CZ2004189A3 - Název neuveden - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález se týká stabilního kapalného farmaceutického prostředku obsahujícího chinerní monoklonální protilátku C225 <Cetuximab^H> proti receptoru epidermálního růstového faktoru (EGF receptor).

Dosavadní stav techniky

Četné studie in vitro a in vivo ukázaly, že blokování receptoru EGF protilátkami působí proti nádorům různým způsobem, například inhibováním proliferace rakovinových buněk, snížením angiogenese zprostředkované nádorem, vyvoláváním apoptózy rakovinových buněk a zvyšováním toxických účinků radioterapie a konvenční chemoterapie. Cetuximab¹⁴ je velmi slibná protilátka, která se váže na receptor EGF. Cetuximab^s nebolí C225 je rekomblnaván z DNA různých druhů a popsal ho poprvé Naramura a kol. (Cancer Immunol. Immunotherapy 37, st-r. 343 až 349, 1993j. Způsob přípravy Cetuximabu^R je popsán v uvedené vědecké literatuře .

Podobně jako jiné protilátky se Cet.uximab^R podává parenterálně v podobě roztoku pro terapeutickou aplikaci. Zvláštním problémem roztoků, obsahujících protilátky, je jejich sklon ke shlukování a k vytváření piOteinových multimerů- V případě redukovatelných mul timerů se to může přičítat nezáměrnému vytváření mezimolekulárních disulfidických můstků interakcí mezi sousedními podíly. Hydrofobní interakce a s nimi spojené vytváření neredukovatelných multimerů jsou také možné. Kromě toho dochází k deamidačním reakcím, které vedou k následným reakcím odbourání proteinů.

9

9 «« «· ♦ · · 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9999 999 9999 9999

9 9 9 9 9 9 9 9 ·· 9 99 9999 99 9

V důsledku uvedeného sklonu ke shlukování dochází při skladování k vysrážení proti látkových roztoků a následně je zpochybňováno reprodukovatelné vyprazdňování obalu obsahujícího roztok. Kromě toho se může vytvářet embolismus pří parentei-álním podání roztoku obsahujícího částice. Proto není zaručeno reprodukovatelné podávání pacientovi dávky nutné ve všech případech a při aplikaci není možné dodržet s nezbytnou bezpečnost. I když mohou být agregáty odfiltrovány před injektováním, představuje takový způsob další stupeň a je proto složitý a ne příliš vhodný pro klinickou praxi. Problém reprodukovatelnostl dávek zůstává nevyřešený také proto, že je z roztoku vždy oddělen neznámý podíl protilátek a vytváření částic po filtraci nadále představuje bezpečnostní riziko.

Známým způsobem stabi1izování monoklonálních pi-oti látek je sušení vymrazováním roztoků obsahujících protilátky a pomocná činidla. Lyofilizace je však časově náročná a spotřebovává energii a je proto nákladná- Kromě toho se musí lyofilizát před použitím rekonstituovat.

V evropském patentovém spise číslo EP-0 073371 se popisují imunoglobulinové prostředky, které se mohou podávat intravenozně a pro stabilizaci mají hodnotu pH nastavenou na 3,5 až 5,0. Tak nízké hodnoty pH vedou však k nežádoucím reakcím, nesnášeni ivosi v místě injekce.

Americký patentový spis číslo US 6 171586 B1 se týká použití acetátového pufru s hodnotou pH 4,48 až 5,5, povrchově aktivního činidla a polyolu v kapalných prostředcích protilátek, přičemž chlorid sodný pro zavedení isotonicity je vyloučen. Vlivem nízké hodnoty pH a nedostatku isotonicity se mohou podobně vyskytnout reakce nesnášeniivosi v místě injekce.

V literatuře jsou popsány příklady dalších prostředků, obsahujících specifické protilátky (například evropský paten3 ·· • 999 · 9 9 9 9 9 · • · 9999 9 9 9 9 9 · 9 9999

999 999 999 ·· · ·· 999· 99 9 tový spis číslo EP 0 280358 a EP 0 170983 a americký patentový spis číslo US 5 945098).

Například v evropském patentovém spise EP 0 280358 se popisuje přísada dextranu do roztoku protilátky pro stabilizaci proti určitým hormonům, přičemž se dosahuje stability po dobu devíti měsíců.

V evropském patentovém spise EP 0 170983 se popisuje stabilizace tepelně labilní monoklonální protilátky zahříváním společně s hydrolyžovaným ovalbuminem, čímž se protilátka stává stabilní při uskladnění 7 dní při teplotě 45 C. Avšak přidávání proteinů jiných druhů do prostředků určených k parenterálnímu podávání je nežádoucí vzhledem k problémům s tím spojeným, obzvlášť jejich možné antigeneity.

Americký patentový spis číslo US 5 945 098 popisuje použití glycinu, polysorbátu 80 a polyethylenglykolu pro stabilizaci kapalných formulací imunoglobul inu G.

tíkoleia vynálezu je nalézt, obzvláště pro Cetuximab^e, kapalnou formulaci, která je vhodná pro parenterální podávání, dobře se snáší a je stálá po dobu nejméně jednoho roku při skladování při teplotě místosti- Prostředek by měl mít jednoduché složení a nemá obsahovat žádné pomocné látky, které jsou sporné z toxikologického hlediska.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je kapalný farmaceutický prostředek obsahující Cetuximab^R, fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí G až 8 a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny.

Podle vynálezu byl tedy s překvapením nalezen prostředek ve formě roztoku splňující úkol vynálezu, který, vedle Cetuxi4

• · · · • 9 •9 9999

9 9

9999 9 9

9 mabu^R, obsahuje fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí přibližně 6 až přibližně 8 a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny. Vynález se proto týká stabilního kapalného farmaceutického prostředku, který obsahuje fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí 6 až 8 a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny. Hodnota pH je s výhodou v rozmezí 6,5 až ?,5, především 7,2.

Fosfátovými pufry, kterých je možno použít, jsou roztoky monosodných a/nebo disodných a draselných solí kyseliny fosforečné, jako jsou dinatriummhydrogenfosfát nebo kaliumdihydrogenfosfát a směsi sodných a draselných solí, jako jsou například směsi dinatriummhydrogenfosfátu a kaliumdihydrogenfosfátu. Fosfátový pufr mflže být v prostředku podle vynálezu obsažen v množství v rozmezí 2 mM až 100 mM. Přednost se dává rozsahu množství 5 mM až 20 mM, obzvláště přibližně 10 mM.

Cetuximab® může být v prostředku podle vynálezu obsažen v množství v rozmezí 0,1 mg/ml až 25 mg/ml, s výhodou v rozmezí 2 mg/ml až 10 mg/ml, obzvláště přibližně 5 mg/ml.

Estery polyethylensorbitanmastné kyseliny jsou známy také pod obchodním názvem Tveen. Prostředky podle vynálezu mohou obsahovat zejména polyoxyethy1en(20)sorbitanmonolaurát, polyoxyethy len C 20) sorb i tanmonopalm i tát a polyoxyethylen(20)sorbitanirionostarát. Přednost se dává polyoxyethylen<20)sorbitanmonolaurátu a polyoxyethylenC20)sorbitanmonooleátu, především však polyoxyethylenC20)sorbitanmonooleátu. Estery polyethylensorbitan mastné kyseliny mohou být v prostředku podle vynálezu obsaženy ve hmotnostním množství v rozmezí 0,001 až 1,0 Výhodným je obsah v rozmezí 0,005 % až 0,1 obzvláště přibližně 0,01 %.

Prostředek podle vynálezu obsahuje s výhodou přídavně iso5

9999 ·· ΦΦ ΦΦ Φ

Φ Φ Φ Φ Φ Φ

Φ Φ Φ Φ Φ ·

Φ 9 9 9 9 9999

9 9 9 9

ΦΦ ΦΦ ΦΦ 99 · tonické činidlo, s výhodou fyziologicky přijatelnou sůl, jako je například chlorid sodný nebo draselný nebo fyziologicky přijatelný polyol, jako je například glukóza nebo glycerol v koncentraci potřebné k nastavení isotonicity. Vynález se proto týká kapalného prostředku obsahujícího Cet.uximab^R, fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí ó až přibližné 8, ester polyethylensorbitan mastné kyseliny a isotonické činidlo v koncentraci nutné k nastavení isotonicity. Prostředek obsahuje s výhodou chlorid sodný jako isotonicklé činidlo.

Podle nejvýhodnějšího provedení vynálezu obsahuje kapalný prostředek přibližně 5 mg/ml Cetuximabu^R, přibližně 10 mM fosfátového pufru s hodnotou pH přibližně 7,2, 145 mM chloridu sodného a 0,01 % polyoxyethylenC20)sorbitanmonooleátu.

Prostředek podle vynálezu se může připravovat přidáním uvedených složek do roztoku obsahujícího Cetuximab^R. Za tímto účelem definované objemy zásobních roztoků obsahujících uvedené další složky v definované koncentraci se s výhodou přidají do připraveného roztoku majícího definovanou koncentraci Cetuximabu^R a směs se popřípadě zředí vodou na předem vypočtenou koncentraci. Alternativně mohou být složky jako pevné látky také přidány do Cetuximab^R obsahujícího výchozího roztoku. Pokud je Cetuximab^R v pevné formě, například ve formě lyofilizátu, může se prostředek podle vynálezu připravit tak, že se napřed rozpustí Cetuximab^R ve vodě nebo ve vodném roztoku obsahujícím jednu nebo několik dalších složek a pak se vždy přidá potřebné množtví zásobních roztoků obsahujích další složky, další složky v pevné formě a/nebo voda. S výhodou se může Cetuximab^R také rozpuštět přímo v roztoku obsahujícím všechny další složky.

Jedna nebo několik složek prostředku podle vynálezu se může s výhodou přidávat jak na začátku tak během způsobu přípravy Cetuximab^Ru nebo na jeho konci. S výhodou se to může • · ·«·· « · · »· * *·«· ·· 9999 provést rozpuštěním Cetuximabu^K přímo ve vodném roztoku obsahujícím jednu nebo několik složek nebo všechny další složky v konečném stupni čištění prováděném po přípravě Cetuximabu^R. K přípravě prostředku se pak příslušné další složky mají přidat v menším množství a/nebo se nepřidají vůbec. Je obzvláště výhodné rozpouštět příslušnou složku přímo ve vodném roztoku obsahujícím všechny další složky v konečném stupni čištění prováděném po přípravě CetuximabuR, takže se prostředek podle vynálezu získá přímo.

Vynález blíže objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení- Procenta jsou míněna vždy hmotnostně, pokud nejí uvedeno jinak.

Příklady provedení

Příklad 1

Vodný roztok obsahující:

mg/ml Cetuximabu^B mM natriumfosfátového pufru o hodnotě pH 7,2 mM chloridu sodného

0,01 % polyoxyethylen(20)sorbitanmonooleátu

Prostředek se připravuje smísením definovaných objemů vodných roztoků obsahujících příslušné složky v definované koncentraci- Použije se následujících roztoků:

Rozok ft (roztok účinné látky) obsahující:

9,7 mg/ml Cet.uximabu^B mM natriumfosfátového pufru o hodnotě pH 7,2 (sestávajícího z 2,07 g/1 dinatriumhydrogenfosfát-7-hydrátu a 0,31 g/1 natriumdihydrogenfosfátmonohydrátu)

145 mM chloridu sodného.

(Roztok se získá eluováním účinné látky ze sloupce roztokem B φφ · • φ · • φφφ • φ φφφφ φ • φ · • Φ φ φ* φφ φ φ φ φ • · · φφφ φφφ •Φ φφφφ

Φ· φ φ φ · φ φ φ φφφ φφ φ

Φ · φφφ v konečném stupni čištění účinné látky chromatografií po její přípravě.

Roztok B (roztok systému pufr/sfil):

odpovídá roztoku A, neobsahuje však žádnou účinnou látku.

Roztok C (roztok esteru polyoxyethylensorbitanmastné kysellny> odpovídá roztoku B, obsahuje však přídavně 1 % polyoxyethylen (20)sorbitanmonooleátu.

K přípravě prostředku podle vynálezu se navzájem smíchá 10 ml roztoku A, 9,8 ml roztoku B a 0,2 ml roztoku C.

Připravený roztok se zfilt.ruje za použití sterilního filtru před plněním do lékovek. Do každé lékovky se vnesou pipetou 2 ml roztoku- Lékovky se uzavřou zátkami a utěsní se.

Příklad 2 (Srovnávací pros tředek)

Vodný roztok obsahující:

mg/ml Cetuximabu® lOmM natriumfosfátového pufru o hodnotě pH 7,2

145 mM chloridu sodného

K přípravě srovnávacího prostředku se navzájem smísí 10 ml každého roztoku A a B popsaných v příkladu 1.

Příklad 3

Vodný roztok obsahující:

mg/ml Cetuximabu^R

0,1 % polyoxyethylen(20)sorbitanmonolaurátu raM dinatriumhydrogenfosfátu ·· · • · · • · · · • · ···· • · · ·· · • · · ·· ···· • · 99

9

9999 % glukózy

Prostředek se připravuje smísením definovaných objemů vodných roztoků obsahujících příslušné složky v definované koncentraci- Použije se následujících roztoků-’

Roztok A

Vodný roztok obsahující:

mg/ml Cetuximabu^B mM dinatriumhydrogenfosfátu (Roztok se získá eluováním účinné látky ze sloupce roztokem B v konečném stupni čištění účinné látky chromatografií po její přípravě.)

Roztok B (roztok systému ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny/glukóza)0,2% po1yoxyethy1en(20)sorb i tanmono1aurátu % glukózy mM dinatriumhydrogenfosfátu

Prostředek se připravuje vzájemným smíchám 10 ml roztoku ň a 10 ml roztoku B.

Připravený roztok se zfiltruje za použití sterilního filtru před plněním do lékovek. Do každé lékovky se vnesou pipetou 2 ml roztoku- Lékovky se uzavřou zátkami a utěsní se.

Příklad 4

Stabilita prostředků podle vynálezu se testuje stresovým testem. Za tímto účelem se lékoveky obsahující roztok podle příkladu 1 a pro porovnání lékovky obsahující roztok podle o

příkladu 2 uskladní při teplotě 40 C a 75% relativní vlhkosti. Před uskladněním a po definované době uskladnění, se vždy tři lékovky posoudí vizuálně za přímého osvětlení studeným světelným zdrojem a stanoví se absorpce roztoků při 350 a • · • · · • · · · · ·· ·· · • · · · · • · · · · • · · · ···· • · · · ···· ·· ·

550 nm, což představuje míru zakalení. Kromě toho se vždy odeberou tři lékovky a analyzují se se zřetelem na obsah Cetuxisiabiri a rozkladných produktů chromatografickou HPLC gelovou fi 1trac í.

Při chromatografické gelové filtraci HPLC se použije fosfátového pufru o hodnotěpH 7,2 jako mobilního prostředí. Sloupec: Toso Haas TSKgel G 3000 SVXL Cvnitřní průměr 7,8 mra, délka 300 mm) průtočná rychlost 0,5 ml/min. Detekce se provede při 280 nm.

Výsledky testu stability jsou v tabulce I. Tabulka I

Test. Uskladnění Cetuximab	Sec. zóny [%]	Produkty Zákal rozkladu při	Zákal Vizuáln: při posouze 550 ní nm
roztok	[týdny]	t%]
1¾]	350 nm
Příklad	1	0	99,72	0,11	0,17	0,0128	0,0016 čiré
Příklad	1	4	98,60	0,84	0,56	0,0200	0,0022 čiré
Příklad	1	8	96,49	1,30	2,21	0,0280	0,0033 čiré
Příklad	2	0	99,69	0,15	0,16	0,0130	0,0021 čiré
Příklad	2	4	92,00	7,38	0,62	0,0232	0,0047 malé
							částice

Výsledky jasně dokazují, že prostředek podle vynálezu má výrazně zvětšenou stabilitu ve srovnání se srovnávacím roztokem.

Průmys 1 ová využ 1 te 1 nost.

Složky pro výrobu tekutého farmaceutického prostředku obsahujícího Cetuximab® s podstatně zvýšenou stabilitou.

• · · · • · · · · · · • · · « · · · · · · • ······· · · • · · · · · ·· · ·· ····

PATENTOVÉ

Claims (10)

1. NÁROKY

   1. Kapalný farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje Cetuximab^R, fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí 6 až 8 a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny.
2. 2. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku ^vyznačující se tím, že má hodnotu pH 6,5 až 7,.'
3. 3. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 2, v y značující se tím, že má hodnotu pH přibližně 7,2.
4. 4. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 3, vyznačující se tím, že fosfátový pufr je obsažen v množství v rozmezí 2mM až 100 mM.
5. 5. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 4, v yznačující se tím, že fosfátový pufr je obsažen v množství v rozmezí 5 mM až 20 mM, s výhodou 10 mM.
6. 6. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 5, vyznačující se tím, že obsahuje jako ester polyoxethy1en( 20)sorb i tanmastných kyse1 i n po1yoxyethy1enC 20)sorbitanmonooleát nebo polyoxyethylen(20> sorbitanmonolaurát.
7. 7. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 6, vyznačující se tím, že ester polyoxethylen (20)sorbitanmastné kyseliny je obsažen v množství 0,005 % až 0,1 zvláště v koncentraci 0,01
8. 8- Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 7, vyznačující se tím, že dále obsahuje isototonické činidlo v množství potřebném k nastavení iotonicity.

   13.

   • · • · · • ···<
9. 9. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 8, v yznačující se tím, že obsahuje chlorid sodný jako isotonické činidlo.
10. 10. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 9, vyznačující se tím, že obsahuje přibližně 5 mg/ml Cetuximabu^K, přibližně 10 mM fosfátového pufru majícího hodnotu pH přibližně 7,2, přibližně 145 mM chloridu sodného a přibližně 0,01 % polyethylenC20)sorbitanmonooleátu.