CZ281433B6 - The use of enterococcus faecium bacteria strain for preparing preparations of additional human nutrition - Google Patents

Abstract

Prostriedok doplnkovej ĺudskej výživy s antimetagénnymi a imunostimulačnými účinkami obsahuje baktérie mliečného kvasenia druhu Enterococcus faecium.ŕThe supplemental human nutrient composition with antimetagenic and immunostimulatory effects contains Enterococcus faecium lactic acid bacteria.

Description

Použití bakterií kmenu Enterococcus faecium pro přípravu prostředků doplňkové lidské výživyUse of bacteria of the Enterococcus faecium strain for the preparation of supplementary human nutrition products

Oblast technikyTechnical field

Vynález se týká použití bakterií kmenu Enterococcus faecium pro přípravu prostředků doplňkové lidské výživy s antimutagenními a imunostimulačními vlastnostmi.The invention relates to the use of bacteria of the Enterococcus faecium strain for the preparation of human nutritional compositions having antimutagenic and immunostimulatory properties.

Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Mezi prostředky, používané pro přípravu doplňkové lidské výživy, patří různé látky, zlepšující dietetickou hodnotu jednotlivých poživatin, zrovna tak i látky, příznivě ovlivňující metabolické a fyziologické funkce organismu. Do této skupiny se zařazují i probiotika, která jsou tvořena živými mikroorganismy. Mezi probiotika, vyskytující se nejčastěji v lidské potravě, ale i v potravě hospodářských zvířat, patří bakterie mléčného kvašení, zvláště rodu Lactobacillus. Jejich prospěšný účinek na makroorganismus se připisuje schopnosti odstraňovat, resp. alespoň zredukovat počet patogenních zárodků v trávicím ústrojí, inhibovat enzymový systém, kterým střevní mikroflóra může aktivovat prokarcinogeny na karcinogeny a který se považuje za jeden z nejvýznamějších faktorů při iniciaci vzniku rakoviny střev, jakož i schopnost aktivovat makrofágy tak, že se zvýší jejich obranná kapacita proti různým patogenním mikroorganismům a nádorům (Goldin, B. R., Gorbach, S. L., The effect of milk and lactobacillus feeding on human intestinal bacterial enzyme activity, Am. J. Clin. Nutr., 39, 756-761, 1984: Renner, H. W., Munzner, R., The possible role of probiotics as dietary antimutagens, Mutat. Res., 262, 239-245, 1991; Perdigon, G., DeMacias, Μ. E. N., Alvarez, S., Oliver, G., DeRuiz Holdago, A. A. P., Effect of perorally administered lactobacilli on macrophage activation in mice, Infect. Immunol., 53, 404-410, 1986). Tyto poznatky vyvolaly v některých státech snahu využít bakterie mléčného kvašení ve formě různých nápojů a ojediněle i tablet jako doplňků lidské výživy. Žádný z těchto prostředků však neobsahoval bakterie druhu Enterococcus faecium, jejichž antimutagenní a imunostimulační účinek je prioritně popsán v tomto vynálezu.The means used for the preparation of supplementary human nutrition include various substances improving the dietetic value of individual foods, as well as substances favorably affecting the metabolic and physiological functions of the organism. Probiotics, which consist of living microorganisms, are also included in this group. Probiotics most commonly found in human and farmed animals include lactic acid bacteria, especially Lactobacillus. Their beneficial effect on the macroorganism is attributed to the ability to remove, respectively. at least reduce the number of pathogenic germs in the gastrointestinal tract, inhibit the enzymatic system by which the intestinal microflora can activate procarcinogens to carcinogens and is considered to be one of the most important factors in intestinal cancer initiation, as well as the ability to activate macrophages by increasing their defenses various pathogenic microorganisms and tumors (Goldin, BR, Gorbach, SL, The effect of milk and lactobacillus feeding on human intestinal bacterial enzyme activity, Am. J. Clin. Nutr., 39, 756-761, 1984: Renner, HW, Munzner , R., The Possible Role of Probiotics and Dietary Antimutagens, Mutat. Res., 262, 239-245, 1991; Perdigon, G., DeMacias, EN, Alvarez, S., Oliver, G., DeRuiz Holdago, AAP, Effect of perorally administered lactobacilli on macrophage activation in mice, Infect. Immunol., 53, 404-410, 1986). In some countries, these findings have made efforts to use lactic acid bacteria in the form of various beverages and, occasionally, tablets to supplement human nutrition. However, none of these compositions contained Enterococcus faecium bacteria whose antimutagenic and immunostimulatory effect is primarily described in the present invention.

Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Podstatou řešení podle vynálezu je, že se pro přípravu prostředků doplňkové lidské výživy s antimutagenními a imunostimulačními účinky použije bakterií mléčného kvašení kmenu Enterococcus faecium.The present invention is based on the use of lactic acid bacteria of the Enterococcus faecium strain for the preparation of human nutritional supplements with antimutagenic and immunostimulatory effects.

Tyto bakterie jsou přirozenou složkou trávicího ústrojí kojenců, živených mateřským mlékem, a pravidelně se vyskytují v jejich stolici. Ze stolice kojenců je možno tyto bakterie izolovat standardními mikrobiologickými postupy. V makroorganismu mají výhodné imunoregulační a detoxikační aktivity. Prostředek, připravený podle vynálezu, má navíc antimutagenní a imunostimulační účinky.These bacteria are a natural component of the digestive tract of infants, nourished by breast milk, and are regularly found in their stool. These bacteria can be isolated from infant stool by standard microbiological procedures. In a macroorganism they have preferred immunoregulatory and detoxifying activities. In addition, the composition prepared according to the invention has antimutagenic and immunostimulatory effects.

-1CZ 281433 B6-1GB 281433 B6

Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Příklad 1Example 1

Prostředek doplňkové výživy podle vynálezu se připraví tak, že bakterie Enterococcus faecium po pomnožení na standardních mikrobiologických půdách se získají odstředěním. Izolované bakteriové buňky se po opakovaném promytí přímo a nebo po mrazové sublimaci použijí v různých zředěních na stanovení antimutagenní a imunostimulační aktivity.The supplementary nutritional composition of the invention is prepared by centrifuging the Enterococcus faecium bacteria after propagation on standard microbiological media. Isolated bacterial cells, after repeated washing directly or after freeze-sublimation, are used in various dilutions to determine antimutagenic and immunostimulatory activity.

V modifikovaném Amesově testu se Enterococcus faecium testovaly v přítomnosti mutagenu nitrovinu a metabolické aktivace. Na kmeni Salmonella typhimurium TA 100-nitrovin statisticky signifikantně zvyšuje 5,5-násobně počet his⁺ revertantů v porovnání s kontrolou. To znamená, že Enterococcus faecium snižuje mutagenitu nitrovinu o 52 %.In a modified Ames test, Enterococcus faecium was tested in the presence of nitrovine mutagen and metabolic activation. In Salmonella typhimurium TA strain 100-nitrovin, the number of his ⁺ revertants significantly increased 5.5-fold compared to control. This means that Enterococcus faecium reduces the mutagenicity of nitrovin by 52%.

Tabulka 1Table 1

Účinek bakterií Enterococcus faecium na mutagenitu nitrovinuEffect of Enterococcus faecium on nitrovin mutagenicity

nitrovin³ nitrovin ³ Enterococcus faecium Enterococcus faecium aritmetický průměr arithmetic mean ^g/miska ^ g / dish 5.10⁸ zárodků/miska5.10 ⁸ germs / bowl his⁺ revertantůhis ⁺ revertants - - - - 226 ± 15 226 ± 15 i μα i μα - - 1 238 ± 140 1,238 ± 140 i μα i μα + + 592 ± 189 592 ± 189 • • + + 299 ± 55 299 ± 55

a - 1,5-bis(5-nitro-2-furyl)-1,4 pentadien-3-on aminohydrazonhydrochloridand - 1,5-bis (5-nitro-2-furyl) -1,4 pentadiene-3-one aminohydrazone hydrochloride

Příklad 2Example 2

Prostředek podle vynálezu se připraví podle příkladu 1. Pokud se granulocyty, izolované z lidské periferní krve a nebo peritoneální makrofágy morčat, inkubují s různými koncentracemi zárodků Enterococcus faecium, zvyšuje se schopnost těchto fagocytů aktivovat svůj kyslíkový metabolismus, který se dá měřit na základě redukce jódnitrotetrazolu (INT). Stupeň metabolické aktivace je přímo úměrný schopnosti fagocytů usmrcovat mnoho patogenních mikroorganismů a nádorových buněk. Zárodky Enterococcus faecium významně stimulují metabolickou aktivaci nejen čistých fagocytů, ale i fagocytů, inkubovaných v přítomnosti zymozánových částic.The composition of the invention is prepared according to Example 1. When granulocytes isolated from human peripheral blood and / or guinea pig peritoneal macrophages are incubated with various concentrations of Enterococcus faecium, the ability of these phagocytes to activate their oxygen metabolism increases, which can be measured by iodonitrotetrazole reduction. (INT). The degree of metabolic activation is directly proportional to the ability of phagocytes to kill many pathogenic microorganisms and tumor cells. Enterococcus faecium embryos significantly stimulate metabolic activation of not only pure phagocytes but also phagocytes incubated in the presence of zymosan particles.

-2CZ 281433 B6-2GB 281433 B6

Tabulka 2Table 2

INT -reduktázová aktivita lidských granulocytů a peritoneálních makrofágů morčat, inkubovaných v přítomnosti různých koncentrací bakterií Enterococcus faeciumINT -reductase activity of human granulocytes and guinea pig peritoneal macrophages incubated in the presence of various concentrations of Enterococcus faecium

Skupina Group Granulocyty Granulocytes Makrofágy Macrophages fmol/Ne fmol / No. % % P P fmol/Ma fmol / Ma % % P P Le Le 6,9± 1,8 6.9 ± 1.8 100 100 ALIGN! - - 12,8± 3,5 12.8 ± 3.5 100 100 ALIGN! - - Le+EF 100 Le + EF 100 17,7± 5,0 17.7 ± 5.0 256 256 0,001 0.001 35,3±11,3 35.3 ± 11.3 276 276 0,001 0.001 Le+EF 50 Le + EF 50 12,5± 2,3 12.5 ± 2.3 181 181 0,01 0.01 26,8± 8,9 26.8 ± 8.9 209 209 0,01 0.01 Le+EF 10 Le + EF 10 6,8± 2,1 6.8 ± 2.1 99 99 NS NS 12,5± 3,3 12.5 ± 3.3 98 98 NS NS Le+EF 5 Le + EF 5 6,3± 1,9 6.3 ± 1.9 91 91 NS NS 11,5± 3,5 11.5 ± 3.5 90 90 NS NS Le+EF 0 Le + EF 0 ,5 , 5 6,1± 2,2 6.1 ± 2.2 88 88 NS NS 16,2± 4,1 16.2 ± 4.1 127 127 NS NS Le+ZO Le + ZO 48,3±10,4 48.3 ± 10.4 100 100 ALIGN! - - 36,8± 6,9 36.8 ± 6.9 100 100 ALIGN! - - Le+ZO+EF Le + ZO + EF 100 100 ALIGN! 86,5± 8,8 86.5 ± 8.8 179 179 0,001 0.001 68,5±13,2 68.5 ± 13.2 186 186 0,01 0.01 Le+ZO+EF Le + ZO + EF 50 50 82,4±15,2 82.4 ± 15.2 171 171 0,01 0.01 56,8± 9,1 56.8 ± 9.1 154 154 0,01 0.01 Le+ZO+EF Le + ZO + EF 10 10 72,7± 8,1 72.7 ± 8.1 151 151 0,01 0.01 43,2± 6,8 43.2 ± 6.8 117 117 NS NS Le+ZO+EF Le + ZO + EF 5 5 59,8±10,2 59.8 ± 10.2 124 124 NS NS 42,7± 6,5 42.7 ± 6.5 116 116 NS NS Le+ZO+EF Le + ZO + EF 0,5 0.5 59,7± 5,9 59.7 ± 5.9 124 124 0,0 0.0 39,5± 8,2 39.5 ± 8.2 107 107 NS NS

Le - granulocyty nebo makrofágy,Le - granulocytes or macrophages,

EF 100 až EF 0,5 - bakterie Enterococcus faecium v koncentraciEF 100 to EF 0.5 - Enterococcus faecium bacteria in concentration

100 až 0,5 zárodků na jeden fagocyt,100 to 0.5 germs per phagocyte,

ZO - opsonizovaný zymozán,ZO - opsonized zymosan,

NS - statisticky nevýznamný vztah,NS - statistically insignificant relationship,

INT - reduktázová aktivita se vyjadřuje jako femtomoly formazánu, vzniklého při redukci INT jedním neutrofilem (Ne) a nebo makrofágem (MA) po dobu 30 minutové inkubace při 37 °C. dává se ve formě aritmetických průměrů s vyznačenou směrodatnou odchylkou a statistickou významností.INT - reductase activity is expressed as femtomoles of formazan produced by reduction of INT with one neutrophil (Ne) or macrophage (MA) for 30 minutes incubation at 37 ° C. it is given in the form of arithmetic means with the indicated standard deviation and statistical significance.

Průmyslová využitelnostIndustrial applicability

Použití bakterií kmenu Enterococcus faecium ve formě prostředků doplňkové výživy podle vynálezu je možno uplatnit nejen v potravinářském průmyslu, ale např. ve farmaceutickém průmyslu na přípravu doplňkového probiotika v lidské výživě ve formě tablet, kapslí, kysaných mléčných produktů apod. Příznivý účinek Enterococcus faecium, prioritně popsaný v tomto vynálezu, je možno považovat za významný faktor v prevenci genetických a nádorových onemocnění, při stimulaci obranných mechanismů a při oddalování nástupu senescencie a civilizačních chorob.The use of the bacteria Enterococcus faecium in the form of the supplementary nutritional compositions according to the invention can be applied not only in the food industry but also in the pharmaceutical industry for the preparation of supplementary probiotics in human nutrition in the form of tablets, capsules, fermented dairy products. described in this invention can be considered as a significant factor in the prevention of genetic and cancer diseases, in stimulating defense mechanisms and in delaying the onset of senescence and civilization diseases.

Claims (1)

PATENTOVÉ NÁROKYPATENT CLAIMS Použití bakterií kmenu Enterococcus faecium pro přípravu prostředků doplňkové lidské výživy s antimutagenními a imunostimulačními účinky.Use of bacteria of the Enterococcus faecium strain for the preparation of supplementary human nutrition products with antimutagenic and immunostimulatory effects.