CS242062B1 - Vasopresinová a vasotocinová analoga a způsob jejich přípravy - Google Patents
Vasopresinová a vasotocinová analoga a způsob jejich přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CS242062B1 CS242062B1 CS846365A CS636584A CS242062B1 CS 242062 B1 CS242062 B1 CS 242062B1 CS 846365 A CS846365 A CS 846365A CS 636584 A CS636584 A CS 636584A CS 242062 B1 CS242062 B1 CS 242062B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- gly
- cys
- arg
- pro
- vasopressin
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Vasopresinová a vasotocinová analoga obecného vzorce I I--------■----------- 1 X-Y-Z-R-Asn-Cys-Pro-W-Gly-NH2 (1).
v němž X je Cys nebo Mpr, Y je D-Tyr nebo D-Phe, Z je Ile nebo Phe, R je Gin nebo Abu a W je Arg nebo D-Arg, které se připravuji odštěpením chráněného prekursoru peptidu obecného vzorce 11 S.Bzl S.Bzl CH -X-Y -Z-R-Asn-Cys-Pro-W-Gly-NH2 (II), kde CH značí tosylovou nebo benzyloxykarbony- lovou chránící skupinu, P polymerní nosič, Bzl je benzýl, Toa, je tósyl a X, Y, Z, R a W mají výše uvedený význam. z polymerniho nosiče, odstraněním chránících skupin z peptídu, uzavřením disulfi- dového kruhu oxidací a čištěním získaného surového produktu vzorce I. Analoga vzorce I mají vysoký a specifický antidiure- tický účinek.
Description
Vynález se týká vasopresinových a vasotocinových analogů s vysokým a specifickým antidiuretickým účinkem a způsobu jejich přípravy. Sloučeniny jsou charakterizovány obecným vzorcem I
I 1
X - Y - Z - R -Asn-Cys-Pro- W -Gly-NHg (I),
3 4 567 89 v němž
X je Cys nebo Mpr,
Y je D-Tyr nebo D-Phe^
Z je Ile nebo Phe R je Gin nebo Abu a W je Arg nebo D-Arg.
Vasopresinová analoga s vysokým a specifickým antidiuretickým účinkem se používají zejména pro substituční therapii úplavice žíznivé Jdiabetes insipidus), ale také pro therapii nočního pomočováni děti (enuresis nocturna) a pro léčbu lehčích forem hemofilie, včetně von Willebrandova syndromu. (Marek □., Loutocký A., Pacovský V., Zaoral M.j Endokrinologie 72, 188 (1978); Sov.Med.
10, 106 (1976); Proč. lst Int. Synp. on DDAVP in bleeding disorders (Á.H. Sutor, Ed.). Schattauer Verlag, Stuttgart - New York (1980)). V klinické diagnostice se používají hlavně k stanovení koncentrační funkce ledvin a při vylučovací urografii ledvin. (Aronson A.S. a spoluprac. Arch. Dis. Child. 49, 654 (1974)· Némethová V. a spoluprac. Brat. lék. listy 61, 229 (1974)). Nejuživanějši preparát v této oblasti je dosud £l-kyselina 3-merkaptopropionová, 8-D-apginin]vasopressin (DDAVP). (Zaoral M., Kole □ ., Sorm F.: Collect. Czech. Chem. Gommun. 32, 1250 (1967); čs. patent 132 685 ). Nevýhodou DOAVP je zbytkový účinek na krevní tlak a zejména zbytkový uterotonický účinek, který představuje jisté risiko při aplikaci preparátu velmi citlivým těhotným ženám.
242 062
Klíčem k přípravě látek typu DDAVP je změna konfigurace v poloze 8 vasopresinové molekuly (Zaoral M., §orm F,: Collect, Czech. Chem. Commun. 31, 310 (1966)). Velikost a čistota antidiuretického účinku je závislá na dalších strukturních změnách. Zvláětě vysoký a vysoce specifický antidiuretický účinek mají látky obsahující v poloze 1 kyselinu 3-merkaptopropionovou a v poloze 8 D-arginin, jako je např. shora zmíněný DDAVP. Později byly připraveny další vasopresinové analoga s vysokým a specifickým antidiuretickým účinkem. Manning se spolupracovníky (Manning a spoluprac. □ . Med. Chem. 19, 842 (1976)) zvýšil specifičnost antidiuretického účinku DDAVP zavedením valinu do polohy 4. Smith a Waltar připravili vasopresinové analogon obsahující v poloze 7 3,4-dehydroprolin, v poloze 2 fenylalanin a v poloze 1 kyselinu merkaptopropionovou. Žádné z těchto analogů však nenalezlo použiti v praxi. Vlastnosti diskutovaných látek jsou uvedeny v tabulce 1, v níž jsou pro srovnáni uvedeny vlastnosti lysin- a arginin-vasopresi nu.
Tabulka 1
Sloučenina | AD | BP | UT | G | AD/BP |
Ly si n-vasopre si n | 250® | 243 - 3 | 4,7 í 0,5 | 60 - | 10 1,0 |
Argi ni n-vasop re si n | 430 í 45® | 380 í 40 | 16-4 | 64 í | 9 1,1 |
DDAVP | 50 450b | 0,96 | 5,1 | - | 52 550 |
^4-valinjDDAVP | 1 230C | 0,01 | - | - | 123 000 |
£2- fe nylalanin. | 13 250 - 1 | 250d 0 | - | oo |
7-(3,4-dehydroprolin)}
DDAVP d
Handbook of Exp. Pharmacol. XXIII, Neurohypophysial Hormones and
Peptides (B. Berde, Ed.), str. 802. Springer 1968.
b '
Zaoral M. a spoluprac. Collect. Czech. Chem. Commun. 43, 511 (1978).
c
Manning M. a spoluprac. Febs Lattere 44, 229 (1974).
bSmith C.W a Waltar R.: Science 199, 297 (1978).
Hodnoty biologických účinků jsou uvedeny v mezinárodních jednotkách na mg účinné látky (IU/mg). AD « antidiuretický účinek, BP » presorický účinek, UT · uterotonický účinek, 0 = galaktogogický účinek, AD/BP specifičnost antidiuretického účinku.·
242 062
Autoři vynálezu nyni zjistili, že změna konfigurace v poloze 2 vasopresinové molekuly má na oba typické účinky vasopresinů podobný vliv, jako změna konfigurace v poloze 8, tj. vede k analogům se zvýšenou specifičnosti antidiuretického účinku. Tento objev byl zcela neočekávaný. Hrubý se spolupracovníky popsal přípravu a vlastnosti £D-Tyr jarginin-vasopresinu. Podle Hrubyho a spolupracovníků jsou biologické účinky analoga velmi blízké lysin-vasopresinu. Podle výsledků získaných autory vynálezu má toto analogon značně vysoký a specifický antidiuretický účinek. Situaci osvětluje tabulka 2jv niž jsou uvedeny biologické účinky nalezené Hrubým a spolupracovníky a autory vynálezu.
Tabulka 2
Sloučenina | AD | BP | AD/BP |
£2-D-tyroslnjarginin | |||
vasopresin | |||
Hrubý a spoluprac. | 207 1 10® | 194 í 11 | 1,1 |
podle vynálezu zjištěné | |||
hodnoty | 5 000 | 39,5 | 126 |
aHruby V. a spoluprac. | 3. Amer. Chem | i. Soc. 101, | 2717 (1979). |
Zkratky a číselné údaje | mají stejný | význam jako | v tabulce 1 |
Dále autoři vynálezu zjistili, že změna konfigurace v poloze 2 zvyšuje specifičnost antidiuretického účinku nejen ve vasopresinové, ale také ve vasotocinové řadě a rovněž u analogů obsahujících v poloze 2 fenylalanin. Vlastnosti příslušných látek jsou uvedeny v tabulce 3. Konečně se zjistilo, že antidiuretický účinek 2-D substituovaných vasopresinových a vasotocinových analogů lze výhodně modifikovat dalšími strukturními změnami, jako je desaminace v poloze 1, substituce polohy 4 neutrální aminokyselinou a změna konfigurace v poloze 8, Vliv samotné změny konfigurace v poloze 2 a v kombinaci s dalšími změnami je doložen vlastnostmi látek, které byly připraveny podle vynálezu a které jsou uvedeny v tabulce 3.
Vasopresinová a vasotocinová analoga výše uvedeného vzorce I podle vynálezu obsahuji v poloze 1 cystein nebo kyselinu 3-merkaptopropionovou, v poloze 2 D-tyrosin nebo D-fenylalanin, v poloze 4 kyselinu qf-aminomáselnou a v poloze 8 arginin nebo D-argiI
242 062 nin. Podstata způsobu přípravy těchto analogů spočívá v tom, že se methodou synthesy peptidů v pevné fázi připraví na polymernim nosiči, např. na styren-divinylbenzenovém kopolymeru, lineární prekursor analoga obecného vzorce II
S.Bzl S.Bzl Tos
CH- X - Y - Z - R -Asn-Cys-Pro- W -Gly-(p) (H), kde CH značí tosylovou nebo benzyloxykarbonylovou chránící skupinu (p) značí polymerni nosič a Bzl značí benzyl,
Tos je tosyl a
X,Y,Z,R a W mají výše uvedený význam.
ten se odštěpí z nosiče působením amoniaku v methanolu, přip. v methanolu - dimethylformamidu. Takto získaný lineární chráněný prekursor se přečisti krystalisaci^přip. přesrážením z methanolu -vody nebo dimethylformamidu - vody. Chránící skupiny se z něj odstraní působením sodíku v kapalném amoniaku, disulfidový kruh ee uzavře oxidací ferikyanidem draselným, produkt se odsoli na ionexu karboxylátového typu (Amberlitu IRC-50 nebo Ostionu AT) a vyčisti se kontinuální beznosičovou elektroforesou a vysokotlakou kapalinovou chromatografii (HPLC).
Látky uvedené v tabulce 3 sub la -ld (tab. 3 viz str. 5) mají nižší a méně specifický antidiuretický účinek ve srovnání s DDAVP. Nejsou proto výhodnější pro lékařské použiti než DDAVP.
□sou však velmi cenné jako matečné látky pro přípravu va_sopresinových analogů e velmi zajímavými vlastnostmi, jak ukazuji vlast nosti látek le) alf), za jejichž matečnou látku lze považovat slou čeninu lb). Z praktického hlediska, pro lékařské použiti, jsou velmi zajímavé látky le) a lf). Prvá z nich má zřetelně vyšší antidiuretický a takřka lOx nižší presorický účinek ve srovnáni s DDAVP, t.zn. má asi 12x vyšší specifičnost antidiuretického účinku než DDAVP. Působi jako výrazný inhibitor uterotonického účinku oxytocinu, a to jak in vítro, tak in vivo. To je velmi důležité z hlediska léčebné aplikace. Ve srovnání 8 DDAVP je tak zcela vyloučeno risiko při podáni preparátu těhotným ženám. Látka lf) má sice nižší antidiuretický účinek než DDAVP, ale působi jako výrazný inhibitor presorického účinku vasopresinu a uterotonického účinku oxytocinu. Z tohoto hlediska je ve srovnáni s DDAVP ještě výhod- 5 Tabulka 3
Sloučenina | AD | BP | AD/BP |
la) [D-Tyr2]AVT | X /0 | 60 | 8 |
1b) [Mpr1, D-Tyr2]AVP | 100 % | 483 | 103 |
lc) [Mpr1, D-Tyr2]AVT | O ť C /0 | 34,6 | 29 |
ld) [Mpr1, D-Phe2, D-Arg8] | 10 % | inh. | oo |
VP | |||
le) [Mpr1, D-Tyr2, D-Arg8] | 120 až 150 % | 0.1 | 706 30C |
lf) [Mpr1, D-Tyr2, Abu4 | 40 až 60 % | inh. | <JĎ |
D-Arg8]VP | |||
Zkratky á číselné hodnoty máji stejný význam | jako v | tabulce 1, |
AVP a arginin vasopresin, AVT arginin vasotocin, VP = vasopresin. Hodnoty uvedené v % značí velikost aktivity udanou v % účinku DDAVP. Látka le) působí inhibičně na uterotonický účinek oxytocinu in šitu a in vitro (pA2 6,3, 7,9). Látka 14) a lf) působí inhibičně na presorický účinek vasopresinu (pA2 7,1) a na uterotonický účinek oxytocinu in sítu a in vitro (pA2 6,7, 7,6).
nějši než látka.le). Obě látky, látka le) a látka lf) představují nový typ vasopresinových analogů, který v sobě spojuje vlastnosti silných antidiuretických agonistů s vlastnostmi výrazných inhibitorů účinku uterotonického a presorického. Obě látky jsou z hlediska lékařského použití výhodnější než DDAVP. Další výhoda látky le) a látky lf) spočívá v tom, že obsahují jak na N-konci tak na C-konci molekuly aminokyseliny konfigurace D. Tím jsou mnohem lépe chráněné proti ataku inaktivujících enzymů než DDAVP, což je velmi výhodné zejména při perorální aplikaci.
Podstata vynálezu je ilustrována a doložena následujícími příklady provedeni:
Teploty táni byly změřeny pa Koflerově bloku a nebyly korigovány. Optická aktivita byla měřena na polarimetru. Synthesa v pevné fázi byla provedena na automatickém syntetizátoru peptidů. Volné peptidy byly čištěny beznosičovou kontinuální elektroforesou. Čistota produktů byla kontrolována chromatografií na tenké vrstvě silikagelu v soustavě terc.^butylalkohol: n-butylalkohol: kyselina octová: voda (2:2:1:1), detekce chloračním
Β
- 6 —
242 062 postupem, kontrolní papírovou elektroforesou na papíře /Whatman No 3) při 700 V (asi 50 V/cm) ve vodné kyselině octové (pH 2,5), detekce ninhydrinem a HPLC na reversní fázi, kolona 250 mm x 4 mm, mobilní fáze 4 M CHgCOOH : MeOH, 30 : 70 (obj./obj,), detekce UV 280 nm. Vzorky pro aminokyselinovou analysu byly hydrolysovány 20 h v 6M HC1 při 110 °C. Pufrované hydrolysáty (pH 2,2) byly analysovány na aminokyselinovém analyzátoru.
HPLC chráněných prekursorů vasopresinových a vasotocinových analogů byla prováděna ve vodném methanolu (65 až 75^) obsahující 0,1 % CFgCO^H, isokraticky. Oako adsorbent byl používán ojftadecylsilylsilikagel (Separon SI C 18) 10 >um a Oíftylsilikagel (Lichrosorb RP 8), 10 /jm. Oetekce byla prováděna měřením absorbance efluentů při 225 a 254 nm. HPLC vasopresinových a vasotocinových analogů byla prováděna na stejných nosičích. Bylo používáno gradientově eluce (40 až 8Q^% vodný methanol, obsahující 0,1 %CF3C02H). Detekce byla prováděna měřením absorbance při 220 nm.
Přiklad 1* la) £2-0-Tyrosin^arginin-vasotocin
Amid N-tosyl-S-benzylcysteinyl-D-tyros^l-isoleucyl-glutaminylasparagi nyl-S-be nzylcystei nyl-prolyl-N -tosylarginyl-glyci nu
Synthesa byla provedena na chlormathylované polystyrénové pryskyřici sítované 2 % divinylbenzenu (DVB) (obsah chloru 5,9 %), esterifikované Boc-Gly (obsah 0,75 mmol Gly/g pryskyřice). Synthesa byla provedena postupem popsaným dříve (Collect. Czech.
Chem. Commun. 44, 1173 (1979). 2 1,33 g esterifikované pryskyřice bylo po odštěpení peptidu z pryskyřice amonolysou získáno 1,12 g (73 %) produktu o t.t. 142 až 145 °C. Vzorek pro analysu byl dvakrát překrystalován ze směsi methanol-voda,t.t. 147 až 149, °Cj, Produkt byl chromatograficky jednotný. Aminokyselinová analysa:Cys(S-Bzl) 1,98, Tyr 0.90, Ile 0,90, Glu 1,04, Asp 1,07, Pro 1.04, Arg 1,01, Gly 1,06. Pro C7iH93Ni5°i6S4 . 3 HgO (1595) vypočteno: 53,47 % C, 6,26 % H, 13,17 % N; nalezeno: 53,30 % C,
5,93 % H, 13,44 % N.
- 7 £2-D-Tyrosin3erginin-vasotocin 242 062
Chráněný peptid byl redukován sodíkem v kapalném amoniaku, odsolen na koloně Amberlitu IRC-50 a čištěn beznosičovou kontinuální elektroforesou. 2 340 mg chráněného peptidu bylo získáno 183 mg surového produktu a po čištění 79 mg látky la)^ [oQ2O= -66,9° (c « 0,2, 1M kyselina octová). Produkt byl homogenní při elektroforese na papíře a při kontrole čistoty HPLC. Analysa aminokyselinového složeni: Tyr 0,91, Ile 0,90, Glu 1,04, Asp 1,07,
Pro 1,09, Arg 0,94, Gly 1,06, Pro c43H67N15012S2 * 2,5 CH3C00H 2,5 H20 (1245) vypočteno: 46,29 % C, 6,64 % H, 16,87 % N; nalezeno 46,54 % C, 6,44 % H, 16,60 % N.
Přiklad 2 lb) [1 -Kyselina 3-merkaptopropionová,
2-D-tyrosinJarginin-vasopresin
Amid β-benzyIthiopropionyl-D-tyrosyl-fenylalanyl-glutaminylG asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-N -tosylarginyl-glycinu Synthesa byla provedena s použitím chlormethylované polystyrénové pryskyřice sítované 2 % divinylbenzenem (obsah chloru 5,9 %), esterifikovaná Boc-Gly (obsah 0,75 mmol Gly/g pryskyřice). Ž 1,33 g (1 mmol Gly) pryskyřice bylo po synthese a následné amonolyse získáno 1,05 g (75 %) produktu o t.t. 130 až 145 °C. Analytický vzorek byl dvakrát překrystalován ze směsi methanol-voda, t.t. 142 až 145 °C ^byl chromatograficky jednotný. Aminokyselinová analysa: Tyr 0,91, Phe 0,98, Glu 1,06, Asp 1,05,
Cys (S-Bzl) 0,95, Pro 1.03, Arg 0,94, Gly 1,08. Pro
C67H84N14014S3 . 2,5 H20 (1451) vypočteno: 55,47 % C, 6,18 % H, 13,52 % N·, nalezeno: 55,63 % C, 5,97 % H, 13,86 % N.
£l-Kyselina 3-merkaptopropionová,
2-D-tyrosinJarginin-vasopresin
Chráněný peptid byl redukován sodíkem v kapalném amoniaku, odsolen na koloně Amberlitu IRC-50 a čištěn beznosičovou kontinuální elektroforesou. Z 300 mg látky bylo získáno 161 mg surového produktu a po čištění 77 mg analogu. Lyofilizát obsahoval 81 % látky (průměrná hodnota z polarografického stanovení obsahu a z
ΛΛ Λ obsahu dusíku v lyofilizátu), £ofJD · -60,7 (c = 0,2, 1M kyselina octová), HPLC a elektroforeticky homogenní. Aminokyselinová analysa: Tyr 1,01, Phe 1,04, Glu 1,05, Asp 1,05, Pro 0,93, Arg 0,92, Gly 1,00. Pro C46H64N14°12S2 · 1,5 CH3C00H · H2° (H77) vypočteno:
242 062 — 8 —
49,99 % c, 6,16 ‘/ý H, 16,66 % N; nalezeno: 49,80 % C, 6,01 % H, 16,69 % N.
Příklad 3 lc) [l-l<yselina 3-merkaptopropionová,
S-D-tyrosin^arginin-vasotocin
Amid 3-benzylthiopropionyl-D-tyrosyl-isoleucyl-glutaminylG
-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-N -tosylarginyl-glycinu Látka byla připravena analogicky jako chráněný produkt sub la) (1 mmol Gly vázaného na pryskyřici). Výtěžek 1,0 g (73 , t.t.
139 až 143 °C. Analytický vzorek byl dvakrát překrystalován ze směsi methanol-voda, t.t. 149 až 151 °C. fchromatograficky jednotný. Aminokyselinová analysa: Tyr 0,90, Ile 0,91, Glu 1,07,
Asp 1,09, Cys(S-Szl), 0,94, Pro 1,04, Arg 0,99, Gly 1,06. Pro C64H86N14°14S3 · 3 H2° (1426) vypočteno: 53,91 % C, 6,50 % H. 13,75 % Nj nalezeno: 53,75 % C, 6,68 % H. 14,05 % N.
[l-l<yselina 3-merkaptopropionová,
2-D-tyrosin^Jargini n-vasotocin
Látka byla připravena analogicky jako produkt la, 2 320 mg chráněného peptidu bylo získáno 195 mg surového produktu a po čiětěni 81 mg analoga. Lyofilizát obsahoval 85 % látky, -57,5° (c β 0,2, 1M kyselina octová), HPLC a elektroforeticky homogenní. Aminokyselinová analysa: Tyr 0,99, Ile 0,90, Glu 1,05, Asp 1,07, Pro 1,02, Arg 0,99, Gly 1,07. Pro C43H66N14012S2 . 2 CHgCOOH .
2,5 H20 (1200) vypočteno: 47,03 %C, 6,63 % H, 16,34 % N,· nalezeno: 47,27 % C, 6,36 % H, 16,20 % N.
Příklad 4 ld) [1 -Kyselina 3-merkaptopropionová, 2-D-fenylalanin,
8-D-arginin]vasopresin
Amid-3-benzylmerkaptopropionyl-D-fanylalanyl-fenylalanyl-glutaminyl-asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-N -tosyl-D-arginyl-glycinu t
Při synthese byla použita chlormethylovaná pryskyřice čs. provenience (1 % DVB, 1,02 mmol Cl/g), která po esterifikaci obsahovala 0,74 mmol Gly na 1 g pryskyřice. Synthesa byla provedena s 2 g esterifikované pryskyřice (1,48 mmol Gly) v autom.
242 062 syntetizátoru vlastní konstrukce. Při kondensacích bylo užito 3 ekv. symetrických anhydridů a programu uvedeného dříve. Po vysušení bylo získáno 3,75 g (97 %) látky. Odštěpení peptidu z nosiče bylo provedeno amonolyticky, výtěžek surového nonapeptidu 1.77 g (86 %), t.t. 160 až 165 °C. Po dvojnásobné krystalisaci ze směsi methanol - voda bylo získáno 1,15 g (56 %) produktu chrom, jednotného v soustavě 1-butanol - kys.octová - voda (4:1:1) a na HPLC. t.t. 164 až 166 °C, -8,85° (c = 0,508, dimethylformamid (DMF)). Aminokyselinové složeni: Phe 1,96,
Glu 1,06, Asp 1,01, Cys(Bzl) 0,91, Pro 0.99, Arg 1,05, Gly 1.02. Pro C67H84N14013S3 . 2 «20 (1426) vypočteno: 56,43 % C, 6.22 % H, 13,75% N· nalezeno: 56,52 % C, 5,99 % H, 13,61 % N.
£l-Kyselina 3-merkaptopropionová, 2-D-fenylalanin, e-D-arginin^vasopresin
Redukci sodíkem v kapalném amoniaku, oxidaci ferrikyanidem draselným, odsolenim na Amberlitu IRC-50 a lyofilizací bylo z 1 g (0,72 mmol) chráněného peptidu získáno 454 mg (61 %) surového produktu. Po čištění na kontinuální beznosičové elektroforese (2 500 V) byl výtěžek 201 mg (27 ^). Lyofilizát obsahoval 82 % látky (průměrná hodnota stanovená z obsahu dusíku a polařografického stanovení obsahu), -22,5° (c - 0.142, 1M CHgCOOH).
HPLC záznam obsahoval jediný pík. Aminokyselinová analysa:
Phe 1,90, Glu 1,01, Asp 0,97, Pro 0,97, Arg 1,08, Gly 1,07. Pro C46W64N14°11S2 * 2 CH3C00H*H20 (1191) vypočteno: 50,41 % C,
6,26 % H, 16,46 % Nj nalezeno: 50,30 % C, 6,11 % H, 16,38 % N.
Příklad 5 le) £l-Kyselina 3-merkaptopropionová, 2-0-tyrosin,
8-D-arginin^vasopresin
Amid 3-benzylmerkaptopropionyl-D-tyrosyl-fenylalanyl-glutaG minyl-\asparaginyl-S-benzylcysteinyl-prolyl-N -tosyl-D-arginyl-glycinu
Při synthese bylo použito 2 g pryskyřice esterifikované glycinem (1,48 mmol Gly). Při kondensacích bylo užito 3 ekv. symetrických anhydridů, pouze při kondensací Boc-D-TyrOH byl užit N,Nz-dicyklohexylkarbodiimid (OCC) + N-hydroxybenztriazol (HOBt) (3 ekv.). Po vysušeni bylo získáno 3,67 g (92 %) látky. Po amonolytickém odštěpeni bylo získáno 1,09 g (91 %) surového nonapeptidu, t.t. 158 až 161 °c. Po dvojnásobné krystalisaci ze směsi
242 062 methanol - voda - ether činil výtěžek 1,05 g (50 %) produktu, chromatograficky jednotného v soustavě 1-butanol - kys.octová -voda (4:1:1) a na HPLC, t.t. 172 až 174 °C. -8,06° (c » 0,422, DMF). Aminokyselinové složeni: Tyr 0,97, Phe 1,01,
Glu 1,02, Asp 1,03, Cys(Bzl) 0,89, Pro 1,05, Arg 0,98, Gly 1,04.Pro C67H84N14°14S3 (14θθ) vypočteno: 57,25 % C, 6,02 % H, 13,95 % N; nalezeno: 57,29 % C, 6,03 % H, 14,17 % N.
£l-Kyselina 3-merkaptopropionová, 2-D-tyrosin, S-D-arginin^vasopresin
Redukcí sodíkem v kapalném amoniaku, oxidací ferrikyanidem draselným, odsolenim na Amberlitu IRC-50 a lyofilizaci bylo z 1 g (0,71 mmol) chráněného peptidu získáno 624 mg (82 %) surového produktu. Po čištěni kontinuální beznosičovou elektroforesou (2 500 V) byl výtěžek 250 mg (33 %). Lyofilizát obsahoval 80 % látky, Μθ°β-65,7° (c = 0,548, 1M CHgCOOH). HPLC záznam obsahoval jediný pík. Aminokyselinová analysa: Tyr 0,94, Phe 1,00,
Glu 1,01, Asp 1,03, Pro 1,02, Arg 0,92, Gly 1,07. Pro C46H63N14°12S2 * CH3C00H · H2° (1146) vypočteno: 50,30 % C,
6,07 % H. 17,11 % N; nalezeno: 50,06 % C, 6,01 % H, 16,84 % N.
Příklad 6
If) £l-Kyselina 3-merkaptopropionová, 2-0-tyrosin, 4-kyselina of-ami nomáselná, 8-D-arginin^vasopresin
Amid 3-benzylthxopropionyl-D-tyrosyl-fanylalan^l-qr-aminobutyryl-asparaginyl-S-benzylcystainyl-prolyl-N -tosyl-O-arginyl-glycinu
Synthesa v pevné fázi byla provedena na'chlormethýlované polystyrénové pryskyřici sitované 1 % DVB (obsah chloru 2,9 %) esterifikované Boc-Gly (0,3 mmol/g nosiče). Synthesa byla uskutečňována se 4 g esterifikovaného nosiče (2,2 mmol Gly) na automatickém syntatizátoru peptidů. Odstraněni terc.butyloxykarbonylové chránící skupiny bylo prováděno tříminutovým působením 3 % HBr a CHgCl^-CH^COOH (5:1), kondensace symetrickými anhydridy (3 ekv., 30 až 60 min). Po amonolysa bylo získáno 1,04 g (64 %) produktu, t.t. 144 až 152 °C._ Analytický vzorek byl dvakrát překrystalován ze směsi methanol-voda, t.t. 154 «,ϊ 'S6 4Č C°Í3d s -10’3 íc °»4* dimethylformamid). Byl chromatograficky jednotný. Aminokyselinová analysa: Tyr 0,92, Phe 0,98, Abu 0,99,
Asp 0,95, Cys(S-Bzl) 1,02, Pro 1,07, Arg 0,99, Gly 1,06. Pro
- 11 242 062 C66H83N13°eSr 1,5 H2° (139°) vypočteno: 57,04 % C, 6,24 H, 13,10 % N; nalezeno: 56,88 % C, 5,97 % H. 12,84 % N.
£l-Kyselina 3-merkaptopropionová 2-D-tyrosin, 4-kyselina
3-aminomáselná, 8-D-arginin]vasopresin Redukcí sodíkem v kapalném amoniaku, oxidaci ferrikyanidem draselným, odsolením na ionexu IRC-50 a lyofilizací bylo z 600 mg (0,44 mmol) chráněného peptidu získáno 410 mg (91 %) surového produktu. Po čištěni na HPLC byl výtěžek 150 mg (33 %) elektroforeticky homogenní látky. Lyofiližát obsahoval 77 % látky, “θ5,5ο (c = 0,5, 1M CHgCOOH), aminokyselinové složení:
Phe 1,00, Tyr 0,91, Abu 1,00, Asp 1,02, Pro 1,00, Arg 0,97,
Gly 1,09. Pro C45 H63Nl30ilS2 · 3 CH3C00H · 2 H2° U242) vypočteno: 49,30 % C, 6,41 % H, 14,66 % N; nalezeno: 49,00 % C,
6,12 % H, 14,63 % N.
Látky, které jsou předmětem vynálezu, mohou být použity k léčebným účelům v oblastech vyznačených v úvodní části, ve formě vhodné pro intranasálni, sublinguální, subkutánnx, intravenosni a perorálni použiti, tj. ve vodných roztocích, v emulsích s rostlinnými oleji, v liposomech, adsorbované, enkapsulované a k ovalantně vázané na polymerní nosiče ap. Přítomnost D-Tyr v poloze 2 zvyšuje jejich resistenci vůči proteolytickým enzymům a činí je zvláště výhodnými pro perorálni aplikaci.
Claims (4)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Vasopresinová a vasotocinová analoga obecného vzorce I j-jX - Y - Z - R -Asn-Cys-Pro- W--Gly-NH2 (I),1 2 3 4 5 6 7 8 9 v němž X je Cys nebo Mpr,Y je D-Tyr nebo D-Phe.Z je Ile nebo Phez R je G1H nebo Abu a W je Arg nebo D-Arg .
- 2.! ----1Mpr-D-T yr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NHg
- 3. ,--,Mpr-D-Tyr-Phe-Abu-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH2 ,
- 4. Způsob přípravy vasopresinových a vasotocinových analogů obecného vzorce 1 podle bodu 1, vyznačující se tlm, že sef^hráněného prekursoru peptidu, vázaného na polymerni nosič, obecného vzorce II
S.Bzl CH - X - Y S.Bzl Tos 1 1 . z-x - Z - R -Asn-Cys-Pro- W.-Gly -(p) (II), kde CH značí tosylovou nebo benzyloxykerbonylovou chránící skupinu^ Θ polymerni nosič/ Bzl značí benzyl/ Tos je tosyl a X,Y,Z,R a W mají výše uvedený význam, odštěpí chráněný prekursor peptidu, načež se chránící skupiny z peptidu odstraní, disulfidový kruh se uzavře oxidaci a získaný produkt obecného vzorce I se vyčisti.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS846365A CS242062B1 (cs) | 1984-08-23 | 1984-08-23 | Vasopresinová a vasotocinová analoga a způsob jejich přípravy |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS846365A CS242062B1 (cs) | 1984-08-23 | 1984-08-23 | Vasopresinová a vasotocinová analoga a způsob jejich přípravy |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CS636584A1 CS636584A1 (en) | 1985-08-15 |
CS242062B1 true CS242062B1 (cs) | 1986-04-17 |
Family
ID=5410507
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS846365A CS242062B1 (cs) | 1984-08-23 | 1984-08-23 | Vasopresinová a vasotocinová analoga a způsob jejich přípravy |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CS (1) | CS242062B1 (cs) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8148319B2 (en) | 2004-08-11 | 2012-04-03 | Ferring B.V. | Peptidic vasopressin receptor agonists |
US8883965B2 (en) | 2006-02-10 | 2014-11-11 | Ferring B.V. | Compounds |
US9050286B2 (en) | 2007-08-14 | 2015-06-09 | Ferring B.V. | Use of peptidic vasopression receptor agonists |
-
1984
- 1984-08-23 CS CS846365A patent/CS242062B1/cs unknown
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8148319B2 (en) | 2004-08-11 | 2012-04-03 | Ferring B.V. | Peptidic vasopressin receptor agonists |
US8778881B2 (en) | 2004-08-11 | 2014-07-15 | Ferring B.V. | Peptidic vasopressin receptor agonists |
US8883965B2 (en) | 2006-02-10 | 2014-11-11 | Ferring B.V. | Compounds |
US9050286B2 (en) | 2007-08-14 | 2015-06-09 | Ferring B.V. | Use of peptidic vasopression receptor agonists |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CS636584A1 (en) | 1985-08-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2052375C (en) | Parathyroid hormone derivatives | |
EP0561412B1 (en) | Parathyroid hormone derivatives | |
Gregory et al. | The primary structure of human urogastrone | |
Akaji et al. | Disulfide bond formation using the silyl chloride-sulfoxide system for the synthesis of a cystine peptide | |
Bodanszky et al. | Synthesis of the vasoactive intestinal peptide (VIP) | |
Fernandez-Luna et al. | Complete amino acid sequence of the Aspergillus cytotoxin mitogillin | |
Photaki | A New Synthesis of Oxytocin Using S-Acyl Cysteines as Intermediates1, 2 | |
Wang et al. | SOLID PHASE SYNTHESIS OF BOVINE PITUITARY GROWTH HORMONE‐(123–131) NONAPEPTIDE | |
Li et al. | Synthesis of a biologically active heptadecapeptide related to adrenocorticotropin | |
CS242062B1 (cs) | Vasopresinová a vasotocinová analoga a způsob jejich přípravy | |
Li et al. | Synthesis of a biologically active pentadecapeptide corresponding to an altered sequence in the adrenocorticotropin (ACTH) structure | |
LEBL et al. | Conformationally biased analogs of oxytocin | |
KHAN et al. | SYNTHESIS OF THE DODECAPEPTIDE‐α MATING FACTOR OF SACCHAROMYCES CEREVISIAE | |
Or et al. | Cysteine alkylation in unprotected peptides: synthesis of a carbavasopressin analog by intramolecular cysteine alkylation | |
US5059679A (en) | Method of selectively sulfating peptides | |
Poujade et al. | Synthesis and biological activity of glycosylated analogs of the C‐terminal hexapeptide and heptapeptide of Substance P | |
BLAKE et al. | β‐ENDORPHIN: SYNTHESIS AND RADIOLIGAND BINDING ACTIVITY OF ANALOGS CONTAINING CYSTINE BRIDGES | |
YAMASHIRO et al. | Synthesis and properties of human β‐endorphin‐(1–9) and its analogs | |
Suzuki et al. | Thin-layer chromatography of amino acid hydantoins | |
Hlaváček et al. | Oxytocin analogues with non-coded amino acid residues in position 8:[8-neopentylglycine] oxytocin and [8-cycloleucine] oxytocin | |
Buku et al. | Synthesis and biological activities of arginine-vasopressin analogs with 4-hydroxyproline in position 7 | |
Lindeberg et al. | SOLID PHASE SYNTHESIS AND SOME PHARMACOLOGICAL PROPERTIES OF 8‐D‐HOMOARGININE‐VASOPRESSIN AND 1‐DEAMINO‐8‐D‐HOMOARGININE‐VASOPRESSIN | |
Stahl et al. | Oxytocin and lysine-vasopressin with N5, N5-dialkylglutamine in the 4 position: effect of introducing sterically hindered groups into the hydrophilic cluster of neurohypophyseal hormones | |
Chillemi | SYNTHESIS BY CONVENTIONAL METHODS OF HUMAN GROWTH HORMONE PEPTIDE FRAGMENTS. I. Protected peptides corresponding to positions 139–146 and 147–156 | |
Lebl et al. | Solid phase synthesis and biological activities of oxytocin carba analogues containing threonine in position 4 |