CZ293694B6 - Farmaceutický prostředek obsahující deriváty 4-merkaptopyrrolidinu jako inhibitory farnesyl-transferázy - Google Patents

Abstract

Farmaceutický prostředek obsahující inhibitor farnesylování Ras obecného vzorce I, kde R.sup.1.n. je například H, R.sup.2.n. je například H, R.sup.3.n. je například H, p je 0 až 3, kde významy R.sup.3.n. mohou být stejné nebo různé, L je vazebná část, například skupina -CONH.sub.2.n.-, A je vybrán ze souboru, který zahrnuje fenylovou skupinu, naftylovou skupinu, pěti až deseti-členný monocyklický nebo bicyklický heteroarylový kruh obsahující do pěti heteroatomů, kde heteroatomy jsou nezávisle vybrány ze souboru, který zahrnuje O, N a S nebo -S-S- dimer, když R.sup.2.n. znamená H, nebo jeho enantiomer, diastereoizomer, farmaceuticky použitelná sůl, prekurzor léčiv nebo solvát, s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem. Zejména se používá při léčení rakoviny.ŕ

Description

Farmaceutický prostředek obsahující deriváty 4-merkaptopyrrolidinu jako inhibitory farnesyl-transferázy

Oblast techniky

Vynález se týká sloučenin, které inhibují famelysování mutantních Ras genových produktů přes inhibici enzymu famesyl-protein transferáza (TPTáza). Vynález se také týká způsobů přípravy těchto sloučenin, farmaceutických prostředků a způsobů léčení nemocí, zejména rakoviny, která je zprostředkována farnesylováním Ras.

Dosavadní stav techniky

Předpokládá se, že rakovina zahrnuje alteraci v expresi nebo funkci genů, řídicích růst buněk a jejich diferenciaci. Aniž bychom se vázali na teoretické úvahy, následující text podává vědecký názor n Ras v rakovině. Geny Ras jsou často mutovány v nádorech. Geny Ras kódují proteiny vázající guanosin trifosfát (GTP), o kterých se předpokládá, že jsou zahrnuty v převodech signálů, proliferaci a maligní transformaci. Geny Η-, K- a N-Ras byly identifikovány jako mutantní formy Ras (Barbacid M., Ann. Rev. Biochem. 1987, 56, 779 až 827). Pro biologickou účinnost je vyžadována post-translační modifikaci proteinu Ras. Famesylová Ras katalyzované FPTázou se pokládá za základní stupeň při zpracování Ras. Dochází k němu přeměnou famesylové skupiny famesylového pyrofosfátu (FPP) na cystein v C-terminálním tetrapeptidu Ras ve struktuře nazývané CAAX box. Po dalších post-translačních modifikacích, zahrnující proteolytické štěpení v cysteinovém zbytku CAAX boxu a methylaci cysteinového karbonylu, je Ras schopen vázat se k buněčné membráně k převodu růstových signálů do nitra buňky. V normálních buňkách aktivovaný Ras působí v konjukci s růstovými faktory ke stimulaci růstu buněk. V rakovinových buňkách se má za to, že mutace v Ras způsobí stimulaci dělení buněk dokonce i v nepřítomnosti růstových faktorů (Travis J. Science 1993, 260, 1877 až 1878); možná v permanentně aktivované formě GTP spíše než v inaktivní formě (uzavřený cyklus GDP). Inhibice famesylace mutantních Ras genových produktů zastaví nebo sníží aktivaci.

Jedna třída známých inhibitorů farnesyl-transferázy je založena na analozích famesylpyrofosfátu, viz například Evropskou patentovou přihlášku 534546 od fy Měrek. Inhibitory farnesyl-transferázy, založené na napodobení CAAC boxu byly popsány. Reiss (1990) v Cell 62, 81 až 88 objevil tetrapeptidy, jako je CVIM (Cis-Val-Ile-Met). James (1993) v Science 1937 až 1942 objevil peptidomimetické sloučeniny založené na benzadiazepinu. Po prioritním datu předkládané přihlášky Lener (1995) v J. Biol. Chem. 270, 26802 a Eisai v Mezinárodní patentové přihlášce WO 95/25086 objevili další peptidomimetické sloučeniny založené na Cys jako prvním zbytku. Také po prvním prioritním datu předkládané přihlášky Bristol-Myers Squibb v Evropské patentové přihlášce 696593 objevil poprvé inhibitory farnesyl-transferázy mající 4-sulfanylpyrrolidinový zbytek v první poloze.

Podstata vynálezu

Podle jednoho aspektu se předkládaný vynález týká farmaceutické kompozice obsahující inhibitor famesylace Ras obecného vzorce 1

kde

R¹ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; -CO-alkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku; -CO-O-alkenylová skupina obsahující v alkenylové části 2 až 4 atomy uhlíku; -CO-O-(CH₂)_nfenylová skupina popřípadě substituovaná na fenylové skupině nitroskupinou a n=0-4; a skupina - alkylen-CONH₂ obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku;

R² je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; a -Coalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku;

R³ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; hydroxylová skupina; nitroskupina;

skupina alkylen-R⁷ obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku, kde R⁷ je fenylová skupina; skupina R⁷; skupina ~(CH₂)_nCOOR⁸, kde n = 0 až 3 a R⁸ je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 4 atomy uhlíku; skupina - COŇR⁹R¹⁰, kde R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, -O-alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, -O-alkeny20 lová skupina obsahující 2 až 4 atomy uhlíku, nebo skupina alkylen-Ph obsahující v alkylenové části 1 až 3 atomy uhlíku popřípadě substituovaná atomem halogenu; skupina CON(R¹¹)OR¹*, kde R¹' a R¹² jsou nezávisle na sobě alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a alkenylová skupina obsahující 2 až 4 atomy uhlíku;

skupina vzorce II,

-CONH-CHR^I4-COOR'⁷, kde R¹⁷ je atom vodíku, nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, R¹⁴ je vybrána ze 30 skupiny, kterou tvoří postranní řetězec lipofílní aminokyseliny a karbamoylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, skupina vzorce II má L nebo D konfiguraci na chirálním uhlíku alfa odpovídající volné aminokyseliny; a skupina vzorce -X-R¹⁵, kde X je O nebo skupina CH₂, a R¹⁵ je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo fenylová skupina;

p je 0 až 3, kde významy R³ mohou být stejné nebo různé;

L je můstek vybraný z následujících skupin psaných ve vzorci I zleva doprava:

-CO-NR¹⁶-, kde R¹⁶ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, skupina alkylen-Z obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, skupina -CO-alkylen-Z obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku, -CO-alkylo45 vá skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, a Z je vybrána ze skupiny, kterou tvoří O-alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, methoxyfenylová skupina, pyridylová skupina a methoxypyridylová skupina; skupina -CH2-NH-; skupina -CH2-N(CH2)-; skupina -CH2NR^2I-T- kde R²¹ má jakýkoli význam definovaný pro R¹⁶, T je skupina - (CH2)_n-, kde n je

-2CZ 293694 B6 až 4 a T je popřípadě monosubstituovaná fenylovou skupinou; skupina -CH2NH-SO2-; a skupina -CH₂-NH-CO-;

A je vybrána ze skupiny, kterou tvoří fenylová skupina; naftylová skupina; pyridinylová skupina nebo thienylová skupina;

nebo její -S-S- dimer, když R²=H; nebo její N-oxid;

nebo její enantiomer, diastereoizomer, farmaceuticky přijatelnou sůl, in vivo hydrolyzovatelný ester nebo solvát společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Výhodně se předkládaný vynález týká výše popsané farmaceutické kompozice, ve které kompozice R³ a p jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří:

i) R³ je vybrán ze skupiny sloučenin obecného vzorce II; skupiny -alkyl-R⁷ obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku; a skupina R⁷; a p = 1 až 3 pod podmínkou, že jeden význam R³ je skupina vzorce II;

ii) p = 0 s podmínkou, že A je naftylová skupina a L je skupina -CH₂NR^2I-T;

iii) p = 1 s podmínkou, že R³ = skupin vzorce II a A je naftylová skupina.

Výhodná farmaceutická kompozice je ve formě tablet.

Podle dalšího aspektu se předpokládaný vynález týká sloučeniny obecného vzorce I pro použití jako léčivo.

Podle dalšího aspektu se předkládaný vynález týká sloučeniny obecného vzorce I pro použití při přípravě léčiva pro léčení onemocnění zprostředkovaných famesylací Ras.

Předmětem podle předkládaného vynálezu je mnoho sloučenin, zejména se pak jedná o sloučeniny z kterékoli z následujících tříd i), ii) nebo iii):

třída i)

kde

X¹ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; hydroxyalkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyalkylová skupina obsahující v alkoxylové části 1 až 6 atomů uhlíku a v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; alkylkarbonylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; hydroxyalkylkarbonylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; alkoxyalkylkarbonylová skupina obsahující v alkoxylové části 1 až 6 atomů uhlíku a v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku;

- J CZ 293694 B6

A je vybrána ze skupiny, kterou tvoří fenylová skupina, naftylová skupina nebo pětičlenný až desetičlenný heterocyklický kruh obsahující až 5 heteroatomů vybraných z O, N a S;

X² je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; fenylová skupina; fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; a pětičlenný až šestičlenný heteroarylový kruh obsahující až 3 heteroatomy vybrané zO, N a S popřípadě vázaný k A alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; a X² je popřípadě mono nebo di-substituovaná na kterémkoli kruhu substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, atom halogenu, skupina OH, alkoxyskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkanoylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkanoyloxyskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupina, alkylaminoskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, di(alkyl)aminoskupina obsahující v každé alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, alkanoylaminoskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupina, kyanoskupina, karboxylové skupina, karbamoylová skupina, alkoxykarbonylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, thiolová skupina, alkylsulfanylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfinylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfonylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a sulfonamidoskupina;

X³ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomy uhlíku;

X⁴ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří alkylsulfanylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; alkylsulfinylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; alkylsulfonylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; karbamoylová skupina; N-(alkyl)karbamoyiová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; N-(dialkyl)karbamoylová skupina obsahující v každé alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; a jejich hydroxy nebo alkyletherová skupina

obsahující 1 až 4 atomy uhlíku;
třída i i)
	H-S^	f ---CH2---N---(^Η2)1>2 — —N \	e
kde:		H		(IV)

X⁵ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří skupina -CO-alkyl-Ph obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku; -CO-alkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; -COalkyl-heteroarylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, kde heteroarylová skupina je pětičlenné až desetičlenná heteroarylová skupina obsahující až 5 heteroatomů vybraných z O, N a S a Ph nebo heteroarylová skupina jsou popřípadě substituovány tak, jak je definováno pro arylovou skupinu v X² výše; alkyloxyalkylová skupina obsahující v každé alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku;

A je naftylová skupina nebo desetičlenný heterocyklický kruh obsahující až 5 heteroatomů vybraných z O, N a S;

R³ a p jsou stejné, jako bylo definováno v nároku 1;

-4CZ 293694 B6 třída i i i)

(V) kde:

X⁶ má jakýkoli význam uvedený pro X⁵ v ii) výše;

X⁷ je fenyl popřípadě substituované tak, jak je definováno pro arylový kruh v X² výše;

A je fenyl nebo naftylová skupina nebo pětičlenný až desetičlenný heterocyklický kruh obsahující až 5 heteroatomů vybraných z O, N a S;

R³ a p jsou definovány podle nároku 1;

nebo jeho N-oxid, farmaceuticky přijatelná sůl, in vivo hydrolyzovatelný ester nebo solvát.

Mezi výhodné pro sloučeniny třídy i) patří sloučeniny, kde

X¹ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku nebo alkoxyalkylová skupina obsahující v alkoxylové části i v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku;

X² je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; fenylová skupina nebo fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku;

X⁴ je alkylsulfanylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

A je vybrána ze skupiny, kterou tvoří fenylová skupina nebo naftylová skupina.

Mezi výhodné významy pro sloučeniny třídy ii) patří sloučeniny, kde p je 0.

Mezi výhodné významy pro sloučeniny třídy iii) patří sloučeniny, kde

X⁷ je fenyl;

A je fenyl;

P jeO.

Podle dalšího aspektu se předkládaný vynález týká kterýchkoli z následujících sloučenin nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí:

methylester (2S)-2-{2-benzyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]benzoylamino}-4-methylsulfanylbutanové kyseliny;

(2S)-2-{2-benzyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]benzoylamino}-4methylsulfanylbutanová kyselina;

-5CZ 293694 B6 methylester (2S)-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-suIfanylpyrrolidin-2-yImethyl)-amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny;

(2S)-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanyIpyrroIidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)4-methylsulfanylbutanová kyselina;

methylester (2S)-2-({3-[([2S,4S]-4—sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]naftalen-lkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny;

(2S)-2-({3-[([2S,4S]-4-sulfanyIpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]naftalen-l-karbonyl}amino)-4methylsulfanylbutanové kyseliny;

methylester (2S)-2-({-3-fenyl-5-[([2S,4S]-4—sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny;

(2S)-2-({-3-fenyl-5-[([2S,4S]—4—sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)4-methylsulfany!butanová kysel ina;

(25.45) -2-[{N-(4-methoxybenzyl)-N-(naftalen-l-ylmethyl)amino}methyl]pyrrolidin-4-thiol;

N-(naftaIen-l-yImethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)pentanamid;

N-(naftalen-l-ylmethyl)-N-([2S,4S]—4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-2-(pyridin-3yl)acetamid;

N-((2S,4S)-4-sulfanyl-pyrrolidin-2-ylmethyl)-3-methyl-N-(2-naftalen-l-ylethyl)butyramid;

N-([2S,4S]—4—sulfanyIpyrrolidin-2-ylmethyl)-N-(2-naftalen-l-ylethyl)-2-pyridin-3ylacetamid;

(25.45) -2-{[(3-Methoxypropyl)-(2-naftalen-l-ylethyl)amino]methyl}pyrrolidin-4-thiol;

N-J[2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-2-(4-methoxyfenyl)-N-(2-naftalen-2-ylethyl)acetamid;

(25.45) -2-{ [(2-(4-Methoxyfenyl)ethyl)-(2-naftalen-l -ylethyl)amino]methyl} pyrrolidin-4thiol;

N-(2,2-Difenylethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3-methylbutyramid;

N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3,3-dimethyl-N-(2-naftalen-2-ylethyl)butyramid;

N-(2,2-Difenylethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyI)-3,3-dimethylbutyramid;

(2S)-2-{3-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-(3-methoxypropyl)amino]benzoylamino}-4-methylsuIfanylbutanová kyselina;

N-([2S,4S]-4-suIfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3,3-dimethyl-N-(2-naftalen-l-yl-ethyl)butyramid;

(2S)-4-karbamoyl-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)butanová kyselina; a

-6CZ 293694 B6 methylester (2S)-4-karbamoyl-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino] fenylkarbonyl} amino)butanové kysel iny.

Podle dalšího výhodného aspektu se předkládaný vynález týká farmaceutického prostředku, který obsahuje sloučeninu definovanou výše společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Podle dalšího výhodného aspektu se předkládaný vynález týká kterékoli sloučeniny definované výše pro použití jako léčivo.

Podle dalšího výhodného aspektu se předkládaný vynález týká kterékoli sloučeniny definované výše pro použití při přípravě léčiva pro léčení onemocnění zprostředkovaného famesylací Ras.

Podle dalšího aspektu se předkládaný vynález týká způsobu přípravy sloučenin třídy i), ii) nebo iii) definovaných výše, kdy se odstraní chránící skupiny ze sloučeniny vzorce VI

kde X⁸ představuje pravou stranu sloučeniny ze třídy i), ii) nebo iii) definované podle nároku 6, Pr¹ je atom vodíku nebo skupina chránící aminoskupinu, Pr² je atom vodíku nebo skupina chránící thioskupinu a jakékoli funkční skupiny v X⁸ jsou popřípadě chráněné pod podmínkou, že je přítomna nejméně jedna chránící skupina, a popřípadě, pokud je to vhodné, takto získaný produkt se převede na jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.

V provedení podle vynálezu:

Příklady hodnoty pro R¹ zahrnují methylovou skupinu; skupinu -CH₂-fenyl substituovanou na fenylu nitroskupinou, zejména 4-nitroskupinou; acetylovou skupinu, BOC; allyloxykarbonylovou skupinu; skupinu -CO-O-CH>-fenyl, substituovanou na fenylu, nitroskupinu, zejména 4-nitroskupinou; skupinou -CH₂CONH₂.

Příklady hodnot pro R² zahrnují -COMe a -COOterc.butyl.

Příklady hodnot pro R³ zahrnují Cl; -COOH; -CONH₂; -SOMe a -SO₂Me.

Jestliže R³ znamená skupinu -(CH₂)_n-COOR⁸, pak vhodná hodnota pro n je 0.

Příklady liofilních aminokyselin, které se podílejí svým postranním řetězcem (označené R¹⁴ v definici hodnot pro R³) zahrnují methionin, fenylglycin, fenylalanin, serin, leucin, izoleucin nebo valin. Ve odpovídajících volných aminokyselinách je výhodná L konfigurace. Příklady postranních řetězců aminokyselin jsou uvedeny dále. Výhodná hodnota pro R¹⁴ je -CH2-CH2-SCH3. Další výhodné hodnoty pro R¹⁴ jsou -CH2OMe a-CH₂-CH₂-OMe.

Jestliže R¹⁷ je H, vznikne v obecném vzorci II skupina COOH a jestliže R¹⁴ je skupina -CH₂CHt-OH, potom může vzniknout Iakton, kde R¹⁷ a R¹⁴ společně tvoří část dihydrofuran-2onového heterocyklického kruhu. Stejný Iakton může vzniknout pro sloučeniny obecného vzorce III, kde X⁴ znamená OH a X³ je H.

Aminokyselina	Postranní řetězec
methionin fenylglycin fenylalanin serin	-ch2-ch2-s-ch3 fenyl -CHr-fenyl -CH2Oh nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku (výhodně methylová skupina), její ether
leucin homoserin	-CH2-CHMe2 -CH2-CH2-OH nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku (výhodně methylová skupina), její ether.

Výhodná hodnota pro p je 2.

Když L znamená skupinu -CH₂NR^2I-T-, vhodná hodnota pro n je 1. Když L znamená skupinu CH2-NR²⁴-CO-T, vhodná hodnota pro n je 1. Když L znamená skupinu -CH2-NR²⁵-T-, vhodná hodnota pro n je 1. Když L znamená skupinu -CHr-S-Τ-, vhodná hodnota pro n je 1. Když L znamená skupinu -CHr-O-T, vhodná hodnota pro n je 1. L je skupina -CONH-, -CH₂-NH-CH₂NHSO₂- -CH₂NHCO-.

Příklady hodnot pro A, když A je heteroarylová skupina zahrnují thienylovou skupinu, pyridylovou skupinu, chinolylovou skupinu a chinoxalinylovou skupinu.

Další výhodné hodnoty jsou uvedeny dále.

Pro R¹: 4-nitrobenzyloxykarbonylová skupina; allyloxykarbonylová skupina; karbamoylmethylová skupina; acetylové skupina; fenoxykarbonylová skupina; H.

Pro R²: acetylsulfanylová skupina; H.

Pro R³: methoxykarbonylová skupina; N-methyl-N-methoxykarbamoylová skupina; nitroskupina; allyloxykarbonylová skupina; N-methyl-allyloxykarbamoylová skupina; ethoxykarbonylová skupina; 3,4-dichlorbenzylkarbamoylová skupina; hydroxyskupina; karboxylová skupina; methylester-2-ylkarbamoylová skupina odvozená od kyseliny (2S)-4-methylsulfanylbutanové; 2-yI-karbamoylová skupina odvozená od kyseliny (2S),4-methylsulfanylbutanové, fenoxylové skupina.

Pro p: 1,2, zejména 2; a další výhodná hodnota je 0.

Pro L: -C(O)-NH-, -CH₂-C(O)-NH-; -CH₂-NH-C(O)-; -CH₂-NH-SO₂-; zejména -C(O)NH-.

Pro A: fenylová skupina; pyridylová skupina; thienylová skupina, naftylová skupina.

Pro R¹⁶ a R^18-26: H, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, zejména X.

V dalším provedení podle vynálezu jsou výhodné hodnoty uvedené dále.

Ve sloučeninách obecného vzorce III: X¹ je H nebo methoxyalkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu (zejména H); X² je H, fenylová skupina nebo benzylová skupina (zejména benzylová skupina); X³ je H nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku (zejména H); X⁴ je alkylsulfanylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku (zejména methylsulfanylová skupina); a A je fenylová skupina. Jestliže A znamená šesti-členný arylový nebo heteroarylový kruh, potom skupiny -NX¹- a substituent zahrnující X⁴ jsou výhodně navzájem v meta poloze; a jestliže je přítomen X², je výhodně umístěn v para poloze k -NX¹-. Chirální atom uhlíku, ke kterému je

-8CZ 293694 B6 připojena skupina -COOX³ je výhodně v S konfiguraci. Chirální atomy uhlíku ve 2 a 4 poloze pyrrolidinového kruhu jsou výhodně v S konfiguraci.

Ve sloučeninách obecného vzorce IV: X⁵ je -CO-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu (výhodně skupina -CO-CH₂-CHMe₂) nebo -CH₂-fenyl-O-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu (zejména -CH₂-fenyI-OMe); heteroarylová skupina je výhodně pyridylová skupina a výhodný arylový nebo heteroarylový substituent je -O-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku (zejména methoxylová skupina); a A je nafitylová skupina. Chirální atomy uhlíku v 2 poloze a 4 poloze pyrrolidinového kruhu jsou výhodně v S konfiguraci. Bod připojení A k -(CH₂)i ₂-je výhodně v 1 poloze naftalenu a ekvivalentní poloha pro heterocyklické hodnoty pro A (bez ohledu na konvenční číslování pro heterocykly). Výhodná hodnoto pro -(CH?)i je 4CH₂)₂-.

Ve sloučeninách obecného vzorce V: X⁶ je -CO-alkylová skupina s 1 až 5 atomy uhlíku v alkylu (výhodněji -CO-CH2-CHMe2 nebo -CO-CH2-terc.butylová skupina, zejména skupina -COCH2-CHMe2) nebo -CH2-fenyl-O-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu (zejména CH2-fenyl-OMe); heteroarylová skupina je výhodně pyridylová skupina a výhodný arylový substituent je -O-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku (zejména methoxylová skupina); a A znamená fenylovou skupinu nebo naftylovou skupinu (zejména fenylovou skupinu). Chirální atomy uhlíku ve 2 a 4 poloze pyrrolidinového kruhu je výhodně v S konfiguraci. Výhodná hodnota pro -(CH2)i,2 je -(CH2)iVhodné páry hodnot pro R³, když p = 2 jsou: -COOMe, -CON(Me)OMe; NO2, -CON(Me)OMe); -COOMe, allyloxykarbonylová skupina; -CON(Me)OMe, allyloxykarbonylová skupina; allyloxykarbonylová skupina, -CON(Me)OCH₂CH=CH; OH, COOH; -COOMe, COOMe; fenyl, methylester -CO-N-methioninu; benzyl, -CO-N-methionin; benzyl, izopropylester-CO-N-methionin; fenyl, methylester-CONa-glutamin; fenyl, -CONa-glutamin.

Vhodné hodnoty pro L = CHNR²¹T zahrnují

CH₂N(COCH₂CHMe₂)CH₂CH₂; CH₂N(CH₂CH₂CH₂OMe)CH₂CH₂; CH₂N(CH₂p-fenylOMe)CH₂CH₂; CH₂N(COCH₂CHMe₂)CH₂;

CH₂N(COCH₂CH₂CH₂Me)CH₂; CH₂N(COCH₂CHMeCH₂Me)CH₂; CH₂N(COCH₂CH₂OMe)CH₂; CH₂N(COCH₂pyridin-3-yl)CH₂;

CH₂N(4-methoxybenzyl)CH₂; CH₂N(COCH₂CHMe)CH₂CH₂CH(fenyl); CH₂N(COCH₃)CH₂CH₂CH(fenyl); CH₂N(COCH,CHMe₂)CH₂;

CH₂N(COCH₃)CH₂; CH₂N(COCH₂CHMe₂)CH₂CH(fenyl); CH?N(COCH₂CMe₃)CH₂CH(fenyl);

CH₂N(COCH₂pyridin-3-yl)CH₂CH(fenyl); CH₂N(CO-l-hydroxy-6-methoxypyridin-3-yl)CH₂CH(fenyl); CH₂N(COCH₂CHMe)₂CH₂CH₂; CH₂N(COCH₂CMe₃)CH₂CH₂; CH₂N(COCH₂pyridin-3-yl)CH₂CH₂;

CH₂N(CO-4-methoxybenzyl)CH₂CH₂.

Vhodné hodnoty pro L = -CH₂NR^l - zahrnují CH₂NH; CH₂NMe; CH₂N(COCH₂CHMe₂) a CH₂N(COCH₂CH₂OMe).

Ve stavu techniky jsou dobře známé různé formy prekurzorů léčiv. Příklady takových derivátů prekurzorů léčiv jsou uvedeny v:

a) Design of Prodrugs, vydal H. Bundgaard. (Elsevier. 1985) a Methods in Enzymology, díl 42, str. 309 až 396, vydal K. Widder a kol., (Academie Press, 1985);

b) A Textbook of Drug Design and Development, vydal Krogsgaard-Larsen a H. Bundgaard, kapitola 5 „Design and Application of Prodrugs“, H. Bundgaard str. 113 až 191 (1991);

-9CZ 293694 B6

c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 1-38 (1992);

d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviwes, 8, 1 až 38 (1992); a

e) N. Kakeya a kol., Chem. Pharm Bull, 32, 692 (1984).

Příklady prekurzorů léčiv zahrnují in vivo hydrolyzovatelné estery sloučeniny obecného vzorce I obsahující karboxylovou skupinu, například farmaceuticky přijatelný estere, který je hydrolyzován v lidském nebo zvířecím těle za vzniku výchozí kyseliny. Vhodné farmaceuticky přijatelné estery zahrnují alkoxymethylestery s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylu, například methoxymethyl, alkanoyloxymethylestery s 1 až 6 atomy uhlíku v alkanoylu, například pivaloyloxymethyl, ftalidylestery, cykloalkoxykarbonyloxyalkylestery se 3 až 8 atomy uhlíku vcykloalkylu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylu, například l-cyklohexylkarbonyloxyethyl; 1,3— dioxolen-2-onylmethylestery, například 5-methyl-l,3-dioxolen-2-onylmethyl; a alkoxykarbonyloxyethylestery s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylu, například 1-methoxykarbonyloxyethyl a mohou vznikat na kterékoliv karboxyskupině v sloučeninách podle vynálezu.

Zvláštní substituce na A ve významu šestičlenného kruhu jsou v meta nebo para poloze.

Některé sloučeniny v rozsahu vynálezu obecného vzorce I jsou známé jako meziprodukty v syntéze karbapenemového postranního řetězce, ale má se za to, že nebylo dosud popsáno ve formách vhodných jako farmaceutické prostředky, ani nebyla popsána žádná jejich farmaceutická účinnost. Odkazuje se na následující publikace, uvádějící podrobnosti přípravy těchto sloučenin: Matsumura, Heterocycles (1995), 41, 147 až 159; Evropská patentová přihláška EP 590 885 (Zeneca; Betts a kol.); Evropská patentová přihláška EP 592 167 (Zeneca; Siřet]; Evropská patentová přihláška EP 562 855 (Zeneca; Jung a kol.); Mezinárodní patentová přihláška WO 92/17480 (Imperiál Chemical Industries; Betts a kol.); Evropská patentová přihláška EP 508 682 (Imperiál Chemical Industries; Betts a kol.); Evropská patentová přihláška EP 280 771 (Fujisawa Pharmaceutical, Murata a kol.); a Mezinárodní patentová přihláška WO 92/17479 (Imperiál Chemical Industries; Betts a kol).

V popise předkládané přihlášky zahrnuje obecný výraz „alkyl“ alkylové skupiny jak s přímým, tak s rozvětveným řetězcem. Avšak odkazy na individuální alkylové skupiny, jako „propyl“, jsou specifické pouze pro verzi s přímým řetězcem a odkazy na individuální alkylové skupiny s rozvětveným řetězcem jako je „izopropyl“ jsou specifické pouze pro verzi s rozvětveným řetězcem. Analogická konvence platí pro další obecné výrazy.

Je třeba vzít v úvahu, že pokud určité sloučeniny definované shora mohou existovat v opticky aktivních a racemických formách přítomností jednoho nebo více asymetrických atomů uhlíku, předkládaný vynález zahrnuje ve své definici jakoukoliv opticky aktivní nebo racemickou formu, která vykazuje vlastnost inhibování FTPázy. Syntézy opticky aktivních forem se může provést standardními technikami dobře známými v oboru, například syntézou z opticky aktivních výchozích materiálů nebo štěpením racemické formy. Podobně, inhibiční vlastnosti proti FTPáze mohou být vyhodnoceny standardními laboratorními technikami uvedenými shora.

Výraz „halogen“ zahrnuje fluor, chlor, brom a jod. Výraz „karbamoyl“ zahrnuje skupinu -C(O)NH₂. Výraz „BOC“ zahrnuje skupinu terc.butyl-O-C(O)-. Výraz „allyl“ zahrnuje skupinu CH₂=CH-CH₂. Bicyklické arylové a bicyklické heteroarylové kruhy zahrnují kruhové systémy, kde jsou oba kruhy bicyklického systému aromatické.

Příklady alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku zahrnují methylovou skupinu, ethylovou skupinu, propylovou skupinu, sek.butylovou skupinu, terc.butylovou skupinu a pentylovou skupinu; příklady alkylové skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku zahrnují methylovou skupinu, ethylovou skupinu, propylovou skupinu, sek. butylovou skupinu a terc.butylovou skupinu; příklady

-10CZ 293694 B6 alkylové skupiny s 1 až 3 atomy uhlíku zahrnují methylovou skupinu, ethylovou skupinu, propylovou skupinu a izopropylovou skupinu; příklady alkylenfenylové skupiny s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylenu zahrnují benzylovou skupinu, fenylethylovou skupinu, fenylpropylovou skupinu; příklady alkoxylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku (také nazývaná -O-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku) zahrnují methoxylovou skupinu, ethoxylovou skupinu a propoxylovou skupinu; příklady alkanoylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku zahrnují formylovou skupinu, acetylovou skupinu a propionylovou skupinu; příklady alkanoyloxylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku zahrnují acetyloxylovou skupinu a propionyloxylovou skupinu; příklady alkylaminové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku zahrnují methylaminovou skupinu, ethylaminovou skupinu, propylaminovou skupinu, izopropylaminovou skupinu, sek.butylaminovou skupinu a terc.butylaminovou skupinu; příklady dialkylaminové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku zahrnují dimethylaminovou skupinu, diethylaminovou skupinu a N-ethyl-N-methylaminovou skupinu; příklady alkanoylaminové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku zahrnují acetamidovou skupinu a propionylaminovou skupinu; příklady alkoxykarbonylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylu zahrnují methoxykarbonylovou skupinu, ethoxykarbonylovou skupinu a propoxykarbonylovou skupinu; příklad yalkylsulfanylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu zahrnují methylsulfanylovou skupinu, ethylsulfanylovou skupinu, propylsulfanylovou skupinu, izopropylsulfanylovou skupinu, sek. butylsulfanylovou skupinu a terc.butylsulfanylovou skupinu; příklady alkylsulfinylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku zahrnují methylsulfinylovou skupinu, ethylsulfinylovou skupinu, propylsulfinylovou skupinu, izopropylsulfmylovou skupinu, sek.butylsulfinylovou skupinu a terc.butylsulfinylovou skupinu; příklady alkylsulfonylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku zahrnují methylsulfonylovou skupinu, ethylsulfonylovou skupinu, propylsulfonylovou skupinu, izopropylsulfonylovou skupinu, sekbutylsulfonylovou skupinu a terc.butylsulfonylovou skupinu; příklady -CO-alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu zahrnují formylovou skupinu, acetylovou skupinu, propionylovou skupinu, butyrylovou skupinu a valerylovou skupinu; příklady -CO-Oalkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu zahrnují ethyloxykarbonylovou skupinu, propyloxykarbonylovou skupinu a terc.butyloxykarbonylovou skupinu (BOC); příklady -CO-Oalkenylové skupiny se 2 až 4 atomy uhlíku v alkenylu zahrnují allyloxyakrbonylovou skupinu a vinyloxykarbonylovou skupinu; příklady alkylen-CONR⁴R⁵ skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylenu zahrnují karbamoylmethylovou skupinu, karbamoylethylovou skupinu, Nmethylkarbamoylethylovou skupinu, N-methyl-N-ethylkarbamoylethylovou skupinu; příklady alkylen-COOR⁶ skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylenu zahrnují karboxymethylovou skupinu, karboxyethylovou skupinu, karboxypropylovou skupinu, methylester kyseliny propionové, ethylester kyseliny octové; příklady alkenylové skupiny s 2 až 4 atomy uhlíku zahrnují allylovou skupinu a vinylovou skupinu;, příklady -O-alkenylové skupiny se 2 až 4 atomy uhlíku zahrnují allyloxylovou skupinu a vinyloxylovou skupinu; příklady liofílních aminokyselin zahrnují valin, leucin, izoleucin, methionin, fenylalanin, serin, threonin a tyrosin; příklady karbamoylalkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu zahrnují karbamoylmethylovou skupinu, karbamoylethylovou skupinu a karbamoylpropylovou skupinu; příklady N-(monoalkyl)karbamoylalkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylech zahrnují N-methylkarbamoylmethylovou skupinu a Nethylkarbamoylethylovou skupinu; příklad N-(dialkyl)-karbamoylalkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylech zahrnují Ν,Ν-dimethylkarbamoylethylovou skupinu a N-methyl-Nethylkarbamoylethylovou skupinu; příklady alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku monosubstituované na atomu uhlíku skupinou =N-OH zahrnují butyraldehydoximovou skupinu a propionylaldehydoximovou skupinu; příklady hydroxyalkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku zahrnují hydroxymethylovou skupinu, hydroxyethylovou skupinu, hydroxypropylovou skupinu, 2-hydroxypropylovou skupinu, 2-(hydroxymethyl)propylovou skupinu a hydroxypentylovou skupinu; příklady alkoxyalkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylu a 1 až 6 atomy uhlíku v alkylu zahrnují methoxyethylovou skupinu, ethoxyethylovou skupinu a methoxybutylovou skupinu; příklady alkylkarbonylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylu zahrnují methylkarbonylovou skupinu, ethylkarbonylovou skupinu, propylkarbonylovou skupinu, izopropylkarbonylovou skupinu, sek. buylkarbonylovou skupinu, terc.butylkarbonylovou skupinu a pentylkarbonylovou skupinu, příklady hydroxyalkylkarbonylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylu zahrnují hydroxyacetylovou skupinu, hydroxypropionylovou skupinu, hydroxybutyrylovou skupinu, 3-hydroxybutyrylovou skupinu a hydroxypentanoylovou skupinu; příklady alkoxy-11 CZ 293694 B6 alkylkarbonylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylu a 1 až 6 atomy uhlíku v alkylu zahrnují methoxyacetylovou skupinu, methoxypropionylovou skupinu, ethoxybutyrylovou skupinu a butoxyacetylovou skupinu; příklady fenylalkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylu zahrnují benzylovou skupinu, fenylethylovou skupinu a fenylpropylovou skupinu; příklady-CO5 alkylfenylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu zahrnují fenylacetylovou skupinu a fenylpropionylovou skupinu; příklady -CO-alkylheteroarylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu zahrnují 2-(3-pyridyl)acetylovou skupinu a 2-(3-thienyl)acetylovou skupinu; příklady N-alkylkarbamoylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylu zahrnují N-methylkarbamoylovou skupinu a N-ethylkarbamoylovou skupinu; příklady N-dialkylkarbamoylové skupiny s 1 až 6 ío atomy uhlíku v alkylech zahrnují Ν,Ν-dimethylkarbamoylovou skupinu a N-methyl-Nethylkarbamoylovou skupinu.

Příklady pěti až deseti-členných monocyklických nebo bicyklických heteroarylových kruhů obsahujících až 5 atomů vybraných ze skupiny která zahrnuje atomy kyslíku, dusíku a síry 15 zahrnují následující.

Příklady pěti nebo šesti-členných heteroarylových kruhových systémech zahrnují imidazol, triazol, pyrazin, pyrimidin, pyridazin, pyridin, izoxazol, oxazol, izothiazol, thiazol a thiofen. Devíti nebo deseti-členný bicyklický heteroarylový kruhový systém je aromatický bicyklický 20 systém obsahující šesti-členný kruh kondenzovaný buď k pěti-člennému kruhu nebo dalšímu šesti-člennému kruhu. Příklady 5/6 a 6/6 bicyklických kruhových systémů zahrnují benzofuran, benzimidazol, benzthiofen, benzthiazol, benzizothiazol, benzoxazol, benzizoxazol, pyridoimidazol, pyrimidoimidazol, chinolin, izochinolin, chinoxalin, chinazolin, ftalazin, cinnolin a nafthyridin.

Výhodně monocyklické heteroarylové kruhy obsahují do 3 heteroatomů a bicyklické heteroarylové kruhy obsahují do 5 heteroatomů. Výhodné heteroatomy jsou N a S, zejména N. Obecně, připojení heterocyklických kruhů k ostatním skupinám je přes atomy uhlíku. Vhodné heterocykly obsahují pouze N jako heteroatom jsou pyrrol, pyridin, indol, chinolin, izochinolin, imidazol, 30 pyrazin, pyrimidin, purin a pteridin.

Výhodně je kterýkoliv atom uhlíku ve 2 a 4 poloze pyrrolidinového kruhu ve vzorcích I a III až V v S konfiguraci.

Sloučeniny obecného vzorce I a III až V mohou tvořit soli, které rovněž spadají do rozsahu vynálezu. Farmaceuticky přijatelné soli jsou výhodné, ačkoliv například pro izolační a čisticí účely mohou být užitečné i jiné soli.

Jestliže sloučenina obsahuje bazickou část, pak může tvořit farmaceuticky přijatelné soli 40 s různými anorganickými nebo organickými kyselinami, například kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou bromovodíkovou, kyselinou sírovou, kyselinou fosforečnou, kyselinou trifluoroctovou, kyselinou citrónovou nebo kyselinou maleinovou. Vhodná farmaceuticky přijatelná sůl podle vynálezu je, pokud sloučenina obsahuje kyselou část, sůl alkalického kovu, například sodná nebo draselná sůl, sůl kovu alkalických zemin, například vápenatá nebo hořečnatá sůl, amonná sůl 45 nebo sůl s organickou bází, která poskytuje farmaceuticky přijatelný kationt, například sůl s methylaminem, dimethylaminem, trimethylaminem, piperidinem, morfolinem nebo tris—(2— hydroxyethyl)aminem.

Solváty, například hydráty, spadají rovněž do rozsahu vynálezu a mohou být připraveny obecně 50 známými způsoby.

Podle dalšího aspektu se předkládaný vynález týká sloučeniny obecného vzorce I pro použití jako léčiva.

- 12CZ 293694 B6

Podle dalšího aspektu se předkládaný vynález týká použití sloučeniny obecného vzorce 1 k přípravě léčiva pro léčení nemocí způsobených Ras, zejména rakoviny.

Podle dalšího aspektu se předkládaný vynález týká způsobu léčení nemocí způsobených Ras zejména rakoviny tak, že se podá savci v případě potřeby takové léčby účinné množství sloučeniny obecného vzorce I.

Podle dalšího aspektu se předkládaný vynález týká sloučeniny obecného vzorce 1 nebo její farmaceuticky přijatelné soli pro použití k léčbě lidského nebo zvířecího těla terapií.

Vynález také zahrnuje způsob léčení nemoci nebo stavu způsobeného zcela nebo částečně famesylovaným Ras, který zahrnuje podání savci, který takové léčení vyžaduje, účinného množství aktivní složky, jak je definováno shora. Vynález se také týká použití aktivní složky k přípravě nového léčiva pro použití u nemoci nebo stavu způsobených famelysovaným Ras.

Specifické rakoviny zahrnují:

- karcinom, včetně karcinomu měchýře, prsu, ledvin, jater, plic, vaječníku, žaludku, hrdla, štítné žlázy a kůže,

- hemotopoidní nádory limfoidního rodu, včetně akutní lymfocytní leukemie, lymfomu buněk b a Burkettova lymfomu,

- hematopoidní nádory myeloidního rodu, včetně akutní a chronické myelogenní leukemie a promyelocytni leukemie,

- nádory mesenchymálního původu, včetně fibrosarkomu a rhabdomyosarkomu,

- ostatní nádory, včetně melanomu, seminomu, tetratocarcinomu, neuroblastomu a gliomu.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou zejména užitečné při léčbě nádorů, které mají vysoký výskyt mutace Ras, jako jsou nádory tlustého střeva, plic a slinivky břišní. Podáním prostředku obsahující jednu (nebo kombinaci) sloučenin podle vynálezu se rozvoj nádorů u savčího hostitele sníží.

Sloučeniny obecného vzorce l mohou být také užitečné při léčbě jiných nemocí než je rakovina, které mohou být spojeny se signálními transdukčními cestami působícími přes Ras, například neurofi bromatózy.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být také použity k léčení nemocí spojených s CAAXobsahující proteiny jiné než Ras (například nukleární laminy a tranducin), které jsou také posttranslačně modifikovány enzymem famesylprotein-transferázou.

Prostředky podle vynálezu mohou být ve formě vhodné pro orální užití (například jako tablety, pastilky, tvrdé a měkké kapsle, vodné nebo olejové suspenze, emulse, dispergovatelné prášky nebo granule, sirupy, elixíry), pro místní užití (například krémy, masti, gely nebo vodné nebo olejové roztoky nebo suspenze), pro podání inhalací (například jemné prášky nebo kapalné aerosoly), pro podání insuflací (například jemné prášky) nebo pro parenterální podání (například sterilní vodné nebo olejové roztoky pro intravenózní, subkutánní nebo intramuskulámí dávkování nebo jako čípky pro rektální dávkování).

Prostředky podle vynálezu se mohou získat konvenčními postupy za použití konvenčních farmaceutických pomocných látek dobře známých ve stavu techniky. Tak prostředek určený pro orální podání může obsahovat například jedno nebo více barviv, sladidel, ochucovacích činidel a/nebo konzervačních činidel.

Vhodné farmaceuticky přijatelné pomocné látky pro formulaci tablet zahrnují například inertní ředidla, jako je laktóza, uhličitan sodný, fosforečnan draselný nebo uhličitan vápenatý, granulační nebo dezintegrační činidla, jako je kukuřičný škrob nebo kyselina alginová; pojivá, jako je škrob;

- 13CZ 293694 B6 mazadla, jako je stearát hořečnatý, kyselina stearová nebo talek; konzervační činidla, jako je ethyl nebo propyl p-hydroxybenzoát a antioxidační činidla, jako je kyselina askorbová. Tabletové formulace nemusí být povlečeny nebo jsou povlečeny buď aby modifikovaly jejich dezintegraci a následnou absorpci aktivní složky v gastrointestinálním traktu nebo aby zlepšily svojí stálost a/nebo vzhled. Povlečení se provede za použití konvenčních povlékacích činidel a postupů známých ve stavu techniky.

Prostředky pro orální užití mohou být ve formě tvrdých želatinových kapslí ve kterých se aktivní složka smíchá s inertním pevným ředidlem, například uhličitanem vápenatým, fosforečnanem vápenatým nebo kaolinem nebo měkkých želatinových kapslí, ve kterých se aktivní složka smíchá s vodou nebo s olejem, jako je podzemnicový olej, kapalný parafin nebo olivový olej.

Vodné suspenze obvykle obsahují aktivní složku v jemně práškové formě společně s jedním nebo více suspenzačními činidly, jako je karboxymethylcelulóza, methylcelulóza, hydroxypropylethylcelulóza, alginát sodný, polyvinylpyrrolidon, tragakantová guma a akacinová guma; dispergační nebo smáčecí činidla, jako je lecitin nebo kondenzační produkty alkylenoxidu s mastnými kyselinami (například polyoxyethylenstearát) nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s alifatickými alkoholy s dlouhým řetězcem, například heptadekaethylenoxyetanolem nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s parciálními estery odvozenými od mastných kyseliny a hexitolu, jako je polyoxyethylensorbitolmonooleát nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s alifatickými alkoholy s dlouhým řetězcem, například heptadekaethylenoxycetanol nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s parciálními estery odvozenými od mastných kyselin a hexitolu, jako je polyoxyethylensorbitolmonooleát nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s parciálními estery odvozenými od mastných kyselin a anhydridů hexitolu, například polyethylensorbitanmonooleát. Vodné suspenze mohou také obsahovat jedno nebo více konzervačních činidel (jako je ethyl nebo propyl p-hydroxybenzoát, antioxidačních činidel (jako je kyselina askorbová) barviv, ochucovacích činidel a/nebo sladidel (jako je sacharóza, sacharid nebo aspartam.

Olejová suspenze mohou být formulovány suspendováním aktivní složky v rostlinném oleji (jako je arašídový olej, olivový olej, sezamový olej nebo kokosový olej) nebo v minerálním oleji (jako je kapalný parafin). Olejové suspenze mohou také obsahovat zahušťovadla, jako je včelí vosk, tvrdý parafín nebo cetylalkohol. Sladidla, jako je ta, která jsou uvedena shora a ochucovací činidla se přidávají za účelem dosažení chutného orálního prostředku. Tyto prostředky mohou být konzervovány přidáním antioxidačního činidla, jako je kyselina askorbová.

Dispergovatelné prášky a granule vhodné pro přípravu vodných suspenzí přidáním vody obvykle obsahují aktivní složku společně s dispergačním nebo smáčecím činidlem, suspenzačním činidlem nebo jedním nebo více konzervačními činidly. Vhodná dispergační nebo smáčecí činidla a suspenzační činidla jsou uvedena shora. Další pomocné látky, jako sladidla, ochucovadla a barviva mohou být rovněž přítomna.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou být také ve formě emulzí oleje ve vodě. Olejová fáze může být rostlinný olej, jako je olivový olej nebo arašídový olej nebo minerální olej, jako je například kapalný parafín nebo jejich směsi. Vhodná emulgační činidla mohou být například v přírodě se vyskytující pryskyřice, jako je akaciová guma nebo tragakantová guma, v přírodě se vyskytující fosfatidy, jako sojové boby, lecitin, estery nebo parciální estery odvozené do mastných kyselin a anhydridů hexitolu (například sorbitanmonooleát) a kondenzační produkty uvedených parciálních esterů s ethylenoxidem jako je polyoxyethylensorbitanmonoleát. Emulze mohou také obsahovat sladidla, ochucovací činidla a konzervační činidla.

Sirupy a elixíry mohou být formulovány se sladidly, jako je glycerol, propylenglykol, sorbitol, aspartam nebo sacharóza a mohou obsahovat uklidňující léky, konzervační činidla, ochucovací činidla a/nebo barviva.

- 14CZ 293694 B6

Farmaceutické prostředky také mohou být ve formě sterilních injektovatelných vodných nebo olejových suspenzí, které mohou být formulovány podle známých způsobů za použití jednoho nebo více dispergačních nebo smáčecích činidel nebo suspenzačních činidel, která byla uvedena shora. Sterilní injektovatelný preparát může být také sterilní injektovatelný roztok nebo suspenze v netoxickém, parenterálně přijatelném ředidle nebo rozpouštědle například roztok v 1,3— butandiolu.

Čípkové formulace se mohou připravit smícháním aktivní složky s vhodnou nedráždivou pomocnou látkou, která je pevná při normální teplotě, ale je kapalná při rektální teplotě a bude proto roztavena v rektu a uvolní léčivo. Vhodné pomocné látky zahrnují například kakaové máslo a polyethylenglykoly.

Formulace pro místní podání, jako jsou krémy, masti, gely a vodné nebo olejové roztoky nebo suspenze se mohou obvykle získat formulací aktivní složky s konvenčním, místně akceptovatelným vehikulem nebo ředidlem, za použití konvenčních postupů, dobře známých ve stavu techniky.

Prostředky pro podání insuflací mohou být ve formě jemného prášku obsahující částice o průměru například 30 μ nebo mnohé méně. Prášek samotný zahrnuje buď samotnou aktivní složku nebo zředěnou s jedním nebo více fyziologicky přijatelnými nosiči, jako je laktóza. Prášek pro insuflaci je potom obvykle obsažen v kapsli obsahující například 1 až 50 mg aktivní složky pro použití v turboinhalačním zařízení, jako se používá pro insuflaci známého činidla, kromoglykátu sodného.

Prostředky pro orální inhalaci mohou být ve formě konvenčního stlačeného aerosolu upraveného tak, aby dávkoval aktivní složku buď ve formě aerosolu obsahující jemně rozdělenou pevnou látku nebo kapalné kapky. Mohou být použita konvenční aerosolová hnací činidla, jako jsou těkavé fluorované uhlovodíky nebo uhlovodíky a aerosolové zařízení je uspořádáno tak, aby dávkovalo odměřené množství aktivní složky.

Další informace o formulacích jsou uvedeny v kapitole 25.2, díl 5, Comprehensive Medicinal Chemistry (Crowin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.

Množství aktivní složky, která je kombinována s jednou nebo více pomocnými látkami k získání jednotlivé dávky bude závislé na hostiteli který má být léčen a na přesné cestě podání. Například formulace určená k orálnímu podání lidem bude obvykle obsahovat například 0,5 mg až 2 g aktivní složky smísené s vhodným a konvenčním množstvím pomocných látek, které mohou tvořit 5 až 98 % hmotnostních prostředku. Dávkové jednotkové formy obvykle obsahují 1 mg až 500 mg aktivní složky. Další informace o cestách podání a dávkových režimech jsou uvedeny v kapitole 25.3, díl 5, Coprehensive Medicinal Chemistry (Crowin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.

Velikost dávky pro terapeutické a profýlaktické účely sloučeniny obecného vzorce I bude závislá na povaze a vážnosti stavů, věku a pohlaví zvířete nebo pacienta a cestě podáním. Jak se uvádí shora, sloučeniny obecného vzorce I jsou užitečné při léčení nemocí nebo medicinálních stavů, které jsou způsobené zcela nebo částečně famesylací Ras.

Sloučenina obecného vzorce I se při použití pro profýlakticné nebo terapeutické účely podává tak, aby celková dávka činila 0,5 až 75 mg na kg hmotnosti těla, v případě potřeby rozdělena na několik dávek. Při parenterální cestě se obvykle podávají nižší dávky. Tak například pro intravenózní podáni činí dávka například 0,5 až 30 mg na kg hmotnosti těla. Podobně při podání inhalační dávka 0,5 až 25 mg na kg hmotnosti těla. Nicméně, orální podání je výhodné.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být použity v kombinaci se známými protirakovinovými a cytotoxickými činidly. Jestliže jsou formulovány jako pevná dávka, pak tyto kombinační

- 15CZ 293694 B6 produkty obsahují sloučeniny podle vynálezu v dávkových poměrech zde popsaných a ostatní farmaceuticky aktivní složky ve vhodném dávkovém rozsahu. Postupné použití se použije, pokud je kombinační formulace nevhodná.

Ačkoliv jsou sloučeniny obecného vzorce i zejména cenné jako terapeutická činidla, pro použití u teplokrevných živočichů (včetně lidí), jsou také užitečné jestliže je požadováno inhibovat aktivaci Ras famesylováním. Tak jsou užitečné jako farmakologické standarty pro použití při vývoji nových biologických testů a při zkoumání nových farmakologických činidel.

Podle dalšího aspektu se předkládaný vynález týká individuálních sloučenin připravených jako konečné produkty v příkladech uvedených dále a jejich solí.

Sloučeniny podle vynálezu a jejich soli se mohou připravit postupy, které jsou známé při přípravě takových sloučenin nebo sloučenin podobného typu. Tyto postupy jsou ilustrovány v následujících reprezentativních schématech, ve kterých skupiny, pokud není uvedeno jinak, mají významy definované pro vzorec I. Funkční supiny mohou být chráněny a může z nich být chránící skupina odstraněna za použití konvenčních způsobů. Příklady chránících skupin aminové skupiny a skupiny kyseliny karboxylové (a jakož i způsoby jejich tvoření a případně odstranění) viz T.W. Greene a P.G.M. Wuts, „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vydání. John Wiley & Sons, New York, 1991. Použité zkratky jsou uvedeny před příklady dále.

Chrániči skupiny mohou být odstraněny konvenčními postupy, které jsou popsané v literatuře nebo jsou známé zkušenému chemikovi jako vhodné postupy pro odstranění dané chránící skupiny, přičemž se volí takový způsob, kterým se dosáhne účinného odstranění uvedené chránící skupiny při minimálním riziku ohrožení ostatních skupin v molekule.

V další části popisu jsou uvedeny specifické příklady chránících skupin, ve kterých specifikace „nižší“ znamená, že taková specifikovaná skupina výhodně obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku. Je samozřejmé, že uvedený výčet chránících skupin není vyčerpávající. Stejně tak není vyčerpávající ani níže uvedený seznam způsobů použitelných pro odstranění chránících skupin. Je tedy samozřejmé, že do rozsahu vynálezu patří i použití ochranných skupin a způsoby jejich odstranění, které zde nejsou specificky zmíněny.

Chrániči skupinou karboxylové funkce může být zbytek esterotvomého alifatického nebo aralifatického alkoholu nebo esterotvomého silanolu (uvedený alkohol nebo silanol výhodně obsahuje 1 až 20 atomů uhlíku).

Příklady chránících skupin karboxylové funkce zahrnují přímé nebo rozvětvené alkylové skupiny obsahující 1 až 10 atomů uhlíku (například izopropylovou skupinu a terc.butylovou skupinu), nižší alkoxy nižší alkylové skupiny (například methoxymethylovou skupinu, ethoxymethylovou skupinu, izobutoxymethylovou skupinu), nižší alifatické acyloxy nižší alkylové skupiny (například acetoxymethylovou skupinu, propionyloxymethylovou skupinu, butyryloxyethylovou skupinu, pivaloyloxymethylovou skupinu), nižší alkoxykarbonyloxy nižší alkylové skupiny (například 1-methoxykerbonyloxyethylovou skupinu, 1-ethoxykarbonyloxyethylovou skupinu), aryl nižší alkylové skupiny (například p-methoxybenzylovou skupinu, o-nitrobenzylovou skupinu, p-nitrobenzylovou skupinu, benzyhydrylovou skupinu a ftalidylovou skupinu), tri(nižší alkyl)silylové skupiny (například trimethylsilylovou skupinu a terc.butyldimethylsilylovou skupinu), tri(nižší alkyl)silyl nižší alkylové skupiny (například trimethylsilylethylovou skupinu) a alkenylové skupiny se 2 až 6 atomy uhlíku (například allylovou a vinylethylovou skupinu).

Obzvláště vhodné postupy pro odstranění chránících skupin karboxylové funkce zahrnují například hydrolýzy katalyzované kyselinou, kovem nebo enzymaticky.

Příklady chránících skupin hydroxylové funkce zahrnují nižší alkenylové skupiny (například allylové skupiny), nižší alkanoylové skupiny (například acetylovou skupinu), nižší alkoxy

-16CZ 293694 B6 karbonylové skupiny (například terc.butoxykarbonylovou skupinu), nižší alkenyloxykarbonylové skupiny (například allyloxykarbonylovou skupinu), aryl nižší alkoxykarbonylové skupiny (například benzyloxykarbonylovou skupinu, p-methoxybenzyloxykarbonylovou skupinu, onitrobenzyloxykarbonylovou skupinu, p-nitrobenzyloxykarbonylovou skupinu), tri nižší alkyl/arylsilylové skupiny (například trimethylsilylovou skupinu, terc.butylimethyisilylovou skupinu, terc.butyldifenylsilylovou skupinu), aryl nižší alkylové skupiny (například benzylovou skupinu) a triaryl nižší alkylové skupiny (například trifenylmethylovou skupinu).

Příklady chránících skupin aminové funkce zahrnují formylovou skupinu, aralkylové skupiny (například benzylovou skupinu a substituovanou benzylovou skupinu, například p-methoxybenzylovou skupinu, nitrobenzylovou skupinu a 2,4-dimethoxybenzylovou skupinu a trifenylmethylovou skupinu), di-p-anisylmethylovou skupinu a furylmethylovou skupinu, nižší alkoxykarbonylové skupiny (například terc.butoxykarbonylovou skupinu), nižší alkenyloxyarbonylové skupiny (například allyloxykarbonylovou skupinu), aryl nižší alkoxykarbonylové skupiny (například benzyloxykarbonylovou skupinu, p-methoxybenzyloxykarbonylovou skupinu, onitrobenzyloxykarbonylovou skupinu, p-nitrobenzyloykarbonylovou skupinu, trilkylilylové skupiny (například trimethylsilylovou skupinu a terc.butyldimethylsilylovou skupinu), alkylidenové skupiny (například methylidenovou skupinu, benzylidenovou skupinu a substituované benzyl idenové skupiny.

Vhodné postupy pro odstranění chránících skupin hydroxylové a aminové funkce zahrnují například hydrolýzy katalyzované kyselinou, bází, kovem nebo enzymaticky, nebo fotolyticky pro odstranění o-nitrobenzyloxykarbonylové skupiny nebo fluoridové ionty pro odstranění silylových skupin.

Příklady chránících skupin pro amidové skupiny zahrnují aralkoxymethylové skupiny (například benzyloxymethylovou skupinu a substituovanou benzyloxymethylovou skupinu, alkoxyethylové skupiny (například methoxymethylovou skupinu a trimethylsilylethoxymethylovou skupinu), trialkyl/arylsilylové skupiny (například trimethylsilylovou skupinu, terc.butyldimethylsilylovou skupinu, terc.butyldifenylsilylovou skupinu), tri alkyl/atylsilyloxymethylové skupiny (například terc.butyldimethylsilyloxymethylovou skupinu, terc.butyldifenylsilyloxymethylovou skupinu), 4alkoxyfenylové skupin (například 4-methoxyfenylovou skupinu), 2,4-di(alkoxy)fenylové skupiny (například 2,4-dimeethoxyfenylovou skupinu), 4-alkoxybenzylové skupiny (například 4-methoxybenzylovou skupinu), 2,4-di-(alkoxy)benzylové skupiny (například 2,4-di(methoxy)benzylovou skupinu) a alk-l-enylové skupiny (například allylovou skupinu, but-l-enylovou skupinu a substituovanou vinylovou skupinu, například 2-fenylvinylovou skupinu).

Aralkoxymethylové skupiny mohou být zavedeny na amidovou skupinu reakcí amidové skupiny s vhodným aralkoxymethylchloridem a odstraněny katalytickou hydrogenací. Alkoxymethylové skupiny, tri alkyl/arylsilylové skupiny a tri alkyl/silyloxymethylové skupiny mohou být zavedeny reakcí amidu s vhodným chloridem a odstraněny s kyselinou nebo v případě silyl obsahujících skupin, fluoridovými ionty. Alkoxyfenylové skupiny a alkoxybenzylové skupiny jsou konvenčně zavedeny arylací nebo alkylací vhodných halogenidem a odstraněny oxidací dusičnanem amonium-ceričitým. Konečně alk-l-enylové skupiny mohou být zavedeny reakcí amidu s vhodným aldehydem a odstraněny kyselinou.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde L znamená skupinu -CO-NR¹⁶- se mohou připravit vytvořením amidové vazby mezi sloučeninou 1 a 2, jak je uvedeno ve schématu 23. Sloučeniny obecného vzorce I, kde L znamená skupinu -CO-NR²⁵-T- se mohou připravit analogickým postupem. Vhodné kopulační podmínkyjsou následující.

i) Použití EEDQ při teplotě místnosti v organickém rozpouštědle (například v dichlormethanu, methanolu).

-17CZ 293694 B6 ii) Použití oxalylchloridu v organickém rozpouštědle (například DMF, CH₂C1₂) v přítomnosti organické báze (například NMM, triethylaminu, DMAP), při teplotě 0 °C až do teploty místnosti po dobu 0,5 až 16 hodin.

iii) Použití EDC/HOBT v organickém rozpouštědle (například DMF, CH₂CI₂).

iv) Použití DCCI/HOBT v organickém rozpouštědle (například DMF, CH₂C1₂) v přítomnosti organické báze (například triethylaminu).

v) Použití reakcí směsného anhydridů při standardních podmínkách, například izopropylchlorformiátu v organickém rozpouštědle (například DMF, DMA, dichlormethanu) v přítomnosti organické báze (například NMM, DMAP, triethylaminu).

vi) Přes aktivní ester při standardních podmínkách, například pentafluorfenylester v organickém rozpouštědle (například dichlormethanu) v přítomnosti organické báze (například triethylaminu).

vii) Přes chlorid kyseliny při standardních podmínkách,například použitím thionylchloridu a zahříváním po dobu 150 minut a potom působením bází (například triethylaminu) v přítomnosti organického rozpouštědla (například acetonitrilu).

Sloučeniny obecného vzorce I, kde L znamená skupinu -CH₂NR¹⁸-, -CH₂O- nebo -CH₂S- se mohou připravit jak je uvedeno ve schématu 24. LG znamená odcházející skupinu (například mesyloxylovou skupinu, tosyloxylovou skupinu, atom halogenu) a X znamená S, O nebo NR¹⁸. Vhodné kopulační podmínky jsou následující.

i) Použití anorganické báze (například NaHCO₃, NaH, K₂CO₃, butylllíthia) v organickém rozpouštědle (například THF, DMF, DMSO) a při teplotě od 70 do 150 °C.

ii) Použití organické báze (například triethylaminu, DMAP) v organickém rozpouštědle (napří- klad THF, dichlormethanu, DMA, DMF) při teplotě v rozsahu od teploty místnosti do 150 °C.

iii) Použití anorganické báze (například KOH, NaOH, K₂CO₃) ve vodě a organických rozpouštědlech (například dichlormethanu) ve dvoufázovém systému, případně v přítomnosti katalyzátoru pro přenos fáze (například tetrabutylammoniumbromidu).

Sloučeniny obecného vzorce I, kde L znamená skupinu -CH=CR²⁰- se mohou připravit za použití Wittigovy reakce jak je uvedeno ve schématu 25. Vhodné reakční podmínky jsou následující.

i) Použití báze (například uhličitanu draselného, hydridu kovu, alkoxidu kovu) v přítomnosti organického rozpouštědla (například THF, toluenu, DMSO), případně v přítomnosti vodného rozpouštědla (dvoufázový systém) a případně v přítomnosti katalytického komplexního činidla, solubilizuje ionty alkalického kovu v nepolárním rozpouštědle, jako je 1,4,7,10,13-pentaoxycyklopentadekan (také nazývaný 15-crown-5) nebo 1,4,7,10,13,16-hexaoxacyklooktadekan 45 (také nazýván 18-crown-6).

Sloučeniny obecného vzorce I, kde L znamená skupinu -CH₂-NR¹⁸- se mohou připravit jak je uvedeno ve schématu 26 kopulací aldehydu (sloučenina 2) se sloučeninou 4. Vhodné kopulační podmínky jsou následující.

i) Použití redukčního činidla (například NaCNBH₃, BH₃, vodíku plus katalyzátor, LiHBEt₃, diizobutylaluminiumhydridu, lithiumaluminiumhydridu, borohydridu sodného) v přítomnosti vhodného rozpouštědla, například ethanolu a kyseliny octové.

- 18CZ 293694 B6

Aldehyd (sloučenina 2) se může připravit oxidací odpovídajícího alkoholu (sloučenina 1) při vhodných podmínkách, jako je použití oxidačního činidla (například TPAP, NMM-O) v přítomnosti organického rozpouštědla (například acetonitrilu, dichlormethanu) při teplotě místnosti.

Ostatní vhodná oxidační činidla zahrnují oxid chromový, pyridiniumchlorchroman, pyridiniumdichroman, dichroman sodný a chlornan sodný.

Aldehyd (sloučenina 2) se může připravit redukcí odpovídajícího esteru (sloučenina 1) při standardních podmínkách za použití například diizobutylaluminiumhydridu.

Sloučenina obecného vzorce I, kde L znamená skupinu -CHr-NR^-T-, -CFL-O-T nebo CH₂S-T- se může připravit jak je uvedeno ve schématu 27, kde LG znamená odcházející skupinu (například mesyloxyskupinu, tosyloxyskupinu, atom halogenu) a X znamená O, S nebo NR²¹. Vhodné kopulační podmínky jsou uvedeny shora v reakci ke schématu 24. Případně polohy LG a XH ve sloučeninách 1 & 2 ve schématu 27 mohou být obráceny a získá se vhodný konečný produkt.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde L znamená skupinu -CH₂-NR²³-SO₂- se mohou připravit jak je uvedeno ve schématu 28. Sloučeniny 1 a 2 mohou být kopulovány při standardních podmínkách jako jsou následující.

i) Použití organické báze (například di-izopropylethylaminu, triethylaminu, 4-methylmorfolinu) v přítomnosti organického rozpouštědla (například dichlormethanu) při teplotě v rozsahu 0 až 40 °C.

ii) Použití anorganické báze (například uhličitanu draselného) v přítomnosti organického rozpouštědla (například DMF) při teplotě v rozsahu 0 až 150 °C.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde L znamená skupinu -CH2-NR²⁴-CO-T- se mohou připravit jak je uvedeno ve schématu 29. Sloučeniny 1 a 2 mohou být kopulovány při standardních podmínkách, jak je uvedeno shora pro skupinu L = -CO-NR¹⁶-.

Sloučeniny obecného vzorce i, kde L znamená skupinu -CH₂-CHR¹⁹- se mohou připravit jako redukce sloučenin typu uvedeném jako sloučenina 3 ve schématu 25 ale náhradou R¹⁹ místo R²⁰. Reakce se provádí při standardních podmínkách se standardními reagenty například užitím hydrogenace v přítomnosti katalyzátoru, jako je palladium na aktivním uhlí a při teplotě místnosti.

Biologická účinnost se testuje následovně. Famesylprotein-transferáza (FPT) se částečně čistí z lidské placenty frakcionací síranem amonným a potom chromatografií na aniontovém měniči Q-Sepharose^R (Pharmacia lne), jak popsal Ray a Lopez-Belmonte (Ray KPa Lopez-Belmonte J (1992), Biochemical Society Transations 20, 494 až 497). Substrát pro FPT je Kras (CVIM Cterminální sekvence). cDNA pro onkogenní valí 12 variantu lidského c-Ki-ras-2 4B se získá zplazmidu pSWll-1 (ATCC). Ta se potom subklonuje do polylinkeru vhodného expresního vektoru například pCI147. Krase se získá po expresi do kmene BL21 E. coli. Exprese a čištění cKI-ras-2 4B a valí 12 variantu v E. coli jsou také popsány Lowe-m a kol. (Lowe P N a kol, Biol. Chem. (1991), 266 1672 až 1678).

Inkubace enzymem obsahuje 300nM tritiovaný famesylpyrofosfát (DuPont/New England Nuclear), 120nM Ras-CVIM, 50mM Tris HC1 pH 8,0, 5mM MgCl₂, 10 μΜ ZnCI₂, 5 mM dithiotheitolu a sloučeniny byly přidány při vhodných koncentracích v DMSO (3% finální koncentrace v testu a v kontrolním vzorku). Inkubace probíhá 20 minut při teplotě 37 °C a zakončí se kyselým ethanolem jak popsal Pompalino a kol. (Pompalino D L a kol (1992), 31, 3800 až 3807). Vysrážený protein se sebere na skleněném vlákenném filtru (B) za použití buněčného harvestru Tomtec^R a úroveň tritiace se měří v scintilačním sčítači Wallac^R1204 Betaplate.

-19CZ 293694 B6

Ačkoliv farmakologické vlastnosti sloučenin obecného vzorce I kolísají na struktuře, jak lze očekávat, obvykle sloučeniny obecného vzorce I vykazují 1C_5O ve shora uvedených testech v rozsahu například 0,01 až 200 μΜ. Tak například sloučenina allylester 5-3-(N-methylmethoxykarbamoyl)benzoové kyseliny (viz příklad 7) má IC50 přibližně 0,5μΜ. U sloučenin podle vynálezu nebyla zjištěna žádná neakceptovatelná toxicita při účinné dávce.

Vynález ilustrují následující příklady, kterými se však rozsah vynálezu v žádném případě neomezuje. V těchto příkladech, pokud není uvedeno jinak, platí že:

i) všechna odpaření se provádějí v rotační odparce za vakua a zpracování se provádí až po odstranění zbylého pevného podílu filtrací, ii) jednotlivé operace se provádějí při okolní teplotě, tj. v rozmezí 18 až 25 °C a pod atmosférou inertního plynu, jakým je argon, iii) sloupcové chromatografie (je použita mžikové chromatografie) ajako média tlakové kapalné chromatografie se použije silikagelu Měrek Kieselgel (Art. 9385) nebo silikagelu s reversní fází Měrek Lichroprep RP-18 (Arg. 9303) dostupné od fy E. Měrek, Darmstadt, Německo, iv) výtěžky jsou uvedeny pouze pro ilustraci a nepředstavují maximálně dosažitelné výtěžky,

v) finální produkty obecného vzorce i mají uspokojivé výsledky mikroanalýzy a jejich struktury jsou potvrzeny nukleární magnetickou rezonancí (NMR) a technikami hmotové spektroskopie; hodnoty chemických posunů se měří na delta škále; používají se následující zkratky: s, singlet; d, dublet; t nebo tr, triplet; m, multilpet; š, širokým, vi) získané meziprodukty nejsou obecně zcela charakterizovány a jejich čistota se stanoví chromatografií na tenké vrstvě, infračervenou spektroskopií (IR) nebo nukleární magnatickorezonanční spektroskopií (NMR), vii) teploty tání nejsou korigované a stanoví se za použití zařízení Mettler SP62 nebo zařízení s olejovou lázní, přičemž teploty tání finálních produktů obecného vzorce I se stanoví po krystalizaci z vhodného organického rozpouštědla, jako je ethanol, methanol, aceton, ether nebo hexan, a to buď samotný nebo ve směsi s jinými rozpouštědly a viii) používají se následující zkratky:

BOC	terč, butoxykarbonyl
DCCI	1,3-dimethylacetamid
DMA	N,N-dimethylacetamid
DMAP	4-dimethylaminopyridin
DMF	N,N-dimethylformamid
DMSO	dimethylsulfoxid
EDC	l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid
EEDQ	2-ethoxy-1 -ethoxykarbony 1-1,2-d ihydroch inol in
HOBT	1-hydroxybenzotriazol
NMM	N-methylmorfolin
NMM-O	4-methylmorfolin-N-oxid
TFA	kyselina trifluoroctová
THF	tetrahydrofuran
TMSI	triemthylsilyljodid
TPAP	tetrapropylamoniumperruthenát

-20CZ 293694 B6

Ve schématech jsou uvedeny pouze H, které umožní objasnit schémata. Příklady obsahují kromě způsobů přípravy sloučenin dle vynálezu také způsoby přípravy podobných sloučenin, které zde uvádíme pouze pro ilustraci.

⁵ .<

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 (viz schéma 1)

4-Nitrobenzylester (2S,4S)-4-acetylsulfanyl-2-[3-nitro-5-(N-methoxy-N-methylkarbamoyl)fenylkarbamoyl]pyrrolidin-l-karboxylové kyseliny

Směs 0,2 g l-(4-nitrobenzyl)esteru 4-acetylsuIfanyl-pyrrolidin-l,2-dikarboxylové kyseliny 15 (sloučenina lc) a 0,122 g 3-amino-N-methoxy-N-methyl-5-nitrobenzamidu (sloučenina 1 b) a

0,201 g EEDQ ve 20 ml dichloromethanu se míchá při okolní teplotě po dobu 16 hodin. Roztok se potom míchá s 20 ml 0,3M kyseliny chlorovodíkové po dobu 10 minut. Organická fáze se oddělí, vysuší nad síranem hořečnatým a odpařením za sníženého tlaku se získá guma. Tato guma se čistí chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 50:5é a potom směsi 20 acetátu a hexanu v poměru 75:25 a získá 0,132 g žádaného produktu (sloučenina 1) jako bezbarvá guma.

Nukleární magneticko rezonanční spektrum (CDC1₃) δ 2,35 (s, 3H), 2,62 (m, 2H), 3,4 (s, 3H),

3,44 (m, 1H), 2,6 (s, 3h), 4,1 (m, 2H), 4,59 (t, 1H), 5,3 (m, 2H), 7,55 (d, 2H), 8,09 (m, 1H), 8,25 25 (d, 2H), 8,3 (m, 1H), 8,6 (m, 1H), 9,55 šs., 1H).

Výchozí materiál (sloučenina lc) se připraví podle postupů popsaných v referenčních příkladech 1 až 4 Evropského patentu č. 126587 (Sumitomo).

Sloučenina lb používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Směs 10 g 3amino-5-nitrobenzoové kyseliny, 10 g pentafluorfenolu a 11,3 g DCCI se míchá při okolní teplotě po dobu 24 hodin. Reakční směs se filtruje a filtrát se zpracuje sloupcovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 10:90 a získá se 5,8 g 2,3,4,5,6-pentafluorfenylesteru 3-amino-5-nitrobenzoové kyseliny (sloučenina la) jako 35 žlutá pevná látka.

Nukleární magneticko rezonanční spektrum (CDC1₃) δ 4,3 (šs, 2H), 7,7 (tr, 1H), 7,8 (tr, 1H), 8,36 (tr, 1H).

Směs 1,0 g sloučeniny la, 0,84 g hydrochloridu Ν,Ο-dimethylhydroxylaminu a 1,82 ml triethyl40 aminu v 50 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě po dobu 48 hodin. Potom se přidá ml vody a směs se míchá dalších 5 minut. Organická fáze se oddělí, suší se nad síranem hořečnatým a odpařením za sníženého tlaku se získá guma. Tato guma se čistí chromatografií za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 10:90 a potom směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 50:5 a získá se 0,55 g výchozího materiálu 3-amino-N45 methoxy-N-methyl-5-nitrobenzamid (sloučenina lb) jako žlutá pevná látka.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 3,36 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 7,26 (tr, 1H), 7,56 (tr, 1H), 7,90 (tr, 1H).

-21 CZ 293694 B6

Příklad 2 (viz schéma 2)

Allylester (2S,4S)-4-acetylsulfanyl-2-[3-(N-methoxy-N-methylkarbamoyl)-5-nitrofenylkarbamoyl]pyrrolidin-l-karboxylové kyseliny

Směs 0,2 g 1-allylesteru (2S,4S),4-acetylsulfanylpyrrolidin-l,2-dikarboxylové kyseliny (sloučenina ld), 0,165 g sloučeniny lb a 0,271 g EEDQ ve 20 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě po dobu 16 hodin. Roztok se potom míchá s 0,3M kyselinou chlorovodíkovou dalších 10 minut. Organická fáze se oddělí, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se za sníženého tlaku. Získaný produkt se čistí sloupcovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 50:50 a získá se 0,152 g žádného produktu (sloučenina 2) jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) 8 2,33 (s, 3H), 2,62 (m, 2H), 3,38 (m, 1H), 3,4 (s, 3H), 3,6 (s, 3H), 4,05 (m, 2H), 4,59 (tr, 1H), 4,69 (d, 2H), 5,3 (m, 2H), 5,95 (m, 1H), 8,14 (t, 1H), 8,28 (tr, 1H), 8,6 (tr, 1H), 9,7 (šs, 1H).

Syntéza sloučeniny ld používané jako výchozí látka je popsána jako „sloučenina (A)“ na str. 31 Mezinárodní přihlášky vynálezu č. WO 92/17479 (Imperiál Chemical Industries). Syntéza sloučeniny 1 b používané jako výchozí materiál je popsána v příkladu 1.

Příklad 3 (viz schéma 3)

1-Allylester, 3-methylester 5-izoftalové kyseliny

0,07 DMF se přidá za míchání pod atmosférou argonu k 0,078 ml oxalylchloridu ve 20 ml dichlormethanu ochlazeném na -20 °C. Po 15 minutách se přidá roztok 0,3 g sloučeniny lc (viz příklad 1) v dichloromethanu a potom se přidá roztok 0,099 ml N-methylmorfolinu ve 2 ml dichlormethanu. Po 15 minutách se přidá roztok 0,192 g allylesteru, methylesteru 5-aminoizoftalové kyseliny (sloučenina 3b) v 5 ml dichlormethanu a opět roztok 0,099 ml Nmethylmorfolinu ve 2 ml dichlormethanu. Směs se nechá ohřát na okolní teplotu a míchá se po dobu 16 hodin. Reakční směs se zpracuje mžikovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu v hexanu v poměru 50:50 a potom směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 75:15 a získá se 0,24 g žádaného produktu (sloučenina 3) jako bezbarvá pěna.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) 8 2,33 (s, 3H), 2,62 (m, 2H), 3,45 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,03 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,57 (tr, 1H), 4,85 (m, 2H), 5,32 (m, 2H), 5,36 (m, 2H), 6,05 (m, 1H), 7,51 (m, 2H), 8,20 (m, 2H), 8,32 (m, 2H), 8,34 (s, 1H), 9,2 (šs, 1H).

Sloučenina 3b používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Směs 13,8 g monomethyl-5-nitroizoftalátu, 7,96 g allybromidu, 13,94 g uhličitanu draselného a 160 ml DMF se míchá při okolní teplotě po dobu 4,5 hodiny. Pevná látka se odfiltruje a DMF se odpaří z filtrátu za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve směsi tvořené 30 ml diethyletheru a 100 ml vody a míchá se po dobu 5 minut. Organická fáze se oddělí a promyje se 220 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 200 ml solanky, suší se nad síranem hořečnatým a po odpaření za sníženého tlaku se získá 14,74 g allylesteru, methylesteru 5-nitro-izoftalové kyseliny (sloučenina 3a) jako žlutý olej.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) 8 4,0 (s, 3H), 4,9 (m, 2H), 5,4 (m, 2H), 6,1 (m, 1H), 9,0 (m, 3H).

Směs 15,46 g sloučeniny 3a, 65,78 g dihydrátu chloridu cínatého a 200 ml methanolu se míchá pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Methanol se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se znovu rozpustí ve 400 ml ethylacetátu. Potom se přidává po kapkách roztok amoniaku (specifická hmotnost 0,880) pokud pH směsi nedosáhne hodnoty 8 a více se nevytváří sraženina. Pevná látka se odfiltruje a filtrát se promyje 100 ml vody, 100 ml solanky, suší se nad síranem hořečnatým a

-22CZ 293694 B6 po odpaření za sníženého tlaku se získá 13,56 g výchozí látky (sloučenina 3b) jako žlutá pevná látka.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 3,91 (s, 3H), 3,94 (s, 2H), 4,82 (m, 2H), 5,35 (m, 2H), 6,05 (m, 1H), 7,52 (m, 2H), 8,08 (m, 1H).

Příklad 4 (viz schéma 4)

1-Allylester, 3-methylester 5-izoíitalové kyseliny

Směs 0,12 g TFA soli l-allylesteru, 3-methylesteru 5—izoftalové kyseliny (sloučenina 4e), 0,085 g jodacetamidu, 0,058 g hydrogenuhličitanu sodného a 3 ml DMF se míchá při okolní teplotě po dobu 16 hodin. DMF se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se čistí chromatografií za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 60:40 a potom ethylacetátem a konečně směsí methanolu a ethylacetátu v poměru 5:95 a získá se 0,055 g žádného produktu (sloučenina 4) jako žlutá pevná látka.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum δ 2,19 (2tr, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,82 (m, 1H), 3,22 (m, 2H), 3,48 (q, 2H), 3,6 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,05 (m, 1H), 4,85 (m, 2H), 5,35 (m, 2H), 6,04 (m, 1H), 6,1 (šs, 1H), 6,30 (šs, 1H), 8,43 (m, 1H), 8,55 (m, 1H), 10,46 (šs, 1H).

Sloučenina 4e používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Směs 1,0 g 1terc.butylesteru (2S,4S),-4-hydroxypyrrolidin-l,2-dikarboxylové kyseliny, 1,6 g EEDQ, sloučeniny 3b (viz příklad 3) a 100 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě po dobu 16 hodin. Směs se zpracuje mžikovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 80:20 a potom ethylacetátem a získá se 0,85 g l-allylesteru, 3methylesteru 5-izoftalové kyseliny (sloučenina 4a) jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆) δ 1,34 (2s, 9H), 1,97 (m, 1H), 2,15 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,46 (m, 1H), 3,9 (s, 3H), 4,32 (m, 2H), 4,84 (d, 2H), 5,06 (d, 1H), 5,35 (m, 2H), 6,07 (m, 1H), 8,18 (m, 1H), 8,54 (m, 2H).

Směs 0,8 g sloučeniny 4a, 0,152 ml methylsulfonylchloridu, 0,256 ml triethylaminu a 20 ml dichlormethanu se míchá pod atmosférou argonu při teplotě 5 °C po dobu 10 minut a potom při okolní teplotě po dobu 2 hodin. Přidá se 20 ml vody a směs se míchá dalších 5 minut. Organická fáze se oddělí, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se za sníženého tlaku. Produkt se Čistí chromatografií za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 30:70 a potom směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 80:20 a získá se 0,8 g 1allylesteru, 3-methylesteru 5-izoftalové kyseliny (sloučenina 4b) jako čirý olej.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 1,5 (s, 9H), 2,4 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 3,63 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,66 (m, 1H), 4,85 (m, 2H), 5,27 (m, 1H), 5,36 (m, 2H), 6,05 (m, 1H), 8,37 (m, 3H), 9,64 (šs, 1H).

Směs 0,74 g sloučeniny 4b, 0,32 g thiooctanu draselného a 25 ml acetonu se udržuje pod zpětným chladičem po dobu 18 hodin. Směs se potom ochladí na teplotu místnosti a aceton se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve směsi 50 ml ethylacetátu, 25 ml 1,5M kyseliny chlorovodíkové a 25 ml ledu. Organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a pod odpařením za sníženého tlaku se získá červená guma. Tato guma se čistí chromatografií za použití elučního činidla nejprve ethylacetátu a hexanu v poměru 30:70 a potom ethylacetátu a hexanu v poměru 70:30 a získá se 0,48 g l-allylesteru, 3-methylesteru 5-izoftalové kyseliny (sloučenina 4c) jako oranžová guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3) δ 1,5 (s, 9H), 2,32 (s, 3H), 2,56 (m, 2H), 3,33 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,04 (m, 2H), 4,52 (tr, 1H), 4,85 (m, 2H), 5,35 (m, 2H), 6,05 (m, 1H), 8,38 (m,3H), 9,63 (šs, 1H).

-23CZ 293694 B6

Směs 3,6 g sloučeniny 4c a 80 ml TFA se míchá při okolní teplotě po dobu 10 minut. TFA se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v 200 ml ethylacetátu a 100 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Směs se potom míchá 10 minut, organická fáze se oddělí, promyje se 100 ml vody a 100 ml solanky a suší se nad síranem hořečnatým. Ethylacetát se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí chromatografií za použití elučního tlaku a zbytek se čistí chromatografií za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 30:70 a potom směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 80:20 a získá se 2,3g sloučeniny 4f (vodná báze, která se použije v příkladu 6) jako hnědý olej.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) 8 2,05 (m, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,42 (šs, 1H), 2,78 (m, 2H), 3,58 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,99 (m, 1H), 4,84 (m, 2H), 5,35 (m, 2H), 6,05 (m, 1H), 8,47 (m, 3H), 9,83 (šs, 1H).

Směs 0,45 g sloučeniny 4c a 10 ml TFA se míchá při okolní teplotě 10 minut. TFA se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se čistí sloupcovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného postupně směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 30:70, směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 60:40, ethylacetátem a směsí methanolu a ethylacetátu v poměru 10:90 a získá se 0,46 g žádané výchozí látky (sloučeniny 4c) jako hnědá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 2,15 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,97 (m, 1H),

3,44 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,97 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,82 (d, 2H), 4,98 (tr, 1H), 5,35 (m, 2H), 6,03 (m, 1H), 8,12 (m, 2H), 8,26 (m, 1H).

Příklad 5

1-Allylester, 3-methylester 5-izoftalové kyseliny

Směs 0,08 sloučeniny 4e (viz příklad 4), 0,083 ml triethylaminu, 0,056 ml anhydridu kyseliny octové a 5 ml dichlormethanu se udržuje pod zpětným chladičem po dobu 16 hodin. Směs se ochladí a po odpaření za sníženého tlaku a čištění chromatografií za použití elučního činidla tvořeného postupně směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 70:30, ethylacetátu a směsí methanolu a dichlormethanu v poměru 5:95 se získá 0,048 g žádaného produktu (sloučenina 5) jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum δ (CDC1₃) δ 2,18 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,48 (m, 1H), 2,77 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,1 (m, 2H), 4,85 (m, 3H), 5,35 (m, 2H), 6,06 (m, 1H), 8,40 (m, 3H), 9,88 (šs, 1H).

Sloučenina 4e používaná jako výchozí látka se připraví jak je popsáno v příkladu 4.

Příklad 6 (viz schéma 6)

1-Allylester, 3-metylester 5-izoftalové kyseliny

Směs 0,07 g sloučeniny 4f, 0,026 ml chlorformiátu, 0,07 ml triethylaminu a 3 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě po dobu 16 hodin. Směs se odpaří za sníženého tlaku a získá se guma, která se čistí chromatografií za použití elučního činidla tvořeného postupně dichlormethanem, směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 30:70 a směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 60:40 a získá se 0,048 g žádaného produktu jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSOdé) δ 1,93 - 2,24 (m, 1H), 2,38 (s, 1H), 2,38 (s, H), 2,70 (m, 1H), 3,63 (m, 1H), 3,91 (d, 3H), 4,18 (m, 2H), 4,60 (m, 1H), 4,87 (tr, 2H), 5,38 (m, 1H), 6,08 (m, 1H), 6,70 - 7,69 (m, 5H), 8,20 - 8,53 (m, 3H), 10,61 (d, 1H).

Sloučenina 4f používaná jako výchozí látka se připraví jak je popsáno v příkladu 4.

-24CZ 293694 B6

Příklad 7 (viz schéma 7)

Allylester 5—3-(N-methylmethoxykarbamoyl)benzoové kyseliny

Směs 0,02 g sloučeniny lc (viz příklad 1), 0,16 g allylesteru 3-arnino-5-(N-methylrnethoxykarbamoyl)benzoové kyseliny (sloučenina 7d), 0,25 g, EEDQ a 20 ml dichlormethanu se míchá po dobu 16 hodin při okolní teplotě. Směs se potom promyje 0,3M kyseliny chlorovodíkové, organická fáze se oddělí, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se do sucha za sníženého tlaku. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografii za použití elučního činidla tvořeného směsí 10 ethylacetátu a hexanu v poměru 75:25 a získá se 0,053 g žádaného produktu (sloučenina 7) jako žlutá pevná látka.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 2,33 (s, 3H), 2,60 (m, 2H), 3,38 (s, 3H),

3,42 (m, IH), 3,63 (m, IH), 3,91 (d, 3H), 4,18 (m, 2H), 4,60 (m, IH), 4,87 (tr, 2H), 5,38 (m, IH), 6,08 (m, 1H), 6,70 - 7,69 (m, 5H), 8,20 - 8,53 (m, 3H), 10,61 (d, 1H).

Sloučenina 4f používaná jako výchozí látka se připraví jak je popsáno v příkladu 4.

Příklad 7 (viz schéma 7)

Allylester 5-{[(2S,4S), 4-acetylsulfanyl-l-(4-nitrobenžyloxykarbonyl)pyrrolidin-2-karbonyl]amino}-3-(N-methylniethoxykarbamoyl)benzoové kyseliny

Směs 0,02 g sloučeniny lc (viz příklad 1), 0,16 g allylesteru 3-amino-5-(N-methylmethoxykarbamoyl)benzoové kyseliny (sloučenina 7d), 0,25 g EEDQ a 20 ml dichlormethanu se míchá 25 po dobu 16 hodin při okolní teplotě. Směs se potom promyje 30 ml 0,3M kyseliny chlorovodíkové, organická fáze se oddělí, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří se do sucha za sníženého tlaku. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografii za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 75:25 a získá se 0,053 g žádaného produktu (sloučenina 7) jako žlutá pevná látka.

Nukleární magneticko rezonanční spektrum (CDCI₃) δ 2,33 (s, 3H), 2,60 (m, 2H), 3,38 (s, 3H),

3,42 (m, IH), 3,60 (s, 3H), 4,04 (m, IH), 4,15 (m, IH), 4,55 (m, IH), 4,83 (m, 2H), 5,30 (m, 2H),

5,35 (m, 2H), 6,04 (m, IH), 7,52 (m, 2H), 8,10 (m, 3H), 8,18 (m, 2H), 9,12 (šs, IH).

Sloučenina lc používaná jako výchozí látka se připraví jak je popsáno v příkladu 1. Sloučenina 35 7d používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Směs 17,00 g uhličitanu draselného, 52,00 g 5-nitroizoftalové kyseliny, allylbromidu a 400 ml dimethylacetamidu se míchá při teplotě 90 °C po dobu 4 hodiny. Dimethylacetamid se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v ethylacetátu, promyje se vodou (2 x 300 ml) a potom se extrahuje vodným nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 300 ml). Extrakty se spojí, okyselí se na 40 pH 4 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a znovu se extrahují ethylacetátem (2 x

300 ml). Extrakty se spojí, promyjí se 300 ml vody, suší se nad síranem hořečnatým a po odpaření za sníženého tlaku se získá 39,48 g 3-allylesteru 5-nitroizoftalové kyseliny (sloučenina 7a) jako krémová pevná látka.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC^/CDSOdé) δ 4,90 (m, 2H), 5,42 (m, 2H), 6,08 45 (m, IH), 9,00 (m, 3H).

g roztoku sloučeniny 7a, 5,04 g N-hydroxysukcinimidu a 9,03 g DCCI ve 400 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě po dobu 3,5 hodin. Vytvořená bílá sraženina se odfiltruje a filtrát se odpaří za sníženého tlaku a získá se žlutý olej. Tento olej se čistí mžikovou chromato50 grafu' za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 75:25 a získá se 7,58 g l-(2,5-dioxypyrrolidin-l-yl)esteru, 3-allylesteru 5-nitroizoftalové kyseliny (sloučenina 7b) jako žlutá pevná látka.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 2,95 (s, 4H), 4,92 (m, 2H), 5,43 (m, 2H), 6,07 (m, IH), 9,12 (m,3H).

-25 CZ 293694 B6

Směs 2,00 g sloučeniny 7b, 0,62 g hydrochloridu N,O-dimethylhydroxylaminu, 0,86 ml triethylaminu a 60 ml dichlormethanu se míchá při teplotě 5 °C po dobu 30 minut a potom se nechá ohřát na okolní teplotu a míchá se dalších 16 hodin. Směs se zpracuje mžikovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 40:60 a získá se allylester 3-(N-methylmethoxykarbamoyl)-5-nitrobenzoové kyseliny (sloučenina 7c) jako žlutý olej.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 4,90 (m, 2H), 5,40 (m, 2H), 6,07 (m, 1H), 8,71 (m, 1H), 8,76 (m, 1H), 8,95 (m, 1H).

Směs 1,11 g sloučeniny 7c, 4,26 c dihydrátu chloridu cínatého a 60 ml methanolu se zahřívá pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny. Reakční směs se ochladí a methanol se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se znovu rozpustí ve 100 ml ethylacetátu a po kapkách se přidá roztok amoniaku (specifická hmotnost 0,880) dokud se nedosáhne pH 8. Vytvořená sraženina se odfiltruje a promyje se ethylacetátem (2 x lOOml). Spojené filtráty a promývací kapaliny se odpaří za sníženého tlaku a získá se 0,61 Og výchozí látky, allylesteru 3-amino-5-(Nmethylmethoxykarbamoyl)benzoové kyseliny (sloučenina 7d) jako bílá pevná látka.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI₃) δ 3,35 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,90 (šs, 2Hú, 4,82 (m, 2H), 5,35 (m, 2H), 6,04 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,72 (m, 1H).

Příklad 8 (viz schéma 8)

Allylester 5-{ [(2S,4S), 4-acetylsulfanyl-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin-2-karbonyl]amino}-3-(N-methylmethoxykarbamoyl)benzoové kyseliny

Směs 0,293 g sloučeniny lc (viz příklad 1), 0,210 g allylesteru 3-amino-5-(N-methylallyloxykarbamoyl)benzoové kyseliny (sloučenina 8c), 0,268 g EEDQ a 20 ml dichlormethanu se míchá po dobu 16 hodin při okolní teplotě. Směs se potom promyje 30 ml 0,3M kyseliny chlorovodíkové, suší se nad síranem hořečnatým a zpracuje se mžikovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 75:25. Získaný produkt se opět zpracuje mžikovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí methanolu a dichlormethanu v poměru 2,5:97,5 a získá se 0,153 g žádaného produktu (sloučenina 8) jako čirá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 2,33 (s, 3H), 2,61 (m, 2H), 3,40 (s, 3H),

3.42 (m, 1H), 4,04 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,26 (d, 2H), 4,55 (m, 1H), 4,83 (m, 2H), 5,30 (m, 6H), 5,75 (m, 1H), 6,04 (m, 1H), 7,53 (m, 2H), 8,12 (m, 2H), 8,21 (m, 3H), 9,12 (šs, 1H).

Sloučenina 8c používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Směs 2,00 g sloučeniny 7b (viz příklad 7), l,06gN-methylhydroxylaminhydrochloridu, 1,72 ml triethylaminu a 60 ml dichlormethanu se míchá při teplotě 5 °C po dobu 30 minut. Směs se pak nechá ohřát na okolní teplotu a míchá se dalších 16 hodin. Reakční směs se zpracuje mžikovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 50:50 a získá se

1.43 g allylesteru 3-(N-methylhydroxykarbamoyl)-5-nitrobenzoové kyseliny (sloučenina 8a) jako krémová pevná látka.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 3,48 (s, 3H), 4,90 (m, 2H), 5,42 (m, 2H), 6,05 (m, 1H), 8,28 (šs, 1H), 8,55 (m, 1H), 8,63 (m, 1H), 8,96 (m, 1H).

Směs 0,60 g sloučeniny 8a, 0,28 g allylbromidu, 0,59 g uhličitanu draselného a 20 ml DMF se míchá po dobu 3 hodin při okolní teplotě pod atmosférou argonu. Dimethylformamid se potom odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v 50 ml ethylacetátu a 50 ml vody. Organická fáze se oddělí, promyje se 50 ml solanky, suší se nad síranem hořečnatým a po odpaření do sucha za sníženého tlaku se získá 0,571 g allylesteru 3-(N-methyl-allyloxykarbamoyl)-5-nitrobenzoové kyseliny (sloučenina 8b) jako žlutý olej.

-26CZ 293694 B6

Nukleární magnetickorezonanční spektrum δ 3,47 (s, 3H), 4,25 (m, 2H), 4,90 (m, 2H), 5,35 (m,

4H), 5,65 (m, 1H), 6,06 (m, 1H), 8,73 (m, 1H), 8,78 (m, 1H), 8,95 (m, 1H).

Směs 0,523 g sloučeniny 8b, 1,84 g dihydrátu chloridu cínatého a 50 ml ethylacetátu se zahřívá pod zpětným chladičem po dobu 6 hodin. Směs se nechá ochladit na teplotu místnosti a po kapkách se přidá roztok amoniaku (specifická hmotnost 0,880) dokud se nedosáhne pH 8. Vytvořená bílá sraženina se odfiltruje, promyje se ethylacetátem (2 x 50 ml) a spojené promývací kapaliny a filtrát se odpaří do sucha a získá se 0,472 g požadované výchozí látky (sloučenina 8c) jako žlutý olej.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 3,38 (s, 3H), 3,88 (m, 2H), 4,25 (d, 2H), 4,80 (m, 2H), 5,32 (m, 4H), 5,75 (m, 1H), 6,30 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,75 (m, 1H).

Příklad 9 (viz schéma 9)

Allylester 5-{[(2S,4S), l-allyloxykarbonyl)-4-sulfanylpyrrolidin-2-karbonyl]amino}-3-(Nmethylallyloxykarbamoyl)benzoové kyseliny

4,41 ml vodného roztoku 0,lM hydroxidu sodného se přidá kallylesteru 5—3-(N-methylallyloxykarbamoyl)benzoové kyseliny (sloučenina 9a) v 15 ml allylalkoholu a směs se míchá při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Potom se přidá 1,5M kyselina chlorovodíková k úpravě pH roztoku na hodnotu 3 a směs se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve 40 ml ethylacetátu a promyje se vodou (2 x 40 ml). Organická fáze se oddělí, suší se nad síranem hořečnatým a po odpaření do sucha se získá žlutá pěna. Tato pěna se čistí chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 75:25 a získá se 0,148 g žádaného produktu (sloučenina 9) jako žlutá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 1,88 (d, 2H), 2,62 (m, 2H), 3,37 (s, 3H),

3,45 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 4,08 (m, 1H), 4,52 (tr, 1H), 4,65 (m, 2H), 4,83 (m, 2H), 5,35 (m, 4H), 6,00 (m, 2H), 8,10 (m, 1H), 8,15 (m, 1H), 8,21 (m, 1H), 9,15 (šs, 1H).

Sloučenina 9a používaná jako výchozí látka se připraví následovně. Směs 0,568 g sloučeniny 7d (viz příklad 7), 0,645 g sloučeniny ld (viz příklad 20), 0,585 g EEDQ a 50 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě po dobu 16 hodin. Směs se potom promyje 50 ml 0,3M kyseliny chlorovodíkové, suší se nad síranem hořečnatým a zpracuje se mžikovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 75:25. Potom se opět čistí ve druhé koloně za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 50:50 a získá se 0,401 g výchozí látky (sloučenina 9a) jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 2,33 (s, 3H), 2,60 (m, 2H), 3,37 (s, 3H), 3,40 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 4,02 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,58 (tr, 1H), 4,68 (m, 2H), 4,83 (m, 2H),

5,35 (m, 4H), 6,00 (m, 2H), 8,10 (m, 1H), 8,14 (m, 1H), 8,22 (m, 1H), 9,30 (šs,lH).

Příklad 10 (viz schéma 10)

Methylester 5-[((2S,4S), l-allyIoxykarbonyM-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)karbamoyl]pyridin-2-karboxylové kyseliny

K. míchanému roztoku 991 mg (2,07 mmol) methylesteru 5-[((2S,4S),l-allyloxykarbony-4BOCsulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)karbamoyI]pyridin-2-karboxyIové kyseliny (sloučenina 10a) v dichlormethanu se přidá po kapkách 6 ml (78 mmol) TFA. Roztok se potom míchá pod argonem po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo a přebytek TFA se odstraní ve vakuu. Zbytek se zpracuje azeotropickou destilací s toluenem (2 x 10 ml). Produkt se nechá minimálně vystavit účinkům vzduchu a rozetře se s 20 ml etheru. Vzniklá pevná látka se promyje 10 ml chladného

-27CZ 293694 B6 etheru a suší se ve vysokém vakuu a získá se 654 mg žádaného produktu (76 %) (sloučenina 10) jako krémová pevná látka.

Sloučenina [4] má nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI₃; 250 MHz) d 1,70 (m, 1H), 1,75 (d, 1H), 2,63-2,77 (m, 1H), 3,15-3,50 (m, 3H). 3,904,00 (m, 1H), 4,05 (s, 3h), 4,07 - 4,23 (m, 2H), 4,63 (m, 2H), 5,23 - 5,37 (m, 2H), 5,85 - 6,03 (m, 1H), 8,22 (d, 1H), 8,35 (dd, 1H), 8,95 (s(š), 1H), 9,20 (s, 1H).

MS (FAB) m/z 380 (M+H)⁺

Analýza pro Ci₇H₂₁N₃O₅S. 0,33 C₂HF₃O₂ 417: Vypočteno: C, 50,9; H, 5,3; N 10,1 %

Nalezeno: C, 50,8; H, 5,1; N, 10,1 %.

Sloučenina 10c používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. 9,0 g (0,05 mol) 2-methylesteru pyridin-2,5-dikarboxylové kyseliny (sloučenina 10a) se přidá k 25 ml míchaného roztoku thionylchloridu a směs se zahřívá opatrně pod zpětným chladičem po dobu

2,5 hodiny. Přebytek thionylchloridu se odstraní ve vakuu a pevný zbytek se zpracuje azeotropickou destilací s toluenem (2 x 25 ml) a získá se methylester 5-chlorkarbonylpyridin-2karboxylové kyseliny (sloučenina 10b), který se použije v další reakci.

K míchanému roztoku 220 mg (0,7 mmol) sloučeniny 15b (příklad 15) v 6 ml acetonitrilu se přidá roztok sloučeniny 10b (0,7 mmol) ve 4 ml acetonitrilu. Potom se přidá 0,29 ml (2,1 mmol) triethylaminu a roztok se míchá 23 hodin. Rozpouštědlo a přebytek triethylaminu se odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi chloroform a vodu. Organická fáze se promyje vodou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší se nad síranem hořečnatým a vysuší se do sucha. Vzniklá oranžová guma se zpracuje mžikovou chromatografíí na kiaselgelu 9385 za použití elučního činidla tvořeného zpočátku izohexanem a poté se zvyšujícím se obsahem ethylacetátu. Žádaná výchoz látka 10c se izoluje jako bílá pěna v množství 200 mg (60 %). Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz)

1,50 (s,9H), 1,80 (m, 1H), 2,62-2,75 (m, 1H), 3,30-3,37 (m, 1H), 3,39-3,50 (m, 1H),3,683,80 (m, 1H), 3,83 - 3,95 (m, 1H), 4,03 (s, 3H), 4,13 - 4,28 (m, 2H), 4,62 (m, 2H), 5,20 - 5,37 (m, 2H), 5,87 - 6,02 (m, 1H), 8,2 (d, 1H), 8,3 (dd, 1H), 8,87 (s, 1H), 9,2 (s, 1H).

MS (FAB) m/z 480 (M+H)

Analýza pro C₂₂H₂₉N₃O₇S 479:

Vypočteno: C 55,1; H, 6,4; N, 8,5 %

Nalezeno: C, 55,1; H, 6,1; N, 8,8 %.

Příklad 11 (viz schéma 11)

Allylester (2S,4S)2-{[(5-ethoxykarbonylthiofen-2-karbonyl)amino]methyl}-4—sulfanylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny ml (26 mmol) TFA se přidá k míchanému roztoku 130 mg (0,26 mmol) allylesteru (2S,4S)2— 4—BOCsulfanylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny ve 20 ml dichlormethanu. Roztok se míchá pod atmosférou argonu po dobu 19 hodin. Rozpouštědlo a přebytek TFA se odstraní ve vakuu a zbytek se suší ve vysokém vakuu a získá se žádaný produkt (sloučenina 11) jako bílá guma (64 %).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz) d 1,38 (t, 3H), 1,55- 1,70 (m, 1H), 1,75 (d, 1H), 2,60-2,76 (m, 1H), 3,10-3,50 (m,3H),3,803,95 (m, 1H), 4,05 - 4,25 (m, 2H), 4,38 (q, 2H), 4,70 (m, 2H), 5,20 - 5,40 (m, 2H), 5,85 - 6,05 (m, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 8,52 (s(š), 1H).

MS (FAB) m/z 399 (M+H)⁺

Analýza pro C|₇H₂₂N₂O₃S₂. 0,5 C₂HF₃O₂ 455:

Vypočteno: C, 47,6; H, 5,2; N, 6,1 %

-28CZ 293694 B6

Nalezeno: C, 47,5; Η, 4,9; N, 6,15 %.

Sloučenina 1 lb používaná jako výchozí látka se připraví analogickým způsobem ekvivalentnímu stupni příkladu 10, ale přidá se ethylester 5-chlorkarbonylthiofen-2-karboxylové kyseliny (sloučenina 11a) ke sloučenině 15b (příklad 15) a podobným chromatografickým zpracováním. Získá se sloučenina 1 lb jako lepivá bílá guma. Výtěžek 60 %. Příprava sloučeniny 1 laje popsána v Joumal of the Američan Pharmaceutical Associaton (Sci. Ed.), díl 41, str. 273 až 276 (1952). NMR sloučeniny 11b: (CDC1₃; 250 MHz), d 1,4 (t, 3H), 1,5 (s, 9H), 1,70 - 1,85 (m, 1H), 2,57 2,73 (m, 1H), 3,26-3,36 (m, 1H), 3,38-3,50 (m, 1H), 3,65-3,87 (m, 2H), 4,10-4,25 (m, 2H),

4,35 (q, 2H), 4,65 (m, 2H), 5,20 - 5,38 (m, 2H), 5,85 - 6,04 (m, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,72 (d, 1H),

8,45 (s(š), 1H).

MS (FAB) m/z 499 (M+H)⁺, jiné m/z 183

Analýza pro C₂₂H₃oN₂07S₂ 498:

Vypočteno: C, 53,4; H, 6,3; N 5,5 %

Nalezeno: C, 53,0; H, 6,1; N, 5,6 %.

Příklad 12 (viz schéma 12)

N-(3,4-Dichlorbenzyl)-N'-((2S,4S),4—sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)thiofen-2,5-dikarboxamid

K míchanému roztoku 59 mg (0,1 mmol) N-(3,4-dichlorbenzyl)-N'-((2S,4S),l-allyloxykarbonyl-4-sulfanylpyrrolidin-2-yl-methyl)thiofen-2,5-dikarboxamidu (sloučenina 12e) v 10 ml dichlormethanu, pod atmosférou argonu, se přidá 0,35 ml (0,25 mmol) trimethylsilyljodidu. Po 20 hodinách při okolní teplotě se odstraní ve vakuu dichlormethan a přebytek trimethylsilyljodidu a zbytek se zpracuje 3 ml methanolu. Nerozpustný materiál se zpracuje dalším methanolem (2x3 ml) a potom se rozetře s diethyletherem a získá se pevná látka, která se filtruje a po vysušení se získá žádaný produkt (sloučenina 12) jako světle hnědá pevná látka (59 %) Nukleární magneticko rezonanční spektrum (DMSO-d₆); 250 MHz), δ 1,65 - 1,90 (m, 1H), 2,50 - 2,62 (m, 1H), 3,20 - 3,40 (m, 2H), 3,55 - 3,70 (m, 2H), 3,75 - 3,90 (m, 2H), 4,45 (d, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,73 (d, 1H), 7,78 (d, 1H), 8, 68 (š, 1H), 8,88 (t, 1H), 9,22 (t, 1H).

MS (FAB) m/u 444 (M+H)⁺, j iné 111, 312.

Analýza C_I8H₁₉CI₂N₃O₂S₂.1,25 HI.0,5 C₄H_l0O 640 C.

Vypočteno: C, 37,6; H, 3,5; N 6,5 %

Nalezeno: C, 47,5; H, 3,9; N, 6,6 %.

Sloučenina 12e používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. K míchanému roztoku 0,53 ml (4,0 mmol) 3,4 dichlorbenzylaminu v 10 ml acetonitrilu se přidá 1,67 ml (12,0 mmol) triethylaminu a 0,87 g (4,0 mmol) roztoku sloučeniny 11a (viz příklad 11) v 20 ml acetonitrilu. Roztok se míchá při okolní teplotě. Rozpouštědlo a přebytek triethylaminu se odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi chloroform a vodu. Organická fáze se promyje vodou a solankou, suší se nad síranem hořečnatým a po odpaření ve vakuu do sucha se získá ethylester 5-(3,4-dichlorbenzylkarbamoyl)thiofen-2-karboxylové kyseliny (sloučenina 12a) jako krémová pevná látka (90%).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz) δ 1,40 (t, 3H), 4,38 (q, 2H), 4,57 (d, 2H), 6,47 (t(š), 1H), 7,28 (m, 1H),7,42 (m, 2H), 7,48 (d, 1H), 7,73 (d, 1H).

MS (Cl) m/z 358 (M+H)⁺

Analýza pro Ci₅H|₃C1₂NO₃S 358:

Vypočteno: C 50,4; Η, 3,8; N, 3,9 %

Nalezeno C 50,3; Η, 3,7; N, 3,9 %.

16,3 ml (16,3 mmol) vodného 1M roztoku hydroxidu sodného se přidá za míchání k roztoku 1,17 g (3,3 mmol) sloučeniny 12a v 70 ml ethanolu. Reakční směs se míchá při okolní teplotě po

-29CZ 293694 B6 dobu 19 hodin, sníží se na malý objem, zředí se vodou a pH se upraví na hodnotu 2 přidáním 2M kyseliny chlorovodíkové. Odfiltrovaná pevná látka se promyje vodou a po vysušení ve vakuu se získá 5-(3,4-dichlorbenzylkarbamoyl)thiofen-2-karbonylová kyselina (sloučenina 12b) jako bílá pevná látka (83 %).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO dňj 200 MHz) d 4,43 (d, 2H),7,3 (dd, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,68 (d, 1H), 7,78 (d, 1H), 9,28 (t, 1H).

MS (Cl) m/z 330 (M+H)⁺.

Analýza pro C13H9CI2NO3S 330:

Vypočteno: C, 47,3; H, 2,7; N, 4,2 %

Nalezeno: C, 47,3; H, 2,7; N, 4,2 %.

Míchaný roztok 495 mg (1,5 mmol) sloučeniny 12b v 25 ml dichlormethanu se ochladí v ledové lázni a po kapkách se přidá 1 kapka DMF a 0,175 ml (2,0 mmol) oxalylchloridu. Roztok se míchá při okolní teplotě pod argonem po dobu 4 hodin. Dichlormethan a přebytek oxalylchloridu se odstraní ve vakuu. Zbytek se zpracuje azeotropickou destilací s toluenem (2x15 ml) a získá se 5-(3,4-dichlorbenzylkarbamoyl)thiofen-2-karbonylchlorid (sloučenina 12c), který se použije v dalším stupni.

0,83 ml (4,5 mmol) triethylaminu a 316 mg (1,0 mmol) sloučeniny 15b (příklad 15) v 10 ml acetonitrilu se přidá k míchané směsi 1,5 mmol sloučeniny 12c v 15 ml acetonitrilu a míchá se při okolní teplotě pod argonem 19 hodin. Acetonitril a přebytek triethylaminu se odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi chloroform a vodu. Organická fáze se promyje vodou a solankou, suší se nad síranem hořečnatýrn a po vysušení do sucha ve vakuu se získá N-(3,4-dichlorbenzyl)-N'((2S,4S),l-allyloxykarbonyl-4-BOCsulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)thiofen-2,5-dikarboxamid (sloučenina 12d) jako lepivá hnědá pevná látka (95 %).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 200 MHz) δ 1,5 (s, 9H), 1,65 - 1,85 (m, 1H), 2,47 - 2,73 (m, 1H), 3,25 - 3,50 (m, 2H), 3,65 - 3,85 (m, 2H), 4,10 - 4,23 (m, 2H), 4,57 (d, 2H), 4,64 (m, 2H), 5,20 - 5,40 (m, 2H), 5,85 - 6,05 (m, 1H), 6,45 (t, 1H), 7,20 (dd, 1H), 7,40 (m, 2H),

7,46 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 8,47 (š, 1H).

MS (FAB) m/z 628 (M+H)⁺.

Analýza pro C27H31CI2N3O6S.H2O 646:

Vypočteno: C 50,2; H, 4,9; N, 6,5 %

Nalezeno: C 50,2; H, 5,1; N, 6,5 %.

ml (65 mmol) TFA se přidá k míchanému roztoku 600 mg (0,93 mmol) sloučeniny 12d v 25 ml dichlormethanu. Roztok se míchá při okolní teplotě pod atmosférou argonu po dobu 4 hodiny a rozpouštědlo a přebytek TFA se odstraní ve vakuu a zbytek se zpracuje azeotropickou destilací s toluenem a získá se žádaná výchozí látka (sloučenina 12e).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz) δ 1,55 - 1,75 (m, 1H), 1,75 (d, 1H), 2,50 - 2,72 (m, 1H), 3,12 - 3,43 (m, 1H), 3,65 - 3,90 (m, 2H), 4,03 - 4,20 (m, 2H), 4,54 (d, 2H), 4,63 (m, 2H), 5,17 - 5,37 (m, 2H), 5,85 - 6,03 (m, 1H), 6,63 (š, 1H), 7,10 - 7,55 (m, 5H),

8,5 (š, 2H).

MS (FAB) m/z 528 (M+H)⁺.

Analýza pro C₂₂H₂₃CbN3O₄S->. 0,33C₄H_I0O.0,3C7HF₃O₂ 586,5:

Vypočteno: C 49,0; H, 4,5; N, 7,2 %

Nalezeno: C 49,0; H, 4,6; N, 7,2 %.

Příklad 13 (viz schéma 13)

5-[N-(3,4-Dichlorbenzyl)karbamoyl]-N-((2S,4S)-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)pyridin-2karboxamid

-30CZ 293694 B6

5-[N-(3,4-Dichlorbenzyl)karbamoyl]-N-((2S,4S)-l-yllyloxykarbonyl-4-sulfanyIpyrrolidin-2ylmethyl)pyridin-2-karboxamid (sloučenina 13e) se zpracuje trimethylsilyljodidem podobným způsobem jako sloučenina 12e v příkladu 12. Žádaný produkt (sloučenina 13) se získá jako hnědá pevná látka (26 %).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆; 200 MHz) δ 1,70 - 1,82 (m, 1H),

3,15 - 3,40 (m, 2H), 3,55 - 3,90 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 7,35 (dd, 1H), 7,60 (m, 2H), 8,18 (d, 1H),

8,47 (dd, 1H), 8,75 (š, 1H), 9,10 (d, 1H), 9,28 (t, 2H), 9,42 (t, 1H).

MS (FAB) m/z 439 (M+H)⁺.

Analýza pro Ci₉H₂₀CI₂N₄O₂S.l,5HI. 0,33C₄H_ioO 655,7:

Vypočteno: C, 37,4; H, 3,4; N, 8,1 %

Nalezeno: C, 37,2; H, 3,7; N, 8,5 %.

Sloučenina 13e používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Methylester 5chlorkarbonylpyridin-2-karboxylové kyseliny reaguje s 3,4-dichlorbenzenem analogicky s přípravou sloučeniny 12a v příkladu 12 a získá se methylester 5-(3,4-dichlrobenzylkarbamoyl)pyridin-2-karboxylové kyseliny (sloučenina 13a) jako krémová pevná látka (61 %). Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz), d, 4,05 (s, 3H), 4,62 (d, 2H), 6,80 (t(š), 1H), 7,22 (dd, 1H), 7,43 (m, 2H), 8,20 (d, 1H), 8,30 (m, 1H), 9,08 (d, 1H). MS (Cl) m/z 339 (M+H)⁺. Analýza pro Ci₅Hi₂C1₂N₂O₃ 339:

Vypočteno: C, 53,2; H, 3,5; N, 8,1 %

Nalezeno: C, 53,1; H, 3,6; N, 8,3 %.

Sloučenina 13a se zpracuje analogickým způsobem jako sloučenina 12a v příkladu 12 a získá se 5-(3,4-dichíorbenzylkarbamoyl)pyridin-2-karboxylová kyselina (sloučenina 13b) jako ne zcela bílá pevná látka (82 %).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆; 200 MHz) δ 4,50 (d, 2H), 7,33 (dd, 1H), 7,58 (m, 2H), 8,13 (d, 1H), 8,37 (dd, 1H), 9,12 (d, 1H), 9,40 (t, 1H).

MS (Cl) m/z 325 (M+H)⁺.

Analýza pro Ci₄Hi₀C1₂N₂O₃.H₂O 343:

Vypočteno: C, 48,9; H, 3,5; N, 8,0 %

Nalezeno: C, 48,9; H, 3,5; N, 8,2 %.

Sloučenina 13b se zpracuje analogickým způsobem jako sloučenina 12b v příkladu 12 a získá se 5-(3,4-dichlorbenzylkarbamoyl)pyridin-2-karbonylchlorid (sloučenina 13c), který se použije v další reakci.

Sloučenina 13c reaguje se sloučeninou 15b (příklad 15) podobným způsobem jako sloučenina 12c v příkladu 12 a získá se 5-[N-(3,4-dichlorben2yI)karbamoyl]-N-((2S,4S)-l-allyloxykarbonyl-4-BOCsuIfanylpyrro!idin-2-ylmethyl)pyridin-2-karboxamid jako světle hnědá pevná látka (sloučenina 13d) ve výtěžku 81%.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz) δ 1,50 (s, 9H), 1,73 - 1,90 (m, 1H), 2,50 - 2,65 (m, 1H), 3,20 - 3,30 (m, 1H), 3,62 - 3,80 (m, 2H), 4,10 - 4,27 (m, 2H), 4,65 (d, 4H), 5,18 - 5,38 (m, 2H), 5,83 - 6,05 (m, 1H), 6,80 (t (š), 1H), 7,20 - 7,28 (m, 2H), 7,40 - 7,48 (m, 2H), 8,23 (s, 2H), 8,75 (š, 1H), 8,98 (d, 1H).

MS (FAB) m/z 623 (M+H)⁺.

Analýza pro C₂sH₃₂C1₂N₄O6S 623:

Vypočteno: C, 53,8; H, 5,1; N, 8,9 %

Nalezeno: C, 53,9; H, 5,2; N, 9,0 %.

teplota tání 136 až 137,5 °C.

Sloučenina 13d se zpracuje podobným způsobem jako sloučenina 12d v příkladu 12 a získá se žádaná výchozí látka 13d jako světle žlutá pevná látka (64 %).

-31 CZ 293694 B6

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz) δ 1,70 (d, 1H), 1,80 - 2,0 (m,

1H), 2,52 - 2,65 (m, 1H), 3,05 - 3,25 (m, 2H), 3,60 - 3,85 (m, 2H), 4,05 - 4,20 (m, 2H), 4,60 (d,

4H), 5,18 - 5,33 (m, 2H), 5,85 - 6,03 (m, 1H), 6,80 (š, 1H), 7,20 (dd, 1H), 7,40 - 7,47 (m, 2H),

8,23 (s, 2H), 8,78 (š, 1H), 9,0 (s, 1H).

MS (FAB) m/z 523 (M+H)⁺.

Analýza ro C2₃H₂4Cl₂N4O4S.0,lC₂HF₃O2 534,4:

Vypočteno. C, 52,4; H, 4,6; N, 10,3 %

Nalezeno: C, 52,1; H, 4,5; N, 10,5 %.

Teplota tání 101 až 105 °C.

Příklad 14 (viz schéma 14)

1- Hydroxy-4-[((2S,4S),4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)aminosulfonyl]naftaIen-2-karboxylová kyselina

K míchanému roztoku 47,5 mg (0,1 mmol) l-hydroxy-4—[((2S,4S),l,-allyloxykarbonyl-4sulfanylpyrrolidin-2-yl-methyl)aminosulfonyl]naftalen-2-karboxylové kyseliny (sloučenina 14c) v 10 ml dichlormethanu se přidá 0,56 ml (0,4 mmol) TMSI. Po 6 hodinách se rozpouštědlo a přebytek TMSI odstraní ve vakuu. Ke zbytku se přidá 5 ml methanolu a potom se odstraní ve vakuu z roztoku. Zbytek se rozetře s diethyletherem, filtruje se a po vysušení ve vakuu se získá žádaný produkt (sloučenina 14) jako hnědá pevná látka (74 %).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-de; 250 MHz) δ 1,45 - 1,62 (m, 1H), 2,25 - 2,45 (m, 1H), 2,90 - 3,25 (m, 3H), 3,45 - 3,70 (m, 2H), 7,72 (m, 1H), 7,85 (m, 1H), 8,12 (m, 1H), 8,38 - 8,60 (m, 2H), 9,15 (š, 1H).

MS (FAB) m/z 383 (M+H)⁺.

Analýza pro C16H18N2O5S7.1,25 ΗΙ.0,5 C4H10O 579:

Vypočteno: C, 37,θ'; H, 4,1; N, 4,8 %

Nalezeno. C, 37,3; H, 4,2; N, 4,8 %.

Sloučenina 14c používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Sloučenina 15b (příklad 15) a 1-hydroxy—4-chlorsulfonylnaftalen-2-karboxylová kyselina (14a) se kopulují podobným způsobem jako v ekvivalentním stupni příkladu 15 a získá se l-hydroxy-4[((2S,4S),l-allyloxykarbonyl-4-BOCsulfanylpyrrolidin-2-yl-methyl)aminosulfonyl]naftalen-

2- karboxylová kyselina (sloučenina 14b) jako světle hnědá pevná látka (80 %).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz) δ 1,45 (s, 9H), 1,50 - 1,75 (m, 1H), 2,28 - 2,42 (m, 1H), 2,96 - 3,10 (m, 2H), 3,48 - 3,60 (m, 1H), 3,80 - 3,90 (m, 1H), 3,95 4,05 (m, 1H), 4,47 (m, 2H), 4,53 - 4,63 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,67 (m, 1H), 8,50 (m, 2H), 8,70 (m, 1H).

MS (FAB) M+Na⁺ 589, jiné 317, 261.

Analýza pro C25H₃qN2O9S2.H₂O.0,8C₃H]5N 664,8:

Vypočteno: C 53,7, H,’6,7; N, 5,9 %

Nalezeno: C 53,8; H, 6,6; N, 5,9 %.

ml (10,0 mmol) 2M vodného hydroxidu sodného se přidá k míchanému roztoku 333 mg (0,5 mmol) sloučeniny 4b v 5 ml methanolu. Po 42 hodinách se roztok odpaří do sucha a zbytek se rozpustí v 10 ml vody. Potom se upraví pomocí 2M kyseliny chlorovodíkové pH na hodnotu 2 a pevná látka se odfiltruje, promyje se vodou a po vysušení ve vakuu se získá žádaná výchozí látka (sloučenina 14c) jako bílá pevná látka (72 %).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 200 MHz) δ 1,48 - 1,70 (m, 2H), 2,38 - 2,52 (m, 1H), 2,85 - 3,40 (m, ?H), 3,90 - 4,05 (m, 2H), 4,40 - 4,60 (m, 3H), 5,10 - 5,35 (m, 3H), 5,70 - 5,95 (m, 2H), 6,20 - 6,45 (š, lh), 7,57 -7,90 (m, 3H), 8,43 - 8,70 (m, 4H)MS (FAB) m/z 467 (M+H)⁺.

-32CZ 293694 B6

Analýza pro C₂₀H₂₂N₂O₇S₂.0,5H₂O 475: Vypočteno: C 50,6; H, 4,8; N, 6,0 %

Nalezeno: C 50,5; H, 4,8; N, 5,9 %.

Příklad 15 (viz schéma 15)

Methylester (2S)-2-{3-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-yl-methyl)sulfamoyl]benzoylamino}-4-methylsulfanylaminobutanové kyseliny

2,0 ml TFA se přidá při teplotě místnosti a pod argonem k míchanému roztoku 101 mg (0,18 mmol) methylesteru (2S)-2—4-methylsulfanylaminobutanové kyseliny (sloučenina 15d) ve 2 ml CH₂C1₂. Po 1 hodině se reakční směs koncentruje do sucha, zpracuje se azeotropickou destilací s toluenem (3x10 ml) a po vysušení se získá 101,8 mg žádaného produktu (sloučenina 15) jako bezbarvá guma (99 %).

‘H Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃; 250 MHz) δ 1,6-1,8 (1H, m), 2,0 (lh, d, SH), 2,1 - 2,4 (5H, m), 2,52 - 2,65 (3H, m), 3,15 - 3,4 (3H, m), 3,45 - 3,65 (1H, m), 3,7 - 3,85 (4H, m), 3,9 - 4,1 (1H, m), 4,85 - 5,0 (1H, m), 7,55 - 7,7 (2H, m), 7,8 (1H, s), 8,0 (1H, d), 8,1 (1H, d), 8,3 (1 H,s), 9,0-9,4 (lH,s), 10,0 -10,4(lH,s).

MS (ESP⁺) m/z 462 (M+H)⁺.

Sloučenina 15d používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. 3,0 ml (21,5 mmol) triethylaminu se přidá k 4,37 g (21,8 mmol) suspenze methylesteru L-methioninu.HCl v 50 ml CH₂C1₂. Vzniklá směs se nechá míchat 30 minut při teplotě místnosti a potom se filtruje. Filtráty se potom přidají při teplotě 0 °C pod atmosférou argonu k míchanému roztoku 5,23 g (21,9 mmol) 3-chlorsulfonylbenzoylchloridu 7,6 ml (54,7 mmol) triethylaminu v 50 ml CH₂C1₂. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a potom se ochladí 100 ml směsi vody a ledu. Organické látky se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a koncentrují se na viskózní hnědou gumu. Tato guma se čistí mžikovou chromatografií na SiO₂ 9385 za použití elučního činidla tvořeného 50% EtOAc/i-hexan a získá se 2,88 g (36 %) methylesteru (2S)-2-(3-chlorsulfonylbenzoylamino)-4-methylsulfonylbutanové kyseliny (sloučenina 15a) jako viskózní oranžový olej.

*H Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 250 MHz), δ 2,1 - 2,2 (5H, m), 2,65 (2H, t), 3,83 (3H, s), 4,95 (1H, m), 7,23 (1H, d), 7,74 (1H, t), 8,2 (2H, m), 8,47 (1H, m).

MS (Cl) m/z 366 (M+H)⁺, 332, 300.

Roztok 1,53 g (4,18 mmol) sloučeniny 15a v 20 ml CH₂CI₂ se přidá při teplotě 0 °C a pod atmosférou argonu k míchanému roztoku 1,32 g (4,18 mmol) allylesteru (2S,4S)-2-aminomethyl-4-BOCsulfanylpyrrolidin-l-karboxyIové kyseliny (sloučenina 15b; připraven jak je popsáno v Mezinárodní patentové přihlášce WO 92/17480, viz str. 39 až 41) a 1,5 ml (9,0 mmol) ('Pr)₂Net v 30 ml CH₂C1₂. Vzniklý roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin. Reakční směs se promyje 100 ml vody, suší se nad MgSO₄ a koncentruje se na viskózní bílou gumu. Tato guma se čistí mžikovou chromatografií na SiO₂ 9385 za použití eluování s tradientem 35-50% EtOAc/i-hexan a získá se 2,19 g (81,3%) allylesteru (2S,4S)-4-BOCsulfanyl-2pyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 15c) jako bezbarvá pěna.

’H Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz) δ 1,5 (9H, s), 1,65 - 1,9 (1H, s), 2,05 - 2,35 (5H, m), 2,4 - 2,7 (3H, m), 3,3 - 3,4 (3H, m), 3,55 - 3,75 (1H, m), 3,8 (3H, s), 3,9 - 4,2 (2H, m), 4,55 (2H, d), 4,98 (1H, m), 5,15 - 5,35 (2H, m), 5,8 - 6,0 (1H, m), 6,5 (1H, s), 7,4 (1H, s), 7,55 (1H, t), 7,9 - 8,05 (2H, m), 8,25 (1H, m).

MS (FAB) M/z 646 (M+H)⁺, 590, 568, 546, 230.

Analýza pro C₂7H₃₉N₃O9S₃.0,3CH₂Ck Vypočteno: C, 48,8; H, 5,95; N, 6,26 %

Nalezeno: C, 48,9; H, 6,2; N, 6,0 %.

-33 CZ 293694 B6

595 ml (2,1 mmol) tri-n-butylcínhydridu se přidá k míchanému roztoku 1,18 g (1,8 mmol) sloučeniny 15c a 13 mg (0,018 mmol) (PPh)₃PdCl₂ ve směsi 0,5 ml vody a 100 ml CH₂C1₂.

Reakční směs se nechá míchat 10 minut, suší se nad MgSO₄, filtruje se a koncentruje se na hnědý olej. Tento olej se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu 9385 eluováním s gradientem

0-10 % EtOAc/i-hexan a získá se 751 mg (73 %) žádané látky (sloučenina 15d) jako bílá pěna.

’H Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI₃+CD₃COOD, 250 MHz, δ 1,5 (9H, s), 1,85 - 1,97 (1H, m), 2,1 - 2,35 (5H, m), 2,45 - 2,7 (3H, m), 3,1 - 3,4 (3H, m), 3,65 - 4,25 (6H, m), 4,9 - 5,0 (1H, m), 7,63 (1H, t), 7,97 - 8,05 (1H, m), 8,1 - 8,17 (1H, m), 8,35 - 8,42 (1H, m).

MS (ESP⁺) m/z 562 (M+H)⁺, 462.

Analýza pro C₂₃H₃₅N₃O₇S₃:

Vypočteno: C, 49,2; H, 6,28; N, 7,48 %

Nalezeno: C, 49,4; H, 6,3; N, 7,20 %.

Příklad 16 (viz schéma 16) (2S), 2-{3-[([2S,4S]^4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)sulfamoyl]benzoylamino}-4-methylsulfanylaminobutanová kyselina

2,0 ml (4,0 mmol) 2N NaOH se přidá při teplotě místnosti pod atmosférou argonu k 200 mg (0,36 mmol) sloučeniny 15d (připravené v příkladu 15) v MeOH. Po 18 hodinách se reakční směs koncentruje k odstranění MeOH. Vzniklý zbytek se rozpustí v H₂O a okyselí se 2N HCI na pH 3. Vzniklý zbytek se čistí HPLC v reverzní fázi (přípravná kolona Dynamax C18.8p) eluováním s gradientem 0-40 % MeOH/H₂O. Frakce s produktem se koncentrují a zpracují se azeotropickou destilací s toluenem (3 x 25 ml) a získá se bezbarvá sklovitá látka, které se rozetře s 25 ml Et₂O, filtruje se a po vysušení se získá 85,2 mg (54 %) žádaného produktu (sloučenina 16) jako bílý prášek.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-de+CD₃COOD, 250 MHz) δ 1,45 - 1,65 (1H, m), 2,0 - 2,2 (5H, m), 2,3 - 2,7 (3H+DMSO, m), 2,95 - 3,2 (3H, m), 3,35 - 4,2 (3H, m),

4,5 - 4,65 (1H, m), 7,65 - 7,8 (1H, m), 7,9 - 8,05 (1H, m), 8,1 - 8,25 (1H, m), 8,3 - 8,4 (1H, m). MS (FAB) m/z 448 (M+H)⁺.

Analýza pro C_I7H₂₅N₃O5S₃:

Vypočteno: C, 45,6; H, 5,63; N, 9,39 %

Nalezeno: C, 45,5; H, 5,8; N, 9,1 %.

Příklad 17 (viz schéma 17)

N-(3,4—Dichlorfenyl)-3-[([2S,4S], 4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)sulfamoyl]benzamid

N-(3,4-Dichlorbenzyl)-3-[([2S,4S],4-BOCsulfanyIpynOlidin-2-ylmethyl)sulfamoyl]benzamid (sloučenina 17c), u kterého se odstraní pomocí TFA chránící skupina (analogicky jako u sloučeniny 15d v příkladu 15) poskytne po rozetření s Et₂O v 97% výtěžku žádaný produkt (sloučenina 17).

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz) δ 1,5 - 1,8 (1H, m), 1,8-2,2 (2H+H₂O, m, SH, NH), 2,5 - 2,7 (1H, m), 3,1 - 3,35 (3H, m), 3,4 - 4,1 (3H, m), 4,55 (2H, d),

7,15 (1H, dd), 7,2 (1H, s), 7,32 (1H, d), 7,4 (1H, d), 7,65 (lH+PPh₃PO, m), 7,9 (1H, m), 8,2 (lH,m), 8,35 (1H, m), 8,5-9,3 (1H, s, NH), 10,3 - 10,7 (1H, s, NH).

MS (ESP⁺) m/z 474 (M+H)⁺, 279 (Ph₃PO).

Sloučenina 17c používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. 3,4— Dichlorbenzylamin se kopuluje s chlorsulfonylbenzoylchloridem (analogicky jako u sloučeniny 15a v příkladu 15) a získá se 3-(3,4-dichlorbenzylkarbamoyl)benzensulfonylchlorid (sloučenina 17a) v 28% výtěžku.

-34CZ 293694 Β6 'Η nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃,250 MHz) δ 64,6 (2H, d), 6,6 (1H, s, NH),

7,2 (1H, dd), 7,4 - 7,5 (2H, m), 7,75 (1H, t), 8,15 - 8,25 (2H, m), 8,4 (1H, m).

MS (FAB) m/z 378 (M+H)⁺, 380.

Sloučenina 15b (příklad 15) se kopuluje se sloučeninou 17a analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 15 a získá se N-(3,4-dichlorbenzyl)-3-[([2S,4S],4-BOCsulfanylpyrrolidin-2ylmethyl)sulfamoyl]benzamid (sloučenina 17b) v 72,5% výtěžku.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz) δ 1,5 (9H, s), 1,6 - 1,9 (1H+H₂O, m), 2,4 - 2,6 (1H, m), 3,1 - 3,3 (3H, m), 3,6-3,7 (1H, m), 3,8 - 4,1 (2H, m), 4,4 (2H, d), 4,6 (2H, d), 5,1 - 5,3 (2H, m), 5,7 - 5,95 (1H, m), 6,08 (1H, s, NH), 7,2 (1H, dd), 7,35 -

7,7 (4H, m), 7,95 (1H, d), 8,15 (1H, d), 8,25 - 8,35 (1H, s, NH).

MS (FAB) m/z 658 (M+H)⁺.

Analýza pro C₂₈H₃₃N₃C1₂O₇S₂:

Vypočteno: C, 51,1; H, 5,05; N, 6,38 %

Nalezeno: C, 50,8; H, 5,2; N, 6,2 %.

Sloučenina 17b se zbaví chránící skupiny, analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 15, a získá se žádaná výchozí látka (sloučenina 17c) v 70% výtěžku.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 250 MHz) δ 1,1 - 1,45 (1H, m), 1,5 (9H, s), 2,25 - 2,4 (1H, m), 2,6 - 2,9 (4H, m), 3,02 (1H, dd), 3,25 - 3,4 (2H, m), 3,45-3,6 (lH,m), 4,6 (2H, m), 7,05 (1H, m), 7,2 (1H, dd), 7,4 (1H, d), 7,45 (1H, d), 7,6 (1H, t), 7,95 (lH,d), 8,1 (1H, d), 8,25 (1H, s).

MS (ESP⁺) m/z 574 (M+H)⁺, 574,279 (PPh₃O).

Příklad 18 (schéma 18)

N-(3,4-Dichlorbenzyl)-N'-([2S,4S],4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)izoftalamid

N-(3,4-Dichlorbenzyl)-N'-([2S,4S],4-BOCsulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)izoftalamid (sloučenina 18e) se zbaví chránící skupiny sTFA (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 15) a po rozetření s Et₂O se získá žádaný produkt (sloučenina 18) v 100% výtěžku.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃+CD₃COOD, 250 MHz) δ 1,75- 1,9 (1H, m), 2,6 - 2,75 (1H, m), 3,2 - 3,35 (1H, m), 3,45 - 3,65 (1H, m), 3,7 - 3,95 (3H, m), 4,05 -

4,15 (1H, m), 4,6 (2H, s), 7,2 (1H, dd), 7,4 (1H, d), 7,55 (1H, t), 7,95 - 8,05 (1H, m), 8,1 - 8,2 (1H, m), 8,4 (1H, m).

MS (ESP⁺) m/z 438 (M+H)⁺.

Sloučenina 18e používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Suspenze 2,65 g (14,7 mmol) monomethylesteru kyseliny izoftalové (sloučenina 18a) ve 100 ml CH₂C1₂ a 10 kapkách DMF se zpracuje při teplotě 0 °C a pod argonem 2,6 ml (29,8 mmol) oxalylchloridu. Reakční směs se nechá během 18 hodin ohřát na teplotu místnosti. Vzniklý roztok se koncentruje azeotropickou destilací s toluenem a získá se krystalická žlutá pevná látka. Tato látka se znovu rozpustí ve 100 ml CH₂C1₂ a po kapkách se přidá při teplotě 0 °C a pod argonem k míchanému roztoku 2,6 g (14,7 mmol) 3,4-dichlorbenzylaminu a 5 ml (35,9 mmol) Et₃N ve 100 ml CH₂C1₂. Vzniklý roztok se nechá během 4 hodin ohřát na teplotu místnosti, promyje se 50 ml IN HCI, 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a koncentruje se na oranžový olej. Ten se pak čistí mžikovou chromatografií na SiO₂9385 při gradientu 25-50% EtOAc/i-hexan a získá se 3,99 g (80 %) methylesteru 3-(3,4dichlorbenzylkarbamoyl)benzoové kyseliny jako světle žlutý olej.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃,200 MHz) δ 3,9 (3H, s), 4,6 (2H, d), 6,6 -

6,8 (1H, t, NH), 7,18 (1H, dd), 7,38 - 7,45 (2H, m), 7,54 (1H, t), 8,0 - 8,1 (1H, m), 8,13 - 8,23 (1H, m), 8,35-8,42 (1H, m).

-35CZ 293694 B6

MS (Cl) m/z 338 (M+H)⁺.

Míchaný roztok 3,85 g (11,4 mmol) sloučeniny 18b ve 100 ml MeOH se při teplotě místnosti pod argonem zpracuje 12ml (24 mmol) 2N NaOH. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 5 4 hodiny, koncentruje se na 1/5 objemu a okyselí se na pH 4 pomocí 2N HC1. Vzniklá sraženina se sebere filtrací, promyje se vodou (2 x 25 ml) a po vysušení ve vysokém vakuu se získá 2,9 g (79 %) 3-(3,4-dichlorbenzylkarbamoyl)benzoové kyseliny (sloučenina 18c) jako bílý prášek.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 200 MHz) δ 4,49 (2H, d), 7,32 (1H, dd), 7,5 - 7,7 (3H, m), 8,0 - 8,2 (2H, m), 8,42 - 8,53 (1H, m), 9,27 (1H, t, NH), 13,0 - 13,4 ίο (1H, s, COOH).

MS (ESP⁺) m/z 324 (M+H)⁺, 159.

Analýza pro C]5HnNO3Cl₂.0,4H₂O:

Vypočteno: C, 54,4; H, 3,59; N, 4,23 %

Nalezeno: C, 54,0; H, 3,2; N, 4,2 %.

655 mg (3,4 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu a 463 mg (3,4 mmol) hydroxybenztriazolu se přidá po částech, při teplotě 0 °C a pod argonem k míchanému roztoku 1,0 g (3,1 mmol) sloučeniny 18c v 20 ml DMF. Po 30 minutách se přidá po kapkách roztok 1,13 g (3,57 mmol) sloučeniny 15b ve 20 ml DMF a potom 375 ml (3,4 mmol) N20 methylmorfolinu. Směs se nechá ohřát během 4 hodin na teplotu místnosti. Vzniklá reakční směs se koncentruje na 1/5 objemu a zředí se 100 ml EtOAc. Tento roztok se promyje postupně 100 ml IN kyseliny citrónové, 100 ml nasyceného roztoku vodného hydrogenuhličitanu sodného, 100 ml vody a 100 ml solanky, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a koncentruje na bílou pěnu. Tato pěna se potom čistí mžikovou chromatografií na SiO₂ 9385 eluci s gradientem 50-75% 25 EtOAc/i-hexanu a získá se 1,57 g (82 %) allylesteru (2S,4S),4-BOCsulfanyl-2-{[3-(3,4dichlorbenzylkarbamoyl)benzoy!amino]methyl}pyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 18d) jako bílá pěna.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCh, 250 MHz) δ 1,5 (9H, s), 1,6-1,9 (1H, m), 2,55 - 2,75 (1H, m), 3,2 - 3,6 (2H, m), 3,65 - 3,9 (2H, m), 4,1 - 4,25 (2H, m), 4,5 - 4,65 30 (4H, m), 5,15 - 5,35 (2H, m), 5,38 - 6,0 (1H,) 6,87 (1H, t, NH), 7,2 (1H, dd), 7,4 (1H, d), 7,45 (1H, d), 7,5 5 (1H, t), 7,95 (1H, d), 8,07 (1H, d), 8,25 (IH, s), 8,3 5 - 8,6 (1H, s, NH).

MS (ESP⁺) m/z 622 (M+H)⁺, 566, 522.

Analýza pro C29H33N3CI2O6S:

Vypočteno: C, 55,9; H, 5,34; N, 6,75 %

Nalezeno: C, 56,1; H, 5,6; N, 6,6 %.

Sloučenina 18d se zbaví chránící skupiny, analogicky jako v ekvivalentním příkladu 15 a získá se žádaná výchozí látka (sloučenina 18e) v 67% výtěžku.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz) δ 1,2 - 1,6 (10H, m), 2,25 40 2,55 (2H, mlH+lNH), 2,9 (1H, q), 3,3 - 3,75 (5H, m), 4,6 (2H, d), 6,9 - 7,05 (1H, m, NH),

7,05 - 7,15 (1H, m, NH), 7,2 (1H, dd), 7,4 (1H, d), 7,45 (1H, d), 7,52 (1H, t), 7,9 - 8,05 (2H, m), 8,23 (1H, m).

MS (ESP⁺) m/z 538 (M+H)⁺, 438.

Příklad 19 (viz schéma 19)

Allylester (2S,4S),4-sulfanyl-2-[(3-methoxykarbonylbenzoylamino)methyl]pyrrolidin-l-karboxylové kyseliny

300 mg (0,63 mmol) allylesteru (2S,4S),4—BOC-sulfanyl-2-[(methoxykarbonylbenzoylamino)methyl]pyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 19a) se rozpustí při teplotě místnosti pod argonem v 5 ml TFA. Reakční směs se koncentruje azeotropickou destilací s toluenem (3 x 20 ml) a získá se 250 mg (105 %) žádaného produktu (sloučenina 19).

-36CZ 293694 B6 'Η nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3, 200 MHz) δ 1,6 - 1,85 (2H, m, CH+SH),

2,55 - 2,85 (2H, m), 3,1 - 3,6 (3H, m), 3,92 (3H, š), 4,0 - 4,4 (2H, m), 4,65 (2H, d), 5,15 - 5,4 (2H, m), 5,8-6,1 (1H, m), 7,53 (lH,t), 8,0-8,1 (1H, m), 8,1-8,25 (1H, m), 8,3-8,7 (2H, m,

Ar-H+NH).

MS (FAB) m/z 379 (M+H)⁺, 163.

Sloučenina 19a používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Suspenze 2,5 g (13,89 mmol) monomethylesteru kyseliny izoftalové (sloučenina 18a, příklad 18) v 50 ml CH₂C1₂ a 10 kapkách DMF se zpracuje 1,35 ml (15,5 mmol) při teplotě 0 °C pod argonem oxalylchloridem. Reakční směs se nechá ohřát během 18 hodin na teplotu místnosti. Vzniklý roztok se koncentruje azeotropickou destilací s toluenem a získá se krystalická žlutá pevná látka. Tato látka se rozpustí znovu v 50 ml CH₂CI₂ a po kapkách se přidá při teplotě 0 °C pod argonem k míchanému roztoku 2,0 g (6,33 mmol) allylesteru (2S,4S)-2-aminomethyl-4-BOCsulfanylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 15b, příklad 15) a 2,2 ml ('Pr)₂NEt. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin, potom se promyje vodou (2 x 50 ml), suší se nadsíranem hořečnatým, filtruje se a koncentruje se na tmavohnědý olej. Tento olej se čistí mžikovou chromatografií na SiO₂ 9385 elucí s gradientem 25-50%EtOAc/i-hexan a získá se 1,81 g (60 % žádané výchozí látky (sloučenina 19a) jako světle žlutý olej.

'Η nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz) δ 1,5 (9H, s), 1,65- 1,9 (1H, m), 2,55 - 2,8 (1H, m), 3,3 (1H, q), 3,4 - 3,65 (1H, m), 3,65 - 3,9 (2H, m), 3,95 (3H, s), 4,05 - 4,35 (2H, m), 4,6 - 4,7 (2H, m), 5,15 - 5,4 (2H, m), 5,8 - 6,1 (1H, m), 7,52 (1H, t), 8,02 (1H, dd), 8,15 (1H, dd), 8,25 - 8,5 (1H, šs,NH), 8,55 (1H, šs).

MS (FAB) m/z 479 (M+H)⁺, 423,163.

Analýza pro C73H30N2O7S:

Vypočteno: C, 57,7; H, 6,32; N, 5,85 %

Nalezeno: C, 57,5; H, 6,4; N, 5,7 %.

Příklad 20 (viz schéma 20)

N-([2S,4S],4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3-fenoxybenzamid

3-Fenoxybenzoová kyselina se kopuluje s allylesterem (2S,4S)-2-aminomethyl-4-BOCsulfanylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 15b, příklad 15) a potom následuje selektivní odstranění chránící skupiny N-allyloxykarbonylové skupiny a odstranění BOC skupiny (analogicky k ekvivalentním stupňům v příkladu 15) a získá se žádaný produkt (sloučenina 20). Nukleární magnetickorezonanční spektrum CFC1₃ δ (1H, m), 2,72 (1H, m), 3,01 - 3,31 (1H, šd), 3,69- 3,97 (4H, m), 4,3 (1H, šs), 6,92 - 7,17 (4,5H, m, Ar), 7,23 - 7,45 (5,5H, m, Ar), 7,56 (1H, m), 7,68 (1H, t), 8,02 - 8,29 (1H, 2t), 9,02 - 9,29 (1H, 2 šs) + ether.

Analýza pro Ci₈H₂oN₂02S.HI

Vypočteno: C, 47,33; H, 4,6; N, 6,13 %

Nalezeno: C, 47,8; H, 4,5; N, 6,1 %.

Příklad 21 (viz schéma 21)

Dimethylester 5-{([2S,4S],l-allyloxykarbonyl-4-sulfanylpyrrolidin-2-yImethyl)karbamoyl}izoftalové kyseliny

Dimethylester benzen-l,3,5-trikarboxylové kyseliny se kopuluje s allylesterem (2S,4S)-2aminomethyM—BOCsulfanylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 15b, příklad 15) a potom následuje odstranění BOC skupiny (analogicky k ekvivalentním stupňům příkladu 15) a získá se žádaný produkt (sloučenina 21).

-37CZ 293694 B6

Nukleární magnetickorezonanční spektrum CDCI₃ δ 1,67 (1H, m), 1,75 (1H, d), 2,66- 2,89 (3H, m), 3,21 (1H, q), 3,27 - 3,37 (1H, m), 3,5 (1H, m), 3,9 (2H, šs), 3,97 (6H, s), 4,08 - 4,27 (2H, m), 4,68 (2H, d), 5,2 - 5,4 (2H, m), 5,88 - 6,06 (1H, m), 8,68 (2H, šs), 8,8 (1H, d).

Analýza pro C20H24N2O7S:

Vypočteno: C, 55,0; H, 5,54; N, 6,42 %

Nalezeno: C, 54,9; H, 5,6; N, 5,75 %.

Příklad 22 (viz schéma 22)

Methylester (2S)—2—(3—[2([2S,4S]—4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]benzoylamino}methylsulfanylbutanové kyseliny g methylesteru (2S)-2-{3-[2}[2S,4S]-4-BOCsulfanylpyrrolidin-2-yl)methylamino]benzoylamino}methylsulfanylbutanové kyseliny se zbaví chránící skupiny (analogicky k ekvivalentnímu stupni v příkladu 15) a získá se žádaný konečný produkt (sloučenina 22).

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3+CD3COOD) δ 1,7 - 1,9 (1H, m), 2,0 - 2,4 (6H+CH3COOH, M), 2,5 - 2,8 (3H, m), 3,23 (1H, q), 3,45 - 3,7 (2H, m), 3,7 - 3,9 (4H, m), 3,95 -4,15 (1H, m), 4,8-4,95 (1H, m), 6,8 (1H, d), 7,05 - 7,18 (2H, m), 7,23 (1H, t).

MS (ESP) m/z 398 (M+H)⁺, 235.

Analýza pro CuF^NsC^.l^STFA:

Vypočteno: C, 45,6; H, 5,27; N, 7,78 %

Nalezeno: C, 45,2; H, 5,3; N, 7,4 %.

Sloučenina 22g používaná jako výchozí látka se připraví následovně.

i) Příprava allylesteru (2S,4S),4-BOCsulfanyl-2-formylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 22b)

5,5 mg (0,0156 mmol) TPAP se přidá k míchané směsi 100 mg (0,31 mmol) allylesteru (2S,4S),4-BOCsulfanyl-2-hydroxymethylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 22a) a 56 mg (0,478 mmol) NMM-0 ve 2 ml CH₂CI₂ a 100 μΐ CH₃CN obsahující 200 mg suchých práškových molekulárních sít A°. Reakční směs se míchá 1 hodinu a potom se koncentruje do sucha. Zbytek se čistí mžikovou chromatografií na SiO₂ (kolona Varian Mega Bond Elut) eluováním směsí 50% EtOAc/i-hexan a získá se 66,3 mg (66,7 %) sloučeniny 22b jako bezbarvá guma, ‘H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3, 250 MHz) δ 1,4 - 1,6 (9H, m), 2,0-2,25 (1H, m), 2,45-2,75 (1H, m), 3,45-3,6 (1H, m), 3,75-3,9 (1H, m), 3,9-4,1 (1H, m), 4,1 4,35 (1H, m), 4,5-4,7 (2H, m), 5,15 - 5,4 (2H, m), 5,75 - 6,05 (1H, m), 9,4 (1H, s, CHO).

MS (Cl) m/z 316 (M+H)⁺, 260,216.

ii) Příprava methylesteru (2S)-2-[(3-aminobenzoyl)amino)—4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 22e)

2,0 g (11,9 mmol) 3-nitrobenzoové kyseliny se kopuluje s 2,6 g (13 mmol) hydrochloridu methylesteru L-methioninu podle způsobu použitém k přípravě sloučeniny 18a a získá se 3,15 g (93,4 % methylesteru (2S)-2-[(3-nitrobenzoyl)amino]-4—methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 22d) jako bílá pevná látka.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz) 2,05 - 2,45 (5H, m), 2,63 (2H,t), 3,82 (3H, s), 4,96 (1H, m), 7,2 (1H, d, NH), 7,65 (1H, t), 8,18 (1H, m), 8,39 (1H, m), 8,65 (1H, m).

MS (ESP) m/z 313 (M+H)⁺, 265, 253.

Analýza pro C13H16N2O5S:

-38CZ 293694 B6

Vypočteno: C, 50,0; H, 5,16, N, 8,97 %

Nalezeno: C, 50,3; H, 5,1; N, 8,9 %.

Míchaný roztok 500 mg (1,62 mmol) sloučeniny 22d v 10 ml MeOH se zpracuje po částech

50 mg odbarvovacího aktivního uhlí a 7 mg (0,026 mmol) hexahydrátu chloridu železitého.

Potom se přidá po kapkách 1,5 ml (19,8 mmol) Ν,Ν-dimethylhydrazinu a vzniklá suspenze se zahřívá pod zpětným chladičem celkem 18 hodin. Reakční směs se potom koncentruje do sucha a zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na SiO₂ (kolona Varian Mega Bond Elut) eluováním 50% EtOAc/i-hexan. Frakce produktu se koncentrují a získá se bezbarvý olej, který krystaluje 10 stáním. Krystaly se rozetřou v Et₂O a získá se 367 mg (81,2 %) sloučeniny 22e jako bílý prášek, který se sebere filtrací.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 250 MHz) δ 2,0 - 2,4 (5H, m), 2,5-2,65 (2H, m), 3,8 (3H, s), 4,9 (1H, m), 6,75 - 6,95 (2H, m, ArH+CONH), 7,05 - 7,3 (3H, m).

MS (ESP) m/z 283 (M+H)⁺ 251, 235, 223.

Analýza pro Ci3Hi_gN₂O₃S:

Vypočteno: C, 55,3; 6,43; N, 9,92 %

Nalezeno: C, 55,5; H, 6,6; N, 9,8%.

iii) Příprava sloučeniny 22g

Roztok obsahující 50 mg (0,17 mmol) sloučeniny 22e a 54 mg (0,17 mmol) sloučeniny 22b v

2,5 ml EtOH se zpracuje 100 mg práškových molekulárních sít 4A a vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Přidá se 10 μΐ kyseliny octové a kyanborohydridu sodného (17 mg, 0,27 mmol) a reakční směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se rozdělí mezi 25 50 ml EtOAc a 50 ml nasyceného vodného hydrogenuhličitanu sodného. Vodná fáze se potom promyje 50 ml EtOAc a spojené organické fáze se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a koncentrují na bezbarvou gumu. Ta se potom čistí mžikovou chromatografií na SiO₂ (kolona Varian Mega Bond Elut) eluováním s gradientem 25-40% EtOAcP/i-hexan a získá se 60,1 mg (60,3 %) methylesteru (2S)-2-{3-[([2S,4S]-l-allyloxykarbonyl—4-BOCsulfanylpyrrolidin-230 ylmethyl)amino]benzoylamino}—4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 22f) jako bezbarvá guma.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3, 200 MHz) δ 1,45 (9H, s, terc.Bu), 1,7 —

1,9 (1H, m), 2,0 - 2,45 (5H, m), 2,45 - 2,7 (3H, m), 3,1 - 3,35 (2H, m), 3,4 - 3,6 (1H, m), 3,6 -

3,85 (4H, m), 4,0 - 4,3 (2H, m), 4,6 (2H, m), 4,8 - 4,95 (1H, m), 5,15 - 5,4 (2H, m), 5,8 - 6,1 35 (1H, m), 6,75 (1H, d), 6,5 - 7,3 (5H, m).

MS (ESP) m/z 582 (M+H)⁺, 482.

U sloučeniny 22f se odstraní chránící skupina (analogicky k ekvivalentnímu stupni v příkladu 15) a získá se žádaná výchozí látka (sloučenina 22g) v 64% výtěžku.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3+D2O) δ 1,15 - 1,95 (10H, m), 1,95-2,15 (4H, m, SMe+H), 2,15 - 2,35 (1H, m), 2,35 - 2,5 (1H, m), 2,55 (2H, t), 2,75 - 2,95 (1H, m), 2,95 - 3,15 (1H, m), 3,15 - 3,55 (3H, m), 3,55 - 3,7 (1H, m), 3,78 (3H, s, COMe), 4,9 (1H, m), 6,73 (1H, m), 6,98 - 7,13 (2H, m), 7,2 (IH, t).

MS (ESP) m/z 498 (M+H)⁺, 398.

Analýza pro C₂3H3₅N3O₅S₂.0,35CH₂Cl₂:

Vypočteno: C, 53,2; H, 6,82; N, 7,97 %

Nalezeno: C, 53,5; H, 7,1; N, 7,5 %.

Příklad 23 (viz schéma 30)

Příprava N-((2S,4S)-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3-methyl-N-(2-naftalen-l-ylethyl)butyramidu (sloučenina 9);

-39CZ 293694 B6

Příprava (2S,4S)-2-{[(-3-methoxypropyl)-(2-naftalen-l-ylethyl)amino]methyl}pyrrolidin-4thiolu (sloučenina 10) a

Příprava (2S,4S)-2-{[(-2-methoxyfenyl)-(2-naftalen-l-ylethyl)amino]methyl}pyrrolidin-45 thiolu (sloučenina 11).

Příprava sloučeniny 9

Roztok 770 mg výchozí látky N-((2S,4S)-4-BOCsulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)-3-methyl-Nío (2-naftalen-l-ylethyl)butyramidu (6) ve 40 ml kyseliny trifluoroctové se míchá při okolní teplotě 10 minut. Kyselina trifluoroctová se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se znovu rozpustí v 90 ml diethyletheru. Přidá se 10 ml 1M etherové HCI a vzniklá suspenze se odstředí. Diethylether se dekantuje a ke zbytku se přidá 90 ml etheru. Tato směs se míchá 5 minut a potom se znovu odstředí. Tato promývací a odstřeďovací procedura se opakuje ještě jednou a vzniklá 15 pevná látka se suší za sníženého tlaku a získá se 600 mg sloučeniny 9.

NMR data v DMSOd₆ d 0,6 (2d, 6H), 0,95 (d, 1H), 1,7 (m, 3H), 2,15 (m, 1H), 1,9 (m, 1H), 3,0 3,85 (m, 10H), 7,3 - 8,4 (m, 7H), 8,9 (šs, 1H), 9,5 (šs, 1H).

Mikroanalýza (1,00 HCI)

Vypočteno: C, 64,9; H, 7,7; N, 6,9 %

Nalezeno: C, 64,7; H, 7,9; N, 6,8 %.

Sloučenina 6 používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem.

1,84 g allylesteru (2S,4S)-2-formyl-4-BOCsulfanylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 1) v 20 ml dichlormethanu se přidá po kapkách během 10 minut ke směsi 1 g 2-naftalen-l25 ylethylaminu, 1,36 g triacetoxyborohydridu a 3 g A° práškových molekulárních sít v 130 ml dichlormethanu ochlazeném na -20 °C a míchá se pod atmosférou argonu. Po skončení přidávání se nechá reakce ohřát na teplotu místnosti a míchá se dalších 18 hodin. Molekulová síta se odfiltrují a filtrát se míchá se 100 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného 5 minut. Směs se rozdělí, organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a zpracuje se mžikovou chromatografií na 30 silikagelu za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 50:50, potom ethylacetátu a hexanu v poměru 80:20 a konečně ethylacetátu a získá se 2,2 g allylesteru (2S,4S)-4-BOCsulfanyl-2-[(2-naftalen-l-ylethylamino)methylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 2) jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) d 1,5 (s, 9H), 1,85 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,8 35 (m, 1H), 3,0 (m, 3H), 3,2 (m, 3H), 3,7 (m, 1H), 4,05 (m, 2H), 4,55 (d, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 7,43 (m, 4H), 7,7 (d, 1H), 7,83 (m, 1H), 8,05 (m, 1H).

Směs 1,2 g sloučeniny 2, 0,61 g izovalerylchloridu a 0,77 g triethylaminu v 75 ml dichlormethanu se míchá 1 hodinu při okolní teplotě. Reakční směs se zpracuje mžikovou chromato40 grafií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 20:80 a získá se 1,3 g sloučeniny 3 jako bezbarvá guma.

6,46 g tributylcínhydridu se přidá po kapkách během 5 minut k míchané směsi 1,23 g sloučeniny 3 a 20 mg bis(trifenylfosfin)palladium(0) chloridu v 75 ml dichlormethanu. Směs se 45 míchá při okolní teplotě po dobu 30 minut a potom se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 50:50, potom ethylacetátu a konečně směsí ethylacetátu a methanolu v poměru 95:5. Produkt se znovu zpracuje chromatograficky na 10 g Izolute® Cl8 za použití elučního činidla tvořeného směsí methanolu a vody v poměru 80:20 a získá se 769 mg výchozí sloučeniny 6 jako pevná 50 látka, teploty tání 86 °C.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) d 0,9 (2d, 6H), 1,3 (m, 1H), 1,5 (s, 9H), 1,8 -

2,5 (m, 6H), 2,9 (m, 1H), 3,05 - 3,9 (m, 9H), 7,25 - 8,35 (m, 7H).

-40CZ 293694 B6

Příprava sloučeniny 10

Roztok 78 mg výchozí látky (2S,4S)-2-{[(3-methoxypropyl)-2-(2-naftalen-l-ylethyI)amino]methyl}pyrrolidin-4-BOC-thiolu (sloučenina 7) v 5 ml kyseliny trifluoroctové se míchá při okolní teplotě 30 minut. Kyselina trifluoroctová se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se zpracuje 5 ml diethyletheru. Ether se oddekantuje a zbytek se suší za sníženého tlaku po dobu 24 hodin a získá se 70 mg žádaného konečného produktu (sloučenina 10) jako bezbarvá guma. Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) d 1,95 (m, 4H), 2,05 (m, 1H), 3,16 - 3,62 (m, 10H), 3,29 (s, 3H), 3,7 (m, 1H), 4,15 (m, 2H), 7,3 - 7,65 (m, 4H), 7,68 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 11,2 (šs, 2H).

Mikroanalýza (2,5TFA.0,5H2O):

Vypočteno: C, 48,2; H, 5,14; N, 4,32 %

Nalezeno: C, 48,5; H, 5,20; N, 4,40 %.

Sloučenina 7, používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Roztok 140 mg 4-methoxybutyraldehydu v 10 ml dichlormethanu se přidá po kapkách ke směsi 250 mg sloučeniny 2, 338 mg triacetoxyborohydridu sodného a 1,0 g molekulových sít 4Á v 30 ml dichlormethanu míchané v argonové atmosféře při teplotě -20 °C. Po skončení přidávání (5 minut) se reakční směs nechá ohřát na okolní teplotu a míchá se 18 hodin. Molekulární síta se odfiltrují a filtrát se promyje nasyceným roztokem 20 ml hydrogenuhličitanu sodného a potom solankou a suší se nad síranem sodným. Roztok se zpracuje sloupcovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 50:50 a získá se 260 mg čiré gumy (sloučenina 4).

Sloučenina 7 se připraví ze sloučeniny 4 analogicky k přípravě sloučeniny 6.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) d 1,35 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,74 (m, 2H), 2,31 (m, 1H), 2,42 - 3,1 (m, 7H), 3,15 - 3,5 (m, 9H), 3,65 (m, 1H), 7,28 - 8,1 (m, 7H).

Příprava sloučeniny 11

Sloučenina 11 se připraví z výchozí sloučeniny (2S,4S)-2-{[(2-(4-methoxyfenyl)methyl)-(2naftalen-l-ylethyl)amino]methyl}pyrrolidin-4-BOCthiolu (sloučenina 8) postupem popsaným pro ekvivalentní stupeň přípravy sloučeniny 10.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) d 1,9 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 2,3 (m, 1H), 3,1 - 3,8 (m, 8H), 3,82 (s, 3H), 4,25 (m, 3H), 6,96 (d, 2H), 7,42 (m, 6H), 7,83 (m, 3H).

Mikroanalýza (2TFA, 0,75 diethylether):

Vypočteno: C, 55,7; H, 5,77; N, 4,06 %

Nalezeno: C, 56,0; H, 5,40; N, 4,50 %.

Výchozí látka pro sloučeninu 11 se připraví následujícím způsobem. Směs 200 mg sloučeniny 2, 133 mg p-methoxybenzylchloridu, 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 20 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě 24 hodin. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se suší, zpracuje se mžikovou chromatografií na silikagelu za použití elučního Činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 80:20 a získá se 140 mg (2S,4S)-1aílyloxykarbonyl-2-{[(2-(4-methoxyfenyl)methyl(2-naftalen-l-ylethyl)amino]methyl}pyrrolidin-4-BOCthiolu (sloučenina 5) jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3) d 1,45 (s, 9H), 2,0 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,53 - 4,15 (m, 10H), 3,8 (s, 3H), 4,6 (m, 4H), 5,25 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 6,85 (m, 3H), 7,3 (m, 6H), 7,75 (m, 2H).

Výchozí látka (sloučenina 8) se připraví ze sloučeniny 5 stejným postupem jako sloučenina 6 ze sloučeniny 3.

Hmot, spektrum (ESP+) m/z 507,0.

-41 CZ 293694 B6

Příklad 24 (viz schéma 31)

Příprava

a) 3-methyl-N-(naftalen-l-ylmethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)butanamidu (sloučenina 23);

b) N-(naftalen-l-ylmethyl-N-([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyI)pentanamidu (sloučenina 24);

c) N-(naftalen-l-ylmethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-2-(pyridin-3yl)acetamidu (sloučenina 27);

d) 3-methyl-N-(naftalen-l-ylmethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)pentanamidu (sloučenina 25);

e) 3-methoxy-N-(naftalen-l-ylmethyl)-N-([2S,4S]—4-sulfanyIpyrrolidin-2-ylmethyl)propanamidu (sloučenina 26);

f) (2S,4S)-2-[{N-(4-methoxybenzyl)-N-(naftalen-l-ylmethyl)amino}methyl]pyrrolidin-4thiolu (sloučenina 54).

a) Příprava sloučeniny 23

Roztok 187 mg výchozí látky 3-methyl-N-(naftalen-1-ylmethyl)-N-([2S,4S]-4-BOCsulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)butanamidu (sloučenina 18) v 10 ml kyseliny trifluoroctové se míchá při okolní teplotě 5 minut. Kyselina trifluoroctová se odpaří za sníženého tlaku a vzniklý zbytek se znovu rozpustí v 5 ml ethylacetátu. Potom se přidají 2ml l,0M kyseliny chlorovodíkové a 5 ml iethyletheru. Směs se odstředí, rozpouštědlo se dekantuje a zbytek se promyje diethyletherem (2x15 ml) a sušením se získá 43 mg hydrochloridu sloučeniny 23 jako ne zcela bílá pevná látka. Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆) δ 0,83 (m, 6H), 0,95 (d, 1H), 1,68 (m, 1H), 2,10 (m, 3H), 2,42 (m, 1H), 3,10 (m, 1H), 3,28 - 3,90 (m, 5H), 5,20 (m, 2H), 7,08 (d, 1H), 7,57 (m, 3H), 7,87 (d, 1H), 8,00 (m, 2H), 9,10 - 9,80 (2 šs, 2H).

Mikroanalýza (1HC1.0,5H₂0):

Vypočteno: C, 62,7; H, 7,52; N, 6,97 %

Nalezeno: C, 62,4; H, 7,6; N, 6,7 %.

Sloučenina 18 používaná jako výchozí látka se připraví následujícím postupem. Roztok 3,11 g allylesteru (2S,4S)-2-formyl-4-BOCsulfanyl-pyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 1) v 60 ml dichlormethanu se přidá po kapkách pod atmosférou argonu a při teplotě -20 °C k míchané směsi 1,71 g l-naftalenmethylaminu, 12 g molekulových sít 4Á a 2 g triacetoxyborohydridu sodného v 200 ml dichlormethanu. Směs se míchá dalších 30 minut při teplotě -20 °C a potom se nechá ohřát na okolní teplotu a míchá se dalších 16 hodin. Směs se filtruje a promyje se vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 200 ml), organická fáze se promyje 200 ml vody, oddělí se a suší nad síranem hořečnatým a čistí se sloupcovou chromatografií za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 30:70 a získá se 2,09 g allylesteru (2S,4S)-2-{[naftalen-l-ylmethyl]amino)methyl}-4—BOC(sulfanylpyrrolidin-l— karboxylové kyseliny (sloučenina 12) jako světle žlutý olej.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 1,50 (s, 9H), 1,55 (m, 1H), 1,90 (m, 1H),

2,50 (m, 1H), 2,90 (m, IH), 3,05 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 4,08 (m, 2H), 4,23 (s, 2H), 4,55 (d, 2H), 5,20 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,47 (m, 4H), 7,77 (m, 1H), 7,86 (m, 1H), 8,13 (m, 1H).

-42CZ 293694 B6

Směs 507 mg sloučeniny 12, 0,3 ml triethylaminu a 0,271 ml izovalerylchloridu v 30 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě 1,5 hodiny a potom se zpracuje mžikovou chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 25:75 a potom ethylacetátu a hexanu v poměru 35:65 a získá se 475 mg 3-methyl-N-(naftalen5 l-ylmethyl)-N-([2S,4S]-l-aIlyloxykarbonyl-4-BOCsulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)butanamidu (sloučenina 13) jako guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 373 °K) δ 0,90 (m, 6H), 1,45 (s, 9H), 1,78 (m, 1H), 2,18 (m, 3H), 2,50 (m, 1H), 3,15 (q, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,70 (m, 2H), 4,03 (q, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 5,10 (m, 4H), 5,80 (m, 1H), 7,20 (d, 1H), 7,50 (m, 3H), 7,80 (d, 1H), ío 8,00 (m,lH).

2,22 ml tributylcínhydridu se přidá po kapkách ke směsi 446 mg sloučeniny 13, 5,8 mg bis— trifenylfosfinpalladiumchloridu v 10 ml dichlormethanu. Směs se míchá při okolní teplotě pod atmosférou argonu 70 minut a potom se zpracuje mžikovou chromatografií za použití elučního 15 činidla tvořeného nejprve směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 50:50 a potom ethylacetátem.

Získaný produkt se znovu chromatografuje za použití 10 g Izolute® C18 a za použití elučního činidla tvořeného směsí methanolu a vody postupně v poměrech 70:30, 75:25 a 80:20 a získá se 197 mg žádané výchozí látky jako guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 373 °K) δ 0,90 (m, 6H), 1,45 (m, 5H), 20 1,60 (m, 1H), 1,68 (m, 2H), 2,12 (m, 2H), 2,25 (d, 2H), 2,40 (m, 1H), 2,60 - 3,85 (m, 8H), 5,14 (s, 2H), 7,20 (d, 1H), 7,50 (m, 3H), 7,83 (m, 1H), 7,93 (m, 1H), 8,03 (m, 1H).

b) Příprava sloučeniny 24

Sloučenina 24 se připraví stejným postupem jako pro sloučeninu 23, ale nahradí se příslušné sloučeniny jak je uvedeno ve schématu 31.

Sloučenina 24:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆) δ 0,85 (m, 3H), 1,15 - 1,75 (m, 5H), 30 2,28 (t, 2H), 3,10 (m, 1H), 3,33 - 3,95 (m, 6H), 5,18 (m, 2H), 7,20 (2d, 1H), 7,55 (m, 3H), 7,85 (d, 1H), 8,00 (m, 2H), 8,95 - 9,90 (2 šs, 2H).

Mikroanalýza (IHCI.0,5 H₂O):

Vypočteno: C, 62,7; H, 7,52; N, 6,97 %

Nalezeno: C, 62,5; H, 7,80; N, 6,8 %.

Sloučenina 14:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 0,90 (m, 3H), 1,12 - 2,10 (m, 6H), 1,48 (s, 9H), 2,26 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 3,00 - 5,70 (m, 12 H), 5,87 (m, 1H), 7,07 - 8,06 (m, 7H).

Sloučenina 19:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-dí, 373 °K) δ 0,84 (m, 3H), 1,30 (m, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,55 (m, 2H), 2,34 (m, 3H), 2,80 (m, 2H), 3,45 (m, 5H), 5,10 (m, 2H), 7,25 (d, 1H),

7,50 (m, 3H), 7,80 (d, 1H), 7,90 (m, 1H), 8,03 (m, 1H).

c) Příprava sloučeniny 27

Sloučenina 27 se připraví stejným způsobem jako v ekvivalentním stupni pro sloučeninu 23 z výchozí látky N-(naftalen-l-ylmethyl-N-{[2S,4S]-4-BOCsulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-2(pyridin-3-yl)acetamidu (sloučenina 22).

Sloučenina 27:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d_Ď) δ 1,70 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,28 - 5,10 (m, 7H), 5,35 (m, 2H), 7,20 - 9,00 (m, 11H), 9,20 (šs, 1H), 10,05 - 10,50 (2 šs, 1H).

-43 CZ 293694 B6

Mikroanalýza (2HCl.2,25H₂O.0,3 diethylether):

Vypočteno: C, 55,10; H, 6,60; N, 7,97 %

Nalezeno: C, 54,80, H, 6,10, N, 7,60 %.

s Sloučenina 22 používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Směs 345 mg sloučeniny 12, 305 mg 4-dimethylaminopyridinu, 262 mg hydrochloridu 3-pyridyloctové kyseliny a 348 mg hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu v 30 ml dichlormethanu se míchá při okolní teplotě pod atmosférou argonu po dobu 16 hodin. Směs se potom čistí mžikovou chromatografíí na silikagelu za použití elučního činidla nejprve směsí ethylacetátu ίο a hexanu v poměru 75:25 a potom ethylacetátu a získá se 394 mg N-(naftalen-l-ylmethyl)-N([2S,4S]-l-allyloxykarbonyl—4-BOC-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-2-(pyridin-3yl)acetamid (sloučenina 17) jako bezbarvá guma.

Sloučenina 17:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 373 °K) δ 1,46 (s, 9H), 1,75 (m, 1H),

2,50 (m, 1H), 3,17 (q, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,75 (m, 4H), 4,04 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 4,45 (m, 2H),

5.15 (m, 4H), 5,83 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,43 (t, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,58 (m, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,95 (m, 2H), 8,40 (d, 2H).

Za použití postupu popsaném pro ekvivalentní stupeň při přípravě sloučeniny 23 se získá žádané výchozí látka (sloučenina 22) ze sloučeniny 17.

Sloučenina 22:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 373 °K) δ 1,45 (s, 9H), 2,38 (m, 1H), 25 2,55 - 4,00 (m, 1 OH), 5,20 (m, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,50 (m, 4H), 7,90 (m, 3H), 8,40 (m, 2H).

d) Příprava sloučeniny 25

Sloučenina 25 se připraví za použití sloučenin 12, 15 a 20 jako meziproduktů stejným způsobem 30 jako v ekvivalentních stupních pro přípravu sloučeniny 27 (viz schéma 31).

Sloučenina 25:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆) δ 0,80 (m, 6H), 0,95 - 4,80 (m, 14H), 5,18 (m, 2H), 7,08 (d, 1H), 7,55 (m, 3H), 7,95 (m, 3H), 8,90- 10,15 (2 šd, 2H).

Mikroanalýza (2HC1.0,2H₂O):

Vypočteno: C, 59,1; H, 7,30; N, 6,27 %

Nalezeno: C, 59,1; H, 6,90; N, 5,9 %.

Sloučenina 15:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 373 °K) δ 0,85 (m, 6H), 1,15 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,75 (m, 1H), 1,90 (m, 1H), 2,17 (m, 1H), 2,30 (m, 1H), 2,50 (m, 1H),

3.15 (q, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,70 (m, 2H), 4,03 (q, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 5,10 (m, 4H),

5.80 (m, 1H), 7,20 (d, 1H), 7,50 (m, 3H), 7,80 (d, 1H), 7,90 (m, 1H), 8,00 (m, 1H).

Sloučenina 20:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 373 °K) δ 0,85 (m, 6H), 1,25 (m, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,93 (m, 1H), 2,27 (m, 3H), 3,40 (m, 6H), 5,13 (m, 2H), 7,25 (d, 1H), 7,50 (m, 3H),

7.80 (d, 1H), 7,90 (m, 1H), 8,04 (m, 1H).

e) Příprava sloučeniny 26

Sloučenina 26 se připraví za použití sloučenin 12, 16 a 21 jako meziproduktů stejným způsobem jako v ekvivalentních stupních pro přípravu sloučeniny 27 (viz schéma 31).

-44CZ 293694 B6

Sloučenina 26:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆) δ 1,70 (m, IH), 2,40 - 4,15 (m, 14H),

5,20 (m, 2H), 7,20 (2d, IH), 7,55 (m, 3H), 7,85 (m, IH), 8,00 (m, 2H), 9,05 - 10,25 (2šd, 2H).

Mikroanalýza (2HC1.0,5H₂O):

Vypočteno: C, 69,5; H, 6,99; N, 6,93 %

Nalezeno: C, 59,3; H, 7,30; N, 6,70 %.

Sloučenina 16:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 373 °K) δ 1,45 (s, 9H). 1,78 (m, IH), 10 2,40 - 3,80 (m, 12H), 4,00 (m, IH), 4,20 (m, IH), 4,45 (m, 2H), 5,10 (m, 4H), 5,80 (m, IH), 7,20 (d, IH), 7,45 (t, IH), 7,50 (m, 2H), 7,80 (d, IH), 7,90 (m, IH), 8,00 (m, IH).

Sloučenina 21:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 373 °K) δ 1,30 (m, IH), 1,48 (s, 9H), 15 2,30 (m, IH), 2,56 - 3,70 (m, 14H), 5,15 (m, 2H), 7,30 (d, IH), 7,47 (t, IH), 7,53 (m, 2H), 7,83 (d, IH), 7,94 (m, IH), 8,05 (m, IH).

f) Příprava sloučeniny 54

Směs 100 mg výchozí látky (2S,4S)-2-[{N-(4-methoxybenzyl)-N-(naftalen-l-ylmethyl)amino}methyl]pyrrolidin—4-BOCthiolu (sloučenina 53) a 5 ml kyseliny trifluoroctové se míchá při okolní teplotě 1 hodinu. Kyselina trifluoroctová se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se znovu odpaří s diethyletherem a získá se 83 mg sloučeniny 54 jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) d 1,5 (m, IH), 1,75 (š.d, IH), 1,95 (m, IH), 25 2,6 (t, IH), 3,05 (m, IH), 3,2 (d, IH), 3,35 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 4,2 (s, 2H), 4,6 (2d, 2H), 6,95 (d, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,6 (m, 4H), 7,9 (m, 3H).

Mikroanalýza (2,5 TFA.0,4 diethylether):

Vypočteno: C, 52,0; H, 5,40; N, 3,90 %

Nalezeno: C, 52,0; H, 4,92; N, 3,96 %.

Výchozí látka se připraví následujícím způsobem. Směs 240 mg sloučeniny 12, 20 ml dimethylformamidu, 80 mg bezvodého uhličitanu draselného a 0,143 ml p-methoxybenzylchloridu se míchá při teplotě 70 °C pod atmosférou argonu po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí sloupcovou chromatografii na silikagelu za použití elučního 35 činidla ethylacetátu a hexanu v poměru 20:80 a získá se 213 mg bezbarvé gumy (2S,4S)—1— allyloxykarbonyl-2-[{N-(4-methoxybenzyl)-N-(naftalen-l-ylmethyl)amino}methyl]pyrroli' din-4-BOCthiolu (sloučenina 52).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3) d, 1,45 (s, 9H), 2,15 (m, IH), 2,5 (m, IH), 2,8 (m, IH), 3,05 (m, IH), 3,5 (m, 2H), 3,8 (šs, 7H), 3,9 (m, IH), 4,2 (m, IH), 4,6 (s, 2H), 5,25 40 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 6,85 (d, 2H), 7,2 (d, 2H), 7,4 (m, 4H), 7,8 (2d, 2H), 8,1 (d, 1H).

0,77 ml tributylcínhydridu se přidá ke směsi sloučeniny 52 a 2 mg bis(trifenylfosfin)palladium(O)chloridu v 10 ml dichlormethanu. Roztok se míchá při okolní teplotě 30 minut. Potom se přidá druhá část 0,335 ml tributylcínhydridu a 2 mg bis(trifenylfosfin)palladium(0)chloridu a pokračuje 45 se v míchání dalších 30 minut. Směs se zpracuje mžikovou chromatografii na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 25:75 a potom 50:50 a získá se konečný ethylacetát. Získaný produkt se dále čistí HPLC v reverzní fázi na koloně C18 za použití elučního činidla tvořeného směsí vody, methanolu a TFA v poměru 20:80:0,2 a získá se 168 mg žádané výchozí látky (sloučenina 53) jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) d 1,45 (s, 9H), 1,55 (m, IH), 2,0 (m, IH), 2,5 (m, IH), 3,1 (d, IH), 3,4 (m, 3H), 3,6 (t, IH), 3,8 (s, 3H), 4,1 (2d, 2H), 4,4 (d, IH), 4,6 (d, IH), 6,95 (d, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,5 (m, 4H), 7,9 (m, 3H).

Mikroanalýza (2TFA):

Vypočteno: C, 54,4; H, 5,40; N, 3,70 %

-45CZ 293694 B6

Nalezeno: C, 55,0; H, 5,31; N, 3,89 %.

Příklad 25 (viz schéma 32)

Příprava

a) (2S,4S)-2-[(N-methylnaftalen-l-ylamino)methyl]-4-sulfanylpyrrolidinu (sloučenina 36) a

b) N-(naftalen-l-yl)-N-((2S,4S)-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl}-3-methylbutanamidu (sloučenina 37)

Příprava sloučeniny 36

Směs 110 mg výchozí látky (2S,4S)-2-[(N-methylnaftalen-l-ylamino)methyl]-4-BOCsulfanylpyrrolidinu (sloučenina 34) a 5 ml kyseliny trifluoroctové se míchá při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Kyselina trifluoroctová se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se suší ve vysokém vakuu a získá se 110 mg sloučeniny 36 jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 1,7 (m, 1H), 1,9 (d, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,95 (s, 3H), 3,1 (2d, 1H), 3,5 (m, 1H), 3,65 (m, 3H), 4,05 (m, 1H), 7,0 (šs, 1H), 7,4 (t, 1H), 7,55 (m, 3H), 7,7 (d, 1H), 7,85 (m, 1H), 8,2 (m, 1H).

Mikroanalýza (2,0 TFA. 1,0 H₂O):

Vypočteno: C, 45,5; H, 4,2; N, 5,0 %

Nalezeno: C, 46,3; H, 4,67; N, 5,4 %.

Výchozí látka pro sloučeninu 36 se připraví následujícím postupem. Směs 711 mg allylesteru (25.45) -2-formyl-4-BOC-sulfanylpyrrolidin-l-karboxylové kyseliny (sloučenina 1), 25 ml ethanolu, 333 mg 1-naftylaminu a 4,5 g molekulových sít 3Á se míchá pod atmosférou argonu při okolní teplotě po dobu 6 hodin. Potom se přidá 0,4 ml kyseliny octové a 170 mg kyanborohydridu sodného. Směs se míchá dalších 20 hodin a molekulová síta se odstraní filtrací. Filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 20:80 a získá se 560 mg (25.45) -l-allyloxykarbonyl-2-[(naftalen-l-ylamino)methyl]-4-BOC-sulfanylpyrrolidinu (sloučenina 31) jako čirý olej.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 1,5 (s, 9H), 1,85 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,5 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 4,2 (m, 1H), 4,5 (m, 1H), 4,65 (d, 2H), 5,3 (2d, 2H), 5,95 (m, 1H), 6,55 (m, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,3 (t, 1H), 7,4 (m, 2H), 7,75 (m, 1H), 7,9 (m, 1H).

Směs 218 mg sloučeniny 31, 40 ml dimethylformamidu, 0,6 ml jodmethanu a 150 mg bezvodého uhličitanu draselného se míchá při teplotě 80 °C po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se převede do 30 ml ethylacetátu a promyje se 20 ml vody. Organická fáze se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a koncentrací za sníženého tlaku se získá 183 mg (25.45) -l-allyloxykarbonyl-2-[(N-methylnafitalen-l-ylamino)methyl]-4-BOCsulfanylpyrrolidinu (sloučenina 32) jako žlutá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,45 (s, 9H), 2,0 (m, 1H), 2,4 (m, 1H), 2,85 (s, 3H), 3,0 (2d, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,7 (2d, 1H), 3,8 (m, 1H), 4,1 (m, 2H), 4,6 (d, 2H), 5,3 (9m, 2H), 5,95 (m, 1H), 7,45 (m, 5H), 7,8 (m, 1H), 8,25 (m, 1H).

K roztoku 178 mg sloučeniny 32 v 10 ml dichlormethanu se přidá 0,2 ml tri-n-butylcínhydridu a poté se přidají 2 mg bis(trifenylfosfín)palladiumchloridu a směs se míchá při okolní teplotě. Po 10 a 20 minutách se přidá druhá a třetí část 0,2 ml tri-n-butylcínhydridu a 2 mg bis(trifenylfosfin)palladiumchloridu a míchání pokračuje 90 minut. Reakční roztok se zpracuje sloupcovou chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 25:75, 50:50 a ethylacetátu. Produkt se dále čistí HPLC s reverzní fází na koloně Cl8,

-46CZ 293694 B6 která se eluuje směsí vody, methanolu a kyseliny trifluoroctové v poměru 20:80:0,2 a získá se

160 mg žádané výchozí látky (sloučenina 34) jako bezbarvá guma.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,45 (s, 9H), 2,2 (s, 1H), 2,39 (m, 1H),

2,85 (s, 3H), 2,9 (2d, 1H), 3,1 (2d, 1H), 3,25 (m, 2H), 3,4 (m, 1H), 7,15 (d, 1H), 7,45 (m, 4H),

7,8 (m, 1H), 8,35 (m, 1H).

Mikroanalýza (2,0 TFA.0,5 H₂O):

Vypočteno: C, 50,8; H, 5,20; N, 4,6 %

Nalezeno: C, 49,3; H, 5,13; N, 4,6 %.

b) Příprava sloučeniny 37

Směs 187 mg výchozí látky (sloučenina 35) a 5 ml kyseliny trifluoroctové se míchá při okolní teplotě 1 hodinu. Kyselina trifluoroctová se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se suší ve vysokém vakuu a získá se 200 mg bezbarvé gumy (sloučenina 37).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 0,8 (m, 6H), 1,6- 2,2 (m, 5H), 2,6 (m, 1H), 3,2 - 5,0 (m, 6H), 7,6 (m, 5H), 8,0 (m, 2H).

Mikroanalýza (2,0 TFA. 1,0 H₂O):

Vypočteno: C, 48,4; H, 4,80; N, 4,5 %

Nalezeno: C, 49,0; H 5,14; N, 4,76 %.

Výchozí látka se připraví následujícím způsobem. 0,164 ml izovalerylchloridu se přidá po kapkách během 10 minut k míchanému roztoku 297 g sloučeniny 31, 50 ml dichlormethanu a 0,136 ml triethylaminu. Roztok se míchá při okolní teplotě 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se zpracuje sloupcovou chromatografíí na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 25:75 a získá se 329 mg bílé pěny, N(naftalen-l-yl)-N-((2S,4S)-l-allyloxykarbonyl-4—BOCsulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3methylbutanamidu (sloučenina 33).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 0,75 (m, 6H), 1,5 (s, 9H), 1,65- 2,7 (m, 5H), 3,15 - 6,0 (m, 9H), 7,25 (m, 1H), 7,5 (m, 3H), 7,7 (m, 1H), 7,9 (m, 2H).

K roztoku 296 mg sloučeniny 33 v 10 ml dichlormethanu se přidá 0,3 ml tri-n-butylcínhydridu a potom 2 mg bis(trifenylfosfin)palladiumchloridu. Roztok se míchá při okolní teplotě. Po 10 a 20 minutách se přidá druhá a třetí část 0,2 ml tri-n-butylcínhydridu a 2 mg bis(trifenylfosfin)palladiumchloridu a míchání pokračuje 30 minut. Reakční roztok se zpracuje sloupcovou chromatografíí na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu v poměru 25:75, 50:50 a ethylacetátu. Produkt se dále čistí HPLC s reverzní fází na koloně Cl 8, eluováním směsí vody, methanolu a kyseliny trifluoroctové v poměru 20:80:0,2 a získá se 216 mg žádané výchozí látky (sloučenina 35).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃) δ 0,8 (m, 6H), 1,49 (s, 9H), 1,1 - 2,2 (m, 6H), 2,9 - 5,6 (m, 6H), 7,4 - 8,0 (m, 7H).

Mikroanalýza (1,0 TFA, 0,75 H₂O):

Vypočteno: C, 57,0; H, 6,20; N, 4,80 %

Nalezeno: C, 56,9; H, 6,45; N, 4,91 %.

Příklad 26 (viz schéma 33)

Příprava

a) 3-Methyl-N-(3,3-difenylpropyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethylbutanamidu (sloučenina 43) a

b) N-(3,3-difenylpropyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyI)butanamidu (sloučenina 44)

-47CZ 293694 B6

Sloučeniny 43 a 44 se připraví za použití postupu popsaném v příkladu 23 a za použití vhodných výchozích látek a meziproduktů, jak je uvedeno ve schématu 33.

a) Přípravy sloučeniny 43

Sloučenina 43:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆ při 373 °K): d 0,9 (d, 6H), 1,7 (m, 1H),

2,1 (m, 1H), 2,33 (m, 2H), 2,45 (m, 1H), 2,9 - 4,00 (m, 9H), 4,2 - 4,95 (m, 2H), 7,3 - 8,1 10 (m, 10H), 9,65 (šs, 2H).

Mikroanalýza (1,00 HC1.1 H₂O):

Vypočteno: C, 64,8; H, 7,7; N, 5,9 %

Nalezeno: C, 64,5; H, 7,9; N, 6,0 %.

Výchozí sloučenina 3-methyl-N-(3,3-difenylpropyl)-N-([2S,4S]-4-BOCsulfanylpyrrolidin-2ylmethyl)butanamid (sloučenina 41) se připraví ze sloučeniny 1 a 3,3-difenylpropylaminu za použití podobného postupu, který je popsán v příkladu 23.

Sloučenina 28:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): d 1,5 (s, 9H), 1,8 (m, 1H), 2,19 (m, 2H), 2,42 (m, 1H), 2,55 (m, 2H), 2,7 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 3,67 (m, 1H), 4,0 (m, 3H), 4,55 (d, 2H), 5,2 (2d, 2H), 5,9 (m, 1H), 7,2 (m, 1 OH).

Sloučenina 39:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3): d 0,75 - 1,0 (m, 6H), 1,22 (m, 1H), 1,5 (s,9H), 1,78-2,02 (m, 2H), 2,3 (m, 4H), 3,2 (m, 3Η), 3,4 - 4,2 (m, 6Η), 4,52 (m, 2H), 5,21 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 7,2 (m, 10H).

Sloučenina 41:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3): d 0,75 - 1,00 (m, 6H), 1,25 (m, 1H), 1,5 (s, 9H), 1,85 - 2,4 (m, 6H), 2,83 (m, 1H), 3,05 - 3,47 (m, 6H), 3,6 (m, 1H), 3,87 (2t, 1H), 7,25 (m, 10H).

b) Příprava sloučeniny 44

Charakteristická data jsou uvedena dále:

Sloučenina 44:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆ při 373 °K): d 1,65 (m, 1H), 1,85 (s, 3H), 40 2,32 (q, 2H), 2,45 (m, 1H), 2,69 - 4,3 (m, 9H), 7,2 (m, 10H), 9,37 (šs, 2H).

Mikroanalýza (1,00 HCl.0,75 H₂O):

Vypočteno: C, 63,3; H, 7,3; N, 6,6 %

Nalezeno: C, 63,1; H, 7,3; N, 6,7 %.

Sloučenina 40:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): d 1,5 (s, 9H), 1,82 (s, 3H), 1,6- 2,5 (m,4H), 3,2 (m, 3H), 3,32 - 4,25 (m, 6H), 4,54 (m, 2H), 5,23 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 7,23 (m, 10H).

Sloučenina 42:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): d 1,48 (s, 9H), 1,8 (m, 1H), 1,87 (s, 2H), 2,07 (s, 1H), 2,33 (m, 3H), 2,83 (m, 1H), 3,28 (m, 6H), 3,6 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 7,25 (m, 10H).

-48CZ 293694 B6

Příklad 27 (viz schéma 34)

Příprava

a) 3-methyl-N-(naftalen-2-ylmethyl)-N-([2S,4S]—4-sulfanyIpyrrolidin-2-ylmethyl)butanamidu (sloučenina 50) a

b) N-(naftalen-2-ylmethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)acetamidu (sloučenina 51)

Sloučeniny 50 a 51 se připraví za použití postupu popsaném v příkladu 23 a za použití vhodných výchozích látek a meziproduktů, jak je uvedeno ve schématu 34.

a) Příprava sloučeniny 50

Sloučenina 50

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆): d 0,75 - 1,1 (m, 6H), 1,63 (m, 1H), 2,1 (m, 1H), 2,48 (m, 1H), 2,83 (m, 3H), 3,0-4,95 (m, 8H), 7,17 (m, 1H).

Mikroanalýza (1,0 HCI):

Vypočteno: C, 64,2; H, 7,44; N, 7,13 %

Nalezeno: C, 64,0; H, 7,40; N, 7,10 %.

Výchozí látka 3-methyl-N-(naftalen-2-ylmethyl)-N-([2S,4S]-4-BOCsulfanylpyrrolidin-2ylmethyl)butanamid (sloučenina 48) se připraví ze sloučeniny 1 a 2-naftylmethylaminu.

Sloučenina 45:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): d 1,48 (s, 9H), 1,92 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,2 (2d, 1H), 3,7 (m, 1H), 3,96 (s, 2H), 4,08 (m, 2H), 4,54 (m, 2H),

5.2 (m, 2H), 5,9 (m, IH), 7,42 (m, 3H), 7,8 (m, 4H).

Sloučenina 46:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3): d 0,96 (2d, 6H), 1,48 (s, 9H), 1,9 (m, 1H), 2,13 - 2,6 (m, 4H), 3,3 (m, 1H), 3,72 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 4,5 (m, 2H), 4,76 (m, 1H), 5,2 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 7,48 (m, 3H), 7,73 (m, 4H).

Sloučenina 48:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): d 0,98 (2d, 6H), 1,3 (m, 1H), 1,48 (s, 9H),

2.3 (m, 4H), 2,9 (m, 1H), 3,1 -3,7 (m, 5H), 4,85 (m, 2H), 7,15 - 7,9 (m, 7H).

b) Příprava sloučeniny 51

Charakteristická data jsou uvedena dále

Sloučenina 51:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d_Ř při 373 °K) d 1,7 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,47 (m, 1H), 2,8 - 4,00 (m, 6H), 4,8 (m, 2H), 7,32 - 8,1 (m, 7H).

Mikroanalýza (1,00 HCI):

Vypočteno: C, 64,2; H, 7,44; N, 7,13 %

Nalezeno: C, 64,0; H, 7,40; N, 7,10 %.

Sloučenina 47:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3): d 1,5 (s, 9H), 1,9 (m, 1H), 2,12 (s, 2H), 2,29 (s, 1H), 2,5 (m, 1H), 3,18 - 5 (m, 1 OH), 5,2 (m, 2H), 7,2 - 7,89 (m, 7H).

-49CZ 293694 B6

Sloučenina 49:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): d 1,3 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 2,15 (s, 2H), 2,3 (s, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 3,1 - 3,7 (m, 5H), 4,85 (m, 2H), 7,4 - 7,9 (m, 7H).

Příklad 28 (viz schéma 35)

Methylester (2S)-2-({4-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)amino]naftalen-2karbonyl}amino)-4—methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 30)

72,1 mg (0,132 mmol) výchozí sloučeniny methylesteru (2S)-2-({4-[([2S,4S]-4-BOCsulfanylpyrroIidin-2-yl-methyl)amino]naftalen-2-karbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 30e) se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 15) a získá se 76 mg (97,8 %) sloučeniny 30 uvedené v názvu.

'Η nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃+CD₃COOD, 200 MHz): d 1,75 —2,0 (1H, m), 2,0 - 2,5 (5H-DMSO, m), 2,55 - 3,0 (3H, m), 3,15 - 3,4 (1H, m), 3,5 - 3,7 (1H, m), 3,7-3,9 (6H, m), 4,2-4,4 (1H, m), 4,9 - 5,05 (1H, m), 7,0 - 8,1 (6H, m, ArH).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 448 (M+H)⁺.

Analýza pro C22H₂9N₃S₂O₃.1,25 TFA:

Vypočteno: C, 49,9; H, 5,17; N, 7,2 %

Nalezeno: C, 49,6; H, 5,3; N, 6,7 %.

Sloučenina 30e používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem.

Sloučenina 30a:

Kyselina 2-naftoová se nitruje konc. HNO₃ (Tetrahedron 49, 17, 3655, 1993) a získá se směs nitrokyselin 30a obsahující žádanou 4-nitro-2-naftoovou kyselinu

Hmotové spektrum (ESP^-) m/z 216 (M-H)^-.

Sloučenina 30b:

6,0 ml (68,7 mmol) oxalylchloridu se přidá po kapkách k míchanému roztoku kyseliny dusičné,

7,3 g (33,6 mmol) sloučeniny 30a ve směsi 1,0 ml DMF a 100 ml CH₂C1₂ při teplotě 0 °C pod atmosférou argonu. Roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin, odpaří se do sucha a azeotropicky se destiluje s toluenem (2 x 25 ml). Vzniklý zbytek se znovu rozpustí ve 100 ml CH₂C1₂ a ochladí se pod argonem na teplotu 0 °C. Potom se přidá 7 ml (50 mmol) Et₃N, následně po částech 7,4 g (37 mmol) methylesteru L-methioninu tak, že vnitřní teplota nepřestoupí 10 °C. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 18 hodin, promyje se 100 ml vody, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a koncentruje na viskózní hnědou gumu. Tato guma se čistí mžikovou chromatografií na SiO₂ (Měrek 9385) za použití elučního činidla tvořeného 25% EtOAc/i-hexan. Příslušné frakce se spojí a odpařením se získá 490 mg (4 %) sloučeniny 30b jako viskózní oranžová guma.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz): d 2,1 - 2,5 (5H, m), 2,55-

2,75 (2H, m), 3,85 (3H, s), 4,9 - 5,1 (1H, m), 7,32 (1H, d) 7,6 - 8,0 (2H, m), 8,05 (1H, dd), 8,5 -

8,7 (3H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 363 (M+H)⁺.

Sloučenina 30c:

450 mg (1,24 mmol) sloučeniny 30b se redukuje (analogicky jak v ekvivalentním stupni příkladu 22) a získá se 310 mg (75,3 %) odpovídajícího anilinu 30c jako žlutá guma.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI₃, 250 MHz): d 2,0- 2,45 (5H, m), 2,5-

2,75 (2H, m), 3,83 (3H, s), 4,3 (2H, šs, NH₂), 4,9 - 5,05 (1H, m), 7,0 (1H, d, NHCO), 7,2 (1H, d),

7,45 - 7,65 (2H, m), 7,72 (1H, s), 7,8 - 8,0 (2H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 333 (M+H)⁺, 271, 170.

-50CZ 293694 B6

Sloučenina 30d:

300 mg (0,9 mmol) sloučeniny 30c se kopuluje s 428 mg (1,36 mmol) aldehydu 22b za podmínek použitých k přípravě sloučeniny 22g užitím MeOH jako rozpouštědla a v přítomnosti molekulových sít 3Á jako sušicího činidla a získá se 460 mg (76,5 %) sloučeniny 30d jako žlutá guma.

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 632 (M+H)⁺.

Sloučenina 30e:

450 mg (0,7 mmol) sloučeniny 30d se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 15) a získá se 220 mg (56,4 %) žádané výchozí látky, sloučenina 30e.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz): d 1,4- 1,9 (10H+H₂O, m), 2,0 - 2,75 (9H, m), 2,95 (1H, q), 3,1 - 3,35 (1H, m), 3,35 - 3,55 (2H, m), 3,55 - 3,8 (2H, m), 3,82 (3H, s, CO₂Me), 4,98 (1H, m), 5,15 (1H, šs, NH), 6,9 - 7,1 (2H, m, ArH+NHCO), 7,4 - 7,6 (2H, m), 7,61 (1H, d), 7,8 - 8,0 (2H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 548 (M+H)⁺, 488.

Příklad 29 (viz schéma 36)

Příprava

a) methylesteru (2S)—2-({3-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]naftalen-lkarbonyl}-amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 31) a

b) (2S)-2-({3-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]naftalen-l-karbonyl}amino)4-methyIsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 31 f)

a) Příprava sloučeniny 31 mg (0,1 mmol) sloučeniny 31e se zbaví chránící skupiny (analogicky jak v ekvivalentním stupni v příkladu 15) a potom se zpracuje Et₂O.HCl a získá se 37 mg (64,8 %) sloučeniny 31 uvedené v názvu jako bílá pevná látka.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆+CD₃CO₂D, 250 MHz): d 1,05 (1H, t, (CH₃CH₂)₂O), 1,6 - 1,8 (lH,m), 1,9 - 2,15 (4H, m), 2,3 - 2,8 (4H+DMSO, m), 3,0- 4,0 (9H+(CH₃CH₂)₂O), 4,55 - 4,7 (1H, m), 6,95 (1H, s), 7,1 (1H, s), 7,15 (1H, t), 7,32 (1H, t), 7,62 (1H, d), 7,92 (1H, d).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 448 (M+H)⁺.

Analýza pro C₂₂H₂9N₃S₂O₃.2,7HC1.0,3Et₂O:

Vypočteno: C, 49,0; H, 6,15; N, 7*39 %

Nalezeno: C, 49,1; H, 6,1; N, 7,2 %.

Sloučenina 31a:

Sloučenina 31a, 3-nitronaftoová kyselina se připraví z anhydridu kyseliny 3-nitro-l,8-naftalové podle způsobu, který popsal G. J. Leuck a kol. (Joumal of the Američan Chemical society 51, 1831, 1929).

Sloučenina 31b:

5,0 g (23,04 mmol) sloučeniny 31a, 3-nitro-l-naftoové kyseliny se kopuluje se hydrochloridem methylesteru L-methioninu (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 22) a získá se 2,53 g 30,3 %) sloučeniny 3 lb jako bílá krystalická pevná látka.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz): d 2,0 -2,5 (5H, m), 2,55-

2,75 (2H, m), 3,85 (3H, s), 5,05 (1H, m), 6,9 (1H, d,NH), 7,6-7,85 (2H, m), 8,0-8,15 (1H, m), 8,3-8,5 (2H, m), 8,83(1H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 363 (M+H)⁺.

-51 CZ 293694 B6

Sloučenina 31c:

2,3 g (6,35 mmol) sloučeniny 31b se redukuje (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 22) a získá se 1,75 g (83 %) odpovídajícího anilinu 3 lc jako žlutá guma.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 250 MHz): d 2,05 - 2,2 (4H, m), 2,25 5 2,45 (1H, m), 2,63 (2H, m), 3,83 (3H, s), 5,03 (1H, m), 6,66 (1H, d), 7,05 (1H, m), 7,16 (1H, m),

7,28 (1H, m), 7,39 (1H, m), 7,6 (1H, m), 8,15 (1H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 333 (M+H)⁺, 170.

Sloučenina 3 ld:

1,7 g (5,12 mmol) sloučeniny 31c se kopuluje s 1,76 g (5,59 mmol) aldehydu 22b (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 30) a získá se 2,95 g (91,3 %) sloučeniny 31 d jako ne zcela bílá pěna.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3+CD3COOD, 250 MHz): d 1,5 (9H, s), 1,9 (1H, m), 2,0-2,25 (4H+CH₃COOH, m), 2,25 - 2,44 (1H, m), 2,55 - 2,75 (3H, m), 3,25 - 3,53 15 (2H, m), 3,55 - 3,7 (1H, m), 3,7 - 3,95 (4H, m), 4,1 - 4,25 (1H, m), 4,25 - 4,4 (1H, m), 4,55 -

4,8 (2H, m), 5,03 (1H, m), 5,15 - 5,45 (2H, m), 5,96 (1H, m), 6,9 - 7,5 (4H+CHC1₃, m), 7,66 (1H, m), 8,1 (1H, m).

Hmotové spektrum (ESP*) m/z 632 (M+H)*.

Sloučenina 31 e:

2,0 g (3,17 mmol) sloučeniny 31d se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 15) a získá se 1,62 g (93,4 %) žádané látky 31e jako světle žlutá pěna.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 300 MHz): d 2,4 - 2,6 (10H, m), 1,85 (4H, šs), 2,0-2,2 (4H, m), 2,35 (1H, m), 2,5 (1H, m), 2,65 (2H, t), 2,9 (1H, m), 3,1 (1H, m), 3,3 25 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,55 (1H, m), 3,65 (1H, m), 3,8 (3H, s), 5,02 (1H, m), 6,65 (1H, d), 6,9 (1H, m), 7,1 (1H, m), 7,2-7,3 (1H+CHC1₃, m), 7,4 (1H, m), 7,62 (1H, m), 8,1 (1H, m).

Hmotové spektrum (ESP*) m/z 548 (M+H)*, 448.

b) Sloučenina 3lf

180 mg (0,33 mmol) sloučeniny 3le se hydrolyzuje (analogicky jako v příkladu 16) a potom se čistí HPLC v reverzní fázi (Dynamax® 60A, C18,8m kolona) eluováním směsí 50%MeOH/H₂O (0,1 % TFA) a získá se 126 mg (65,9%) sloučeniny 3 lf jako bílá pěna.

^]H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆+CD₃COOD, 300 MHz): d 1,5-1,8 (lH,m), 1,9-2,1 (5H,m), 2,4 - 2,7 (3H+DMSO, m), 3,0 - 3,1 (1H, m), 3,4- 3,7 (4H, m),

3,75 - 3,9 (1H, m), 4,57 (1H, m), 6,9 (1H, m), 7,07 (1H, m), 7,17 (1H, m), 7,35 (1H, m), 7,63 (1H, m), 7,95 (1H, m).

Hmotové spektrum (ESP*) m/z 434 (M+H)*, 285.

Analýza pro C₂iH₂7N₃S₂O₃.l,3TFA:

Vypočteno: C, 48,7; H, 4,9; N, 7,22 %

Nalezeno: C, 48,6; H, 4,9; N, 7,1 %.

Příklad 30 (viz schéma 37)

Příprava

a) methylesteru (2S)-2-({3-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 32) a

b) (2S)-2-({3-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 32f)

-52CZ 293694 B6

a) Příprava sloučeniny 32 mg (0,096 mmol) sloučeniny 32e používané jako výchozí látka se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 15) a získá se 56 mg sloučeniny 32 uvedené v názvu jako bílá pěna.

‘H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 250 MHz): d 1,6 - 1,85 (1H, m), 1,9 - 2,4 (6H+CH₃C₅H₆), 2,45 -2,7 (3H, m), 3,1 - 3,25 (1H, m), 3,35 - 4,1 (11H+H₂O, m), 4,75 - 4,95 (1H, m), 6,8 (1H, m), 6,9-7,05 (1H, m), 7,1 -7,55 (6H+CH₃C₆H₅+CHC1₃, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 474 (M+H)⁺.

Analýza pro C₂4H₃iN₃O₃S₂.2TFA.0,75 toluenu

Vypočteno: C, 51,8; H, 5,1; N, 5,45 %

Nalezeno: C, 51,6; H, 5,2; N, 5,1 %.

Sloučenina 32 je používaná jako výchozí látka se připraví následujícím postupem.

Sloučenina 32a:

ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se přidá k míchanému roztoku 4,0 g (15,38 mmol) methyl-3-brom-5-nitrobenzoátu (Mindl a Večeřa, Coll., Czech.-Chem. Comm. 38, 3496, 1973) a potom se přidá 2,0 g (16,38 mmol) kyseliny fenylboronové ve 180 ml dimethoxyethanu. Přidá se 444 mg (0,38 mmol) tetrakis(trifenylfosfin)palladia(0) a směs se zahřívá pod zpětným chladičem 1 hodinu. Vzniklý tmavý roztok se nechá ochladit na teplotu místnosti a potom se ochladí 400 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva se extrahuje 200 ml EtOAc a potom se okyselí na pH 3 pomocí 2H HCI. Vzniklá suspenze se filtruje, promyje se vodou a azeotropuje se s toluenem (3 x 25 ml) a získá se sloučenina 32a jako ne zcela bílá pevná látka, která se rozetře s hexanem, filtruje se a suší a získá se 2,6 g (69,5 %) produktu.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-dý, 300 MHz): d 7,5 (3H, m), 7,8 (2H, m),

8,4 - 8,7 (3H, m)

Hmotové spektrum (ESP)“ m/z 242 (M+H)“.

Analýza pro CbHqNQ»:

Vypočteno: C, 64,2; H, 3,73; N, 5,76 %

Nalezeno: C, 64,0; H, 3,7; N, 5,6 %.

Sloučenina 32b:

3,1 g (12,76 mmol) sloučeniny 32a se kopuluje s hydrochloridem methylesteru L-methioninu (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 22) a získá se 4,9 g (99 %) sloučeniny 32 *H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz): d 2,1 - 2,45 (5H, m), 2,65 (2H,t), 3,83 (3H, s), 4,99 (1H, m), 7,2 - 7,35 (1H+CHC1₃, m), 7,4 - 7,6 (3H, m), 7,6- Ί,Ί (2H, m), 8,38 (1H, m), 8,58 (2H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 389 (M+H)⁺.

Analýza pro Ci9H₂₀N₂O₅S:

Vypočteno: C, 58,8; H, 5,19; N, 7,21 %

Nalezeno: C, 58,8; H, 5,1; N, 7,2 %.

Sloučenina 32c

3,0 g (7,73 mmol) sloučeniny 32b se redukuje (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 30) a získá se 2,43 g (87,8 %) odpovídajícího anilinu 32c.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 200 MHz): d 2,0 - 2,2 (4H, m), 2,2 - 2,4 (1H, m), 2,6 (2H, m), 3,8 (3H, s), 3,9 (2H, šs, NH₂), 4,93 (1H, m), 6,93 (1H, d, NHCO), 7,03 (1H, m), 7,12 (1H, m), 7,3 - 7,5 (4H, m), 7,5 - 7,65 (2H, m). Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 359 (M+H)⁺.

-53CZ 293694 tí6

Sloučenina 32d:

1,0 g (2,8 mmol) sloučeniny 32c se kopuluje s 880 mg (2,8 mmol) aldehydu 22b (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 30) a získá se 1,51 g (82,3 %) sloučeniny 32d.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3+CD3COOD, 250 MHz): d 1,5 (9H, s),

1,8 - 2,0 (1H, m), 2,0 - 2,4 (5H+CH₃COOH, m), 2,5 -2,75 (3H, m), 3,2 - 3,45 (2H, m), 3,5 3,7 (1H, m), 3,7 - 3,9 (4H, m), 4,0-4,4 (2H, m), 4,5-4,75 (2H, m), 4,9-5,05 (1H, m), 5,1 -

5,45 (2H, m), 5,8 - 6,1 (1H, m), 7,03 (1H, m), 7,1 - 7,5 (5H+CHC1₃, m), 7,55 - 7,7 (2H, m). Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 658 (M+H)⁺.

Analýza pro €33^3^0783.0,1 H₂O:

Vypočteno: C, 59,9; H, 6,61; N, 6,35 %

Nalezeno: C, 59,7; H, 6,8; N, 6,2 %.

Sloučenina 32e:

1,1 g (1,67 mmol) sloučeniny 32d se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 15) a získá se 800 mg (83,4 %) žádané výchozí látky, sloučeniny 32e.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 250 MHz): d 1,25 (1,5H, t, CH₃CH₂COCH₃), 1,4-1,6 (10H, m), 1,9 (2H, šs, NH+H₂O), 2,0 - 2,22 (4H+CH₃CH₂CO₂CH3), 2,23-2,55 (2H, m), 2,51 -2,65 (2H, m), 2,9 (1H, m), 3,12 (1H, m), 3,2-3,75 (4H, m), 3,8 (3H, m), 4,13 (1,3H, q, 0Η₃0Η₂0Ο₂0Η₃), 4,45 (1H, šs, NH), 4,95 (1H, m), 6,85 - 7,0 (2H, m, ArH+NHCO), 7,07 (1H, m), 7,2 - 7,5 (4H+CHC1₃, m), 7,5 - 7,65 (2H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 574 (M+H)⁺, 474.

Analýza pro C₂9H39N₃O₅S₂.0,5EtOAc:

Vypočteno: C, 60,3; H, 7,02; N, 6,8 %

Nalezeno: C, 59,9; H, 7,1; N, 6,6 %.

b) Příprava sloučeniny 32f

140 g (0,244 mmol) sloučeniny 32e používané jako výchozí látka se hydrolyzuje (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 31) a získá se 96,3 mg žádaného produktu, sloučeniny 32f jako bílá pěna.

‘H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-dů+C^COOD, 250 MHz): d 1,5 - 1,8 (lH,m), 1,9-2,2 (5H, m), 3,05 (1H, q), 3,15 - 3,6 (7H, m), 3,65-3,9 (lH,m), 4,45-4,65 (1H, m), 6,95 - 7,05 (1H, m), 7,05 - 7,2 (1H, m), 7,25 - 7,5 (4H, m), 7,55 - 7,7 (2H, m). Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 460 (M+H)⁺, 279.

Analýza pro C₂3H₂9N₃S₂O3.1,3TFA:

Vypočteno: C, 50,6; H, 5,02; N, 6,91 %

Nalezeno: C, 50,6; H, 5,1; N, 7,2 %.

Výchozí látka se připraví jak je popsáno v a) shora.

Příklad 31 (viz schéma 38)

Příprava

a) methylesteru (2S)-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 33) a

b) (2S)-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 33f)

-54CZ 293694 B6

a) Příprava sloučeniny 33

53,4 mg (0,093 mmol) sloučeniny 32a používané jako výchozí látka se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 31) a získá se 43,2 mg (87 %) sloučeniny 33 uvedené v názvu jako bílá pevná látka.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆+CD₃COOD, 300 MHz): d 1,5 - 1,9 (3H+CH₃COOH, m), 1,95 (3H, s), 2,02 - 2,3 (2H, m), 2,4-2,65 (1H+DMSO, m), 3,0 - 3,15 (1H, m), 3,3 - 3,9 (8H, m), 4,25 - 4,4 (1H, m), 6,7 (1H, m), 6,78 (1H, m), 7,1 - 7,4 (6H, m). Hmotové spektrum (Cl⁺) m/z 474 (M+H)⁺.

Analýza pro C₂₄H₃iN₃S₂O₃.l,75TFA:

Vypočteno: C, 53,6; H, 6,1; N, 7,82 %

Nalezeno: C, 53,6; H, 6,3; N, 7,7 %.

Výchozí látka se připraví následujícím způsobem.

Sloučenina 33a:

12,28 g (0,05 mmol) 2-brom-5-nitrobenzoové kyseliny se kopuluje s 6,7 g (0,055 mmol) benzenboronové kyseliny (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 32) a získá se 10,95 g (90,3 %) sloučeniny 33a jako bílá pevná látka.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 300 MHz): d 7,3 - 7,5 (5H, m), 7,65 (1H, m), 8,35 (1H, m), 8,45 (1H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 242 (M+H)⁺, 198.

Sloučenina 33b:

3,58 g (14,7 mmol) sloučeniny 33a se kopuluje s hydrochloridem methylesteru L-methioninu (analogicky jako v ekvivalentním příkladu 32) a získá se 3,02 g (52,6 %) sloučeniny 32b jako světle žlutá pevná látka.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 300 MHz): d 1,7 - 2,2 (7H, m), 3,7 (3H, s), 4,7 (1H, m), 6,05 (1H, m, NH), 7,35 - 7,6 (6H, m), 8,33 (1H, m), 8,55 (1H, m). Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 389 (M+H)⁺.

Sloučenina 33c:

1,0 g (2,6 mmol) sloučeniny 33b se redukuje (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 30) a získá se 725 mg (78,6 %) odpovídajícího anilinu, sloučeniny 33c.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 300 MHz): d 1,6 - 1,8 (1H, m), 1,8-2,15 (6H, m), 3,6 (3H, s), 3,7-3,9 (2H, šs, NH₂), 4,6 - 4,7 (1H, m), 5,85 (1H, d, NHCO), 6,79 (1H, m), 7,0 (1H, m), 7,15 (1H, d), 7,2-7,45 (5H+CHC1₃, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 359, (M+H)⁺, 196.

Sloučenina 33d:

710 mg (1,98 mmol) sloučeniny 33c se kopuluje s 625 mg (1,98 mmol) aldehydu 22b (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 30) a získá se 1,1 g (84,4 %) sloučeniny 33d.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃+CD₃COOD, 250 MHz): d 1,5 (9H, s),

1,6 - 2,2 (8H+CH₃COOH, m), 2,5 - 2,75 (1H, m), 3,2 - 3,4 (2H, m), 3,45 - 3,9 (5H, m), 4,05 4,35 (2H, m), 4,5-4,8 (3H, m), 5,15 - 5,45 (2H, m), 5,8 - 6,1 (1H, m), 6,75 - 6,9 (1H, m), 6,9 7,05 (1H, m), 7,1 - 7,23 (1H, m), 7,25 - 7,45 (5H-CHC1₃, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 658 (M+H)⁺.

Analýza pro C₃₃H₄₃N₃S₂O₇:

Vypočteno: C, 60,3; H, 6,59; N, 6,39 %

Nalezeno: C, 60,0; H, 6,9; N, 6,2 %.

Sloučenina 33e:

1,0 g (1,52 mmol) sloučeniny 33d se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 15) a získá se 658 mg (75,4 %) žádané výchozí látky, sloučeniny 33e.

-55CZ 293694 B6 'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3+CD3COOD, 250 MHz): d 1,5 (9H, s),

1,6- 2,2 (8H+CH3COOH, m), 2,55-2,75 (1H, m), 3,25 - 3,4 (1H, m), 3,5-3,75 (5H,m),

3,75-4,2 (3H,m), 4,55-4,75 (1H, m), 6,7- 6,85 (1H, m), 6,85-6,97 (1H, m), 7,1 - 7,25 (1H, m), 7,25 - 7,48 (5H+CHC1₃, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 574 (M+H)⁺, 474.

Analýza pro C29H39N3O5S2: Vypočteno: C, 60,7; H, 6,85; N, 7,32 %

Nalezeno: C, 60,7; H, 7,20; N, 7,30 %.

b) Sloučenina 33f

100 mg (0,174 mmol) sloučeniny 33e používané jako výchozí látka se hydrolyzuje (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 31) a získá se 64,6 mg (59,8 %) sloučeniny 33f jako bílá pěna.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆+CD3COOD, 300 MHz): d 1,5 - 2,0 (6H+CH3COOH, m), 2,0- 2,3 (2H, m), 2,3 - 2,7 (1H+DMSO), 3,0 - 3,1 (1H, m), 3,2-3,9 (5H, m), 4,2 - 4,35 (1H, m), 6,6 - 6,9 (2H, m), 7,1 - 7,4 (6H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 460 (M+H)⁺, 311.

Analýza pro C23H29N3O3S7.1,4TFA:

Vypočteno: C, 50,0; H, 4,95; N, 6,79 %

Nalezeno: C, 49,9; H, 5,1; N, 6,7 %.

Sloučenina 33e používaná jako výchozí látka se připraví jak je popsáno v a) shora.

Příklad 32 (viz schéma 39)

Příprava

a) methylesteru (2S)-2-{2-benzyl-5-[(4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]benzoylamino}4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 34) a

b) (2S)-2-{benzyl-5-[(4-sulfanylpyrrolidin-2-yl-methyl)amino]benzoylamino}amino)-4methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 34h)

a) Příprava sloučeniny 34

500 mg (0,85 mmol) sloučeniny 34g používané jako výchozí látka se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 31) a získá se 454 mg (89,3 %) sloučeniny 34 uvedená v názvu jako bílá pevná látka.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d6+CD₃COOD, 300 MHz): d 1,5-1,7 (1H, m), 1,85 - 2,1 (5H, m), 2,35 - 2,6 (3H+DMSO, m), 2,9 - 3,1 (1H, m), 3,1 - 3,8 (8H, m), 3,9 (2H, q), 4,4 - 4,6 (1H, m), 6,5 - 6,7 (>1H, m), 6,9 - 7,0 (1H, m), 7,0 - 7,3 (6H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 488 (M+H)⁺, 325.

Analýza pro C75H33N3S2O3.3HCI:

Vypočteno: C, 50,3; H, 6,8; N, 7,04 %

Nalezeno: C, 50,4; H, 6,3; N, 7,3 %.

Sloučenina 34 g používaná jako výchozí látka se připraví následujícím způsobem.

Sloučenina 34a:

Roztok 9,0 g (36,6 mmol) 2-brom-5-nitrobenzeové kyseliny ve 200 ml MeOH se zpracuje s 2 ml SO2CI2 a vzniklá směs se zahřívá pod zpětným chladičem 18 hodin. Reakční směs se odpaří, předběžně se absorbuje na SiO₂ (Měrek 9385) a chromatografuje se za použití elučního činidla

-56CZ 293694 B6 tvořeného 10%EtOAc/i-hexan. Příslušné frakce se spojí a po odpaření se získá 8,38 g (88,1 %) sloučeniny 34a jako bílá krystalická pevná látka.

'Η nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 300 MHz): d 4,0 (3H, s, CO₂CH₃), 7,85 (lH,m), 8,18 (1H, m), 8,63 (1H, m).

Sloučenina 34b:

Roztok 2,0 ml (17,3 mmol) benzylbromidu v 10 ml THF se přidá po kapkách a při teplotě 0 °C k míchané suspenzi tvořené 1,7 g (26 mmol) zinkového prášku v 10 ml THF, který byl aktivován podle způsobu který popsal Knochel (J. O. C., 53, 2392, 1988). Směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 3 hodiny. Potom se přidá při teplotě místnosti a pod argonem k míchanému roztoku obsahující 1,0 g (3,85 mmol) sloučeniny 34a a 27 mg (0,0385 mmol) Pd(PPh₃)₂Cl₂ v 10 ml THF alikvótní část (6,5 mmol) supematantu obsahující benzylzinek. Po 1 hodině se přidá druhý alikvótní podíl (6,5 mmol) benzylzinku. Vzniklá tmavá reakční směs se ochladí 250 ml 2N HC1 a extrahuje se EtOAc (2 x 100 ml). Spojené organické podíly se promyjí 50 ml vody a 50 ml solanky, filtruji se a odpaří na oranžovou gumu. Tato guma se chromatografuje na SiO₂ (Měrek 9385) za použití elučního činidla tvořeného 10% EtOAc/i-hexan a získá se 590 mg (56,6 %) sloučeniny 34b jako žlutý olej.

*H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI₃, 300 MHz): d 3,9 (3H, s, CO₂CH₃), 4,48 (2H, s, CH₂Ph), 7,0 - 7,5 (6H, m), 8,23 (1H, m), 8,75 (1H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 270 (M-H)~, 210).

Sloučenina 34c:

2,0 ml (4 mmol) 2N NaOH se přidá při teplotě místnosti k roztoku 560 mg (2,06 mmol) sloučeniny 34b v 10 ml MeOH. Po 2 hodinách se reakční směs odpaří k odstranění MeOH a potom se rozdělí mezi 20 ml Et₂O a 20 ml 2N NaOH. Vodná vrstva se okyselí na pH 2/3 pomocí 2N HC1 a extrahuje se EtOAc (3 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí 20 ml vody a 20 ml solanky, filtrují se přes filtrační papír a po odpaření se získá 453 mg (85,3 %) sloučeniny 34c jako bílá pevná látka.

‘H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 300 MHz): d 4,45 (2H, s, CH₂Ph), 7,0 - 7,4 (5H, m), 7,55 (1H, m), 8,3 (1H, m), 8,53 (1H, m).

Hmotové spektrum (ESP) m/z 256 (M-H)~, 212.

Sloučenina 34d:

350 mg (2,45 mmol) sloučeniny 34c se kopuluje s 540 mg (2,7 mmol) hydrochloridem methylesteru L-methioninu (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 32) a získá se 900 mg (91,3 %) sloučeniny 34djako světle žlutá pevná látka.

‘H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-de, 250 MHz): d 1,9 - 2,25 (5H, m), 2,5 2,75 (2H+DMSO, m), 3,7 (3H, s, CO₂CH₃), 4,28 (2H, q, CH₂Ph), 4,55 - 4,75 (1H, m), 7,15 - 7,5 (5H, m), 7,6 (1H, m), 8,2 - 8,35 (2H, m), 9,13 (1H, d, NHCO).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 403 (M+H)⁺.

Sloučenina 34e

2,5 g (11,08 mmol) SnCl₂.2H₂O se přidá k míchanému roztoku 900 mg (2,24 mmol) sloučeniny 34d v 50 ml EtOAc a vzniklá směs se zahřívá pod zpětným chladičem 18 hodin. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a zpracuje se po kapkách vodným NH₃ specifické hmotnosti 0,88 na pH 8. Vzniklá sraženina se odstraní filtrací přes celit (545). Filtráty se odpaří a čistí se sloupcovou chromatografií (Mega Bond Elut, SiO₂) za použití elučního činidla tvořeného nejprve CH₂C1₂ a potom 50% EtOAc/i-hexan a získá se 595 mg (71,4 %) odpovídajícího anilinu (sloučenina 34e).

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 300 MHz): d 1,75 - 2,2 (5H, m), 2,25 -

2,45 (2H, m), 3,6 - 3,8 (5H, m, CO₂CH₃+NH₂), 4,08 (2H, q, CH,Ph), 4,65 - 4,85 (1H, m), 6,24 (1H, d, NHCO), 6,7 (1H, m), 6,78 (1H, m), 7,0 (1H, m), 7,05 - 7,3 (5H+CHC1₃, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 373 (M+H)⁺, 210.

-57CZ 293694 B6

Sloučenina 34f:

570 mg (1,53 mmol) sloučeniny 34e se kopuluje s 580 mg (1,84 mmol) aldehydu 22b (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 30) a získá se 1,54 g sloučeniny 34f jako surová, světle zelená pěna.

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 672 (M+H)⁺.

Sloučenina 34g:

1,5 g (2,24 mmol) sloučeniny 34f se zbaví chránící skupiny (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 15) a získá se 550 mg (41,9 %) žádané výchozí látky 34g jako světle hnědá sklovitá látka.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃, 300 MHz): d 1,3 - 1,65 (10H, m), 1,7 —

2.2 (5H+H₂O, m), 2,25 - 2,6 (3H, m), 2,8 - 3,9 (9H, m), 3,9 - 4,25 (2H, m), 4,6 - 4,9 (1H, m),

6.3 (1H, d, NHCO), 6,55 - 6,8 (2H, m), 6,9 - 7,4 (5H+CHC1₃, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 588 (M+H)⁺, 488.

b) Příprava sloučeniny 34h

Sloučenina 34g používaná jako výchozí látka se hydrolyzuje (analogicky jako v ekvivalentním stupni v příkladu 16) a potom se čistí HPLC v reverzní fázi (Dynamax® 60A, C18,8m kolona) eluováním směsí 50%MeOH/H₂O (0,1 % TFA) a získá se 38,2 mg (56,6 %) sloučeniny 34h jako bezbarvá sklovitá látka.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d6+CD₃COOD, 300 MHz): d 1,5 - 1,7 (1H, m), 1,8 - 2,1 (5H+CH₃COOH, m), 2,3 - 2,6 (3H+DMSO, m), 2,9 - 3,1 (1H, m), 3,2 - 4,1 (7H, m), 4,3 - 4,5 (1H, m), 6,5 - 6,7 (2H, m), 6,9 - 7,0 (1H, m), 7,05 - 7,25 (5H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) 474 (M+H)⁺.

Analýza pro C₂4H₃iN₃S₂O₃.1,4TFA:

Vypočteno: C, 50,8; H, 5,16; N, 6,14 %

Nalezeno: C, 51,0; H, 5,3; N, 6,7 %.

Výchozí látka se připraví jak je popsáno v a) shora.

Příklad 33 (viz schéma 40)

Příprava

a) methylesteru (2S)-2-{2-benzyl-4-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2ylmethyl)amino]benzoylamino]—4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 35) a

b) (2S)-2-{benzyl-4-[([2S,4S]-sulfanylpyrrolidin-2-yl-methyl)amino]benzoylamino}amino)4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 35g)

a) Příprava sloučeniny 35

Sloučenina 35 uvedená v názvu se připraví z methyl-2-brom-4—nitrobenzoátu za použití stejného postupu jak je popsáno v příkladu 32, ale použije se Pd₂(dba)₃ jako zdroj katalytického palladia při benzylační reakci.

H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆+CD₃COOD, 300 MHz): d 1,5 - 1,7 (1H, m), 1,8-2,1 (5H, m), 2,3 - 2,6 (3H+DMSO, m), 2,9 - 3,1 (1H, m), 3,2 - 3,8 (8H, m), 4,05 (2H, m), 4,4 - 4,6 (1H, m), 6,4 - 6,6 (2H, m), 7,0 - 7,35 (6H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 488 (M+H)⁺, 325.

Analýza pro C₂₅H₃₃N₃S₂O₃.2HC1:

Vypočteno: C, 53,6; H, 6,29; N, 7,5 %

Nalezeno: C, 53,5; H, 6,5; N, 7,3 %.

-58CZ 293694 B6

b) Příprava sloučeniny 35g

100 mg (0,18 mmol) sloučeniny 35 se hydrolyzuje (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 32) a získá se 85,8 mg (67,3 %) sloučeniny 35g jako bílá pevná látka.

'H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆+CD₃COOD, 300 MHz): d 1,5- 1,7 (1H, m), 1,8-2,1 (5H, m), 2,3 - 2,6 (3H+DMSO, m), 2,9-3,9 (6H, m), 3,95 - 4,2 (2H, m),

4,3 - 4,6 (1H, m), 6,4 - 6,5 (2H, m), 7,0 - 7,3 (6H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 474 (M+H)⁺, 325.

Analýza pro C₂4H3iN₃S₂O3.1,3TFA: Vypočteno: C, 51,4; H, 5,24; N, 6,76 %

Nalezeno: C, 51,2; H, 5,4; N, 6,7 %.

Příklad 34 (viz schéma 41)

Izopropylester (2S)-2-{2-benzyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanyIpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]benzoylamino}-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 36)

Nitrosloučenina 36b se redukuje na odpovídající anilin, kopuluje se s thioprolinaldehydem 22b za použití IPA jako rozpouštědlo a zbaví se chránící skupiny přesně stejně jako v příkladu 32 a získá se sloučenina 36.

‘Η nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d6+CD₃COOD, 300 MHz): d 1,0 - 1,3 (6H, m), 1,5-1,7 (1H, m), 1,8 - 2,1 (5H, m), 2,3 - 2,6 (3H+DMSO, m), 2,9 - 4,1 (8H, m), 4,3 -

4.6 (1H, m), 4,8 - 5,0 (1H, m), 6,5 - 6,7 (2H, m), 6,8 - 7,3 (6H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 516 (M+H)⁺, 325

Analýza pro C₂₇H3₇N3S₂O3.2HC1: Vypočteno: C, 55,1; H, 6,68; N, 7,14 %

Nalezeno: C, 54,9; H, 7,0; N, 7,1 %.

Sloučenina 36a:

Roztok 25,24 g (62,78 mmol) sloučeniny 34d v 500 ml MeOH se zpracuje 35 ml (70 mmol) 2N NaOH. Vzniklý roztok se odpaří do sucha a pevné látky se rozdělí mezi 200 ml Et₂O a 500 ml vody. Vodná vrstva se okyselí na pH 2 pomocí 2N HC1 a extrahuje se EtOAc (2 x 250 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2 x 100 ml), solankou (100 ml), filtrují se přes filtrační papír a po odpaření se získá 23,57 g (96,8 %) sloučeniny 36a jako bílá pevná látka.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d6, 300 MHz): d 1,8-2,2 (5H, m), 2,3 -

2.6 (2H+DMSO, m), 4,1 - 4,3 (2H, m), 4,4 - 4,6 (1H, m), 7,1 - 7,3 (5H, m), 7,4 - 7,6 (1H, m), 8,1 - 8,3 (2H, m), 8,9 - 9,0 (1H, m, NHCO).

Hmotové spektrum (ESP^-) m/z 387 (M+H).

Sloučenina 36b:

5,0 ml (62 mmol) sulfurylchloridu se přidá k míchané suspenzi 19,2 g (50 mmol) sloučeniny 36a v 500 ml IPA. Vzniklá směs se zahřívá pod zpětným chladičem 18 hodin. Reakční směs se odpaří na 1/5 objemu a rozdělí se mezi 11 EtOAc a 500 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se promyje 200 ml vody, 200 ml solanky, filtruje se přes filtrační papír a po odpaření se získá 21,25 g (100 %) sloučeniny 36b jako bílá pevná látka. *H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆+CD3COOD, 300 MHz): d 1,0- 1,3 (6H, m), 1,8 - 2,2 (5H, m), 2,3 - 2,6 (2H+DMSO, m), 4,1 - 4,3 (2H, m), 4,4 - 4,6 (1H, m), 4,8 5,0 (1H, m), 7,1 - 7,3 (5H, m), 7,4-7,6 (1H, m), 8,1 - 8,3 (2H, m), 9,0 (1H, m, NHCO). Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 431 (M+H)⁺.

-59CZ 293694 B6

Příklad 35

Izopropylester (2S)-2-{2-benzyl-5-[N-([2S,4S]-4-sulfanyIpyrroIídin-2-yIrnethyI)-N-(3methoxypropionyl)amino]benzoylamino}-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 37)

Sloučenina 37b používaná jako výchozí látka se zbaví chránící skupiny stejným způsobem jako v ekvivalentním stupni popsaném v příkladu 32 a získá se sloučenina 37 uvedená v názvu.

’H nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d6+CD₃COOD, 300 MHz): d 1,0 - 1,3 (6H, m), 1,5 - 1,7 (1H, m), 1,8- 2,1 (5H, m), 2,2 - 2,6 (5H+DMSO, m), 2,9-3,95 (10H, m), 4,0 - 4,2 (3H, m), 4,4 - 4,6 (1H, m), 4,8 - 5,0 (1H, m), 7,0 - 7,5 (8H, m).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 602 (M+H)⁺.

Analýza pro C₃iH4₃N₃S₂O₅.l,5HCl:

Vypočteno: C, 56,7; H, 6,83; N, 6,4 %

Nalezeno: C, 56,7; H, 7,0; N, 6,0 %.

Výchozí látka se připraví následujícím způsobem.

530 mg EEDQ (2,15 mmol) se přidá k míchanému roztoku 1,5 g (2,15 mmol) sloučeniny 36d (viz příklad 34) a 220 ml (2,36 mmol) 3-methoxypropionové kyseliny v 15 ml CH₂C1₂. Směs se nechá míchat 18 hodin při teplotě místnosti a potom se odpaří. Zbytek se rozdělí mezi 200 ml IN kyseliny citrónové a 100 ml EtOAc. Organická vrstva se promyje 50 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 50 ml vody a 50 ml solanky, filtruje se přes filtrační papír a po odpaření se získá světle žlutá guma. Tato guma se čistí mžikovou chromatografií na SiO₂ (Měrek 9385) a eluuje se s gradientem 0-50% EtOAc/i-hexan. Příslušné frakce se filtrují a po odpaření se získá 1,14 g (67,7 %) sloučeniny 37b jako bezbarvá guma.

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 786 (M+H)⁺.

Příklad 36 (viz schéma 43)

Příprava

a) N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3,3-dimethyl-N-(2-naftalen-l-ylethyl)butyramidu (sloučenina 56) a

b) N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-N-(2-naftalen-l-ylethyl)-2-pyridin-3ylacetamidu (sloučenina 57)

a) Příprava sloučeniny 56

Pro přípravu sloučeniny 56 se použije způsob popsaný v příkladu 23 pro přípravu sloučeniny 6 jak je uvedeno ve schématu 43.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 0,91 (s, 9H), 1,5 (m, 1H), 1,75 (m, 1H), 1,82 (d, 1H), 1,91 (d, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 3,33 (m, 3H), 3,72 (m, 4H), 4,15 (m, 1H), 7,26 (d, 1H), 7,41 (t, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,8 (d, 1H), 7,9 (2d, 2H), 9,08 (šs, 1H).

Mikroanalýza (1,00 HC1.0,5H₂O):

Vypočteno: C, 64,2; H, 7,97; N, 6,5 %

Nalezeno: C, 64,4; H, 7,90; N, 6,3 %.

Sloučenina 54 používaná jako výchozí látka se připraví analogicky s příkladem 23 za použití příslušných meziproduktů:

-60CZ 293694 B6

Sloučenina 52:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,00 (2s, 9H), 1,46 (d, 9H), 1,95 (m, 2H),

2,4 (m, 2H), 3,3 (m, 4H), 3,7 (m, 3H), 4,00 (m, 3H), 4,57 (d, 2H), 5,22 (2d, 2H), 5,90 (m, 1H),

7,24 - 8,4 (m, 7H).

Sloučenina 54:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,00 (2s, 9H), 1,35 (m, 1H), 1,49 (s, 9H), 1,89 (šs, 1H), 1,95 (d, 1H), 2,3 (m, 1H), 2,32 (d, 1H), 2,88 (2q, 1H), 3,1 - 3,9 (m, 9H), 7,25 -

8.31 (m,7H).

b) Příprava sloučeniny 57

Použije se podobný způsob popsaný v příkladu 24 pro přípravu sloučeniny 27 a připraví se sloučenina 57.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,2 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 2,6 (m, 2H), 3,15-4,40 (m, 10H), 7,28 - 8,70 (m, 11H), 9,4 (šs, 1H).

Mikroanalýza (2HC1.2H₂O):

Vypočteno: C, 56,0; H, 6,20; N, 8,17 %

Nalezeno: C, 56,4; H, 6,46; N, 7,70 %.

Sloučenina 55 použitá jako výchozí látka se připraví analogicky s příkladem 24 za použití příslušných meziproduktů:

Sloučenina 53:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,48 (s, 9H), 1,84 (m, 1H), 2,42 (m, 1H), 2,87- 3,45 (m, 5H), 3,63 - 4,26 (m, 7H), 4,55 (d, 2H), 5,22 (2d, 2H), 5,9 (m, 1H), 7,1 - 8,7 (m, 11H).

Sloučenina 55:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,34 (m, 1H), 1,5 (s, 9H), 1,95 (m, 1H),

2.32 (m, 2H), 2,72 - 4,00 (m, 1 OH), 7,1 - 8,6 (m, 11H).

Příklad 37 (viz schéma 44)

Příprava

a) N-(2,2-difenylethyl)-N-([2S,4S)-4—sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3-methylbutyramidu (sloučenina 67),

b) N-(2,2-difenylethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)-3,3-dimethylbutyramidu (sloučenina 68),

c) N-2,2-difenylethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-2-pyridin-3-ylacetamidu (sloučenina 69) a

d) N-(2,2-difenylethyl)-l-oxy-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolídin-2-ylmethyl)-6-methoxynikotinamidu (sloučenina 70).

a) Příprava sloučeniny 67

K. přípravě sloučeniny 67 se použije způsob popsaný v příkladu 23 pro přípravu sloučeniny 6 a za použití příslušných meziproduktů-viz schéma 44.

-61 CZ 293694 B6

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-ds): δ 0,75 (m, 6H), 1,55 (m, 1H), 1,87 (m, 2H), 2,05 - 2,45 (m, 1H), 3,05 (m, 1H), 3,25 - 3,70 (m, 6H), 4,05 (m, 2H), 4,20 - 4,55 (m, 1H), 7,30 (m, 10H), 8,80 - 9,80 (2šs, 2H).

Mikroanalýza (l,00HCl, 1,00 H₂O):

Vypočteno: C, 63,9; H, 7,82; N, 6,21 %

Nalezeno: C, 64,1; H, 7,70; N, 6,00 %.

Sloučenina 58:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,50 (s, 9H), 1,77 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 3,00 (m, 1H), 3,14 (q, 1H), 3,24 (d, 2H), 3,67 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 4,10 (m, 2H), 4,54 (d, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,25 (m, 10H).

Sloučenina 59:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3): δ 0,85 (m, 6H), 1,48 (m, 9H), 1,80 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,40 (m, 1H), 2,80 - 4,35 (m, 9H), 4,55 (m, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,25 (m, 10H).

Sloučenina 63:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 0,85 (2d, 6H), 1,24 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,68 (m, 1H), 1,81 (d, 1H), 1,95 - 2,35 (m, 3H), 2,75 - 3,65 (m, 6H), 3,90 - 4,55 (m, 3H), 7,25 (m, 10H).

b) Příprava sloučeniny 68

Podobně se sloučenina 68 připraví ze sloučeniny 60 jak je uvedeno ve schématu 44.

Sloučenina 68:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-dó): δ 0,85 (m, 9H), 1,55 (m, 1H), 1,74 — 2,27 (m, 2H), 2,37 (m, 1H), 3,05 (m, 1H), 3,45 (m, 6H), 4,05 (m, 2H), 4,18 - 4,55 (m, 1H), 7,28 (m, 10H), 8,90-9,90 (m,2H).

Mikroanalýza (l,0HC!.l,0H₂O):

Vypočteno: C, 64,6; H, 8,02; N, 6,02 %

Nalezeno: C, 64,8; H, 8,30; N, 5,70 %.

Sloučenina 60:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 0,93 (m, 9H), 1,50 (s, 9H), 1,82 (m, 2H), 2,35 (m, 3H), 2,90 - 4,35 (m, 8H), 4,55 (m, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,25 (m, 10H).

Sloučenina 64:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 0,93 (s, 9H), 1,24 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,80 (q, 1H), 2,23 (d, 1H), 2,30 (m, 1H), 2,75 - 3,70 (m, 6H), 3,90 - 4,60 (m, 3H), 7,25 (m, 10H).

c) Příprava sloučeniny 69

Sloučenina 69 se připraví ze sloučeniny 61 (viz schéma 44) analogicky s postupem popsaným v příkladu 24 pro přípravu sloučeniny 27.

Sloučenina 69:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,95 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,60 (m, 1H), 3,15 - 4,50 (m, 1H), 7,28 (m, 10H), 7,67 (m, 1H), 8,05 (m, 1H), 8,50 (m, 1H), 8,71 (m, 1H), 9,10- 10,20 (šd, 2H).

-62CZ 293694 B6

Mikroanalýza(2,0HCI.0,75TFA.0,5H₂O):

Vypočteno: C, 55,1; H, 5,51; N, 7,01 %

Nalezeno: C, 55,0; H, 5,60; N, 6,90 %.

Sloučenina 61:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,47 (s, 9H), 1,80 (m, 1H), 2,30- 4,65 (m, 14H), 5,23 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,25 (m, 12H), 8,10 - 8,55 (m, 2H).

Sloučenina 65:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,25 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 2,30 (m, 1H), 2,70-4,55 (m, 12H), 7,30 (m, 12H), 8,28 (2d, 1H), 8,45 (m, 1H).

d) Příprava sloučeniny 70

Podobně se připraví sloučenina 70 ze sloučeniny 62 za použití příslušných meziproduktů.

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,67 (m, 1H), 2,15 (d, 1H), 2,47 (m, 1H), 3,16 (šs, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,85 - 4,40 (m, 8H), 5,22 (šs, 1H), 6,56 (d, 1H), 7,00- 7,35 (m, 11H), 7,90 (s, 1H), 8,85 - 10,75 (2šs, 2H).

Mikroanalýza (2HC1.0,5H₂O):

Vypočteno: C, 57,2; H, 5,91; N, 7,70 %

Nalezeno: C, 57,5; H, 5,60; N, 7,30 %.

Sloučenina 62:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,50 (s, 9H), 1,60 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 3,00 - 4,50 (m, 12H), 4,58 (d, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 6,53 (d, 1H), 6,95 (m, 1H), 7,25 (m, 11H).

Sloučenina 66:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 1,20 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 2,30 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 3,00-3,45 (m, 4H), 3,55 (m, 1H), 3,95-4,25 (m, 5H),4,47 (m, 1H), 6,55 (d, 1H), 7,25 (m, 11H), 7,65 (m, 1H).

Příklad 38 (viz schéma 45)

Příprava

a) N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrroIidin-2-ylmethyl)-3-methyl-N-(2-naftalen-2-ylethyl)butyramidu (sloučenina 80),

b) N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3,3-dimethyl-N-(2-naftalen-2-ylethyl)butyramidu (sloučenina 81),

c) N-([2S,4S]-4-sulfanyipyrrolidin-2-ylmethyl)-N-(2-naftalen-2-ylethyl)-2-pyridin-3ylacetamidu (sloučenina 82) a

d) N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyI)-2-(4-methoxyfenyl)-N-(2-naftaIen-2ylethyl)acetamidu (sloučenina 83).

a) Příprava sloučeniny 80

Pro přípravu sloučeniny 80 se použije způsob popsaný v příkladu 23 pro přípravu sloučeniny 6.

-63CZ 293694 B6

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆): δ 0,75 (m, 6H), 0,87 (d, 1H), 1,65 (m, 1H), 1,92 (m, 1H), 2,02 (d, 1H), 3,03 (m, 3H), 3,20 - 3,80 (m, 9H), 7,48 (m, 3H), 7,75 (d, 1H), 7,85 (m, 3H), 8,90 - 9,90 (šd, 2H).

Mikroanalýza (1,0 HC1):

Vypočteno: C, 64,9; H, 7,68; N, 6,88 %

Nalezeno: C, 64,9; H, 7,50; N, 6,80 %.

Sloučenina 76 používaná jako výchozí látka se připraví analogicky s příkladem 23 za použití příslušných meziproduktů - viz schéma 45.

Sloučenina 71:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3): δ 1,50 (s, 9H), 1,85 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 3,00 (m, 5H), 3,20 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,53 (d, 2H), 5,20 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,32 (m, 1H), 7,42 (m, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,80 (m, 3H).

Sloučenina 72:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3): δ 0,90 (m, 7H), 1,00 -2,60 (m, 14H), 3,00 (m, 2H), 3,10 - 4,20 (m, 7H), 4,60 (m, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,30 - 7,50 (m, 3H), 7,60 (m, 1H), 7,80 (m, 3H).

Sloučenina 76:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDC1₃): δ 0,90 (m, 6H), 1,10 - 2,50 (m, 15H), 2,80 - 3,80 (m, 9H), 7,26 - 7,50 (m, 3H), 7,60 (m, 1H), 7,80 (m, 3H).

b) Příprava sloučeniny 81

Sloučenina 81 se připraví ze sloučeniny 73 stejným způsobem jak je uvedeno ve schématu 45 při přípravě sloučeniny 80 (viz shora).

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-dů): δ 1,08 (d, 9H), 1,80 (m, 1H), 2,15 30 (m, 2H), 2,65 (m, 1H), 3,00 - 4,00 (m, 10H), 7,63 (m, 3H), 7,90 (s, 1H), 8,03 (m, 3H), 9,50 (šd, 2H).

Mikroanalýza (l,0HC1.0,25H₂O):

Vypočteno: C, 64,9; H, 7,93; N, 6,58 %

Nalezeno: C, 64,8; H, 8,10; N, 6,50 %.

Sloučenina 73:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (CDCI3): δ 1,00 (m, 9H), 1,47 (s, 9H), 1,80- 2,55 (m, 4H), 3,00 (m, 2H), 3,10 - 4,20 (m, 8H), 4,60 (d, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,30 - 7,85 (m, 7H).

Sloučenina 77:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-dé, 100 °C): δ 0,95 (m, 9H), 1,35- 1,75 (m,9H), 2,15 (s, 2H), 2,40 (m, 1H), 2,60 -3,90 (m, 12H), 7,40 (m, 3H), 7,70 (m, 1H), 7,80 (m, 3H).

c) Příprava sloučeniny 82

Sloučenina 82 se připraví ze sloučeniny 74 jakje popsáno ve schématu 45 stejným postupem jak je popsán v příkladu 24 pro přípravu sloučeniny 27

Sloučenina 82:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-dů): δ 1,65 (m, 1H), 2,90 - 4,15 (m, 14H), 7,35 - 8,90 (m, 11H), 9,50 (šd, 2H).

-64CZ 293694 B6

Mikroanalýza (2,OHC1.1,OTFA.O,5H₂0):

Vypočteno: C, 51,9; H, 5,19; N, 6,99 %

Nalezeno: C, 52,2; H, 5,40; N, 7,00 %.

Sloučenina 74:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 100 °C): δ 1,45 - 1,75 (m, 10H), 2,85 3,85 (m, 11H), 4,03 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,45 - 4,65 (m, 2H), 5,20 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 7,23 (m, 1H), 7,45 (m, 4H), 7,67 (s, 1H), 7,80 (m, 3H), 8,35 (m, 2H).

Sloučenina 78:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 100 °C): δ 1,30 - 1,75 (m, 9H), 2,40 (m, 1H), 2,55-3,90 (m, 14H), 7,10-8,45 (m, 11H).

Příprava sloučeniny 73

Podobně, sloučenina 83 se připraví ze sloučeniny 75 za použití příslušných meziproduktů, jak je uvedeno ve schématu 45.

Sloučenina 85:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆): δ 1,65 (m, 1H), 2,95 (m, 2H), 3,08 (m, 1H), 3,25 - 4,00 (m, 13H), 6,80 (m, 2H), 7,06 (2d, 2H), 7,47 (m, 3H), 7,68 (d, 1H), 7,85 (m, 3H), 9,35 (šd, 2H).

Mikroanalýza (l,5HC1.0,5H₂O):

Vypočteno: C, 62,7; H, 6,57; N, 5,62 %

Nalezeno: C, 62,4; H, 6,50; N, 5,40 %.

Sloučenina 75:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 100 °C): δ 1,45 (s, 9H), 1,75 (m, 1H), 2,75- 3,85 (m, 14H), 4,00 (m, 1H), 4,14 (m, 1H), 4,45 - 4,65 (m, 2H), 5,20 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 6,80 (m, 2H), 7,05 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,80 (m, 3H).

Sloučenina 79:

Nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 100 °C): δ 1,30 - 1,75 (m, 9H), 2,35 (m, 1H), 2,60 - 3,90 (m, 17H), 6,78 (m, 2H), 7,05 (m, 2H), 7,40 (m, 3H), 7,65 (m, 1H), 7,80 (m, 3H).

Příklad 39 (viz schéma 46)

Příprava

a) methylesteru (2S)-2-({2-fenyl-4-[((2S,4S)-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)-amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 38) a

b) (2S)-2-({2-fenyl-4-[((2S,4S)-4-sulfany!pyrrolidin-2-ylmethyl)-amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny (sloučenina 38f).

a) Příprava sloučeniny 38

Methyl-2-brom-4-nitrobenzoát se kopuluje s fenylboronovou kyselinou (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 30) a potom se kopuluje a zbaví chránící skupiny stejným způsobem jak je popsáno v příkladu 32 a získá se sloučenina 38 uvedená v názvu.

-65CZ 293694 B6 'Η nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆, 200 MHz): δ 1,35 - 1,75 (3H, m), 1,8 (3H, s), 1,9 - 2,2 (2H, m), 2,25 - 2,5 (2H+DMSO, m), 2,75 - 3,9 (1 OH, m), 4,0 - 4,25 (1H, m),

5,0 - 5,9 (5H, šs, H₂O), 6,3 - 6,6 (2H, m), 7,0 - 7,3 (7H, m), 7,95 (1H, m), 9,2 - 9,8 (2H, šd).

Hmotové spektrum (ESP⁺) m/z 474 (M+H)⁺, 311, 196.

Analýza pro C₂4H3iN3C>3S₂.2HCl.l,5H₂O: Vypočteno: C, 50,3; H, 6,3; N, 7,3 %

Nalezeno: C, 60,4; H, 6,1; N, 7,3 %.

Příprava sloučeniny 38f

Sloučenina 38 se hydrolyzuje na odpovídající kyselinu (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 33) a získá se sloučenina 33f.

'Η nukleární magnetickorezonanční spektrum (DMSO-d₆+CD₃COOD, 300 MHz): δ 1,5- 1,9 (3H+CDjCOOD, m), 1,95 (3H, s), 2,05 - 2,35 (2H, m), 2,4 - 2,6 (2H+DMSO, m), 3,0-3,1 (IH, m), 3,2- 3,9 (4H, m), 4,2-4,3 (IH, m), 6,5 -6,7 (2H, m), 7,2 - 7,4 (6H, m).

MS (ESP⁺) m/z 460 (M+H)⁺, 311.

Analýza pro C₂3H₂9N₃O3S₂.1,35TFA:

Vypočteno: C, 50,3; H, 4,99; N, 6,85 %

Nalezeno: C, 50,2; H, 5,1; N, 6,8 %.

Příklad 40

Farmaceutické prostředky

Pro terapeutické nebo profylaktické účely u lidí mohou být použity následující reprezentativní farmaceutické dávkovači formy podle vynálezu jak je zde definován, přičemž aktivní složka bude označena jako „sloučenina X“.

a)	Tableta I	mg/tableta
	Sloučenina X	100
	Laktóza PH.Eur.	182,75
	Natrium-kroskarmelóza	12,0
	Pasta kukuřičného škrobu (5% hmot./obj.)	2,25
	Stearát hořečnatý	3,0
b)	Tableta II	mg/tableta
	Sloučenina X	50
	Laktóza PH.Eur.	223,75
	Natrium-kroskarmelóza	6,0
	Kukuřičný škrob	15,0
	Polyvinylpyrolidon (pasta 5% hmotn./obj.)	2,25
	Stearát hořečnatý	3,0
c)	Tableta III	mg/tableta
	Sloučenina X	1,0
	Laktóza PH.Eur	93,25
	Natrium-kroskarmelóza	4,0
	Pasta kukuřičného škrobu (5% hmot./obj.)	0,75
	Stearát hořečnatý	1,0
d)	Kapsle	mg/kapslí
	Sloučenina X	10
	Laktóza	488,5
	Hořčík	1,5

-66CZ 293694 B6

e)	Injekce I	(50 mg/ml)
	Sloučenina X	5 % hmot./obj.
	1M roztok hydroxidu sodného O,1M kyselina chlorovodíková k úpravě pH na 7,6	15 % obj./obj.
	Polyethylenglykol 400 Voda pro injekce do 100 %	4,5 % hmot./obj.
0	Injekce II	(10 mg/ml)
	Sloučenina X	1,0 % hmot./obj.
	Fosforečnan sodný BP	3,6 % hmot./obj.
	O,1M roztok hydroxidu sodného Voda pro injekce do 100 %	15,0 % obj./obj.
£)	Injekce III	(1 mg/ml, pufrováno na pH 6)
	Sloučenina X	0,1 %hmot./obj.
	Fosforečnan sodný BP	2,26 % hmot./obj.
	Kyselina citrónová	0,38 % hmot./obj.
	Polyethylenglykol 400 Voda pro injekce do 100 %	3,5 % hmot./obj.
	Aerosol I	mg/ml
	Sloučenina X	10,0
	Sorbitan trioleát	13,5
	T richlorfluormethan	910,0
	Dichlordifluormethan	490,0
i)	Aerosol II	mg/ml
	Sloučenina X	0,2
	Sorbitan trioleát	0,27
	Trichlorfl uormethan	70,0
	Dichlordifluormethan	280,0
	Dichlortetrafluorethan	1094,0
j)	Aerosol III	mg/ml
	Sloučenina X	2,5
	Sorbitan trioleát	3,38
	Trichlorfluormethan	67,5
	Dichlordifluormethan	1086,0
	Dich lortetrafluorethan	191,5
k)	Aerosol IV	mg/ml
	Sloučenina X	2,5
	Sója lecitin	2,7
	Trichlorfluormethan	67,5
	Dichlordifluormethan	1086,0
	Dichlortetrafluorethan	191,6
1)	Mast	ml
	Sloučenina X	40 mg
	Ethanol	300 μΐ
	Voda	300 μ|
	1 -Dodecy lazacykloheptan-2-on	50 μΐ
	Propylenglykol	do 1 ml

Výše uvedené formulace mohou být získány konvenčními postupy, které jsou velmi dobře známé ve farmaceutickém průmyslu. Tablety a až c mohou být opatřeny enterickým povlakem 5 konvenčními způsoby, například z acetátfitalátu celulózy. Aerosolové formulace h až k mohou být použity ve spojení s standardními aerosolovými dávkovači, a suspenzační činidla, sorbitan

-67CZ 293694 B6 trioleát a sója lecitin mohou být nahrazeny alternativními suspenzačními činidly, jako je sorbitan monooleát, sorbitan seskvioleát, polysorbát 80, polyglycerololeát nebo olejová kyselina.

Příklad 41 (viz schéma 47)

Příprava

a) (2S}-4-karbamoyl-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)butanové kyseliny (sloučenina 39e) a

b) methylesteru (2S)-4-karbamoyl-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)butanové kyseliny (sloučenina 39).

a) Příprava sloučeniny 39

Sloučenina 39a:

1,5 g (6,2 mmol) sloučeniny 32a se kopuluje s methylesterem L-glutaminu (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 30) a získá se 1,2 g (50,5 %) sloučeniny 39a jako bílá pevná látka.

MS (ESP⁺) m/z 386 (M+H)⁺.

Sloučenina 39:

Sloučenina 39a se redukuje, kopuluje se s aldehydem 22b a selektivně se odstraní chránící skupina za použití stejného postupu jak je popsáno v příkladu 32 a získá se sloučenina 39 uvedená v názvu.

MS (ESP⁺) m/z 471 (M+H)⁺.

Analýza pro C₂₄H₃₀N₄O₄S.3HC1.0,25H₂O:

Vypočteno: C, 49,3; H, 5,8; N, 9,6 %

Nalezeno: C, 49,2; H, 5,9; N, 9,2 %.

b) Příprava sloučeniny 39e

Sloučenina 39 se hydrolyzuje (analogicky jako v ekvivalentním stupni příkladu 32) a získá se sloučenina 39e uvedená v názvu.

MS (ESP) m/z 455 (M-H).

Analýza pro C₂₃H₂₈N₄O₄S.2TFA:

Vypočteno: C, 47,4; H, 4,4; N, 8,2 %

Nalezeno: C, 47,0; H, 4,5; N, 7,9 %.

-68CZ 293694 B6

Schéma 1

O

-69CZ 293694 B6

Schéma 2

O

1(d)

(A)EEDQ/CH₂CI₂

-70CZ 293694 B6

Schéma 3

(A)

--->

(A) allylbromid/K₂CO₃/DMF (B) dihydrát chloridu cínatého/MeOH/var pod zpětným chladičem (C) EEDQ/CH₂C1₂

-71 CZ 293694 B6

Schéma 4

H 4(f) (volná báze)

-72CZ 293694 B6

Schéma 4 (pokračování)

(A) EEDQ/CH₂C1₂ (B) methansulfonylchlorid/triethylamin/CHiCb (C) kaliumthioacetát/aceton (D) TFA (trifluoroctová kyselina) (E) jodacetamid/hydrogenuhličitan sodný/DMF

-73CZ 293694 B6

Schéma 5

(A) acetanhydrid/triethylamin/CHjCh

-74CZ 293694 B6

Schéma 6

(A)fenylchlorformiát/triethylamin/CH₂C12

-75CZ 293694 B6

Schéma 7

(A) allylbromid/uhličitan draselný/DMA/90 °C/4 hodiny (B) DCCl/N-hydroxysukcinimid/CHjCb/teplota místnosti/3,5 hodiny (C) hydrochlorid N,O-dimethylhydroxylaminu/triethylamin/5 °C/16 hodin (D) chlorid cínatý/methanol/var pod zpětným chladičem/1 hodina (E) EEDQ/CHiCh/teplota místnosti/16 hodin

-76CZ 293694 B6

Schéma 8 to

(A) hydrochlorid N-methylhydroxylaminu/triethylamin/CFLCb/S °C/16 hodin (B) allylbromid/uhličitan draselný/teplota místnosti/DMF/3 hodiny (C) chlorid cínatý/ethylacetát/70 °C

-77CZ 293694 B6

Schéma 9

(A) EEDQ/CH₂C1₂ (B) O,1M hydroxid sodný/allylalkohol/teplota místnosti

-78CZ 293694 B6

Schéma 10

-79CZ 293694 B6

Schéma 11

-80CZ 293694 B6

Schéma 12

12(b)

-81 CZ 293694 B6

Schéma 12 (pokračování)

-82CZ 293694 B6

Schéma 13

13(a)

13(b)

13(c)

Cl

-83CZ 293694 B6

Schéma 13 (pokračování)

-84CZ 293694 B6

Schéma 14

H

-85CZ 293694 B6

Schéma 15

-86CZ 293694 B6

Schéma 15 (pokračování)

Schéma 16

-87CZ 293694 B6

Schéma 17

>^c

-88CZ 293694 B6

Schéma 17 (pokračování)

-89CZ 293694 B6

Schéma 18

-90CZ 293694 B6

Schéma 18 (pokračování)

-91 CZ 293694 B6

Schéma 19

Schéma 20 io Schéma 21

COOCH.

O

-92CZ 293694 B6

Schéma 22

(i) TPAP, NMM-O/CH3CN, CH2CI2, teplota místnosti, Ar (ii) Me₂N(CH₂)₃N=C=NEth.HCI,HOBT/DMF, 0 °C hydrochlorid methylesteru L-methioninu, NMM/DMF, 0 °C až teplota místnosti, 2 hodiny (iii) Me₂NNH2,FeCI₃.6H₂O/MeOH, var pod zpětným chladičem, 18 hodin (iv) NaCNBH₃, AcOH/EtOH, teplota místnosti, 18 hodin (v) PdCI₂(PPh₃)2, n-Bu₃SnH/CH₂Cl₂, H₂O, teplota místnosti (vi) TFA/CH₂C1₂, teplota místnosti

-93 CZ 293694 B6

Schéma 23

Schéma 24

R²

R¹

R² \

-94CZ 293694 B6

Schéma 25

-95CZ 293694 B6

Schéma 26

-96CZ 293694 B6

Schéma 27

-97CZ 293694 B6

R² \

Schéma 29

-98CZ 293694 B6

Schéma 30

(7) R= (CH₂)₃OCH₃ (8) R-(CH₂)paraPhOCH₃

(10)R=(CH,)₃OCH₃ (ll>R=(CH₂)paraPhOCH₃

-99CZ 293694 B6

Schéma 30 (pokračování) (a) molekulové síto 4.10^-10 m/natriumtriacetoxyborhydrid/dichlormethan/-20 °C (b) izovalerylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti (c) R = (CH₂)₃OCH₃, molekulové síto 4.10~^lom/natriumtriacetoxyborhydrid/dichlormethan (c) R = CH₂paraPhOCH₃, paramethoxybenzylchlorid/hydrogen uhličitan ío sodný/H₂O/dichlormethan (d) tributylcínhydrid/bis(trifenylfosfm)palladium(0)chlorid/dichlormethan (e) trifluoroctová kyselina/teplota místnosti

-100CZ 293694 B6

Schéma 31

(lj)R“COCH₂CH(Meh (14) R-COíCH₂)₃Me (15) R- COCH,CH(Me)CH₂Me (16) R-COtCH^OMe (17) R= COCH₂-pyridin-3-yl (52) R= CH₂-4-methoxyPh (C)

(18) R= COCH₂CH(Me)₂ (19) R= CO(CH₂)₃Me (20) R“ COCH₂CH(Me)CH₂Me (21) R“ CO(CH₂)2OMe (22) R COCH₂-pyridin-3-yl (53) R“ CH₂-4-methoxyPh (23) R- COCH₂CH(Me)₂ (24) R- COfCH^Me (25) R= COCH,CH(Me)CH₂Me (26) R- COfCH₂)₂OMe (27) R” COCH-j-pyridÍn-3-yl (54) R“ CH₂-4-mcihoxyPh

- 101 CZ 293694 B6

Schéma 31 (pokračování)

a) molekulové síto 4.10^lom/natriumtriacetoxyborhydrid/dichlormethan/ -20 °C

b) R= 13, izovalerylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti

R= 14, valerylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti

R = 15, 3-methylvalerová kyselina/EDC/4-dimethylaminopyridin/dichlormethan

R= 16, 3-methoxypropionová kyselina/EDC/4-dimethylaminopyridin/dichlormethan

R = 52, p-methoxybenzylchlorid/uhličitan draselný/DMF/70 °C

c) tributylcínhydrid/bis(trifenylfosfm)palladium(o)chlorid/dichlormethan

d) trifluoroctová kyselina/teplota místnosti

- 102CZ 293694 B6

Schéma 32

(32) R=CH₃ (33) R=COCH₂CH(CH₃) (34) R=CH₃ (35) R=COCH₂CH(CH₃) (36) R=CH₃ (37) R=COCH₂CH(CH₃)

a) molekulové síto 3.10 ’°m/octová kyselina/ethanol/natriumkyanborhydrid/teplota místnosti

b) R = CH₃, methyljodid/dimethylformamid/uhličitan draselný, 80 °C

R = COCH₂CH(CH₃)₂, izovalerylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti

c) tributylcínhydrid/bis(trifenylfosfin)palladium(o)chlorid/dichlormethan

d) trifluoroctová kyselina/teplota místnosti

- 103 CZ 293694 B6

Schéma 33

(43) R=COCH₂CH(CH₃) (44) R=C0CH₃

a) molekulové síto 4.10 ^l0m/natriumtriacetoxyborhydrid/dichlormethan/teplota -20 °C

b) R = COCH₂CH(CH₃)₂, izovaleiylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti R = COCH₃, acetylchlorid/dichlormethan/triethylamin/teplota místnosti

c) tributylcínhydrid/bis(trifenylfosfin)palladium(o)chlorid/dichlormethan

- 104CZ 293694 B6

Schéma 34

(48) R=COCH₂CH(CH₃)₂ (49) R=COCH₃ (d) v

(50) R=COCH₂CH(CH₃)₂ (51) R=COCH₃

- 105CZ 293694 B6

Schéma 34 (pokračování)

a) molekulové síto 4.10'^lom/natriumtriacetoxyborhydrid/dichlormethan/teplota-20 °C

b) R = COCH₂CH(CH3)₂, izovalerylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti R = COCH3, acetylchlorid/dichlormethan/triethylamin/teplota místnosti

c) tributylcínhydrid/bis(trifenylfosfin)palladium(o)chlorid/dichlormethan

d) trifluoroctová kyselina/teplota místnosti

- 106CZ 293694 B6

Schéma 35

i) kyselina dusičná, 50 °C ii) (COC1)₂, dimethylformamid/dichlormethan triethylamin, hydrochlorid methylesteru L-methioninu iii) Me₂NNH₂, FeCl₃.6H₂O/methanol, var pod zpětným chladičem iv) 22b/methanol, molekulové síto 3.1Ο“¹⁰ m kyselina octová, NaCNBH₃

v) PdCI₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda vi) kyselina trifluoroctová

-107CZ 293694 B6

Schéma 36

i) G. J. Leuckakol. JACS5J., 1831,1929 ii) EDC, HOBT/dimethylformamid, 0 °C NMM, hydrochlorid methylesteru L-methioninu,

0 °C - teplota místnosti iii) Me₂NNH₂, FeCl₃.6H₂O/methanol, var pod zpětným chladičem iv) 22b/methanol, molekulové síto 3.10”¹⁰ m kyselina octová, NaCNBH₃

v) PdCl₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda ίο vi) kyselina trifluoroctová vii) 2N hydroxid sodný/methanol

- 108CZ 293694 B6

Schéma 37

iii)

η-;

32e 11

- 109CZ 293694 B6

Schéma 37 (pokračování)

i) PhB(OH)₂, (PPh₃)4Pd°/DME, vodný hydrogenuhličitan sodný, var pod zpětným chladičem ii) EDC, HOBT/dimethylformamid, 0 °C

NMM, hydrochlorid methylesteru L-methioninu, 0 °C - teplota místnosti iii) Me₂NNH₂, FeCl₃.6H₂O/methanol, var pod zpětným chladičem iv) 22b/methanol, molekulové síto 3.10*'° m kyselina octová, NaCNBH₃ ío v) PdCI₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda vi) kyselina trifluoroctová vii) 2N hydroxid sodný/methanol

-110CZ 293694 B6

- 111 CZ 293694 B6

Schéma 38 (pokračování)

i) PhB(OH)₂, (PPhjfyPďÝDME, vodný hydrogenuhličitan sodný, var pod zpětným chladičem ii) EDC, HOBT/dimethylformamid, 0 °C

NMM, hydrochlorid methylesteru L-methioninu, 0 °C - teplota místnosti iii) Me₂NNH₂, FeC13.6H₂O/methanol, var pod zpětným chladičem iv) 22b/methanol, molekulové síto 3.10“¹⁰ m kyselina octová, NaCNBH₃

v) PdCl₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda vi) kyselina trifluoroctová vii) 2N hydroxid sodný/methanol

-112CZ 293694 B6

-113CZ 293694 B6

Schéma 39 (pokračování)

i) SO₂Cl₂/methanol, var pod zpětným chladičem ii) BzZnBr, PdCl₂(PPh₃)₂/tetrahydrofuran iii) 2N hydroxid sodný/methanol iv) EDC, HOBT/dimethylformamid, 0 °C NMM, hydrochlorid methylesteru L-methioninu, 0 °C - teplota místnosti

v) SnCl₂.2H₂O/ethylacetát, var pod zpětným chladičem vi) 22b/methanol, molekulové síto 3.10^-10 m kyselina octová, NaCNBH₃ vii) PdCl₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda viii) kyselina trifluoroctová ix) 2N hydroxid sodný/methanol

-114CZ 293694 B6

-115CZ 293694 B6

Schéma 40 (pokračování)

i) BzZnBr, Pd₂(dba)₃/tetrahydrofuran ii) 2N hydroxid sodný/methanol iii) EDC, HOBT/dimethylformamid, 0 °C NMM, hydrochlorid methylesteru L-methioninu, 0 °C - teplota místnosti iv) SnCl₂.2H₂O/ethylacetát, var pod zpětným chladičem

v) 22b/methanol, molekulové síto 3.10'° m kyselina octová, NaCNBH₃ vi) PdCl₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda vii) kyselina trifluoroctová viii) 2N hydroxid sodný/methanol

-116CZ 293694 B6

Schéma 41

36d / 3 Se

i) 2N hydroxid sodný/methanol ii) SO₂CI₂/izopropanol, var pod zpětným chladičem iii) SnCI₂.2H₂O/ethylacetát, var pod zpětným chladičem iv) 22b/izopropanol, molekulové síto 3.10“¹⁰ m kyselina octová, NaCNBH₃

v) PdCl₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda vi) kyselina trifluoroctová

- 117CZ 293694 B6

Schéma 42

O

37a

i) CH₃O(CH₂)₂CO₂H, EEDQ/dichlormethan ii) PdCI₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda iii) kyselina trifluoroctová

- 118CZ 293694 B6

(a) molekulové síto 4.10“¹⁰ m/natriumtriacetoxyborohydrid/dichlormethan/-20 °C (b) /erc-butylacetylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti (c) 3-pyridyloctová kyselina/EDC/HOBT/N-methylmorfolin/dichlormethan/O °C-teplota místnosti (d) tributylcínhydrid/bÍs(trifenylfbsfin)palladium(0)chlorid/dichlormethan (e) kyselina trifluoroctová/teplota místnosti

-119CZ 293694 B6

Schéma 44

- 120CZ 293694 B6

Schéma 44 (pokračování) (a) molekulové síto 4.10’¹⁰ m/natriumtriacetoxyborohydrid/dichlormethan/-20 °C (b) R = COCH₂CH(CH₃)₂, izovalerylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti

R = COCH₂C(CH₃)2, terc-butylacetylchlorid/dichlormethan/triethylamin/teplota místnosti

R = COCH₂

3-pyridyloctová kyselina/EDC/HOBT/N-methylmorfolin/dichlormethan

R = COCH₂

o10

6-methoxy-l-oxonikotinová kysel ina/EDC/HOBT/N-methyl morfol in/dichlormethan (c) tributylcínhydrid/bis(trifenylfosfín)palladium(0)chlorid/dichlormethan (e) kyselina trifluoroctová/teplota místnosti

- 121 CZ 293694 B6

Schéma 45

συ

- 122CZ 293694 B6

Schéma 45 (pokračování) (a) molekulové síto 4.10^-10 m/natriumtriacetoxyborohydrid/dichlormethan/-20 °C (b) R = COCH₂CH(CH₃)₂, izovalerylchlorid/triethylamin/dichlormethan/teplota místnosti

R = COCH₂C(CH₃)₂, terc-butylacetylchlorid/dichlormethan/triethylamin/teplota místnosti

R = COCHj

3-pyridyloctová kyselina/EDC/HOBT/N-methylmorfolin/dichlormethan

R = C0CH₂

6-methoxy-l-oxonikotinová kyselina/EDC/HOBT/N-methylmorfolin/dichlormethan (c) tributylcínhydrid/bis(trifenylfosfin)palladium(0)chlorid/dichlormethan (e) kyselina trifluoroctová/teplota místnosti

- 123 CZ 293694 B6

Schéma 46

iii)

- 124CZ 293694 B6

Schéma 46 (pokračování)

i) PhB(OH)₂, (PPh₃)₄ Pd°/DME, vodný hydrogenuhličitan sodný, var pod zpětným chladičem ii) EDC, HOBT/dimethylformamid, 0 °C NMM, hydrochlorid methylesteru L-methioninu, 0 °C - teplota místnosti iii) SnCl₂.2H₂O/ethylacetát, var pod zpětným chladičem iv) 22b/methanol, molekulové síto 3.10^-10 m kyselina octová, NaCNBH₃

v) PdCl₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda io vi) kyselina trifluoroctová vii) 2N hydroxid sodný/methanol

- 125 a

Schéma 47

- 126CZ 293694 B6

Schéma 47 (pokračování)

i) EDC, HOBT/dimethylformamid, 0 °C NMM, hydrochlorid methylesteru L-methioninu, 0 °C - teplota místnosti ii) SnCI₂.2H₂O/ethylacetát, var pod zpětným chladičem iii) 22b/methanol, molekulové síto 3.10“'° m kyselina octová, NaCNBH₃ iv) PdCl₂(PPh₃)₂, n-Bu₃SnH/dichlormethan, voda

v) kyselina trifluoroctová vi) 2N hydroxid sodný/methanol

Claims (13)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Farmaceutická kompozice inhibující famesylaci Ras, vyznačující se tím, že obsahuje derivát 4-merkaptopyrrolidinu obecného vzorce I kde:

   R¹ je vybrán ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; -CO-alkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku; -CO-O-alkenylová skupina obsahující v alkenylové části 2 až 4 atomy uhlíku; -CO-O-(CH₂)nfenylová skupina popřípadě substituovaná na fenylové skupině nitroskupinou a n=0-4; a skupina -alkylen-CONH₂ obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku;

   R² je vybrán ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; a -CO-alkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku;

   R³ je vybrán ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; hydroxylová skupina; nitroskupina; skupina alkylen-R⁷ obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku, kde R⁷ je fenylová skupina; skupina -(CH₂)_nCOOR⁸, kde n = 0 až 3 a R⁸ je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 4 atomy uhlíku; skupina -CO-NR⁹R¹⁰, kde R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, -O-alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, -O-alkenylová skupina obsahující 2 až 4 atomy uhlíku, nebo skupina alkylen-fenyl obsahující v alkylenové části 1 až 3 atomy uhlíku popřípadě substituovaná atomem halogenu; skupina CON(R^U)OR¹², kde R¹¹ a R¹² jsou nezávisle na sobě alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a alkenylová skupina obsahující 2 až 4 atomy uhlíku;

   skupina vzorce II,

   -CONH-CHR¹⁴-COOR¹⁷ (II),

   - 127 CZ 293694 B6 kde R¹⁷ je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, R¹⁴ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří postranní řetězec lipofilní aminokyseliny a karbamoylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, skupina vzorce II má L nebo D konfiguraci na chirálním uhlíku alfa odpovídající volné aminokyseliny; a skupina vzorce -X-R¹⁵, kde X je O nebo skupina CH₂, a R¹⁵ je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo fenylová skupina;

   p je 0 až 3, kde významy R³ mohou být stejné nebo různé;

   L je můstek vybraný z následujících skupin psaných ve vzorci I zleva doprava: -CO-NR¹⁶-, kde R¹⁶ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, skupina alkylen-Z obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku, skupina -CO-alkylen-Z obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku, -COalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, a Z je vybrána ze skupiny, kterou tvoří -O-alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, methoxyfenylová skupina, pyridylová skupina a methoxypyridylová skupina; skupina -CH2-NH-; skupina -CH2-N(CH3)-; skupina -CH2NR²¹~T~, kde R’¹ má jakýkoli význam definovaný pro R¹⁶, T je skupina -(CH2)_n-, kde n je 1 až 4 a T je popřípadě monosubstituovaná fenylovou skupinou; skupina -CH₂NH-SO?-; a skupina-CH₂-NH-CO-;

   A je vybrána ze skupiny, kterou tvoří fenylová skupina; naftylová skupina; pyridinylová skupina nebo thienylová skupina;

   nebo její -S-S- dimer, když R²=H; nebo její N-oxid;

   nebo její enantiomer, diastereoizomer, farmaceuticky přijatelnou sůl, in vivo hydrolyzovatelný ester nebo solvát společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
2. 2. Farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že kombinace R³ a p jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří:

   i) R³ je vybrána ze skupiny sloučenin obecného vzorce II; skupiny -alkylen-R⁷ obsahující v alkylenové části 1 až 4 atomy uhlíku; a skupiny R⁷; a p = 1 až 3 pod podmínkou, že jeden význam R³ je skupina vzorce II;

   ii) p = 0 s podmínkou, že A je naftylová skupina a L je skupina -CH₂NR^2I-T;

   iii) p = 1 s podmínkou, že R³ = skupina vzorce II a A je naftylová skupina.
3. 3. Farmaceutická kompozice podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že je ve formě tablet.
4. 4. Derivát 4-merkaptopyrrolidinu obecného vzorce I definovaný v kterémkoli z předcházejících nároků 1 až 2, pro použití jako léčivo.
5. 5. Derivát 4-merkaptopyrrolidinu obecného vzorce I definovaný v kterémkoli z předcházejících nároků 1 až 2, pro použití při přípravě léčiva pro léčení onemocnění zprostředkovaných famesylací Ras.
6. 6. Derivát 4-merkaptopyrrolidinu vybrané z jakékoli z následujících tříd i), ii) nebo iii):

   - 128CZ 293694 B6 (III) třída i) kde:

   X¹ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; hydroxyalkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkoxyalkylová skupina obsahující v alkoxylové části 1 až 6 atomů uhlíku a v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; alkylkarbonylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; hydroxyalkylkarbonylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; alkoxyalkylkarbonylová skupina obsahující v alkoxylové části 1 až 6 atomů uhlíku a v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku;

   A je vybrána ze skupiny, kterou tvoří fenylová skupina, naftylová skupina nebo pětičlenný až desetičlenný heterocyklický kruh obsahující až 5 heteroatomů vybraných z O, N a S;

   X² je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; fenylová skupina; fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; a pětičlenný až šestičlenný heteroarylový kruh obsahující až 3 heteroatomy vybrané zO, N a S popřípadě vázaný k A alkylovou skupinou obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; a X² je popřípadě mono nebo di-substituovaná na kterémkoli kruhu substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, atom halogenu, skupina OH, alkoxyskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkanoylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkanoyloxyskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupina, alkylaminoskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, di(alkyl)aminoskupina obsahující v každé alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, alkanoylaminoskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nitroskupina, kyanoskupina, karboxylová skupina, karbamoylová skupina, alkoxykarbonylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, thiolová skupina, alkylsulfanylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfinylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfonylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku a sulfonamidoskupina;

   X³ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomy uhlíku;

   X⁴ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří alkylsulfanylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; alkylsulfinylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; alkylsulfonylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku; karbamoylová skupina; N-(alkyl)karbamoylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; N-(dialkyl)karbamoylová skupina obsahující v každé alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; a jejich hydroxy nebo alkyletherová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku;

   třída i i) (IV)

   - 129CZ 293694 B6 kde:

   X⁵ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří skupina -CO-alkyl-Ph obsahující v alkylové Části 1 až 4 atomy uhlíku; -CO-alkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku; -COalkyl-heteroarylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, kde heteroarylová skupina je pětičlenná až desetičlenná heteroarylová skupina obsahující až 5 heteroatomů vybraných z O, N a S a Ph nebo heteroarylová skupina jsou popřípadě substituovány tak, jak je definováno pro arylovou skupinu v X² výše; alkyloxyalkylová skupina obsahující v každé alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku;

   A je naftylová skupina nebo desetičlenný heterocyklický kruh obsahující až 5 heteroatomů vybraných z O, N a S;

   R³ a p jsou stejné, jako bylo definováno v nároku 1;

   třída iii)

   X⁶ (V) kde:

   X⁶ má jakýkoli význam uvedený pro X⁵ v i i) výše;

   X⁷ je fenyl popřípadě substituovaná tak, jak je definováno pro arylový kruh v X² výše;

   A je fenyl nebo naftylová skupina nebo pětičlenný až desetičlenný heterocyklický kruh obsahující až 5 heteroatomů vybraných z O, N a S;

   R³ a p jsou definovány podle nároku 1;

   nebo jeho N-oxid, farmaceuticky přijatelná sůl, in vivo hydrolyzovatelný ester nebo solvát.
7. 7. Derivát 4—merkaptopyrrolidinu podle nároku 6, kde ve sloučeninách ze třídy i), vzorce III

   X¹ je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku nebo alkoxyalkylová skupina obsahující v alkoxylové části i v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku;

   X² je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku; fenylová skupina nebo fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku;

   X⁴ je alkylsulfanylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku;

   A je vybrána ze skupiny, kterou tvoří fenylová skupina nebo naftylová skupina;

   ve sloučeninách ze třídy ii),

   P je 0 a;

   - 130CZ 293694 B6 ve sloučeninách ze třídy iii)

   X⁷ je fenyl;

   A je fenyl;

   P jeO-
8. 8. Kterýkoli z následujících derivátů 4-merkaptopyrrolidinu nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí:

   methylester (2S)-2-{2-benzyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)amino]benzoylamino}—4-methylsulfanylbutanové kyseliny;

   (2S)-2-{2-benzyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]benzoylamino}-4methylsulfanylbutanová kyselina;

   methylester (2S)-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)-amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny;

   (2S)-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)4-methylsulfanylbutanová kyselina;

   methylester (2S)-2-({3-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)amino]naftalen-lkarbonyl}amino)-4-methylsulfanylbutanové kyseliny;

   (2S)-2-({3-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)amino]naftalen-l-karbonyl}amino)-4methylsulfanylbutanové kyseliny;

   methylester (2S)-2-({-3-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)-4-methylsuIfanylbutanové kyseliny;

   (2S)-2-({-3-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)4-methylsulfanylbutanová kyselina;

   (25.45) -2-[{N-(4-methoxybenzyl)-N-(naftalen-l-ylmethyl)amino}methyI]pyrrolidin-4-thioI;

   N-(naftalen-l-ylmethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyí)pentanamid;

   N-(naftalen-l-ylmethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-2-(pyridin-3-yl)acetamid;

   N-((2S,4S)-4-sulfanyl-pyrrolidin-2-ylmethyl)-3-methyl-N-(2-naftalen-l-ylethyl)butyramid;

   N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-N-(2-naftalen-l-ylethyl)-2-pyridin-3-ylacetamid;

   (25.45) -2-{[(3-Methoxypropyl)-(2-naftalen-l-ylethyl)amino]methyl}pynOlidin-4-thiol;

   N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-2-(4-methoxyfenyl)-N-(2-naftalen-2-ylethyI)acetamid;

   (25.45) -2-{[(2-(4-Methoxyfenyl)ethyl)-(2-naftalen-l-ylethyl)amino]methyl}pyrrolidin-4thiol;

   - 131 I

   N-(2,2-Difenylethyl)-N-([2S,4S]^-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethy!)-3-methylbutyramid;

   N-([2S,4S]-4-suIfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3,3-dirnethyl-N-(2-naftaIen-2-ylethyl)butyramid;

   N-(2,2-Difenylethyl)-N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3,3-dimethylbutyramid;

   (2S)-2-{3-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-(3-methoxypropyl)amino]benzoylamino}-4-methylsulfanylbutanová kyselina;

   N-([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)-3,3-dimethyl-N-(2-naftalen-l-yl-ethyl)butyramid;

   (2S)-4-karbamoyl-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpyrrolidin-2-ylmethyl)amino]fenylkarbonyl}amino)butanová kyselina; a methylester (2S)-4-karbamoyl-2-({2-fenyl-5-[([2S,4S]-4-sulfanylpynOlidin-2-ylmethyl)am i no] feny lkarbony 1} am ino)butanové kysel iny.
9. 9. Derivát 4-merkaptopyrrolidinu podle kteréhokoli z nároků 6 až 8 pro použití jako léčivo.
10. 10. Derivát 4-merkaptopyrrolidinu podle kteréhokoli z nároků 6 až 8 pro použití při přípravě léčiva pro léčení onemocnění zprostředkovaného famesylací Ras.
11. 11. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje derivát 4-merkaptopyrrolidinu definovaný podle kteréhokoli z nároků 6 až 8 společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
12. 12. Farmaceutické kompozice, v y z n a č u j í c í se tím, že je ve formě tablet.
13. 13. Způsob přípravy derivátů 4-merkaptopyrrolidinu ze tříd i), ii) nebo iii) definovaných podle nároku 6, vyznačující se tím, že se odstraní chránící skupiny ze sloučeniny vzorce VI představuje pravou stranu sloučeniny ze třídy i), ii) nebo iii) definované podle nároku 6,

    Pr¹ je atom vodíku nebo skupina chránící aminoskupinu, Pr² je atom vodíku nebo skupina chránící thioskupinu a jakékoli funkční skupiny v X⁸ jsou popřípadě chráněné pod podmínkou, že je přítomna nejméně jedna chránící skupina, a popřípadě, pokud je to vhodné, takto získaný produkt se převede na jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.