CZ309716B6 - Přípravek k léčení degenerativních poškození sítnice - Google Patents
Přípravek k léčení degenerativních poškození sítnice Download PDFInfo
- Publication number
- CZ309716B6 CZ309716B6 CZ2019-765A CZ2019765A CZ309716B6 CZ 309716 B6 CZ309716 B6 CZ 309716B6 CZ 2019765 A CZ2019765 A CZ 2019765A CZ 309716 B6 CZ309716 B6 CZ 309716B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- stem cells
- pharmaceutical solution
- preparation
- trehalose
- retina
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 title claims description 7
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 title abstract description 14
- 230000006378 damage Effects 0.000 title description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims abstract description 21
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 3
- 206010057430 Retinal injury Diseases 0.000 claims 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 abstract description 11
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 abstract description 11
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 abstract description 11
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 6
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 10
- 208000007014 Retinitis pigmentosa Diseases 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 2
- 208000001344 Macular Edema Diseases 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 108010013480 succinylated gelatin Proteins 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000028006 Corneal injury Diseases 0.000 description 1
- 206010058202 Cystoid macular oedema Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025415 Macular oedema Diseases 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 201000010206 cystoid macular edema Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229940076783 lucentis Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 201000010230 macular retinal edema Diseases 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000000162 organ preservation solution Substances 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940007079 succinylated gelatin Drugs 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 208000029257 vision disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Vynález se týká terapeutického přípravku sestávajícího z kmenových buněk a pufrovaného vodného roztoku obsahujícím trehalózu či sacharózu pro intravitreální podání je určena při invazivní léčbě degenerativních onemocnění lidského oka, především patologických změn na sítnici. Přípravek podle vynálezu obsahuje 7 až 13 x 106 purifikovaných expandovaných mesenchymálních kmenových buněk na ml přípravku, přičemž farmaceutický roztok obsahuje kationty K+, Mg2+ Na+ a anionty Cl-, PO43- a/nebo HPO42- a/nebo H2PO4-, SO42- a dále obsahuje 0,18 až 0,22 mol trehalózy nebo sacharózy na litr farmaceutického roztoku, přičemž pH farmaceutického roztoku je 7,1 až 7,6 a celková osmolarita farmaceutického roztoku je 200 až 400 mosmol/l.
Description
Přípravek k léčení degenerativních poškození sítnice
Oblast techniky
Vynález se týká prostředku složeného z kmenových buněk a pufrovaného vodného roztoku obsahujícím trehalózo či sacharózu. Tato terapeutická směs pro intravitreální podání je určena pro invazivní léčbu degenerativních onemocnění lidského oka, především patologických změn na sítnici.
Dosavadní stav techniky
Léčba degenerativních onemocnění oka, konkrétně sítnice je i přes pokročilé terapeutické možnosti moderní medicíny stále nedostatečná. Sítnice je za fyziologických podmínek zodpovědná za snímání a zpracování světelných signálů přicházející z předních částí oka na zrakový nerv. Mezi nejčastější onemocnění sítnice patří věkem podmíněná makulární degenerace, diabetická retinopatie či retinitis pigmentóza. Onemocnění sítnice patří k velmi častým důvodům poruchám vidění či úplné ztrátě vidění. Účinná cílená terapie je velmi omezená. Onemocnění retinitis pigmentóza nelze k datu sepsání tohoto patentu nijak vyléčit. Obecně jsou dostupné terapeutické postupy, které mohou progresy onemocnění zpomalit. Výjimku tvoří velmi specifické případy s konkrétní detekovanou mutací, kdy lze použít metody genové terapie, která může zvyšovat úspěch léčby.
Použití autologních kmenových buněk, zejména mesenchymálních kmenových buněk, je v současné době velmi perspektivní díky jejich jedinečným vlastnostem a možnému pleiotropnímu efektu. Mesenchymální kmenové buňky mají významný imunomodulační efekt, mohou sekretovat cytokiny a jiné látky, které se mohou podílet na nejen imunologické regulaci mikroprostředí, ve kterém se vyskytují. Mesenchymální kmenové buňky mají navíc vysoký diferenciační potenciál. Výhodou mesenchymálních kmenových buněk je jejich snadná izolace a expanze in vitro. Jejich použití pro degenerativní onemocnění oka je například diskutováno v publikaci Perspectives of Stem Cell-Based Therapy for Age-Related Retinal Degenerative Diseases (Holáň et al., Cell transplantation, 2017).
Trehalóza je přírodně se vyskytující disacharid, který může chránit buněčné struktury před oxidačním stresem a je také součástí roztoků pro uchování orgánů určených pro transplantaci chráněných patenty US 6365338 a US 8512940 B2. Pufrovaný vodný roztok trehalózy vyniká účinnou ochranou také pro skladování kmenových buněk, jak bylo popsáno v patentu CZ 2016-284 (306800) - prostředek pro uchování, transport a aplikaci kmenových buněk k léčebnému použití, tvořený pufrovaným vodným roztokem trehalózy. Podobně jako trehalózu, sacharózu lze použít pro ochranu mesenchymálních kmenových buněk například při jejich zamražování a má další potenciální možnosti využití v biotechnologiích. Trehalóza je součástí oftalmologického léčivého přípravku Lucentis (ranibizumabum) jako pomocná látka. Její funkce je udržení vhodné tonicity léčivého přípravku. Trehalóza je součástí různých očních kapek a je také obsažena v přípravku spolu s vodíkem pro léčbu degerativního onemocnění oka (dle CZ 2017-84), nebo také součástí přípravku k léčení zánětlivých onemocnění a poranění oční rohovky, obsahující limbální kmenové buňky, nosič z netkané textilie z nanovláken a farmaceutický roztok obsahující 1 až 10 % hmotn., s výhodou 2 až 5 % hmotn., trehalózy (CZ 2016-644).
Nedostatky terapeutických možností degenerativních onemocnění sítnice odstraňuje prostředek dle vynálezu. Bylo zahájeno množství klinických studií sledujících terapeutický efekt buněčné terapie. Nicméně klíčovou roli v takto připraveném preparátu hraje zdroj a čistota použitých buněk a zároveň přidaný sacharid - trehalóza či sacharóza, které působí synergicky. Mechanismus takového účinku je zatím předmětem dalšího testování.
- 1 CZ 309716 B6
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález, který umožňuje další terapeutické možnosti pro pacienty s retinitis pigmentóza, s diabetickou retinopatií nebo s věkem podmíněnou makulární degenerací je složen z pufrovaného vodného roztoku obsahujícím trehalózu či sacharózu a ex vivo izolovaných a expandovaných mesenchymálních kmenových buněk. Roztok obsahuje nezbytné složky - kationty K+, Mg2+, Ca2+ Na+ a anionty Cl-, PO43- a/nebo HPO42- a/nebo H2PO4-, SO42 a vodu. Optimální celková osmolarita roztoku není vyšší než 400 mosmol/l. Požadovaná koncentrace buněk ve finálním přípravku je 7 až 13 x 106/ml, tedy 10,5 až 19,5 x 106 buněk v 1,5 ml. Tato koncentrace je optimální pro zajištění terapeutického efektu. Zvýšením koncentrace buněk nad uvedený limit se nezvyšuje účinnost přípravku. Jedná se o terapeutickou suspenzi, která je určena pro intravitreální aplikace do postiženého oka. Bylo zjištěno, že účinek mesenchymálních kmenových buněk se synergicky zvyšuje, pokud je použit současně pufrovaný vodný roztok obsahující trehalózu či sacharózu.
Podstatou vynálezu je inovativní kombinace purifikovaných a expandovaných kmenových buněk, které spolu s trehalózou či sacharózou zpomalují progresi degenerativního onemocnění sítnice. Lze očekávat pozitivní efekt také na jiné degenerativní onemocnění.
Objasnění výkresů
Přiložené obrázky zobrazují ústup makulárního edému u pacienta po podání přípravku dle vynálezu. Obrázek č. 1 zobrazuje mikrofotografii stavu sítnice před podání přípravku, obrázek č. 2 zobrazuje mikrofotografii stavu sítnice po třech měsících po podání přípravku. V grafech na obrázcích je znázorněna tloušťka sítnice ve sledovaném místě edému. Tloušťka vrstvy před podáním přípravku byla 416 μm a po podání 385 μm. Analýza byla pořízena přístrojem RTA (retina thickeness analyzer).
Příklady uskutečnění vynálezu
Mesenchymální kmenové buňky byly izolovány z autologní kostní dřeně, která byla odebrána pacientům trepanobiotickou jehlou, která je součástí odběrového setu obsahujícího fyziologický roztok s heparinem. Čistá frakce mesenchymální kmenových buněk byla kultivována ex vivo a pasážována do 3. pasáže. Podrobněji, po transportu kostní dřeně do prostor pro sterilní výrobu a zpracování biologického materiálu byl vzorek smíchán s infuzním roztokem Gelofusinu, což je roztok obsahující ionty Na+, Cl- a sukcinylovanou želatinu. Směs sedimentovala cca 10 minut a následně z ní byla separována vrstva prstence mononukleárních buněk. Do každé z připravených kultivačních lahví o ploše 75 cm2 bylo přidáno 10 ml kompletního kultivačního média Alpha MEM Eagle obsahující 5% hmotn. lidský destičkový lyzát a 5 milionů jaderných buněk pro nasazení primokultury. Kultivace buněk probíhala v CO2 inkubátorech při 37 ± 2 °C a v 5 ± 1 % CO2 při teplotě 37 ± 0,5 °C. V průběhu kultivace buněk probíhala průběžná výměna kompletního kultivačního média s případným oplachem buněk pomocí pufru PBS. Dle konfluence profilerujících buněk probíhalo jejich pasážování, tedy řízené enzymatické odloučení adherujících buněk. Pasážování probíhalo pomocí enzymu TrypLE Select CTS. Třetím pasážováním buněk bylo dosaženo finální suspenze buněk. Ta byla několikrát promyta pufrem PBS a centrifugována při 230 g po dobu 5 minut. Tímto byla vytvořena peleta kultivovaných mesenchymálních buněk, která byla finálně resuspendována v pufrovaném roztoku obsahujícím trehalózu či sacharózu. Finální koncentrace buněk byla 7,5 x 106/ml a v druhém příkladném provedení 12,0 x 106/ml. Purifikace mesenchymální kmenových buněk může probíhat cestou specifické adherence na kultivační plast, je ovšem možné použít také metodu průtokové cytometrie a sortovat buňky dle jejich specifických povrchových znaků (CD105+, CD90+, CD73+, CD45-, CD34-, CD14-, CD19-, HLA-DR-). Čistota buněk musí být nejméně 80 %, s výhodou však více než 90 %.
- 2 CZ 309716 B6
Roztok obsahující trehalózu či sacharózu o 200 až 400 mM osmolaritě a s koncentrací trehalózy či sacharózy 0,18 až 0,22 mol/l obsahoval také nezbytné pufrační ionty: kationty K+, Ca2+, Mg2' Na+ a anionty Cl-, HPO42, H2PO4’, SO42 a vodu.
Pro další testování bylo použito první příkladné provedení suspenze dle vynálezu, tedy 200mM roztok trehalózy. K jeho přípravě bylo použito:
| 100 ml roztoku obsahuje | |
| Dihydrogenfosforečnan draselný | 0,41 g |
| Hydrogenfosforečnan sodný dihydrát | 0,27 g |
| Trehalóza | 7,56 g |
| Chlorid vápenatý | 7,4 mg CaCl2.2H2O |
| Síran hořečnatý | 12 mg MgSO4.7H2O |
Po provedení všech potřebných testů kontroly kvality tohoto finálního produktu (například test sterility, detekce přítomnosti mykoplazmat, fenotypová charakterizace kmenových buněk apod.) byla suspenze testována v rámci toxikologické studie. Po získání všech výsledků a vyhodnocení byla následně suspenze aplikována do postiženého oka pacientů (se závažnějším stupně progrese onemocnění), druhé oko bylo ponecháno bez aplikace přípravku. Aplikace přípravku byla provedena pomocí intravitreální jehly. Výběr reálných výsledků u pacientů sledovaných po 6 měsíců od aplikace přípravku dle vynálezu je uveden níže.
120 • Pacient č. 1 (retinitis pigmentóza)
| Pacient č. 1 | 0 měsíců | 1 měsíc | 2 měsíce | 3 měsíce | 6 měsíců |
| Průměrná tloušťka neuroretiny (μm) | 181 | 178 | 177 | 179 | 176 |
| Skóre zrakové ostrosti | 53 | 66 | 74 | 71 | 76 |
| Snellenův ekvivalent zrakové ostrosti | 0,4 | 0,5 | 0,63 | 0,5 | 0,63 |
| Fixační stabilita | 100% | 99% | 100% | 100% | 100% |
| Průměrný práh senzitivity retiny (dB) (MAlA - micropetrimetry) | 9,4 | 10,8 | 9,4 | 9,6 | 8,5 |
Na konci sledovací doby bylo zaznamenáno zjevné zlepšení zrakové ostrosti. Senzitivita retiny (dB) se mírně zhoršila. Anatomicky průměrná tloušťka neuroretiny kolísala mezi hodnotami 176 až 181 μm - lze tedy říci, že byla beze změn. Zraková ostrost se zlepšila z 0,4 na 0,63 dle Snellena. Nález na studovaném oku lze hodnotit jako stabilizaci onemocnění po šesti měsících od aplikace přípravku dle vynálezu.
• Pacient č. 2 (retinitis pigmentóza)
| Pacient č. 2 | 0 měsíců | 1 měsíc | 2 měsíce | 3 měsíce | 6 měsíců |
| Průměrná tloušťka neuroretiny (μm) | 207 | 210 | 214 | 210 | 207 |
| Skóre zrakové ostrosti | 14 | 10 | 27 | 12 | 14 |
| Snellenův ekvivalent zrakové ostrosti | 0,16 | 0,13 | 0,15 | 0,20 | 0,20 |
| Fixační stabilita | |||||
| Průměrný práh senzitivity retiny (dB) (MAlA - micropetrimetry) |
- 3 CZ 309716 B6
Pacient nezvládal mikroperimetrické vyšetření pro pokročilé změny. Nicméně po aplikace přípravku dochází k subjektivnímu zlepšení. Zlepšena je také mírně zraková ostrost. Tloušťka centrální neuroretiny beze změn. Pacient byl schopen se lépe orientovat v cizím prostředí. Fixační stabilita a stanovení průměrného prahu senzitivity retiny nebylo možné u tohoto pacienta provést. U tohoto pacienta lze hovořit o zlepšení, resp. stabilizaci onemocnění.
• Pacient č. 3 (retinitis pigmentóza)
| Pacient č. 3 | 0 měsíců | 1 měsíc | 2 měsíce | 3 měsíce | 6 měsíců |
| Průměrná tloušťka neuroretiny (μm) | 392 | 419 | 387 | 377 | 380 |
| Skóre zrakové ostrosti | 78 | 77 | 80 | 82 | 75 |
| Snellenův ekvivalent zrakové ostrosti | 0,9 | 0,8 | 0,9 | 0,8 | 0,8 |
| Fixační stabilita | 99% | 100% | 100% | 100% | 98% |
| Průměrný práh senzitivity retiny (dB) (MAlA - micropetrimetry) | 5,4 | 5,8 | 5,4 | 6,0 | 5,9 |
Pacient s retinitis pigmentóza komplikovanou cystoidním edémem makuly. Subjektivně beze změn. Zraková ostrosti dle ETDRS je mírně horší, ale jen 3 písmena, průměrná tloušťka centrální neuroretiny fovey se snížila, což je pozitivní, protože edém neuroretiny ustoupil. Zlepšila se citlivost centrální neuroretiny dle mikroperimetrie.
Průmyslová využitelnost
Prostředek připravený dle vynálezu pro řešení degenerativního poškození sítnice je určen k intravitreální aplikaci. Je možné jej využít v rámci buněčné terapie při různých formách degenerativního onemocnění lidské sítnice, především retinitis pigmentóza. Prostředek podle vynálezu lze použít pro jednorázovou léčebnou aplikaci tak i pro dlouhodobé podávání pro stabilizaci daného onemocnění.
Claims (1)
1 . Terapeutický přípravek tvořený suspenzí kmenových buněk ve farmaceutickém roztoku s obsahem trehalosy, obsahující 7 až 13 x 106 purifikovaných expandovaných mesenchymálních 5 kmenových buněk na mililitr přípravku, přičemž farmaceutický roztok obsahuje kationty K+, Mg2+,
Na+ a anionty Cl’, PO43 a/nebo HPO42 a/nebo H2PO4’, SO42 a dále obsahuje 0,18 až 0,22 mol trehalózy na litr farmaceutického roztoku, přičemž pH farmaceutického roztoku je 7,1 až 7,6 a celková osmolarita farmaceutického roztoku je 200 až 400 mosmol/l, pro použití k léčení degenerativních poškození sítnice.
10 2. Terapeutický přípravek podle nároku 1, kde purifikované expandované mesenchymální kmenové buňky pocházejí z autologní kostní dřeně.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2019-765A CZ309716B6 (cs) | 2019-12-12 | 2019-12-12 | Přípravek k léčení degenerativních poškození sítnice |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2019-765A CZ309716B6 (cs) | 2019-12-12 | 2019-12-12 | Přípravek k léčení degenerativních poškození sítnice |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2019765A3 CZ2019765A3 (cs) | 2021-06-23 |
| CZ309716B6 true CZ309716B6 (cs) | 2023-08-16 |
Family
ID=76474425
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2019-765A CZ309716B6 (cs) | 2019-12-12 | 2019-12-12 | Přípravek k léčení degenerativních poškození sítnice |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ309716B6 (cs) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015148120A1 (en) * | 2014-03-14 | 2015-10-01 | The Curators Of The University Of Missouri | Methods and compositions for treatment of neurodegenerative diseases |
| WO2017195179A1 (en) * | 2016-05-13 | 2017-11-16 | Institute Of Experimental Medicine As Cr, V.V.I. | Solution for the preservation, transport and application of stem cells |
| CZ2017396A3 (cs) * | 2017-07-07 | 2019-01-16 | Bioinova, S.R.O. | Prostředek pro uchování lidských nebo zvířecích buněk při velmi nízkých teplotách a jeho použití |
-
2019
- 2019-12-12 CZ CZ2019-765A patent/CZ309716B6/cs unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015148120A1 (en) * | 2014-03-14 | 2015-10-01 | The Curators Of The University Of Missouri | Methods and compositions for treatment of neurodegenerative diseases |
| WO2017195179A1 (en) * | 2016-05-13 | 2017-11-16 | Institute Of Experimental Medicine As Cr, V.V.I. | Solution for the preservation, transport and application of stem cells |
| CZ2017396A3 (cs) * | 2017-07-07 | 2019-01-16 | Bioinova, S.R.O. | Prostředek pro uchování lidských nebo zvířecích buněk při velmi nízkých teplotách a jeho použití |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| S. S. PARK A KOL.: "Advances in bone marrow stem cell therapy for retinal dysfunction", PROGRESS IN RETINAL AND EYE RESEARCH, vol. 56, 23 October 2016 (2016-10-23), pages 148 - 165, XP029881863, ISSN: 1350-9462, DOI: 10.1016/j.preteyeres.2016.10.002 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2019765A3 (cs) | 2021-06-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4943324B2 (ja) | 新生血管病の治療のための組成物および方法 | |
| US20220054554A1 (en) | Scalable Production of Standardized Extracellular Vesicles, Extracellular Vesicle Preparations and Uses Thereof | |
| ES2811085T3 (es) | Composiciones, usos y preparación de lisados de plaquetas | |
| KR101342447B1 (ko) | 중추신경계 병변 치료용 뉴런성 전구체 세포의 용도 | |
| JP2021505667A (ja) | ざ瘡およびバイオフィルムに対するバクテリオファージ処置 | |
| US20230145213A1 (en) | Pre-conditioned mesenchymal stem cells and preparations and applications thereof | |
| JPWO2020045642A1 (ja) | 眼細胞を保存または培養するための組成物および方法 | |
| Pan et al. | Combined transplantation with human mesenchymal stem cells improves retinal rescue effect of human fetal RPE cells in retinal degeneration mouse model | |
| Wu et al. | Disrupted potassium ion homeostasis in ciliary muscle in negative lens-induced myopia in Guinea pigs | |
| US20200140811A1 (en) | Compositions for treating retinal diseases and methods for making and using them | |
| US20210380939A1 (en) | Methods of human retinal progenitor cell isolation and culture | |
| AU2017306558A1 (en) | Reelin compositions for treatment of neurological disorders | |
| CZ309716B6 (cs) | Přípravek k léčení degenerativních poškození sítnice | |
| JP2017501133A (ja) | Ｃｘｃｒ拮抗性ペプチド及びその用途 | |
| CZ33778U1 (cs) | Přípravek k léčení degenerativních poškození sítnice | |
| CN110721308A (zh) | 一种用于治疗骨关节炎的药物复方制剂及其制备方法 | |
| Khairullah et al. | Subtenon implantation of Wharton’s jelly-derived mesenchymal stromal cells in retinitis pigmentosa | |
| US20220096526A1 (en) | Methods and compositions for the treatment and prevention of ocular diseases and conditions | |
| CN110694051A (zh) | 一种神经导向因子Sema在制备治疗骨关节炎注射剂中的应用 | |
| Maura Fernandes de Lima et al. | The kinetics of non-synaptically triggered acute excitotoxic responses in the central nervous system observed using intrinsic optical signals | |
| RU2623646C1 (ru) | Способ лечения глаукомной оптической нейропатии посредством трансплантации 3D-клеточной культуры мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток лимба | |
| Mangunsong et al. | Multifocalelectroretinography result before and after peribulbar injection of allogeneic umbilical cord—mesenchymal stem cell secretome for late‑stage retinitis pigmentosa | |
| Fernandes de Lima et al. | Interaction of small cationic peptides with intact basement membranes. A study using intrinsic optical signals of chick retinas | |
| dos Santos Evangelho et al. | Early Detection of Functional Changes in an Intraocular Hypertension Rabbit Model Treated with Human Wharton Jelly Mesenchymal Stem Cells (hWJ-MSCs) Using Chromatic Pupillometry. | |
| Korhonen | Inflammasome activation in response to aberrations of cellular homeostasis in epithelial cells from human cornea and retina |