CZ294996B6 - Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů - Google Patents

Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů Download PDF

Info

Publication number
CZ294996B6
CZ294996B6 CZ20031950A CZ20031950A CZ294996B6 CZ 294996 B6 CZ294996 B6 CZ 294996B6 CZ 20031950 A CZ20031950 A CZ 20031950A CZ 20031950 A CZ20031950 A CZ 20031950A CZ 294996 B6 CZ294996 B6 CZ 294996B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
reactive
polymer
preparation
hydroxypropyl
methacrylamide
Prior art date
Application number
CZ20031950A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20031950A3 (cs
Inventor
Vladimír Ing. Csc. Šubr
Karel Doc. Ing. Drsc. Ulbrich
Blanka Prof. Rndr. Drsc. Říhová
Original Assignee
Ústav Makromolekulární Chemie Av Čr
Mikrobiologický Ústav Av Čr
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ústav Makromolekulární Chemie Av Čr, Mikrobiologický Ústav Av Čr filed Critical Ústav Makromolekulární Chemie Av Čr
Priority to CZ20031950A priority Critical patent/CZ294996B6/cs
Priority to CA002533199A priority patent/CA2533199A1/en
Priority to US10/564,614 priority patent/US20060275250A1/en
Priority to PCT/IB2004/052127 priority patent/WO2005007798A2/en
Priority to EA200600259A priority patent/EA200600259A1/ru
Publication of CZ20031950A3 publication Critical patent/CZ20031950A3/cs
Publication of CZ294996B6 publication Critical patent/CZ294996B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
    • C08F220/52—Amides or imides
    • C08F220/54—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide
    • C08F220/58—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide containing oxygen in addition to the carbonamido oxygen, e.g. N-methylolacrylamide, N-(meth)acryloylmorpholine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C08F8/34—Introducing sulfur atoms or sulfur-containing groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F2810/00—Chemical modification of a polymer
    • C08F2810/40—Chemical modification of a polymer taking place solely at one end or both ends of the polymer backbone, i.e. not in the side or lateral chains

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Řešení se týká reaktivních polymerů a kopolymerů na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, které obsahují reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny jež mohou být v postranních řetězcích polymeru nebo na konci polymerního řetězce. Řešení dále zahrnuje způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv a konjugátů s proteiny a přípravu systémů pro dopravu genů.ŕ

Description

Reaktivní polymery a kopolymery na bázi 7V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů
Oblast techniky
Vynález se týká nových reaktivních polymerů a kopolymerů na bázi A-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, jejich přípravy a použití pro přípravu polymerních léčiv umožňujících cílenou terapii a pro modifikaci biologicky aktivních proteinů („protein delivery“) a přípravu systémů pro genovou terapii.
Dosavadní stav techniky
Vývoj nových léčiv a lékových forem se v posledních letech stále více zaměřuje na využití polymerních látek, zvláště vodorozpustných polymerů jako nosičů léčiv. Významnou skupinu polymerních léčiv zaznamenávajících rychlý vývoj tvoří léčiva připravená na bázi kopolymerů N-(2hydroxypropyl)methakrylamidu (ΗΡΜΑ). V takovém polymemím léčivu je léčivo vázáno k polymernímu nosiči přes enzymaticky štěpitelnou oligopeptidovou sekvenci umožňující řízené uvolňování aktivního cytostatika v cílových (nádorových) buňkách. Tato léčiva často využívají protilátku jako jednotku specificky směrující léčivo k vybraným orgánům či buňkám. Struktura, syntéza a vlastnosti takovýchto konjugátů jsou popsány v patentech (CZ 278551 - J. Kopeček, P. Rejmanová, J. Strohalm, R. Duncan, J. B. Lloyd, K. Ulbrich, B. Říhová, V. Chytrý; USP 5,571,785 - F. Angelucci, M. Grandi, A. Suarato) [1,2] a řadě dalších publikací (K. Ulbrich, V. Šubr, J. Strohalm, D. Plocová, M. Jelínková, B. Říhová, Polymeric drugs based on conjugates of synthetic and natural macromolecules I. Synthesis and physico-chemical characterisation: J. Controlled Release 64, 2000, 63-79; B. Říhová, M. Jelínková, J. Strohalm, V. Šubr, D. Plocová, O. Hovorka, M. Novák, D. Plundrová, Y. Germano, K. Ulbrich, Polymeric drugs based on conjugates of synthetic and natural macromolecules II. Anticancer activity of antibody or (Fab')2-targeted conjugates and combined therapy with immunomodulators,: J. Controlled Release 64 (2000) 241-261; J. Kopeček, P. Kopečková, T. Minko, Z. R. Lu, HPMA copolymeranticancer drug conjugates: design, activity, and mechanism of action: European Joumal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 50 (2000) 61-81; K. Ulbrich, J. Strohalm, V. Šubr, D. Plocová, R. Duncan, B. Říhová, Polymeric Conjugates of Drugs and Antibodies for SiteSpecific Drug Delivery, Macromol. Symp. 103 (1996) 177-192). [3-6].
Přehled dosud dosažených výsledků je dobře dokumentován v práci Kopeček a spol.: HPMA copolymer-anticancer drug conjugates: design, activity, and mechanism of action: European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 50 (2000) 61-81 [5], Některé polymemí konjugáty jsou v současné době klinicky testovány (P. A. Vasey, R. Duncan, S. B. Kaye, J. Cassidy, Clinical phase I trial of PK1 (HPMA co-polymer doxorubicin), Eur. J. Cancer 31 (1995) S193, P. A. Vasey, S. B. Kaye, R. Morrison, C. Twelves, P. Wilson, R. Duncan, A. H. Thomson, L. S. Murray, T. E. Hilditch, T. Murray, S. Burtles, D. Fraier, E. Frigerio, J. Cassidy, Phase I clinical and pharmacokinetic study of PK1 [N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide copolymer doxorubicin]: First member of a new class of chemotherapeutic agents - Drug-polymer conjugates, Clinical Cancer Research 5 (1999) 83-94, P. J. Julyan, L. W. Seymour, D. R. Ferry, S. Daryani, C. M. Boivin, J. Doran, M. David, D. Anderson, C. Christodoulou, A. M. Young, Preliminary clinical study of the distribution of HPMA copolymers bearing doxorubicin and galactosamine, J. Controlled Release 57 (1999) 281-290, A. H. Thomson, P. A. Vasey, L. S. Murray, J. Cassidy, D. Fraier, E. Frigerio, C. Twelves, Population pharmacokinetics in phase I drug development: a phase I study of PK1 in patients with solid tumours: Br. J. Cancer 81 (1999) 99-108, L. W. Seymour, D. R. Ferry, D. Anderson, S. Hesslewood, P. J. Julyan, R. Poyner, J. Doran, A. M. Young, S. Burtles, D. J. Kerr, Hepatic drug targeting: Phase I evaluation of polymer-bound doxorubicin. J. Clin. Oncol. 20, 1668-1676,
2002; N. V. R. Panday, M. J. M. Terwogt, W. W. Huinink et al., Phase I clinical and pharmacokinetic study of PNU 166945, a novel water-soluble prodrug of paclitaxel. Proč. Am, Soc. Clin. Oncol. 17,742, 1998; M. J. M. Terwogt, W. W. Huinink, J. Η. M. Schellens, M. Schot,
I. A. M. Mandjes, M. G. Zurlo, M. Rocchetti, H. Rosing, F. J. Koopman, J. H. Beijnen: Phase I clinical and pharmacokinetic study of PNU 166945, a novel water-soluble polymer-conjugated prodrug of paclitaxel. Anti-Cancer Drugs 12, 315-323, 2001; M. Bouma, B. Nuijen, D. R. Stewart, J. R. Rice, B. A. J. Jansen, J. Reedijk, A. Bult, J. H. Beijnen, Stability and compatiblity of the investigational polymer-conjugated platinum anticancer agent AP 5280 in infusion systems and its hemolytic potential. Anti-Cancer Drugs 13, 915-924, 2002; Μ. M. Tibbem, J. M. Rademaker-Lakhai, J. R. Rice, D. R. Steward, J. Η. M. Schellens, J. H. Beijnen, Determination of total platium in plasma and plasma ultrafiltrate, from subjects dosed with the platinumcontaining N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide copolymer AP5280, by use of graphite-furnace Zeeman atomic-absorption spectrometry, Anal. Bioanal. Chem 373, 233-236, 2002) [7-15]. Ve fázi předklinického testování jsou v současné době polymerní cytostatika obsahující jako směrující jednotku lidský IgG (B. Říhová, J. Strohalm, K. Kubáčková, M. Jelínková, L. Rozprimová, M. Šírová, D. Plocová, T. Mrkvan, M. Kovář, J. Pokorná, T. Etrych, K. Ulbrich, Drug-HPMA-Hulg conjugates effective against human solid cancer: Adv. Exp. Med. Biol. 519 (2003) 125-143). [16],
Výsledky klinického testování ukázaly, že například polymerní léčivo na bázi doxorubicinu (Dox) je účinné a méně nespecificky toxické než volné léčivo. Maximální tolerovaná dávka pro PK1 (MTD) je 320 mg/m2 což je 4 až 5 x více, nežli je v klinice používaná dávka volného doxorubicinu (60 až 80 mg/m2), MYD pro PK2 je 120 mg/m2. Na rozdíl od doxorubicinu nebyly při aplikaci polymerního léčiva pozorovány žádné závažné změny srdečních funkcí, ačkoliv kumulativní dávka dosáhla hodnoty 1680 mg/m2.
Současná syntéza polymerních léčiv na bázi kopolymerů HPMA prováděná podle postupu popsaném v CZ patentu 278551 [1] a řadě dalších prací je poměrně složitá a skládá se z několika kroků, jako je syntéza HPMA, monomerů obsahujících reaktivní esterové skupiny (4-nitrofenylové či sukcinimidové estery), přípravy kopolymerů obsahujících v postranním řetězci 4nitrofenylové (ONp) nebo sukcinimidové (OSu) estery (polymerní prekurzory), vazby léčiva, případně směrující jednotky k polymernímu nosiči a čištění a charakterizace polymerního léčiva. Příprava reaktivních polymerních prekurzorů s 4-nitrofenylovými reaktivními skupinami se provádí srážecí kopolymerizací HPMA s 4-nitrofenylovými estery A-methakryloylovaných aminokyselin nebo oligopeptidů v acetonu při 50 °C po dobu 24 h. Dosažená konverze se pohybuje v rozmezí 55 až 60 %. Polymerace je provázena inhibiční periodou a probíhajícími přenosovými reakcemi. To brání jednoduchým způsobem (koncentrací iniciátoru či monomeru nebo teplotou) řídit molekulovou hmotnost a tedy i vlastnosti polymerního prekurzoru. Vazba léčiva a směrující jednotky (protilátky) je založena na aminolytické reakci polymerních ONp esterů primárními aminoskupinami obsaženými v molekule léčiva nebo směrující jednotky za vzniku amidické vazby.
Vzhledem ke srovnatelné rychlosti aminolýzy a hydrolýzy polymerních ONp esterů ve vodném prostředí je vazba kancerostatika například doxorubicinu, případně další biologicky aktivní molekuly či směrující jednotky (galaktosamin) (CZ patent 278551) [1] prováděna v organickém rozpouštědle dimethylsulfoxidu (DMSO) a izolace finálního produktu je prováděna vysrážením do značného objemu srážedla (aceton: diethylether 3:1) a následující filtrací. Konjugáty obsahující jako směrující jednotku glykoproteiny (protilátky) jsou připravovány dvoustupňovým procesem, přičemž je nejdříve navázáno v organickém rozpouštědle (DMSO, DMF) léčivo například doxorubicin a po izolaci konjugátu s léčivem obsahujícím část nezreagovaných ONp esterů srážením, jsou protilátky vázány aminolyticky ve vodném roztoku při konstantní pH v rozmezí 8,0 až 8,2 udržovaném přídavkem tetraboritanu sodného (K. Ulbrich, V. Subr,
J. Strohalm, D. Plocová, M. Jelínková, B. Říhová, Polymeric drugs based on conjugates of synthetic and natural macromolecules I. Synthesis and physico-chemical characterisation: J. Controlled Release 64, 2000, 63-79) [3],
-2 CZ 294996 B6
Stejným způsobem jsou modifikovány rozpustnými polymery na bázi kopolymerů HPMA i další biologicky aktivní proteiny či oligopeptidy (enzymy jako BS RNáza, RNáza, A, cyklosporin A, lecirelin (K. Ulbrich, J. Strohalm, D. Plocová, D. Oupický, V. Šubr, J. Souček, P. Poučková, J. Matoušek, Poly[N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide] conjugates of bovine seminal ribonuclease. Synthesis, physicochemical and biological properties: J. Bioactive Compat. Polym. 15 (2000) 4-26; J. Souček. P. Poučková, M. Zadinová, D. Hloušková, D. Plocová, J. Strohalm, Z. Hrkal, T. Oleár, K. Ulbrich, Polymer conjugated bovine seminal ribonuclease inhibits growth of solid tumors and development of metastases in mice: Neoplasma 48 (2001) 127-132; J. Souček, P. Poučková, J. Strohalm, D. Plocová, D. Hloušková, M. Zadinová, K. Ulbrich, Polyf/V(2-hydroxypropyl)methacrylamide] conjugates of bovine pancreatic ribonuclease (RNase A) inhibit growth of human melanoma in nudě mice: J. Drug Targeting 10 (2002) 175-183; B. Říhová, A. Jegorov, J. Strohalm, V. Maťha, P. Rossmann, L. Fornůsek, K. Ulbrich, AntibodyTargeted Cyclosporin A: J. Controlled Release 19 (1992) 25-39; K. Ulbrich, V. Šubr, J. Lidický, L. Sedlák, J. Píchá, Polymerní konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem a jejich použití, CZ patent 288 568 (2001)) [17-21] či polyelektrolytové DNA (nebo plazmidové) komplexy (K. D. Fisher, Y. Stallwood, N. K. Green, K. Ulbrich, V. Mautner, L. W. Seymour, Polymercoated adenovirus permits efficient retargeting and evades neutralising antibodies: Gene Ther. 8 (2001)341-348) [22].
Všechny tyto syntézy vedou k hydrolýze části ONp nebo OSu esterových skupin polymeru a tím i ke snížení schopnosti polymeru reagovat s proteinem, případně další biologicky aktivní látkou, a vedou k produktu, jehož struktura je komplikovaná a obtížně definovatelná.
Cílem předloženého vynálezu je poskytnout nové jednoduše připravitelné reaktivní polymery a kopolymery HPMA, obsahující reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny pro syntézu polymerních léčiv, modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů.
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu jsou reaktivní polymery a kopolymery na bázi7V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu pro přípravu polymerních léčiv, modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů, jejichž podstata spočívá v tom, že obsahují reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny. Tyto reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny se mohou podle vynálezu nacházet na postranních řetězcích polymeru či kopolymeru nebo na konci polymerního řetězce.
Přednostní provedení podle vynálezu představují reaktivní kopolymery sestávající z 30 až 3000 monomerních jednotek spojených do polymerního řetězce, z nichž 60 až 99,8 % jednotek je N(2-hydroxypropyl)methakrylamid a 0,2 až 40% je reaktivních monomerních jednotek na bázi Nmethakryloylovaných aminokyselin nebo oligopeptidů obsahující reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny, obecného vzorce Ma-X-TT, kde Ma je methakryloyl, TT je thiazolidin-2-thionová skupina a X je aminokyselina nebo oligopeptid, přičemž aminokyselina je vybraná ze skupiny zahrnující kyselinu ε-aminokapronovou, kyselinu 4-amino-benzoovou a β-alanin a oligopeptid je vybraný ze skupiny zahrnující GlyGly, GlyPhe, GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, Gly-DL-PheLeuGly, GlyLeuPheGly.
Dalším význakem předloženého vynálezu jsou reaktivní polymery sestávající z 20 až 150 monomerních jednotek spojených do polymerního řetězce složeného ze 100% jednotek N-(2hydroxypropyl)methakrylamidu, a nesoucího na konci řetězce sulfanylpropionyl-thiazolidin-2thionovou skupinu.
Předložený vynález dále zahrnuje reaktivní polymery sestávající z 20 až 150 monomerních jednotek spojených do polymerního řetězce, složeného z 95 % až 99,90 % jednotek N-(2hydroxypropyl)methakrylamidu a 0,1 až 5 % TV-methakryloylovaných oligopeptidů doxorubici-3 nu, přičemž oligopeptidy jsou s výhodou vybrané ze skupiny GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-DLPheLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, GlyLeuPheGly a GlyLeuLeuGly, a nesoucího na konci řetězce sulfanylpropionyl-thiazolidin-2-thionovou skupinu.
Dalším přednostním provedením vynálezu jsou reaktivní polymery sestávající z 20 až 2000 monomerních jednotek spojených do polymerního řetězce, složeného ze 100 % jednotek N(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, a nesoucího na konci řetězce kyanovaleroyl-thiazolidin-2thionovou skupinu.
Význakem vynálezu jsou dále reaktivní kopolymery sestávající z 20 až 2000 monomerních jednotek spojených do polymerního řetězce, složeného z 95 až 99,9 % jednotek 7V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu a 0,1 až 5 % jednotek vV-methakryloylovaných oligopeptidů doxorubicinu, přičemž oligopeptidy jsou s výhodou vybrané ze skupiny GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-DLPheLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, GlyLeuPheGly a GlyLeuLeuGly, a nesoucího na konci řetězce kyanovaleroyl-thiazolidin-2-thionovou skupinu.
Předložený vynález dále zahrnuje reaktivní monomemí jednotky na bázijV-methakryloylovaných aminokyselin nebo oligopeptidů obsahující reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny obecného vzorce Ma-X-TT, kde Ma je methakryloyl, X je aminokyselina nebo oligopeptid, přičemž aminokyselina je vybraná ze skupiny zahrnující kyselinu ε-aminokapronovou, kyselinu 4amino-benzoovou a β-alanin, oligopeptid je vybraný ze skupiny zahrnující GlyGly, GlyPhe, GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, Gly-DL-PheLeuGly, GlyLeuPheGly a kde TT představuje thiazolidin-2-thionovou skupinu, vhodné pro přípravu reaktivních polymerů.
Způsob přípravy reaktivních polymerů a kopolymerů podle vynálezu spočívá v tom, že se monomery vybrané ze skupiny, sestávající z A-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu a jV-methakryloylované aminokyseliny nebo oligopeptidů obsahující reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny podrobí roztokové radikálové polymerizaci.
Význakem vynálezu je dále způsob přípravy reaktivních polymerů a kopolymerů podle vynálezu jež spočívá v tom, že se monomer ÝV-(2-hydroxypropyl)methakrylamid podrobí radikálové srážecí polymeraci za přítomnosti 3-sulfanylpropionové kyseliny jako přenašeče či azo-biskyanovalerové kyseliny jako iniciátoru a získaný polymer se nechá zreagovat s 2-thiazolin-2thiolem.
Reaktivní kopolymery podle vynálezu lze připravit způsobem, který spočívá v tom, že se monomer A-(2-hydroxypropyl)methakrylamid podrobí radikálové roztokové kopolymeraci s Nmethakryloylovaným oligopeptidem doxorubicinu za přítomnosti 3-sulfanylpropionové kyseliny jako přenašeče či azo-bis-kyanovalerové kyseliny jako iniciátoru a získaný polymer se nechá zreagovat s 2-thiazolin-2-thiolem.
Předložený vynález dále zahrnuje použití reaktivních polymerů a kopolymerů podle vynálezu pro přípravu polymerních konjugátů obsahujících léčivo jako doxorubicin nebo daunomycin a použití reaktivních kopolymerů pro přípravu konjugátů obsahujících ligand pro receptor na cílové buňce, např. glykoproteiny Ig, IgG, hlgG nebo monoklonální protilátku pro terapeutické účely.
Význakem vynálezu je dále použití reaktivních polymerů podle vynálezu pro přípravu hydrofilním polymerem modifikovaných (koutovaných) polymerních komplexů) polyplexů) DNA plazmidů nebo adenovirů jako systémů pro dopravu genů.
Předmětem vynálezu jsou reaktivní polymery (polymemí prekurzory) připravené na bázi kopolymerů HPMA s methakryloylovanými substituovanými amidy, obsahujícími reaktivní thiazolidin2-thionové (TT) skupiny, jejich syntéza a použití pro přípravu polymerních léčiv a konjugátů s proteiny pro terapeutické účely. Záměna ONp skupiny v HPMA kopolymerech za reaktivní TT skupinu přináší významné zlepšení, zjednodušení a zlevnění celého postupu přípravy polymer-4CZ 294996 B6 nich léčiv na bázi kopolymerů HPMA i konjugátů těchto polymerů s biologicky aktivními proteiny a oligopeptidy. Přípravu polymerních prekuzorů obsahujících reaktivní thiazolidin-2thionové skupiny (TT polymery) v postranních řetězcích je možné s výhodou provádět roztokovou polymerizací v dimethylsulfoxidu. Vlivem vyšší polymerizační rychlosti je možné dosáhnout 70 až 80 % konverze již po 7 hod polymerace (u polymerních ONp esterů je možné dosáhnout konverze 50 až 60 % až za 24 hod). Požadovaná molekulová hmotnost polymerního prekurzoru není ovlivňována obsahem reaktivního komonomeru jako v případě ONp esterů a je řízena jak koncentrací monomeru a iniciátoru, tak i polymerační teplotou v širokém rozmezí molekulových hmotností.
Příprava semitelechelických poly(HPMA) prekurzorů obsahujících reaktivní thiazolidin-2thionovou skupinu (TT polymery) na konci polymerního řetězce probíhá ve dvou krocích. V prvním kroku jsou připraveny semitelechelické poly(HPMA) obsahující koncové karboxylové skupiny srážecí radikálovou polymerací v acetonu při 50 °C prováděnou po dobu 24 h za přítomnosti 3-sulfanylpropionové kyseliny jako přenašeče (K. Ulbrich, V. Šubr, J. Strohalm. D. Plocová, M. Jelínková, B. Říhová, Polymeric drugs based on conjugates of synthetic and natural macromolecules I. Synthesis and physico-chemical characterisation: J. Controlled Release 64, 2000, 63-79) [3] nebo radikálovou srážecí polymerací v acetonu při 50 °C po dobu 24 h za použití azo-bis-kyanovalerové kyseliny jako iniciátoru (T. Etrych, J. Strohalm, K. Ulbrich, M. Jelínková, B. Říhová, Targeting of Polymer-drug Conjugates with Antibodies. Effect of the Method of Conjugation: 5th International Symposium On Polymer Therapeutics, Cardiff, Great Britain, 2002, Abstracts, p. 65) [24]. Následnou reakci koncové karboxylové skupiny s 2thiazolin-2-thiolem v přítomnosti A/TV-dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) v TV.A-dimethylformamidu (DMF) je připraven reaktivní polymemí prekurzor.
Semitelechelické HPMA-Dox polymemí prekurzory, obsahující reaktivní thiazolidin-2-thionovou skupinu (TT polymery) na konci polymerního řetězce a doxorubicin v postranním řetězci, lze připravit roztokovou radikálovou kopolymerací HPMA a TV-methakryloylovaných oligopeptidů doxorubicinu (GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-DL-PheLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, GlyLeuPheGly a GlyLeuLeuGly) v methanolu při 50 °C probíhající po dobu 24 h za přítomnosti 3-sulfanylpropionové kyseliny jako přenašeče [3] nebo radikálovou roztokovou kopolymerací výše uvedených komonomerů v methanolu při 50 °C po dobu 24 h za použití azo-bis-kyanovalerové kyseliny jako iniciátoru [24] a následnou reakcí koncové karboxylové skupiny s 2-thiazolin-2thiolem v přítomnosti Λζ/V-dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) v DMF.
Polymemí prekurzory podle vynálezu, obsahující reaktivní TT skupiny, se vyznačují značným rozdílem mezi rychlostí aminolýzy a hydrolýzy ve vodném prostředí (obr. 1), což umožňuje provádět vazbu léčiv i biologicky aktivních látek v jednom reakčním kroku. Navíc ve vodném prostředí je možné provádět celý proces, tj. včetně vazby léčiva, což vede ke značnému zjednodušení a zlevnění přípravy polymerních cytostatik i konjugátů polymeru s proteiny. Vyloučení použití velkých objemů hořlavin (diethylether, aceton) při syntéze se projeví nejen nižšími výrobními náklady, ale i jednoduššími podmínkami pro zajištění bezpečnosti výroby preparátu a projeví se i šetrností k životnímu prostředí. Porovnání přípravy polymerních konjugátů je schematicky znázorněno na obr. 2. Obr. 1 dokumentuje, že při aminolytické reakci vazby léčiva či proteinu bude přednostně a velmi rychle docházet k vazbě těchto látek (aminolýze) na polymer a nežádoucí vedlejší reakce hydrolýzy bude silně potlačena.
Přehled obrázků na výkresech
Na obr. 1 je znázorněné porovnání rychlosti hydrolýzy a aminolýzy kopolymerů P-Akap-TT a P-GlyGly-ONp v HEPES pufru při pH 8,0, ♦ P-Akap-TT hydrolýza, 0 P-Akap-TT aminolýza, A P-GlyGly-ONp hydrolýza, Δ P-GlyGly-ONp aminolýza. Na obr. 2 jsou porovnány jednotlivé kroky při syntéze polymerních konjugátů obsahujících léčivo a glykoprotein z výchozích monomemích surovin HPMA a jV-methakryloylovaných aminokyselin a oligo-5 CZ 294996 B6 peptídů obsahujících reaktivní TT a ONp skupiny. Na obr. 3 je znázorněna aktivita klasického a hvězdicového konjugátu BS-RNázy při léčbě lidského melanomu v nu-nu myších. Obr. 4 ukazuje dobu přežití pokusných myší v terapeutickém modu podání konjugátů připravených podle příkladů 5 a 6 předloženého vynálezu. Na obrázcích 5 a 6 jsou znázorněny obecné struktury reaktivních sloučenin podle předmětného vynálezu, kde struktura I představuje monomer obecného vzorce Ma-X-TT, struktura II kopolymery s reaktivními thiazolidin-2-thionovými skupinami v bočném řetězci, struktury III a V polymery s reaktivními skupinami na konci řetězce a struktury IV a VI kopolymery s reaktivními skupinami na konci řetězce. Obr. 7 ukazuje struktury sloučenin připravitelných za použití reaktivních polymerů podle vynálezu, přičemž struktura VII znázorňuje příklad nesměřovaného polymerního kancerostatika a struktura VIII příklad protilátkou směrovaného kancerostatika.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení, kde jsou uvedeny příklady přípravy reaktivních monomerů, syntézy reaktivních polymerů tj. polymemích prekurzorů za použití reaktivních monomerů a také příklady použití těchto polymerních prekurzorů pro přípravu polymerního léčiva či konjugátu aniž je na ně omezen.
Příklady provedení vynálezu
Příprava polymerních prekurzorů
Příprava reaktivních polymerů se provádí ve dvou syntetických krocích. V prvním se připraví monomery A-(2-hydroxypropyl)methakrylamid (HPMA) a TV-methakryloylované aminokyseliny a oligopeptidy obsahující thiazolidin-2-thionové reaktivní skupiny (Ma-X-TT, Struktura I, obr. 5). V druhém kroku se připraví výsledné reaktivní polymery radikálovou kopolymerizací HPMA s Ma-X-TT (X je oligopeptid nebo aminokyselina).
Příklad 1
Reaktivní TT kopolymer s nedegradovatelnou spojkou tvořenou ε-aminokapronovou kyselinou (P-Akap-TT) (Struktura II, obr. 5)
HPMA byl připraven dříve popsanou metodou [3], jV-Methakryloyl-s-aminokapronová kyselina byla připravena methakryloylací ε-aminokapronové kyseliny reakcí dle Schotten-Baumana [23], A-methakryloyl-s-aminokapronová kyselina (3,0 g, 0,015 mol) a 2-thiazolin-2-thiol (l,8g, 0,015 mol) byly rozpuštěny v 35 ml octanu ethylnatého. Dicyklohexylkarbodiimid (DCCI) (3,72g, 0,018 mol) byl rozpuštěn v 5 ml octanu ethylnatého. Oba roztoky byly ochlazeny na 15 °C. Ochlazené roztoky byly smíchány a udržovány 1 h při -15 °C a dále přes noc při 5 °C. Reakční směs byla míchána 1 h při teplotě místnosti s přídavkem 0,1 ml kyseliny octové. Vyloučená dicyklohexylmočovina (DCU) byla odfiltrována. Roztok byl vakuově zahuštěn a opět naředěn octanem ethylnatým. Další část vyloučené dicyklohexylmočoviny (DCU) byla odfiltrována. Produkt byl krystalován ze směsi octan ethylnatý- diethylether-15 °C. Produkt byl odfiltrován, promyt diethyletherem a sušen ve vakuu.
Výsledný polymer byl připraven radikálovou kopolymerizací. 1 g směsi HPMA (95 % mol, 0,90 g) a Ma-Akap-TT (5 % mol, 0,10 g) a 0,133 g azo-bis-izobutyronitrilu bylo rozpuštěno v 5,53 g dimethylsulfoxidu (DMSO) a roztok byl předložen do polymerační ampule. Po probublání polymerační směsi dusíkem byla ampule zatavena a polymerace prováděna při 60 °C po dobu 6 h. Polymer byl izolován vysrážením do 100 ml směsi aceton-diethylether 1:1. Polymer byl odfiltrován, promyt acetonem a diethyletherem a sušen za vakua. Molekulová hmotnost tohoto polymeru byla Mw = 32 400, Mw/Mn= 1,65 a obsah TT skupin byl 3,9 mol %. Složení kopolymerů (obsah postranních řetězců zakončených TT reaktivními skupinami) je možné řídit
-6CZ 294996 B6 složením polymerizační směsi v širokém rozsahu, molekulovou hmotnost je možné řídit koncentrací iniciátoru a monomeru v násadě i teplotou polymerace.
Příklad 2
Reaktivní TT kopolymer se spojkou tvořenou biodegradovatelnou tetrapeptidovou sekvencí (PGly-DL-PheLeuGly-TT, P-Gly-L-PheLeuGly-TT) (Struktura II, obr. 5)
HPMA a oba komonomery (A-methakryloyl-glycyl-fenylalanylleucylglycin lišící se konfigurací fenylalaninu (L; D,L)) byly připraveny dříve popsanými metodami [3], Oba V-methakryloylglycyl-fenylalanylleucylglycin-thiazolidin-2-thiony (Ma-Gly-L-PheLeuGly-TT, Ma-GlyDL-PheLeuGly-TT) byly připraveny reakcí kyseliny s 2-thiazolin-2-thiolem v přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu (DCCI). Ma-Gly-PheLeuGly-OH (2,0 g, 0,00434 mol) a 2-thiazolin2-thiol (0,544 g, 0,00456 mol) byly rozpuštěny ve 12 ml A/V-dimethylformamidu (DMF). DCCI (1,06 g, 0,00514 mol) byl rozpuštěn v 5 ml DMF. Roztoky byly ochlazeny na-15 °C a smíchány dohromady. Reakční směs byla udržována 1 h při -15 °C a dále po 48 h při 5 °C. Reakční směs byla míchána 1 h při teplotě místnosti za přídavku 0,1 ml kyseliny octové. Vyloučená DCU byla odfiltrována a filtrát byl vakuově zahuštěn. Olejovitý zbytek byl naředěn acetonem, vypadlý zbytek DCU byl odfiltrován. Produkt byl vyčištěn na silikagelové koloně ve směsi rozpouštědel octan ethylnatý : aceton v poměru 3:1. Frakce odpovídající produktu byla jímána, rozpouštědlo bylo vakuově odpařeno k suchu. Produkt byl rozmíchán s diethyletherem, odfiltrován a usušen. Kopolymerizace HPMA s jednotlivými reaktivními komonomery byla prováděna za stejných podmínek, jako v případě kopolymerů s Akap spojkou. Molekulová hmotnost tohoto polymeru byla Mw = 33 100, Mw/Mn = 1,63 obsah TT skupin byl 8,22 mol %. Složení kopolymerů (obsah postranních řetězců zakončených TT reaktivními skupinami) je možné i v tomto případě řídit složením polymerizační směsi v širokém rozsahu, molekulovou hmotnost je možné řídit koncentrací iniciátoru a monomeru v násadě i teplotou polymerace.
Obdobným způsobem byly připraveny i kopolymery s TT skupinami připojenými k polymeru spojkami tvořenými glycinem, diglycinem a β-alaninem. V těchto případech byly výchozími surovinami HPMA a Ma-Gly-OH, Ma-Gly-Gly-OH a Ma-3-Ala-OH. Postupy syntézy byly analogické s přípravou P-Akap-TT.
Příklad 3
Příprava semitelechelických HPMA polymerů obsahujících koncovou thiazolidin-2-thionovou reaktivní skupinu.
A. Semitelechelické poly(HPMA), obsahující koncové karboxylové skupiny, byly připraveny srážecí radikálovou polymerací v acetonu při 50 °C prováděnou po dobu 24 h za přítomnosti 3sulfanylpropionové kyseliny jako přenašeče [3] nebo radikálovou srážecí polymerací v acetonu při 50 °C po dobu 24 h za použití azo-bis-kyanovalerové kyseliny jako iniciátoru [24], 1 g semitelechelického póly (HPMA) obsahující koncové karboxylové skupiny (Mn = 5000, 0,0002 mol karboxylových skupin) byl rozpuštěn v 10 ml DMF a k roztoku byl přidán 2thiazolin-2-thiol (0,238 g, 0,002 mol) a DCCI (0,413 g, 0,002 mol). Reakční směs byla míchána 24 h při teplotě místnosti. Reakční směs byla vakuově zahuštěna na koncentraci 15 % hmotn. polymeru. Reaktivní polymer byl izolován vysrážením do směsi aceton : diethylether 1:1. Polymer, byl odfiltrován, promyt acetonem, rozpuštěn v methanolu a izolován srážením do směsi aceton : diethylether 3:1. Polymer byl odfiltrován, promyt diethyletherem a sušen za vakua. (Struktury III a V, obr. 5).
B. Semitelechelické HPMA-Dox kopolymery, obsahující koncové karboxylové skupiny, byly připraveny roztokovou radikálovou kopolymerací HPMA a TV-methakryloylglycylphenyl
-7CZ 294996 B6 alanylleucylglycyldoxorubicinu v methanolu při 50 °C probíhající po dobu 24 h za přítomnosti 3-sulfanylpropionové kyseliny jako přenašeče [3] nebo radikálovou roztokovou kopolymerací výše uvedených komonomerů v methanolu při 50 °C po dobu 24 h za použití azo-biskyanovalerové kyseliny jako iniciátoru [24], g semitelechelického polymeru HPMA-Dox obsahující koncové karboxylové skupiny (Mn = 5000, 0,0002 mol karboxylových skupin) byl rozpuštěn v 10 ml DMF a k roztoku byl přidán 2-thiazolin-2-thiol (0,238 g, 0,002 mol) a DCCI (0,413 g, 0,002 mol). Reakční směs byla míchána 24 h při teplotě místnosti. Reakční směs byla vakuově zahuštěna na koncentraci 15% hmotn. polymeru. Reaktivní polymer byl izolován vysrážením do směsi aceton : diethylether 1:1. Polymer byl odfiltrován, promyt acetonem, rozpuštěn v methanolu a izolován srážením do směsi aceton : diethylether 3:1. Polymer byl odfiltrován, promyt diethyl etherem a sušen za vakua. (Struktura IV, obr. 5 a struktura VI, obr. 6).
Příklad 4
Příprava nasměrovaného polymemího kancerostatika s doxorubicinem v DMSO
Kopolymer P-GlyPheLeuGly-TT (Struktura II) (0,15 g) byl rozpuštěn v 0,85 ml DMSO a k roztoku bylo přidáno 0,016 g Dox.HCl a dále 0,003 ml triethylaminu. Po 1 h míchání bylo přidáno dalších 0,0012 ml Et3N a reakční směs byla míchána další 1 h. Zbylé, nezreagované TT skupiny byly odstraněny přídavkem 0,002 ml l-amino-2-propanolu a polymer byl izolován vysrážením do směsi aceton - diethylether 3:1. Polymer byl odfiltrován a přečištěn přes kolonu plněnou Sephadoxem LH-20 v methanolu. Obsah navázaného Dox byl 6,79 % hmotn. (Struktura VII, obr. 7).
Příklad 5
Příprava nesměřovaného polymemího kancerostatika s doxorubicinem ve vodě
Kopolymer P-GlyPheLeuGly-TT (0,15 g) byl rozpuštěn v 1,5 ml destilované vody a k roztoku bylo přidáno 0,016 g Dox.HCl. Reakční směs byla míchána 2 h při teplotě místnosti apH roztoku bylo udržováno pomocí pH-statu na hodnotě 8,2 přídavkem nasyceného roztoku tetraboritanu sodného. Zbylé, nezreagované TT skupiny byly odstraněny přídavkem 0,002 ml l-amino-2propanolu a pH bylo upraveno na 6,5. Finální produkt byl přečištěn přes kolonu plněnou Sephadexem G-25 ve vodě a lyofilizován. Obsah navázaného Dox byl 6,51 % hmotn.
Příklad 6
Příprava klasického protilátkou směrovaného polymemího kancerostatika s doxorubicinem (Struktura VIII, obr. 7)
Kopolymer P-GlyPheLeuGly-TT (0,1 g, 8,22 % mol TT skupin) byl rozpuštěn přímo v 5,0 ml Adriablastiny (Adriblastina CZ, Pharmacia-Upjohn, léková forma Dox.HCl, 2 mg Dox/ml 0,15 M NaCl) a pak bylo přidáno 35 mg hlgG (Intraglobin F, Biotest GmbH) v 1,87 ml destilované vody. Pomocí pH-statu bylo upraveno pH z počátečních 5,0 až 8,0 přídavkem tetraboritanu sodného a bylo na této hodnotě udržováno 1,5 h pak bylo zvýšeno na 8,2 po následující 4,5 hod. Pak bylo přidáno 0,002 ml l-amino-2-propanolu a pH bylo upraveno na 6,5. Finální produkt byl přečištěn přes kolonu plněnou Sephadexem G-25 ve vodě a lyofilizována. Konjugát obsahoval 4,3 % hmotn. Dox a 29,7 % hmotn. hlgG. Mol. hmotnost Mw konjugátu byla 885 000.
-8CZ 294996 B6
Příklad 7
Příprava hvězdicového protilátkou směrovaného polymerního kancerostatika sdoxorubicinem
Pro přípravu hvězdicového cytostatika na bázi kopolymeru HPMA byl použit semitelechelický kopolymer nesoucí v postranních řetězcích Dox, připravený podle příkladu 3 B. Reakce polymeru s protilátkou byla prováděna podle postupu uvedeného pro syntézu hvězdicového konjugátu vycházejícího ze semitelechelického ONp esteru [3], Reakce byly prováděny při různém poměru polymeru a protilátky ve výchozí směsi a tím bylo řízeno i složení produktu (obsah protilátek v konečném léčivu a molekulová váha produktu). Ačkoli obě reakce vedou k velmi podobným produktům (obsah Dox v konjugátu 4 až 5 % hmotn., Mw ~ 500 000), reakce vycházející z TT HPMA kopolymeru vedla k vyšším výtěžkům a menšímu obsahu nezreagovaného (hydrolyzovaného) polymeru v reakční směsi na konci reakce. To umožňuje přesněji nastavit stupeň substituce protilátky polymerem jednoduše změnou poměru navážek obou komponent vstupujících do reakce. Rovněž čištění produktu od nezreagovaného polymeruje pak jednodušší.
Příklad 8
Příprava klasického konjugátu kopolymeru HPMA s hovězí pankreatickou RNázou (RNázou A)
Klasický konjugát byl připraven reakcí polymeru připraveného podle příkladu 2 (P-Gly-DLPheLeuGly-TT) s RNázou A za stejných podmínek, jak je uvedeno v [3]. Obsah RNázy A v polymerním konjugátu byl stanoven pomocí aminokyselinové analýzy (LDC-Analytical, kolona s reverzní fází Nucleosil 120-3 C18 Macherey Nagel, OPA derivatizace [3], čistota byla ověřena SDS-PAGE elektroforézou (gradientový gel 10-15 Phastsystem (Pharmacia LKB) a konjugát charakterizován pomocí GPC (Superose 4B/6B; 0,05 M Tris pufr pH 8,0). Vlastnosti konjugátu byly porovnány s vlastnostmi konjugátu připraveného z klasického ONp reaktivního polymeru. Bylo zjištěno, že fyzikálně-chemické vlastnosti obou konjugátů (obsahy proteinu v konjugátu molekulové hmotnosti) i biologická aktivita při léčbě lidského melanomu v nu-nu myších (Obr. 3) je podobná. Syntéza využívající reaktivního polymeru podle vynálezu probíhala rychleji, pro dosažení stejného produktu stačilo použít polymer s menším obsahem reaktivních skupin (2 % mol) a ve výsledném konjugátu nebyl přítomen nemodifikovaný protein ani nezreagovaný polymer (výtěžek reakce reaktivních skupin byl větší).
Příklad 9
Příprava hvězdicového konjugátu kopolymeru HPMA s RNázou A
Hvězdicový konjugát poly(HPMA) s RNázou A byl připraven ze semitelechelického polymeru připraveného podle příkladu 3 stejným postupem jako při syntéze vycházející z poly(HPMA) s koncovou sukcinimidovou reaktivní skupinou [3]. Hvězdicový konjugát byl čištěn od nízkomolekulárních látek pomocí preparativní gelové chromatografíe (Sephacryl S300, kolona 26x600mm, průtok 12,5 ml/h, destilovaná voda). Po zahuštění na ultrafíltrační membráně (PM 30) byl produkt lyofilizován. Při porovnání syntézy konjugátu pomocí polymerního OSu a TT esteru, syntéza pomocí TT esteru vedla k většímu výtěžku reakce a mnohem menšímu podílu nezreagovaného (hydrolyzovaného) polymeru v reakční směsi. Výsledný konjugát byl účinný v in vivo podmínkách stejně jako konjugát připravený z reaktivního OSu esteru (Obr. 3).
-9CZ 294996 B6
Příklad 10
In vitro aktivita (cytotoxicita) polymerních doxorubicinových kancerostatik
In vitro testy cytotoxicity byly prováděny standardní metodou [4] na ConA stimulovaných a nestimulovaných myších T-splenocytech a na nádorové linii myšího T-buněčného lymfomu EL-
4. Cytotoxicita byla sledována pomocí změny zabudování [3H]-thymidinu do buněk inkubovaných v médiu obsahujícím testovaný vzorek o různých koncentracích. Cytotoxicita byla vyjádřena faktorem IC5o (koncentrace látky, při které dochází k 50 % poklesu proliferace testovaných buněk). Ukázka výsledků testů je uvedena v tabulce 1. Výsledky ukázaly, že vlastnosti konjugátů připravených jednodušší a levnější metodou dle vynálezu jsou ve shodě s vlastnostmi konjugátů připravených náročnější klasickou metodou.
Tabulka 1
Porovnání cytotoxicity polymerních Dox kancerostatik připravených z thiazolidin-2-thionových (TT) a klasických 4-nitrofenylových (ONp) polymerů.
Konjugát Splenocyty (ConA) IC50 [pg/ml] EL-4 IC50 [pg/ml]
Dox 0,07 0,03
P-Gly-DL-PheLeuGly-Dox (TT) >8,00 >8,00
P-Gly-DL-PheLeuGly-Dox (ONp) 21,5 19,1
P-Gly-DL-PheLeuGly-Dox(hlgG) (TT) >8,00 >8,00
P-Gly-DL-PheLeuGly-Dox(hlgG) (ONp) ~ 8,00 11,8
P-Gly-L-PheLeuGly-Dox(hlgG) (TT) >8,00 >8,00
Příklad 11
Porovnání in vivo aktivity polymerních Dox cytostatik připravených z TT a ONp polymerů
In vivo testy byly prováděny na myších kmene C57BL/10 s inokulovanými buňkami myšího Tbuněčného lymfomu EL4. Nádorové buňky (105) byly podány subkutánně (s.c.) do pravé dolní poloviny dorzální strany myší v den 0. Léčivo (polymemí cytostatikum s GlyPheLeuGly sekvencí) bylo podáno v terapeutickém režimu (podání léčiva v dávce 5 mg/kg ve dnech 10, 12, 14, 16 a 18 po inokulaci). Byl sledován růst nádoru a přežívání testovaných zvířat. Příklad výsledků je uveden na Obr. 4. Bylo prokázáno, že v in vivo podmínkách je účinnost obou polymerních cytostatik, klasického připraveného z ONp polymeru a léčiva připraveného novou metodou přes TT polymery, shodná. Léčba polymerními cytostatiky byla podstatně účinnější, nežli klasická léčba komerčním doxorubicinem.
Příklad 12
Povrchová modifikace polyelektrolytového komplexu DNA plazmidu (polyplexu) hydrofilním polymerem.
Polyelektrolytový komplex polykationtu polylysinu s DNA (nebo specifickým plazmidem) pLL/DNA připravený podle [25] byl povrchově modifikován reaktivním polymerem o struktuře II i o struktuře III. Polymerní komplex pLL/DNA připravený při poměru nábojů +/- 2:1 (mol. váha použitého pLL byla 20 000) v HEPES (pH 7,5) o koncentraci 20 pg/ml DNA (5 ml)
- 10CZ 294996 B6 byl smíchán s 200 pg polymeru o struktuře II nebo III a reakční směs byla míchána 15 min při pokojové teplotě. K reakční směsi komplexu s polymerem II bylo přidáno, obdobně jako v práci [25], 300 pg pEG-NH2 modifikovaného biologicky aktivního oligopeptidu (SIKVAVS) a reakční směs byla v obou případech ponechána reagovat přes noc při pokojové teplotě. Nezreagovaný polymer a případný derivát oligopeptidu byly odstraněny z roztoku na zahušťovači. Vivaspin 20 (100 000 Da cut-of) a povrchově upravený nasměrovaný i oligopeptidem směrovaný komplex byl použit pro testy jeho stability a biologické aktivity. Bylo ukázáno, že polymerem upravený polymer je podstatně stabilnější jak v roztocích solí, tak i v přítomnosti krevních bílkovin (albumin). Schopnost transfekce DNA in vitro byla zachována.
Literatura [1] , J.Kopeček, P. Rejmanová, J. Strohalm, R. Duncan, J. B. Lloyd, K. Ulbrich, B. Říhová,
V. Chytrý, Synthetic polymeric drugs, Czech Patent No. 278551 (Czech PV 0097/85), Austrálie 589587, Canada 130053, Denmark 164485, Europe 0187547, US 5 037 883, Japan 000137/86(1985) [2] , F. Angelucci, M. Grandi, A. Suarato, Biologically active compounds, US 5 571 785 (1996) [3] , K. Ulbrich, V. Šubr, J. Strohalm, D. Plocová, M. Jelínková, B. Říhová, Polymeric drugs based on conjugates of synthetic and natural macromolecules I. Synthesis and physicochemical characterisation, J. Controlled Release 64 (2000) 63-79.
[4] . B. Říhová, M. Jelínková, J. Strohalm, V. Šubr, D. Plocová, O. Hovorka, M. Novák,
D. Plundrová, Y. Germano, K. Ulbrich, Polymeric drugs based on conjugates of synthetic and natural macromolecules II. Anticancer activity of antibody or (Fab')2-targeted conjugates and combined theraphy with immunomodulators, J. Controlled Release 64 (2000) 241-261.
[5] . J. Kopeček, P. Kopečková, T. Minko, Z. R. Lu, HPMA copolymer-anticancer drug conjugates: design, activity, and mechanism of action, European Joumal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 50 (2000) 61-81.
[6] . K. Ulbrich, J. Strohalm, V. Šubr, D. Plocová, R. Duncan, B. Říhová, Polymeric Conjugates of Drugs and Antibodies for Site-Specifíc Drug Delivery, Macromol. Symp. 103 (1996) 177-192.
[7] , P. A. Vasey, R. Duncan, S. B. Kaye, J. Cassidy, Clinical phase I trial of PK1 (HPMA) copolymer doxorubicin), Eur. J. Cancer 31 (1995) S193.
[8] . P. A. Vasey, S. B. Kaye, R. Morrison, C. Twelves, P. Wilson, R. Duncan, A. H. Thomson,
L. S. Murray, Τ. E. Hilditch, T. Murray, S. Burtles, D. Fraier, E. Frigerio, J. Cassidy, Phase I clinical and pharmacokinetic study of PK1 [N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide copolymer doxorubicin]: First member of a new class of chemotherapeutic agents - Drugpolymer conjugates, Clinical Cancer Research 5 (1999) 83-94.
[9] . P. J. Julyan, L. W. Seymour, D. R. Ferry, S. Daryani, C. M. Boivin, J. Doran, M. David,
D. Anderson, C. Christodoulou, A. M. Young, Preliminary clinical study of the distribution of HPMA copolymers bearing doxorubicin and galactosamine, J. Controlled Release 57 (1999)281-290.
[10] . A. H. Thomson, P. A. Vasey, L. S. Murray, J. Cassidy, D. Fraier, E. Frigerio, C. Twelves, Population pharmacokinetics in phase I drug development: a phase I study of PK1 in patients with solid tumours, Br. J. Cancer 81 (1999) 99-108.
[11] L. W. Seymour, D. R. Ferry, D. Anderson, S. Hesslewood, P. J. Julyan, R. Poyner, J. Doran, A. M. Young, S. Burtles, D. J. Kerr, Hepatic drug targeting: Phase I evaluation of polymerbound doxorubicin. J. Clin. Oncol. 20 (2002) 1668-1676.
[12] N. V. R. Panday, M. J. M. Terwogt, W. W. Huinink et al., Phase I clinical and pharmacokinetic study of PNU 166945, a novel water-soluble prodrug of paclitaxel Proč. Am. Soc. Clin. Oncol. 17 (1998) 742.
- 11 CZ 294996 B6 [13] M. J. M. Terwogt, W. W. Huinink, J. Η. M. Schellens, M. Schot, I. A. M. Mandjes, M. G. Zurlo, M. Rocchetti, H. Rosing, F. J. Koopman, J. H. Beijnen: Phase I clinical and pharmacokinetic study of PNU 166945, a novel water-soluble polymer-conjugated prodrug of paclitaxel. Anti-Cancer Drugs 12 (2001) 315-323.
[14] M. Bouma, B. Nuijen, D. R. Stewart, J. R. Rice, B. A. J. Jansen, J. Reedijk, A. Bult, J. H. Beijnen, Stability and compatiblity of the investigational polymer-conjugated platinum anticancer agent AP 5280 in infusion systems and its hemolytic potential Anti-Cancer Drugs 13 (2002)915-924.
[15] Μ. M. Tibben, J. M. Rademaker-Lakhai, J. R. Rice, D. R. Steward, J. Η. M. Schellens, J. H. Beijnen, Determination of total platinum in plasma and plasma ultrafiltrate, from subjects dosed with the platinum-containing N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide copolymer AP5280, by use of graphite-furnace Zeeman atomic-absorption spectrometry, Anal. Bioanal. Chem. 373 (2002) 233-236.
[16] . B. Říhová, J. Strohalm, K. Kubáčková, M. Jelínková, L. Rozprimová, M. Šírová, D. Plocová, T. Mrkvan, M. Kovář, J. Pokorná, T. Etrych, K. Ulbrich, Drug-HPMA-Hulg conjugates effective against human solid cancer, Adv. Exp. Med. Biol. 519 (2003) 125-143.
[17] , K. Ulbrich, J. Strohalm, D. Plocová, D. Oupický, V. Šubr, J. Souček, P. Poučková, J. Matoušek, Poly[N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide] conjugates of bovine seminal ribonuclease. Synthesis, physicochemical and biological properties, J. Bioactive Compat. Polym. 15(2000)4-26.
[18] , J. Souček, P. Poučková, M. Zadinová, D. Hloušková. D. Plocová, J. Strohalm, Z. Hrkal, T. Oleár, K. Ulbrich, Polymer conjugated bovine seminal ribonuclease inhibits growth of solid tumors and development of metastases in mice, Neoplasma 48 (2001) 127-132.
[19] . J. Souček, P. Poučková, J. Strohalm, D. Plocová, D. Hloušková, M. Zadinová, K. Ulbrich, Poly[ZV-(2-hydroxypropyl)methacrylamide] conjugates of bovine pancreatic ribonuclease (RNase A) inhibit growth of human melanoma in nudě mice, J. Drug Targeting 10 (2002) 175-183.
[20] . B. Říhová, A. Jegorov, J. Strohalm, V. Maťha, P. Rossmann, L. Formůsek, K. Ulbrich, Antibody-Targeted Cyclosporin A. J. Controlled Release 19 (1992) 25-39.
[21] . K. Ulbrich, V. Šubr, J. Lidický, L. Sedlák, J. Píchá, Polymemí konjugáty lecirelinu s protrahovaným účinkem a jejich použití, CZ Pat. 288 568 (2001) [22] . K. D. Fisher, Y. Stallwood, N. K. Green, K. Ulbrich, V. Mautner, L. W. Seymour, Polymercoated adenovirus permits efficient retargeting and evades neutralising antibodies, Gene Ther. 8 (2001) 341-348.
[23] , J. Drobník, J. Kopeček, J. Labský, P. Rejmanová, J. Exner, V. Saudek, J. Kálal, Enzymatic cleavage of side chains of synthetic water-soluble polymers, Makromol. Chem. 177 (1976) 2833-2848.
[24] , T. Etrych, J. Strohalm, K. Ulbrich, M. Jelínková, B. Říhová, Targeting of Polymer-drug Conjugates with Antibodies. Effect of the Method of Conjugation, 5th International Symposium on Polymer Therapeutics, Cardiff, Great Britain, 2002, Abstracts, p. 65.
[25] . CH. M. Ward, M. Pechar, D. Oupický, K. Ulbrich, L. W. Seymour, Modification of pLL/DNA Complexes with a Multivalent Hydrophilic Polymer Permits Folate-mediated Targeting in vitro and Prolonged Plasma Circulation in vivo. J. Gene Medicine 4 (2002) 536-547

Claims (15)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Reaktivní polymery a kopolymery na bázi /V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu obsahující reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny.
  2. 2. Reaktivní polymery a kopolymery podle nároku 1, které obsahují reaktivní thiazolidin-2thionové skupiny na postranních řetězcích polymeru či kopolymerů.
  3. 3. Reaktivní polymery a kopolymery podle nároku 1, které obsahují reaktivní thiazolidin-2thionové skupiny na konci polymemího řetězce.
  4. 4. Reaktivní kopolymery podle nároku 2, které sestávají z 30 až 3000 monomemích jednotek spojených do polymerního řetězce, z nichž 60 až 99,8 % je jednotek Y-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu a 0,2 až 40 % je reaktivních monomemích jednotek na bázi A-methakryloylovaných aminokyselin nebo oligopeptidů obsahující reaktivní thiazolidin-2-thionové skupiny obecného vzorce Ma-X-TT, kde Maje methakryloyl, TTje thiazolidin-2-thionová skupina a X je aminokyselina nebo oligopeptid, přičemž aminokyselina je vybraná ze skupiny zahrnující kyselinu ε-aminokapronovou, kyselinu 4-aminobenzoovou a β-alanin a oligopeptid je vybraný ze skupiny zahrnující GlyGly, GlyPhe, GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, Gly-DLPheLeuGly, GlyLeuPheGly.
  5. 5. Reaktivní polymery podle nároku 3, které sestávají z 20 až 150 monomemích jednotek spojených do polymerního řetězce, složeného ze 100% jednotek V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, a nesoucího na konci řetězce sulfanylpropionylthiazolidin-2-thionovou skupinu.
  6. 6. Reaktivní polymery podle nároku 5, které sestávají z 20 až 150 monomemích jednotek spojených do polymerního řetězce, složeného z 95 % až 99,90 % jednotek 7V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu a 0,1 až 5 % jV-methakryloylovaných oligopeptidů doxorubicinu, přičemž oligopeptidy jsou vybrané ze skupiny zahrnující GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-DL-PheLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, GlyLeuPheGly a GlyLeuLeuGly, a nesoucího na konci řetězce sulfanylpropionyl-thiazolidin-2-thionovou skupinu.
  7. 7. Reaktivní polymery podle nároku 3, které sestávají z 20 až 2000 monomemích jednotek spojených do polymemího řetězce, složeného ze 100% jednotek .<V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, a nesoucího na konci řetězce kyanovaleroyl-thiazolidin-2-thionovou skupinu.
  8. 8. Reaktivní polymery podle nároku 7, které sestávají z 20 až 2000 monomemích jednotek spojených do polymerního řetězce, složeného z 95 až 99,9 % jednotek 7V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu a 0,1 až 5% jednotek TV-methakryloylovaných oligopeptidů doxorubicinu, přičemž oligopeptidy jsou vybrané ze skupiny zahrnující GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-DLPheLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, GlyLeuPheGly a GlyLeuLeuGly, a nesoucího na konci řetězce kyanovaleroyl-thiazolidin-2-thionovou skupinu.
  9. 9. Reaktivní monomerní jednotky na bázi V-methakryloylovaných aminokyselin nebo oligopeptidů pro přípravu polymerů podle nároku 4, které sestávají z A-methakryloylovaných aminokyselin nebo oligopeptidů obecného vzorce Ma-X-TT, kde Ma je methakryloyl, X je aminokyselina nebo oligopeptid, přičemž aminokyselina je vybraná ze skupiny zahrnující kyselinu εaminokapronovou, kyselinu 4-amino-benzoovou a β-alanin a oligopeptid je vybraný ze skupiny zahrnující GlyGly, GlyPhe, GlyPheGly, GlyLeuGly, Gly-L-PheLeuGly, Gly-DL-PheLeuGly, GlyLeuPheGly a kde TT je reaktivní thiazolidin-2-thionová skupina.
    - 13 CZ 294996 B6
  10. 10. Způsob přípravy reaktivních polymerů a kopolymerů podle nároku 1, vyznačený t í m , že se monomery vybrané ze skupiny, sestávající z A-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu a TV-methakryloylované aminokyseliny nebo oligopeptidu obsahující reaktivní thiazolidin-2thionové skupiny podrobí radikálové kopolymeraci v roztoku.
  11. 11. Způsob přípravy reaktivních polymerů a kopolymerů podle nároku 1, vyznačený t í m , že se monomer A-(2-hydroxypropyl)methakrylamid podrobí radikálové srážecí polymeraci za přítomnosti 3-sulfanylpropionové kyseliny jako přenašeče či azo-bis-kyanovalerové kyseliny jako iniciátoru a získaný polymer se nechá zreagovat s 2-thiazolin-2-thiolem.
  12. 12. Způsob přípravy reaktivních kopolymerů podle nároků 6 nebo 8, vyznačený tím, že se monomer 7V-(2-hydroxypropyl)methakrylamid podrobí radikálové roztokové kopolymeraci s TV-methakryloylovaným oligopeptidem doxorubicinu za přítomnosti 3-sulfanylpropionové kyseliny jako přenašeče či azo-bis-kyanovalerové kyseliny jako iniciátoru a získaný polymer se nechá zreagovat s 2-thiazolin-2-thiolem.
  13. 13. Použití reaktivních polymerů podle nároku 1, pro přípravu polymemích konjugátů obsahujících léčivo jako doxorubicin, daunomycin.
  14. 14. Použití reaktivních kopolymerů podle nároku 1, pro přípravu konjugátů obsahujících protein jako IgG, hlgG, monoklonální protilátku.
  15. 15. Použití reaktivních polymerů podle nároku 1, pro přípravu hydrofílním polymerem modifikovaných polymerních komplexů DNA, plazmidů nebo adenovirů jako systémů pro dopravu genů.
CZ20031950A 2003-07-16 2003-07-16 Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů CZ294996B6 (cs)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ20031950A CZ294996B6 (cs) 2003-07-16 2003-07-16 Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů
CA002533199A CA2533199A1 (en) 2003-07-16 2004-07-15 Reactive polymers and copolymers, method of their preparation and their use
US10/564,614 US20060275250A1 (en) 2003-07-16 2004-07-15 Reactive polymers and copolymers, method of their preparation and their use
PCT/IB2004/052127 WO2005007798A2 (en) 2003-07-16 2004-07-15 Hydroxypropyl methacrylamide polymers and copolymers comprising reactive thiazoline-2-thione
EA200600259A EA200600259A1 (ru) 2003-07-16 2004-07-15 Реакционноспособные полимеры и сополимеры на основе n-(2-гидроксипропил)метакриламида, способ их получения и их применение для синтеза полимерных лекарственных средств, для модификации биологически активных белков и получения систем доставки генов

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ20031950A CZ294996B6 (cs) 2003-07-16 2003-07-16 Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20031950A3 CZ20031950A3 (cs) 2005-02-16
CZ294996B6 true CZ294996B6 (cs) 2005-04-13

Family

ID=34070025

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20031950A CZ294996B6 (cs) 2003-07-16 2003-07-16 Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20060275250A1 (cs)
CA (1) CA2533199A1 (cs)
CZ (1) CZ294996B6 (cs)
EA (1) EA200600259A1 (cs)
WO (1) WO2005007798A2 (cs)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ2005558A3 (cs) * 2005-09-05 2007-04-04 Zentiva, A. S. Zpusob prípravy polymerních konjugátu doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva
CZ298945B6 (cs) * 2006-09-18 2008-03-19 Zentiva, A. S. Polymerní lécivo a zpusob jeho výroby
US8017141B2 (en) * 2006-12-15 2011-09-13 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Coatings of acrylamide-based copolymers
EA201100915A1 (ru) * 2008-12-11 2012-01-30 Сайоксус Терапьютикс Лимитед Модификация нуклеиновокислотных векторов с помощью полимеров, включающих заряженные четвертичные аминогруппы
EP2210616A1 (en) * 2009-01-21 2010-07-28 Centre National de la Recherche Scientifique Multifunctional stealth nanoparticles for biomedical use
GB0907989D0 (en) * 2009-05-08 2009-06-24 Hybrid Systems Ltd Multivalent adjuvant display
TWI592426B (zh) 2013-08-13 2017-07-21 賽諾菲公司 胞漿素原活化素抑制劑－１（ｐａｉ－１）之抗體及其用途
CZ308742B6 (cs) 2015-01-14 2021-04-21 Ústav Organické Chemie A Biochemie Av Čr, V.V.I. Makromolekulární konjugáty pro izolaci, imobilizaci a vizualizaci proteinů
CZ308807B6 (cs) 2015-01-14 2021-06-02 Ústav Organické Chemie A Biochemie Av Čr, V.V.I. Makromolekulární konjugáty pro vizualizaci a separaci proteinů a buněk
EP3525808A4 (en) 2016-10-14 2020-06-24 University of Utah Research Foundation ANTIBODY-POLYMER-DRUG CONJUGATES
CZ2022167A3 (cs) * 2022-04-22 2023-11-01 Ústav makromolekulární chemie AV ČR, v. v. i. Polymerní konjugát pro blokování nespecifických interakcí v imunochemických stanoveních, způsob jeho výroby a jeho použití

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9623051D0 (en) * 1996-11-06 1997-01-08 Schacht Etienne H Delivery of DNA to target cells in biological systems
WO1999030727A1 (en) * 1997-12-17 1999-06-24 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
EP1379257B1 (en) * 2001-03-23 2009-08-12 Enzon, Inc. Prodrugs of anticancer agents employing substituted aromatic acids
CZ293787B6 (cs) * 2001-12-20 2004-07-14 Zentiva, A.S. pH senzitivní polymerní konjugáty antracyklinového kancerostatika pro cílenou terapii
US7122189B2 (en) * 2002-08-13 2006-10-17 Enzon, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers

Also Published As

Publication number Publication date
CZ20031950A3 (cs) 2005-02-16
WO2005007798A3 (en) 2006-04-06
WO2005007798A2 (en) 2005-01-27
CA2533199A1 (en) 2005-01-27
US20060275250A1 (en) 2006-12-07
EA200600259A1 (ru) 2006-08-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2620517B2 (ja) 重合性薬剤
US9289510B2 (en) Polymeric drug delivery conjugates and methods of making and using thereof
US20130281646A1 (en) Multifunctional linkers
JP2002543111A (ja) ポリマーを使用する葉酸で仲介された腫瘍細胞へのターゲッティングの増幅
CZ2006592A3 (cs) Polymerní lécivo a zpusob jeho výroby
Etrych et al. Star-shaped immunoglobulin-containing HPMA-based conjugates with doxorubicin for cancer therapy
EP3180023B1 (en) Biodegradable trehalose glycopolymers
CZ294996B6 (cs) Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů
CN107397959B (zh) 一种表面具有超微结构的纳米拮抗剂的制备方法和应用
JP4718117B2 (ja) ターゲット療法用アントラサイクリン系制癌薬のｐＨ感受性重合体コンジュゲート
KR100508369B1 (ko) 펩타이드 스페이서를 갖는 생체적합성 고분자
JP5781084B2 (ja) 樹状高分子量ポリマー薬物担体および特に固形腫瘍の処置のための薬物とのそれらの結合体
CN109762099A (zh) 一种聚合物-抗肿瘤药物偶联物及其制备方法和用途
JP5105166B2 (ja) ポリエーテルの製造方法
AU2017381408A1 (en) Biocompatible and hydrophilic polymer conjugate for targeted delivery of an agent
JP5189243B2 (ja) 薬物複合体および薬物送達用担体
Sintov et al. Polymeric drug delivery of enzymatically degradable pendant agents: Peptidyl-linked procainamide model system studies
Ulbrich et al. Hydrophilic polymers for drug delivery
WO2023227724A1 (en) Star-shaped graft copolymers
CZ293886B6 (cs) pH senzitivní polymerní konjugáty antracyklinového kancerostatika pro cílenou terapii
AU2004201277A1 (en) Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20190716