CZ301754B6

CZ301754B6 - Premostené indenopyrrolokarbazoly

Info

Publication number: CZ301754B6
Application number: CZ20004522A
Authority: CZ
Inventors: Singh@Jasbir; P. Mallamo@John; Tripathy@Rabindranath; L. Hudkins@Robert; Underiner@Theodore
Original assignee: Cephalon, Inc.
Priority date: 1998-06-05
Filing date: 1999-06-04
Publication date: 2010-06-16
Also published as: HUP0102512A2; EA004066B1; SK285368B6; PT1083903E; DE69919700D1; KR20010071385A; NZ508306A; CA2334189C; US6359130B1; EA200100012A1; PL198434B1; DK1083903T3; EP1083903A4; DE69919700T2; JP4481493B2; EP1083903A1; BG65447B1; AU744900B2; US6127401A; EP1083903B1

Abstract

Jsou popsány premostené indenopyrrolokarbazolové slouceniny vzorce II, ve kterém R.sup.1.n., R.sup.4.n., R.sup.6.n. a R.sup.7.n. jsou každý H, Y je O, n je 1, A.sub.1.n.A.sub.2.n. a B.sub.1.n.B.sub.2.n. jsou nezávisle =O nebo H,H, R.sup.2.n. je H, OR nebo C.sub.1.n. až C.sub.4.n. alkyl s prímým retezcem, cyklický nebo rozvetvený, R.sup.3.n. je H, Br, CH.sub.2.n.OCH.sub.2.n.OC.sub.2.n.H.sub.5.n. nebo 3'NH.sub.2.n.Ph nebo C.sub.1.n. až C.sub.8.n. alkyl s prímým retezcem, cyklický nebo rozvetvený, Ph znamená fenyl, R.sup.5.n. je H nebo C.sub.1.n. až C.sub.8.n. alkoxy s prímým retezcem, cyklický nebo rozvetvený a R.sup.8.n. je H, CH.sub.3.n., CH.sub.2.n.OH, CH.sub.2.n.C.sub.2.n.H.sub.5.n., C(O)OC.sub.2.n.H.sub.5.n. nebo C.sub.1.n. až C.sub.8.n. alkoxy s prímým retezcem, cyklický nebo rozvetvený, Z je vazba nebo O, m je 1 nebo 2 a R je vodík. Jsou popsány také farmaceutické prostredky s jejich obsahem a použití takových sloucenin pro výrobu léku, napr. pro lécení zánetu, onemocnení prostaty, nemocí související s angiogenezí, ... atd.

Description

Přemostěné indenopyrrolokarbazoly

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových fúzovaných arylem nebo heteroarylem přemostěných indenopyrrolokarbazolů, které jsou zde označovány jako „přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny“. Vynález se také týká farmaceutických prostředků s jejich obsahem a použití přemostěných indenopyrrolokarbazolů pro výrobu léků.

io

Dosavadní stav techniky

Materiál získaný z mikrobů, označený jako „K-252a“, je jedinečná sloučenina, která vzbudila značnou pozornost v několika minulých letech pro různé své funkční aktivity. K-252aje indolokarbazolový alkaloid, který byl původně izolován z kultury Nocardiosis sp. (Kase, H. et al., J. Antibiotics, 1059, 1986). K-252a je inhibitor několika enzymů, včetně protein kinasyC (PKC), která má centrální význam pro regulaci buněčných funkcí, a trk tyrosin kinasy. Popsané funkční aktivity K-252a a jeho derivátů jsou Četné a různorodé: inhibice nádorů (viz patenty

2ó US 4 877 776, US 4 923 986 a US 5 063 330; evropská patentová přihláška 238 011, Nomato); anti-insekticidní aktivita (viz patent US 4 735 939); léčba onemocnění spojených s neuronálními buňkami (viz patenty US 5 461 146; US 5 621 100; US 5 621 101; a WIPO přihláška WO 94/02488, publikovaná 3. 2. 1994 na jméno Cephalon, INC. a Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.); a léčba onemocnění prostaty (viz patenty US 5 516 771; a US 5 654 427). Také bylo popsáno, že K-252a inhibuje produkci IL-2 (viz Grove, D. S. et al., Experimental Cell Research 193:175-182,1991),

Popsané indolkarbazoly mají několik společných rysů. Konkrétně, každý obsahuje tři pětičlenné kruhy, které každý obsahují dusíkovou skupinu; staurosporin (získaný z Streptomyces sp.) a K-252a každý dále obsahují sacharidovou skupinu vázanou prostřednictvím dvou N-glykosidových vazeb. Jak K-252a, tak staurosporin byly důkladně studovány z hlediska jejich použitelnosti jako terapeutických Činidel. Indolkarbazoly jsou obecně lypofilní, což umožňuje jejích snadný průnik hematoencephaiickou bariérou a oproti proteinovým materiálů mají další poločas in vivo.

Ačkoli je K-252a obyčejně získán z kultivačního média fermentací, byla provedena celková syntéza přirozeného (+) izomeru a nepřirozeného (-) ízomeru (viz Wood et al., J. Am. Chem. Soc. 117: 10413, 1995, a WIPO přihláška WO 97/07081). Nicméně, tato syntéza není praktická pro komerční účely.

Kromě indolkarbazolových alkaloidů representovaných K-252a a staurosporinem byly připraveny malé organické molekuly, které jsou biologicky aktivní a které jsou známé jako fúzované pyrrolokarbazoly (viz patenty US 5 475 110; US 5 591 855; US 5 594 009; US 5 705 511; US 5 705 511; a US 5 616 724).

Fúzované izoindolony, což jsou molekuly neobsahující žádný indol, které mohou být chemicky syntetizovány de novo, jsou také známé (viz WIPO přihláška WO 97/21677).

Některé bis-indolylmaleimidové makrocyklické deriváty byly také popsány (viz například paten50 ty US 5 710 145; US 5 672 618; US 5 552 396; a US 5 545 636).

Také byly popsány sacharidové deriváty indolpyrrolokarbazolů (viz WIPO přihláška WO 98/07433).

-1 CZ 301754 B6

Existuje potřeba nových pyrrolokarbazolových derivátů mající výhodné vlastnosti. Vynález je zaměřen na tyto deriváty, stejně jako najiné cíle.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina vzorce II

ve kterém io

R¹, R⁴, R⁶ a R⁷ jsou každý Η, Y je O, n je 1, A|A2 a BiB2 jsou nezávisle =0 nebo H,H, R² je H, OR nebo C! až C4 alkyl s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený, R³ je H, Br, CH2OCH2OC2H5 nebo 3'NH2Ph nebo Ci až C8 alkyl s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený, Ph znamená fenyl, R⁵ je H nebo Ct až C₈ alkoxy s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvět15 vený a R⁸ je H, CH₃, CH₂OH, CH₂C₂H₅, C(O)OC₂H₅ nebo Ci až C₈ alkoxy s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený, Z je vazba nebo O, m je 1 nebo 2 a R je vodík.

Výhodným provedením tohoto vynálezu je přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina vzorce II, kterou tvoří diastereomeiy vzorce

Jiným výhodným provedením tohoto vynálezu je přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina vzorce II, kterou tvoří enantiomery vzorce uz. jui do

Jiným výhodným provedením tohoto vynálezu je přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina mající vzorec

-3CZ 3U1754 B6 nebo

ve kterém

R³ je H, Br, CH2OCH2OC2H5 nebo 3'NH2Ph nebo C| až C8 alkyl s přímým řetězcem, cyklický 5 nebo rozvětvený, Ph znamená fenyl a R⁵ je H nebo Cj až C8 alkoxy s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený.

Z nich výhodným provedením tohoto vynálezu je přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina, která má vzorec

CZ, JU1 /□*# DO

Z nich ještě výhodnějším provedením tohoto vynálezu je přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina, kterou tvoří enantiomery vzorce

popřípadě přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina, kterou tvoří diastereomery vzorce

Předmětem tohoto vynálezu je dále farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu vzorce H a farmaceuticky přijalo telný nosič.

-5CZ 301754 B6

Výhodným provedením předmětu vynálezu je farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu vzorce

a farmaceuticky přijatelný nosič.

Jiným výhodným provedením tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu svrchu uvedeného vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič, určený pro léčbu nebo prevenci onemocnění prostaty. Zvláště výhodným provedením io je farmaceutický prostředek svrchu uvedeného složení, určený proti onemocnění prostaty, kterým je karcinom prostaty nebo benigní hyperplasie prostaty.

-6CZ JUi/34 BO

Jiným výhodným provedením tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu svrchu uvedeného vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič, určený pro léčbu nebo prevenci onemocnění souvisejících s angiogenesí. Ještě výhod5 nějším provedením tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek určený proti onemocněním souvisejícím s angiogenesí, kterými je solidní nádor, endometriosa, diabetická retinopatie, psoriasa, hemangioblastom, oční onemocnění nebo makulámí degenerace.

Výhodným provedením tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující přemostěnou io indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu svrchu uvedeného vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič, určený pro léčbu nebo prevenci neoplastických onemocnění, revmatoidní artritidy, plicní fibrosy, myelofíbrosy, abnormálního hojení ran, atherosklerosy nebo restenosy.

Výhodným provedením tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu svrchu uvedeného vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič, určený pro léčbu nebo prevenci Alzheimerovy nemoci, amyotrofické laterální sklerosy, Parkinsonovy nemoci, mrtvice, ischemie, Huntingtonovy nemoci, AIDS demence, epilepsie, roztroušené sklerosy, periferní neuropatie nebo poranění mozku nebo míchy.

Předmětem tohoto vynálezu je také použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle vzorce II pro výrobu léku pro inhibici aktivity trk kinasy.

Výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití, kdy trk kinasou je trk A. Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití přemostění indenopyrrolokarbazolové sloučeniny vzorce II pro výrobu léku pro léčbu zánětu.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny vzorce Π pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci onemocnění prostaty. Přitom podle vynálezu výhodným použitím je případ, kdy onemocněním prostaty je karcinom prostaty nebo benigní hyperplasie prostaty.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci onemocnění souvisejících s angiogenesí. Ještě výhodnější provedení tohoto vynálezu spočívá v použití, kdy onemocněním souvise35 jícím s angiogenesí je solidní nádor, endometriosa, diabetická retinopatie, psoriasa, hemangioblastom, oční onemocnění nebo makulámí degenerace.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci onemocnění, pri kterých přispívá aktivita PDGFR k patologickým stavům.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci neoplastických onemocnění, revmatoidní artritidy, plicní fibrosy, myelofíbrosy, abnormálního hojení ran, atherosklerosy nebo restenosy.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci onemocnění charakterizovaných aberantní aktivitou buněk reaktivních na trofické faktory.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci Alzheimerovy nemoci, amyotrofické laterální sklerosy, Parkinsonovy nemoci, mrtvice, ischemie, Huntingtonovy nemoci, AIDS demence, epilepsie, roztroušené sklerosy, periferní neuropatie nebo poranění mozku nebo míchy.

-7CZ 301754 B6

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 je schematický obrázek ukazující obecně přípravu přemostěných indenopyrrolokarbazolů.

Obr. 2 je schematický obrázek ukazující obecně přípravu přemostěných indenopyrrolokarbazolů.

Obr. 3 je schematický obrázek ukazující přípravu indenopyrrolokarbazolů navázaných na pryskyřici.

Obr. 4 je schematický obrázek ukazující přípravu chráněných, rozpustných indenopyrrolokarbazolů.

Obr. 5 je schematický obrázek ukazující přípravu meziproduktu V.

Obr. 6 je schematický obrázek ukazující přípravu přemostěných indenopyrrolokarbazolů za použití způsobu A.

Obr. 7 je schematický obrázek ukazující přípravu přemostěných indenopyrrolokarbazolů za použití způsobu B.

Obr. 8 je schematický obrázek ukazující přípravu přemostěných indenopyrrolokarbazolů se substituovaným B-kruhem.

Obr. 9 je schematický obrázek ukazující derivatizaci E kruhu přemostěných indenopyrrolokarbazolů.

Dále se uvádí podrobnější popis předmětného vynálezu, který je obsažen v části popisující podstatu vynálezu. Předložený popis je doplněn srovnávacím údaji a také údaji, které mají umožnil pochopení vynálezu v celé jeho šíři.

Předmětný vynález se týká nových fúzovaných arylem nebo heteroaiylem přemostěných indenopyrrolokarbazolů, které jsou zde označovány jako „přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny“.

Předmětné sloučeniny jsou vhodné mimo jiné proto, že zesilují aktivitu indukovanou trofíckými faktory v buňkách reaktivních na trofické faktory, například v cholinergních neuronech, a mohou také působit jako činidla podporující přežívání pro jiné typy neuronálních buněk, jako jsou například dopaminergní a glutamatergní neurony, a proto jsou výhodnými farmakologickými a tera40 peutickými činidly. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou také použitelné pro léčbu onemocnění spojených se sníženou ChAt aktivitou nebo se smrtí nebo s poraněním motorických neuronů míšních, a jsou také použitelné při onemocněních spojených s apoptosou buněk centrálního a periferního nervového systému, imunitního systému a při zánětlivých onemocněních.

Některé přemostěné indenopyrrolokarbazoly podle předkládaného vynálezu jsou také použitelné pro léčbu onemocnění vyznačujících se proliferaci maligních buněk, jako jsou zhoubné nádory.

Také jsou popsány farmaceutické prostředky obsahující sloučeniny podle předkládaného vynálezu a způsoby použití uvedených sloučenin.

Také jsou popsány způsoby přípravy přemostěných indenopyrrolokarbazolů. Jiné použitelné metody budou jasné odborníkům v oboru po prostudování uvedeného popisu. Tyto a jiné vlastnosti sloučenin podle předkládaného vynálezu jsou podrobněji uvedeny dále.

-8CZ JU1754 B6

Z širšího hlediska se vynález týká přemostěných indenopyrrolokarbazolů obecného vzorce 1:

(I), kde kruh B a kruh F, společně s atomy uhlíku, na které jsou tyto kruhy navázány, jsou nezávisle vybrány ze skupiny skládající se z následujících skupin:

(a) nenasycený 6-členný karbocyklický aromatický kruh, ve kterém mohou být 1 až 3 atomy uhlíku nahrazeny atomy dusíku;

(b) nenasycený 5-členný karbocyklický aromatický kruh;

(c) nenasycený 5-členný karbocyklický aromatický kruh, kde je buď;

(1) jeden atom uhlíku nahrazen atomem kyslíku, dusíku, nebo síry;

(2) dva atomy uhlíku jsou nahrazeny atomem síry a dusíku, kyslíku a dusíku nebo dvěma atomy dusíku; nebo (3) tři atomy uhlíku jsou nahrazeny třemi atomy dusíku;

R¹ je vybrán ze skupiny zahrnuj ící:

(a) H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, substituo25 váný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl;

(b) -C(=O)R⁹, kde R⁹ je vybrán ze skupiny zahrnující alkyl, aryl a heteroaryl;

(c) -OR^,Ď, kde R¹⁰ je vybrán ze skupiny zahrnující H a alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku;

-9CZ 301754 Bó (d) -C(=O)NH₂, -NRRⁱ², 4CH2)pNRR¹², -(CH2)pOR'°, -OÍCH^OR¹⁰ a

-OfCHjlpNR¹ 'R¹², kde p je 1 až 4; a kde buď:

(1) R a R¹² jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující H a alkyl obsahující

1 až 4 atomy uhlíku; nebo (2) tvoří R¹¹ a R¹² dohromady spojovací skupinu vzorce -(CH^jT-X^CHsL- kde X¹ je vybrán ze skupiny skládající se z -O-, -S- a -CH₂-;

io R² je vybrán ze skupiny zahrnující H, alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, -OH, alkoxy skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, -OC(=0)R⁹, -OC(=O)NRⁿR'², -O(CH2)PNR^1IR¹², -(CH2)pOR¹⁰, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl obsahující 6 až 10 atomů uhlíku a substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl;

R³, R⁴, R⁵ a R⁶ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující:

(a) H, aryl, heteroaryl, F, Cl, Br, I, -CN, CF₃, -NO₂, -OH, -OR⁹, ^O(CH2)PNR¹¹R¹², -OC(=O)R⁹, -OC(=O)NR²R⁷, -OC^OjNR^R¹², -O(CH2)_POR¹⁰, -CH2OR¹⁰, ™NR^HR¹², -NR^l0S(O)2R\ -NR*°C(=O)R⁹;

(b) -CH₂OR¹⁴, kde R¹⁴ je zbytek aminokyseliny po odstranění hydroxylové skupiny karboxylové skupiny;

(c) -NR¹⁰C(=O)NR^uR¹², -CO2R², -C(=O)R², -C(=O)NR^hR¹², -CH=NOR², -€H=NR⁹, 4CH2)_pNR^hR¹², -(CH₂)pNHR¹⁴ nebo -CH=NNR²R^2A, kde R^2A je stejný jako R²;

(d) -S(0)_yR²4CH2)p-S(0)yR⁹, -CH2-S(O)_yR¹⁴, kde y je 0, I nebo 2;

(e) alkyl obsahující od i do 8 atomů uhlíku, alkenyl obsahující od 2 do 8 atomů uhlíku a alkynyl obsahující od 2 do 8 atomů uhlíku, kde (1) každý alkyl, alkenyl nebo alkynyl je nesubstituovaný, nebo (2) každý alkyl, alkenyl nebo alkinyl je substituovaný 1 až 3 skupinami vybranými z následujících skupin: aiyl obsahující 6 až 10 atomů uhlíku, heteroaryl, arylalkoxy, heterocykloalkoxy, hydroxyalkoxy, alky loxy alkoxy, hydroxyalkylthio, alkoxyalkylthio, F, Cl, Br, I, -CN, -NO₂, -OH, -OR⁹, -X²(CH2)pNRR¹², -X²(CH2)_pC(=O)NR¹¹R¹², -X²(CH2)pOC(=O)NRr'², -X²(CH2)_pCO₂R⁹,

-X²(CH2)pS(O),R’, -X²(CH2)_pNRⁱ⁰C(=O)NRR¹², -OC(=O)R⁹, -oconhr², -O-tetrahydropyranyl, -NR^hR¹², -NR^l0C(=O)R⁹, -NR‘°CO₂R’,

-NRⁱ⁰C(O)NR'R¹², -NHC(=NH)NH2, NR^ioS(0)2R’, -S(O\R⁹, -CO₂R²,

-C(=O)NR“R¹², -C(=O)R², -ch2or¹⁰, -CH=NNR²R^2a, -ch=nor², -ch-nr’, -CH=NNHCH(N=NH)NH2i -S(=O)2NR²R^2a, -P(=OXOR^io)₂, -OR¹⁴, a monosacharid obsahující 5 až 7 atomů uhlíku, kde každá hydroxylová skupina monosacharidu je nezávisle buď nesubstituovaná, nebo substituovaná H, alkyl obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylkarbonyloxy obsahující od 2 do 5 atomů uhlíku nebo alkoxy obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku; kde X² je O, S nebo NR¹⁰;

R⁷ a R⁹ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující následující skupiny: H, alkyl obsahu50 jící 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxy obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl obsahující 6 až 10 atomů uhlíku, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, -CH2OR¹⁰, -(CH2OC(=O)NRr¹² a -(CH₂)_pNRR¹²; nebo tvoří R⁷ a R⁸ dohromady spojovací skupinu vzorce -CH₂-X³-CH₂- kde X³ je X² nebo vazba;

man jsou každý nezávisle 0, 1 nebo 2;

- 10CZ JU1/34 BO

-N(S(O)yNR^llR¹²), -N(C(=O)R¹⁷b -C(R^l5R¹⁶)-, -N*(O’XR¹⁰)-, -CH(OH)-CH(OH)a-CH(O(C-O)R⁹)CH(OC(=O)R^9A)~, kde R^9Aje stejný jako R⁹;

R¹³ a R¹⁶ jsou nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující H, -OH, -C(=O)R¹⁰, -O(C=O)R⁹, hydroio xyalkyl a-CO₂R^l°;

R¹⁷ je vybrán ze skupiny zahrnující H, alkyl, aryl a heteroaryl;

A* a A² jsou vybrány ze skupiny zahrnující Η, Η; H, -OR²; H, -SR²; H, -N(R²)₂; a skupiny, kde

A* a A² dohromady tvoří skupinu vybranou ze skupiny skládající se z =0, =S a =NR²;

B¹ a B² jsou vybrány ze skupiny zahrnující Η, Η; H, -OR²; H, -SR²; H, -N(R²)₂; a skupiny, kde B^l a B² dohromady tvoří skupinu vybranou ze skupiny skládající se z =0, =S a =NR²;

s podmínkou, že alespoň jeden z párů A¹ a A² nebo B¹ a B² tvoří =0. Mezi sloučeniny podle předkládaného vynálezu patří všechny diastereomery a enantiomery vzhledem k atomům uhlíku, na které jsou navázány substituenty R², R⁷ a R⁸.

Výhodné přemostěné indenopyrrolokarbazoly mají následující obecný vzorec:

Rl

I

R2

ΓΗ₂)η (Π)

-11 CZ 301754 B6 mají tyto sloučeniny diastereomery

V některých výhodných provedeních sloučenin vzorce II vzorce:

V jiných výhodných provedeních sloučenin vzorce II mají tyto sloučeniny enantiomery vzorce:

V některých výhodných provedeních sloučenin vzorce I a II je R¹ Η. V dalších výhodných provedeních je R² H, hydroxyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl.

V jiných výhodných provedeních jsou R³, R⁴, R? a R⁶ nezávisle H, substituovaný nebo nesubstiio tuovaný alkyl, halogen, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxy- skupina, substituovaná nebo nesubstituovaná amino- skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl. V dalších výhodných provedeních jsou R⁷ a R⁸ nezávisle H nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl.

V některých výhodných provedeních je Y O. V dalších výhodných provedeních je Z vazba, O, 15 S nebo substituovaný nebo nesubstituovaný N. V ještě jiných výhodných provedeních jsou man nezávisle 1 nebo 2. V některých speciálních výhodných provedeních je Y O, Z je vazba nebo O

-12HO a m a n jsou nezávisle 1 nebo 2. V ještě jiných výhodných provedeních jsou A¹ A² a Β’Β² nezávisle =0 nebo H,H.

V některých zejména výhodných provedeních jsou R¹, R⁴, R⁶ a R⁷ každý Η, Y je =0, n je 1, A¹ A²5 a B’B² jsou =0 nebo H,H, R² je H, OH nebo nižší alkyl, R³ je H nebo substituovaný alkyl, R⁵ a R* jsou každý H nebo alkoxy- skupina (výhodně methoxy-), Z je vazba nebo O a m je 1 nebo 2.

V jiných výhodných provedeních mají sloučeniny vzorce II vzorec:

nebo nebo

Ve výhodnějších provedeních jsou R³ a R⁵ každý nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující:

(a) H, heteroaryl, F, -CN, CF₃, -N0₂, -ΌΗ, -OR⁹, -O(CH2)pNR^hR¹², -OC(=0)R⁹, -OC(=O)NR²R⁷, -OC(=O)NR^llR¹², -O(CH2)pOR¹⁰, -CH₂OR¹⁰, -NRR¹²,

-NR'°S(=O)₂R⁹, -NR^l0C(=O)R⁹;

(c) -NR¹⁰C(=O)NRⁿR¹², -CO₂R², -C(=0)R², -C(=0)NR**R¹², -CH=N0R², -CH=NR⁹,

4CH₂)_pNRⁿR¹²,4CH₂)pNHR¹⁴;

• 13CZ 301754 B6 (d) -S(O)_yR²-(CH2)p-S(O)yR⁹, -CH2-S(O)yR'⁴, kde y je 0, 1 nebo 2;

(e) alkyl obsahující od 1 do 8 atomů uhlíku, alkenyl obsahující od 2 do 8 atomů uhlíku a atkynyl obsahující od 2 do 8 atomů uhlíku, kde (1) každý alkyl, alkenyl nebo alkynyl je nesubstituovaný, nebo (2) každý alkyl, alkenyl nebo alkynyl je substituovaný 1 až 3 skupinami vybranými z následujících skupin: aryl obsahující 6 až 10 atomů uhlíku, heteroaryl, arylio alkoxy, heterocykloalkoxy, hydroxyalkoxy, alkyloxyalkoxy, hydroxyalkylthio, alkoxyalkylthio, F, Cl, Br, I, -CN, -NO₂, -OH, -OR’, -X²(CH2)pNRR¹². -X²(CH2)pC(=O)NRⁿR¹², -X²(CH2)pOC(=O)NRR¹², -X²(CH2)_pCO₂R⁹,

-X²(CH2)pS(O)yR⁹, -X^J(CH,)pNR'^r’C(=O)NRR¹², -OC(=O)R⁹, -OCONHR², -O-tetrahydropyranyl, -NRR¹², -NR'°C(=O)R⁹, -NR¹⁰CO₂R⁹,

-NR”C(O)NRR¹², -NHC(=NH)NH2, NR¹⁰S(O)2R’, -S(O)_yR⁵, -CO₂R²,

-Cí-OJNR¹^'², -C(=O)R², -CH2ORⁱ⁰, -CH-NR⁹, -S(=O)2NR²R^2a, -OR¹⁴, a monosacharid obsahující 5 až 7 atomů uhlíku, kde každá hydroxylová skupina monosacharidu je nezávisle buď nesubstituovaná, nebo substituovaná H, alkyl obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku, alkylkarbonyloxy- skupina obsahující od 2 do

5 atomů uhlíku nebo alkoxy- skupina obsahující od 1 do 4 atomů uhlíku;

V ještě výhodnějších provedeních je R⁵ nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující H, -OR⁹, -OÍCHjUMR¹^¹², -0C(=O)R⁹, -OC(=0)NR²R⁷, -OC(=O)NR^UR¹², -O(CH2)pOR'’, -CH2OR'“, -NRRⁱ², -NR¹⁰S(=O)2R⁹, -NR^l0C(=O)R’; -C(=O)NRR¹², 4CH2)pNR^hR¹², -S(O)yR²,

-(CH₂)p-S(O)_y R’, -CH2-S(O)yR¹⁴, kde y je 0, 1 nebo 2.

Některá zejména výhodná provedení sloučenin vzorce II jsou sloučeniny II-1, II-1 b, Π-2, 11-3, IWa, IMb, II—5, IM, II-7a, IMb, II-8, II-9,11-10, H-l 1, 11-12, 11-13, II-14a, II-14b, 11-15, II—16a a II—16b, jejichž struktura je uvedena v tabulce 8, dále. Některá výhodná chirálně specifická provedení sloučenin vzorce II jsou uvedena dále v tabulce 9.

V jiném provedení předkládaný vynález obsahuje farmaceutické prostředky obsahující sloučeninu vzorce I nebo vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič.

V některých výhodných farmaceutických prostředcích je prostředek určen pro inhibici jedné nebo více z aktivit trk kinasy, VEGFR kinasy nebo PDGFR, kde tento prostředek obsahuje sloučeninu vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič. Jiný výhodný farmaceutický prostředek je určen pro zesílení aktivity trofického faktoru nebo ChAT aktivity v míše a tento prostředek obsahuje sloučeninu vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič.

Jiné výhodné farmaceutické prostředky jsou určeny pro léčbu nebo prevenci onemocnění prostaty, jako je karcinom prostaty nebo benigní hyperplasie prostaty. Jiné výhodné farmaceutické prostředky jsou určeny pro léčbu nebo prevenci onemocnění souvisejících s angiogenesí, jako jsou solidní nádory, endometriosa, diabetická retinopatie, psoriasa, hemangioblastom, oční one45 mocnění nebo makulámí degenerace. Jiné výhodné farmaceutické prostředky jsou určeny pro léčbu nebo prevenci neoplastických onemocnění, revmatoidní artritidy, plicní fibrosy, myelofibrosy, abnormálního hojení ran, atherosklerosy nebo restenosy. Jiné výhodné farmaceutické prostředky jsou určeny pro léčbu nebo prevenci Alzheimerovy nemoci, amyotrofické laterální sklerosy, Parkinsonovy nemoci, mrtvice, ischemie, Huntingtonovy nemoci, AIDS demence, epilepsie, roztroušené sklerosy, periferní neuropatíe nebo poranění mozku nebo míchy.

V jiných provedeních obsahuje předkládaný vynález způsob pro inhibici aktivity trk kinasy, který obsahuje podání sloučeniny vzorce I v množství dostatečném pro účinnou inhibici. Ve výhodném provedení je sloučenina vzorce I podána pro léčbu zánětu. V jiném výhodném provedení je receptorem trk kinasy trk A.

- 14CZ JWI /34 BO

V jiných provedeních obsahuje předkládaný vynález způsob pro léčbu nebo prevencí onemocnění prostaty, při kterém je jedinci, který potřebuje takovou léčbu nebo prevenci, podáno terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce I. Ve výhodném provedení je onemocněním prostaty karci5 nom prostaty nebo benigní hyperplasie prostaty.

V jiných provedeních obsahuje předkládaný vynález způsob pro léčbu nebo prevenci onemocnění souvisejících s angiogenesí, při kterých aktivita VEGFR kinasy přispívá k patologickému stavu, který obsahuje podání sloučeniny vzorce Ϊ v množství dostatečném pro kontakt receptoru pro vaskuíámí endotelový růstový faktor s účinným inhibičním množstvím sloučeniny. V jiných provedeních obsahuje předkládaný vynález způsob pro léčbu nebo prevenci onemocnění souvisejících s angiogenesí, při kterém je jedinci, který potřebuje takovou léčbu nebo prevenci, podáno terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce 1. Ve výhodných provedeních je onemocněním souvisejícím s angiogenesí solidní nádor, endometriosa, diabetická retinopatie, psoriasa, hemani5 gioblastom, oční onemocnění, makulámí degenerace.

V jiných provedeních obsahuje předkládaný vynález způsob pro léčbu nebo prevenci onemocnění, při kterých aktivita PDGFR kinasy přispívá k patologickému stavu, který obsahuje podání sloučeniny vzorce I v množství dostatečném pro kontakt receptoru pro trombocytámí růstový faktor s účinným inhibičním množstvím sloučeniny. V jiných provedeních obsahuje předkládaný vynález způsob pro léčbu nebo prevenci patologických stavů, při kterém je jedinci, který potřebuje takovou léčbu nebo prevenci, podáno terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce L Ve výhodných provedeních je patologickým stavem neoplastické onemocnění, revmatoidní artritida, plicní fibrosa, myelofibrosa, abnormální hojení ran, atherosklerosa nebo restenosa.

V jiných provedeních obsahuje předkládaný vynález způsob pro léčbu onemocnění charakterizovaných aberantní aktivitou buněk reaktivních na trofícké faktory, který obsahuje podání sloučeniny vzorce I v množství dostatečném pro kontakt buněčného receptoru pro trofický faktor s účinným aktivačním množstvím sloučeniny. Ve výhodných provedeních je aktivitou buněk reaktív30 nich na trofícké faktory ChAT aktivita. V jiných provedeních obsahuje předkládaný vynález způsob pro léčbu nebo prevenci Alzheimerovy nemoci, amyotrofické laterální sklerosy, Parkinsonovy nemoci, mrtvice, ischemie, Huntingtonovy nemoci, AIDS demence, epilepsie, roztroušené sklerosy, periferní neuropatie nebo poranění mozku nebo míchy, při kterém je jedinci, který potřebuje takovou léčbu nebo prevenci, podáno terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce I.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu zahrnují všechny diastereomery a enantiomery. Sloučeniny vzorce I jsou zde také označovány jako sloučeniny 1 a totéž platí pro sloučeniny vzorců jiných čísel.

Termín „karbocyklus“, jak je zde použit, označuje cyklické skupiny, ve kterých je kruhová část složena pouze z atomů uhlíku. Termíny „heterocyklus“ a „heterocvklo“ označují cyklické skupiny, ve kterých kruh obsahuje alespoň jeden heteroatom, jako je O, N nebo S.

Termín „alkyl“, jak je zde použit, označuje alkylovou skupinu s přímým, cyklickým nebo rozvět45 veným řetězcem obsahující 1 až 8 atomů uhlíku, jako je methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, terc-butyl, pentyl, isoamyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, hexyl, oktyl, cyklopropyl a cyklopentyl. Alkylová funkce skupin obsahujících alkyl, jako je alkoxy, alkoxykarbonylová a alkylaminokarbonylová skupina, má stejnou definici. Nižší alkylové skupiny, které jsou výhodné, jsou alkylové skupiny jak byly definovány výše, které obsahují 1 až 4 atomy uhlíku.

Termín „alkenyí“ označuje přímé nebo rozvětvené uhlovodíkové řetězce obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu uhlík—uhlík. Příklady alkenylových skupin jsou ethenyl a propenyl. Termín „alkynyl“ označuje přímé nebo rozvětvené uhlovodíkové řetězce obsahující alespoň jednu trojnou vazbu uhlík—uhlík. Příklady alkynylových skupin jsou ethynyl a propynyl.

- 15CZ 301754 B6

Acylová skupina skupin obsahujících acyl, jako je acyloxy skupina, označuje alkanoylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, jako je formy 1, acetyl, propanoyl, butyryl, valeryl, pivaloyl nebo hexanoyk

Termín „aryl“, jak je zde použit, označuje skupinu obsahující 6 až 12 atomů uhlíku, jako je fenyl, bifenyl a naftyl. Výhodné arylové skupiny jsou substituované nebo nesubstituované fenylové a naftylové skupiny. Termín „heteroaryl“ jak je zde použit, označuje arylovou skupinu, ve které je jeden nebo více uhlíkových atomů kruhu nahrazen hetero- (tj. neuhlíkovým) atomem, jako je O, N nebo S. Mezi výhodné heteroarylové skupiny patří pyridyl, pyrimidyl, pyrrolyl, íuryl, thieio nyl, imidazolyl, triazolyl, tetrazolyl, chinolyl, isochinolyl, benzimidazolyl, thiazolyl, pyrazolyl a benzothiazolyl.

Termín „aralkyl“ (nebo „arylalkyl“) označuje skupinu obsahující od 7 do 15 atomů uhlíku, která se skládá z alkylové skupiny nesoucí arylovou skupinu. Příklady aralkylových skupin jsou ben15 zyl, fenethyl, benzhydryl a nafty Imethy lové skupiny. Alkylové skupiny a alkylové skupiny obsažené v substituentech jako je aralkylová, alkoxy, arylalkoxy, hydroxyalkoxy, alkoxyalkoxy, hydroxyalkylthio, alkoxyalkylthio, alkylkarbonyl, hydroxyalkyl a acyloxy skupiny, mohou být substituované nebo nesubstituované. Substituovaná alkylová skupina má 1 až 3 nezávisle vybrané substituenty, výhodně vybrané ze skupiny zahrnující následující skupiny: hydroxy, nižší alkoxy, nižší alkoxyalkoxy, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxy-nižší alkoxy, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxy-nižší alkoxy, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxy, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkoxy, halogen, karboxyl, nižší alkoxykarbonyl, nitro, amino, mono- nebo di—nižší alkylamino, dioxolan, dioxan, dithiolan, dithion, furan, lakton nebo laktam.

Substituovaná arylová, substituovaná heteroarylová a substituovaná aralkylová skupina obsahující každá 1 až 3 nezávisle vybrané substituenty, který jsou výhodně nižší alkyl, hydroxy, nižší alkoxy, karboxy, nižší alkoxykarbonyl, nitro, amino, mono- nebo di- nižší alkylamino a halogen.

Mezi heterocyklické skupiny tvořené s atomem dusíku patří následující skupiny: pyrrolidinyl, piperidyl, piperidino, morfolinyl, morfolino, thiomorfolino, N-methylpiperazinyl, indolyl, isoindolyl, imidazol, imidazolin, oxazolin, oxazol, triazok thiazolin, thiazol, pyrazol, pyrazolon atriazol. Mezi heterocyklické skupiny tvořené s atomem kyslíku patří furan, tetrahydrofuran, pyran a tetrahydropyran.

„Hydroxyalkylové“ skupiny jsou alkylové skupiny, které mají na sebe navázanou hydroxylovou skupinu. Mezi halogeny patří fluor, chlor, brom a jod.

Termín „heteroarylalkyl“, jak je zde použit, označuje arylalkylovou skupinu, která obsahuje hete40 roatom. Termín „oxy“ označuje přítomnost atomu kyslíku. „Alkoxy“ skupiny jsou alkylové skupiny, které jsou navázány prostřednictvím atomu kyslíku, a „karbonyloxy“ skupiny jsou karbonylové skupiny, které jsou vázány prostřednictvím atomu kyslíku.

Termín „heterocykloalkoxy“ označuje alkoxy skupinu, která má heterocyklo- skupinu navázanou na alkylovou skupinu a termín „arylalkoxy“ označuje alkoxy skupinu, která má arylovou skupinu navázanou na alkylovou skupinu. Termín „alkylkarbonyloxy“ označuje skupinu vzorce -OC(=O)alkyl.

Termín „alkyloxyalkoxy“ označuje alkoxy skupinu, která obsahuje alkyloxy substituent navázaný na svou alkylovou skupinu. Termín „alkoxyalkylthio“ označuje alkylthio skupinu (tj. skupinu vzorce -S-alkyl), která obsahuje alkoxy substituent navázaný na svou alkylovou skupinu. Termín „hydroxyalkylthio“ označuje alkylthio skupinu (tj. skupinu vzorce -S-alkyl), která obsahuje hydroxy substituent navázaný na svou alkylovou skupinu.

Termín „monosacharid“, jak je zde použit, označuje jednoduchý cukr.

- 16CZ. JUl/D⁴» DO

Termín „aminokyselina“, jak je zde použit, označuje molekulu obsahující jak amino- skupinu, tak karboxylovou skupinu. Termín aminokyselina zahrnuje alfa-aminokyseliny; tj. karboxylové kyseliny obecného vzorce HOOC-CH(NH₂)-(vedlejší řetězec).

Vedlejší řetězce aminokyselin obsahují přirozené skupiny a skupiny, které se přirozeně nevyskytují. Mezi přirozeně se nevyskytující (tj. nepřirozené) aminokyselinové vedlejší řetězce patří skupiny, které jsou užívány místo přirozených aminokyselinových vedlejších řetězců v, například, analogách aminokyselin. Viz, například, Lehninger, Biochemistry, Second Edition, Worth

Publishers, lne., 1975, strany 73-75, kde tato práce je zde uvedena jak odkaz.

Výhodnými alfa-aminokyselinami je glycin, alanin, protin, kyselina glutamová a lysin, v Dkonfiguraci, L-konfiguraci nebo ve formě racemátu.

Vedlejší řetězce dalších representativních alfa-aminokyselín jsou uvedeny dále v tabulce 1.

Tabulka 1 CH₃ho-ch₂~

CA-CHj-

hs-ch₂HO₂C-CH(NH₂)~CH,-S-S-CH₂CH3-CH2* ch₃-s-ch₂-ch₂ch₃-ch₂-s-ch₂-ch₂HO-CH₂-CH₂.

CH₃-CH(0H) KO₂C’CH₂’NHC(«O) -ch₃DHO₂C-CH₂-CHjNHjC(»O)-CH₂-CH₂(CH₃)₂-CH(CH₃) 2-CH-CH,di₃ “ CH₂ ^—di₂ ~ h₂n-ch₂-ch₂-ch₂H₂N-C(=NH) -nh-ch₂-ch₂-ch₂H₂N-C(=O) -nh-ch₂-ch₂-ch₂CH₃-CHj-CH(CHj) CH₃-CH₂-CH₂-CHjHjN-CH₂-CHj-CH₂-CH₂17

V některých výhodných provedeních patří mezi substituenty pro sloučeniny vzorce I a II zbytek aminokyseliny po odstranění hydroxylové skupiny karboxylové skupiny; tj. skupiny vzorce -G(=OpCH(NH₃Hvedlejší řetězec).

Funkční skupiny na sloučeninách vzorce I mohou obsahovat chránící skupiny. Například, vedlejší aminokyselinové řetězce, které jsou substituenty sloučenin vzorce I, mohou být substituované chránícími skupinami jako je benzy loxy karbony 1 nebo t-butoxykarbonylová skupina. Chránící skupiny jsou známé jako chemické funkční skupiny, které mohou být selektivně navázány a odstraněny z jiných funkčních skupin, jako jsou hydroxylové skupiny a karboxylové skupiny. Tyto io skupiny jsou přítomné v chemických sloučeninách pro dosažení toho, aby byly takové funkční skupiny inertní v chemických reakčních podmínkách, jejichž působení je uvedená sloučenina vystavena. V předkládaném vynálezu může být použita jakákoliv z mnoha chránících skupin. Jednou takovou chránící skupinou je benzy loxykarbonylová (Cbz; Z) skupina. Jiné výhodné chránící skupiny pro použití v předkládaném vynálezu jsou uvedeny v Green, T. W. and Wuts,

P. G. M., „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vydání, Ed., Wiley and Sons, 1991.

Bylo prokázáno, že přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny mají významné funkční farmakologické aktivity, které jsou použitelné v mnoha směrech, včetně výzkumu a terapie. Tyto deriváty jsou použitelné jako terapeutická činidla. Aktivity sloučenin vykazují pozitivní účinky na funkci a/nebo přežívání buněk reaktivních na trofické faktory. Efekt na funkci a/nebo přežívání buněk reaktivních na trofické faktory, například buněk neuronální linie, byl prokázán za použití následujících testů: (1) testu kultivované míšní cholin acetyltransferasy („ChAT“); nebo (2) testu aktivity ChAT v kultivovaných neuronech bazálního předního mozku.

Termín „efekt“, jak je zde použit v souvislosti s termíny „funkce“ a „přežívání“ označuje pozitivní nebo negativní alteraci nebo změnu. Efekt, který je pozitivní, může být označován jako „zesílení“ nebo „zvýšení“, a efekt, který je negativní, může být označen jako „inhibování“ nebo „inhibice“.

Termíny „zesílení“ nebo „zvýšení“, jak jsou použity v souvislosti s termíny „funkce“ nebo „přežívání“ označují, že přítomnost přemostěných indenopyrrolokarbazolových sloučenin má pozitivní efekt na funkci a/nebo přežívání buněk reaktivních na trofícké faktory ve srovnání s buňkami za nepřítomnosti sloučeniny. Například, v souvislosti s přežíváním například cholinergních neuronů bude sloučenina způsobovat zvýšení přežívání populace cholinergních neuronů ri2iko35 vých z hlediska odumření (z důvodu, například, poranění, onemocnění, degenerativního onemocnění nebo přirozeného stárnutí) ve srovnání s populací cholinergních neuronů za nepřítomnosti takové sloučeniny, pokud má léčená populace delší dobu funkčnosti než neléčená populace.

Termín „trk“ označuje rodinu vysoce afinitnich receptoru pro neurotrofiny, do které se v součas40 nosti zařazují trk A, trk B a trk C a jiné membránové proteiny, na které se neurotrofiny mohou vázat.

Inhibice VEGFR ukazuje na použitelnost u onemocnění, při kterých má značný význam angiogenese, jako jsou solidní nádory, endometriosa, diabetická retinopatie, psoriasa, hemangioblas45 tom, stejně jako jiná oční onemocnění a nádory.

Inhibice trk ukazuje na použitelnost u - například - onemocnění prostaty, jako je karcinom prostaty a benigní hyperplasie prostaty, a při léčbě bolesti při zánětu.

Inhibice receptoru destičkového růstového faktoru (PDGFR) ukazuje na použitelnost při, například, různých formách nádorů, revmatoidní artritidě, plicní Fibrose, myelofibrose, abnormálním hojení ran, onemocnění kardiovaskulárního systému, jako je atherosklerosa, restenosa, restenosa po angioplastice, atd.

- 18CL JU1 /□*· DD

Termíny „nádory“ a „nádorová“ označují jakoukoliv maligní proliferaci buněk u savců. Příklady zahrnují benigní hyperplasii prostaty, karcinomy prostaty, vaječníkú, prsu, mozku, plic, slinivky břišní, tlustého střeva, žaludku, solidní nádory, nádory hlavy a krku, neuroblastom, karcinom ledvin, lymfomy, leukemie, jiné známé malignity hematopoetíckého systému a jiné známé maligní tumory.

Termíny „neuron“, „buňka neuronální buněčné linie“ a „neuronální buňka“ zahrnují, ale nejsou omezeny na, heterogenní populaci neuronálních buněk obsahujících jeden nebo více přenašečů signálu a/nebo majících jednu nebo více funkcí; výhodně jde o cholinergní a sensorické neurony, io Termín „cholinergní neuron“ označuje neurony centrálního nervového systému (CNS) a periferního nervového systému, jejichž neuropřenašečem je acetylcholin; příklady jsou neurony bazálního předního mozku, striata a míchy, Termín „sensorický neuron“ zahrnuje neurony reaktivní na signály z prostředí (například teplotu, pohyb) umístěné v kůži, svalech a kloubech; příkladem je neuron zadních kořenů míšních.

Termín „buňka reaktivní na trofický faktor“, jak je zde použit, označuje buňku, která obsahuje receptor, na který se může trofický faktor specificky vázat; příkladem jsou neurony (například cholinergní a sensorické neurony) a ne-neuronální populace buněk (například monocyty a nádorové buňky).

Přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou použitelné při výzkumu a terapii, například pro inhibici enzymové aktivity. Například, ve výzkumu mohou být sloučeniny použity pro vývoj testů a modelů pro další zlepšení pochopení úlohy, kterou má inhibice serin/threonin nebo tyrosin protein kinas (například PKC, trk tyrosin kinasy) v mecha25 nistickém aspektu souvisejících onemocnění a poruch. V terapii mohou být sloučeniny inhibující tyto enzymové aktivity použity pro inhibici Škodlivých následků působení těchto enzymů při onemocněních, jako jsou například nádorová onemocnění.

Jak je uvedeno v následujících příkladech, inhibice enzymatické aktivity pomocí přemostěných indenopyrrolokarbazolových sloučenin může být určena, například, za použití následujících testů:

1. test inhibice aktivity tyrosin kinasy trk A;

2. inhibice fosforylace trk stimulované NGF v přípravcích celých buněk;

3. test inhibice kinasy receptoru pro vaskulámí endotelový růstový faktor (VEGFR);

4. test inhibice aktivity PKC; a

5. test inhibice PDGFR.

Popsané přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny mohou být použity pro zlepšení funkce a/nebo přežívání buněk neuronálních linií u savců, například u lidí. V tomto kontextu mohou být sloučeniny použity samostatně nebo společně s jinými fúzovanými pyrrolokarbazoly a/nebo indolkarbazoly, nebo společně s jinými výhodnými molekulami, které mají také schopnost ovlivňovat funkci a/nebo přežívání uvedených buněk.

Různá neurologická onemocnění jsou charakterizována odumíráním, poškozením, funkčním poškozením, axonální degenerací neuronálních buněk. Mezi tato onemocnění patří, například: Alzheimerova nemoc, onemocnění motorických neuronů (například amyotrofická laterální sklerosa), Parkinsonova nemoc, cerebrovaskulámí onemocnění (například mrtvice, ischemie), Huntingtonova nemoc, AIDS demence, epilepsie, roztroušená sklerosa, periferní neuropatie (například neuropatie postihující DRG neurony při periferní neuropatii spojené s chemoterapií), včetně diabetické neuropatie, onemocnění indukovaná excitačními aminokyselinami a onemocnění spojená s otřesem mozku nebo penetrujícími poraněními mozku nebo míchy.

ChAT katalyzuje syntézu neuropřenašeče acetylcholinu a je považována za enzymatický markér pro funkční cholinergní neurony. Funkční neuron je také schopen přežívání. Přežívání neuronů je

- 19CZ 301754 B6 testováno kvantifikací specifického vychytávání a enzymové konverze barviva (například calceinu AM) živými neurony.

Vzhledem k různé použitelnosti mají přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle předkládaného vynálezu různé aplikace. Sloučeniny mohou být použity pro vývoj in vitro modelů přežívání, funkcí neuronálních buněk, pro identifikaci neuronálních buněk, nebo pro vyhledávání jiných syntetických sloučenin, které mají podobné aktivity jako přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny. Sloučeniny mohou být použity ve výzkumu pro výzkum, definování a stanovení molekulových cílů spojených s funkčními reakcemi. Například, pomocí radioaktivně znače10 né přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny asociované s určitou buněčnou funkcí (například mitogenesí) může být identifikována, izolována a přečištěna pro charakterizaci cílová entita, na kterou se uvedený derivát váže.

Sloučeniny jsou použitelné, mimo jiné, nejen pro zesílení aktivit indukovaných trofickými faktoi5 ry v buňkách reaktivních na trofické faktory, například v cholinergních neuronech, ale také mohou působit jako činidla podporující přežívání v jiných typech neuronálních buněk, například v dopaminergních nebo glutamatergních neuronech. Růstový faktor může regulovat přežívání buněk prostřednictvím signalizačních kaskád za malými GTP vazebnými proteiny ras, rac a cdc42 (Denhart, D. T., Biochem. J., 1996, 318: 729). Konkrétně, aktivace ras vede k fosforylaci a aktivaci extracelulámí receptorem-aktivované kinasy (ERK), která je spojena s biologickými procesy růstu a diferenciace. Stimulace ras/cdc42 vede ke zvýšení aktivace JNK a p38, jejichž odpovědi jsou spojeny se stresem, apoptosou a zánětem. Ačkoliv odpovědi na růstové faktory probíhají primárně prostřednictvím ERK dráhy, může vést ovlivnění této dráhy k alternativním mechanismům přežívání neuronů, které mohou napodobovat signály růstových faktorů (Xia et al., Science, 1995, 270: 1326). Sloučeniny mohou také účinkovat jako činidla podporující přežívání pro neuronální a jiné než neuronální buňky, prostřednictvím mechanismů příbuzných, ale odlišných, mechanismům podpory přežívání růstovými faktory, jako je například inhibice JNK a p38 MAPK drah, které mohou podporovat přežívání pomocí inhibice apoptosy.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou použitelné při léčbě onemocnění spojených se sníženou aktivitou ChAT nebo s odumíráním či poškozením motorických neuronů míšních, a jsou také použitelné, například, při onemocněních spojených s apoptosou buněk centrálního a periferního nervového systému, imunitního systému a při zánětlivých onemocněních.

Přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou také použitelné při léčbě onemocnění vyznačujících se maligní proliferací buněk, jako jsou mnohé nádory.

Mezi farmaceuticky přijatelné soli sloučenin vzorce I patří farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami, soli s kovy, amoniové soli, adiční soli s organickými aminy a adiční soli s amino40 kyselinami. Příklady adičních solí s kyselinami jsou adiční soli s anorganickými kyselinami, jako je hydrochlorid, síran a fosforečnan, a adiční soli s organickými kyselinami, jako je acetát, malát, fumarát, vínan, citrát a laktát; příklady solí s kovy jsou soli s alkalickými kovy, jako jsou lithné soli, sodné soli a draselné soli, soli s kovy alkalických zemin, jako jsou horečnaté a vápenaté soli, hlinité soli a zinečnaté soli; příklady ammoniových solí jsou ammoniové soli a tetramethylammo45 niové soli; příklady adičních solí s organickými aminy jsou soli s morfolinem a piperidinem; a příklady adičních solí s kyselinami jsou soli s glycinem, fenylalaninem, kyselinou glutamovou a lysinem.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny do formy farmaceutických pro50 středků pomocí smísení s farmaceuticky přijatelnými netoxickými přísadami a nosiči. Takové prostředky mohou být připraveny pro parenteralní podání, ve formě kapalných roztoků nebo suspenzí; nebo pro orální podání, ve formě tablet a kapslí; nebo pro intranasální podání, ve formě prášků, nosních kapek nebo aerosolů; nebo pro dermální podání, ve formě transdermálních náplastí,

-20CL JUl /yt BO

Prostředky mohou být výhodně podány ve formě dávkové jednotky a mohou být připraveny jakýmkoliv způsobem známým v oboru farmacie, jak jsou popsány, například, v Remingtonů Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton, PA, 1980). Prostředky pro parenterální podání mohou obsahovat jako běžnou přísadu sterilní vodu nebo salinický roztok, poíyalkylengíykoly jako je polyethylenglykol, oleje a rostlinné oleje, hydrogenované naftaleny a podobně. Biologicky kompatibilní, biodegradovatelný laktidový polymer, kopolymer laktidu/glykolidu nebo kopolymer polyoxaethylen/polyoxypropylen mohou být použity pro řízení uvolňování aktivních sloučenin. Mezi další potenciálně použitelné systémy pro parenterální podání těchto aktivních sloučenin patří částice kopolymeru ethylenu-vinylacetátu, osmotické pumpy, implantovatelné inťusní systémy a liposomy, Prostředky pro inhalaění podání obsahují jako přísady, například, laktosu, nebo mohou být ve formě vodných roztoků obsahujících, například, polyoxyethylen-9-lauryl·ether, glykocholát a deoxycholát, nebo mohou být ve formě olejových roztoků pro podání ve formě nosních kapek, nebo mohou být ve formě gelu, který je aplikován intranasálně. Prostředky pro parenterální podání mohou také obsahovat glykocholát při bukálním podání, salicylát při rektálním podání nebo kyselinu citrónovou při vaginálním podání. Prostředky pro transdermální náplasti jsou výhodně lipofilní emulze.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být použity jako jediné aktivní činidlo ve farmaceutickém prostředku. Alternativně mohou být použity v kombinaci s jinými aktivními činidly, například s jinými růstovými faktory, které podporují přežívání neuronů nebo regeneraci axonů při onemocněních nebo poruchách.

Sloučeniny vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou být podány orálně nebo jinak než orálně, například ve formě masti nebo injekce. Koncentrace sloučeniny podle předkládaného vynálezu v terapeutickém prostředku může být různá. Koncentrace závisí na faktorech jako je celková dávka léku, která má být podána, chemické charakteristiky (například hydrofobnost) použité sloučeniny, způsob podání, věk, tělesná hmotnost pacienta a příznaky onemocnění, atd. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou pro parenterální podání obvykle připraveny ve vodném fyziologickém pufrovacím roztoku obsahujícím od přibližně 0,1 do 10% (hmotn./objem) sloučeniny. Obvyklé dávky jsou v rozmezí do přibližně 1 pg/kg do přibližně 1 g/kg tělesné hmotnosti a den; lépe jsou v rozmezí do přibližně 0,1 do přibližně 100 mg/kg tělesné hmotnosti a den; a nejlépe jsou v rozmezí do přibližně 0,1 do přibližně 20 mg/kg tělesné hmotnosti a den. Použitá dávka léku závisí na okolnostech jako je typ a rozsah onemocnění nebo poruchy, celkový zdravotní stav pacienta, relativní biologická účinnost vybrané sloučeniny a složení prostředku a způ35 sob podání.

Sloučeniny vzorce í a jejich farmaceuticky přijatelné soli mohou být podány samostatně nebo ve formě různých farmaceutických prostředků, podle farmakologické aktivity a účelu podání. Farmaceutický prostředek podle předkládaného vynálezu může být připraven homogenním pro40 míšením účinného množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli, jako aktivního činidla, s farmaceuticky přijatelným nosičem. Nosičem mohou být různé substance, podle způsobu podání prostředku. Je žádoucí, aby byly takové farmaceutické prostředky připraveny ve formě jednotkových dávek vhodných pro orální nebo jiné než orální podání. Mezi formy vhodné pro jiné než orální podání patří masti a injekce.

Tablety mohou být přidány za použití přísad jako je laktosa, glukosa, sacharosa, mannitol a methylcelulosa, činidel podporujících rozpadavost jako je škrob, alginát sodný, karboxymethylcelulosa vápenatá a krystalická celulosa, kluzných Činidel jako je stearan hořečnatý a talek, pojiv jako je želatina, polyvinylalkohol, polyvinylpyrrolidon, hydroxypropylcelulosa a methylcelulosa, surfaktantů jako je sacharosový ester mastné kyseliny a sorbitolový ester mastné kyseliny a podobně. Je výhodné, aby každá tableta obsahovala 15 až 300 mg aktivní složky.

Granule mohou být připraveny za použití přísad jako je laktosa a sacharosa, činidel podporujících rozpadavost jako je škrob, pojiv jako je želatina a podobných činidel, za použití běžných způsobů přípravy. Prášky mohou být připraveny za použití přísad jako je laktosa a mannitol, za použití

-21CZ 301754 B6 běžných způsobů přípravy. Kapsle mohou být připraveny za použití želatiny, vody, sacharosy, arabské klovatiny, sorbitolu, glycerinu, krystalické celulosy, stearanu horečnatého, talku a podobně, za použití běžných způsobů přípravy. Je výhodné, aby každá kapsle obsahovala 15 až 300 mg aktivní složky.

Přípravky ve formě sirupu mohou být připraveny za použití cukrů jako je sacharosa, voda, ethanol a podobně, za použití běžných způsobů přípravy.

Masti mohou být připraveny za použití masťových bází jako je vazelína, kapalný parafín, lanolin io a makrogol, emulgačních činidel jako je lauryl, laktát sodný, benzalkoniumchlorid, monoester sorbitanu s mastnou kyselinou, karboxymethylcelulosa sodná, arabská klovatina a podobně, za použití běžných způsobů přípravy.

Injekční prostředky mohou být připraveny za použití rozpouštědel jako je voda, fyziologický roztok, rostlinné oleje (například olivový olej a podzemnicový olej), ethyloleát a propylenglykol, solubílizačních činidel jako je benzoát sodný, salicylát sodný a urethan, činidel upravujících izotonicitu jako je chlorid sodný a glukosa, konzervačních činidel jako je fenol, kresol, ester kyseliny p-hydroxybenzoové a chlorbutanol, antioxidačních činidel jak je kyselina askorbová a pyrosiričitan sodný a podobně, za použití běžných způsobů přípravy.

Vynález je dále popsán v následujících příkladech, které dokreslují předkládaný vynález. Tyto příklady nijak neomezují rozsah předkládaného vynálezu.

Příklady provedeni vynálezu

Příklad 1: Inhibice aktivity tyrosin kinasy trk A

Vybrané přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny byly testovány na jejich schopnost inhibovat kinasovou aktivitu cytoplasmatické domény lidské trk A exprimované pomocí bakuloviru za použití testu založeného na ELISA, který byl popsán v literatuře (Angeles et al., Anal. Biochem. 236: 49-55, 1996). Stručně, 96jamková mikrotitrační plotna byla potažena roztokem substrátu (fúzní protein složený z rekombinantní lidské fosfolipasy C- 1/glutathion-S-transfe35 rasy (Rotin et al., EMBO J., 11: 559-567, 1992)). Testy inhibice byly provedeny ve 100 μΐ směsích obsahujících 50 mM Hepes, pH 7,4, 40 μΜ ATP, 10 mM NaCl₂, 0,1% BSA, 2%DMSO a různé koncentrace inhibitoru. Reakce byla zahájena přidáním trkA kinasy a probíhala 15 minut při 37 °C. Potom se přidala protilátka proti fosfotyrosinu (UBI) a po ní sekundární protilátka konjugovaná s enzymem, kterou byl alkalickou fosfatasou značený kozí anti-myší IgG (Bío-Rad).

Aktivita navázaného enzymu byla měřena zesilovacím detekčním systémem (Gibco-BRL), Data inhibice byla analyzována za použití sigmoidální rovnice dávka-odpověď (s variabilním sklonem) v GraphPad Prism. Koncentrace, která vedla k 50% inhibici kinasové aktivity, byla označena jako „IC50“ Výsledky jsou shrnuty v tabulce 2.

-22CL JU1 /» HO

Tabulka 2: Inhibiční účinky přemostěných indenopyrrolokarbazolových sloučenin na aktivitu trk A kinasy

Sloučenina Č.	trk A (¾ inhibice, 300 nM) ic_so, nM
II-l	13
IX-2	(20)
11-3	9
n-4a	76
II-4B	16
11-5	72
11-6	6
II-7a	11
II-7b	5
11-8	254
II-9	(34J
11-10	(17)
11-11	121
11-12	17
II-14a	14
II-14b	242

Příklad 2: Inhibice fosforylace trk stimulované NGF v přípravcích celých buněk

Inhibice fosforylace trk stimulované NGF vybranými přemostěnými indenopyrrolokarbazolovými sloučeninami byla testována pomocí modifikovaného postupu popsaného dříve (viz patent US 5 516 771). NIH3T3 buňky transfektované trk A byly kultivovány na IOOmm discích, ío Subkonfluentní buňky byly zbaveny přísunu séra pomocí nahrazení média bezsérovým 0,05%

BSA-DMEM obsahujícím sloučeninu (100 nM a 1 μΜ) nebo DMSO (pro kontrolu) na dobu hodiny při 37 °C. Potom se k buňkám přidal NGF (Harlan/Bioproducts fór Science) v koncentraci lOng/ml na dobu 5 minut. Buňky byly lyžovány vpufřu obsahujícím detergentní činidlo a inhibitory proteasy. Pročištěné buněčné lyzáty byly normalizovány na proteiny za použití BCA metody a byly imunitně sráženy s anti-trk protilátkou, Polyklonální anti-trk protilátka byla připravena proti peptídu odpovídajícímu 14 aminokyselinám na karboxylovém konci trk (MartinZanca et al., Mol. Cell Biol. 9: 24-33, 1989). Imunitní komplexy byly zachycovány na Protein A Sepharosových korálkách (Sigma Chem. Co., St. Louis, MO), byly separovány SDS polyaktylamidovou gelovou elektroforesou (SDS-PAGE) a byly přeneseny na polyvinylidendifluoridovou (PVDF) membránu. Membrána byla imunoblotována anti-fosfotyrosinovou protilátkou (UBI) a potom byla provedena inkubace s křenovou peroxidasou navázanou na kozí anti-myší IgG (BioRad Laboratories, Hercules, CA). Fosfoiylované proteiny byly vizualizovány za použití ECL (A, ersham Life Science, lne., Arlington Heights, IL). Plocha trk proteinového proužku byla změřena a byla srovnána s kontrolou stimulovanou NGF. Použitý skorovací systém inhibice, založený na procentuálním zmenšením trk proteinového proužku, byl následující: 0 = žádné zmenšení; 1 = 1 až 25 %; 2 - 26 až 49%; 3 = 50 75%; 4 - 76 až 100%. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

-23CZ 301754 Bó

Tabulka 3: Vliv přemostěných indenopyrrolokarbazolových sloučenin na fosforylaci trk A stimulovanou NGF v NIH3T3 buňkách

	Inhibiční skóre
Sloučenina č.	při 100 nM	při 1000 nM
II-l	3	4
II-3	1	4
II-4b	0	2
II-6	4	4
n-7a	3	4
II-7b	3	4

Příklad 3: Inhibice kmasové aktivity receptoru pro vaskulámí endotelový růstový faktor

Přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny byly testovány na jejich schopnost inhibovat kinasovou aktivitu kinasové domény VEGF receptoru (lidské fík-1, KDR, VEGFR2) exprimoio vane na bakuloviru za použití testu popsaného pro ELISA test pro trk A Kinasová reakční směs, obsahující 50 mM Hepes, pH 7,4, 40 μΜ ATP, 10 mM MnCl₂, 0,1% BSA, 2% DMSO a různé koncentrace inhibitoru, byla přenesena na plotny potažené PLC-gamma/GST. Potom se přidala

VEGFR kinasa a reakce probíhala 15 minut při 37 °C. Detekce fosfory lovaného materiálu se provedla přidáním protilátky proti fosfotyrosinu (UBI). Pro zachycení komplexu protilátka— i5 fosforylovaný PLC-gamma/GST se přidala sekundární protilátka konjugovaná s enzymem. Aktivita navázaného enzymu byla měřena zesilovacím detekčním systémem (Gibco-BRL). Data inhibice byla analyzována za použití sigmoidální rovnice dávka-odpověď (s variabilním sklonem) v GraphPad Prism. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 4.

-24CZ JU1/» BO

Tabulka 4: InhibiČní účinky přemostěných indenopyrroíokarbazoiových sloučenin na kinasovou aktivitu VEGF receptoru

Sloučenina č.	VEGFR kinasa (% inhibice, 300 nM)
II-l	30
Il-lb	67
II~2	>10000
II-3	71
II-4a	17
II-4b	184
II-5	398
II-6	9
II-7a	87
IX-7b	260
II-8	26
IX-9	318
11-10	601
11-11	205
11-12	20
11-13	8
II-14a	32
11-14	538
11-15	25
II-16a	43-
ll-16b	57

Příklad 4: Inhibice aktivity protein kinasy C

Aktivita protein kinasy C byla hodnocena za použití Millipore Multiscreen TCA „in plate“ testu, jak byl popsán v Pitt, A. M. and Lee, C. (J. Biomol. Screening 1: 47-51,1996). Testy byly provedeny na 96-jamkových Multiscreen-DP plotnách (Millipore). Každých 40 ml testovací směsi io obsahovalo 20 mM Hepes, pH 7,4, 10 mg MgCl₂, 2,5 mM EGTA, 2,5 mM CaCl₂, 80mg/ml fosfatidylserinu, 3,2 mg/ml dioleinu, 200 mg/ml histonu H-l (Fluka), 5 mM [gamma-³²P]ATP,

1,5 ng proteinkinasy C (UBI, směs izoenzymů a, b, g), 0,1% BSA, 2% DMSO a testovanou přemostěnou indenopynolokarbazolovou sloučeninu. Reakce probíhala po dobu 10 minut při 37 °C, potom se utlumila přidáním ledově chladné 50% kyseliny trichloroctové. Plotny se nechaly uvést do rovnováhy během 30 minut při 4 °C a potom se promyly ledově chladnou 25% TCA. K plotnám se přidala scintilační směs a radioaktivita se stanovila za použití Wallac MicroBeta 1450 PLUS scintilačního měřiče. Hodnoty IC₅o se vypočítaly z úpravy dat pro sigmoidální rovnici dávka-odpověď (s variabilním sklonem) v GraphPad Prism. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 5.

-25CZ 301754 B6

Tabulka 5: Inhibiční efekty přemostěných indenopyrrolokarbazolových sloučenin na aktivitu protein kinasy C

Sloučenina č.	PKC (% inhibice, 1 /uM) TC5Qt nM
II-l	1300
II-2	(-9)
II-3	(23)
lX-4a	(18)
II-4b	(28)
II-5	(37)
II-6	221
II-7a	696
II-7b	568
II-8	1078
II-9	(5)
11-10	(5)
11-11	(19)
11-12	518
11-13	576
ll~14a	126
11-14	1239
11-15	(02)
II-16a	46

Příklad 5: Inhibice kinasové aktivity receptoru pro trombocytámí růstový faktor

Přemostěné indenopyrrolokarbazoíové sloučeniny byly testovány na jejich schopnost inhibovat kinasovou aktivitu kinasové domény PDGFp receptoru exprimované na bakuloviru za použití testu popsaného pro ELISA test pro trk A. Testy byly provedeny na substrátem (PLC-gammaA io GST)-potažených 96jamkových mikrotitračních plotnách. Každá ΙΟΟμΙ reakční směs obsahovala mM Hepes, pH 7,4, 20 μΜ ATP. 10 mM MnCl₂, 0,1% BSA, 2% DMSO a různé koncentrace inhibitoru. Reakce byla zahájena přidáním prefosforylovaného rekombinantního lidského enzymu (10 ng/ml PDGFRp) a probíhala po dobu 15 minut při 37 °C. Prefosforylovaný enzym byl připraven před použitím inkubací kinasy v pufru obsahujícím 20 μΜ ATP a 10 mM MnCl₂ po i5 dobu 1 hodiny při 4 °C. Detekce fosfory lovaného materiálu se provedla přidáním protilátky proti fosfotyrosinu (UBI) konjugované s křenovou peroxidasou (HRP). Potom se přidal substrátový roztok pro HRP obsahující 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin a peroxid vodíku a plotny byly inkubovány po dobu 10 minut při teplotě okolí. Reakce byla utlumena kyselinou a dosažená absorbance byla odečítána při 450 nm za použití Microplate Bio-kinetics Reader (Bio-Tek Instruments

EL 312e). Data inhibice byla analyzována za použití sigmoidální rovnice dávka-odpověď (s variabilním sklonem) v GraphPad Prism. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 6.

-26Tabulka 6: Inhibiční účinky přemostěných indenopyrrolokarbazolových sloučenin na PDGFR

CL JU1/34 HO

Sloučenina č.	PDGFR (% inhibice, 1 /uM) ^IC50' nM
II-l	1383
IX-2	(7)
II-3	(28)
ll-4a	(0)
II-4b	(17)
IX-5	1076
II-6	96
II-7a	(36)
Il-7b	(34)
II-8	(15)
II-9	(24)
II-1Q	(23)
11-11	(15)
11-12	125
11-13	1229
II-14a	81
II-14b	1406

Příklad 6: Zesílení míšní ChAT aktivity 5

Jak bylo uvedeno výše, ChAT je specifickým biochemickým markérem pro funkční cholinergní neurony. Cholinergní neurony představují hlavní cholinergní vstup do hipokampu, nucleus olfactorius, nucleus interpeduncularis, cortexu, amygdaly a částí thalamu. V míše jsou motorické neurony cholinergnímí neurony, které obsahují ChAT (Phelps et al., J. Comp. Neurol. 273: ío 459-472 (1988). ChAT aktivita byla použita pro studium efektů neurotrofinů (například NGF nebo NT-3) na přežívání a/nebo funkci cholinergních neuronů. ChAT test také slouží pro zjištění regulace hladin ChAT v cholinergních neuronech.

Přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny zvyšují ChAT aktivitu v testu disociované kryli sí embryonální míšní kultury (tabulka 7). V těchto testech mohou být sloučeniny přímo přidány do disociované míšní kultury. Sloučeniny, které zvyšují ChAT aktivitu na alespoň 120 % kontrolní aktivity byly považovány za aktivní,

Tabulka 7: Zesílení míšní ChAT aktivity přemostěnými indenopyrrolokarbazolovými sloučeninami

Míšní ChAT {% kontroly)
Sloučenina č.	Aktivita při 30 nM	Maximální aktivita
II-l	114	139 při 300 nM

Metody: Byla provedena disociace buněk míchy fetálních krys a pokusy byly provedeny dříve popsaným způsobem (Smith et al., J. Cell. Biology 101: 1608—1621 (1985); Glicksman et al.,

J. Neurochem, 61: 210-221 (1993)). Disociované buňky byly připraveny z mích odstraněných chirurgicky od krys (embryonální věk 14 až 15 dnů) za použití standardních trypsinových disociačních technik (Smith et al., výše). Buňky byly umístěny v množství 6 x 10⁵ buněk/cm² na

-27CZ 301754 Bó poly-l-omithinem potažené plastové tkáňové kultivační plotny v bezsérovém N2 médiu doplněném 0,05% hovězím sérovým albuminem (BSA) Bottenstein et al., PNAS USA 76: 514—517 (1979)). Kultury byly inkubovány při 37 °C ve zvlhčované atmosféře 5% CO₂/95% vzduchu po dobu 48 hodin. Aktivita ChAT byla měřena po 2 dnech in vitro za použití modifikovaného

Fonnumova postupu (Fonnum, J. Neurochem. 24: 407-409 (1975)), podle McManaman et ak, a Glicsman et al. (McManaman et al., Devolopmental Biology 125: 311—320 (1988); Glicsman et ak, J. Neurochem, výše).

Sloučeniny vzorce II popsané v příkladech jsou uvedeny v tabulce 8. R¹, R⁴, R⁶ a R⁷ jsou Η; Y je io O; a n jel.

Tabulka 8

Sloi	icenina č.		®1®2	Sí			R* \| Z	a
	II-l	B,H	O	H	H	H	H ’ vazba i	1
	11-lb	S,H	0	H	H	H	H vazba \| _x
II-2	H,R	0	Et	H	H	H	vazba ’ i
IX-3	H,H	0	. H	H	H	Me	vazbaj i
		a,H	0	H	H	H	Me	vazba\| 2
II-4b '		0	H	H	H	Me	vazba 2
ri-s	B,H	0	H	3-Br	H	Me \|	vazba	1
II-6	H,H	0	Ξ	H	10- -OMe	a	vazba	1
II-7a	H,H	0	H	H	n	Me	0	í
II-7b	H,B	o	H	H	H	Me	0	1
II-6	O		H	H	H	H vazba	1
II-9	H,H	0	a	3-(3‘- «Β,-PhJ	H	H vazba l	‘ 1
11-10	O	O	OT,	H	H	H vazba	1
11-11	H,H	O	H	H	H	co,- Et	va2ba	1
31-12	H,B	O	H	H	K	CH_a-oH vazba	1
11-13	H,H	0	a	H	s— QHe	H vazba 1	1 1
Il-14a	H/H	0	H	a	Ή	h ’vasba
II-14b	H,H	0	H	H	H	H	vazba	1 1
11-15	fi,H	0	,H	3- ch₂o- CKjOEt	H	H	vazba
1 II-l6a	H,H	0	H	H	H	H	0	1
	j II-16b		0	H	H	H	H	0	1

-28CL JU1734 HO

Obecný popis syntézy a příkladů

Obecný způsob syntézy použitý pro přípravu přemostěných indenopyrrolokarbazolů podle předkládaného vynálezu je uveden na obr. 1 a 2. Syntéza indenopyrrolokarbazolů II1/VIII může být provedena postupem podle patentu US 5 705 511» jehož obsah je zde v celém rozsahu uveden jako odkaz. Pokud je R¹ H, tak je laktamový dusík indenopyrrolokarbazolů III/VIII chráněn vhodnou chránící skupinou, za vzniku sloučenin IV/IX. Chráněné sloučeniny reagují s vhodnou bází v bezvodých organických rozpouštědlech, což vede ke vzniku tmavě červeného roztoku, o kterém se předpokládá, že se jedná o karbanion. Reakce karbanionu s bifonkčním činidlem io V vede k elektrofilní adici k C=Y vazbě V, což vede ke vzniku prvního meziproduktu Vl/X. Reakce meziproduktu VIX a/nebo V1I/XI s buď kyselinou sulfonovou, nebo s Lewisovou kyselinou, jako je například fluorid boritý - etherat, vede ke vzniku přemostěných indenopyrrolokarbazolů VII.

Postup pro chránění laktamového dusíku (uvedený na obr. 3 a 4) může být proveden jako postup katalyzovaný kyselinou nebo bází. Reakce katalyzované kyselinou mohou být provedeny za použití Činidla navázaného na pryskyřici, které umožní imobilizaci indenopyrrolokarbazol III/VIII na polymemí nosič, jako je Rink kyselá pryskyřice na bázi polystyrenu XII (obr. 3), za vzniku XIII. Alternativně může být reakce katalyzovaná kyselinou provedena za použití roz20 pustných Činidel za zisku sloučeniny XIV (obr. 4). Silylovou skupinou chráněná sloučenina XV je připravena reakcí katalyzovanou bází (obr. 4).

Obr. 5 popisuje několik způsobů pro přípravu meziproduktu V. Způsob (a) popisuje přeměnu různých acetálů XVI na (XVIII, Z = vazba). Například, ester-acetal/ketal (XVI, D - COOR) je úplně redukován na příslušný alkohol a potom je oxidován (například Swemovou nebo DessMartinovou oxidací) na aldehyd-acetál/ketál (XVII, R⁸ = H). Alternativně je ester-acetál/ketál (XVI, D = COOR) je částečně redukován za použití DIBAL přímo za zisku aldehydu (XVII, R⁸ = H). Podobně se redukcí nitril-acetálu (XVI, D = CN) pomocí DIBAL získá aldehyd (XVII, R⁸ = H). Keto-acetály/ketály jsou připraveny adicí Grignardových činidel k Weinrebovu amid30 acetáíu/ketáíu (XVI, D = CON(OMe)Me).

Meziprodukt (XVII, Z - vazba) může být také získán dvoustupňovým procesem uvedeným v postupu (b). Adice organokovového činidla XIX k acetálu/ketálu XVIII vede ke vzniku alkenu XX, ze kterého po ozonolýze následovaná redukčním zpracováním vzniká keto-acetál/ketál

XVII. Příprava meziproduktu (XVII, Z = heteroatom) dvoustupňovým postupem je uvedena v postupu (c). Kopulační reakce acetalu ΧΧΠ s alkenem XXI, po které následuje ozonolýza (s redukčním zpracováním) vzniklého alkenu, vede k zisku keto-acetálu/ketálu XVII. Alternativně je meziprodukt (XVII, Z = heteroatom) připraven dvoustupňovým postupem uvedeným v postupu (c). Reakcí sloučeniny XXIV s acetálem/ketálem XVIII se získá XXV, která je potom premě40 něna na keto-acetál/ketál XVII způsobem uvedeným v postupu (a). Kondenzací keto-acetálu/ketálu XVII s hydroxylaminy hydraziny, N-alkyl-N-alkoxyaminy a aminy se získá meziprodukt XXVI obsahující elektrofilní C=N funkci.

Indenopyrrolokarbazol XIII navázaný na pryskyřici (obr. 6, způsob A) reaguje s nadbytkem

Grignardova činidla jako báze, což vede ke vzniku tmavě červeného roztoku karbanionu. Následující reakce s V vede ke vzniku materiálu vzniklého elektrofilní adicí k C=Y skupině. Zpracování vodou a odštěpení produktu z pryskyřice pomocí ředěné kyseliny (1% TFA v methylenchloridu) vede k izolaci sloučeniny XXVII a/nebo XXVIII. Po reakci meziproduktu XXVII a/nebo XXVIII s buď kyselinou sulfonovou, nebo Lewisovou kyselinou, jako je například fluorid boritý

- etherat, vede ke vzniku přemostěných indenopyrrolokarbazolů II.

Podobná strategie je použita pro reakci rozpustného meziproduktu s chráněným laktamem, například XV (obr. 7, způsob B). Nicméně, v tomto případě je meziprodukt XV zpracován Tritonem B v pyridinu jako bází, místo Grignardovým činidlem. Meziprodukt XXIX a/nebo XXX může být izolován za zachování intaktní chránící skupiny pro laktam, která je vhodná pro chromatografic-29CZ 301754 B6 ké přečištění. Jako ve způsobu A (obr. 6) vede reakce s Lewisovou kyselinou (jako je fluorid boritý - etherat) k zisku přemostěných indenopyrrolokarbazolů 11, kde R = H.

Navázání skupin R³, R⁴, R⁵ a R⁶ může být provedeno způsobem popsaným v patentech 5 US 5 705 511 a US 4 923 986, jejichž objevy jsou zde uvedeny jako odkazy. R³ substituent může být vložen po přípravě přemostěných indenopyrrolokarbazolů, jak je uvedeno na obr. 8. 3 pozice B kruhu je hromovaná sloučeninou poskytující NBS XXXI. Uhlíkový fragment je potom vložen za použití palladiem katalyzovaných Stilleovi, Suzukiho, Heckovi, Kumadovi nebo CastroStephensovi reakcí, za zisku sloučenin XXXII, XXXIII atd. Dále, sloučenina XXXI může umožio nit přípravu sloučenin, ve kterých je brom nahrazen heteroatomem, například skupinou na bázi aminu, za použití Buchwaldovi palladiem katalyzované aminační reakce.

Oxidací může být skupina vázaná na kyslík vložena na indenový uhlík E kruhu sloučeniny XXXIV, jak je uvedeno na obr. 9. Tento postup také vede k oxidaci methylenové skupiny lakta15 mu (A kruhu), za zisku imidového derivátu, jako je uvedeno.

Příklad 7: Příprava meziproduktů navázaných na pryskyřici: ΧΠΙ-Α, X1II-B a ΧΙΠ-C, (Obr. 3).

Příklad 7A:

Tříhrdlá baňka s kulatým dnem opatřená mechanickým míchadlem a Dean-Starkerovým odlučovačem se postupně naplní Rinkovou kyselou pryskyřicí XII (10,00 g, 0,64 mmol/g), 1 -methy 1-225 pyrrolidinonem (80 ml), benzenem (350 ml), VIII-A (A¹, A² = H₂, B¹, B = O, R - R⁴ = R - R⁶= H) (3,0 g) a kyselinou p-toluensulionovou (1,00 g). Reakční směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 20 hodin a potom se přefiltruje. Pryskyřice se promyje THF (5 x 175 ml) a filtrát se odstraní. Pryskyřice se potom postupně promyje DMSO (4 x 100 ml), 2% vodným roztokem NaHCO, (4 x 100 ml), vodou (4 x 100 ml), DMSO (2 x 200 ml), THF (4 x 100 ml) a ethylacetatem (4 x 100 ml). Pryskyřice se suší ve vakuu (24 hodin) za zisku 11,70 (0,47 mmol/g) VIII-A navázané na pryskyřici (XIII-A).

Původní THF výplachy se odpaří, zbytek se ředí vodou (750 ml) a vzniklá sraženina se přefiltruje a postupně se promyje vodou, 2% vodným roztokem NaHCO₃ (4 x 100 ml) a vodou (4 x 100 ml).

Po sušení ve vakuu se získá sloučenina VIII-A (1,28 g).

Příklad 7-B

Podobným způsobem se sloučenina Vlil—B (A¹, A² = O, B¹, B² = H₂, R³ = R⁴ = R^s = R⁶ = H) (0,5 g) naváže na Rink kyselou pryskyřici XII (1,52 g) za zisku 1,58 g sloučeniny VIII—B navázané na pryskyřici (XIII—B).

Příklad 7-C

Podobným způsobem se sloučenina VIII-C (A¹, A² = H₂, B¹, B² = O, R³ = R⁴ = R^! = H, R⁶ = 10OMe) (1,2 g) naváže na Rink kyselou pryskyřici XII (3,12 g) za zisku 3,70 g (0,46 mmol/g) sloučeniny VIII-C navázané na pryskyřici (XIII-C) a znovu získané sloučeniny VIII-C (0,44 g).

Příklad 8: Příprava sloučeniny II-1, sloučeniny II—2, sloučeniny II—3, sloučeniny IMa, sloučeniny 1Mb, sloučeniny II—6 a sloučeniny Π-8. (Způsob A, obr. 6)

-30CZ JU1/34 BO

Příklad 8-A:

IO

Do suspenze sloučeniny XIII-A (1,25 g) v THF (24 ml) se přidá 1,OM roztok EtMgBr (6,25 ml v THF) a reakční směs se mísí po dobu 1 hodiny před přidáním HMPA (5,0 ml). Po míšení po dobu 10 minut se přidá diethoxybutyraldehyd (3,0 g) (který se připraví postupem podle Paquette, L. A., Backhaus, D., Braum, R., Underiner, T. L. a Fuchs, K. I, J. Am. Chem. Soc., 1997, 119: 9662-71) a reakční směs se mísí po dobu 20 hodin. Reakce se utlumí 10% vodným NH4CI (5 ml) a reakční směs se přefiltruje. Pryskyřice se potom postupně promyje 10% vodným NH4CI (3 x 10 ml), vodou (3 x 10 ml), THF (3 x 10 ml), DMF (3 x 10 ml), vodou (3 x 10 ml), THF (3 x 10 ml) a etherem (3x10 ml). Pryskyřice se suší ve vakuu, odebere se v methylenchloridu (15 ml) a reaguje s kyselinou trifluoroctovou (0,15 ml). Po míšení po dobu 1 hodiny se reakční směs přefiltruje a filtrát se odpaří. Získaný zbytek se odebere v methylenchloridu (20 ml) a reaguje s pyridiniumtosylátem (50 mg) a vzniklý roztok se mísí po dobu 4 hodin. Potom se reakční směs promyje nasyceným vodným NaHCO₃ a solankou a suší se přes MgSO₄. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se zbytek přečistí preparativní HPLC (Zorbax RX-8, 4 x 25 cm, eluovanou 60% MeCN/vodou/0,1% kyselinou trifluoroctovou). Vhodné frakce se neutralizují NaHCO₃a extrahují se do methylenchloridu (3 x 50 ml) a suší se přes MgSO₄. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se získá 70,2 mg sloučeniny II—1 ve formě bílého prášku, který má následující charakteristiky: ^l3C NMR (DMSO-dJ: 171,8, 143,3, 142,4, 141,4, 140,1, 140,0, 136,6, 129,2, 127,9,

127,4, 127,1, 126,8, 124,1 (2C), 122,7, 121,6, 121,5, 118,3, 112,1, 88,1, 79,2, 56,6, 45,6, 33,4, 24,8; *HNMR (DMSOdJ: 9,21 (d, J = 7,5, 1H), 8,62 (s, 1H),7,98 (d,J-7,7 1H), 7,86 (d, J =

8,3,1H), 7,71 (d, J = 7,3, 1H), 7,49 (dd, J = 7,9, 7,4,1H), 7,41 (dd, J = 7,5, 7,4, 1H), 7,36 - 7,27 (m, 2H), 6,86 (d, J = 6,0,1H), 5,63 - 5,58 (m, 1H), 4,91 (s, 2H), 4,53 (d, J = 3,3, 1H), 2,23 - 2,14 (m, 1H), 1,96 - 1,92 (tn, 1H), 0,96 - 0,88 (m, 1H), 0,60-0,57 (m, 1H); MS M/Z (M+H) vypočteno: 379; pozorováno 379. Při preparativní HPLC této reakění směsi se také izoluje sloučenina II—2 (0,5 mg), která má následující charakteristiky: 'HNMR (DMSO-dé): 9,17 (d, J = 8,1, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,98 (d, J = 7,0, 1H), 7,85 (d, J = 6,8, 1H), 7,57 (d, J = 6,8, 1H), 7,49 (dd, J = 7,9, 7,4, 1H), 7,44 - 7,26 (m, 3H), 6,81 (d, J = 6,0, 1H), 5,43 - 5,33 (m, 1H), 4,43 (s, 2H), 2,23 - 2,14 (m, 1H), 1,96- l,92(m, 1H), l,45-l,55(m,2H), 0,96-0,88 (m, 1H),0,60-0,57(m, 1H),0,29 (t, J = 7,0, 3H); MS m/z (M+H) vypočteno: 407; pozorováno 407.

Příklad 8-B

Podobným způsobem jako je způsob popsaný výše pro sloučeninu Π-l reaguje pryskyřice XIIIA (70,3 mg) s l,l-diethoxy-2-pentanonem (0,75 ml) (který se připraví postupem podle Sworin, M. a Neuman, W. L., J. Org. Chem. 1988, 53, 4894-6), za zisku sloučeniny 11-3 (3,5 mg), která se izoluje preparativní TLC (silikagel eluovaný 50% EtOAc/toluenem) a která má následující charakteristiky: 'HNMR (DMSO-d_Ď): 9,42 (d, J= 8,2, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,95 (d, J-7,4,

1H), 7,79 (d, J = 8,3, 1H), 7,71 (d, J = 7,1, 1H), 7,50- 7,20 (m, 4H), 6,81 (d, J = 5,9, 1H), 4,90 (s, 2H), 4,46 (s, 1H), 2,35 - 2,20 (m, 1H), 1,98 (s, 3H), 1,75 - 1,60 (m, 1H), 1,25 - 1,00 (m, 1H), 0,35 - 0,15 (m, 1H); MS m/z (M+H) vypočteno: 393; pozorováno 393,

Příklad 8-C

Podobným způsobem reaguje (XIII-A) (74,3 mg) s l,l-dÍethoxy-2-hexanonem (0,75 ml) (který se připraví postupem podle Brenner, J. E., J. Org. Chem. 1961, 26, 22-7), za zisku sloučeniny II4a (2,10 mg) a sloučeniny II—4b (1,06 mg), které se jednotlivě izolují preparativní HPLC (Zorbax

RX-8, 4 x 25 cm, 65% MeCN/voda/0,1% kyselina trifluoroctová). Sloučenina H-4a má následující charakteristiky: 'HNMR (DMSO-dé): 9,30 (d, J= 8,3, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,97 (d, J = 7,2, 1H), 7,65 (d, J = 8,5, 1H), 7,59 (d, J - 7,5), 7,48 (dd, J = 7,8, 7,2, 1H), 7,39 - 7,15 (m, 3H), 6,31 (dd, J = 5,9, 5,5, 1H), 5,02 (s, 1H), 4,88 (s, 2H), 0,88 (s, 3H), ostatní alifatické signály se ztrácí po píky rozpouštědla; MS m/z (M+H) vypočteno: 407; pozorováno 407. Sloučenina IMb má následující charakteristiky: 'HNMR (DMSO-de): 9,43 (d, J = 8,1, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,99 (d, J -31 CZ 301754 B6

7,3, 1H), 7,75 - 7,65 (m, 2H), 7,49 (dd, J = 7,0, 6,4, 1H), 7,43 (dd, J = 8,2, 8,1, 1H), 7,36 - 7,25 (m, 2H), 6,75 (s, 1H), 4,91 (s, 2H), 4,50 (s, 1H), 1,95 (s, 3H), ostatní alifatické signály se ztrácí pod píky rozpouštědla; MS m/z (M+H) vypočteno: 407; pozorováno 407.

Příklad 8-D

Podobným způsobem reaguje XIII-C (1,00 g) s diethoxybutyraldehydem (3,65 g), za zisku sloučeniny II-6 (87,8 mg), která se izoluje preparativní HPLC (Zorbax RX-8, 2,5 x 25 cm, 65% io MeCN/voda/0,1% kyselina triťluoroctová). Sloučenina II-6 má následující charakteristiky:

'HNMR (DMSO-df,): 9,09 (d, J = 8,6, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,95 (d, J = 7,4, 1H), 7,84 (d, J = 8,3,

1H), 7,47 (dd, J = 7,2, 7,0, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,29 (dd, J = 7,0, 7,0, 1H), 6,98 (dd, J = 8,6, 1,9,

1H), 6,83 (d, J = 6,0, 1H), 5,65 - 5,55 (m, 1H), 4,88 (s, 2H), 4,48 (d, J = 3,9, 1H), 3,82 (s, 3H),

2,25 - 2,10 (m, 1H), 2,08 - 1,85 (m, 1H), 0,96- 0,75 (m, 1H), 0,65 - 0,50 (m, 1H); MS m/z 15 (M+Na) vypočteno: 431; pozorováno 431.

Příklad 8-E

Podobným způsobem reaguje pryskyřice (XIII-B) (153,2 mg) s diethoxybutyraldehydem (1,5 ml), za zisku sloučeniny II-8 (3,6 mg), která se izoluje preparativní HPLC (Zorbax RX-8, 2,5 x 25 cm, 65% MeCN/voda/0,1% kyselina trifluoroctová), Sloučenina II—8 má následující charakteristiky: 'H NMR (DMSO-d₆): 9,09 (d, J = 7,9, 1H), 8,81 (s, 1H), 7,81 - 7,73 (m, 3H), 7,48-7,35 (m, 3H), 7,24 (dd, J = 7,6, 7,5, 1H), 6,85 (d, J = 6,2, 1H), 5,63 - 5,59 (m, 1H), 4,86 (s, 2H), 4,61 (d, J = 3,6, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,21 - 2,13 (m, 1H), 1,96-1,90 (m, 1H), 0,87-0,79 (m, 1H), 0,61-0,56 (m, 1H); MS m/z (M+H) vypočteno: 379; pozorováno 379.

Příklad 9: Příprava sloučeniny II—7a a sloučeniny II—7b (způsob A, obr. 6)

Příklad 9-A

Příprava (1, l-diethoxyethoxy)acetonu

Do chladné (0 °C) suspenze NaH (2,68 g, 60%) v THF (150 ml) se přidá roztok 1,1—diethoxyethanolu (který se připraví postupem podle Zirkle, C. L. et al., J. Org. Chem. 1961, 26: 395-407) (9,0 g) v THF (20 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 hodiny před tím, než se přidá methallylchlorid (8,0 ml). Reakční směs se zahřeje na teplotu zpětného toku, ochladí se a přefiltruje se přes vrstvu celitu. Rozpouštědlo se odstraní rotačním odpařením a zbytek se přečistí chromatografií na koloně (oxid křemičitý, 20% ether/hexan) za zisku 1,1-diethoxyethylmethallyl etheru (11,5, 90%). Ozonolýza chladného (-30 °C) roztoku tohoto etheru (6,0 g) v EtOAc (80 ml) se provádí do té doby, dokud není žádný výchozí materiál detekovatelný TLC (1 hodinu). V této době se reakční směs probublá kyslíkem, přidá se Pd(OH)₂ (150 mg) a směs se mísí pod atmosférou vodíku přes noc. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí rotačním odpařením. Získaný zbytek se přečistí chromatografií na koloně (oxid křemičitý, 20% EtOAc/hexan) za zisku titulní sloučeniny (4,53 g, 82%).

Příklad 9-B

Způsobem podle způsobu A (obr. 6) reaguje pryskyřice ΧΙΠ-Α (230,2 mg) s EtMgBr (1,25 ml a potom s (l,l-diethoxyethoxy)acetonem (příklad 8-A) (1,2 ml). Po zpracování a odštěpení z pryskyřice se část směsi surového produktu reakce (10,5 mg) odebere v methylenchloridu (20 ml) a reaguje s BF₃ etheratem (20 μΐ). Po míšení po dobu 2,5 hodin se roztok promyje nasy-32CZ 3U1754 B6 ceným vodným roztokem NaHCO₃ a solankou a potom se suší přes MgSO₄. Po filtraci a odstranění rozpouštědla se získaný zbytek přečistí preparativní HPLC (Zorbax RX-8, 4 x 25 cm, 65% MeCN/voda/0,1% kyselina trifluoroctová), za zisku sloučeniny II—7a (2,34 mg) a sloučeniny II7b (1,34mg). Sloučenina (II-7a) má následující charakteristiky: 'HNMR (DMSO-dé): 9,355 9,20 (m, 1H), 7,87 (d, J = 7,6, 1H), 7,62 (d, J = 7,0, 1H), 7,60 - 7,45 (m, 1H), 7,49 (dd, J = 7,7,

7,5, IH), 7,40 (d, J = 8,1, IH), 7,37 - 7,26 (m, 3H), 6,22 (s, IH), 5,20 - 4,85 (m, IH), 4,47 (s, IH), 3,67 (d, J = 12,7, IH), 3,52 (d,J= 11,8, IH), 3,40 (d,J= 12,7, IH), 3,38(d,J= 11,8, IH), 1,91 (s, 3H); MS m/z (M+Na) vypočteno: 409; pozorováno 409. Sloučenina (II—7b) má následující charakteristiky: 'H NMR (DMSO-dí): 9,58 - 9,22 (m, IH), 7,82 (d, J = 7,4, IH), 7,60 - 7,40 io (m, 3H), 7,37 -7,27 (m, 3H), 7,21 (d, J= 8,1, IH), 5,81 (s, IH), 5,21 (s, IH), 5,10-4,80 (m, IH), 4,59 (d, J= 13,5, IH), 4,38 (dd, J - 13,5, 5,3, IH), 4,21 (d, J = 13,1, IH), 3,82 (d, J= 13,2,

IH), 1,13 (s, 3H); MS m/z (M+Na) vypočteno: 409; pozorováno 409.

Příklad 10: Příprava sloučeniny Π-5 (obr. 8)

Do roztoku sloučeniny II—1 (8,1 mg) v THF (2 ml) se přidá NBS (4,6 mg) a reakční směs se mísí přes noc. Přidá se další NBS (4,5 mg) a reakční směs se mísí po dobu 2,5 hodin. Nerozpustný materiál se odfiltruje a filtrát se zahustí rotačním odpařením. Zbytek se přečistí chromatografií na koloně (C-18, 65% MeCN/voda/0,1% kyselina trifluoroctová). Vybrané frakce se neutralizují NaHCO₃ a extrahují se do methylenchloridu (3 x 20 ml) a suší se přes Mg$O₄. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se získá sloučenina Π-5 (5,1 mg) ve formě bílého prášku, která má následující charakteristiky: 'HNMR (DMSO-dí): 9,22 (d, J = 7,4, IH), 8,67 (s, IH), 8,14 (s, IH), 7,86 (d, J = 8,7, IH), 7,72 (d, J = 7,0, IH), 7,63 (d, J = 7,8, IH), 7,42 (dd, J = 7,5, 7,3, IH), 7,35 (dd, J =

7,3,7,2, IH), 6,86(d, J = 6,0, IH), 5,63 -5,58 (m, IH),4,94(s, 2H),4,54 (d, J = 3,1, IH),2,302,14 (m, IH), 2,00- 1,82 (m, IH), 0,96-0,88 (m, IH), 0,62 - 0,50 (m, IH); MS m/z (M+H) vypočteno: 457/9; pozorováno 457/9 (1:1).

Příklad 11: Příprava meziproduktu XV (obr. 4)

Do roztoku sloučeniny VIII-A (A¹, A² = H2, B¹, B² = O, R³ = R¹ = R^s = R⁶ = H) (1,05 g) v DMF (25 ml) se přidá triethylamin (0,75 ml) a t-butyldimethylsilylchlorid (TBS-C1) (0,65 g). Po míšení po dobu 3 hodin se reakce utlumí nasyceným vodným roztokem NaHCO3 a extrahuje se do

EtOAc. Organická vrstva se promyje vodou a solankou a suší se přes MgSO₄. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se vzniklý zbytek trituruje s etherem za zisku sloučeniny XV (848 mg). Výplachy se odpaří za zisku zbytku, který se přečistí chromatografií na koloně (oxid křemičitý, 1% EtOAc/CH₂Cl2) a získá se další materiál (502 mg, kombinovaný výtěžek 94%), který má následující spektrální vlastnosti: 'H NMR (DMSO-dé): 11,94 (s, IH), 9,32 (d, J = 7,6, IH), 8,03 (d, J =

7,7, IH), 7,64 (d, J = 7,2, IH), 7,58 (d, J = 8,1, IH), 7,44 (dd, J = 7,7, 7,6, IH), 7,39 (dd, J = 7,7,

7,6, IH), 7,32 (d, J = 7,3, IH), 7,25 (dd, J = 7,6, 7,3, IH), 5,00 (s, 2H), 4,14 (s, 2H), 0,99 (s, 9H), 0,46 (s, 6H); MS m/z (M+H) vypočteno; 425; pozorováno 425.

Příklad 12: Příprava sloučeniny lí-1 způsobem B (obr. 7)

Roztok Tritonu B v pyridinu (0,45 M) se připraví rozpuštěním 40% roztoku Tritonu B v methanolu (10 ml) v pyridinu (10 mi). Rozpouštědlo se odstraní za redukovaného tlaku (20 mm Hg) za získání konečného objemu reakční směsi přibližně 8 ml. Zbytek se ředí pyridinem na 50 ml, pře50 filtruje se a uskladní se pod dusíkem. Roztok sloučeniny XV (20,3 mg) v pyridinu (2,0 ml) se probublá argonem a reaguje s 300 μ Tritonu B (0,45 M v pyridinu) a s diethoxybutyraldehydem (50 μΐ). Po míšení po dobu 2 hodin se reakční směs extrahuje do EtOAc, promyje se 1N vodným roztokem HC1, solankou a suší se přes MgSO₄. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se addukt odebere v CH2CI2 (10 ml) a reaguje s BF₃ etheratem (10 μΐ). Po míšení po dobu 2,0 hodin se roztok promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ a solankou a potom se suší přes MgSO₄,

-33CZ 301754 B6

Po odstranění rozpouštědla rotačním odpařením se získá zbytek, který se přečistí preparativní HPLC (Zorbax RX-8, 4 x 25 cm, eluovanou 60% MeCN/vodou/0,1 % kyselinou trifluoroctovou). Vhodné frakce se neuralizují NaHCO₃ a extrahují se do methylenchloridu (3 x 20 ml) a suší se přes MgSO₄. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se získá sloučenina II—1 (11,8 mg, 65%), jejíž 'H

NMR a MS spektra a HPLC retenční čas je stejný jako pro materiál připravený a izolovaný způsobem A, jak je popsán v příkladu 8-A.

Příklad 13: Příprava sloučeniny II-9 (obr. 8).

Do suspenze bromové sloučeniny II—5 (6,2 mg) v 1-propanolu (4,0 ml) se přidá kyselina 3aminofenylboritá (3,8 mg). Po míšení po dobu 0,25 hodiny se postupně přidá Pd(OAc)₂ (2,0 mg), Ph₃P (4,8 mg), Na₂CO₃ (2,8 mg) a voda (2,0 ml). Směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 0,75 hodiny, ochladí se, extrahuje se do CH₂C1₂ a promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší přes MgSO₄ a rozpouštědlo se odstraní rotačním odpařením a zbytek se přečistí preparativní HPLC (Zorbax RX-8, 4 x 25 cm, eluovanou 50% MeCN/vodou/0,1% kyselinou trifluoroctovou). Vhodné frakce se neutralizují NaHCO₃ a extrahují se do methy lenchloridu (3 x 20 ml) a suší se přes MgSO₄, Po Filtraci a odpaření rozpouštědla se získá sloučenina 11-9 (3,1 mg, 49% výtěžek), která má následující spektrální vlastnosti: 'H NMR (DMSO-d₆): 9,22 (d, J - 7,5,

1H), 8,66 (s, 1H), 8,00-7,25 (m, 8H), 7,12 (dd, J = 7,1, 7,0, 1H), 6,95-6,80 (m, 3H), 6,53 (d,

J = 6,0, 1H), 5,63 - 5,58 (m, 1H), 4,99 (s, 2H), 4,55 (s, IH), 2,25 - 2,10 (m, 1H), 1,95 - 1,90 (m, 1H), 0,98 - 0,88 (m, 1H), 0,65 - 0,57 (m, 1H); MS m/z (M+H) vypočteno: 470; pozorováno 470.

Příklad 14: Příprava sloučeniny II—10 (obr. 9)

Do roztoku sloučeniny II-1 (5,0 mg) v DMSO (1 ml) se přidá NaCN (4,3 mg) a směs se zahřívá při teplotě 145 °C po dobu 1 hodiny. Směs se ochladí, extrahuje se do EtOAc a promyje se vodou (3 x 20 ml) a solankou, Organická vrstva se suší přes MgSO₄, filtruje se a odpaří se za zisku zbytku, který se přečistí preparativní HPLC (Zorbax RX-8, 4 x 25 cm, eluovanou 55% MeCN/vodou/0,1% kyselinou trifluoroctovou). Vhodné frakce se neutralizují NaHCO₃ a extrahují se do methylenchloridu (3 x 20 ml) a suší se přes MgSO₄. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se získá sloučenina II—10 (2,7 mg, 50% výtěžek), která má následující spektrální vlastnosti: *HNMR (DMSO-dů): 11,4 (s, 1H), 8,86 (d, J = 7,9, 1H), 8,79 (d, J = 7,6, 1H), 7,90 (d, J = 8,3, 1H), 7,62 7,55 (m, 2H), 7,49 (dd, J = 7,6, 7,4, 3H), 7,40 (dd, J= 7,4, 7,3, 1H), 7,35 (dd, J = 7,5, 7,4, 1H), 6,86 (d, J = 6,0, 1H), 6,03 (s, 1H), 5,40 - 5,30 (m, 1H), 2,25 - 2,14 (m, 1H), 2,03 - 1,90 (m, 1H), 1,10-0,98 (m, 1H), 0,82-0,77 (m, 1H).

Příklad 15: Příprava sloučeniny II-11 (způsob A, obr. 6)

Postupem podle způsobu A reaguje pryskyřice (XIHa) (150,2 mg) s EtMgBr (1,0 ml) a potom s ethyl 2,5-dioxopentanoatem) Schmidt, U., Reidel, B. Synthesis, 1993, 809) (1,5 ml). Po zpracování a odštěpení z pryskyřice se surová reakční směs odebere v methylenchloridu (20 ml) a zpracuje se BF₃ etheratem (20 μΐ). Po míšení po dobu 2,5 hodin se roztok promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ a solankou a potom se suší přes MgSO₄. Po filtraci a odstranění rozpouštědla se získaný zbytek přečistí preparativní HPLC (Zorbax RX-8, 4 x 25 cm, 55 až 75% gradient MeCN/vody/0,1% kyseliny trifluoroctové) za zisku sloučeniny II—11 (6,4 mg), která má následující charakteristiky: ^!H NMR (DMSO-d_ó): 9,36 (d, J = 7,7, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,00 (d, J = 7,7, 1H), 7,83 (d, J= 8,3, 1H), 7,58- 7,15 (m, 5H), 6,97 (d, J- 5,9, 1H), 4,93 (s, 2H), 4,82 (s, 1H), 4,48 (q, J = 7,1, 2H), 2,42 - 1,91 (m, 2H), 1,37 (t, 3H, J = 7,1), 1,25-0,63 (m,2H).

-34Příklad 16: Příprava sloučeniny 11-12

Roztok sloučeniny II—11 (3,4 g) vTHF (2 ml) reaguje s 2M roztokem LiBH» (1,0 ml vTHF) a reakční směs se mísí po dobu 1,5 hodiny. Reakce se utlumí přidáním IN vodného roztoku HC1 (4 ml). Po míšení po dobu 20 minut se přidá 10% vodný roztok NaOH (15 ml) a směs se extrahuje do methy lenchloridu (3 x 10 ml). Po sušení přes MgSO₄ se směs přefiltruje a rozpouštědlo se odpaří za zisku sloučeniny 11-12 (0,32 mg), která má následující charakteristiky: ^lH NMR (DMSO-dé): 9,35 (d, J = 7,7, IH), 8,62 (s, IH), 7,98 (d, J = 7,7, IH), 7,83 (d, J = 8,2, IH), 7,75 (d, J = 8,2, IH), 7,50- 7,25 (m, 4H), 6,84 (d, J = 7,7, IH), 6,11 (s, IH), 4,91 (s, 2H), 4,71 (s,

IH), 4,50 - 4,40 (m, IH), 4,30 - 4,20 (m, IH), 2,42 - 1,91 (m, 2H), 1,25 - 0,63 (m, 2H). MS m/z (M+H) vypočteno 409, pozorováno 409.

Příklad 17: Příprava sloučeniny 11-13

Postupem podle příkladu 11 se roztok směsi (přibližně 95:5) sloučeniny Vílí-C (A¹, A² - H2, B¹, B² = O, R³ = R⁴ = R⁵ = H, R⁶ = OMe) a VI1I-D (A¹, A² = H2, Β¹, B² = O, R³ = R⁴ = R⁶ = H, R⁵ = OMe) (1,25 g) silyluje v DMF (45 ml) s triethylaminem (0,85 ml) a t-butyldimethylsilylchlori20 dem (0,65 g) za zisku VIIIB-TDBMS (1,41 g), která má následující spektrální vlastnosti: 'H NMR (DMSO-dé): 11,91 (s, IH), 9,18 (d, J= 8,6, IH), 7,99 (d, J = 7,8, IH), 7,56 (d, J= 8,0, IH), 7,42 (dd, J = 7,7, 7,6, IH), 7,30 - 7,20 (m, 2H), 6,95 (dd, J = 7,6, 2,5, IH), 4,97 (s, 2H), 4,09 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 0,99 (s, 9H), 0,45 (s, 6H). Chromatografií na koloně byla také izolována sloučenina VIIID-TBDMS (65 mg), která má následující spektrální vlastnosti: 'HNMR (DMSO-dó): 11,92 (s, IH), 9,01 (d, J = 1,8, IH), 8,02 (d, J = 7,9, IH), 7,58 (d, J = 8,1, IH), 7,53 (d, J = 8,3, IH), 7,44 (dd, J = 7,2, 7,1, IH), 7,25 (dd, J = 7,2, 7,1, IH), 6,91 (dd, J = 8,1, 2,7, IH),

4,99 (s, 2H), 4,06 (s, 2H), 3,78 (s, 3H), 0,99 (s, 9H), 0,46 (s, 6H).

Syntéza sloučeniny 11-13 v roztoku

Podle postupu podle příkladu 12 se roztok sloučeniny VIIID-TBDMS (10,3g) v pyridinu (2,0 ml) probublá argonem a přidá se 350 μΐ Tritonu B (0,45 M v pyridinu) a diethoxybutyraldehyd) (50 μΐ) (který se připraví postupem podle Paquette, L. A., Backhaus, D., Braum, R., Underiner, T. L. a Fuchs, K. J., J. Am. Chem. Soc., 1997, 119: 9662-71, kde tato publikace je zde uve35 děna v celém rozsahu jako odkaz). Po míšení po dobu 2 hodin se reakční směs extrahuje do EtOAc, promyje se 10% vodným roztokem CuSO₄ (3 x 50 ml), solankou a suší se přes MgSO₄. Po přefiltrování a odpaření rozpouštědla se zbytek eluuje přes sílikagel (30% EtOAc/hexan) a UV aktivní frakce se zahustí, odebere se v CH₂Cl₂ (4 ml) a zpracuje se BF₃ etheratem (10 μΐ). Po míšení po dobu 2,0 hodin se roztok promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ a solan40 kou a potom se suší přes MgSO₄. Po odstranění rozpouštědla rotačním odpařením se získá zbytek, který se trituruje s etherem za zisku čisté sloučeniny II-13 (4,6 mg), která má následující spektrální vlastnosti: 'H NMR (DMSO-d«): 8,92 (d, J = 2,3, IH), 8,59 (s, IH), 7,97 (d, J = 7,7, IH), 7,86(d, J = 8,3, IH), 7,59 (d, J -»2 IH), 7,47 (dd, J = 7,7,7,6, IH), 7,28 (dd, J = 7,5, 7,4, 1H), 6,89 (dd, J = 8,3, 2,4, 1H), 6,82 (d, J = 6,0), 5,55 - 5,50 (m, 1H), 4,99 (s, 2H), 4,53 (d, J =

3,5, IH), 3,85 (s, 3H), 2,30- 2,20 (m, IH), 2,10 - 1,90 (tn, IH), 1,10 - 0,90 (m, 1H), 0,73 - 0,66 (m, IH). MS m/z (M+H) vypočteno 409, pozorováno 409.

Příklad 18: Syntéza sloučeniny II—14a a sloučeniny II—14b

Syntéza VIIIA-TBDPS. Do roztoku VIII-A (6,2 g) v DMF (150 ml) se přidá TEA (9,7 ml), t-butylchlordifenylsilan (tBDPS-CI, 10,5 mí) a katalytické množství dímethylaminopyridinu. Směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu 15 hodin. Přidá se další triethylamin (5,0 ml) a tBDPS-CI (5,0 ml) a reakční směs se udržuje při teplotě 50 °C po dobu dalších 20 hodin. Reak55 ce se utlumí NaHCO₃ a reakční směs se extrahuje do EtOAc. Organická vrstva se promyje vodou

-35CZ 301754 B6 (2 x 100 ml) a solankou a potom se suší MgSO₄. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se zbytek trituruje se směsí 1:1 etheru:hexanu, za zisku VIIIA-TBDPS (9,1 g, 83%), která má následující spektrální vlastnosti: 'H NMR (DMSO-d,): 11,95 (s, IH), 9,21 (d, J = 1,8, IH), 7,80-7,20 (m, I6H), 7,13 (dd, J = 8,1, 2,7, 1H), 4,83 (s, 2H), 1,25 (s, 9H). MS m/z (M+H) vypočteno 549, pozorováno 549.

Syntéza sloučeniny 11-17 v roztoku

Roztok sloučeniny VIIIA-TBDPS (102,5 mg) v pyridinu (4,0 ml) probublá argonem a přidá se ío 1,0 ml Tritonu B (0,45 M v pyridinu) a diethoxybutyraldehyd (140 μΐ) (který se připraví postupem podle Paquette, L. A., Backhaus, D., Braum, R., Underiner, T. L. a Fuchs, K. J., J. Am.

Chem. Soc., 1997, 119: 9662-71). Po míšení po dobu 2 hodin se reakční směs extrahuje do EtOAc, promyje se 10% vodným roztokem CuSO₄ (3 x 50 ml), solankou a suší se pres MgSO₄. Po přefiltrování a odpaření rozpouštědla se zbytek eluuje přes silikagel (30% EtOAc/hexan) a UV aktivní frakce se zahustí, odebere se v CH2CI2 (10 ml) a zpracuje se BF₃ etheratem (10 μΐ).

Po míšení po dobu 0,5 hodin se roztok promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ a solankou a potom se suší přes MgSO₄. Po odstranění rozpouštědla rotačním odpařením se získá zbytek, který se trituruje s etherem za zisku produktu (75,5 mg), který má následující spektrální vlastnosti: 'H NMR (DMSO-d„): 9,08 (d, J = 7,2, 1H), 7,86 (d, J = 8,2, IH), 7,73 (d, J = 6,9, IH),

7,70 7,24 (m, 15H), 6,88 (d, J = 5,9, 1H), 5,72 (m, 1H), 4,86 (s, 2H), 4,55 (d, J = 3,3, 1H), 2,30 2,20 (m, IH), 2,10- 1,90 (m, IH), 1,10-0,90 (m, 1H), 0,73 - 0,66 (m, IH). MS m/z (M+Na) vypočteno 639, pozorováno 639.

Separace enantiomerů sloučeniny II—la chráněné TBDPS pomocí chirální HPLC a příprava sloučenin Π-14a a II-14b

Sloučenina II—la chráněná TBDPS se rozpustí v minimálním množství (1:4, obj./obj.) CHCl₃:EtOH a 500μΙ podíly se injikují do CHIRACEL OD kolony (1 cm, ID x 25 cm) a 100% ethanol (1,5 ml/min) se použije jako eluens. Frakce z každého kola zpracování odpovídající enan30 tiomeru A (24,0 až 27,0 minuta) a enantiomerů B (36,0 až 39,0 minuta) se odeberou a samostatně se zahustí. Jednotlivé enantiomery TBDPS chráněné sloučeniny II-1 a se odeberou v THF (12 ml) a přidají se do 0,lM vodného roztoku KF (4,6 ml) pufrovaného HF (0,125 ml 0,lM vodného roztoku). Každý roztok se mísí po dobu 40 hodin. Roztok se odebere v DCM a promyje se vodným roztokem NaHCO₃. Vodná vrstva se extrahuje DCM (3 x 100 ml) a kombinované organické vrstvy se ihned protlačí pres vrstvu MgSO₄ a odpaří se za zisku zbytku, který se trituruje se směsí 1:1 etheru:hexanu a přečistí se preparativní HPLC, jak je popsáno v příkladu 8A. HPLC retenční čas a MS spektra pro každý enantiomer odpovídající autentické sloučenině II-1 a. Sloučenina II14a (2,84 mg) se získá v 97% enantiomemím přebytku (dále ee) a sloučenina II-14b (3,52 mg) se získá v 90% ee, jak je stanoveno chirální HPLC. Chirální čistota jednotlivých enantiomerů se sta40 noví za použití CHIRACEL OD kolony (0,46 cm ID x 5 cm), za použití 1:1 směsi methanolu/ethanolu jako eluens (0,25 ml/min). Rt - pro Π-14Α: 14,0 min a R_t = pro II—14b 20,5 min.

Příklad 19: Syntéza sloučeniny 11-15

Do suspenze sloučeniny VIII-A (I g, 3,2 mmol) v THF (40 ml) se přidá NBS (632 mg, 3,5 mmol) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získaný žluto-oranžový materiál se suspenduje v methanolu (50 ml). Kaše se přefiltruje a pevný materiál se promyje dalším objemem methanolu. Po sušení se bromová sloučenina (R - Br) (l,09g, 2,8 mmol, 88% výtěžek) získá ve formě světle žlutého pevného materiálu (MS: m/z (M+H) 389, 391).

Do roztoku výše uvedeného bromidu (1,09 g, 2,8 mmol) v benzenu (60 ml) a N-methylpyrrolidinonu (6 ml) se přidá 4,4'-dimethoxybenzhydrol (818 mg, 3,4 mmol) a kyselina p-toluensulfo55 nová (532 mg, 2,8 mmol) a reakční směs se zahřeje na teplotu zpětného toku. Po 24 hodinách se

-36CZ, JIH/34 BO reakční směs ochladí na teplotu okolí a ředí se ethylacetátem (200 ml). Organická vrstva se promyje NaHCO₃ (2x), H₂O (2x) a solankou (2x). Organická vrstva se suší přes bezvodý MgSO₄, přefiltruje se a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Surový materiál se přečistí chromatografií na koloně (10% EtOAc-hexan) za zisku požadovaného DMB chráněného 3-bromindolového deri5 vátu (1,5 g, 2,4 mmol, 87% výtěžek) ve formě oranžového pevného materiálu. (MS m/z (M+H) 615,617).

250ml uzavíratelná zkumavka se naplní DMB chráněnou 3-bromslouČeninou (1,5 g, 2,4 mmol), bis(trifenylfosfin)palladiumdichloridem (100 mg, 0,14 mmol), bezvodým octanem sodným io (3,9 g, 4,8 mmol) a methoxyethanolem (50 ml). Ze zkumavky se střídavě odsává vzduch a plní se

CO a nakonec se ponechá atmosféra CO. Potom se zkumavka ponoří do olejové lázně o teplotě

150 °C. Po 4 hodinách se zkumavka ochladí na teplotu okolí a znovu se naplní CO. Toto se opakuje znovu, celkem po dobu 10 hodin, Reakční směs se potom ředí ethylacetátem (250 ml), promyje se vodou, suší se přes bezvodý MgSO₄, přefiltruje se a suší se ve vakuu. Zbytek se tritu15 ruje s methanolem za zisku 3-karboxy sloučeniny (1,29 g, 2,02 mmol, 84% výtěžek) ve formě žlutého pevného materiálu. MS m/z (M+H) 639,

Do roztoku výše uvedeného esteru (1,2 g, 1,9 mmol) v methylenchloridu (20 ml) se přidá thioanisol (1 ml) a potom TFA (4 ml). Po míšení po dobu 1 hodiny při teplotě okolí se reakční směs odpaří do sucha a zbytek se suspenduje v diethyletheru. Suspenze se přefiltruje a pevný materiál se promývá diethyletherem do té doby, než je filtrát bezbarvý. Pevný materiál se suší ve vakuu za zisku esteru (636 mg, 1,54 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu. MS m/z (M+H) 413.

Výše uvedený ester (500 mg, 1,2 mmol) se suspenduje v methylenchloridu (15 ml) a přidá se roztok diisobutylaluminium hydridu v methylenchloridu (5,5 ml, 5,5 mmol, 1,0 M). Po 2 hodinách při teplotě okolí se reakce utlumí methanolem. Rozpouštědlo se odstraní rotačním odpařením a ke zbytku se přidá voda. Kaše se přefiltruje a pevný materiál se suší ve vakuu. Požadovaný produkt (A_b A₂ = O, B_h B₂ = H₂, R = 3-CH₂OH, &t = R₅ = R<; = H, Q = NH) (367 mg,

1,08 mmol) se získá ve formě světle žlutého pevného materiálu. MS m/z (M+H) 341 m/e.

Výše uvedený alkohol (360 mg, 0,9 mmol) (A_b A₂ = O, B_b B₂ = H₂, R³ = 3-CH₂OH, R₄ = R_s = = H, Q = NH) se umístí do uzavíratelné zkumavky s ethanolem (15 ml). Do této suspenze se přidá anhydrid kyseliny trifluoroctové (254 ml, 1,8 mmol). Reakční směs se zahřívá při teplotě

70 °C po dobu 15 hodin. Zkumavka se ochladí a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Získaný pevný materiál se trituruje s methanolem, přefiltruje se a suší se za zisku požadovaného etheru (239 mg, 0,65 mmol, 72% výtěžek) ve formě oranžového pevného materiálu. MS m/z (M+H) 369.

Postupem podle příkladu 11 se výše uvedený ether (100 mg, 0,27 mmol) silyluje v DMF (5 ml) s triethylaminem (0,75 ml, 0,54 mmol) a t-butyldimethylsilylchloridem (81,0 mg, 0,54 mmol). Po zpracování vodou a odpaření rozpouštědla se pevný materiál trituruje s etherem .hexanem (1:1) za zisku produktu (114,6 mg, 0,24 mmol, 88%) ve formě oranžového pevného materiálu. MS m/z (M+H) 483.

Postupem podle příkladu 12 se roztok výše uvedeného etheru (23,0 mg, 0,048 mmol) v pyridinu (4,0 ml) probublá argonem a zpracuje se 200 μΐ Tritonu B (0,45 M v pyridinu) a 5,5-dimethyll,3-dioxan-2-propionaldehydem (50 μΐ) (Khanna, I. K., Weier, R. M., Yu, Y., Collins, P. W., Miyashiro, J. M. et al., J. Med. Chem. 1997,40: 1619-33, což je zde uvedeno jako odkaz ve své úplnosti. Po 0,5 hodině se přidá další Triton B (200 μΐ 0,45 M v pyridinu). Toto se opakuje ještě dvakrát. Nakonec se reakční směs extrahuje do EtOAc, promyje se 10% vodným roztokem CuSO₄ (3 x 50 ml), solankou a suší se přes MgSO₄. Po přefiltrování a odpaření rozpouštědla se zbytek eluuje pres silikagel (30% EtOAc/hexan) a UV aktivní frakce se zahustí, odebere se v CH₂C1₂ (4 ml) a zpracuje se katalytickým množstvím pyridiniumtosylatu (1 mg). Směs se zahří55 vá při teplotě zpětného toku po dobu 48 hodin a potom se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Získa-37CZ 301754 B6 ný zbytek se odebere v THF (8,0ml) a přidá se k O,1M vodnému roztoku KF (2,9 ml) pufrovanému HF (0,09 ml O,1M vodného roztoku). Po míšení po dobu 20 hodin se roztok extrahuje do DCM a promyje se vodným roztokem NaHCO₃. Vodná vrstva se extrahuje DCM (3 x 100 ml) a kombinované organické vrstvy se ihned protlačí přes vrstvu MgSO4 a odpaří se za zisku zbytku, který se trituruje se směsí 1:1 etheru:hexanu a přečistí se preparativní HPLC, jak je popsána v příkladu 8-A. Toto vede k zisku sloučeniny 11-15 (1,26 mg, 6,0%), která má následující spektrální vlastnosti: Ή NMR (DMSO-40: 9,41 (d, J = 2,3, IH), 8,53 (s, IH), 7,90 (s, IH), 7,80 7,25 (m, 5H), 6,33 (d, J = 6,0, IH), 5,31 (m, IH), 4,95 (s, 2H), 4,66 (s, 2H), 4,48 (m, IH), 3,50 (q, J = 6,8, 2H), 2,30 - 2,20 (m, IH), 2,10 - 1,90 (m, IH), 1,25 (t, J = 6,8, 3H), 1,10 - 0,90 (m, io 1H), 0,73 - 0,66 (m, IH). MS m/z (M+H) vypočteno 437, pozorováno 437.

Příklad 20: Syntéza sloučeniny II—1 b

Příprava XIV (DMB-VIIIA). Tříhrdlá baňka opatřená mechanickým míchadlem a Dean-Starkerovým odlučovačem se postupně naplní DMB-OH (2,44 g, 10 mmol), l-methyl-2-pyrrolidinonem (30 ml), benzenem (270 ml), VIII-A (3,1 g, 10 mmol) a kyselinou p-toluensulfonovou (1,90 g, 10 mmol). Reakění směs se zahřívá při teplotě zpětného toku. Po 2 hodinách se reakční směs stane homogenní a zahřívání pokračuje po dobu dalších 2 hodin. Reakění směs se ochladí na teplotu okolí, ředí se EtOAc (200 ml), promyje se nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ (4 x 100 ml), vodou (4 x 100 ml) a organická vrstva se suší přes bezvodý MgSO₄, přefiltruje se a zahustí se ve vakuu. Zbytek se trituruje s EtOAc/hexanem a vzniklý pevný materiál se přefiltruje a suší se ve vysokém vakuu za zisku sloučeniny XIV (obr. 4) (A¹, A² = H₂, B^l, B² = O, R³ = R⁴- R⁵ - R⁶ = H, Q = NH, R' = R = H) (5,2 g, 98%), která má následující spektrální charakteristi25 ky: *H NMR (CDCb-dé) 9,54 (d, J = 7,82, IH), 8,55 (s, IH), 7,68 (d, J = 7,8, IH), 7,60 - 6,70 (m, 15H), 4,71 (s, 2H), 4,03 (s, 2H), 3,78 (s, 6H). MS m/z (M+H) vypočteno 537, pozorováno 537.

Do roztoku sloučeniny XIV (obr. 4) (102,5 mg) v THF (6,0 ml) se přidá roztok EtMgBr v THF (0,8 ml, 1,0 M) a směs se mísí po dobu 1 hodiny. Přidá se 5,5-dimethyl-l,3-dioxan-2-propionaldehyd (300 μΐ) (Khanna, I. K., Weier, R. M., Yu, Y„ Collins, P. W., Miyashiro, J. M. et al., J. Med. Chem. 1997, 40: 1619-33) a směs se mísí po dobu 3 hodin. Reakce se utlumí vodným roztokem NH4CI a extrahuje se do EtOAc. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ a solankou a potom se suší přes MgSO₄. Po odstranění rozpouštědla na rotační odparce se získá zbytek, který se přečistí chromatografií na koloně (silikagel, 40% EtOAc/hexan) za zisku dvou frakcí odpovídajících dvěma diastereomerickým adduktům: MS m/z (M+H) 709. Polárnější frakce se odebere v dichlormethanu (10 ml) a zpracuje se BF₃ etheratem (10 μΐ).

Po míšení po dobu 1,5 hodiny se roztok promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ a solan40 kou a organická vrstva se suší pres bezvodý MgSO₄, přefiltruje se a zahustí se ve vakuu. Vzniklý materiál se přečistí preparativní HPLC jak je popsána v příkladu 8-A, za zisku produktu (1,75 mg), který má následující spektrální vlastnosti: ‘HNMR (DMSO-dé): 9,20 (d, J = 7,46, IH), 8,56 (s, IH), 7,97 (d, J = 7,7, 1H), 7,69 (d, J = 8,2, IH), 7,57 (d, J = 7,3, IH), 7,52-7,20 (m,4H), 6,57 (m, IH), 5,1 (m, IH), 4,88 (s, 2H), 4,67 (s, IH), 2,30-2,20 (m, IH), 2,10-1,90 (m, IH), 1,10 - 0,90 (m, IH), 0,73- 0,66 (m, IH). MS m/z (M+H) vypočteno 379, pozorováno 379.

Příklad 21: Syntéza sloučenin II— 16a a II—16b

Roztok sloučeniny VII1A-TBDPS (viz příklad 18) (214 mg) v pyridinu (4,0 ml) se probublá argonem a zpracuje se 750 μΐ Tritonu B (0,45 M v pyridinu) a roztokem 2,2-diethoxyethoxyacetaldehydu (200 mg) (který se připraví způsobem podle Aparico, F. J. L.; Benitez, F. Z., Gonzales, F. S., Carbohydr. Res. 1983,297-302, kde tato práce je zde uvedena jako odkaz ve své úplnosti) v pyridinu (2 ml). Po 2 hodinách se přidá další Triton B (250 μΐ). Po míšení po dobu další

-3810

0,5 hodiny se reakční směs extrahuje do EtOAc, promyje se 10% vodným roztokem CuSO₄ (3 x 50 ml), solankou a suší se přes MgSO₄, Po přefiltrování a odpaření rozpouštědla se zbytek eluuje přes silikagel (35% EtOAc/hexan) a UV aktivní frakce se zahustí, odebere se v CH₂C1₂ (10 ml) a zpracuje se BF₃ etheratem (10 μΐ). Po míšení po dobu 0,5 hodiny se roztok promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO₃ a solankou a potom se suší přes MgSO₄. Po odstranění rozpouštědla rotačním odpařením se získá zbytek, který se přečistí na chromatografické koloně (silikagel, 35% EtOAc/hexan) za zisku dvou frakcí odpovídajících dvěma diastereomeríckým adduktům: MS m/z (M+H) 725. Každý addukt se odebere vCH₂CI₂ (10 ml) a zpracuje se BF₃ etheratem (10 μΐ). Po míšení po dobu 0,5 hodin se rozpouštědlo odstraní rotačním odpařením a každý zbytek se odebere v THF (15 ml) a přidá se k 0,lM vodnému roztoku KF (5,8 ml) pufrovanému HF (0,20 ml 0,lM vodného roztoku). Každý roztok se mísí po dobu 20 hodin, extrahuje se do DCM a promyje se vodným roztokem NaHCO₃. Vodná vrstva se extrahuje DCM (3 x 100 ml) a kombinované organické vrstvy se ihned protlačí přes vrstvu MgSO₄ a odpaří se. Získaný pár zbytků se odebere v CH₂C1₂ (10 ml) a zpracuje se BF₃ etheratem (10 μΐ) a mísí se po dobu 48 hodin.

Každá reakční směs se extrahuje do CH₂C1₂ a promyje se nasyceným vodným roztokem NaHCOj a solankou a potom se suší přes MgSO₄. Po odstranění rozpouštědla rotačním odpařením se získá zbytek, který se přečistí preparativní HPLC, jak je popsáno v příkladu 8A. Jeden diastereomer, sloučenina II—16a (izolováno 2,38 mg) má následující spektrální vlastnosti: ¹³C NMR (DMSOdé): 172,0, 142,6, 142,5, 142,1, 141,0, 139,8, 134,8, 130,6, 128,0, 127,2, 127,0, 126,6, 124,4, 124,2, 122,7, 121,7,121,0, 116,8, 112,1, 80,0, 70,0,69,1,65,6, 54,1,45,7; 'HNMR(DMSO-d<i): 9,23 (d, J = 7,7, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,99 (d, J = 7,7, 1H), 7,63 (d, J = 7,22, 1H), 7,48 - 7,30 (m, 4H), 6,56 (s, 1H), 5,10 (m, 1H), 4,90 (s, 2H), 4,70 (m, 1H), 3,80-3,60 (m, 2H), 3,30-3,00 (m, 2H). MS m/z (M+Na) vypočteno 395, pozorováno 395.

Druhý diastereomer, sloučenina II-16b (izolován 1,00 mg) má následující spektrální vlastnosti: ¹³C NMR (DMSCKl₆): 9,21 (d, J= 7,7, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,99 (d, J= 7,7, 1H), 7,77- 7,30 (m, 6H), 5,95 (s, 1H), 5,05 (m, 1H), 4,91 (s, 2H), 4,63 (m, IH), 4,55 - 4,30 (m, 2H), ostatní signály se ztrácejí pod píky rozpouštědla. MS m/z (M+Na) vypočteno 395, pozorováno 395.

Sloučeniny vzorce II mohou být dále popsány s odkazem na tabulku 9, která uvádí některá výhodná provedení označená jako sloučeniny vzorce lil, ve kterých jsou označena (*) chirální centra. Významy pro R¹, R⁴, R⁶ a R⁷ jsou Η; Y je O; a n je 1.

-39CZ 301754 B6

Tabulka 9

Sloučenina č.	AiAj	ΒΑ		Řj	R,		Z	m	R2R7R8
rn-Ai	Η,Η	0	Η	Η	Η	Η	vazba	1	RSR
	ΠΙ-Α2	HJÍ	0	Η	Η	Η	Η	vazba	1	SSR
	ΙΙΪ-Α3	Η,Η	0	Η	Η	Η	Η	vazba	1	RRS
	II1-A4	HJi	0	Η	Η	Η	Η	vazba	1	SRS
	III-Bl	Η,Η	0	Et	Η	Η	Η	vazba	1	RSR
	11I-B2	Η,Η	0	Et	“ Η	Η	Η	vazba	1	SSR
	HI-B3	Η,Η	0	Et	Η	Η	Η	vazba	1	RRS
	ΙΠ-Β4	Η,Η	0	Et	Η	Η	Η	vazba	1	SRS
	IH-C1	Η,Η	0	Η	Η	Η	Me	vazba	1	RSR
	m-C2	Η,Η	0	Η	Η	Η	Me	vazba	1	SSR
	m-c3	Η,Η	0	Η	Η	Η	Me	vazba	l	RRS
	III-C4	Η,Η	0	Η	Η	Η	Me		1	SRŠ
	ΙΠ-Dl	Η,Η	0	Η	Η	Η	Me	vazba	2	RRS
	m-D2	Η,Η	0	Η	Η	Η	Me	vazba	2	SRS
	ra-D3	Η,Η	0	Η	Η	Η	Me	[va zba	2	RSR
	HI-D4	Η,Η	0	Η	Η	Η	Me	vazba	2	SSR
	III-E1	Η,Η	0	Η	3-Βγ	Η	Me	vazba	1	RSR
	ΠΙ-Ε2	Η,Η	0	Η	3-Br	Η	Mc	vazba	1	SSR
	ΙΠ-Ε3	Η,Η	0	Η	3-Br	Η	Me	vazba	1	RRS
	ΙΠ-Ε4	Η,Η	0	Η	3-Br	Η	Me	vazba	1	SRS
	HI-FI	HJÍ	0	Η	Η	10-OMe	H	vazba	1	RSR
	11I-F2	Η,Η	0	Η	Η	10-OMe	H	vazba	1	SSR
	I1I-F3	ΚΗ	, 0	Η	Η	10-OMe	H	vazba	1	RRS
	HI-F4	Η,Η	0	Η	Η	10-OMe	H	vazba	1	SRS

-40CZ JVI7M BO

ΠΙ-Gl	Η,Η	0	Η	Η	H	Me	0	1	ss s
IH-G2	Η,Η	0	Η	Η	H	Me	0	1	RSS
HI-G3	Η,Η	0	Η	Η	H	Me	0	1	RRR
IH-G4	HJÍ	0	Η	Η	H	Me	0	1	SRR
ΙΠ-Η1	0	Η3	Η	Η	H	H	vazba	1	RSR
m-H2	0	Η3	Η	Η	H	H	vazba	1	SSR
ΠΙ-Η3	0	Η,Η	Η	Η	H	H	vazba ^:	1	RRS
ΙΠ-Η4	0	Η,Η	Η	Η	H	H	vazba	1	SRS
m-n	Η,Η	0	Η	3-<3'-W Ph)	H	H	vazba	1	RSR
ΪΠ42	Η,Η	0	Η	3-(3‘-NH,- Ph)	H	H	vazba	1	SSR
ΙΠ-Ι3	Η,Η	0	Η	3-{3’-NH_ť Ph)	H	H	vazba	1	RRS
HI-I4	Η,Η	0	Η	Η3’·ΝΗ_Γ Ph)	H	H	vazba	1	SRS
ΙΠ-Jl	0	0	0 Η	H	H	H	vazba	1	SSR
IH-J2	0	0	0 Η	H	H	H	vazba	1	RSR
1II-J3	0	0	0 Η	H	H	H	vazba	1	RRS
m-j4	0	0	Ο Η	H	H	H	vazba	1	SRS
ΙΠ-Κ1	Η,Η	0	Η	H	H	CG2-EI	vazba	1	RSR
H1-K2	Η,Η	0	Η	H	H	CO2-EI	vazba	1	SSR
ΠΙ-Κ3	Η,Η	0	Η	H	H	002-Et	vazba	1	RRS
m-K4	Η,Η	0	Η	H	H	CO2-Et	vazba	1	SRS
ffl-Ll	Η,Η	ο	Η	H	H	CH20H	vazba	I	RSR
1114-2	HJÍ	0	Η	H	H	CH2OH	vazba	1	SSR
IH-L3	Η,Η	0	Η	H	H	CH2OH	vazba	1	RRS
IH-L4	Η,Η	0	Η	H	H	CH2OH	vazba	1	SRS
m-Mi	Η3	0	Η	H	9-OMe	H	vazba	1	RSR
ΠΙ-Μ2	Η3	0	Η	H	9-OMe	H	vazba	1	SSR
ΠΙ-Μ3	HJÍ	0	Η	H	9-OMe	H	vazba J	1	RRS

-41 CZ 301754 B6

ΠΙ-Μ4	HJI	Η	Η	9-OMe	Η	vazba	1	SRS
m-Ni	Η,Η	Η	Η	Η	Η	vazba	1	RSR
ΠΙ-Ν2	Η,Η	Η	Η	Η	Η	vazba	1	SSR
ΙΠ-Ν3	Η,Η	Η	Η	Η	Η	vazba	1	RRS
ΙΠ-Ν4	HJÍ	Η	Η	Η	Η	vazba	1	SRS
ΙΠ-Ρ1	Η,Η	Η	3-CH2O- CH2OEI	Η	Η	vazba	I	RSR
IH-P2	Η,Η	Η	3-CH2O- CH2OEI	Η	Η	vazba	1	SSR
ΠΙ·Ρ3	Η,Η	Η	3-CH2Ó- CH2OE1	Η	Η	vazba	1	RRS
m-P4	Η,Η	Η	3-CH2O- CH2OEI	Η	Η	vazba	1	SRS
III-Qi	HH	Η	Η	Η	Η	0	1	RSS
III-Q2	Η,Η	Η	Η	Η	Η	0	1	sss
HI-Q3	Η,Η	Η	Η	Η	Η	0	1	RRR
III-Q4	Η,Η	Η	Η	Ή	Η	0	1	SRŘ

Je třeba si uvědomit, že všechny patenty, přihlášky a publikace zmíněné v uvedené patentové přihlášce jsou obsaženy jak odkazy ve své úplnosti. Jak bude odborníkům v oboru jasné, existují různé obměny a modifikace výhodných provedeních předkládaného vynálezu, která se neodchy5 lují od rozsahu vynálezu. Všechny takové varianty spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.

Claims

io PATENTOVÉ NÁROKY

1. Přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina vzorce II

Rl

I (ID,

15 ve kterém

-42CZ JUl/M BO

R¹, R⁴, R⁶ a R⁷ jsou každý Η, Y je O, n je 1, AiA2 a BiB2 jsou nezávisle =0 nebo H,H, R² je H, OR nebo Ci až C4 alkyl s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený, R³ je H, Br, CH2OCH2OC2H5 nebo 3'NH2Ph nebo Ct až C8 alkyl s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený, Ph znamená fenyl, R³ je H nebo Ci až C8 alkoxy s přímým řetězcem, cyklický nebo

5 rozvětvený a R⁸ je H, CH₃, CH₂0H, CH₂C₂H₅, C(O)OC₂H₅ nebo Ci až C« alkoxy s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený, Z je vazba nebo O, m je 1 nebo 2 a Rje vodík.
2. Přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina podle nároku 1 vzorce II, mající diastereomery vzorce
3. Přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina podle nároku 2 mající enantiomery vzorce

-43CZ 301754 B6 ve kterém
5 R³ je H, Br, CH2OCH2OC2H5 nebo 3'NH2Ph nebo Ci až C8 alkyl s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený, Ph znamená fenyl a R³ je H nebo C| až C8 alkoxy s přímým řetězcem, cyklický nebo rozvětvený.

-44CZ, JU1 /34 BO

5. Přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina podle nároku 4, mající vzorec

-45CZ 301754 B6
6. Přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina podle nároku 5, mající enantiomery vzorce nebo
7. Přemostěná indenopyrrolokarbazolová sloučenina podle nároku 5, mající diastereomery 5 vzorce
8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu podle nároku 1 vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič.

io
9. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje přemostěnou índenopyrrolokarbazolovou sloučeninu podle nároku 5 a farmaceuticky přijatelný nosič.
10. Farmaceutický prostředek pro léčbu nebo prevenci onemocnění prostaty, vyznačující se tím, že obsahuje přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu podle nároku 1

15 vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič.
11. Farmaceutický prostředek podle nároku 10, vyznačující se tím, že onemocněním prostaty je karcinom prostaty nebo benigní hyperplasie prostaty.

20
12. Farmaceutický prostředek pro léčbu nebo prevenci onemocnění souvisejících s angiogenesí, vyznačující se tím, že obsahuje přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu podle nároku 1 vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič.
13. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že onemocněním

25 souvisejícím s angiogenesí je solidní nádor, endometriosa, diabetická retinopatie, psoriasa, hemangioblastom, oční onemocnění nebo makulámí degenerace.
14. Farmaceutický prostředek pro léčbu nebo prevenci neoplastických onemocnění, revmatoidní artritidy, plicní fibrosy, myelofibrosy, abnormálního hojení ran, atherosklerosy nebo restenosy,

30 vyznačující se tím, že obsahuje přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu podle nároku 1 vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič.

-46CZ 301754 B6
15. Farmaceutický prostředek pro léčbu nebo prevenci Alzheimerovy nemoci, amyotrofické laterální sklerosy, Parkinsonovy nemoci, mrtvice, ischemie, Huntingtonovy nemoci, AIDS demence, epilepsie, roztroušené sklerosy, periferní neuropatie nebo poranění mozku nebo míchy, vyznačující se tím, že obsahuje přemostěnou indenopyrrolokarbazolovou sloučeninu

5 podle nároku 1 vzorce II a farmaceuticky přijatelný nosič.
16. Použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle nároku 1 vzorce II pro výrobu léku pro inhibici aktivity trk kinasy.

ío
17. Použití podle nároku 16, kde trk kinasou je trk A.
18. Použití podle nároku 16, přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle nároku 1 vzorce II pro výrobu léku pro léčbu zánětu.

15
19. Použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle nároku 1 vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci onemocnění prostaty.
20. Použití podle nároku 19, kde onemocněním prostaty je karcinom prostaty nebo benigní hyperplasie prostaty.
21. Použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle nároku 1 vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci onemocnění souvisejících s angiogenesí.
22. Použití podle nároku 21, kde onemocněním souvisejícím s angiogenesí je solidní nádor,

25 endometriosa, diabetická retinopatie, psoriasa, hemangioblastom, oční onemocnění nebo makulámí degenerace.
23. Použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle nároku 1 vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci onemocnění, při kterých přispívá aktivita PDGFR k patologicko kým stavům.
24. Použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle nároku 1 vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci neoplastíckých onemocnění, revmatoidní artritidy, plicní fibrosy, myelofibrosy, abnormálního hojení ran, atherosklerosy nebo restenosy.
25. Použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle nároku 1 vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci onemocnění charakterizovaných aberantní aktivitou buněk reaktivních na trofické faktory.

40 26. Použití přemostěné indenopyrrolokarbazolové sloučeniny podle nároku 1 vzorce II pro výrobu léku pro léčbu nebo prevenci Alzheimerovy nemoci, amyotrofické laterální sklerosy, Parkinsonovy nemoci, mrtvice, ischemie, Huntingtonovy nemoci, AIDS demence, epilepsie, roztroušené sklerosy, periferní neuropatie nebo poranění mozku nebo míchy.