross, D. Haynes, K. Kamohara, D. P. Knott, H. Lewis, A. Melamud, A. Miniaci and M. Strome (2008). Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof. United States, The Cleveland Clinic Foundation (Cleveland, OH, US).
Darr, A. and A. Calabro (2009). Synthesis and characterization of tyramine-based hyaluronan hydrogels. Journal of Materials Science: Materials in Medicine 20(1): 33-44.
Ghan, R., T. Shutava, A. Patel, V. T. John and Y. Lvov (2004). Enzyme-Catalyzed Polymerization of Phenols within Polyelectrolyte Microcapsules. Macromolecules 37(12): 45194524.
Higashimura, H. and S. Kobayashi (2002). Oxidative Polymerization. John Wiley & Sons, Inc. Kurisawa, M., F. Lee and J. E. Chung (2009). Formation of Hydrogel in the Presence of Peroxidase and Low Concentration of Hydrogen Peroxide
Kurisawa, M., F. Lee, L.-S. Wang and J. E. Chung (2010). Injectable enzymatically crosslinked hydrogel system with independent tuning of mechanical strength and gelation rate for drug delivery and tissue engineering. Journal of Materials Chemistry 20(26): 5371-5375. Lee, F., J. E. Chung and M. Kurisawa (2008). An injectable enzymatically crosslinked hyaluronic acidtyramine hydrogel system with independent tuning of mechanical strength and gelation rate. Soft Matter 4: 880-887.
Li, P., D. Raitcheva, M. Hawes, N. Moran, X. Yu, F. Wang and G. L. Matthews (2012). Hylan G-F 20 maintains cartilage integrity and decreases osteophyte formation in osteoarthritis through both anabolic and anti-catabolic mechanisms. Osteoarthritis and Cartilage 20(11): 1336-1346.
Prestwich, G. D. (2011). Hyaluronic acid-based clinical biomaterials derived for cell and molecule delivery in regenerative medicine. J Control Release 155(2): 193-199.
Salwowska, N. M., A. Bebenek, D. A. Zqdlo and D. L. Wcislo-Dziadecka (2016). Physiochemical properties and application of hyaluronic acid: a systematic review. Journal of Cosmetic Dermatology 15(4): 520-526.
Shutava, T., Z. Zheng, V. John and Y. Lvov (2004). Microcapsule modification with peroxidase-catalyzed phenol polymerization. Biomacromolecules 5(3): 914-921.
Stern, R., G. Kogan, M. J. Jedrzejas and L. Soltés (2007). The many ways to cleave hyaluronan. Biotechnology advances 25(6): 537-557.
Tognana, E., A. Borrione, C. De Luca and A. Pavesio (2007). Hyalograft C: hyaluronan-based scaffolds in tissue-engineered cartilage. Cells Tissues Organs 186(2): 97-103.
Veitch, N. C. (2004). Horseradish peroxidase: a modem view of a classic enzyme. Phytochemistry 65(3): 249-259.
Volpi, N. (2019). Chondroitin Sulfate Safety and Quality. Molecules (Basel, Switzerland) 24(8): 1447.
Xiong, S.-L. and Z.-Y. Jin (2007). THE FREE RADICAL-SCAVENGING PROPERTY OF CHONDROITIN SULFATE FROM PIG LARYNGEAL CARTILAGE IN VITRO. Journal of Food Biochemistry 31(1): 28-44.
Xu, X., A. K. Jha, D. A. Harrington, M. C. Farach-Carson and X. Jia (2012). Hyaluronic AcidBased Hydrogels: from a Natural Polysaccharide to Complex Networks. Soft matter 8(12):
-20CZ 33324 U1
3280-3294.
NÁROKY NA OCHRANU
Claims (5)
1. Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové, vyznačující se tím, že obsahuje molekuly hydroxyfenylového derivátu hyaluronové kyseliny (HA-TA) nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl podle obecného vzorce I
kde n je v rozmezí 2 až 7500 a kde R1 je H+ nebo iont alkalické soli nebo soli alkalických zemin a R2 je OH nebo tyraminový substituent podle obecného vzorce II:
(Π), přičemž v rámci jedné molekuly hydroxyfenylového derivátu hyaluronové kyseliny nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli podle obecného vzorce I je alespoň jeden R2 tyraminový substituent podle obecného vzorce II a přičemž alespoň dva tyraminové substituenty podle obecného vzorce II jsou spojeny prostřednictvím kovalentní vazby v kterékoliv ortho poloze fenylových skupin, a dále obsahuje chondroitin sulfát nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl vybranou ze skupiny obsahující alkalické soli nebo soli alkalických zemin.
2. Hydrogel podle nároku 1, vyznačující se tím, že alkalické soli nebo soli alkalických zemin jsou vybrány ze skupiny obsahující Na+, K+, Ca2+, Mg2+.
3. Hydrogel podle nároku 1 nebo nároku 2, vyznačující se tím, že koncentrace chondroitin sulfátu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli je v rozsahu 0,5 až 50 mg/ml hydrogelu, s výhodou v koncentraci 1 až 20 mg/I, výhodněji 5 mg/ml.
4. Hydrogel podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že obsah zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu je v rozsahu 5 až 30 mg/ml, s výhodou 10 mg/ml hydrogelu.
5. Hydrogel podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že dále obsahuje kyselinu hyaluronovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl v koncentraci 1 až 20 mg/ml hydrogelu, s výhodou 5 až 10 mg/ml, výhodněji 5 mg/ml hydrogelu.
3 výkresy
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2019-36602U CZ33324U1 (cs) | 2019-09-06 | 2019-09-06 | Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové |
| PCT/CZ2020/050065 WO2021043349A1 (en) | 2019-09-06 | 2020-09-03 | Hydrogel based on crosslinked hydroxyphenyl derivative of hyaluronic acid |
| DE212020000715.2U DE212020000715U1 (de) | 2019-09-06 | 2020-09-03 | Hydrogel auf der Basis eines vernetzten Hydroxyphenylderivats der Hyaluronsäure |
| ATGM9011/2020U AT18104U1 (de) | 2019-09-06 | 2020-09-03 | Hydrogel auf Basis eines vernetzten Hydroxyphenylderivats der Hyaluronsäure |
| SK50027-2022U SK9649Y1 (sk) | 2019-09-06 | 2020-09-03 | Hydrogél na báze zosieťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyalurónovej |
| FR2009046A FR3104945B3 (fr) | 2019-09-06 | 2020-09-07 | Hydrogel à base d’un dérivé hydroxyphényle réticulé d’acide hyaluronique |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2019-36602U CZ33324U1 (cs) | 2019-09-06 | 2019-09-06 | Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ33324U1 true CZ33324U1 (cs) | 2019-10-25 |
Family
ID=68384244
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2019-36602U CZ33324U1 (cs) | 2019-09-06 | 2019-09-06 | Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT18104U1 (cs) |
| CZ (1) | CZ33324U1 (cs) |
| DE (1) | DE212020000715U1 (cs) |
| FR (1) | FR3104945B3 (cs) |
| SK (1) | SK9649Y1 (cs) |
| WO (1) | WO2021043349A1 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ308970B6 (cs) * | 2020-05-12 | 2021-10-27 | Contipro A.S. | Sada gelotvorných roztoků určená pro přípravu hydrogelu na bázi kovalentně zesítěného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu k prevenci pooperačních komplikací souvisejících s vytvořením kolorektální anastomózy a její použití |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU555747B2 (en) | 1983-08-09 | 1986-10-09 | Cilco Inc. | Chondroitin sulfate and sodium hyaluronate composition |
| US6051560A (en) | 1986-06-26 | 2000-04-18 | Nestle S.A. | Chrondroitin sulfate/sodium hyaluronate composition |
| DE10156617A1 (de) | 2001-11-17 | 2003-05-28 | Biosphings Ag | Herstellung reiner Stereoisomere von Tricyclo[5.2.1.0··2··.··6··]-dec-9-yl-xanthogenat und Arzneimittel daraus |
| NZ540045A (en) | 2002-10-16 | 2008-04-30 | Frank D Marcum | Treatment for traumatic synovitis and damaged articular cartilage with chondroitin sulfate, N-acetyl D-glucosamine and hyaluronan |
| US7465766B2 (en) * | 2004-01-08 | 2008-12-16 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| US6982298B2 (en) * | 2003-01-10 | 2006-01-03 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| WO2006010066A2 (en) | 2004-07-09 | 2006-01-26 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| US8394782B2 (en) | 2007-11-30 | 2013-03-12 | Allergan, Inc. | Polysaccharide gel formulation having increased longevity |
| KR101091028B1 (ko) * | 2009-07-02 | 2011-12-09 | 아주대학교산학협력단 | 체내 주입형 하이드로젤 및 이의 생의학적 용도 |
| KR101161640B1 (ko) * | 2009-08-25 | 2012-07-02 | 서울과학기술대학교 산학협력단 | 리포산이 결합된 화합물과 이의 제조방법 |
| EP2498824B1 (en) * | 2009-11-11 | 2016-04-20 | University of Twente, Institute for Biomedical Technology and Technical Medicine (MIRA) | Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers |
| CZ28434U1 (cs) * | 2015-05-18 | 2015-07-07 | Contipro Biotech S.R.O. | Nanokompozit na bázi hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové nebo jejísoli obsahující nanočástice fosforečnanu vápenatého |
-
2019
- 2019-09-06 CZ CZ2019-36602U patent/CZ33324U1/cs active Protection Beyond IP Right Term
-
2020
- 2020-09-03 WO PCT/CZ2020/050065 patent/WO2021043349A1/en active Application Filing
- 2020-09-03 AT ATGM9011/2020U patent/AT18104U1/de unknown
- 2020-09-03 DE DE212020000715.2U patent/DE212020000715U1/de active Active
- 2020-09-03 SK SK50027-2022U patent/SK9649Y1/sk unknown
- 2020-09-07 FR FR2009046A patent/FR3104945B3/fr active Active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ308970B6 (cs) * | 2020-05-12 | 2021-10-27 | Contipro A.S. | Sada gelotvorných roztoků určená pro přípravu hydrogelu na bázi kovalentně zesítěného hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu k prevenci pooperačních komplikací souvisejících s vytvořením kolorektální anastomózy a její použití |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE212020000715U1 (de) | 2022-04-21 |
| SK500272022U1 (sk) | 2022-07-27 |
| SK9649Y1 (sk) | 2022-11-24 |
| WO2021043349A1 (en) | 2021-03-11 |
| FR3104945B3 (fr) | 2021-12-10 |
| AT18104U1 (de) | 2024-02-15 |
| FR3104945A3 (fr) | 2021-06-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yang et al. | Recent advance in delivery system and tissue engineering applications of chondroitin sulfate | |
| Aravamudhan et al. | Natural polymers: polysaccharides and their derivatives for biomedical applications | |
| KR100674177B1 (ko) | 교차 결합된 히알루론산과 그것의 의학적 용도 | |
| CA2672495C (en) | Novel injectable chitosan mixtures forming hydrogels | |
| JP5746617B2 (ja) | キトサン混合物を形成する注入可能なヒドロゲル | |
| US8481080B2 (en) | Method of cross-linking hyaluronic acid with divinulsulfone | |
| PT2470230E (pt) | Geles viscoelásticos como enchimentos inovadores | |
| US8202986B2 (en) | Branched hyaluronic acid and method of manufacture | |
| EP0977780B1 (en) | Hetero-polysaccharide conjugates, s-inp polysaccharide gels and methods of making and using the same | |
| Morelli et al. | Perspectives on biomedical applications of ulvan | |
| Fakhari | Biomedical application of hyaluronic acid nanoparticles | |
| CZ33324U1 (cs) | Hydrogel na bázi zesíťovaného hydroxyfenylového derivátu kyseliny hyaluronové | |
| CZ2015445A3 (cs) | Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití | |
| CN106714856B (zh) | 含有糖胺聚糖和蛋白质的组合物 | |
| Brekke et al. | Hyaluronan as a biomaterial | |
| JPH0273019A (ja) | 多環性芳香族化合物を含有する医薬品合成物 | |
| EP3980029B1 (en) | Means for use in preparation of hydrogel based on hydroxyphenyl derivative of hyaluronan, method of hydrogel preparation and use thereof | |
| CZ33901U1 (cs) | Prostředek pro použití k přípravě hydrogelu na bázi hydroxyfenylového derivátu hyaluronanu | |
| RU2750000C1 (ru) | Способ получения модифицированного гиалуронана и его применение в медицине, в том числе при эндопротезировании | |
| CN106573013B (zh) | 用于治疗关节炎的包含石莼多糖的粘性补充剂组合物 | |
| IT202100012737A1 (it) | Miscele di polisaccaridi e poliamminosaccaridi con proprietà reologiche migliorate | |
| Kumar et al. | Use of Polysaccharides: Novel Delivery System for Genetic Material | |
| Dhanasingh | sP (EO-stat-PO)-glycosaminoglycans (GAGs) hybrid-hydrogels for medical applications | |
| Lendlein et al. | Biodegradable polyurethanes and poly (ester amide) s | |
| Cai | Glycosaminoglycans and their binding proteins: Biochemical studies and development of potential wound healing biomaterials |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20191025 |
|
| ND1K | First or second extension of term of utility model |
Effective date: 20230815 |