CZ287989B6

CZ287989B6 - Perorální přípravek k prevenci a léčbě infekčních gastroenteritid prasat

Info

Publication number: CZ287989B6
Application number: CZ1998859A
Authority: CZ
Inventors: Petr Mvdr. Mičan; Jan Mvdr. Csc. Štěpánek
Original assignee: Medipharm Cz, S. R. O.
Priority date: 1998-03-20
Filing date: 1998-03-20
Publication date: 2001-03-14
Also published as: CZ85998A3; SK282945B6; EP0955061A1; PL191391B1; SK23799A3; PL332146A1

Abstract

Předmětem tohoto řešení je perorální přípravek k prevenci a léčbě infekčních gastroenteritid prasat, který obsahuje alespoň jednu specifickou protilátku proti prasečímu rotaviru, prasečímu koronaviru, enteropatogenním a enterotoxickým kmenům bakterií Escherichia coli, Clostridium sp., Salmonela sp., Serpulina sp., protozoím Isospora sp. a Cryptosporidium sp., získanou ze žloutků imunizovaných nosnic. Obsahuje rovněž alespoň jeden kmen živých stabilizovaných kultur laktacidoprodukčních bakterií. Dále je řešen způsob výroby protilátek tím, že probiotická složka přípravku se vyrábí oddělenou submersní kultivací jednotlivých vybraných kmenů laktacidoprodukčních bakterií Enterococcus faecium, Lactobacillus casei, případně Lactobacillus plantarum, které jsou po ukončení kultivačního procesu separovány od média, konzervovány lyofilizací, a finálně smíseny jednotlivě nebo v kombinaci s protilátkami a nosnými látkami přípravku.ŕ

Description

Perorální přípravek k prevenci a léčbě infekčních gastroenteritid prasat

Oblast techniky

Vynález se týká přípravku určeného k prevenci a léčbě infekčních onemocnění gastroenterálního traktu prasat.

Dosavadní stav techniky

Základním předpokladem determinujícím úroveň ekonomiky produkce selat a jatečných prasat je udržení jejich dobrého zdravotního stavu po celou dobu odchovu. Vzhledem ktomu, že se odchovný proces odehrává ve velkovýrobních podmínkách, je dosažení tohoto efektu náročnou chovatelskou záležitostí. Ustájení početných populací zvířat v prostorově omezeném prostředí navozuje nepřirozenou a neúměrnou zátěž jejich imunitního systému a je často doprovázeno snížením jejich rezistence proti infekcím. Současně umožňuje přežívání a postupný nárůst virulence četných, především fakultativně patogenních mikroorganismů a jejich trvalou přítomnost ve stájovém prostředí ve vzrůstajících koncentracích.

Z epidemiologického hlediska lze tento stav charakterizovat jako umělé vytvoření vhodných podmínek umožňujících vznik a rozvoj četných infekčních procesů postihujících především gastroenterální arespirační trakt, které se v konečné fázi manifestuje hromadným výskytem průjmových nebo respiračních onemocnění. Zvlášť významné jsou gastroenteritidy, vzhledem ktomu, že postihují prasata všech věkových skupin. Nejčastější, a z chovatelského hlediska nejzávažnější, je jejich výskyt u sajících selat a odstávčat. Klinicky se manifestují jednotným obrazem, a sice průjmem různé intenzity a charakteru, dehydratací, inapetencí, ztrátou kondice a snížením váhových přírůstků. U některých zvířat končí onemocnění úhynem. U sajících telat a odstávčat dosahuje mortalita až 20 nebo i více procent, ale i u prasat starších věkových kategorií jsou ztráty vzniklé úhynem v důsledku gastroenteritid významným negativním faktorem ekonomiky. Etiologie infekčních gastroenteritid je velmi různorodá a uplatňují se v ní četné mikroorganismy, viry, bakterie a v menší míře i protozoa, samostatně nebo v různých kombinacích. Nejvýznamnější jsou prasečí rotavirus, prasečí koronavirus (původce transmisivní gastroenteritidy - TGE), prasečí koronavirus (původce epidemické diarrhoey prasat - PED), enterotoxické a enteropatogenní kmeny E. coli (ETEC a EDEC, nejméně 4 sérotypy), Clostridium sp. (především Clostridium perfringens typu A), Salmonella sp, Serpulina hyodysenteriae (původce dysenterie prasat), Serpulina pilosicoli (původce intestinální spirochetózy), Lawsonia intracellularis (původce prasečí protilíferativní enteropatie), Isospora suis a Cryptosporidium (protozoa, které se objevuje jako doprovodná, komplikující invaze u gastroenteritid jiné etiologie).

Příčinou rekurentních, endemických gastroenteritid, které jsou z chovatelského hlediska zvlášť významné jsou prasečí rotavirus, ETEC a Clostridium sp. u sajících selat a odstávčat, a dále pak Salmonella spp., Serpulina hydrodyseteriae a prasečí koronavirus (PED) u běhounů a starších prasat.

Komplexní etiologie, fakultativní patogenita původců a lokální charakter infekčního procesu komplikují profylaxi endemických gastroenteritid a omezují její účinnost. Přesto, vzhledem k četnosti výskytu těchto onemocnění, jsou opatření zaměřená na jejich tlumení esenciální součástí všech chovatelských zásahů.

V současné době se využívají postupy zaměřené na snížení stupně kontaminace stájového prostředí, vakcinace, aplikace antibiotik a podávání probiotik.

-1 CZ 287989 B6 ₍ Obecně zaměřená protiinfekční opatření, jako je průběžná asanace prostředí, patří sice k nezbyt'*» ným profylaktickým zásahům, ale vzhledem ke schopnosti enteropatogenních mikroorganismů přežívat v organismu zdravých prasat, mají jen částečný a časově omezený efekt.

Také účinnost parenterální a perorální aplikace antibiotik je jen částečná, a to i v případě jejich plošné aplikace a použití vysokých léčebných dávek. Antibiotika jsou zcela neúčinná v případě virových infekcí. Při perorální aplikaci mohou pozitivně ovlivnit pomnožování, a následně i průběh bakteriálních infekcí. I tento efekt antibiotik je však většinou časově limitován dobou aplikace aje často doprovázen nežádoucími souběžnými efekty, a to dočasnou imunosupresí 10 ustájených zvířat, vznikem rezistentních bakteriálních kmenů a potlačením růstu kulturní, z hlediska hostitele symbiotní, střevní mikroflóry.

Určitý, především preventivní, pozitivní efekt má aplikace probiotik, která na principu kompetitivní inhibice potlačuje pomnožování enteropatogenních, resp. enterotoxických, bakterií 15 a potencuje funkční aktivitu imunitního systému zvířat, především lokálních imunitních struktur gastrointestinálního traktu.

Nedostatečně účinná je i vakcinace, především proto, že skutečný efekt mohou mít pouze protilátky přítomné ve střevním lumen, produkované buď imunitním systémem střeva, nebo 20 pasivně přijímané perorální cestou. Lokální typ imunity po parentální vakcinaci nevzniká a vakcíny určené k perorální aplikaci jsou dosud ve fázi vývoje. Dílčí úspěch byl zaznamenán pouze u vakcín určených ke zvýšení chráněnosti novorozených sajících selat. Používají se k imunizaci březích prasnic a navozují zvýšení koncentrace specifických protilátek v kolostru a mateřském mléce. Tyto protilátky přijímané selaty permanentně v průběhu sání chrání jejich 25 intestinální sliznici tím, že neutralizují enteropatogenní mikroorganismy přímo v lumen střeva, a navozují tak stav pasivní lokální imunity, znemožňující rozvoj a průběh infekčního procesu. Nedostatkem vakcinace prasnic je často neúplné antigenní spektrum příslušných biopreparátů a skutečnost, že vylučování protilátek mléčnou žlázou je časově limitováno, a koncentrace protilátek může být ovlivněna četnými doprovodnými vlivy (mastitidy, agalakcie, nevhodné 30 chovatelské zásahy atd.).

Tendence využít princip pasivní lokální imunity gastroenterálního traktu obecně, tj. založit prevenci a terapii gastroenteritid prasat na permanentním perorálním přísunu specifických sérových protilátek (séroterapie pomocí hyperimunních a rekonvalescentních sér) se ukázala jako 35 nereálná. Rozhodující důvod spočívá v tom, že se ekonomicky únosným způsobem nepodařilo zabezpečit přípravu těchto látek v potřebném množství a v indikované polyvalentní specifítě. Další nevýhodou je to, že v gastrointestinálním traktu jsou sérové protilátky rychle denaturovány. Existuje dostatek důkazů o tom, že parenterální aplikace protilátek je, vzhledem k patogenezi infekčních gastroenteritid, zcela bezpředmětná.

Podstata vynálezu

Výše uvedené nedostatky do značné míiy odstraňuje perorální přípravek k prevenci a léčbě 45 infekčních gastroenteritid prasat podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že pro dosažení potřebného preventivního a terapeutického efektu se kombinuje účinnost dvou profylaktických a léčebných principů, to je specifickou pasivní imunoterapii protilátek a nespecifickou profy. taktickou účinnost stabilizovaných laktacidoprodukčních bakterií - probiotik. Specificky účinnou složku přípravku představují specifické protilátky proti jednotlivým enteropatogenním mikro50 organismům, použité buď samostatně nebo v různých indikačních kombinacích, které působí přímo v lumen gastroenterálního traktu. Na základě neutralizace povrchových antigenů (faktory patogenity) mikrobů blokují jejich adhezi a permanentní množení na povrchu sliznice (bakterie), nebo průnik a multiplikaci v epiteliámích buňkách (viry). Znemožňují tak rozvoj a omezují rozsah a intenzitu infekčního procesu. Další účinnou složku přípravku tvoří stabilizované kultury

-2CZ 287989 B6 laktacidoprodukčních bakterií Enterococcus spp., a nebo vybavené schopností kompetitivně inhibovat adherenci, růst a množení enteropatogenních a enterotoxických bakterií ve střevním traktu selat a prasat. Tím nejen omezují riziko vzniku bakteriálních sepsí, ale přispívají k zachování eubiotické stability střevní mikroflóry selat i v případě virových infekcí, a tak potencují lokální účinek specifických protilátek. Tyto základní synergicky působící komponenty přípravku mohou být doplněny dalšími podpůrnými látkami, jako například vitamíny, a vhodnými nosnými substráty, které zajišťují standardní obsah účinných látek, homogenitu zapracování jednotlivých složek, dlouhodobou stabilitu přípravku a snadnou aplikovatelnost.

Specifické protilátky jsou získávány z vajec slepic (nosnic) cíleně imunizovaných antigeny prasečího rotaviru (například CAPM V-334), prasečího koronaviru (např. kmeny CAPM V-66, CAPM V-126, CAPM V-474), a pro prasata enteropatogenními a enterotoxickými kmeny zárodků E. coli (např. CAPM 5051 - 5057), bakteriemi rodu Salmonella sp., např. kmeny CAPM 5938, CAPM 5939, CAPM 5445), Clostridium sp. (např. kmenem CAPM 5744), Serpulina (například kmeny CAPM 6033, CAPM 6163), a případně iprotozoy rodu Isospora a Cryptosporidium. Výchozí suroviny, v tomto případě vaječná hmota, získané od imunizovaných nosnic se po homogenizaci finálně zpracovávají sprejovým nebo fluidním sušením. Optimálním způsobem stabilizace je však lyofílizační technika, která je nejšetmější a umožňuje zachovat plný biologický potenciál výchozích surovin. Výsledným produktem je žlutobílý sypký prášek. Hladina specifických protilátek v sušeném nebo lyofilizovaném vaječném obsahu (žloutku) musí dosáhnout minimálního neutralizačního titru 16 na 100 TKID₅₀ (Tissue Culture Infection Dose, to je infekční dávka pro tkáňovou kulturu) u virových antigenů a minimálního aglutinačního titru 20, nebo precipitačního titru 4 na 10⁸ inaktivovaných bakterií u mikrobiálních a protozoálních antigenů v 1,00 g přípravku sušené hmoty.

Další podstatnou složku přípravku tvoří živé stabilizované kultury vybraných laktacidogenních kmenů Enterococcus spp., a/nebo Lactobacillus spp., například Enterococcus faecium, například kmen M 74 - CCM 6226 nebo Lactobacillus casei, například kmen CCM 3775, případně Lactobacillus plantarum, například kmen CCM 3769. Tato probiotická část přípravku je vyráběna cestou submersní pulsační kultivace. Po ukončení exponenciální růstové fáze je získaná bakteriální biomasa separována od růstového média, a po přidání kryoprotektiva je zahuštěná bakteriální kultura stabilizována lyofilizací. Koncentrace živých laktacidoprodukčních bakterií v 1 g suchého probiotického koncentrátu má dosáhnout minimálního CFU: 50 x 10⁹/lg. (CFU = Colonies Forming Units/ zárodky schopné vytvořit kolonii). Při smíchání probiotické části přípravku s vaječnou hmotou obsahující protilátky, jak je popsáno výše, se koncentrace živých kultur laktacidoprodukčních bakterií pohybuje v rozsahu 5 x 10³ až 50 x 10¹⁰ živých kmenů na 1 g přípravku podle vynálezu.

Ke zvýšení úrovně metabolismu a k zvýšení celkové odolnosti organismu k infekcím je výhodné obohatit přípravek o vitaminový doplněk, složený z koncentrátů vitaminů A, D3, a E, a to buď v sypké, olejovité, nebo vodorozpustné formě. Průměrná minimální dotace vitaminů na sele a den by měla obsahovat 1000 mj. vitaminu A, 100 mj. vitaminu D3 a 5 mg vitaminu E.

Přípravek podle vynálezu také s výhodou obsahuje nosné látky jako je potravinářský olej v množství 40 až 60 % hmotnostních, koloidní siloidy v množství 3 až 7 % hmotnostních, a destilované monoglyceridy v množství 1 až 3 % hmotnostních z celkové hmotnosti přípravku.

Je výhodné, pokud přípravek podle vynálezu dále obsahuje nosné látky jako glukózu, a/nebo laktózu, a/nebo sacharózu, a/nebo sorbitol společně se sušeným mlékem, a/nebo sušenou syrovátkou, v celkovém množství 16 až 40 % hmotnostních z celkové hmotnosti přípravku.

Vzhledem k tomu, že přípravek je určen výlučně k perorální aplikaci selatům, odstávčatům, i starším prasatům v různém období postnatálního vývoje, byly zvoleny dvě základní aplikační formy.

-3CZ 287989 B6

Aplikační forma pasty je určena převážně pro perorální aplikaci přípravků novorozeným a sajícím selatům odchovaným tradičním způsobem pod prasnicemi v individuálních kotcích. Přípravek v pastovité formě je inkorporován do speciálních plastových injektorů (aplikátorů), 5 které zabezpečují přesné a spolehlivé dávkování bez rizika aspirace.

Naproti tomu další vodorozpustná a sypká, resp. práškovitá forma přípravku (pulvis, premix), umožňuje jak individuální dávkování odměrkou, tak i skupinové a hromadné podávání přípravku ve vodě a v krmných směsích používaných po celou dobu odchovu prasat (odstávčata, běhouni, 10 výkrmová prasata). Sypká forma je indikována i pro použití v rehydratačních roztocích určených k symptomatické terapii infekčních průjmů selat.

V aplikační formě pasty tvoří hlavní nosné komponenty kolodiální silikonhydrolyzát a destilované monoglyceridy, které společně s kvalitním potravinářským olejem vytvářejí konzistentní 15 pastu s molekulárním sítem, které zajišťuje rovnoměrné a stabilní rozptýlení účinných komponent. U všech operací souvisejících s výrobou past je třeba dodržovat pravidla aseptické práce. Při finální adjustaci sypkých forem přípravku (pulvis, premix) jsou jako nosiče využívány sušené odtučněné mléko, sušená syrovátka v kombinace se sacharózou, glukózou, sorbitolem nebo laktózou.

Rozhodující výhoda přípravku k prevenci a léčbě gastroenteritid prasat podle vynálezu spočívá v tom, že jeho účinnost je založena na kombinaci dvou samostatně funkčních preventivně léčebných postupů, a to na pasivní imunoterapii specifickými protilátkami a současně efektivně inhibičním účinkem probiotických bakteriálních kultur. V intestinálním traktu selat a prasat je 25 neutralizační efekt specifických protilátek posilován kompetitivně inhibiční aktivitou laktacidoprodukčních mikroorganismů na celou řadu enteropatogenních zárodků.

Skutečnost, že protilátky potřebné k pasivní imunizaci selat a prasat jsou připravovány z vaječných žloutků imunizovaných slepic (nosnic) má pro praktické využití řadu nezpochybnitelných 30 výhod. Při tomto způsobu produkce je možno získat velké množství specifických protilátek při příznivé hladině výrobních nákladů. Výhodná je i vysoká specifita protilátek, která umožňuje buď indikované individuální použití monovalentních protilátek, nebo následné stavebnicové skládání polyvalentních přípravků, které svou skladbou protilátek plně odpovídají spektru mikroorganismů etiologicky se podílejících na vzniku gastrointestinálního onemocnění.

Analogickým postupem, za použití indikované skladby antigenů k imunizaci nosnic, je možné získat žloutkovou masu obsahující specifickou polyvalentní skupinu protilátek odpovídající specifické antigenní struktuře infektu, který gastrointestinální onemocnění vyvolal.

Výhoda vaječných protilátek spočívá v tom, že jsou na rozdíl od sérových protilátek odolnější k působení nízkého pH a proteolytických enzymů, a v důsledku toho si vaječné protilátky zachovávají svou funkční aktivitu i v prostředí gastrointestinálního traktu.

Předností využití vajec, jako zdrojů protilátek, je i to, že umožňuje realizovat výrobu přípravku 45 pouze z biologických surovin, které jsou nutričně identické s běžnými proteinovými komponentami využívanými ve výživě prasat.

Analogické výhody má i probiotická složka přípravku, kde je možné cíleně volit a využívat různé konkurenčně inhibiční, adherenční, růstové ametabolické schopnosti jednotlivých kmenů 50 laktacidoprodukčních bakterií, jako jsou například Enterococcus faecium (kmen M 74, CCM

6226), Lactobacillus plantarum (CCM 3769) nebo Lactobacillus casei (CCM 3775). Můžeme použít buď jen jeden vybraný bakteriální kmen nebo kombinaci dvou nebo tří druhů bakterií. Ve všech případech jde o bakterie apatogenní, které vytvářejí významnou část pozitivní, symbio

-4CZ 287989 B6 tické střevní mikroflóry zdravých prosperujících zvířat, například selat a prasat. Z tohoto důvodu je tedy vyloučeno jakékoliv riziko neindikovaného použití nebo předávkování.

V případě obou složek přípravku, to znamená žloutkových protilátek a probiotických kultur, prakticky neexistuje žádné nebezpečí vedlejších účinků souvisejících s jejich širokým použitím v praxi, tak jak je to bohužel běžné při využití antibiotik nebo chemoterapeutických látek.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Pro novorozená sající selata je nej efektivnější aplikace přípravku ve formě pasty, která umožňuje bezpečné a přesné perorální dávkování, bez rizika aspirace přípravku mládětem. Při přípravě pasty jsou primárně míšeny jednotlivé účinné složky, tj. specifické protilátky, například antirotavirové, antikoronavirové a protilátky proti enteropatogenním bakteriím, společně s koncentrátem laktacidogenních bakterií. Protilátky ve formě lyofilizovaných nebo sušených vaječných žloutků, pocházejících od imunizovaných nosnic, jsou homogenně smíseny s lyofilizovanými koncentráty bakterií Enterococcus faecium, přípravků Lactobacillus casei, nebo i Lactobacillus plantarum, a směsí koncentrátů vitaminů A, D₃ a E. V dalším kroku je tato směs účinných složek přípravku postupně přidávána do předem homogenně smíšených nosných složek, které tvoří kvalitní potravinářský olej, například arašídový olej, koloidní siloidhydrolyzát, například CABOSIL a směs destilovaných monoglyceridů, například MYVEROL. Celá kompletní směs je finálně zpracována na vakuovém homogenizátoru, a v konečné fázi asepticky rozplněna do plastových aplikátorů (injektorů) o objemu, například 40a 80 ml pasty. Průměrná perorální dávka přípravku ve formě pasty představuje objem 1 ml až 5 ml na sele a den, v případě akutního ohrožení nákazou je účelné denní dávku zdvojnásobit.

Tabulka 1 : Základní složení přípravku ve formě pasty v hmotnostních procentech:

Nosné složky pasty Kvalitní potravinářský olej (například arašídový) Koloidní siloid (například CABOSIL) Destilované monoglyceridy	Hmotn. % 40-60 3-7 1-3
Účinné složky pasty Sušené (lyofilizované) vaječné žloutky od imunizovaných zvířat Koncentrát laktacidoprodukčních bakterií CFU 200 x 10⁹/lg (Enterococcus faecium M 74, Lactobacillus plantarum)	18-40 4-5
Vitaminová přísada pasty Směs koncentrátů vitaminů A, D₃, E	1-2

Množství (hmotn. %) složek přípravku je vztaženo na celkové množství přípravku.

Příklad 2

Sypká vodorozpustná forma přípravku (pulvis) je připravována na standardních míchacích zařízeních (například Nautamix), vybavených horizontálním a vertikálním systémem míchání komponent. Základní účinné složky - sušené (lyofilizované) vaječné žloutky od imunizovaných zvířat, společně s koncentráty lyofilizovaných laktacidoprodukčních bakterií jsou v malém množství nosných složek primárně homogenizovány buď v menším míchacím zařízení, a pak

-5CZ 287989 B6 přepuštěny do finalizačního homogenizátoru, nebo se účinné složky rozptýlí v menším objemu nosičů, a teprve po dokonalém promíchání se finalizační zařízení doplní na plný obsah a míchání se dokončí. Přípravek podle vynálezu je následně plněn do alufanových sáčků nebo plastových kontejnerů (například alufanové sáčky o obsahu 500 g nebo plastové kontejnery a pytle až do 5 váhy 25 kg).

V praktických podmínkách je přípravek podle vynálezu dávkován individuálně 1,5 g až 3 g přípravku na sele a den, nebo v dávce 500 až 2500 g na lt suché mléčné krmné směsi, případně i kompletní krmné směsi.

Tabulka 2: Základní složky přípravku podle vynálezu finálně upraveného do formy sypkého solubilního prášku (pulvis/premix):

Nosné složky sušené instantní mléko nebo sušená syrovátka glukóza, laktóza, sorbitol, sacharóza (škrob)	Hmotn. % 16-40
Účinné složky
Sušené (lyofilizované) vaječné žloutky od imunizovaných zvířat	20-60
Koncentrát laktacidoprodukčních bakterií CFU : 5xl0⁹/lg	10-15
Enterococcus faecium

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Perorální přípravek k prevenci a léčbě infekčních gastroenteritid prasat, vyznačující

25 se t i m, že obsahuje alespoň jednu specifickou protilátku proti prasečímu rotaviru, prasečímu koronaviru, enteropatogenním a enterotoxickým kmenům bakterií Escherichia coli, Clostridium sp., Salmonela sp., Serpulina sp., protozoím Isospora sp. a Cryptosporidium sp., získanou ze žloutků imunizovaných nosnic a rovněž obsahuje alespoň jeden kmen živých stabilizovaných kultur laktacidoprodukčních bakterií.
2. Přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že množství antivirových protilátek dosahuje titru alespoň 16/100 TKID₅₀, a množství antibakterikálních protilátek dosahuje minimálního aglutinačního titru 20, nebo precipitačního titru 4 na 10* inaktivovaných bakterií v 1 g přípravku.
3. Přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že živými stabilizovanými kulturami laktacidoprodukčních bakterií jsou kmeny Enterococcus faecium, Lactobacillus casei a/nebo Lactobacillus plantarum.

40
4. Přípravek podle nároku 3, vyznačující se tím, že koncentrace stabilizovaných živých kultur laktacidoprodukčních bakterií je v rozsahu 5 x 10³ až 50 x 10¹⁰ živých kmenů na 1 g přípravku.
5. Přípravek podle nároku 1, vyznačující se t í m , že rovněž obsahuje vitaminy 45 a nosné látky.

-6CZ 287989 B6
6. Přípravek podle nároku 5, vyznačující se tím, že množství vitaminů je pro vitamin A alespoň 1000 mj., pro vitamin D3 alespoň 100 mj., a pro vitamin E alespoň 5 mg na sele a den.
7. Přípravek podle nároku 5, vyznačující se tím, že jako nosné látky obsahuje potravinářský olej v množství 40 až 60 % hmotnostních, koloidní siloidy v množství 3 až 7 % hmotnostních, a destilované monoglyceridy v množství 1 až 3 % hmotnostních z celkové hmotnosti přípravku.
8. Přípravek podle nároku 5, vyznačující se tím, že jako nosné látky obsahuje glukózu, a/nebo laktózu, a/nebo sacharózu, a/nebo sorbitol v souhrnu se sušeným mlékem, a/nebo sušenou syrovátkou v množství 16 až 40 % hmotnostních z celkové hmotnosti přípravku.
9. Způsob výroby přípravku podle nároku 1, vyznačující se tím, že se imunizují nosnice antigeny prasečího rotaviru, prasečího koronaviru, enteropatogenních a enterotoxických kmenů bakterií Escherichia coli, Clostridium sp., Salmonella sp., Serpulina sp., popřípadě i protozoálními kmeny Isospora sp. a Cryptosporidium sp., a to buď separované jednotlivými antigeny, nebo indikovanými skupinami antigenů, načež se žloutky nebo celé obsahy vajec získané od imunizovaných nosnic finálně konzervují fluidním nebo sprejovým sušením, případně lyofilizační technikou, a poté se smíchá s alespoň jedním kmenem živých stabilizovaných kultur laktacidoprodukčních bakterií.
10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že se nosnice imunizují antigeny prasečího rotaviru, jako je CAPM V - 334, antigeny prasečího koronarotaviru, jako jsou CAPM V - 66, CAPM V - 126, CAPM V - 474, dále kmeny bakterií Escherichia coli, jako jsou CAPM 5051, CAPM 5052, CAPM 5053, CAPM 5054, CAPM 5055, CAPM 5056, CAPM 5057, kmenem Clostridium sp., jako je CAPM 5744, kmeny Salmonella sp., jako jsou CAPM 5938, CAPM 5939, CAPM 5445, a kmeny Serpulina sp., jako jsou CAPM 6063 a CAPM 6163, a to buď separované jednotlivými antigeny, nebo indikovanými skupinami antigenů, načež se žloutky nebo celé obsahy vajec získané od imunizovaných nosnic finálně konzervují fluidním nebo sprejovým sušením, případně lyofilizační technikou.