CZ291757B6

CZ291757B6 - Léčivo pro léčení úzkosti a panického strachu

Info

Publication number: CZ291757B6
Application number: CZ1997162A
Authority: CZ
Inventors: Geoffrey Neil Woodruff; Nicolas Steven Gee; Lakhbir Singh; Jason Peter Brown
Original assignee: Warner-Lambert Company
Priority date: 1994-07-27
Filing date: 1995-07-11
Publication date: 2003-05-14
Also published as: WO1996003122A3; DE69526972T2; CA2193384A1; CA2193384C; EP0804182B1; PL187064B1; SK283711B6; HUT76835A; MX9606674A; HU0102043D0; PT804182E; ES2176334T3; SK9097A3; AU3006995A; EP0804182A2; HU0102041D0; CZ16297A3; WO1996003122A2; PL318268A1; AU703428B2

Abstract

eÜen se t²k nov²ch indikac zn m²ch cyklick²ch aminokyselin. Tyto slou eniny, jako nap° klad gabapentin, se pou vaj p°i l en ·zkosti a p°i l en a/nebo prevenci z chvat panick ho strachu. Zjistilo se, e parci ln N-termina n sekvence proteinu, kter² v e gabapentin, je identick s N-termina n sekvenc zral .alfa..sub.2.n..delta. podjednotky L-typu Ca.sup.2+ .n.kan lku z kostern ho svalu kr l ka.\

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nového terapeutického použití určitých α-aminokyselin, zejména gabapentinu, jeho derivátů a farmaceuticky přijatelných solí. Vynález se týká použití těchto sloučenin pro výrobu farmaceutické kompozice pro léčení a/nebo prevenci úzkosti a panického strachu u savců.

Dosavadní stav techniky

Patent US 5 084 479 se týká způsobu léčení neurodegenerativních poruch.

Takovými neurodegenerativními poruchami je Altheimerova choroba, Huntingtonova choroba, Parkinsonova choroba a amyotrofní laterální skleróza. Do rozsahu vynálezu rovněž patří léčení neurodegenerativních poruch známých jako akutní poranění mozku. Mezi akutní poranění mozku se řadí například mrtvice, poranění hlavy a asfyxie.

Mrtvice se vztahuje k cerebrálně-vaskulámí poruše nebo cerebrálně vaskulámí příhodě (CVA) a zahrnuje akutní tromboembolickou mrtvici. Mrtvice zahrnuje jak fokální, tak i globální ischemii. Rovněž jsou zde zahrnuty dočasné cerebrální ischemické záchvaty a další cerebrálně vaskulámí problémy doprovázející cerebrální ischemii. Uvedený způsob je rovněž použitelný u pacientů, kteří se podrobují specifické karotické endarterektomii nebo dalším cerebrovaskulámím nebo vaskulámím chirurgickým zákrokům nebo diagnostickým vaskulámím procedurám zahrnujícím cerebrální angiografii apod.

Dalšími léčenými příhodami jsou poškození míchy nebo poškození vznikající v důsledku anoxie, hypoxie, hypoglykemie, hypotonie, stejně jako poškození, se kterými se lze setkat v průběhu procedur v důsledku embolie, hypertenze a hypoxie.

Patent US 4 024 175 a z něho vyloučený patent US 4 087 544 se týkají sloučenin zmíněných v předložené přihlášce vynálezu, způsobů jejich přípravy a několika jejich použití. Popsané indikace zahrnují protetický účinek proti křeči vyvolané thiosemikarbazidem; protetický účinek proti kardiozolové křeči; onemocněním mozku, epilepsii, záchvatům slabosti, hypokinezi, a poranění lebky; a zlepšení funkcí mozku. Tyto sloučeniny lze podle zmíněných patentů rovněž použít u geriatrických pacientů.

Ve výše jmenovaných dokumentech nebyla nalezena žádná zmínka, z níž by zřejmým způsobem vyplývalo nové použití sloučenin uvedených v patentu US 4 024 175 pro léčení úzkosti, kterými se zabývá předložená přihláška vynálezu.

Gabapentin (Neurotin) je strukturálním analogem kyseliny γ-aminobutyrové (GABA), která je hlavním inhibitorem přenašečů nervových vznětů v mozku savců. Nicméně na rozdíl od GABA snadno proniká mozko-krevní bariérou a nepůsobí ani na GABA_a-, ani na GABA_B-receptoiy (Bartoszyk D. g. a Reimann W. (1985), Preclinical characterization of the anticonvulsant gabapentin, Abstrakta 16. Mezinárodního kongresu zabývajícího se epilepsií (Ciba-Geigy, Basel), str. 1). Ukázalo se, že vykazuje antikonvulzivní neboli protikřečové účinky v širokém rozsahu záchvatových modelů u zvířat. Spektrum protikřečové aktivity gabapentinu, předpokládané na základě předklinických studií, zahrnuje částečné záchvaty a celkové tonicko-klonické záchvaty, což potvrdily klinické studie (Goe K. L., Sorkin E. M. Gabapentin: A review of its pharmacological propertiesand clinical potenciál in epilepsy. Drug Evaluation, 46(3): 409 až 427 (1993)). Patentová přihláška WO 93/23 383 se týká použití analogů kyseliny a-aminobutyrové (GABA) a kyseliny Z-glutamové při léčení epileptických záchvatů. Rovněž popisuje léčení deprese, úzkosti a psychózy.

-1 CZ 291757 B6

Podstata vynálezu

Gabapentin je v současné době používán v rámci klinických použití jako doplňkové léčebné činidlo při léčení parciálních záchvatů s případnou sekundární generalizací u pacientů, u kterých nezabírají konvenční terapie nebo kteří jsou k těmto konvenčním terapiím intolerantní. Způsob účinku gabapentinu nebyl dříve znám, i když bylo uváděno, že zahrnuje nový, ještě nedefinovaný mechanizmus antiepileptického účinku zahrnující afinitu ke dříve neidentifikovaným vazebným místům v mozku (Hill D. R. a kol., Localization of [³H]gabapentin to a novel site in rat brain: autoradiographic studies. Eur. J. Pharmacol. -Mol. Pharmacol, Sec.. 244: 303-309 (1993) a [³H]Gabapentin binds to a novel sitew in rat cortical syneptic plasma membranes (SumanChaukan N., a kol., British Joumal of Pharmacology Proceedings Supplement, 71P: 10. až 12. července (1991).

V současné době se vyčistil protein vážící gabapentin a určila se sekvence prvních deseti aminokyselinových zbytků (EPFPSAVTIK) a ze získaného výsledku bylo vyvozeno, že proteinem vázajícím gabapentin je α₂δ podjednotka mozkového kalciového kanálku. Další sloučeniny reagující s α₂δ podjednotkou Ca²⁺ kanálku budou mít anxiolytické, protiúzkostné a protikřečové účinky. Nyní se zjistilo, že gabapentin, izobutyl GABA a podobné sloučeniny vážou na protein vázající [³H]gabapentin v mozku krys, prasat a lidí.

Účinky gabapentinu se testovaly na čtyřech zvířecích modelech.

Jak již bylo uvedeno, předmětem vynálezu je nové použití známé sloučeniny, kterou je gabapentin (Neurontin), jehož chemické označení je kyselina l-(aminomethyl)cyklohexanoctová. Tato sloučenina se používá jako anxiolytikum a jako činidlo pro léčení a/nebo prevenci záchvatů panického strachu.

Stručný popis obrázků

Obr. 1 znázorňuje účinky gabapentinu u myši, v boxu s osvětlenou a temnou částí;

obr. 2 ukazuje účinky gabapentinu u krysy na vysutém X-labyrintu;

obr. 3 ukazuje účinky gabapentinu u kosmana, kterému hrozí člověk; a obr. 4 ukazuje účinky gabapentinu a CDP u krysy při konfliktním testu.

Za použití vynálezu lze vyrobit léčiva pro léčbu úzkosti nebo panického strachu u savců, kteří toto léčení potřebují. Toto léčení zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce

H₂N-CH₂-C-’CH₂-CCX)R₁O '

CCB.I.

ve kterém Ri znamená vodík nebo nízkou alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku a n znamená 4,5 nebo 6, nebo její farmaceuticky přijatelné soli v jednotkové dávkové formě.

Mezi výhodné sloučeniny výše zmíněného obecného vzorce lze zařadit například kyselinu 1-aminomethyl-l-cyklohexanoctovou, ethyl-l-aminomethyl-l-cyklohexanacetát, kyselinu

-2CZ 291757 B6

1-aminomethyl-l-cykloheptanoctovou, kyselinu 1-aminomethyl-l-cyklopentanoctovou, methyl-1 -aminomethyl-1 -cyklohexanacetát, n-butyl-1 -aminomethyl-1 -cyklohexanacetát, methyl1-aminomethyl-l-cykloheptanacetát, n-butyl-1-aminomethyl-1-cykloheptanacetát, toluensulfonát, 1-aminomethyl-l-cyklopentanacetát, benzensulfonát a n-butyl-l-aminomethyl-1cyklopentanacetát.

Nejvýhodnější sloučeninou je kyselina 1-aminomethyl-l-cyklohexanoctová (gabapentin).

Farmaceutické kompozice výše jmenované sloučeniny nebo jejich soli se vyrábějí formulací účinné sloučeniny v dávkové jednotkové formě s farmaceutickým nosičem. Dávkovými jednotkovými formami jsou například tablety, kapsle, pilulky, prášky, vodné a bezvodé orální roztoky a suspenze a parenterální roztoky balené v zásobnících obsahujících buď jednu, nebo určitý větší počet dávkových jednotek, které lze rozdělit na jednotlivé dávky. K vhodným farmakologickým nosičům patří například farmaceutická ředidla, jako želatinové kapsle; cukiy, například laktóza a sacharóza; škroby, například kukuřičný škrob a bramborový škrob; deriváty celulózy, například natriumkarboxymethylcelulóza, ethylcelulóza, methylcelulóza a acetát-ftalát celulózy; želatina; mastek; kyselina stearová; stearát hořečnatý; rostlinné oleje, například olej z podzemnice olejné nebo ze semen bavlníku, sezamový olej, olivový olej, kukuřičný olej a olej theobromy; propylenglykol; glycerol; sorbitol; polyethylenglykol; voda; agar; kyselina alginová; izotonický fyziologický roztok; a fosfátové pufrové roztoky; stejně jako další slučitelné substance zpravidla používané ve farmaceutických formulích. Kompozice podle vynálezu mohou rovněž obsahovat další složky, jako například barvicí činidla, ochucovadla a/nebo konzervační látky. Tyto materiály, pokud jsou přítomny, jsou zpravidla zastoupeny v relativně malých množstvích. Kompozice mohou pokud je to žádoucí, rovněž obsahovat další terapeutická činidla.

Procento účinné složky v předcházejících kompozicích se může v širokém rozsahu lišit, ale pro praktické účely je výhodné, pokud její koncentrace představuje alespoň 10 % v pevné kompozici a alespoň 2 % v primárně kapalné kompozici, Nejuspokojivější kompozice jsou ty, ve kterých je mnohem vyšší procentní zastoupení účinné složky.

Způsoby podávání sloučeniny nebo jejích solí subjektu jsou orální nebo parenterální. Použitelnou intravenózní dávkou je například 5 mg až 50 mg a použitelnou orální dávkou je například 50 mg až 600 mg, výhodně 20 mg až 200 mg.

Jednotková dávková forma podle vynálezu může rovněž obsahovat další sloučeniny použitelné při léčení úzkosti a nemocí zahrnujících úzkostné stavy.

Výhodou použití sloučenin obecného vzorce I, zvláště potom gabapentinu, podle vynálezu je relativně netoxická povaha sloučeniny, její snadná příprava, dobrá snášenlivost sloučeniny subjektem, kterému je aplikována, a snadná intravenózní aplikace léčiva. Kromě toho nedochází k metabolizování tohoto léčiva v tělu.

Zde použitými subjektu jsou savci, včetně lidí.

Použitelnost sloučenin výše zmíněného obecného vzorce a jejich solí jako léčiv pro léčení úzkostí a strachu bude demonstrována na standardních farmakologických testovacích postupech.

Materiál a způsoby

Zvířata

Samečci krys Hooded Listerových (200 g až 250 g) byli získáni od firmy Interfauna (Huntington, UK) a samečci TO myší (20 g až 25 g) byli získáni od firmy Bantin a Kingman (Hulí, UK). Oba druhy hlodavců se umístily do klecí po šesti. Deset kosmanů (Callithrix Jacchus) o hmotnosti 280 g až 360 g, chovaných v menchesterské univerzitní lékařské škole (Manchester, UK), se

-3CZ 291757 B6 umístilo do klecí po párech. Všem zvířatům byly vytvořeny podmínky normálního 12hodinového světelného cyklu, kde se střídalo světlo a tma (světlo se rozsvěcelo v 0,7:00 h) a zvířata měla k dispozici jídlo a vodu dle potřeby.

Podávání léčiva

Léky se podávaly buď intraperitoneálně (IP) nebo subkutánně (SC) 40 min před zahájením testu, přičemž krysám a kosmanům se aplikovaly v objemu 1 ml/kg a myším lOml/kg hmotnosti zvířete.

Myši v boxu s osvětlenou a temnou částí

Zařízením použitým při tomto testuje nahoře otevřený box 45 cm dlouhý, 27 cm široký a 27 cm vysoký, který byl rozdělen na dvě části, menší (2/5) a větší (3/5), přepážkou vybíhající 20 cm nad stěny (Costall B. a kol, Exploratrion of mice in black and white box: validation as a model of anxiety. Pharmacol. Biochem. Behav, 32: 777-785 (1989)).

Ve středu přepážky v úrovni podlahy byl proveden otvor o rozměrech 7,5x7,5 cm. Menší oddělení bylo natřeno černě a větší oddělení bylo bílé. Bílé oddělení bylo osvětleno 60W wolframovou žárovkou. Laboratoř byla osvětlena červeným světlem. Každá testovaná myš se umístila do středu bílé plochy a měla 5 min na průzkum nového prostředí, při tomto testu se měřila doba, kterou myš strávila na osvětlené straně boxu (Kilfoil T. a kol., Effects of anxiolytic and anxiogenic drugs on expliratory activity in a simple model of anxienty in mice. Neuropharmacol., 28: 901 až 905 (1989)).

Vysutý X-labyrint pro krysy

Standardní vysutý X-labyrint (Handley, S. L. a kol., Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of „fear“-motivated behavior. Naunvn-Schiedeberg's Arch. Pharmacol.. 327: 1 až 5 (1984) se automatizoval dříve popsaným způsobem (Field a kol., Automation of the rat elevated X-maze test of anxiety. Br. J. Pharmacol.. 102 (Suppl): 304P (1991)). zvířata se umístila na střed X-labyrintu tak, že se dívala do jednoho z otevřených ramen. Pro stanovení anxiolytického účinku se měřil počet vstupů na koncovou polovinu otevřených ramen a doba strávená na těchto koncových polovinách v průběhu 5minutové testovací periody (Costall a kol., Use of the elevated plus maze to assess anxiolytic potenciál in the rat. Br. J. Pharmacol.. 96(Suppl(: 312P (1989).

Test sledující reakci kosmanů na hrozbu člověka

Celkový počet projevů úzkosti (držení těla) předváděných zvířaty v odezvě na hrozbu člověka (člověk stojí přibližně 0,5 m od klece kosmanů a upřeně se dívá do očí kosmana) se zaznamenával v průběhu 2minutové testovací periody. Zaznamenanými projevy zvířat bylo zúžení zornic, postavení ocasu, čenichání, označkování klece, naježení (vztyčení) chlupů, ústup a nahrbení zad. Každé zvíře bylo vystaveno stimulům hrozby v průběhu testovacího dne dvakrát, a to před a po léčení. Rozdíl mezi dvěma získanými výsledky se analyzoval pomocí jednocestné analýzy proměnné následované Dunnettovým t-testem. Léčiva se aplikovala podkožně alespoň h po první (kontrolní) hrozbě a 40 min před testovanou hrozbou.

Konfliktní test prováděný u krys

Krysy se cvičily na stlačení pák, za které dostaly v operačních komorách odměnu ve formě potravy. Režim testu sestával ze střídání čtyř 4minutových netrestaných period ve variabilních 30sekundových intervalech signalizovaných osvětlením komory a tri 3minutových trestaných period, ve fixním poměru 5 (ranou do tlapky provedenou současně s uvolněním potravy) ze signalizovaných, zhasnutím světel v komoře. Míra rány do tlapky se pro každou kiysu nastavila

-4CZ 291757 B6 tak, aby bylo dosaženo přibližně 80% až 90% potlačení odezvy, ve srovnání s netrestanou odezvou. V průběhu tréninkových dnů byl krysám fyziologický roztok.

Výsledky

Test 1

Testování myší v boxu s osvětlenou a temnou částí

IP Podání gabapentinu (3 mg/kg až 100 mg/kg) 40 min před testem v dávkách 10 mg/kg a 30 mg/kg zvýšila dobu, kterou myš strávila v osvětlené části boxu, což naznačuje anxiolytické účinky (viz obr. 1). Nicméně účinek zmizel při nejvyšší dávce 100 mg/kg gabapentinu (viz obr. 1).

Test 2

Testování krys na vysutém X-Iabyrintu

Podkožní podání gabapentinu (3 mg/kg až 100 mg/kg) zvýšilo procentní čas strávený na koncové polovině otevřeného ramene (% TEOA) a procento vstupů na tuto část (obr. 2). Tato zvýšení naznačují anxiolytický účinek. Kromě toho bylo při 30 mg/kg rovněž pozorováno zvýšení celkového počtu vstupů na koncovou část otevřených ramen.

Test 3

Sledování reakce kosmanů na hrozbu člověka

Podkožní aplikace gabapentinu (10 mg/kg až 30 mg/kg) snížila počet sledovaných projevů úzkosti u zvířat v odezvě na hrozbu člověka (obr. 3). To naznačuje anxiolytické účinky. U tohoto testu účinnost gabapentinu zůstala zachována v širokém rozsahu dávek.

Test 4

Konfliktní test prováděný u krys

Podání gabapentinu 40 min před testem zvýšilo počet stlačení páky v trestané periodě, v závislosti na aplikované dávce testované látky (1 mg/kg až 100 mg/kg), přičemž minimální účinnou dávkou byly 3 mg/kg, které produkovaly 65% zvýšení. Maximálního efektu (179% zvýšení) se dosáhlo při aplikaci 30 mg/kg. Při nejvyšší testované dávce (100 mg/kg) bylo zaznamenáno snížení počtu stlačení páky (37,4%) v netrestané periodě, což naznačuje sedativum a ataxii, které mohou přispět rovněž k očividnému snížení účinku pozorovaného v trestané periodě. Podobně chlordiazepoxid (1 mg/kg až 100 mg/kg) zvýšil, v závislosti na dávce, počet stlačení páky v trestané periodě, přičemž minimální účinnou dávkou byly 3 mg/kg, které produkovaly 128,4% zvýšení. Maximálního efektu (330,0% zvýšení) se dosáhlo při aplikaci 30 mg/kg. Netrestané odezvy se nesnížily při žádné z testovaných dávek (obr. 4a a 4b).

Dále se zjistilo, že účinky gabapentinu, tj. protikřečové a protiúzkostné účinky, lze zvrátit Z>-serinem. Tento zvrat aktivity D-serinu ukázal, že tyto vlastnosti mají společný mechanizmus účinku. Nezahrnuje přímou interakci mezi D-serinem a gabapentinem v glycerol/NMDA receptorovém komplexu, protože předešlé studie radioligandových vazeb ukázaly, že gabapentin se neváže na glycerol/NMDA receptor (Suman-Chanhan a kol., Eur. J. Pharmacol. -Mol. Pharmacol. Sec.. 244: 293 až 301 (1993).

Navázání gabapentinu na α₂δ podjednotku kalciového kanálku

-5CZ 291757 B6

Shrnutí

Určila se částečná N-ténninační sekvence proteinu, která váže [³H]gabapentin v mozku prasete. Tato sekvence prvních deseti zbytků EPFPSAVTIK je identická s N-terminační sekvencí zralé α2δ podjednotky L-typu Ca²⁺ kanálku z kosterního svalu králíka. Distribuce [³H]gabapentinových vazebných míst v tkání krys byly v širším slova smyslu podobné místům na dihydropyridin citlivých Ca²⁺ kanálků, které definoval [³H]nitrendipin. Pořadí potence ligand působících ve svalovém [³H]gabapentinovém vazebném místě bylo shodné s pořadím zaznamenaným dříve pro CHS místa. [³H]Gabapentin je v prvním popsaným farmakologickým činidlem, které vzájemně působí na α2δ podjednotku Ca²⁺ kanálku. Z toho lze usuzovat, že modulace napěťově závislých neuronových Ca²⁺ kanálků je důležitá pro antiepileptické účinky gabapentinu.

Materiály

Prasečí mozek se získal z místních jatek a přepravil do laboratoře na ledu. Pufrové složky se získaly buď od společnosti Sigma Chemical Company, Poole, Dorset, UK, nebo od FSA dodavatelů, Loughborough, Leicestershire, UK. [³H]Gabapentin (57,7 Ci/mmol) byl na zakázku syntetizován společností Amersham Intemational, Amersham, Bucks, UK. Neoznačený gabapentin a enantiomery 3-izobutyl GABA se získaly od Wamer-Lambert, Ann Arbor, Michigan, USA. [³H]Nitrendipin (75,3 Ci/mmol) se získal od společnosti DuPont (UK) Ltd, Stevenage, Herts, UK.

Způsoby

Navázání [³H]gabapentinu na membrány se provedlo způsobem, který popsal Suman Chauhan a kol., Eur. J. Pharmacol, 244: 293 (1993). Navázání [ Hjnitrendipinu se provádělo 30 min při pokojové teplotě v 50 mmol Tris/150 mmol NaCl/2,5 mM CaCl₂ a reakce se ukončily rychlou filtrací přes GF/B filtry, nespecifická vazba byla definována jako vazba získaná v přítomnosti 1 gmol nifedipinu. příprava P₂ membránových frakcí a čištění proteinu vážící [³H]gabapentin se provedly způsobem, který popsal Gee a kol., 1994, s výjimkou toho, že se aktivní frakce ze Sephacrylu S400 dále frakcionovaly na sloupci kyselina iminodioctová-sepharosa v cyklu Cu²⁺. Konečný vzorek vyčištěného proteinu (přibližně 5 gg) se zpracoval pomocí elektroforézy v 10% polyakrylamidovém gelu a přemístil na membránu immobilon P. Takto připravená skvrna se zabarvila Coomassieovou modří, načež se oddělila frakce 130, 2,16.10^-22 kg, která se potom sekvencovala v sekvenčním zařízení Appled Biosystems 477A Sequencer.

Výsledky

Sekvencování proteinů

Stanovení N-terminační sekvence se provedlo u každé ze dvou příprav vyčištěného prasečího proteinu, který váže [³H]gabapentin. Sekvence získaná pro prvních deset cyklů byla EPFPSAVTIK. Průzkum databáze genové banky objevil 100% homology s prvními deseti zbytky zralé α₂δ podjednotky L-typ kalciového kanálku králičího svalu (Ellis a kol., Science 241:1 661 (1988)).

Distribuce [³H]gabapentinových vazných míst u krysy

Test navázání radioligandů používající buď [³H]gabapentin nebo [³H]nitrendipin se provedl za použití membrán připravených z celé řady krysích tkání. Relativně vysoké hladiny [³H]gabapentinových vazných míst byly sledovány v kosterním svalu. Nepříliš vysoké hladiny byly nalezeny v mozkové kůře a v mozečku a nízké hladiny byly nalezeny v předním mozku a v srdci. Stopová množství [³H]gabapentinových vazebných míst byla nalezena v plicích, slezině, játrech a ledvinách, zatímco ve slinivce a ve střevech nebyla zaznamenána žádná aktivita. Distribuce

-6CZ 291757 B6

L-typu Ca²⁺kalcinových kanálků, citlivých na dihydropyridin, které jsou definovány [³H]nitrendipinem, jsou v širším smyslu podobné kanálkům definovaným [³H]nitrendipinem, jsou v širším smyslu podobné kanálkům definovaným [³H]gabapentinem, ačkoliv při podrobnějším pozorování byly objeveny v některých tkáních určité rozdíly v relativním množství radioligandových vazeb.

Údaj o částečné N-terminační sekvenci naznačuje, že proteinem, který váže [³H]gabapentin a který se získal z prasečího mozku, je α₂δ podjednotka napěťově závislého Ca²⁺ kanálku.

Obr. 1

Účinky gabapentinu u myší v boxu s osvětlenou a tmavou částí

Gabapentin se podával IP, 40 min před testem. Při testu se měřil čas strávený v osvětlené části testovacího boxu. V grafu na obr. 1 jsou vyneseny průměrné naměřené hodnoty pro skupinu 10 zvířat (vertikální čáry reprezentují standardní odchylku od průměru, + SEM).

*Podstatný rozdíl v porovnání se skupinou ošetřenou vehikulem (VEH), p < 0,05 (ANOVA následovaná Dunnettovým t-testem).

Obr. 2

Účinky gabapentinu na vysutém X-labyrintu pro krysy

Gabapentin se podával 40 min před testem. Při testu se měřil procentní čas strávený na koncové polovině otevřeného ramene (% TOEA) a počet vstupů na tuto část otevřených ramen (TE). V grafu na obr. 2 jsou vyneseny průměrné hodnoty pro skupinu 10 zvířat (vertikální čáry reprezentují standardní odchylku od průměru, ± SEM). *Podstatný rozdíl v porovnání se skupinou ošetřenou vehikulem (VEH), p<0,05 (ANOVA následovaná Dunnettovým t-testem).

Obr. 3

Účinky gabapentinu při testu sledujícím projevy úzkosti u kosmanů v odezvě na hrozbu člověka

Každé zvíře bylo vystaveno před a po aplikaci gabapentinu 2minutovému stimulu hrozby. Testované sloučeniny se podávaly SC, 40 min před testem. Výsledky ukazují procentní snížení počtu sledovaných projevů úzkosti v 5členných a óčlenných zvířecích skupinách. (Vertikální čáry reprezentují standardní odchylku od průměru, ± SEM).

*Podstatný rozdíl v porovnání s průměrným počtem projevů skupiny pozorovaných ve stejný den před aplikací testované sloučeniny, p<0,05 (ANOVA následovaná Dunnettovým t-testem).

Obr. 4

Účinky gabapentinu a CDP v konfliktním testu u kiys a gabapentinu při testu sledujícím projevy úzkosti u kosmanů v odezvě na hrozbu člověka

Gabapentin nebo chlordiazepoxid (CDP) se podaly 40 min před testem. Výsledky vyjadřují střední procentní zvýšení nebo snížení počtu provedených stlačení páky (vertikální čáry reprezentují standardní odchylku od průměru, ±SEM) alespoň 5členné zvířecí skupiny v testovacím dni, v porovnání s poměrným počtem provedení stlačení páky získaným ve dvou předcházejících dnech po podání vehikula. Rozdíl ve výsledcích, získaných v testovací den a ve dvou předcházejících dnech, byl velmi vysoký. *p<0,05, **p<0,01 (párový Studentův t-test).

-7CZ 291757 B6

Výsledky všech provedených předcházejících testů, prezentované na obrázcích ukazují, že kromě protikřečové aktivity gabapentin rovněž vykazuje možné protiůzkostné účinky u zvířat. Dobré protiúzkostné účinky se tedy ukázaly při testování myší v boxu s osvětlenou a temnou částí, při testování krys na vysutém X-labyrintu, při sledování reakce kosmanů na hrozbu člověka i při konfliktním testu prováděném u kiys.

Dávkové rozmezí, při kterém se projevují protiůzkostné účinky gabapentinu je podobná dávkovému rozmezí, při kterém se projevují protikřečové účinky u zvířat. U testu 2 (vysutý X-labyrint pro krysy) a testu 3 (pozorování projevů úzkosti kosmanů v odezvě na hrozbu člověka) byla maximální účinnost podobná účinnosti pozorované při aplikaci benzodiazepinových anxiolytik (Costall a kol., 1988; Singh a kol., 1991). Získané údaje dále ukazují, že gabapentin má dobrý anxiolytický účinek při provádění krysího konfliktního testu. Většina nebenzodiazepinových ligandů, které indukují možné anxiolytické účinky v testu 2 a testu 3, vykazují mnohem nižší účinnost u šokem vyvolaných konfliktních testů. Schopnost gabapentinu vyvolat dobrou eliminaci inhibičního účinku konfliktního chování může znamenat jeho výhodu oproti sloučeninám, jakou je například buspiron a sloučeninám, které se současně podrobují klinickým testům zkoumajícím možnost jejich použití při léčení úzkosti, ale které v tomto testu nejsou příliš účinné (například CCK® a 5-HT₃ receptorově antagonisty; viz Broekkamp a kol., 1989 for review; Singh a kol., 1991).

Výsledky testu 3 (test hodnotící úzkostné projevy zvířat v odezvě na hrozbu člověka) předurčují gabapentinu roli při léčení úzkosti.

Příklady formulací sloučenin podle vynálezu a jejich solí ilustrují následující příklady, které mají pouze ilustrativní charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, kteiý je jednoznačně vymezen přiloženými patentovými nároky.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Injekce mg až 100 mg/ml gabapentin voda pro injekce (USP), dle potřeby

Sloučenina nebo její vhodná sůl se rozpustí ve vodě a přefiltruje přes 0,2pm filtr. Podíly přefiltrovaného roztoku se přidají do ampulí nebo lahviček, které se uzavřou a sterilizují.

Příklad 2

Kapsle mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg nebo 400 mg gabapentin, 250 g laktóza USP, bezvodá, dle potřeby nebo 250 g Sterotexový prášek HM 5 g

Účinná sloučenina a laktóza se 2 min mísí v bubnovém směšovací překlápěním, 1 min intenzivním mícháním pomocí tyčového míchadla a následně 1 min. Opět převracením bubnového směšovače. Část směsi se následně mísí se Sterotexovým práškem, přesije přes

-8CZ 291757 B6 #30 síto a přidá zpět ke zbytku směsi. Smíšené složky se následně mísí 1 min překlápěním bubnového směšovače, 30 s mícháním pomocí tyčového míchadla a další minutu převracením. 50 mg, 125 mg a 250 mg kapsle se naplní 141 mg, 352,5 mg, resp. 705 mg směsi.

Příklad 3

Tablety mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg nebo 600 mg gabapentin, 125 g kukuřičný škrob NF, 200 g celulóza, mikrokrystalická, 46 g Sterotexový prášek HM, 4 g čištěná voda, dle potřeby nebo 300 ml

Kukuřičný škrob, celulóza a účinná sloučenina se vzájemně smísí v planetové míchačce a míchá po dobu 2 min. Do směsi se přidá voda a směs se míchá další minutu. Výsledná směs se rozprostře na plata a suší v horkovzdušné troubě při 50 °C do okamžiku, kdy se dosáhne snížení vlhkosti o 1 % až 2 %. Vysušená směs se následně mele pomocí mlýnu Fitzmill skrze síto #RH2B a přidá zpět k rozemleté směsi, která se míchá 5 min válcováním na válcích. Lisované tablety 150 mg, 375 mg a 750 mg celkové směsi jsou tvořeny pomocí vhodně kalibrovaných průbojníků.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

Kukuřičný škrob, celulóza a účinná sloučenina se vzájemně smísí v planetové míchačce a míchá po dobu 2 min. Do směsi se přidá voda a směs se míchá další minutu. Výsledná směs se rozprostře na plata a suší v horkovzdušné troubě při 50 °C do okamžiku, kdy se dosáhne snížení vlhkosti o 1 % až 2 %. Vysušená směs se následně mele pomocí mlýnu Fitzmill skrze síto #RH2B a přidá zpět k rozemleté směsi, která se míchá 5 min válcováním na válcích. Lisované tablety 150 mg, 375 mg a 750 mg celkové směsi jsou tvořeny pomocí vhodně kalibrovaných průbojníků.

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použití γ-aminokyseliny obecného vzorce h₂n-ch₂-c-ch₂-coor₁ í Ϊ

ICH,! .

ve kterém Ri znamená vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku a n znamená 4, 5 nebo 6, nebo její farmaceuticky přijatelné soli, pro výrobu farmaceutické kompozice určené pro léčbu a/nebo prevenci úzkosti u savců.
2. Použití γ-aminokyseliny obecného vzorce h,n-ch,-c-ch₂-coor, ( l ve kterém Rj znamená vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku a n znamená 4, 5 nebo 6, nebo její farmaceuticky přijatelné soli, pro výrobu farmaceutické kompozice určené pro léčbu a/nebo prevenci panického strachu u savců.

-9CZ 291757 B6
3. Použití podle nároku 1 nebo 2, kde je γ-aminokyselinou uvedeného obecného vzorce gabapentin nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
5 4. Použití podle nároku 1 nebo 2, kdy se poskytuje individuální dávka 5 mg až 50 mg parenterálně podané γ-aminokyseliny uvedeného obecného vzorce nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo 50 mg až 600 mg enterálně podané γ-aminokyseliny uvedeného obecného vzorce nebo její farmaceuticky přijatelné soli.