CS238020B1 - Method of polarographic blood analysis - Google Patents

Abstract

Sposob polarografického rozboru krvi spočívá v tom, že sa vo filtráte séra a dvooh eluátoch séra Ε^θθ a Ε^θθ získaných po separácii ionomeničovou chromatografiou na ionomeniči typu dextranového gélu elučnými roztokmi, obsahujúcimi výsledné koncentráciu chloridových aniónov 320 až 330 mmol/1 a 500 až 520 mmol/1 stanoví polarografická dvojvlna a zo zistených hodnot dvojvlny 'uvedených eluátov a plného krvného séra sa vypočítají! poměry ako kvocient a percentuálňy kvocient, odlišujdci zápalové a nádorové ochorenia, podlá vzorcov Brdičkov index séra --------------------------- - kvocient K, Brdičkov index eluátu Ε^θθ Brdičkov index eluátu Ε5θθ —------------------------- x 100 = percenBrdičkov index séra tuálny kvocient.Method of polarographic analysis of blood consists in the serum filtrate and two sera of serum Ε ^ θθ and Ε ^ θθ obtained after separation by ion exchange chromatography dextran gel ion exchangers by elution solutions containing the final concentration chloride anions 320-330 mmol / l and 500-520 mmol / L is determined by polarographic double-wavelength and double-wavelength of said eluates and whole blood serum calculated! ratios as quotient and percentages quotient, distinguishing inflammatory and tumorous diseases, according to the formulas Brdičkov serum index --------------------------- - quotient K, Brdick's eluate index Ε ^ θθ Brdičkov eluate index Ε5θθ —------------------------- x 100 = percenBrdičkov serum index solid quotient.

Description

Predmetom vynálezu je sposob polarografického rozboru krvi stanovením polarografickej dvojvlny filtrátu krvného séra.The subject of the invention is a method of blood polarographic analysis by determining a polarographic double-wave serum filtrate.

Zvýšené hodnoty polarograflekej dvojvlny filtrátu krvného séra /Brdičkov index/, móžu sa nájsť pri nádorových, ale aj zápalových ochoreniaoh. Je to reakcia citlivá, ale jej nevýhodou je nešpecifičnost vo vztahu k týmto ochoreniam. Z Brdičkovho indexu nie je možné určit, či sa jedná o nádorové, alebo zápalové ochorenie.Elevated values of the polarographic double-wave serum filtrate (Brdičky index) can be found in both cancer and inflammatory diseases. It is a sensitive reaction, but its disadvantage is its non-specificity in relation to these diseases. It is not possible to determine from the Brdička index whether it is a cancer or an inflammatory disease.

Túto nevýhodu odstraňuje sposob polarografického rozboru krvi so stanovením polarograflekej aktivity filtrátu krvného séra podlá vynálezu, ktorého podstatou je, že sa vo filtráte séra a eluátov séra získaných po separáoii elučnou ionomeničovou chromatografiou na ionomeniči typu dextranového gélu elučnými roztokmi, obsahujúcimi výsledné koncentráclu chloridových aniónov 320 až 330 mmól/1 a 500 až 520 mmól/1 stanoví polarografická dvojvlna a zo zistených hodnot dvojvlny uvedených eluátov a plného krvného séra sa vypočítajú poměry ako kvocient a percentuálny kvocient, ktoré odlišujú zápalové a nádorové ochorenia, podlá vztahovThis disadvantage is overcome by the method of blood polarographic analysis by determining the polarographic activity of the blood serum filtrate according to the invention, which consists in that the serum filtrate and serum eluates obtained after separation by elution ion exchange chromatography on dextran gel ion exchanger with elution solutions containing up to 320 330 mmol / l and 500-520 mmol / l are determined by a polarographic binary wave and from the observed binary values of the indicated eluates and whole blood serum the ratios as quotient and percentage quotient that differentiate inflammatory and tumor diseases are calculated according to

Brdičkov index séra Brdičkov index eluátu Ε^θθ kvocient K,Brdičkov Index Serum Brdičkov Index of eluate Ε ^ θθ quotient K,

Brdičkov index eluátu vBrdička index eluate v

500500

—.- x 100 r percentuálny kvocient.—.- x 100 r percentage quotient.

Brdičkov index séraBrdička's serum index

Na zistenie klinického stavu pacienta sa použiji! grafy empiricky získané podlá uvedených vzorcov.To determine the clinical condition of the patient, they are used! graphs empirically obtained according to the above formulas.

P r í k 1 a dExample 1 a d

Pracovné roztokyWorking solutions

1. základný Tris-/hydroxymetyl/aminometan tlmivý roztok: 50 mmól/1 Tris-HCl pufer, upravený s koncentrovanou HC1 na pH 7,01. Tris- / hydroxymethyl / aminomethane basic buffer: 50 mmol / l Tris-HCl buffer, adjusted to pH 7.0 with concentrated HCl

2. Elučný roztok A: 10 mmol/1 NaCl roztok v základnom Tris pufri2. Elution Solution A: 10 mM NaCl solution in Tris base buffer

3. Elučný roztok B: 300 mmol/1 Naci roztok v základnom Tris pufri. Výsledná koncentrácia chloridových aniónov musí byt v rozmedzí 320 až 330 mmol/13. Elution solution B: 300 mmol / l Nation solution in Tris base buffer. The resulting chloride anion concentration must be in the range of 320 to 330 mmol / l

4. Elučný roztok C: 500 mmol/1 NaCl roztok v základnom Tris pufri. Výsledná koncentrácia chloridových aniónov musí byť v rozmedzí 500 až 520 mmol/14. Elution Solution C: 500 mM NaCl solution in Tris base buffer. The resulting chloride anion concentration must be in the range of 500-520 mmol / l

5. Gél Sephadex DEAE A-50: 0,5 g substancie sa nechá napučať 12 hodin před použitím v 100 ml základnom Tris pufri.5. Sephadex DEAE A-50 gel: 0.5 g of substance is swelled 12 hours before use in 100 ml of Tris base buffer.

6. 2 N amoniak /přesný/6. 2 N ammonia (accurate)

7. Zásobný roztok chloridu hexamokobaltitého: 0,267 5 g Co/NH^/Clg a 5,35 g NH^Cl sa rozpustí v 500 ml destilovanej vody7. Stock solution of hexamocobalt trichloride: 0,267 5 g of Co / NH4 / Clg and 5,35 g of NH4Cl are dissolved in 500 ml of distilled water

8. Brdičkov roztok trojmocného kobaltu: Zmieša sa roztok č. 6 a 7 v pomere 1:18. Brdička's trivalent cobalt solution: Mix solution no. 6 and 7 in a 1: 1 ratio

9. 20% vodný roztok kyseliny sulfosalicylovej9. 20% aqueous sulfosalicylic acid solution

10. 0,1 N KOH10. 0.1 N KOH

Roztok č. 5 vydrží asi 2 týždneSolution no. 5 lasts about 2 weeks

Do sklenenej, alebo umělohmotněj kolonky /použitá a vyčištěná kolonka pre stanovenie porfyrínov/ zakončenej fritou o vnátornom priemere asi 8 mm sa napipetuje 3,5 ml napučaného gélu Sephadex DEAE A-50.3.5 ml of Sephadex DEAE A-50 swollen gel is pipetted into a glass or plastic column (used and cleaned porphyrin column) terminated with a frit having an internal diameter of about 8 mm.

Potřebný objem gélu je najvýhodnejšie označit na kolonke. Takto naplněná kolonka sa opatrné premyje 2 ml elučným roztokom A. Po odkvapnutí posledněj kvapky sa opatrné napipetuje na povrch gélu 0,5 ml krvného séra a nechá sa vsiaknut.The gel volume required is most preferably indicated on the column. The column thus filled is carefully washed with 2 ml of elution solution A. After the last drop has been dripped, 0.5 ml of blood serum is carefully pipetted onto the gel surface and allowed to soak.

Pod kolonku sa postaví kadička označená ako eluát A. Na povrch gélu sa napipetuje 1 ml elučného roztoku A a nechá sa pretiect. Potom sa ešte napipetuje 3 ml elučného roztoku A.Place a beaker marked as eluate A under the column. 1 ml of elution solution A is pipetted onto the gel surface and allowed to flow. 3 ml of elution solution A is then pipetted.

Po odkvapnutí poslednej kvapky sa získá eluát A.After dropping the last drop, eluate A is obtained.

Pod kolonku sa postaví kadička, označená ako eluát B. Na povrch gélu v kolonke sa napipetuje 1 ml elučného roztoku B a nechá sa pretiect. Potom sa ešte napipetuje 2 ml elučného roztoku B. Po odkvapnutí poslednej kvapky sa dostává eluát B, ktorý sa premieša.Place a beaker, called eluate B, under the column. Pipette 1 ml of elution solution B onto the gel surface in the column and allow to run. 2 ml of elution solution B is then pipetted. After the last drop is dripped, eluate B is obtained and mixed.

Pod kolonku sa postaví kadička označená ako eluát C. Na povrch gélu v kolonke sa napipetuje 1 ml elučného roztoku C a nechá sa pretiect. Potom sa ešte napipetuje 1 ml elučného roztoku C.Place a beaker labeled eluate C under the column. 1 ml of elution solution C is pipetted onto the gel surface in the column and allowed to flow. 1 ml of elution solution C is then pipetted.

Po odkvapnutí poslednej kvapky sa získá eluát C, ktorý sa premieša. Potom do skámavky označenej ako S sa napipetuje 0,4 ml vyšetřovaného séra, do skámavky označenej ako Ε^θθ 0,6 ml eluátu B, do skámavky označenej ako Ε^θθ 0,6 ml eluátu C.After dropping the last drop, eluate C is obtained and mixed. Then, 0.4 ml of the serum to be examined is pipetted into the well marked S, into the well marked 0.6 ml of eluate B, into the well marked 0.6 ml of eluate C.

Do týchto skámaviek sa přidá po 1 ml 0,1 N roztoku KOH, premieša sa a nechá sa 45 minát stát. Po uplynutí tejto doby sa přidá do týchto skámaviek po kvapkách po 1 ml kyseliny sulfosalicylovej, dobré sa premieša a nechá sa 10 minát stát. Potom sa zrazeniny prefiltrujá cez filtračný papier Filtrak 391.To these slides was added 1 ml of 0.1 N KOH solution, mixed and allowed to stand for 45 minutes. After this time, 1 ml of sulfosalicylic acid is added dropwise to these slides, mixed well and allowed to stand for 10 minutes. The precipitates are then filtered through Filtrak 391 filter paper.

Filtrát eluátov B a C musí byt po přefiltrovaná čirý. Ak nie je číry, musí sa oentrifugovať 10 minát 6 000 až 7 000 ot/minátu. Zo skámavky označenej ako S sa odpipetuje 0,2 ml supernatantu, zo skámaviek označených ako Ε^θθ a Ε^θθ po 0,8 ml supernatantu.The filtrate of eluates B and C must be clear after filtration. If it is not clear, 10 to 6 000 to 7 000 rpm must be centrifuged. Pipette 0.2 ml of the supernatant from the slide labeled S, from the slides labeled as Ε ^ θθ and Ε ^ θθ with 0.8 ml of the supernatant.

Ak sa skámavky E_3QQ a E_5Q0 centrifugovali, musí sa potřebné množstvo supernatantu odsát opatrné, aby nedošlo ku zvíreniu usadených bielkovín. Do všetkých skámaviek sa postupné přidá po 2,0 ml Brdičkovho roztoku, polarografuje sa najprv skámavka S, potom skámavky Ε^θθ a Ε^θθ a nakoniec sa vykoná slepá skáška, tvořená 2,0 ml Brdičkovým roztokom v pásme 1,3 až 1,4 V.If _E3QQ and _{E5Q0 slides have been} centrifuged, the required amount of supernatant must be aspirated carefully to prevent the sedimentation of the sedimented proteins. Add 2.0 ml Brdička solution successively to all the slides, first slide S, then slide Ε ^ θθ and Ε ^ θθ and finally carry out a blank test consisting of 2,0 ml Brdička solution in the range 1,3 to 1 , 4 V.

Na polarografiu sa použije: rozsah 0 až 4 V, polarografla od 0,8 V, citlivost 1/1 000, katodická polarizácia, anoda móže byť realizovaná aj strieborným drótom, Coarse 0,1, Fine 0,04. Brdičkov index sa vypočítá podlá vzorcaFor polarography, the range is: 0 to 4 V, polarograph of 0.8 V, sensitivity 1/1000, cathodic polarization, anode can also be realized with a silver wire, Coarse 0.1, Fine 0.04. The Brdicka index is calculated according to the formula

Korigovaná výška vlny pokusu séra alebo eluátov = Brdičkov index /Bl/ Priemerná výška vlny normálneho séraCorrected wave height of serum or eluate experiment = Brdicka index / Bl / Average wave height of normal serum

Podlá uvedeného výpoštu sa zletí Bl séra a eluátov séra ^Ε30θ a ^E500‘According to the above calculation, serum B1 and serum eluates ^Ε 30θ and ^E 500 'are descended

Zistené Bl sa dosadia do vzoroovThe detected B1 is inserted into the patterns

Bl séraBl sera

Bl eluátu E_30q kvocient K,B1 eluate E _30q quotient K,

Bl eluátu Ε_5θθ B1 eluate Ε _5θθ

- x 100 = percentuálny kvocient/BI eluátu E__nn v percentách.- X 100 = percentage of the quotient / BI eluate _{E_-voltage} in percentage.

Bl séra ⁵⁰⁰ Bl serum ⁵⁰⁰

Na zistenie klinického stavu pacienta sa použijú grafy na obr. 1 a na obr. 2. Obidva grafy boli zostrojené zo súboru 852 pacientov; 531 paoientov bolo chorých na verifikované nádorové ochorenia, 321 pacientov bolo chorých na akútne a chronické zápalové ochorenia. Hodnoty Bl séra a kvocientu K sú zachytené na obr. 1, kde na osi x je vypočítaná hodnota kvocientu K a na osi y je Bl analyzovaného séra, hodnoty Bl séra a výšky Bl Ejqq v percentách sú zachytené na obr. 2, kde na osi x je vyjádřená výška Bl Ejqq v percentách a na osi y je Bl analyzovaného séra.The graphs of FIG. 1 and FIG. 2. Both graphs were constructed from a set of 852 patients; 531 patients were diagnosed with verified cancer, 321 patients were diagnosed with acute and chronic inflammatory diseases. Serum B1 and quotient K1 values are shown in FIG. 1, where the quotient value K is calculated on the x-axis and the serum analyzed B1 on the y-axis, the serum B1 values and the percent heights B1 Ejqq in percent are shown in FIG. 2, where on the x-axis is expressed the height B1 Ejqq in percent and on the y-axis B1 is the serum analyzed.

Oblast A představuje normálně hodnoty, oblast B akútne zápalové procesy, oblast C skupinu chronických zápalových a malígnych ochorení. Oblasti C.^ a na obr. £ predstavujú oblasti chronických zápalových ochoreni a malígnych ochorení. oblast A bola určená analýzou 84 darcov krvi, oblasti B, C, a súborom 852 pacientov.Area A represents normal values, area B acute inflammatory processes, area C represents a group of chronic inflammatory and malignant diseases. Areas C and FIG. They represent areas of chronic inflammatory diseases and malignant diseases. Area A was determined by analysis of 84 blood donors, Area B, C, and a group of 852 patients.

Graf na obr. 1 sa použije na odlíšenie akútnych zápalových procesov od skupiny malígnych a chronických zápalových ochorení. Chronické zápalové procesy sa odlíšia od malígnych nádorov pomocou grafu na obr. 2 vtedy, ke3 hodnota klinického stavu pacienta padne na grafe na obr. 1 do oblasti C.The graph of FIG. 1 is used to distinguish acute inflammatory processes from the group of malignant and chronic inflammatory diseases. Chronic inflammatory processes are distinguished from malignant tumors by the graph of FIG. 2 when the clinical condition of the patient falls in the graph of FIG. 1 to area C.

Výhody metody sú v rýchlosti a spolahlivosti. Metoda je schopná zachytit ešte klinicky bezpríznakové štádiá malígnych ochorení. Náklady na jedno vyšetrenle sú nízké. Metoda je vhodná pre všeobecné biochemické laboratórlá v teréne. Jej citlivost a špecifita sa Statisticky pohybuje do 90 4.The advantages of the method are in speed and reliability. The method is able to detect still clinically symptomless stages of malignant diseases. The cost per examination is low. The method is suitable for general biochemical laboratories in the field. Its sensitivity and specificity are statistically up to 90 4.

Claims (2)

PREDMET VYNÁLEZUOBJECT OF THE INVENTION Spósob polarografiekého rozboru krvi stanovením polarografiokej dvojvlny filtrátu krvného séra, vyznačujúci sa tým, že sa stanovenie dvojvlny prevádza vo filtráte séra a dvoch eluátov séra a Ε^θθ, získaných po separácii ionomeničovou chromatografiou na ionomeniči typu dextranového gélu elučnými roztokmi, pričom eluát E_3Q() bol získaný s elučným roztokom obsahujúcim výslednú koncentráciu chloridových aniónov 320 až 33U mmol/1 a eluát E,.qq bol získaný s elučným roztokom obsahujúcim výslednú koncentráciu chloridových aniónov 500 až 520 mmol/1 a zo zistených hodnot polarografickej dvojvlny uvedených eluátov a plného krvného séra sa vypočítajú poměry ako kvocienty, odlišujúce zápalové a nádorové ochorenia, podlá vzorcovA method polarografiekého analysis of the blood by determining the polarografiokej DvoJvlna filtrate of blood serum, characterized in that the determination DvoJvlna transferred in the sera and the two eluates serum Ε ^ θθ, obtained after separation by ion-exchange chromatography, the ion exchange type dextran gel eluting solution, the eluent E _{Q3 ( )} was obtained with an elution solution containing a final chloride anion concentration of 320 to 33U mmol / l and eluate E, qq was obtained with an elution solution containing a final chloride anion concentration of 500 to 520 mmol / l and from the determined polarographic double values of said eluates and whole blood sera are calculated as quotients distinguishing inflammatory and tumor diseases according to formulas Brdlčkov index séra * kvocient K,Brdlček's serum index * quotient K, Brdičkov index eluátu Ε_30θ Brdička eluate index Ε _30θ Brdičkov index eluátu E „ ____ ^x Ιθθ - percentuálny kvocient.Brdička eluate index E „____ ^x Ιθθ - percentage quotient. Brdičkov index séraBrdička's serum index