CS200519B2 - Process for preparing derivatives of androstane - Google Patents

Description

Vynález se týká způsobu výroby derivátů androstanu obecného vzorce IThe invention relates to a process for the preparation of androstane derivatives of the general formula I

ve kterém vazba . . . , představuje jednoduchou nebo dvojnou vazbu,in which the bond. . . , represents a single or double bond,

Ri značí atom vodíku nebo Cl—C4-alkylovou skupinu,R 1 represents a hydrogen atom or a C 1 -C 4 -alkyl group,

Rz značí Ci—C6-alkylovou skupinu, popřípadě přerušenou atomem kyslíku, nebo v případě, že n značí číslo 2, znamená rovněž atom vodíku aR 2 denotes a C 1 -C 6 -alkyl group optionally interrupted by an oxygen atom or, in the case n denotes 2, also represents a hydrogen atom and

Re značí methyl nebo ethinyl.R 6 denotes methyl or ethynyl.

Tento způsob podle vynálezu spočívá v tom, že sterolový derivát obecného vzorce IIThe process according to the invention consists in that the sterol derivative of the general formula II

v němž vazba . , n, Ri a Rz mají výše Uvedený význam ain which the bond. , n, R 1 and R 2 are as defined above and

R3 představuje uhlovodíkový zbytek sterolu s 8 až 10 uhlíkovými atomy, se fermentuje kulturou mikroorganismů způsobilých k odbourávání postranního řetězce sterolů, a takto vyrobený derivát androstan-17-onu obecného vzorce IIIR3 represents a hydrocarbon residue of a C8-C10 sterol, is fermented with a culture of microorganisms capable of degrading the sterol side chain, and the androstan-17-one derivative of formula III thus produced

v němž v němž vazba . . . . , Ri a R2 mají výše uvedený význam, se redukuje, popřípadě alkyluje organokovovou sloučeninou obecného vzorce IVin which the bond. . . . R 1 and R 2 are as defined above, optionally reduced or alkylated with an organometallic compound of formula IV

MeRs ,MeRs,

v němž _________ ___ vazba . . . . , Ri a R2 mají význam uvedený v bodě 1 ain which _________ ___ bond. . . . R 1 and R 2 are as defined in 1 a

R4 značí atom vodíku, methylovou nebo ethylovou skupinu, se fermentuje kulturou mikroorganismů způsobilých k odbourávání postranního řetězce sterolů.R4 represents a hydrogen atom, a methyl or ethyl group, and is fermented with a culture of microorganisms capable of degrading the sterol side chain.

K fermentaci se může výhodně používat kultury mikroorganismů způsobilých k odbourávání postranního řetězce sterolů druhů Arthrobacter, Brevibacterium, Microbacterium, Protaminobacter, Bacillus, Nocardia, Streptomyces nebo zejména druhu Mycobacterium.Cultures of microorganisms capable of degrading the side chain of sterols of Arthrobacter, Brevibacterium, Microbacterium, Protaminobacter, Bacillus, Nocardia, Streptomyces or, in particular, Mycobacterium species may be advantageously used for fermentation.

Alkylovou skupinou Ri nebo R2 se rozumí alkylová skupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ,s výhodou alkylová skupina s rovným řetězcem. Vhodnými alkylovými skupiRs značí methyl nebo ethinyl aBy alkyl R 1 or R 2 is an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, preferably a straight chain alkyl group. Suitable alkyl groups R 5 are methyl or ethynyl a

Me značí atom alkalického kovu nebo zbytek halogenidu hořečnatého.Me denotes an alkali metal atom or a magnesium halide residue.

Způsob podle vynálezu se výhodně provádí tak, že sterolový derivát obecného vzorce Ila nami Ri nebo R2 jsou například propylová, butylová, isopropylová, sek.butylová skupí; n,a a zejména methylová skupina a ethylová skupina. Alkylovou skupinou přerušovanou atomem kyslíku se rozumí skupina, která obsahuje 3 až 6 uhlíkových atomů. Takovými skupinami jsou například 2;alkoxyethylenové skupiny, jako 2-methoxyethylenová skupina nebo 2-ethoxyethylenová skupina.The process according to the invention is preferably carried out in that the sterol derivative of the general formula (I) and R1 or R2 are, for example, propyl, butyl, isopropyl, sec-butyl; n, and in particular methyl and ethyl. Oxygen interrupted by an oxygen atom means a group containing from 3 to 6 carbon atoms. Such groups are, for example, 2, alkoxyethylene groups such as a 2-methoxyethylene group or a 2-ethoxyethylene group.

Uhlovodíkovým zbytkem R3 obsahujícím 8 áž 10 uhlíkových atomů se rozumí zbytek, který se vyskytuje v postranních řetězcích přirozených zoo- nebo fytosterolů, například cholesterolu, stigmasterolu, kampesterolu, brassikasterolu nebo sitosterolů.A hydrocarbon radical R3 having 8 to 10 carbon atoms is a radical which is found in the side chains of natural zoo- or phytosterols, for example cholesterol, stigmasterol, campesterol, brassicasterol or sitosterols.

Vhodnými sterolovými deriváty obecného vzorce II jsou například takové sloučeniny, které lze charakterizovat obecným vzorcem IlaSuitable sterol derivatives of formula (II) are, for example, those compounds which can be characterized by formula (IIa)

v němž // ·.in which // ·.

. Ri a Rz máji výše uvedený význam, vazby . . . . , představují jednoduché vazby nebo dvojné vazby,. R 1 and R 2 are as defined above, bonds. . . . , represent single bonds or double bonds,

R4 značí atom vodíku, methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu.R4 represents a hydrogen atom, a methyl group or an ethyl group.

Zvláště. vhodnými sterolovými deriváty obecného vzorce Ila jsou A⁵-steroidy a deriváty 5a-sterolů tohoto obecného vzorce.Particularly. suitable sterol derivatives of formula IIIa are ^{5 5} -steroids and derivatives of 5α-sterols of this formula.

Je známo, že četné mikroorganismy (například druhů Arthrobacter, Brevibacterium,Numerous microorganisms (such as Arthrobacter, Brevibacterium,

Microbácterium, Protaminobacter, Bacillus,Microbacterium, Protaminobacter, Bacillus,

Nocardia, Streptomyces a zejména Mycobacterium) mají přirozenou schopnost odbourávat zoo- a fytosteroly na kysličník uhličitý a vodu a že při tomto odbourávání vzniká intermediárně 4-androsten-3,17-dion a l,4-androstaidien-3,17-dion.Nocardia, Streptomyces and especially Mycobacterium) have a natural ability to degrade zoo- and phytosterols to carbon dioxide and water, and that this degradation produces 4-androstene-3,17-dione and 1,4-androstaidien-3,17-dione intermediately.

Protože četné zoo- a fytosteroly (například cholesterol, stigimasterol, kampesterol, brassikasterol nebo sitosteroly) jsou hojně rozšířeny v přírodě a jsou tedy lehko dostupnými surovinami pro syntézu farmakologicky účinných steroidů, byly provedeny četné pokusy, řídit odbourávání sterolů tak, aby se zamezilo dalšímu odbourávání vznik200519 lého 4-androsten-3,17-dionu a 1,4-androstadien-3,17-dionu.Since numerous zoo- and phytosterols (for example, cholesterol, stigimasterol, campesterol, brassicasterol, or sitosterols) are widely distributed in nature and are therefore readily available raw materials for the synthesis of pharmacologically active steroids, numerous attempts have been made to control the degradation of sterols to prevent further degradation. formation of the 4-androstene-3,17-dione and 1,4-androstadiene-3,17-dione.

Tak bylo například možné zamezit další odbourávání l,4-ándrostadien-3,17-dionu a 4-.androšten-3,17-dionu tím, že se k fermentačním násadám přidávají inhibitory (viz vykládací spisy DE č. 1 543 269 a 1 593 327, jakož i patent US č. 1 208 078). Použitím inhibitorů se však .stává technické provedení těchto reakcí velmi nákladným, v neposlední řadě z toho důvodu, že musí být použité inhibitory po provedené reakci odstraňovány z fermentačních kultur, aby se zabránilo pronikání těchto látek do odpadních vod. Známé reakce mají kromě toho tu nevýhodu, že při nidh vždy vzniká 1,4-androstadien-3,l,7-dion nebo směsi 1,4-androstadien-3,17-dionu a 4-androsten-3,17-dioinu. Vznikající l,4-androstadien-3,17-dion je však jako výchozí látka pro syntézu četných farmakologicky účinných steriodů málo vhodný.Thus, for example, it was possible to prevent further degradation of 1,4-indrostadiene-3,17-dione and 4-aspirin-3,17-dione by adding inhibitors to the fermentation broths (see DE 1 543 269 and U.S. Pat. No. 593,327 as well as U.S. Patent No. 1,208,078). However, the use of inhibitors makes the engineering of these reactions very expensive, not least because the used inhibitors must be removed from the fermentation cultures after the reaction to prevent them from entering the waste water. Moreover, the known reactions have the disadvantage that nidh always produces 1,4-androstadiene-3,1,7-dione or a mixture of 1,4-androstadiene-3,17-dione and 4-androstene-3,17-dioin. However, the 1,4-androstadiene-3,17-dione formed is not suitable as a starting material for the synthesis of numerous pharmacologically active steriods.

Jinak mohlo být dalšímu odbourávání 1,4-androstadien-3,17-dionu a 4-androsten-3,17-dionu zabráněno i tak, že ,k fermentační přeměně sterolů bylo použito mutant mikroorganismů druhu Mycobacterium (viz patent US č. 3 684 657). Dosud vypěstované mutanty mají však nevýhodu spočívající ve velmi omezené schopnosti tvorby 1,4-androstadien-3,17-dionu nebo 4-androstan-3,17-dionu ze sterolů.Otherwise, further degradation of 1,4-androstadiene-3,17-dione and 4-androstene-3,17-dione could also be prevented by using a mutant of Mycobacterium species for the fermentation conversion of sterols (see U.S. Pat. No. 3,684) 657). However, the mutants produced so far have the disadvantage of a very limited ability to form 1,4-androstadiene-3,17-dione or 4-androstane-3,17-dione from sterols.

Okolem tohoto vynálezu je vyvinout způsob odbourávání postranních řetězců sterolů prostý nedostatků známých způsobů.It is an object of the present invention to provide a method for degrading sterol side chains free from the drawbacks of known methods.

Okol byl řešen vypracováním způsobu vyznačujícího se tím, že derivát sterolů obecného vzorce II se fermentuje s kulturou mikroorganismů způsobilých odbourávat postranní řetězce sterolů.Surrounding has been solved by a process characterized in that the sterol derivative of formula (II) is fermented with a culture of microorganisms capable of degrading the sterol side chains.

Pro odborníka je velmi překvapující, že při této fermentativní přeměně vznikají ve vysokých výtěžcích deriváty androstan-17-onu obecného vzorce I. To z toho· důvodu, poněvadž je známo, že odbourávání postranního řetězce sterolů provádí velmi komplexní enzymový systém a nemohlo být očekáváno, že všechny enzymy spolupůsobící při odbourávání postranních řetězců přirozených sterolů mají schopnost provádět rovněž odbourávání postranních řetězců sterolů obecného vzorce II nevyskytujících se v přírodě. Nemohlo být kromě toho předvídáno, že enzymové systémy účastnící se odbourávání l,4-.androstadien-3,17-dionu a 4-androsten-3,17-dionu neodbourávají deriváty ándrostan-17-onu obecného vzorce I.It is very surprising for a person skilled in the art that this fermentative conversion results in high yields of androstan-17-one derivatives of the general formula I. This is because it is known that the degradation of the sterol side chain carries out a very complex enzyme system and could not be expected All enzymes involved in the degradation of natural sterol side chains have the ability to also perform non-natural sterol side chain degradation of the general formula II. Furthermore, it could not have been predicted that the enzyme systems involved in the degradation of 1,4-androstene-3,17-dione and 4-androstene-3,17-dione did not degrade the androstan-17-one derivatives of the general formula I.

Odhlédne-li se od použití jiných výchozích sloučenin a od skutečnosti, že tuto reakci lze provádět v nepřítomnosti inhibitorů, způsob podle vynálezu se provádí za stejných fermentačních podmínek, kterých se rovněž používá u známých reakcí mikrobiologického odbourávání postranních řetězců sterolů.Apart from the use of other starting compounds and the fact that this reaction can be carried out in the absence of inhibitors, the process of the invention is carried out under the same fermentation conditions as also used in the known microbiological degradation reactions of sterol side chains.

Podle vynálezu se fermentace provádí za použití kultur mikroorganismů, kterých se používá obvykle k odbourávání postranního řetězce sterolů. Vhodnými kulturami jsou například kultury bakterií způsobilé k odbourávání postranních řetězců sterolů druhů Arthrobacter, Brevibacterium, Microbacterium, Protaminobacter, Streptomyces nebo zejména druhu Mycobacterium. Jako vhodné .mikroorganismy lze uvést například Microbacterium lactum IAM-1640, Protaminobacter alboflavus IAM-1040, Bacillus roseus IAM-1257,According to the invention, the fermentation is carried out using cultures of microorganisms, which are usually used to break down the sterol side chain. Suitable cultures are, for example, bacteria cultures capable of degrading the side chains of sterols of Arthrobacter, Brevibacterium, Microbacterium, Protaminobacter, Streptomyces or, in particular, Mycobacterium species. Suitable microorganisms include, for example, Microbacterium lactum IAM-1640, Protaminobacter alboflavus IAM-1040, Bacillus roseus IAM-1257,

Bacillus sphaericus ATCC-7055,Bacillus sphaericus ATCC-7055

Nocardia gardneri IAM-105,Nocardia gardneri IAM-105

Nocárdia minima IAM-374,Nocárdia minima IAM-374,

Nocardia corallina IFO-3338,Nocardia corallina IFO-3338

Streptomyces rubeseerís IAM-74 nebo zejména mikroorganismyStreptomyces rubeseeris IAM-74 or, in particular, microorganisms

Mycobacterium avium IFO-3O82,Mycobacterium avium IFO-3O82

Mycobacterium phlei ÍFO-3158,Mycobacterium phlei IFO-3158,

Mycobacterium phlei (Ostav Zdravotnictví, Budapešť č. 29),Mycobacterium phlei (Health Institute, Budapest No. 29),

Mycobacterium phlei ATCC-354, Mycobacterium smegmatis ATCC-20, Mycobacterium smegmatis IFO-3O84, Mycobacterium smegmatis (Ústav Zdravotnictví, Budapešť č. 27),Mycobacterium phlei ATCC-354, Mycobacterium smegmatis ATCC-20, Mycobacterium smegmatis IFO-3O84, Mycobacterium smegmatis (Institute of Health, Budapest No. 27),

Mycobacterium smegmatis ATGC-19979, Mycobacterium fortuitum CBS-49566, Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 a Mycobacterium spec. NRRL-B-368.3.Mycobacterium smegmatis ATGC-19979, Mycobacterium fortuitum CBS-49566, Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 and Mycobacterium spec. NRRL-B-368.3.

Sumberzní kultury se předpěstují za vzdušnění ve vhodném živném prostředí za obvyklých podmínek používaných u těchto mikroorganismů. Potom se přidává ke kulturám substrát (.rozpuštěný ve vhodném rozpouštědle nebo s výhodou v 'emulgované formě) a fermentuje se, až se dosáhne maximální přeměny substrátu.Sumber cultures are grown under aeration in a suitable culture medium under the usual conditions used for these microorganisms. Subsequently, the substrate (dissolved in a suitable solvent or preferably in emulsified form) is added to the cultures and fermented until the maximum conversion of the substrate is achieved.

Vhodnými rozpouštědly substrátu jsou například methanol, ethanol, glykolmonomethylether, dimethylformamid nebo diimethylsulfoxid. Emulgování substrátu lze provádět například tak, že se přidává v mikronizované formě nebo rozpuštěný v rozpouštědle mísitelném s vodou (jako methanolu, ethanolu, acetonu, glykolmonomethyletheru, dimethylformamidu neíbo dímethylsulfoxidu) za intenzívní turbulence do vody (s výhodou zbavené vápníku), která obsahuje obvyklá emulgační činidla. Vhodnými emulgačními činidly jsou neiono>genní emulgátory, například ethylenoxidové adukty nebo polyglykolové estery mastných kyselin. Vhodnými emulgátory jsou například obchodně dostupná smáčedla typu Teginu ^(R) , Tagatu ^(R) , Tweenu ^(R) a Spánu ^(R) .Suitable substrate solvents are, for example, methanol, ethanol, glycol monomethyl ether, dimethylformamide or diimethylsulfoxide. The emulsification of the substrate can be carried out, for example, by adding it in micronized form or dissolved in a water-miscible solvent (such as methanol, ethanol, acetone, glycol monomethyl ether, dimethylformamide or dimethylsulfoxide) under intense turbulence into water (preferably de-calcium). reagents. Suitable emulsifying agents are nonionic emulsifiers, for example ethylene oxide adducts or polyglycol fatty acid esters. Suitable emulsifiers are, for example, commercially available surfactants such as Tegin ^(R) , Tagat ^(R) , Tween ^(R) and Span ^(R) .

Emulgování substrátu umožňuje často zvýšené prosazení substrátem a tím zvýšení koncentrace substrátu. Je pochopitelně rovněž možné při způsobu podle vynálezu používat další metody zvyšování prosazení substrátu, jak je dobře známo pracovníkům z oboru.Emulsifying the substrate often allows for increased throughput of the substrate, thereby increasing substrate concentration. Of course, it is also possible to use other methods of increasing substrate throughput in the method of the invention, as is well known to those skilled in the art.

Optimální koncentrace substrátu, doba přidávání substrátu a trvání fermentace jsou závislé na struktuře použitého substrátu a druhu použitého mikroorganismu. Tyto veličiny musí být zjišťovány, jak se u mikrobiálních přeměn steroidů obecně vyžaduje, v jednotlivých případech předběžnými pokusy.The optimum substrate concentration, substrate addition time and fermentation duration depend on the structure of the substrate used and the type of microorganism used. These quantities must be determined, as is generally required for microbial transformations of steroids, in preliminary cases in individual cases.

Deriváty androstan-17-onu obecného vzorce III lze v poloze 17 redukovat nebo alkylovat organokovovou sloučeninou obecného vzorce IVThe androstan-17-one derivatives of formula III can be reduced or alkylated at the 17-position with an organometallic compound of formula IV

MeRs (IV), v němžMeRs (IV) wherein

Rs představuje nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový zbytek s 1 až 2 uhlíkovými atomy aR 5 represents a saturated or unsaturated hydrocarbon radical having 1 to 2 carbon atoms and

Me značí atom alkalického kovu nebo zbytek halogenidů hořčíku.Me denotes an alkali metal atom or a magnesium halide residue.

Takto připravené sloučeniny obecného vzorce IThe compounds of formula I thus prepared

v němž vazba ,..., Ri a Rž mají výše uvedený význam awherein the bond, ..., R 1 and R 2 are as defined above, and

R6 má stejný význam jako Rs nebo značí atom vodíku, lze v přítomnosti H⁺-iontů nebo Lewisových kylselin hydrolyzovat na příslušné 3i/J-hydroxysloučeniny. Jejich další zpracování ve farmakologicfcy účinné látky je známé.R 6 has the same meaning as R 5 or represents a hydrogen atom, in the presence of H ⁺ -ions or Lewis acids can be hydrolyzed to the corresponding 3 H -hydroxy compounds. Their further processing into the pharmacologically active substance is known.

Tak lze například takto získané deriváty 3i/í-hydrOxy-5-androsten-17-onu převádět pomocí Oppenauerovy reakce (například zahřátím produktů hydrolýzy s isopropylátem hlinitým ve směsi benzenu a acetonu) v příslušné 17í₎g-hydroxy-3-keto-A⁴-steroidy, například testosteron, 17«-methyltestosteron, 17«-ethyltestofsteron nebo 17,a-ethinyltestosteron, které jak známo, mají rovněž významnou hormonální aktivitu.Thus, for example the derivatives thus obtained 3i / i-hydroxy-5-androsten-17-one transferred via Oppenauer reaction (for instance by heating the hydrolysis products with isopropylate aluminum in a mixture of benzene and acetone) in the respective _17i) g-hydroxy-3-keto-A ^4- steroids, for example testosterone, 17'-methyltestosterone, 17'-ethyltestofsterone or 17, α-ethinyltestosterone, which are also known to have significant hormonal activity.

17«-Ethinyl-T7|$-hydroxy-4-androsten-3-on a 17/?-hydroxy-17a-vinyl-4-androsten-3-on jsou známými cennými meziprodukty pre výrobu farmakologicky účinného 17a-hydroxyprogesteronu a jeho esterů (Helv. Chim. Acta 24, 1941, 945 a vykládací spis DE č. 2 140 291).17? -Ethinyl-? 7? -Hydroxy-4-androsten-3-one and 17? -Hydroxy-17? -Vinyl-4-androsten-3-one are known valuable intermediates for the preparation of the pharmacologically active 17? -Hydroxyprogesterone and its esters (Helv. Chim. Acta 24, 1941, 945 and DE-A-2,140,291).

Redukce 17-ketoskupiny u derivátů 5-androsten-17-onu obecného vzorce I se provádí způsoby známými z oboru (viz například John Eried: Organic Reactions in Steroid Chemistry — van Norlstrand Reinhold Comp. New York etc. 1972, sv. 1, str. 61 ff). Tyto sloučeniny lze uvést do reakce například s borohydridem sodným nebo hydridem llthnohlinltým a získat příslušné deriváty 17jjS-hydroxy-5-androstenu.The reduction of the 17-keto group of the 5-androsten-17-one derivatives of formula I is carried out by methods known in the art (see, for example, John Eried: Organic Reactions in Steroid Chemistry - van Norlstrand Reinhold Comp. New York etc. 1972, vol 1, p. 61 ff). These compounds can be reacted with, for example, sodium borohydride or 11-aluminum hydride to give the corresponding 17β-hydroxy-5-androstene derivatives.

Rovněž jsou známé způsoby alkylace 17-ketoskupiny (viz například John Fried: Organíc Reactions in Steroid Chemiistry — van Norstrand Reinhold Comp., New York etc. 1972, sv. 2, str. 53 ff). Tak lze například deriváty 5-androsten-17-onu obecného vzorce I uvádět do reakce s alikylmagnesiumhalogenidy nebo acetyhdy alkalických kovů a získat příslušné deriváty 17-hydroxy-17«-alkyl (nebo ethinyl)5-androstenu.Methods for alkylating the 17-keto group are also known (see, for example, John Fried: Organ Reactions in Steroid Chemistry - van Norstrand Reinhold Comp., New York etc. 1972, Vol. 2, p. 53 ff). Thus, for example, 5-androsten-17-one derivatives of formula I can be reacted with alkali metal alkyl halides or acetydes to give the corresponding 17-hydroxy-17'-alkyl (or ethinyl) 5-androstene derivatives.

Výchozí sloučeniny způsobu podle vynálezu jsou známé, nebo- je lze připravit známými způsoby [J. Pharm. Soc. 54, 514 (1965), Can. J. Chem. 49, 2418 (1971) SynthesisThe starting compounds of the process of the invention are known or can be prepared by known methods [J. Pharm. Soc. 54, 514 (1965), Can. J. Chem. 49, 2418 (1971). Synthesis

1975, 276 a 1976, 244, Tetrahedron Letters1975, 276 and 1976, 244, Tetrahedron Letters

1976, 809, Can. J. Chem. 50, 2788 (1972) a Bull. Soc. Chim. France 1960, 297).1976, 809, Can. J. Chem. 50, 2788 (1972) and Bull. Soc. Chim. France, 1960, 297).

Následující příklady provedení slouží k objasnění vynálezu.The following examples serve to illustrate the invention.

A) Příklady provedení týkající se mikrobiologického odbourávání postranního řetězce Příklad 1A) Exemplary embodiments regarding microbiological side chain degradation Example 1

a) Do 750 ml Erlenmeyerovy baňky se vnese 200 ml sterilního živného roztoku, obsahujícího 1 % kvasničného extraktu, 0,45 proč. dinatriumhýdrogenfosfátu, 0,34 % kaliumdihydrogenfosfátu a 0,2 % Tagatu^(E) 02, nastaveného na hodnotu pH 6,7, zaočkuje se smytou suchou kulturou Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 a třepe se po dobu 3 dní při teplotě 30 °C při 190 otáčkách za minutu.(a) In a 750 ml Erlenmeyer flask add 200 ml of sterile nutrient solution containing 1% yeast extract, 0,45 why. disodium hydrogen phosphate, 0.34% potassium dihydrogen phosphate and 0.2% Tagat ^(E) 02, adjusted to pH 6.7, were inoculated with a washed dry culture of Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 and shake for 3 days at 30 ° C at 190 rpm.

b) SOlitrový fermentor se 40 litry sterilního živného, roztoku obsahujícího 1,23 °/o kvasničného extraktu (05 %), 0.68 % kaliumdihydrogenfosfátu a 0,2 °/o Tagatu^w 02, nastaveného na hodnotu pH 6,0, se naočkuje 200 ml napěstované kultury Mycobacterium spec. a předkultura se inikubuje po· dobu 48 hodin při teplotě 30 °C za vzdušnění (2 m³ za hodiinu).(b) A 40 liter sterile nutrient fermenter containing a solution containing 1,23% o / yeast extract (05%), 0,68% potassium dihydrogen phosphate and 0,2% o / o Tagat ^w 02, adjusted to pH 6,0, is seeded with 200 liters. ml of Mycobacterium spec. and the preculture is incubated for 48 hours at 30 ° C under aeration (2 m ³ per hour).

c) 400 g cholesterolu se rozpustí v 8 litrech dlmethylacetalu formaldehydu, za míchání se při teplotě místnosti přidá 400 g křemeliny a 200 g kysličníku fosforečného po dávkách a reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Nerozpustné látky (se odfiltrují, promyjí dimethylacetalem formaldehydu a rozpouštědlo se oddestlluje ve vakuu. Po přidání roztoku hydrogenuhličitanu sodného se pevný surový produkt odsaje, profmyje vodou a po vysušení se získá 440 g 3i0-methoxymethoxy-5-cholestenu. Sloučenina překrystalovaná z acetonu má teplotu tání 79 až 80%!.c) 400 g of cholesterol are dissolved in 8 liters of formaldehyde dimethylacetal, 400 g of diatomaceous earth and 200 g of phosphorus pentoxide are added in portions with stirring, and the reaction mixture is stirred for 2 hours at room temperature. Insoluble materials (filtered, washed with formaldehyde dimethyl acetal and solvent distilled off in vacuo. After addition of sodium bicarbonate solution, the solid crude product was filtered off with suction, washed with water and dried to give 440 g of 3,10-methoxymethoxy-5-cholestene. mp 79-80% !.

400 g takto připraveného 3/J-methoxymethoxy-5-cholestenu se emulguje se 120 g Teginu^(R), 10 litry delonizované vody a 40 ml 1 N hydroxidu sodného při teplotě 95 °C po dobu 30, minut. Emulze se sterilizuje po dobu 20 minut ipři teplotě 120 °C.400 g of the thus prepared 3 H -methoxymethoxy-5-cholestene are emulsified with 120 g of Tegin ^(R) , 10 liters of delonized water and 40 ml of 1 N sodium hydroxide at 95 DEG C. for 30 minutes. The emulsion is sterilized for 20 minutes at 120 ° C.

d) Do 501itrového farmantoru se vnese 40 litrů sterilního živného roztoku obsahujícího 2,0 °/o kukuřičného výluhu, 0,3 % diamoniumhydrogenfosfátu a 0,25 %' Tagatu^(R1 02, nastaveného na hodnotu pH 6,5, naočkuje se 2 litry předkultury Mycobacterium spec. a za vzdušnění (0,5 m³ 'za hodinu} a míchání (250 otáček za minutu) se inkubuje po dobu 24 hodin při teplotě 30 °C. Potqm se ke kultuře přidá emulze 3/?-methoxymethoxý-5-cholestenu, připravená podle odstavce c) a fermentuje se po dobu dalších 120 hodin.d) 40 liters of sterile nutrient solution containing 2.0% corn liquor, 0.3% diammonium hydrogen phosphate and 0.25% Tagat ^(R1 02, adjusted to pH 6.5, inoculated with 2 liters) are placed in a 501 liter farmer. pre-cultures of Mycobacterium spec. and with aeration (0.5 m ³ 'per hour) and agitation (250 rpm) are incubated for 24 hours at 30 ° C. Potassium emulsion of 3-methoxymethoxy-5 is added to the culture. -cholestene prepared according to c) and fermented for a further 120 hours.

Po skončené fermentací se kultura extrahuje 3X5 litry ethylenchloridu, ethylenchloridový extrakt ise zfiltruje a odpaří ve vakuu.After the fermentation was completed, the culture was extracted with 3X5 liters of ethylene chloride, the ethylene chloride extract was filtered and evaporated in vacuo.

Zbytek (156 g) se chromatografuje na sloupci křemeliny, překrystaluje z ethylacetátu a získá ee 86 g 30-methoxymethoxy-5,-androsten-17-oinu s teplotou tání 129/131 až 132 °C.The residue (156 g) is chromatographed on silica gel, recrystallized from ethyl acetate to give 86 g of 30-methoxymethoxy-5, -androsten-17-oine, m.p. 129/131-132 ° C.

P ř í k 1 a d 2Example 1 a d 2

a) Ve 21itrové Erlenmeyerově baňce s 500 ml sterilního živného prostředí se napěstuje za podmínek příkladu la) Mycobacterium spec. N'RRL-3i8i0'5.a) In a 21-liter Erlenmeyer flask with 500 ml of sterile broth, cultured under the conditions of Example 1a) Mycobacterium spec. N'RRL-388'5.

b) 10 g sitosterolu se přemění reakcí 'tak, jak je popsáno v příkladu lcj a získá se 11 g 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5-cholestenu. Sloučenina překrystalovaná z acetonu má teplotu tání 70 až 71 °C.b) 10 g of sitosterol was converted by the reaction as described in Example 1cj to give 11 g of 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5-cholestene. The compound recrystallized from acetone has a melting point of 70-71 ° C.

10' g takto získaného 24-ethyl-3/3wethoxymethoxy-5-cholestenu se emulguje se 4 g Teginu^(R) a 300 ml vody při teplotě 95 °C po dobu 10 minut. Emulze ee sterilizuje po dobu 20 minut při teplotě 120 °C.10 g of the 24-ethyl-3/3-methoxyethoxy-5-cholestene thus obtained are emulsified with 4 g of Tegin ^(R) and 300 ml of water at 95 DEG C. for 10 minutes. The emulsion is sterilized for 20 minutes at 120 ° C.

cj Obsah 20 Erlenmeyerových baněk vždy s 85 ml sterilního živného prostředí, obsahující 2,0 % kukuřičného výluhu, 0,3 % diamoniumhydrogenfo,státu a 0,25 % Tagatu^(R|, nastaveného, ina hodnotu pH 6,5, se očkuje po 5 ml napěstované kultury Mycobacterium spec. a třepe se po dobu 24 hodin při 2120 otáčkách za minutu při teplotě 30 °Ó.The contents of 20 Erlenmeyer flasks each containing 85 ml of sterile broth containing 2.0% corn steep liquor, 0.3% diammonium hydrogenphosphate, the state and 0.25% Tagat ^(R , adjusted at a pH of 6.5) are inoculated 5 ml of Mycobacterium spec. Cultured and shaken for 24 hours at 2120 rpm at 30 ° C.

Potom se ke každé kultuře přidá 14 ml suspenze 24-ethyl-30-me'thoxymethoxy-5-cholestenu (toto imnožství odpovídá 0,5 g 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5-chole'stenuj a fermentuje se dalších 120 hodin při teplotě 30 °C na třepacím zařízení.Then, 14 ml of a suspension of 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5-cholestene (equivalent to 0.5 g of 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5-cholesterol) is added to each culture and fermented for a further 120 hours at 30 ° C on a shaker.

Po zpracování jako v příkladu ld j se získá 2,1 g 30-meťhoxymethoxy-5-androsten-17-onu s teplotou tání 130 až 132 °C.After working up as in Example 1d j, 2.1 g of 30-methoxymethoxy-5-androsten-17-one having a melting point of 130 DEG-132 DEG C. is obtained.

Příklad 3Example 3

a) 10,5 g stigmasterolu se přemění reakcí jako v příkladu lc) a získá se 10,75 g 24-ethyl-3i/J-methoxymethoxy-5,22-cholestadienu. Sloučenina překrystalovaná z acetonu má teplotu tání 103 až 104 ^qC.a) 10.5 g of stigmasterol were converted by the reaction of Example 1c) to give 10.75 g of 24-ethyl-3 H -methoxymethoxy-5,22-cholestadiene. The compound recrystallized from acetone has a melting point of ^103-104 ° C.

b) 10 g 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5,22-cholesta dlenu (se emulguje za podmínek popsaných v příkladu 2ib).b) 10 g of 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5,22-cholestene (emulsified under the conditions described in Example 2ib).

cj Za podmínek popsaných v příkladu 2aj a cj se .připraví 85 ml kultury Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 a přidá se 14 ml suspenze 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5,22-cholestadienu (toto odpovídá 0,5 g 24-ethyl-3/3-methoxymetho>xy-5,22-cholestadienuj.85 ml of a culture of Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 and 14 ml of a suspension of 24-ethyl-30-methoxymethoxy-5,22-cholestadiene (corresponding to 0.5 g of 24-ethyl-3/3-methoxymethoxy-5,22-cholestadiene) is added.

Po inkubaci dalších 120 hodin při teplotě 30 °C na třepacím zařízení následuje zpracování jak je popsáno v příkladu ld).Incubation for an additional 120 hours at 30 ° C on a shaker is followed by treatment as described in Example 1d).

Získá se 2,3 g 3|3-methoxymethoxy-5-androsten-17-onu <s teplotou tání 130 až 132 st. Celsia.2.3 g of 3β-methoxymethoxy-5-androsten-17-one, m.p. 130 DEG-132 DEG C., are obtained. Celsius.

Příklad 4 aj 20 g cholesterolu se rozpustí ve 300 ml diethylacetalu formaldehydu, za míchání se přidá 30 g křemeliny při teplotě místnosti .a po dávkách 15 g kysličníku fosforečného a míchá po dobu 4 hodin. Reakční směs se zbaví filtrací nerozpustných látek, filtr se promyje diethylacetalem formaldehydu a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu. Zbytek krystaluje při teplotě 0 °C, Po přidání roztoku hydrogenuhličitanu sodného se surový produkt odsaje, promyje vodou a po sušení se získá 22,5 g 30-ethoxymethoxy-5-cholestenu. Sloučenina překrystalovaná z ethylacetátu má teplotu tání 64 až 66 °C.Example 4 and 20 g of cholesterol are dissolved in 300 ml of formaldehyde diethyl acetal, 30 g of diatomaceous earth are added with stirring, in portions of 15 g of phosphorus pentoxide and stirred for 4 hours. The reaction mixture was freed of insoluble materials by filtration, washed with formaldehyde diethyl acetal and the solvent was distilled off in vacuo. The residue crystallized at 0 ° C. After addition of sodium bicarbonate solution, the crude product was filtered off with suction, washed with water and dried to give 22.5 g of 30-ethoxymethoxy-5-cholestene. The compound recrystallized from ethyl acetate had a melting point of 64-66 ° C.

bj 10 g 3j3-ethoxymethoxy-5-cholestenu se emulguje za podmínek popsaných v příkladu 2bj.bj 10 g of 3β-ethoxymethoxy-5-cholestene are emulsified under the conditions described in Example 2bj.

cj K 85 ml kultury Mycobacterium spec. NRRL-B-3805, připravené za podmínek uvedených v příkladu 2a) a c), se přidá 14 ml suspenze 30-ethoxymethoxy-5-cholestenu (toto odpovídá 0,5 g 30-ethoxymethoxy-5-cholestenu).cj To 85 ml of Mycobacterium spec. NRRL-B-3805, prepared under the conditions of Example 2a) and c), 14 ml of a suspension of 30-ethoxymethoxy-5-cholestene (corresponding to 0.5 g of 30-ethoxymethoxy-5-cholestene) is added.

Po inkubaci po dobu dalších 120 hodin při teplotě 30 °C na třepacím zařízení, následuje zpracování jako v příkladu ld).Incubation for an additional 120 hours at 30 ° C on a shaker followed by treatment as in Example 1d).

Získá se 1,5 g 30-ethoxymethoxy-5-androsten-17-onu s teplotou tání 121 až 123 °C.1.5 g of 30-ethoxymethoxy-5-androsten-17-one of melting point 121 DEG-123 DEG C. are obtained.

P ř í k 1 a d 5 aj 38,67 g cholesterolu se rozpustí ve 250 mililitrech methylenchloridu .a 164,2,g formaldehyd-bis-glykolmonomethyletheracetalu (připravitelného například podle vykládacího spisu DE č. 2 405 633), za míchání při teplotě místnosti se přidá 60 g křemeliny a 30 g kysličníku fosforečného a míchá se po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Nerozpustné produkty se odfiltrují, promyjí methylenchloridem a neutralizují methanolickým roztokem hydroxidu draselného. Po oddestilování rozpouštědla ve vakuu se produkt vyjme do methanolu, zfiltruje a sloučenina pomalým odpařením zkrystaluje. Získá se 25 g 20-(2,5-dioxahexyloxy]-5-choleštěnu s teplotou tání 41 až 42 °C.Example 5 and 38.67 g of cholesterol are dissolved in 250 ml of methylene chloride and 164.2 g of formaldehyde-bis-glycol monomethyl ether acetal (obtainable, for example, according to DE 2 405 633), with stirring at room temperature. 60 g of diatomaceous earth and 30 g of phosphorus pentoxide are added and stirred for 1 hour at room temperature. Insoluble products are filtered off, washed with methylene chloride and neutralized with methanolic potassium hydroxide solution. After distilling off the solvent in vacuo, the product was taken up in methanol, filtered and the compound crystallized by slow evaporation. 25 g of 20- (2,5-dioxahexyloxy) -5-cholestenes are obtained, m.p. 41-42 ° C.

bj Za podmínek uvedených v příkladu 2b)bj Under the conditions of Example 2b)

12 sé ' emulguje '10 g ' 3/3- (2,5-dioxahexy loxy) -5-cholesténu.' , ,,c) Za podmínek uvedených v příkladu 2aj a c) se připraví 25 riil kultury Mycobacterium spec:.'NRRL-B-3805 a přidá se 14 ml suspenze .3/3-(2,5-dioxahexy loxy )-5-cholestenu (toto odpovídá 0,5 g 3/3-(2,5-dioxahexyloxy-5-cholestehu.12 g of emulsified 10 g of 3 / 3- (2,5-dioxahexyloxy) -5-cholestene. c) Under the conditions given in Example 2aj and c), 25 µl of a culture of Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 was prepared and 14 ml of a suspension of 3- [3- (2,5-dioxahexyloxy) -5-] was added. cholestene (this corresponds to 0.5 g of 3 / 3- (2,5-dioxahexyloxy-5-cholesterol).

Po dalších 120 hodinách inkubace při teplotě 30 °C na třěpacím ' zařízení následuje zpracování jak je popsáno v příkladu ld).After an additional 120 hours of incubation at 30 ° C on a shaking apparatus, processing is carried out as described in Example 1d).

Získá se 1,75 g 3+(2,5-dioxahexyloxy)-5androsten-17-onu s teplotou tání 65 až 67 °C.1.75 g of 3+ (2,5-dioxahexyloxy) -5-androsten-17-one are obtained, m.p. 65-67 ° C.

P ř í k 1 a d 6Example 1 a d 6

a) 12 g cholesterolu se suspenduje ve 100 mililitrech dimethylacetalu acetaldehydu, za míchání při teplotě místnosti se přidá 25 g křemeliny a po dávkách 12 g kysličníku fosforečného a za teploty místnosti se míchá po dobu 45 minut. Nerozpustné látky se odsají, promyjí methylenchloridem a roztok se neutralizuje methanolickým roztokem hydroxidu sodného. Po oddestilování rozpouštědel ve vakuu se surový produkt překrystaluje po přidání aktivního uhlí z acetonu. Získá se 10,2 g 3,/3-( 1-methoxyethoxy )-5-cholestenu s teplotou tání 94 až 95 °C.(a) 12 g of cholesterol are suspended in 100 ml of acetaldehyde dimethyl acetal, 25 g of diatomaceous earth are added under stirring at room temperature, and 12 g of phosphorus pentoxide are added in portions and stirred at room temperature for 45 minutes. The insoluble matter is filtered off with suction, washed with methylene chloride and the solution is neutralized with methanolic sodium hydroxide solution. After distilling off the solvents in vacuo, the crude product was recrystallized after addition of activated carbon from acetone. 10.2 g of 3- [3- (1-methoxyethoxy) -5-cholestene are obtained, m.p. 94-95 ° C.

b) 10 g 3/3-( 1-methoxyethoxy )-5-cholestenu se emulguje za podmínek popsaných v příkladu 2b).b) 10 g of 3 / 3- (1-methoxyethoxy) -5-cholestene were emulsified under the conditions described in Example 2b).

c) Za podmínek popsaných v příkladu 2a) a c) se připraví 85 ml kultury Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 a přidá se 14 ml suspenze 3/3-(l-methoxýethoxy)-5-cholestenu (toto odpovídá 0,5 g 3/3- (1-methoxyethoxy)-5-cholestenu).c) Under conditions described in Example 2a) and c), 85 ml of Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 and 14 ml of a suspension of 3 / 3- (1-methoxyethoxy) -5-cholestene (corresponding to 0.5 g of 3 / 3- (1-methoxyethoxy) -5-cholestene) is added.

Po dalších 120 hodinách inkubace při teplotě 30 °C na třěpacím zařízení následuje zpracování jak je popsáno v příkladu ld).After an additional 120 hours of incubation at 30 ° C on a shaking apparatus, processing is carried out as described in Example 1d).

Získá se 1,89 g 3/3- (1-methoxyethoxy)-5-androsten-17-onu s teplotou tání 111 až 118 stupňů C.There were obtained 1.89 g of 3 / 3- (1-methoxyethoxy) -5-androsten-17-one, m.p. 111-118 ° C.

Příklad 7Example 7

a) K 19,33 g cholesterolu ve 200 ml methylenchloridu se přidá 23,6 ml vinylethyletheru a. 86 mg kyseliny p-toluensulfonové (bělzvodé) a míchá se po dobu 1,5 hodiny. Po neutralizaci roztokem hydrogenuhličitanu sodného se reakční směs extrahuje roztokem chloridu sodného, suší síranem sodným a rozpouštědlo se oddestiluje. Olejovitý surový produkt se chromatografuje na sloupci silikagelu ve směsích hexan-ethylacetát. Získá še 18,4 g 3/3-(1-ethoxyethoxy )-5-cholestenu ve formě bezbarvé voskovité látky.a) To 19.33 g of cholesterol in 200 ml of methylene chloride was added 23.6 ml of vinyl ether and 86 mg of p-toluenesulfonic acid (whitish water) and stirred for 1.5 hours. After neutralization with sodium bicarbonate solution, the reaction mixture is extracted with brine, dried over sodium sulfate and the solvent is distilled off. The oily crude product is chromatographed on a silica gel column in hexane-ethyl acetate mixtures. 18.4 g of 3 / 3- (1-ethoxyethoxy) -5-cholestene are obtained in the form of a colorless waxy substance.

b) 10 g 3/?-(l-ethoxyethoxy)-5-cholestenu se emulguje ža podmínek popsaných v příkladu 2b).b) 10 g of 3- (1-ethoxyethoxy) -5-cholestene were emulsified according to the conditions described in Example 2b).

c) Za podmínek popsaných v příkladu 2a) a c) se připraví 85 ml kultury Mycobacteřium spec. NRRL-B-3805 a přidá se 14 ml suspenze 3/3-(l-ethoxyethoxy)-5-cholestenu (toto odpovídá 0,5 g 3/3-(l-ethoxyethoxy)-5-cholestenu). Potom se inkubuje na třepacim .Zařízení (při teplotě 30 °C), po dobu dalších 120 hodin.c) Under conditions described in Example 2a) and c), 85 ml of Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 and 14 ml of a suspension of 3 / 3- (1-ethoxyethoxy) -5-cholestene (corresponding to 0.5 g of 3 / 3- (1-ethoxyethoxy) -5-cholestene) is added. It is then incubated on a shaking apparatus (at 30 ° C) for an additional 120 hours.

Spojené kultury se extrahují ethylenchloridem. Extrakty se zahustí ve vakuu, zbytek se zahřívá k varu pod zpětným chladičem se 70 ml methanolu, 12 ml Vody a 6 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové po dobu 1 hodiny. Po ochlazení na teplotu 12 °C se reakční produkt vysráží 100 ml vody a odfiltruje. Po překrystalování z acetonu se získá 0,62 g 5-androsten-3/3-ol-17-onu s teplotou tání 138/148 až 149 °C.The combined cultures were extracted with ethylene chloride. The extracts are concentrated in vacuo, the residue is refluxed with 70 ml of methanol, 12 ml of water and 6 ml of concentrated hydrochloric acid for 1 hour. After cooling to 12 ° C, the reaction product is precipitated with 100 ml of water and filtered off. Recrystallization from acetone gave 0.62 g of 5-androsten-3/3-ol-17-one, m.p. 138/148-149 ° C.

PříkladeExample

a) 38,7 g cholesterolu se rozpustí v 500 ml methylenchloridu, při teplotě 0 °C se přidá 25 ml ethylenoxidu a 0,5 ml bortrifluoridetherátu. Reakční směs se ponechá stát přes noc při teplotě místnosti, vytřepe vodou, vysuší síranem sodným a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu. Surový produkt (50 g) se chromatografuje na silikagelu ve směsích hexan-ethyl-acetát.(a) 38.7 g of cholesterol are dissolved in 500 ml of methylene chloride, 25 ml of ethylene oxide and 0.5 ml of boron trifluoride etherate are added at 0 ° C. The reaction mixture was allowed to stand overnight at room temperature, shaken with water, dried over sodium sulfate and the solvent was distilled off in vacuo. The crude product (50 g) is chromatographed on silica gel in hexane-ethyl acetate mixtures.

Získá se 10 g 3/3-(2-hydroxyethoxy)-5-cholestenu s teplotou tání 91 až 95 °C.10 g of 3 / 3- (2-hydroxyethoxy) -5-cholestene are obtained, m.p. 91-95 ° C.

b) 10 g 3/3-(2-hydroxyethoxy)-5-cholestenu se emulguje za podmínek popsaných v příkladu 2b). 'b) 10 g of 3 / 3- (2-hydroxyethoxy) -5-cholestene were emulsified under the conditions described in Example 2b). '

c) Za podmínek uvedených v příkladu 2aj a c) se připraví 85 ml kultury Mycobacterium spec. NRRL-3805 a zpracuje se 14 ml suspenze 3/3-(2-hydroxyethoxy)-5-cholestenu (toto odpovídá 0,5 g 3/3-(2-hydroxyethoxy)-5-cholestenu). Po dalších 120 hodinách inkubace při teplotě 30 °C na třěpacím zařízení následuje zpracování jak je popsáno v příkladu ld).c) Under the conditions of Example 2aj and c), 85 ml of a Mycobacterium spec. NRRL-3805 and treated with a 14 ml suspension of 3 / 3- (2-hydroxyethoxy) -5-cholestene (this corresponds to 0.5 g of 3 / 3- (2-hydroxyethoxy) -5-cholestene). After an additional 120 hours of incubation at 30 ° C on a shaking apparatus, processing is carried out as described in Example 1d).

Získá se 2,1 g 3/3-(2-hydroxyethoxy)-5-androsten-17-onu s teplotou tání 173/175 až 177 °C.2.1 g of 3 / 3- (2-hydroxyethoxy) -5-androsten-17-one with a melting point of 173/175 to 177 ° C are obtained.

Příklad 9 'Example 9 '

a) 20 g 5cei-choléstan-3,/3-olu se uvádí do reakce s dimethylacetalem formaldehydu jak je popsáno v příkladu lc) a získá se 21,5 g 3/3-methoxyinetb.oxy-5aí-cholestenu. Sloučenina překrystalovaná z acetonu má teplotu tání 65 až 68 °C.a) 20 g of 5cei-cholesthan-3, 3-ol are reacted with formaldehyde dimethyl acetal as described in Example 1c) to give 21.5 g of 3-3-methoxyinethoxy-5α-cholestene. The compound recrystallized from acetone has a melting point of 65-68 ° C.

b) 10 g S+methoxymethoxy-Stf-cholestanu se emulguje za podmínek popsaných v příkladu 2b).b) 10 g of S + methoxymethoxy-Stf-cholestane are emulsified under the conditions described in Example 2b).

c) Za podmínek popsaných v příkladu 2a) a c) se připraví 85 ml kultury Mycohacterium spec. NRRL-3805 a zpracuje se 14 ml suspenze a/J-methoxymethoxy-Sw-cholestanu (toto odpovídá 0,5 g 3/3-methoxymethoxy-5«·200519 cholestanu). Po dalších 120 hodinách inkubace při teplotě 30 °C na třepačce následuje zpracování jako v příkladu ld).c) Under conditions described in Example 2a) and c), 85 ml of Mycohacterium spec. NRRL-3805 and treated with 14 ml of a suspension of α-N-methoxymethoxy-Sw-cholestane (this corresponds to 0.5 g of 3/3-methoxymethoxy-5 &apos; 200519 cholestane). After an additional 120 hours of incubation at 30 ° C on a shaker, the treatment is carried out as in Example 1d).

Získá se 2,05 g 3j3-methoxymethoxy-5a'-androstan-17-onu a teplotou tání 97 až 98 °C.2.05 g of 3β-methoxymethoxy-5α'-androstan-17-one is obtained, m.p. 97-98 ° C.

Bj Příklady provedení týkající se dalšího chemického zpracování derivátů androstan-17-onuExamples of further processing of androstan-17-one derivatives

Příklad 10 g terc.butylátu draselného ve 100 ml tetrahydrofuranu se převádí uváděním acetylenu v acetylid. K této suspenzi se přidá při teplotě 10 °G roztok 20 g 3/3-methoxymethoxy-5-androsten-17-onu ve 100 ml tetrahydrofuranu a míchá se po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu a nahradí vodou. Surový produkt se odsaje, promyje vodou a suší. Získá se 21,53 g 17a-ethinyl-3/3-methoxymethoxy-5-androsten-17/3-olu s teplotou tání 184 až 186 °G.Example 10 g of potassium tert-butylate in 100 ml of tetrahydrofuran are converted by introducing acetylene in acetylide. To this suspension was added a solution of 20 g of 3/3-methoxymethoxy-5-androsten-17-one in 100 ml of tetrahydrofuran at 10 ° C and stirred for 1 hour. The solvent was distilled off in vacuo and replaced with water. The crude product is filtered off with suction, washed with water and dried. 21.53 g of 17α-ethynyl-3/3-methoxymethoxy-5-androsten-17/3-ol are obtained, m.p. 184-186 ° C.

PřikladliThey did

3,59 g 17o-ethinyl-3/J-methomethoxy-5-androsten-17/3-olu se zahřívá pod zpětným chladičem se 100 ml acetonu, 4 ml vody a 3,4 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové po dobu 15 minut. Produkt se po ochlazení vysráží vodou, odfiltruje, promyje vodou a suší. Získá se 3,1 g 17a^-ethinyl-5-androsten-3jj3,17/3;-diolu s teplotou tání 241 až 243 °C (z acetonu).3.59 g of 17o-ethynyl-3 H -methomethoxy-5-androsten-17/3-ol was heated to reflux with 100 ml of acetone, 4 ml of water and 3.4 ml of concentrated hydrochloric acid for 15 minutes. After cooling, the product precipitates with water, filtered, washed with water and dried. There were obtained 3.1 g of 17.alpha.-ethynyl-5-androstene-3.beta., 3.37 / 3.diol, m.p. 241 DEG-243 DEG C. (from acetone).

P ř í k 1 a d 1 2Example 1 a d 1 2

Methylmagnesiumbromid se připraví obvyklým způsobem z 1,5 g hořčíkových hoblin, 37,5. ml toluenu a 9 ml etheru a plynného methylbromidu. Do této směsi se přidává při teplotě místnosti pod dusíkem roztok 5,63 g 3(S-methoxymethoxy-5-androsten-17-onu ve 40 ml toluenu během 30 minut. Reakční směs se potom po dobu 200 minut míchá při teplotě 50 až 55 °C pod dusíkem, ochladí, rozloží opatrně zředěnou kyselinou sírovou, rozpouštědla se oddestilují a krystaly izolují. Výtěžek 5,85 g 3/J-methoxymethoxy-17a-methyl-5-androsten-17/S-olu s teplotou tání 134 až 135 °C (z methanolu).Methyl magnesium bromide was prepared in the usual manner from 1.5 g of magnesium shavings, 37.5. ml of toluene and 9 ml of ether and methyl bromide gas. A solution of 5.63 g of 3- (S-methoxymethoxy-5-androsten-17-one in 40 ml of toluene) was added to the mixture at room temperature under nitrogen over 30 minutes, and the reaction mixture was then stirred at 50-55 minutes for 200 minutes. ° C under nitrogen, cooled, decomposed with cautiously diluted sulfuric acid, the solvents were distilled off and the crystals were isolated, yielding 5.85 g of 3'-methoxymethoxy-17α-methyl-5-androsten-17 / S-ol, m.p. ° C (from methanol).

P ř í k 1 a d 1 3Example 1 d

3,49 g 3/S-methoxymethoxy-17<r-methyl-5-androsten-lZ/S-olu se rozpustí ve 100 ml acetonu, přidá se 6 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 6 ml vody a směs se zahřívá po dobu 1 hodiny pod zpětným chladičem k varu. Po ochlazení se produkt vysráží vodou, zfiltruje, promyje vodou a suší. Získá se 3,0 g 17a-methyl-5-androsten-3/?,17,/3-diolu s teplotou tání 200 až 204 °C (z methanolu).3.49 g of 3-S-methoxymethoxy-17'-methyl-5-androsten-1 H -sol are dissolved in 100 ml of acetone, 6 ml of concentrated hydrochloric acid and 6 ml of water are added and the mixture is heated for 1 h. hours under reflux to boil. After cooling, the product is precipitated with water, filtered, washed with water and dried. 3.0 g of 17α-methyl-5-androstene-3R, 17R, 3-diol of melting point 200 DEG-204 DEG C. (from methanol) are obtained.

Příklad 14 g 3i/S-methoxymethoxy-5-androsten-17-onu se rozpustí ve 100 ml ethánolu a 150 ml benzenu, přidají se 2,63 g borohydrldu sodného a reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Potom se přidá voda, rozpouštědla se oddestilují ve vakuu a surový produkt se odsaje, promyje vodou a suší. Získá se 20,1 g 3./3-methoxymethoxy-5-androsten-17/J-olu s teplotou tání 149 až 150 stupňů C (z methanolu).EXAMPLE 14 g of 3 &apos; -S-methoxymethoxy-5-androsten-17-one is dissolved in 100 ml of ethanol and 150 ml of benzene, 2.63 g of sodium borohydride are added and the reaction mixture is stirred for 2 hours at room temperature. Water is then added, the solvents are distilled off in vacuo and the crude product is filtered off with suction, washed with water and dried. There was obtained 20.1 g of 3. 3-methoxymethoxy-5-androsten-17-ol having a melting point of 149 DEG-150 DEG C. (from methanol).

PŘEDMĚTSUBJECT

Claims (2)

PŘEDMĚTSUBJECT 1. Způsob výroby androstanových derivátů obecného vzorce IA process for the preparation of androstane derivatives of the general formula I YNÁLEZU vyznačující se tím, že sterolový derivát obecného vzorce II vazba . . . . , n, Ri a R2 mají výše uvedený význam aThe invention is characterized in that the sterol derivative of the general formula (II) is a bond. . . . , n, R 1 and R 2 are as defined above and R3 představuje uhlovodíkový zbytek sterolu s 8 až 10 uhlíkovými atomy, se fermentuje kulturou mikroorganismů způsobilých k odbourávání postranního řetězce sterolů, a takto vyrobený derivát androstan-17-onu obecného vzorce III v němž vazba . . . , představuje jednoduchou nebo dvojnou vazbu,R 3 represents a hydrocarbon residue of a C 8 -C 10 sterol, fermented with a culture of microorganisms capable of degrading the side chain of the sterols, and the thus-produced androstan-17-one derivative of the general Formula III wherein the bond. . . , represents a single or double bond, Ri značí atom vodíku nebo Ci—Ci-alkylovou skupinu,R 1 represents a hydrogen atom or a C 1 -C 1 -alkyl group, Rž značí Cl—C6-alkylovou skupinu, popřípadě přerušenou atomem kyslíku, nebo značí-li n číslo 2, pak znamená také atom vodíku, aR 2 represents a C 1 -C 6 -alkyl group optionally interrupted by an oxygen atom or, if n is 2, it is also a hydrogen atom, and R6 značí methyl nebo ethinyl, v němž vazba . . . . , Ri a Rž mají výše uvedený význam, se redukuje, popřípadě alkyluje organokovovou sloučeninou obecného vzorce IVR 6 denotes methyl or ethynyl in which the bond. . . . R 1 and R 2 are as defined above, optionally reduced or alkylated with an organometallic compound of formula IV MeRs , (IV) v němžMeRs, (IV) wherein Rs značí methyl nebo ethinyl a Me značí atom alkalického kovu nebo zbytek halogenidu hořečnatého.R 5 denotes methyl or ethynyl and Me denotes an alkali metal atom or a magnesium halide residue. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že sterolový derivát obecného vzorce Ha v němž vazba . . . . , Ri a R2 mají význam uvedený v bodě 1 a2. A process according to claim 1, wherein the sterol derivative of the formula (IIa) wherein the bond. . . . R 1 and R 2 are as defined in 1 a Rí značí atom vodíku, methylovou nebo ethylovou skupinu, se fermentuje kulturou mikroorganismů způsobilých k odbourávání postranního řetězce sterolů, načež se provede druhý reakční stupeň.R 1 represents a hydrogen atom, a methyl or ethyl group, is fermented with a culture of microorganisms capable of degrading the sterol side chain, followed by a second reaction step. Severograha, n. p., závod 7, MostSeverograha, n. P., Plant 7, Most