CZ20004051A3 - Ester functioning as sPLA2 inhibitor - Google Patents

Abstract

N-Morfolinoethylester [(3-(2-amino-1,2-dioxoethyl)-2- methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, je popsán spolu sjeho použitímjako vysoce biologicky dostupný indolový inhibitor aPLA2.N-Morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2- methyl 1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid is described together with its use as highly bioavailable indole inhibitor aPLA2.

Description

Oblast techniky

Poskytnutý vynález se vztahuje ke sloučenině inhibující sPLA₂ s vysokou biologickou dostupností.

Dosavadní stav techniky

Struktura a fyzikální vlastnosti lidské nepankreatické sekreční fosfolipázy A₂ (dále označované sPLA₂) byly podrobně popsány ve dvou článcích, konkrétně Cloning and Recombinant Expression of Phospholipase A₂ Present in Rheumatoid Arthritic Synovial Fluid od autorů Seilhamer, J.

J., Pruzanski, W., Vadas Ρ., Plant S., Miller J. A., Kloss J. a Johnson L. K., The Journal of Biological Chemistry,

264 (10) , 5335 až 5338 (1989) a Structure and Properties of a Human Non-pancreatic Phospholipase A₂ autorů Kramer R.

Μ. , Hession C., Johansen Β., Hayes G., McGray Ρ., Chow E.

Ρ., Tizard R. a Pepinsky R. Β., The Journal of Biological Chemistry, 264 (10), 5768 až 5775 (1989), jejichž poznatky jsou zde zahrnuty odkazy.

Má se za to, že sPLA₂ je enzym limitující rychlost přeměny v kaskádě arachidonové kyseliny, která hydrolyzuje membránové fosfolipidy. Z tohoto důvodu je důležité vyvinout sloučeniny, které inhibují uvolňování mastných kyselin (např. arachidonové kyseliny) zprostředkované sPLA₂ a mají vysokou biologickou dostupnost u savců, zejména u člověka. Takové sloučeniny mají hodnotu v celkové léčbě stavů indukovaných a/nebo udržovaných nadbytečnou tvorbou sPLA₂, jako jsou septický šok, syndrom respirační nedostatečnosti u dospělých, pankreatitida, trauma, průduškové astma,

alergická rhinitida, revmatoidní atrhritida atd.

Léčivé látky, které lze podat orálně, jsou všeobecně významně preferovány a mají zvýšené obchodní možnosti pro jejich velmi snadné použití.

US patent č. 5 654 326 popisuje určité inhibitory sPL&2 indolového typu a související esterové prekurzory. Zejména tento patent uvádí příklad methylesteru [(3(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny.

Je žádoucí vyvinout více vysoce dostupných inhibitorů sPLA₂, a to zejména těch, které jsou vhodné pro orální podání.

Podstata vynálezu

Tímto vynálezem je nová sloučenina, N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, který má vysokou biolologickou dostupnost po orálním podání.

Tímto vynálezem je farmaceutický přípravek obsahující N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl -1-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny v kombinaci s nosičem nebo ředidlem.

Podrobný popis vynálezu lH-Indol-3-glyoxylamidová sloučenina podle tohoto vynálezu:

4 ·

444 4444

Sloučenina podle tohoto vynálezu, N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny je představována strukturním vzorcem (I)

N-Morfolinoethylester vzorce (I) je esterová forma známého inhibitoru sPLA₂ [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2methy1-1-(fenylmethy1)-1H-indol-4-y1)oxy]octové kyseliny představované dále uvedeným strukturním vzorcem (II)

HO.

o

(II)

Sloučenina vzorce (II) je popsána v příkladu 1 US patentu 5 654 326 (jehož popis je zde zahrnut v odkazech) a European Patent Application č. 95302166.4, Publication No.

675 110 (publ., 4. října 1995).

Při tomto vynálezu bylo zjištěno, že sloučenina vzorce (I) má vysokou biologickou dostupnost po orálním podání ve srovnání s jinými inhibitory sPLA₂·

Syntéza sloučeniny podle vynálezu:

Syntéza N-morfolinoethylesteru [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy ] octové kyseliny (sloučenina vzorce I, viz výše) používá jako výchozí látku [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octovou kyselinu nebo její sůl (sloučenina vzorce II, viz výše). Tuto výchozí látku lze připravit podle reakčních schématu nebo způsobem podle příkladu 1 z US patentu č. 5 654 326 (jehož objev je zde zahrnut v odkazech). Podobné způsoby jsou ukázány v European Patent Application č. 95302166.4, Publication No. 0 675 110 (publ.,

4. října 1995). Jiné konvenční způsoby lze rovněž použít pro přípravu této výchozí látky. Způsoby použitelné pro syntézu sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou specifikovány v příkladu 1, který je vysvětlen dále:

Příklad 1

Příprava N-morfolinoethylesteru [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, sloučeniny představované vzorcem:

• · · ·

Část A. Příprava N-terc.-butoxykarbony1-3-methoxy-2-methylanilinu

Roztok 44,4 g (344 mmol) 3-methoxy-2-methylanilinu a 75 g (344 mmol) di-terc.-butyldikarbonátu ve 400 ml tetrahydrofuranu (THF) se udržuje pod zpětným tokem po dobu 4 hodin. Po zahuštění za sníženého tlaku se odparek rozpustí v ethylacetátu, promyje IN roztokem kyseliny citrónové, vodou a vysuší síranem hořečnatým. Po odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku se odparek krystalizuje z hexanu, aby se dostalo 64,5 g (výtěžnost 84%)

N-terc.-butoxykarbonyl-3-methoxy-2-methylanilinu, teplota tání 56 až 57 °C.

Analýza ^C13^H19^NO3^:

Vypočteno: C 65,80; H 8,07; N 5,90.

Nalezeno: C 63,32; H 7,83; N 5,56.

Část B. Příprava 4-methoxy-2-methyl-1H-indolu

Roztok 280 ml (0,36 mol) 1,3M sek-butyllithia v cyklohexanu se pomalu přidá do 43 g (0,18 mol) N-terc.-butoxykarbonyl-3-methoxy-2-methylanilinu v 300 ml THF za udržování teploty pod -40 °C v lázni suchého ledu a ethanolu. Pak se lázeň odstraní, aby teplota vzrostla na

-20 °C a poté se lázeň nahradí novou lázní. Poté, co teplota poklesne na -60 °C, přidá se po kapkách 18,5 g (0,18 mol) N-methoxy-N-methylglyoxylamidu ve stejném objemu tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny, potom se odstraní chladící lázeň a směs se míchá po dobu další 1 hodiny. Potom se vylije do směsi 600 ml etheru a 600 ml IN kyseliny chlorovodíkové. Organická vrstva se oddělí, promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku, aby se dostalo 39,5 g směsi l-[2-(terc.-butoxykarbonylamino)-6-methoxyfenyl]-2-propanonu a výchozího anilidu. Tato směs se rozpustí ve 100 ml methylenchloridu a 40 ml trifluoroctové kyseliny a míchá po celkovou dobu 26 hodin. Směs se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se čistí chromatografií na silikagelu při eluování směsí 20 % ethylacetátu v hexanu, krystaluje ze směsi dičhlormethanu a hexanu aby se dostalo 13,9 g 4-methoxy-2-methyl-lH-indolu, teplota tání 80 až 86 °C.

Analýza C₁₀H_llNO:

Vypočteno: C 74,51; H 6,88; N 8,69.

Nalezeno: C 74,41; H 7,08; N 8,47.

Část C. Příprava 4-methoxy-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indolu g (6,2 mmol) 4-methoxy-2-methyl-lH-indolu se přidá k 248 mg (6,2 mmol) 60% hydridu sodného v minerálním oleji (promyje se hexanem před přidáním DMF) v 15 ml DMF a po míchání po dobu 0,5 hodiny se přidá 0,74 ml (6,2 mmol) benzylbromidu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin, zředí vodou a extrahuje ethylacetátem.

Ethylacetátový roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku.

• · • ·

Odparek se čistí chromatografií na silikagelu, eluuje se směsí 20 % ethylacetátu v hexanu, aby se dostalo 1,3 g (84% výtěžek) 4-methoxy-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indolu, tajícího při teplotě 96 až 116 °C.

Analýza C₁₇H₁₇NO:

Vypočteno: C 81,24; H 6,82; N 5,57.

Nalezeno: C 81,33; H 6,74; K 5,29.

Část D. Příprava 4-hydroxy-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indolu

Roztok 1,25 g (5 mmol) 4-methoxy-2-methyl-l(fenylmethyl)-lH-indolu a 20 ml IM bromidu boritého v dichlormethanu v 50 ml methylenchloridu se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí v ethylacetátu, promyje roztokem chloridu sodného a vysuší síranem hořečnatým. Po odpaření za sníženého tlaku se odparek čistí chromatografií na silikagelu, při eluování směsí 20 % ethylacetátu v hexanu, aby se dostalo 577 mg (49% výtěžek) 4-hydroxy-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lHindolu, tajícího při teplotě 125 až 127 °C.

Analýza C₁₆H₁₅NO:

Vypočteno: C 80,98; H 6,37; N 5,90.

Nalezeno: C 80,76; H 6,26; N 5,80.

Část E. Příprava methylesteru [(2-methyl-l-(fenylmethyl)-lHindol-4-yl)oxy]octové kyseliny

530 mg (2,2 mmol) 4-hydroxy-2-methyl-l-(fenylmethyl) -ΙΗ-indolu se přidá do 88 mg (2,2 mmol) 60% hydridu sodného v minerálním oleji ve 20 ml DMF a směs se míchá po dobu 0,67 hodiny. Potom se přidá 0,21 ml (2,2 mmol) methylbromacetátu a míchá se po dobu 17 hodin. Směs se zředí vodou a extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátový roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se čistí chromatografií na silikagelu, při eluování směsí 20 % ethylacetátu v hexanu, aby se dostalo 597 mg (88% výtěžek) methylesteru [(2-methyl-l-(fenylmethyl)lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, teplota tání 140 až 143 °C.

Analýza ^C19^H19^NO3^:

Vypočteno: C 73,77; H 6,19; N 4,53.

Nalezeno: C 74,01; H 6,23; K 4,32.

Část F. Příprava methylesteru [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

0,16 ml (1,9 mmol) oxalylchloridu se přidá do 582 mg (1,9 mmol) methylesteru [(2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny v 10 ml methylenchloridu a směs se míchá po dobu 1,5 hodiny. Směs se odpaří za sníženého tlaku a odparek se výjme do 10 ml methylenchloridu. Nechá se probublávat parami bezvodého amoniaku po dobu 0,25 hodiny, potom se směs míchá po dobu 1,5 hodiny a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se míchá s 20 ml ethylacetátu a směs se zfiltruje. Filtrát se odpaří, aby se dostalo 672 mg směsi methylesteru [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl )-lH-indol-4-yl) oxy] octové kyseliny a chloridu amonného, teplota tání 202 až 215 °C.

Část G. Příprava [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

Směs 660 mg (1,7 mmol) methylesteru [ (3-( 2-amino-1,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl) oxy]octové kyseliny a 10 ml IN roztoku hydroxidu sodného ve ml methanolu se zahřívá pod zpětným tokem po dobu 1 ·

- 9 hodiny, ochladí na teplotu místnosti a míchá po dobu 0,5 hodiny. Směs se odpaří za sníženého tlaku a odparek se převede do směsi ethylacetátu a vody. Vodná vrstva se oddělí, okyselí na pH 2 až 3 pomocí IN kyseliny chlorovodíkové a extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátový roztok se odpaří a krystalizací se dostane 431 mg (69% výtěžek) [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, tající při teplotě 218 až 220 °C.

Analýza ^C20^H18^N2°5^:

Vypočteno: C 65,57; H 4,95; N 7,65.

Nalezeno: C 63,31; H 4,79; N 6,91.

Část F. Příprava N-morfolinoethylesteru [(3-(2-amino-1,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

Sloučeninu, podle tohoto vynálezu lze připravit reakcí hydrochloridu 4-(2-chlorethyl)morfolinu (dostupný od Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA, položka č. C4,220-3) a vhodné báze, výhodně uhličitanu cesnatého, a sodné soli [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny vhodném rozpouštědle, výhodně dimethylformamidu. Řídká suspenze se zahřívá na teplotu 60 °C nebo jinou vhodnou teplotu dokud nevznikne roztok. Směs se zahřívá až do ukončení reakce. Reakční směs se zpracuje za použití konvenčních laboratorních způsobů používaných v organické chemii, aby se izoloval produkt.

Zkouška I

Pro jednodávkovou farmakokinetickou studii se použij φ φ

9 φ · φ · • · φ • · · · · · · · opice Cynomolgus. Opicím (3 na dávku) se podá jedna perorální dávka 10 mg/kg jedné ze šesti sloučenin, které jsou prekurzory, mezi nimi je zahrnuta i sloučenina, podle tohoto vynálezu.

Serie krevních vzorků se odebírá až do 24 hodin po podání dávky. Plasma se analyzuje na příslušnou volnou kyselinu za použití LC/MS metody. Spočítají se rovněž hodnoty plochy po křivkou (AUC) 8. a 24. hodinu.

Účelem této zkoušky je hodnotit a srovnat dostupnost zvolených inhibitorů sPLA₂ po orálním podání.

Předmět zkoušky:

Druh: Opice Kmen: Cynomolgus

Příprava dávky:

Množství inhibitoru sPLA₂ bylo korigováno na ekvivalenty volné kyseliny.

Nosič:

Suspenze inhibitoru sPLA₂ v 10% Acacia, připravená těsně před podáním dávky.

Podání dávky:

Cesta podání : Častost opakování: Dávka:

Objem dávky:

Orální

Jediná dávka 10 mg/kg (jako 5 ml/kg základní kyseliny) • · • · • fe <

» · · • fe.

• fefefe • · · fe · fefefefe fe «

Výsledky

Studie farmakokinetiky u opic

Tabulka 1

Sloučenina ^cmax T max AUC AUC esterového (ng/ml) hodiny (0 až 8 h) (0 až 24 typu ng.h/ml ng.h/ml 1 1604 2,0 5131 5425 2 200 2,0 1356 2038 3 213 2,0 1277 1761 4 245 2,0 1675 3404 5 3296 2,0 11919 13161 6 615 3,3 — 8730

= N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = methylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = Ν,Ν-diethylglykolamidoester [(3-(2-amino-l,2-dioxo- . ethyl)-1-[(1,1'-bifenyl)-2-ylmethyl]-2-methyl-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = ethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethy1-1-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny = methylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

Zkouška II

Biologická dostupnost sloučeniny, podle tohoto vynálezu, N-morfolinoethylesteru [(3-(2-amino-l,2• ·

- 12 -dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny, se určí rovněž využitím farmakokinetické studie u krys po jedné orální dávce:

Účelem této zkoušky je hodnotit a srovnat dostupnost zvolených inhibitorů sPLA₂ po orálním podání.

Předmět zkoušky:

Druh: Krysa Kmen: Fischer 344

Příprava dávky:

Množství inhibitoru sPLA₂ bylo korigováno na ekvivalenty volné kyseliny.

Nosič:

Suspenze inhibitoru sPLA₂ v 10% Acacia, připravená těsně před podáním dávky.

Podání dávky:

Cesta podání : Orální

Častost opakování: Jediná dávka

Dávka: 10 mg/kg (jako zákldní kyseliny)

Objem dávky: 5 ml/kg

Krysy se nechají přes noc vyhladovět.

Sběr vzorků:

Vzorky krve (0,8 ml) se odeberou v těchto časech: 0,5, 1, 2, 4, 6 a 8 hodin (2 krysy na jeden čas).

Analýza dat:

• ·

Plasma se analyzuje pomocí HPLC, aby se změřily koncentrace různých inhibitorů sPLA₂ (jako volné kyseliny). Hodnoty C_max (maximální plasmatická koncentrace) a AUC se určí z průměrných hodnot závislosti koncentrace na času.

Tabulka 2

Sloučenina c max AUC esterového (ng/ml) (0 až 8 h typu 11 1094 2400 12 79 385 13 258 1229 14 1199 2604 15 612 1504 16 259 1031

= N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxyloctové kyseliny (sloučenina podle tohoto vynálezu) = Ν,Ν-diethylacetamidoester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl )-2-methyl-l-(1-fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxyloctové kyseliny = Ν,Ν-diethylacetamidoester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-[(1-naftalenyl)methyl]-lH-indol-4-yl)oxyloctové kyseliny = N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-[(1-naftalenyl)methyl]-lH-indol-4-yl )oxyloctové kyseliny = N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethyl-l-[(3-chlorfenyl)methyl]-lH-indol-4-yl)oxyloctové kyseliny

= Ν,Ν-diethylacetamidoester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-ethyl-l-[(3-chlorfenyl)methyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny

Ačkoli byl poskytnutý vynález zobrazen výše určitými specifickými ztělesněními, není úmyslem, aby tyto specifické příklady omezily rozsah tohoto vynálezu, jak je popsán v přiložených patentových nárocích.

„TY/oc# /,οΜ

Technical field

The present invention relates to a sPLA ₂ inhibiting compound with high bioavailability.

Background Art

The structure and physical properties of human non-pancreatic secretory phospholipase A ₂ (hereinafter referred to as sPLA ₂ ) have been described in detail in two articles, namely Cloning and Recombinant Expression of Phospholipase A ₂ Present in Rheumatoid Arthritic Synovial Fluid by Seilhamer, J.

J., Pruzanski, W., Vadas, Plant S., Miller JA, Kloss J. and Johnson LK, The Journal of Biological Chemistry,

(1989) and Structure and Properties of Human Non-pancreatic Phospholipase A ₂ by Kramer R.

. , Hession, C., Johansen, Hayes, G., McGray, Chow, E.

, Tizard R. and Pepinsky, R., The Journal of Biological Chemistry, 264 (10), 5768-5755 (1989), the teachings of which are incorporated herein by reference.

SPLA ₂ is believed to be a rate-limiting enzyme in the arachidonic acid cascade that hydrolyses membrane phospholipids. For this reason, it is important to develop compounds that inhibit the release of fatty acids (eg arachidonic acid) mediated by sPLA ₂ and have high bioavailability in mammals, especially in humans. Such compounds are of value in the overall treatment of conditions induced and / or maintained by excess sPLA ₂ formation, such as septic shock, respiratory distress syndrome in adults, pancreatitis, trauma, bronchial asthma,

allergic rhinitis, rheumatoid arthritis, etc.

Medicinal substances that can be administered orally are generally preferred and have increased business opportunities for their ease of use.

U.S. Patent No. 5,654,326 discloses certain sPL & 2 indole type inhibitors and related ester precursors. In particular, this patent discloses an example of methyl [(3 (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid.

It is desirable to develop more highly available sPLA ₂ inhibitors, particularly those that are suitable for oral administration.

SUMMARY OF THE INVENTION

This invention is a novel compound, N-morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid having high bioavailability after oral administration.

The present invention is a pharmaceutical formulation comprising N-morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid in combination with carrier or diluent.

Detailed Description of the Invention 1H-Indole-3-glyoxylamide Compound of the Invention:

4 ·

444 4444

The compound of this invention, N-morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1 (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid, is represented by the structural formula ( AND)

The N-morpholinoethyl ester of formula (I) is an ester form of a known sPLA inhibitor ₂ [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid represented by the following structural formula (II)

HIM.

O

(II)

The compound of formula (II) is described in Example 1 of US Patent 5,654,326 (the disclosure of which is incorporated herein by reference) and European Patent Application No. 95302166.4, Publication No. 5,904,066.

675 110 (publ., 4 October 1995).

In the present invention, it has been found that the compound of formula (I) has a high bioavailability after oral administration compared to other sPLA ₂ inhibitors.

Synthesis of a Compound of the Invention:

Synthesis of N-morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid (compound of Formula I, supra) uses as starting material [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid or a salt thereof (compound of formula II, see above). This starting material can be prepared according to the reaction schemes or by the method of Example 1 of US Patent No. 5,654,326 (the disclosure of which is incorporated herein by reference). Similar methods are shown in European Patent Application No. 95302166.4, Publication No. 5,930,2166,4. 0 675 110 (publ.

October 4, 1995). Other conventional methods can also be used to prepare this starting material. Methods useful for the synthesis of a compound of this invention are specified in Example 1, which is explained below:

Example 1

Preparation of N-morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid, a compound represented by the formula:

• · · ·

Part A. Preparation of N-tert-butoxycarbonyl-3-methoxy-2-methylaniline

A solution of 44.4 g (344 mmol) of 3-methoxy-2-methylaniline and 75 g (344 mmol) of di-tert-butyl dicarbonate in 400 mL of tetrahydrofuran (THF) was refluxed for 4 hours. After concentration under reduced pressure, the residue was dissolved in ethyl acetate, washed with 1N citric acid solution, water and dried over magnesium sulfate. After removing the solvent under reduced pressure, the residue was crystallized from hexane to give 64.5 g (84% yield).

N-tert-butoxycarbonyl-3-methoxy-2-methylaniline, m.p. 56-57 ° C.

Analysis ^C 13 ^H 19 ^NO 3 ^:

Calculated: C 65.80; H 8.07; N 5.90.

Found: C 63.32; H, 7.83; N 5.56.

Part B. Preparation of 4-methoxy-2-methyl-1H-indole

A solution of 280 ml (0.36 mol) of 1,3M sec-butyllithium in cyclohexane is slowly added to 43 g (0.18 mol) of N-tert-butoxycarbonyl-3-methoxy-2-methylaniline in 300 ml of THF while maintaining the temperature below -40 ° C in a dry ice / ethanol bath. Then the bath is removed to allow the temperature to rise to

-20 ° C, then the bath is replaced with a new bath. After the temperature has dropped to -60 ° C, 18.5 g (0.18 mol) of N-methoxy-N-methylglyoxylamide in the same volume of tetrahydrofuran are added dropwise. The reaction mixture was stirred for 1 hour, then the cooling bath was removed and the mixture was stirred for an additional 1 hour. It is then poured into a mixture of 600 ml of ether and 600 ml of 1N hydrochloric acid. The organic layer was separated, washed with water, dried over magnesium sulfate and evaporated under reduced pressure to give 39.5 g of a mixture of 1- [2- (tert-butoxycarbonylamino) -6-methoxyphenyl] -2-propanone and the starting anilide. This mixture was dissolved in 100 mL of methylene chloride and 40 mL of trifluoroacetic acid and stirred for a total of 26 hours. The mixture was washed with water, dried over magnesium sulfate and evaporated under reduced pressure. The residue was purified by chromatography on silica gel eluting with 20% ethyl acetate in hexane, crystallized from dichloromethane / hexane to give 13.9 g of 4-methoxy-2-methyl-1H-indole, mp 80-86 ° C.

Analysis _of C ₁₀ H _LLN O:

Calculated: C 74.51; H, 6.88; N, 8.69.

Found: C, 74.41; H, 7.08; N, 8.47.

Part C. Preparation of 4-methoxy-2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indole g (6.2 mmol) of 4-methoxy-2-methyl-1H-indole was added to 248 mg (6.2 mmol) 60% sodium hydride in mineral oil (washed with hexane before addition of DMF) in 15 mL of DMF and after stirring for 0.5 hour, 0.74 mL (6.2 mmol) of benzyl bromide is added. The mixture was stirred at room temperature for 18 hours, diluted with water and extracted with ethyl acetate.

The ethyl acetate solution was washed with brine, dried (MgSO 4) and evaporated under reduced pressure.

• · • ·

Purify the residue by silica gel chromatography, eluting with 20% ethyl acetate in hexane to give 1.3 g (84% yield) of 4-methoxy-2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indole, melting at 96 ° C. to 116 ° C.

Analysis C ₁₇ H ₁₇ NO:

Calculated: C 81.24; H, 6.82; N 5.57.

Found: C 81.33; H, 6.74; K 5.29.

Part D. Preparation of 4-hydroxy-2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indole

A solution of 1.25 g (5 mmol) of 4-methoxy-2-methyl-1 (phenylmethyl) -1H-indole and 20 ml of 1M boron tribromide in dichloromethane in 50 ml of methylene chloride was stirred at room temperature for 5 hours and evaporated under reduced pressure. pressure. The residue was dissolved in ethyl acetate, washed with brine and dried over magnesium sulfate. After evaporation under reduced pressure, the residue is purified by chromatography on silica gel, eluting with 20% ethyl acetate in hexane to give 577 mg (49% yield) of 4-hydroxy-2-methyl-1- (phenylmethyl) -1Hindole melting at Mp 125-127 ° C.

Analysis C ₁₆ H ₁₅ NO:

Calculated: C 80.98; H, 6.37; N 5.90.

Found: C, 80.76; H, 6.26; N 5.80.

Part E. Preparation of [(2-methyl-1- (phenylmethyl) -1Hindol-4-yl) oxy] acetic acid methyl ester

530 mg (2.2 mmol) of 4-hydroxy-2-methyl-1- (phenylmethyl) -ΙΗ-indole was added to 88 mg (2.2 mmol) of 60% sodium hydride in mineral oil in 20 mL of DMF and stirring for 0.67 hours. Then, 0.21 ml (2.2 mmol) of methyl bromoacetate is added and stirred for 17 hours. The mixture was diluted with water and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate solution was washed with brine, dried (MgSO 4) and evaporated under reduced pressure. Purify the residue by silica gel chromatography, eluting with 20% ethyl acetate in hexane to give 597 mg (88% yield) of [(2-methyl-1- (phenylmethyl) 1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid methyl ester m.p. 140-143 ° C.

Analysis ^C 19 ^H 19 ^NO 3 ^:

Calculated: C 73.77; H, 6.19; N, 4.53.

Found: C, 74.01; H, 6.23; K 4.32.

Part F. Preparation of [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid methyl ester

0.16 ml (1.9 mmol) of oxalyl chloride is added to 582 mg (1.9 mmol) of methyl [(2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid in 10 ml methylene chloride and the mixture was stirred for 1.5 hours. The mixture was evaporated under reduced pressure and taken up in 10 ml of methylene chloride. Anhydrous ammonia vapor is bubbled through for 0.25 hours, then the mixture is stirred for 1.5 hours and evaporated under reduced pressure. The residue was stirred with 20 ml of ethyl acetate and filtered. The filtrate was evaporated to give 672 mg of [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid methyl ester mixture and ammonium chloride, mp 202-215 ° C.

Part G. Preparation of [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1 (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid

A mixture of 660 mg (1.7 mmol) of [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid methyl ester and 10 ml of 1N sodium hydroxide solution in ml of methanol is heated to reflux for 1 · 1.

- 9 hours, cool to room temperature and stir for 0.5 hours. The mixture was evaporated under reduced pressure and the residue was taken up in a mixture of ethyl acetate and water. The aqueous layer was separated, acidified to pH 2-3 with 1N hydrochloric acid and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate solution was evaporated and crystallized to give 431 mg (69% yield) of [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid, melting at 218-220 ° C.

Analysis ^C 20 ^H 18 ^N 2 ° 5 ^:

Calculated: C 65.57; H, 4.95; N, 7.65.

Found: C 63.31; H, 4.79; N, 6.91.

Part F. Preparation of N-morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid

The compound of this invention may be prepared by reacting 4- (2-chloroethyl) morpholine hydrochloride (available from Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, U.S.A. No. C4,220-3) and a suitable base, preferably cesium carbonate, and sodium salts of [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid with a suitable solvent, preferably dimethylformamide. The slurry is heated to 60 ° C or other suitable temperature until a solution is formed. The mixture was heated to completion. The reaction mixture is worked up using conventional laboratory methods used in organic chemistry to isolate the product.

Exam I

For a single-dose pharmacokinetic study, φ φ is used

Cynomolgus monkeys. Monkeys (3 per dose) receive a single oral dose of 10 mg / kg of one of the six precursor compounds, including the compound of the invention.

Blood samples are collected up to 24 hours after dosing. Plasma was analyzed for the appropriate free acid using the LC / MS method. The area to curve (AUC) values of 8 and 24 hours are also calculated.

The purpose of this test is to evaluate and compare the availability of selected sPLA ₂ inhibitors after oral administration.

Exam Subject:

Species: Monkey Tribe: Cynomolgus

Dose Preparation:

The amount of sPLA ₂ inhibitor was corrected for free acid equivalents.

Carrier:

A sPLA ₂ inhibitor suspension in 10% Acacia, prepared just prior to dosing.

Serving a Dose:

Route of administration: Frequency of recurrence: Batch:

Batch volume:

Oral

Single dose of 10 mg / kg (as 5 ml / kg of basic acid)

»· Fe.

• fefefe • · fefefefe fe

Results

Pharmacokinetics study in monkeys

Table 1

Compound ^c max T max AUC AUC ester (ng / ml) clock (0 to 8 h) (0 to 24 type ng.h / ml ng.h / ml 1 1604 2.0 5131 5425 2 200 2.0 1356 2038 3 213 2.0 1277 1761 4 245 2.0 1675 3404 5 3296 2.0 11919 13161 6 615 3.3 - 8730

= [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid N-morpholinoethyl ester = methyl ester [(3- (2 -amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid = Ν, Ν-diethylglycolamidoester [(3- (2-amino-1,2) -dioxo-ethyl) -1 - [(1,1'-biphenyl) -2-ylmethyl] -2-methyl-1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid = ethyl ester [(3- (2-amino) 1,2-dioxoethyl-2-ethyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid = [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) - N-morpholinoethyl ester) 2-ethyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid = [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-ethyl-1- (phenylmethyl) - methyl ester] methyl ester 1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid

Exam II

Bioavailability of the Compound of the Invention N-morpholinoethyl ester [(3- (2-amino-1,2) ·

- 12-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid, is also determined using a single oral dose pharmacokinetic study in rats:

The purpose of this test is to evaluate and compare the availability of selected sPLA ₂ inhibitors after oral administration.

Exam Subject:

Species: Rat Strain: Fischer 344

Dose Preparation:

The amount of sPLA ₂ inhibitor was corrected for free acid equivalents.

Carrier:

A sPLA ₂ inhibitor suspension in 10% Acacia, prepared just prior to dosing.

Serving a Dose:

Route of administration: Oral

Frequency of repetition: Single dose

Dose: 10 mg / kg (as base acid)

Dose volume: 5 ml / kg

Rats are starved overnight.

Sampling:

Blood samples (0.8 ml) are collected at the following times: 0.5, 1, 2, 4, 6 and 8 hours (2 rats per time).

Data Analysis:

• ·

Plasma was analyzed by HPLC to measure the concentrations of various sPLA ₂ inhibitors (as free acid). C _max values (maximum plasma concentration) and AUC are determined from the mean concentration-time values.

Table 2

Compound c max AUC ester (ng / ml) (0 to 8 h type 11 1094 2400 12 79 385 13 258 1229 14 1199 2604 15 612 1504 16 259 1031

N-morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxylacetic acid (compound of the invention) = Ν, Ν - [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (1-phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxyacetic acid diethyl acetamidoester = Ν, Ν-diethylacetamidoester [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1 - [(1-naphthalenyl) methyl] -1H-indol-4-yl) oxyacetic acid = N-morpholinoethyl ester [(3- (2-amino- 1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1 - [(1-naphthalenyl) methyl] -1H-indol-4-yl) oxyacetic acid = [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) ) -2-ethyl-1 - [(3-chlorophenyl) methyl] -1H-indol-4-yl) oxylacetic acid

= Ν, Ν-diethylacetamidoester of [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-ethyl-1 - [(3-chlorophenyl) methyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid

Although the present invention has been illustrated above by certain specific embodiments, it is not intended that these specific examples limit the scope of the invention as described in the appended claims.

"TY / oc # /, οΜ

Claims (2)

PATENTOVÉ NÁROKYPATENT CLAIMS 1.Sloučenina, N-morfolinoethylester [(3-(2-amino-l,2-dioxoethyl)-2-methyl-l-(fenylmethyl)-lH-indol-4-yl)oxy]octové kyseliny.A compound, N-morpholinoethyl [(3- (2-amino-1,2-dioxoethyl) -2-methyl-1- (phenylmethyl) -1H-indol-4-yl) oxy] acetic acid. 2. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 v kombinaci s farmaceuticky vhodným nosičem nebo ředidlem.2. A pharmaceutical composition comprising a compound according to claim 1 in combination with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.