CN86108770A - 抗菌素tan—749化合物及其制备 - Google Patents

抗菌素tan—749化合物及其制备 Download PDF

Info

Publication number
CN86108770A
CN86108770A CN86108770.4A CN86108770A CN86108770A CN 86108770 A CN86108770 A CN 86108770A CN 86108770 A CN86108770 A CN 86108770A CN 86108770 A CN86108770 A CN 86108770A
Authority
CN
China
Prior art keywords
milliliters
compound
water
hydrogen
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN86108770.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1012499B (zh
Inventor
原田节夫
小野英男
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takeda Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN86108770A publication Critical patent/CN86108770A/zh
Publication of CN1012499B publication Critical patent/CN1012499B/zh
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)

Abstract

下式化合物或其盐
其中R1是氢、己酰基或山梨酰基、R2是氢或甲基、R3是游离氨基或加以保护的氨基、而R4是羟基或2—脒基—乙氨基、但需当R1和R2均为氢和R3是氨基、R4才是2—脒基—乙氨基、或当R1是山梨酰基和R4是2—脒基—乙氨基、R3才是加以保护的氨基，此化合物或其盐可用作合成TAN—749(一种治疗细菌感染疾病的药用抗菌素)的有效中间体。

Description

本发明是有关新的抗菌素TAN-749（下面某些情况下简写为“TAN-749”）化合物及其制备方法，该化合物适用于作治疗细菌感染疾病的药物。
δ-羟基-β-赖氨酸，一种TAN-749A和C的氨基酸（下面叙述），系已知作为抗菌负霉素成份的氨基酸〔见the    Journal    of    the    American    Chemical    Society    93，6305（1971）〕。
由于基于抗菌素的治疗学的进展，大部份细菌引起的疾病已被治服，然而，在传染病医药领域里，仍然存在某些重要问题。例如，长时间或高剂量的常用抗菌素投药法引起致病细菌菌丛变异（细菌替换）或出现抗药性细菌（获得抗药性），结果使疾病增加。为解决这些问题就需要具有新结构、新生物活性的抗菌素或合成这些新抗菌素的中间体。
本发明人在其寻找新抗菌素的研究中，从土壤中离析出许多细菌品种，然后分离和研究由这些品种产生的抗菌素，发现某些微生物属于产生新的抗菌素的假单胞菌属，它具有抗格兰氏阳性及格兰氏阴性细菌（包括具有抗药性的菌株）的抗菌活性，并可通过在培养基中培养相应微生物而积聚在培养基上。然后本发明人分离此种抗菌素，并根据它的物理化学和生物特性，证明其为一种新的抗菌素，将之命名为抗菌素TAN-749。TAN-749由四种成份组成，它们被称之为TAN-749A、B、C、D。进一步研究发现各TAN-749成份由下述结构式表示：
Figure 86108770_IMG6
No. TAN-749 R5R6R2
1 A -CH3-H -H
2 B -CH3-H -CH3
3 C -H -CH3-H
4 D -H -CH3-CH3
（R＊）表示按R-S旋光性表示的R-构型。
本发明人进一步使用TAN-749作为原料进行分解反应，获得一种中间体，用以合成其具有更高生物活性的衍生物。
根据这些发现，本发明人进行更深入的研究从而完善了本发明。
本发明涉及：
（1），由下式表示的化合物或其盐
Figure 86108770_IMG7
其中R1是氢、己酰基或山梨酰基，R2是氢或甲基，R3是加以保护的或未被保护的氨基，R4是羟基或2-脒基-乙氨基，但必需当R1和R2均为氢和R3是氨基时，R4才是2-脒基-乙氨基，或当R1是山梨酰基和R4是2-脒基-乙氨基时，R3才是加以保护的氨基。
（2），制备由下式表示的化合物或其盐的方法
Figure 86108770_IMG8
其中R1、R2和R3定义同上，但必需R1和R2均是氢时，R3才是加以保护的氨基。该方法包括使下式表示的化合物或其盐进行水解
式中R1′是己酰基或山梨酰基，R2和R3定义同上。
（3），制备由下式表示的化合物或其盐的方法
Figure 86108770_IMG10
式中R1″是氢或己酰基，R2、R3和R4定义同上，但必需当R1″和R2均是氢和R3是氨基时，R4才能是2-脒基-乙氨基。该方法包括将下式表示的化合物或其盐进行催化还原，必要时，进一步进行脱酰
Figure 86108770_IMG11
式中R2、R3和R4定义同上，而R5和R6各为氢或甲基，但R5和R6不能同时为氢或甲基。
在这些分子式中，R3表示的氨基的保护基团包括芳香酰基基团，例如邻苯二甲酰基、苯甲酰基、对-硝基苯甲酰基、对-叔丁基苯甲酰基、对-叔丁基苯磺酰基、苯磺酰基和甲苯磺酰基;也包括脂肪酰基基团，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、一氯代乙酰基、二氯代乙酰基、三氯代乙酰基、甲磺酰基、乙磺酰基、三氟代乙酰基、马来酰基和琥珀酰基;酯化羰基基团，例如甲氧羰基、乙氧羰基、叔丁氧羰基、异丙氧羰基、2-氰基乙氧羰基、β，β，β-三氯代乙氧羰基、苄氧羰基、对-硝基苄氧羰基、对-甲氧苄氧羰基、二苯基甲氧羰基、甲氧基甲氧羰基、乙酰基甲氧羰基和苯氧羰基;亚甲基基团，例如（六氢化-1H-庚因-1-基）亚甲基;磺酰基基团，例如2-氨基-2-羧乙基磺酰基;以及酰基以外的别的基团，例如三苯甲基、2-硝基苯基硫代、苯亚甲基、4-硝基苯亚甲基、二或三烷基甲硅烷基、苄基和对-硝基苄基。
虽然在选择上述保护基时无特殊限制，但特别优选使用的是对-硝基苯甲酰基、乙酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基等等。
前面通式中R4为羟基的化合物有时形成如下的内酯环：
上述的内酯环化合物亦包括在本发明中。
包括在本发明中的化合物制备方法现叙述如下。
用常规的酸水解法来消除化合物（Ⅲ）或其盐的2-脒基-乙氨基基团。即将化合物（Ⅲ）溶解于2N盐酸中，使其浓度为5-20mg/ml并迴流5分钟至1小时，最好是15-40分钟，同时加热（外部温度120℃左右）（方法Ⅰ）。
将反应液体中和以后，使用Diaion    HP-20（Mitsubi-shi    Kasei）等填充的柱色谱提纯反应产物。当迴流继续2-10小时，最好4-8小时时，在同样条件下，山梨酰基或己酰基基团也从化合物（Ⅲ）中除去，得到没有2-脒基-乙氨基、山梨酰基和己酰基的化合物（方法Ⅱ）。使用以Dowex50W（Dow    Chemic-al.USA）等作为柱的柱色谱提纯反应产物。
将化合物（Ⅴ）或其盐催化还原，便得到具有二个双键被饱和的山梨酰基基团的化合物。该催化还原按常规反应进行。就是，将化合物（Ⅴ）溶解于例如水或乙酸这样的极性溶剂中，加入催化还原催化剂例如氧化铂、钯-碳或阮内镍，然后将溶液在氢气流中搅拌。反应于常温常压下几个小时可完成，提高压力可以缩短反应时间。
建议在用于下一步反应之前，将化合物（Ⅴ）和酸水解法（方法1）或催化还原法所获得的化合物均加以处理，将它们的氨基用保护基加以保护。对氨基引入保护基的普通方法T.W.Greene在“Protective    Groups    in    Organic    Synthesis”P.218（1981）（John    Wiley    &    Sons）中详细叙述过。引入N-保护基的典型情况如下：叔丁氧羰基化情况下，将样品溶于例如50%二噁烷和水的混合物这样的极性溶剂中，并加入大约1～4当量三乙胺和大约1～3当量2-（叔丁氧羰氧基亚胺基）-2-苯乙腈（以下某些情况下缩写为BOC-ON），于常温下搅拌溶液使反应进行0.5至8小时，最好3至6小时，在苯甲酰基化或苄氧羰基化情况下，将样品溶于碳酸氢钠稀水溶液中，并加入大约1～3当量苯甲酰氯或苄氧碳酰氯，反应于常温下进行约2至8小时，同时搅拌该溶液。
将能由式（Ⅴ）表示的化合物（Ⅵ）（其中R3是氨基、R4是2-脒基-乙氨基）或上面叙述的酸水解（方法Ⅰ）的催化还原产物加以处理以除去脂肪酸基（于引入N-保护基以后或按原样）。使用酶来进行消除作用，即用脱酰酶。可使用的脱酰酶包括含于acidovorans假单胞菌属IFO13582的细菌细胞中的脱酰酶。当上述脱酰酶用于反应时，细菌细胞以其固有存在形式或以天然粉末的形式加入，并以丙酮等预处理。样品溶于缓冲溶液中，例如磷酸或醋酸缓冲溶液（PH：5-9，最好是6-7.5;离子浓度：0.01-0.3M，最好0.02-0.2M），然后加入上述的细菌细胞或天然粉末，使其浓度为每1mg样品5-500mg/ml，最好20-100mg/ml。反应温度为30-45℃，最好34-38℃，反应时间10-48小时，最好15-24小时。反应一般于充入空气并搅拌下进行。然后将反应液进行离心等处理除去细菌细胞，此后以离子交换树脂等方法提纯。
通过碱水解由化合物（Ⅲ）生产化合物（Ⅱ），此反应分两步进行。也就是，抗菌素TAN-749、它的催化还原产物或它们的N-保护基引入后的产物，首先在温和条件下处理，以消除2-脒基-乙基。处理条件如下：例如将化合物（Ⅲ）溶于氢氧化钠溶液中，将其搅拌。氢氧化钠浓度为0.5-2当量，最好是1-1.5当量。当反应温度为20-40℃时，反应时间1天至2星期，最好是2-8天，当反应温度为50-70℃，最好55-65℃时，反应时间为1-15小时，最好是2-8小时（方法Ⅲ）。当使用更为急烈的条件时，不仅2-脒基-乙氨基，而且山梨酰基或己酰基也都从化合物（Ⅲ）中除去，得到既没有2-脒基-乙氨基也没有山梨酰基和己酰基的化合物（R1为氢原子的化合物（Ⅱ））。在此种情况下，正如上面叙述的，反应于保持同样碱反应液条件下进行，反应温度50-70℃，最好55-65℃，反应时间8小时-3天，最好10-24小时（方法Ⅳ）。
表1和2分别表示上述主要反应方法以及通过这些方法获得的各种化合物的结构式：
Figure 86108770_IMG13
Figure 86108770_IMG14
Figure 86108770_IMG15
Figure 86108770_IMG16
本发明作为原料使用的TAN-749可由下述参考例中叙述述的方法生产。
参考例1和2中使用的荧光假单胞菌（Pseudomonas    fluorescens）YK-437菌株于1985年6月7日寄存于大坂发酵研究所（IFO），保藏号为IFO14446。该微生物（它于1985年6月15日寄存于日本国际贸易和工业部工业科学和技术厅发酵研究所（FRI），保藏号为FERMP-8312，该寄存物被转换为布达佩斯条约寄存物）保存于FRI保藏号为FERMBP-1005。
本发明获得的化合物（Ⅰ）可作为合成TAN-749的原料，TAN-749系可用作治疗细菌感染疾病的优良药物的抗菌素。
TAN-749可使用下述方法从化合物（Ⅰ）合成，例如将化合物（Ⅰ）溶解或悬浮于二甲基甲酰胺中，用冰冷却该溶液或悬浮液，同时加入1-2当量三乙胺、1-2当量1-羟基苯并***和1-2当量二环己基碳化二亚胺。然后将混合物于室温或冰冷却下搅拌2-16小时，得到TAN-749，其氨基被叔丁氧羰基保护（下面某些情况下称为N-BOC体）得到的N-BOC体于常温下用三氟醋酸处理5-30分钟。也可将化合物（Ⅰ）溶解在稀碱液中，加入山梨酰氯，然后于常温下搅拌30分钟-2小时来制取TAN-749的N-BOC体。
本发明的由化合物（Ⅰ）获得的TAN-749的生物学特性叙述如下。
表3和表4表示TAN-749A、B、C和D（二盐酸盐）抗各种微生物的抗菌频谱。
Figure 86108770_IMG17
注1    培养基组成
Bacto-抗菌素培养基3
（Difco实验室USA）：17.5g
Bacto-醇母浸膏
（Difco实验室USA）：5.0g
Bacto-琼脂
（Difco实验室USA）：20g
蒸馏水
（PH未调节）：1000ml
接种尺寸：约106CFU/ml
Figure 86108770_IMG18
（注1）以琼脂稀释法测定
接种尺寸 108CFU/ml
（注2）TSA（Tripticase    Soy琼脂;Baltimore生物实验室，USA），B-TSA    10%马血清/TSA
表5表示TAN-749二盐酸盐对临床分离的金黄色葡萄球菌菌株的抗菌活性
（注1）由琼脂稀释法测定
培养基：Mueller    Hinton培养基
（Difco实验室，USA）
接种尺寸：106CFU/ml
表6表示TAN-749A、B、C和D（二盐酸盐）对老鼠传染病的治疗效果
Figure 86108770_IMG20
表7为TAN-749A和B（二盐酸盐）对老鼠的急剧毒力
Figure 86108770_IMG21
从这些数据看，很清楚，TAN-749及其盐具有对格兰氏阳性和格兰氏阴性细菌的抗菌活性并且对哺乳动物的毒性很低。而且，它们对各种具抗药性的细菌也有效并不易于交叉抵抗。为此，TAN-749及其盐可用于治疗哺乳动物（老鼠、鼠、兔、狗、人等）的细菌感染疾病。
TAN-749或其盐可按下述方法用作治疗细菌感染疾病的药物。例如，将TAN-749或其盐与适于药用的载体、赋形剂、稀释剂等等混合后，对上述哺乳动物通过皮下或肌肉注射来非口服给药，剂量为约1-50mg/Kg/每天，最好约5-20mg/Kg/每天。TAN-749或其盐也可以胶囊形式口服，TAN-749的剂量约为1-100mg/Kg/每天，建议最好约为5-50mg/Kg/每天。
TAN-749或其盐可用作杀菌剂。例如，可将TAN-749或其盐溶解于蒸馏水中（浓度为约0.01-0.1重量/体积%）制成液体或制成软膏（每克含TAN-749约0.2-20mg最好约1-10mg）施用于手、腿、眼、耳等可杀菌和消毒。
本发明获得的化合物（Ⅰ）可很有效地作为合成TAN-749（一种用于治疗细菌感染疾病的药物的抗菌素）的中间体。
下面以参考例如实施例来更详细描述本发明。除另行说明外，培养基组合物含量以重量体积%表示。
YMC装填的S-30和A312（Yamamura化学实验室）分别用作高压液体色谱（下面某些情况下缩写为HPLC）的制备载体和分析载体。
参考例1：
将生长在浓缩琼脂斜面培养基中的荧光假单胞菌YK-437（IFO14446FERM    BP-1005CGM    CCOO    94）接种到一只2升容量、内有500毫升培养基的坂口氏瓶中。所装培养基是含有2%葡萄糖、3%可溶淀粉、1%未加工大豆粉、0.3%玉米浸泡液、0.5%多肽菌素（Polypepton）（Daigo营养药品公司）和0.3%氯化钠的水溶液（PH7.0）中加入0.5%的沉淀剂碳酸钙配制而成。然后，在24℃下、往复摇动培养48小时。将所得培养液全部接种到一只50升容积的内装有30升培养基的发酵器中，此种培养基系将0.05%的Actcol（Takeda    Chemical    Industries），一种消泡剂，加入到上述的培养基中配制成的。在24℃下，以30升/分的充气速率和200转/分的转速培养48小时。然后将6升培养液接种到一个200升的内有120升培养基的发酵器中，该培养基含有3%甘油、0.1%葡萄糖、0.5%多肽菌素（Daigo营养药品公司），0.5%的肉汁（Wako    Pure    Chmical    Industries）0.5%氯化钠、0.05%硫代硫酸钠、2ppm氯化钴和0.05%的Actcol。然后在24℃下，以120升/分的充气速率和170转/分的转速、孵化66小时。
用2N盐酸、将所得的培养液（105升）的PH值调至6.5后、将其加入到Hyflo超级微孔（Jones Manville产品USA）使过滤，并用水洗涤，得到的滤液（102升）PH值调至6.5后、让其通过IRC-50（Na+型、2升）填充柱，用水洗柱后，用2M盐液（500升）洗提，该洗提液再通过活性炭（2升）填充柱，用水洗，然后用8%的异丁醇水溶液（15升）作洗提剂进行洗提。将得到的洗提液PH值调到6.2后浓缩至2升，然后通过CM-SephadexC-25（Na+型、0.5升）填充柱，其活性馏份用0.1M的盐液（20升）作洗提剂洗提。
TAN-749B出现在色层谱的前半部份，TAN-749A出现在色层谱的后半部份。
将每个馏份进行层析，用活性炭（1.0升或4.0升）填充，脱盐后浓缩、冻干得到TAN-749B粗产物（4.0克）或者TAN-749A粗产物（8.9克）。
用反相高效液体色谱分离粗产物B（4.0克）〔流动相：8%甲醇/0.02M磷酸盐溶液（PH3）〕，得到活性馏份，将该活性馏份进行柱色谱分离，用CM-SephadexC-25（Na+型、0.25升）填充柱、然后再以活性炭（0.3升）填充柱色谱分离、得到纯馏份、然后将其浓缩、冻干、得到白色粉末状的TAN-749B二盐酸盐（0.66克），粗产物A（8.9克）也用相同的方法处理，得到白色粉末状TAN-749A的二盐酸盐（4.7克）。
参考例2：
将生长在浓缩琼脂斜面培养基中的荧光假单胞菌YK-437（IFO14446，FERM    BP-1005，（GMCC-0094）接种到一个内有500毫升培养基的2升坂口氏瓶中、该培养基系含有2%的葡萄糖、3%可溶淀粉、1%未加工大豆粉、0.3%玉米浸泡液、0.5%多肽菌素和0.3%氯化钠的水溶液中加入0.5%的沉淀剂碳酸钙配制成的。然后在24℃下，往复摇动培养48小时，将所得培养液全部移植到一个200升容积、内有120升培养基的发酵器中。这种培养基、系将上述培养基加入0.05%Actcol（一种消泡剂）配制而成。然后在24℃下、以120升/分的充气速率和180转/分的转速孵化48小时。将50升所得培养液接种到一个2000升容量、内装1200升培养基的发酵器中，此种培养基含3%甘油、0.1%葡萄糖、0.5%多肽菌素、0.5%肉汁、0.5%氯化钠、0.05%硫代硫酸钠、2ppm氯化钴和0.05%Actcol。然后在24℃下、以1200升/分的充气速率和150转/分的转速孵化66小时。
将得到的培养液（1150升）的PH值调至6.5后，倒入Hyflo超级微孔中过滤，用水洗涤，得到滤液（1220升）。将该滤液的PH值调至6.2后，使其通过IRC-50（Na+型、20升）填充柱，用水洗涤柱子后，用0.5M的盐酸溶液（200升）作洗提剂洗提，将所得洗提液的PH值调至5.6后，令其通过Diaion SP-207（20升）填充柱、然后用水（120升）洗提，将洗提液浓缩至2升。将浓缩物再通过CG-50（NH+ 4型，3升）填充柱。然后用0.4-0.6M盐液（40升）作洗提剂、洗提活性馏份。
TAN-749A、B、C和D馏份出现在色层谱的前半部份，TAN-749A馏份出现在色层谱的后半部份。
将得到的每一馏份进行色谱分离，用活性炭作填料（1.2升或2.0升）。用8%的异丁醇水溶液（4升或10升）洗提，将仅含TAN-749A的馏份浓缩、冻干、得到TAN-749A（47.5克）。
将用相同方法得到的三批分离物或者含有TAN-749A、B、C和D的馏份（相当于3450升的初始培养液），一次全部浓缩、将得到的浓缩物（2升）进行色谱分离，用CG-50（NH+ 4、3升）填充。用0.2M盐液洗涤后、用0.5-0.8M盐液（40升）洗提，含有TAN-749B和D的馏份出现在色谱的前半部份、含有TAN-749A和C的馏份出现在后半部份、含有TAN-749A和C的馏份再以活性炭填充柱色谱分离并脱盐。所得洗提液浓缩冻干后，得到含有少量TAN-749C的粉末状的TAN-749A（20克）。
含有TAN-749B和D的馏份再进行色谱分离，用活性炭填充。脱盐、洗提液以CM-Sephadex C-25（Na+型，1升）填充柱色谱分离，以0.2M盐液作洗提剂、将洗提物浓缩，以反相高效液体色谱分离该浓缩物〔流动相：5%甲醇/0.02M磷酸缓冲溶液（PH3.0）〕，得到两个馏分，即：仅含TAN-749B的馏分和含有TAN-749B和D的馏分。将仅含TAN-749B的馏分进行色谱分离，先后用CM-Sephadex和活性炭填充柱，得到TAN-749B（3.05克）。含有TAN-749B和D的馏分被浓缩，然后再进行高效液体色谱分离，将得到的仅含TAN-749D的馏分浓缩，令浓缩物通过用IRA-402〔Cl-型，10毫升〕填充柱，用水洗涤柱子，得到的洗提物和洗涤溶液一起用活性炭填充的色谱柱分离脱盐，得到TAN-749D（15.5毫克）。
上述得到的含有少量TAN-749C的TAN-749A粉末（3克）进行色谱分离，先后用CM-Sephadex，Amberlite    CG-50（Rohm    &    Hass    Co.U.S.A.）和活性炭作填料，以增加TAN-749C含量，将得到的高TAN-749C含量的粉状物，在上述条件下，进行两次高效液体色谱分离来纯化，得到TAN-749C（20.2毫克）。
参考实施例3
将化合物13的二盐酸盐（964毫克）悬浮到二甲基甲酰胺（10毫升）中，用冰冷却该悬浮液的同时，加入三乙胺（480微升），山梨酸（307毫克）、1-羟基苯并***（369毫克）和二环己基碳二酰亚胺（563毫克），所得混合物搅拌1小时，同时用冰冷却。然后，将混合物恢复到室温，再搅拌8小时，过滤反应液，减压下蒸去滤液中的溶剂。加入水（200毫升），将所得溶液的PH值调至2.5后，用乙酸乙酯（100毫升×2）洗涤，将水层的PH值调至5.5后浓缩，进行柱色谱分离，用Diaion    HP-20（50～100目，50毫升）作填料。该浓缩物用水（200毫升）洗涤后，相继用10%的甲醇-水（100毫升），50%的甲醇-水（100毫升）和50%的甲醇-1/200N盐酸（200毫升）作洗提剂进行分馏洗提。每一馏分进行高效液体色谱分离〔流动相：50%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，将显示一个峰的馏分合起来，浓缩，然后将浓缩物冻干，得到化合物3的叔-丁氧基羰基本体的盐酸盐（999毫克）。
旋光度：〔α〕25 D-27.4°（C＝0.50水）
元素分析：（C20H35N5O5·Hcl·0.5H2O）
计算值：C：51.00，H：7.92，N：14.87，Cl：7.53（%）
测定值：C：50.83，H：8.01，N：14.71，Cl：7.57（%）
将化合物3的叔-丁氧基羰基本体的盐酸盐（853毫克）溶解在三氟乙酸（5毫升）中，在空气中于室温下放置30分钟，蒸去溶剂后，用醚处理反应液，得到粉末状物质（1050毫克）。将该粉状物溶于水（70毫升）中，通过Amberlite    IRA-402（Cl型，Rohm    &    Hass    Co.，USA，40毫升）填充柱，然后用水（40毫升）洗涤柱子，将得到的洗提物和洗涤溶液合起来浓缩，然后将浓缩物冻干，得到化合物3的二盐酸盐（725毫克）。这个化合物与从自然界中得到的化合物在物理-化学性质上相同。
实施例1：
将化合物1的二盐酸盐（大约200毫克）溶解在水（20毫升）中，加入碳酸氢钠（0.73克）和苯甲酰氯（0.175毫升），然后在室温下搅拌该溶液，随着反应液中苯甲酰氯的消失和PH值的下降，适当地加入苯甲酰氯和三乙胺，以维持反应液的PH值接近8.3。大约5小时后，用乙酸乙酯（35毫升）将反应液洗涤两次，用2NHcl将其PH值调至2.0，再用乙酸乙酯（30毫升）洗涤3次。用3N的氢氧化钠将洗涤液的PH值调至6.7后，将其浓缩，并用Diaion    HP-20（50～100目，20毫升）填充柱吸附，用水（120毫升）洗涤柱子，然后相继用5%的甲醇水溶液，20%的甲醇水溶液，50%的甲醇水溶液和50%的甲醇-0.008N盐酸（各60毫升）洗提被吸附的浓缩物，并以每份20毫升将洗提物分成若干馏份，每馏分进行高效液体色谱分离〔流动相：50%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，将显示一个峰的馏分合并起来浓缩，然后将浓缩物冻干，得到白色粉末状的化合物5的盐酸盐（167毫克）。
旋光度：〔α〕23 D-40.7°（C＝0.46，水）
元素分析：（C22H31N5O4·Hcl·1.0H2O）
计算值：C：54.60，H：7.08，N：14.47，Cl：7.33（%）
测定值：54.52，H：6.92，N：14.41，Cl：7.66（%）
实施例2：
将化合物1的二盐酸盐（1.25克，纯度83%）溶解在50%的二噁烷-水（50毫升）中，并加入三乙胺（0.5毫升）和BOC-ON（1.1克），得到的混合物在室温下搅拌5.5小时，同时加入三乙胺以保持混合物的PH值近似8.5。用2N的盐酸，将反应液体的PH值调至7.2后，浓缩除去二噁烷。加入水（200毫升），然后浓缩物用乙酸乙酯-***（1∶1，200毫升）洗涤，将有机层分离出来并进一步用水（150毫升）萃取，萃取物与水层合并后浓缩，该浓缩物的PH值调至6.8后，通过Diaion    HP-20（50～100目，70毫升）填充柱，然后相继用水（210毫升）、50%的甲醇-水（210毫升）和50%的甲醇-1/200N盐酸（280毫升）洗提，洗提物以70毫升一份分成若干馏份，每馏分用高效液体色谱进行分析〔流动相：50%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，将显示一个峰的馏分合并起来浓缩，然后将浓缩物冻干，得到化合物6的盐酸盐（834毫克）。
旋光度：〔α〕25 D-23.7°（C＝0.52，水）
元素分析：（C20H35N5O5·Hcl·1.5H2O）
计算值：C：49.12，H：8.04，N：14.32，Cl：7.25（%）
测定值：C：49.08，H：8.07，N：14.44，Cl：7.26（%）
实施例3：
将化合物1的二盐酸盐（776毫克）溶解在3%的碳酸氢钠水溶液中（40毫升），加入苯甲氧甲酰氯（798微升），然后在室温下将溶液搅拌5小时，将反应液体的PH值调至2后，用水（50毫升）稀释，用乙酸乙酯（100毫升×2）洗涤，水层的PH值调至4.5后进行浓缩，然后在用Diaion    HP-20（50～100目，40毫升）填充的柱色谱分离，相继用水（100毫升）和10%的甲醇-水（100毫升）洗涤后，该浓缩物分别用50%的甲醇-水（100毫升）和50%甲醇-1/200N盐酸（150毫升）分馏洗提。用高效液体色谱分析每一馏分〔流动相：60%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，将显示一个峰的馏分合并起来进行浓缩，然后将浓缩物冻干，得到化合物7的盐酸盐（728毫克）。
旋光度：〔α〕22 D-41.7°（C＝0.55，水）
元素分析：（C23H33N5O5·Hcl·0.5H2O）
计算值：C：54.70，H：6.99，N：13.87，Cl：7.02（%）
测定值：C：55.02，H：6.85，N：14.06，Cl：7.29（%）
实施例4：
将化合物1的二盐酸盐（20.0克，纯度接近97%）溶解在水（500毫升）中，加入10%的钯-碳（2.0克），然后，在室温下，在氢气流中将溶液搅拌大约4小时，将反应液过滤除去催化剂，所得滤液浓缩并冻干，得到白色粉末状的化合物8的二盐酸盐（19.0克）。
旋光度：〔α〕23.5 D-5.2°（C＝0.60，水）
元素分析：（C15H31N5O3·2Hcl·1.0H2O）
计算值：C：42.86，H：8.39，N：16.66，Cl：16.87（%）
测定值：C：42.88，H：8.84，N：16.75，Cl：17.26（%）
实施例5：
将化合物2的二盐酸盐（1.04克，纯度94%）溶解在水（100毫升）中，加入10%的钯-碳（104毫克），然后，在室温下，在氢气流中，将溶液搅拌约80分钟，将反应液过滤除去催化剂，滤液浓缩后，通过活性炭（70毫升）填充柱，然后分别用水（350毫升），8%的异丁醇水溶液（500毫升）作为洗涤剂进行洗提，并以每份70毫升将洗提物分成若干馏份。用高效液体色谱分析每馏分〔流动相：25%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，将显示一个峰的馏分合并起来进行浓缩，然后将浓缩物冻干，得到白色粉末状的化合物9的二盐酸盐（899毫克）。
旋光度：〔α〕24 D+28.9°（C＝0.57，水）
元素分析：（C16H33N5O3·2Hcl·0.5H2O）
计算值：C：45.18，H：8.53，N：16.46，Cl：16.67（%）
测定值：C：44.96，H：8.82，N：16.46，Cl：17.10（%）
实施例6：
将化合物8的二盐酸盐（19.3克，纯度80%）溶解在50%的二噁烷-水（400毫升）中，加入三乙胺（7.85毫升）和BOC-ON（13.5克），在室温下将混合物搅拌5小时，同时加三乙胺以保持PH值接近8.5，反应液用2N盐酸调PH值至6.5后，浓缩除去二噁烷，所得浓缩物用水（900毫升）稀释，用乙酸乙酯-***（1∶1，800毫升）洗涤，将有机层分离出来后，再用水（500毫升）萃取，萃取液和水层合起来进行浓缩，将浓缩物的PH值调至5.6后，令其通过DiaionHP-20（50～100目，450毫升）填充柱。然后分别用水（1.35升）、50%的甲醇-水（1.35升）和50%甲醇-1/200N盐酸（1.8升）进行洗提，并以每份450毫升将洗提物分成若干馏份，用高效液体色谱分析每馏分〔流动相：60%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，将显示一个峰的馏份合起来进行浓缩，然后将浓缩物冻干，得到化合物10的盐酸盐（13.4克）。
旋光度：〔α〕25 D-13.3°（C＝0.67，水）
元素分析：（C20H39N5O5·Hcl）
计算值：C：51.55，H：8.65，N：15.03，Cl：7.61（%）
测定值：C：51.22，H：9.06，N：14.82，Cl：7.64（%）
实施例7：
将化合物9的二盐酸盐（700毫克）溶解在50%的二噁烷水溶液（28毫升）中，加入三乙胺（0.28毫升）和BOC-ON（455毫克），然后在室温下，将混合物搅拌大约8小时，同时加入三乙胺以维持其PH值大约为8.8，将反应液浓缩除去二噁烷，浓缩物用水（100毫升）稀释后，用***-己烷（5∶1，100毫升）洗涤两次，将有机层分离出来，用水（150毫升）萃取，萃取液与水层合并，将该混合物的PH值调至7后浓缩。然后用Diaion    HP-20（50～100目，30毫升）吸附，分别用水，20%的甲醇水溶液，50%的甲醇水溶液和50%甲醇-0.005N稀盐酸水溶液（各120毫升）进行洗提，并以每份20毫升将洗提物分成若干馏份，用高效液体色谱分析每馏份〔流动相：60%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，将显示一个峰的馏份合起来浓缩。然后将浓缩物冻干，得到白色粉末状的化合物11的盐酸盐（487毫克）。
旋光度：〔α〕23 D+23.1°（C＝0.38，水）
元素分析：（C21H41N5O5·Hcl·H2O）
计算值：C：51.57，H：8.86，N：14.32，Cl：7.25（%）
测定值：C：51.40，H：9.05，N：14.21，Cl：7.21（%）
实施例8：
将化合物8的二盐酸盐（202毫克）溶解在0.03M磷酸盐缓冲溶液中（PH7.0，100毫升）加入acidovorans假单胞菌属IFO13582的细菌细胞（10克）后、于37℃将溶液摇动15小时。将反应液离心分离，将上层清液的PH值调至7.0后、通过Amberlite CG-50（100-200目，H+型，Rohm & Hass USA、40毫升）填充柱，用水（200毫升）和0.01N盐酸（160毫升）将柱子洗涤后，用0.02N盐酸作洗提剂分馏洗提。用高效液体色谱分析每个馏份〔流动相：30%乙腈/0.01M辛烷磺酸盐-0.02M磷酸溶液（PH3）〕、将那些主要成份为化合物12（即所要产物）的馏份合起来浓缩，然后将浓缩物冻干、得粗粉未状产物（147毫升）。将该粗粉状物溶解在少量水中，让其通过Diaion HP-20（50-100目）填充柱，然后分馏洗提，用高效液体色谱分析每个馏份〔流动相：30%乙腈/0.01M辛烷磺酸酯-0.02M磷酸溶液（PH3）〕。将显示一个峰的馏分合起来浓缩，所得浓缩物冻干后，得到化合物12的三盐酸盐（118毫克）。
旋光度：〔α〕25 D-7.6°（C＝0.45，水）
元素分析：（C9H21N5O2·3Hcl·2H2O）
计算值：C：28.70，H：7.49，N：18.59，Cl：28.23（%）
测定值：C：28.58，H：7.19，N：18.32，Cl：28.41（%）
实施例9：
将化合物10的盐酸盐（10.0克）溶解在0.03M的磷酸盐缓冲溶液中（PH7.0，5.0升），加入acidovorance假单胞菌属细菌细胞（500克）后，在37℃时，将溶液摇动15小时。离心分离反应液，将生成的上层清液的PH值调至7.3后，令其通过用IRC-50（Na+型，1升）填充柱，用水（4升）洗涤柱子后，分别用0.5M的盐溶液（8升）和1.0M的盐溶液（5升）进行分馏洗提。用高效液体色谱分析每一馏分〔流动相：15%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕。将显示一个峰的馏分合并起来，通过碳粉（0.8升）填充柱，用水（2升）洗涤柱子后，用8%异丁醇-水（4升）和8%异丁醇-1/100N盐酸（3升）进行洗提。洗提物浓缩后冻干，得到化合物13的二盐酸盐（6.82克）。
旋光度：〔α〕22 D-1.6°（C＝0.90，水）
元素分析：（C14H29N5O4·2Hcl·0.5H2O）
计算值：C：40.68，H：7.80，N：16.94，Cl：17.15（%）
测定值：C：40.62，H：8.40，N：17.04，Cl：17.76（%）
实施例10：
将化合物11的盐酸盐（400毫克）溶解在0.03M的磷酸盐缓冲溶液（PH7.0，200毫升）中，加入acidovorans假单胞菌属的细菌细胞（18克）后，所得溶液在37℃时摇动25小时。离心反应液，产生的上层清液通过IRC-50（NH+ 4型，30毫升）填充柱，分别用水（100毫升），0.5M的盐溶液（150毫升）和1.0M的盐溶液（100毫升）洗提，并以每份20毫升将洗提液分成若干馏份。用高效液体色谱分析每一馏分〔流动相：15%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕。将显示一个峰的馏分合并起来浓缩，得到的浓缩物通过活性炭（20毫升）填充柱，然后用水（100毫升），8%的异丁醇水溶液（100毫升）洗提，并以每份20毫升将洗提液分成若干馏份。用高效液体色谱分析每馏分〔流动相：15%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，将显示一个峰的馏分合并起来浓缩，然后把所得浓缩物冻干，得到白色粉末状化合物14的二盐酸盐（271毫克）。
旋光度：〔α〕21 D+4.0°（C＝0.55，水）
元素分析：（C15H31N5O4·2Hcl·0.5H2O）
计算值：C：42.16，H：8.02，N：16.39，Cl：16.59（%）
测定值：C：42.23，H：8.61，N：16.33，Cl，16.78（%）
实施例11：
将化合物1的二盐酸盐（50.2克，纯度83%）溶解在2N的盐酸（500毫升）中，在油浴中加热，温度为130℃回流15分钟，回流液被浓缩蒸去盐酸并用水（60毫升）稀释，然后用1N的氢氧化钠水溶液将其PH值调至6.8，并浓缩，然后得到的浓缩物通过Diaion    HP-20（50～100目，10升）填充柱，相继用水（3升）和10%甲醇水溶液（5升）洗提，并以每份1升将洗提物分成若干馏份。用高效液体色谱分析每一馏份〔流动相：20%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕。然后，将显示一个峰的馏分合并起来，浓缩并冻干，得到粉末状化合物15（1.79克）。
旋光度：〔α〕21 D-22.3°（C＝0.52，水）
元素分析：（C12H20N2O4·0.5H2O）
计算值：C：54.33，H：7.98，N：10.56（%）
测定值：C：53.81，H：8.11，N：10.46（%）
实施例12：
将化合物2的二盐酸盐（1.25克，纯度86%）溶解在2N盐酸（125毫升）中，并在油浴中加热，温度为124℃时，回流18小时。然后将反应液冷却到室温，浓缩蒸去盐酸，浓缩物用水稀释后，再用1N的氢氧化钠水溶液将其PH值调至6.8。该稀释溶液浓缩后，通过Diaion    HP-20（50～100目，150毫升）填充柱，相继用水（500毫升），10%的甲醇水溶液，20%的甲醇水溶液和40%的甲醇水溶液（各450毫升）洗提，并以每份150毫升将洗提物分成若干馏份，用高效液体色谱分析每一馏分〔流动相：25%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕。将显示一个峰的馏分合并起来浓缩，然后将浓缩产物冻干，得到白色粉末状的化合物16（449毫克）。
旋光度：〔α〕24 D+84.7°（C＝0.42，水）
元素分析：（C13H22N2O4·1.0H2O）
计算值：C：54.15，H：8.39，N：9.72（%）
测定值：C：54.55，H：8.15，N：9.72（%）
实施例13：
将化合物15（3.4克）溶解在50%的丙酮水溶液（114毫升）中，加入三乙胺（7.35毫升）和BOC-ON（3.92克），然后在室温下，将溶液搅拌大约5小时，浓缩蒸除丙酮后，加入碳酸氢钠（1.2克）将反应液的PH值调至接近8.8。然后用***（100毫升）洗3次。洗过的溶液用1N的盐酸将PH值调至2.0后，用乙酸乙酯（100毫升）萃取4次。得到的萃取物合并起来，用盐溶液（100毫升）洗两次，用无水硫酸钠干燥，然后浓缩至干，得到无色油状物质，该物质从乙酸乙酯-***-己烷体系中结晶出来，得到白色晶体状的化合物17（4.12克）。
熔点：128.5℃
旋光度：〔α〕26 D-26.5°（C＝0.50，甲醇）
元素分析：（C13H28N2O6）
计算值：C：57.29，H：7.92，N：7.86（%）
测定值：C：57.34，H：7.72，N：7.98（%）
实施例14：
将化合物15（600毫克）溶解在水（60毫升）中，加入10%的钯-碳（60毫克），然后在室温下，将该溶液在氢气流中搅拌3.5小时，反应液过滤后，将滤液的PH值调至7.0，再浓缩。得到的浓缩物用柱色谱分离，用Diaion    HP-20（50～100目180ml）填充柱。用水（720毫升）洗涤柱子后，再用15%的甲醇-水（540毫升）和25%的甲醇-水（540毫升）作洗提剂进行分馏洗提。用高效液体色谱分析每一馏分〔流动相：40%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕。将显示一个峰的馏分合并起来浓缩，然后将浓缩物冻干，得到粉末状的化合物18（416毫克）。
旋光度：〔α〕22 D-13.9°（C＝0.51，水）
元素分析：（C12H24N2O4）
计算值：C：55.36，H：9.29，N：10.76（%）
测定值：C：55.22，H：9.20，N：10.87（%）
实施例15：
将化合物17（383毫克）溶解在0.1N的氢氧化钠（10.7毫升）在水（30毫升）中的溶液中，加入10%的钯-碳（40mg），室温下，混合物在氢气气氛下搅拌5小时，反应液过滤后，将滤液的PH值调至7.0，并浓缩。浓缩物用柱色谱分离〔流动相：65%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，用Diaion    HP-20（50～100目，30毫升）填充柱。用水（120毫升）洗涤柱子后，再用10%的甲醇-水（60毫升）和50%的甲醇-水（200毫升）进行分馏洗提。用高效液体色谱分析每一馏分。将显示一个峰的馏分合并起来并浓缩，然后将浓缩物冻干，得到化合物20的钠盐（356毫克）。
旋光度：〔α〕23 D-7.7°（C＝0.48，水）
元素分析：（C17H31N2O6Na）
计算值：C：53.39，H：8.17，N：7.33（%）
测定值：C：53.06，H：8.01，N：7.39（%）
实施例16：
将化合物16（706毫克）溶解在水（70毫升）中，加入10%的钯-碳（70毫克），然后在室温下，将混合物在氢气流中搅拌约1小时，反应液过滤分离出晶体，滤液浓缩后，从水-丙酮体系中结晶，得到白色晶体状的化合物19（647毫克）。
熔点：204℃（分解）
旋光度：〔α〕21 D+31.8°（C＝0.57，水）
元素分析：（C13H26N2O4）
计算值：C：56.91，H：9.55，N：10.21（%）
测定值：C：56.80，H：9.82，N：10.13（%）
实施例17：
将化合物18（320毫克）溶解在3%的碳酸氢钠水溶液（25毫升）中，加入苯甲氧甲酰氯（332微升），然后在室温下，将混合物搅拌6小时，反应液的PH值调至2后，用乙酸乙酯萃取，水洗后，有机层用无水硫酸钠干燥，然后浓缩，向浓缩物中加入***-己烷，得到粉末状的化合物22（389毫克）。
旋光度：〔α〕22 D0°（C＝0.49，甲醇）
元素分析：（C20H30N2O6）
计算值：C：60.90，H：7.67，N：7.10    （%）
测定值：C：60.85，H：7.53，N：7.15    （%）
实施例18：
将化合物19（468毫克）溶解在50%的丙酮水溶液（16毫升）中，加入三乙胺（0.95毫升）和BOC-ON（504毫克），然后在室温下，将混合物搅拌约3小时，浓缩蒸除丙酮和三乙胺后，加入碳酸氢钠（160毫升）和水（20毫升），将反应液的PH值调至8.4，该稀释溶液用***（30毫升）洗涤3次，用2N的盐酸将其PH值调至2.2，然后用乙酸乙酯（40毫升）萃取3遍。将乙酸乙酯层合并，用饱和盐溶液（20毫升）洗涤2次，用无水硫酸钠脱盐，然后浓缩至无水，得到无色的油状物。然后该物再从***-己烷中结晶，得到白色晶体状的化合物21（423毫克）。
熔点：102～103℃
旋光度：〔α〕23 D+36.0°（C＝0.45，甲醇）
元素分析：（C18H34N2O6）
计算值：C：57.73，H：9.15，N：7.48（%）
测定值：C：57.81，H：9.21，N：7.47（%）
实施例19：
将化合物1的二盐酸盐（1.94克）溶解在2N的盐酸（193毫升）中，加热下回流6小时，冷却后，用氯仿（200毫升）将反应液洗3次，浓缩蒸去盐酸，再用水（55毫升）稀释。稀释溶液通过Dowex 50W-X2（H+型，50～100目，100毫升）填充柱，用水（300毫升）、0.5N的盐酸，0.8N的盐酸，1.0N的盐酸，1.2N的盐酸和1.5N的盐酸（各400毫升）洗提，并以每份100毫升将洗提物分成若干馏份。用薄层色谱分析每一馏分。然后将含有所需化合物的馏分合并起来并浓缩，得到的浓缩物用水稀释至30毫升，再通过Dowex 50W-X2（H+型，50～100目，30毫升）填充柱，用0.8N的盐酸，0.9N的盐酸和1.0N的盐酸（各150毫升）洗提流出物，并以每份30毫升将洗提物分成若干馏份。用上述方法分析每一馏分。将显示一个点的馏分合并起来并浓缩，然后冻干，得到粉末状的化合物23的二盐酸盐（301毫克）。
旋光度：〔α〕25 D-18.3°（C＝0.85，水）
元素分析：（C6H14N2O3·2Hcl）
计算值：C：30.65，H：6.86，N：11.92，Cl：30.16（%）
测定值：C：30.30，H：7.13，N：12.07，Cl：30.57（%）
实施例20：
将化合物16（310毫克）溶解在2N的盐酸（31毫升）中，加热下回流6小时，冷却后，用氯仿（40毫升）将反应液洗涤3次，并浓缩蒸去盐酸，浓缩物用水（18毫升）稀释后，通过Dowex 50W-X2（H+型，50～100目，17毫升）填充柱，相继用水（50毫升），0.2%的氨水溶液（50毫升），0.3%的氨水溶液（60毫升）和0.4%的氨水溶液（60毫升）洗提，并以每份17毫升将洗提物分成若干馏份，用薄层色谱分析每一馏分，将显示一个点的馏分合并起来，浓缩后冻干，得到粉末状的化合物24（174毫克）。取38毫克的该粉状物溶于水（3.8毫升）中，用Dowex 50W-X2（H+型，50～100目，5毫升）吸附，相继用水（15毫升）、0.5N的盐酸，0.8N的盐酸、0.9N的盐酸和1.0N的盐酸（各20毫升）洗提，并以每份5毫升将洗提物分成若干馏份，用薄层色谱分析每一馏分，将显示一个点的馏分合并起来，浓缩后冻干，得到化合物24的二盐酸盐（39毫克）。
旋光度：〔α〕23 D-2.7°（C＝0.58，水）
元素分析：（C7H16N2O3·2Hcl）
计算值：C：34.02，H：6.53，N：11.34，Cl：28.69（%）
测定值：C：33.81，H：7.81，N：11.20，Cl：29.52（%）
实施例21：
将化合物20的钠盐（280毫克）溶解在0.03M的磷酸盐缓冲溶液（PH7.0，140毫升）中，加入acidovorans假单胞菌属的细菌细胞（14克）。然后在37℃下，将混合物摇动20小时，离心反应液，将得到的上层清液的PH值调至7.0后，将其浓缩。浓缩物进行柱色谱分离，用Diaion    HP-20（50～100目，140毫升）填充柱，相继用水（900毫升）和5%的甲醇-水（500毫升）洗提。用高效液体色谱分析每一馏分〔流动相：25%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕。将显示一个峰的馏分合并起来，浓缩后冻干，得到白色粉末状的化合物25（145毫克）。
旋光度：〔α〕23 D+10.3°（C＝0.48，水）
元素分析：（C11H22N2O5）
计算值：C：50.37，H：8.45，N：10.68（%）
测定值：C：49.91，H：8.54，N：10.57（%）
实施例22：
将化合物21（390毫克）悬浮于0.03M的磷酸盐缓冲溶液（PH7.0，200毫升）中，加入acidovorans假单胞菌属的细菌细胞（40克），然后在37℃下，将混合物摇动18小时，离心反应液，将得到的上层清液的PH值调至7.0后，将其浓缩。浓缩物进行柱色谱分离，用Diaion    HP-20（50～100目，140毫升）填充柱，然后相继用水（700毫升）和5%的甲醇-水（700毫升）洗提，并以每份140毫升将洗提物分成若干馏份。用高效液体色谱分析每一馏分〔流动相：25%甲醇/0.01M磷酸盐溶液（PH6.3）〕。将显示一个峰的馏分合并起来，浓缩后冻干，得到白色粉末状的化合物26（94毫克）。
旋光度：〔α〕21.5 D+19.3°（C＝0.45，水）
元素分析：（C12H24N2O5·0.5H2O）
计算值：C：50.51，H：8.83，N：9.82（%）
测定值：C：50.53，H：8.71，N：9.82（%）
实施例23：
将化合物6的盐酸盐（9.5毫克）溶解在1N的氢氧化钠水溶液（0.95毫升）中，在室温下搅拌60小时，反应完成后，将反应液稀释，并用高效液体色谱分析〔流动相：60%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕，发现生成了3.8毫克的化合物17。
实施例24：
将化合物10的盐酸盐（111毫克）溶解在水（3.7毫升）中，加入氢氧化钠（188毫克），然后在60℃下，将混合物搅拌大约16小时，用盐酸将反应液的PH值调至6.7后，用水稀释至13毫升。用高效液体色谱〔流动相：70%甲醇/0.01M磷酸溶液（PH3）〕进行分析及定量测定：发现分别生成了9毫克的化合物25和32毫克的化合物20。

Claims (9)

1、制备由下式表示的化合物或其盐的方法
Figure 86108770_IMG2
式中R1是氢、已酰基或山梨酰基，R2是氢或甲基，而R3是氨基(游离的或者加以保护的)，但需当R1和R2都是氢、R3才是加以保护的氨基，该方法包括使由下式代表的化合物或其盐进行水解反应
Figure 86108770_IMG3
式中R1′是已酰基或山梨酰基，R2和R3定义同上。
2、根据权利要求1的方法，其中水解于酸存在下进行。
3、根据权利要求2的方法，其中酸是盐酸。
4、根据权利要求1的方法，其中水解是在碱存在下进行。
5、根据权利要求4的方法，其中碱是氢氧化钠。
6、制备由下式表示的化合物或其盐的方法
Figure 86108770_IMG4
式中R1″是氢或己酰基、R2是氢或甲基、R3是加以保护的或游离的氨基、而R4是羟基或2-脒基-乙氨基、需当R1″和R2都是氢和R3是氨基时、R4方能为2-脒基-乙氨基，该方法包括使由下式表示的化合物或其盐进行催化还原反应，必要时再进行脱酰化反应，
Figure 86108770_IMG5
式中R2、R3和R4定义同上，而R5、R6各是氢或甲基，但R5和R6不能同时是氢或甲基。
7、根据权利要求6的方法，其中催化还原反应通过使用钯-碳进行。
8、根据权利要求6的方法，其中使用脱酰酶来进行脱酰化反应。
9、根据权利要求8的方法，其中脱酰酶来自acidoVorans假单胞菌属IFO13582。
CN86108770A 1985-12-27 1986-12-09 抗菌素tan-749化合物的制备方法 Expired CN1012499B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP29867185 1985-12-27
JP298671/85 1985-12-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN86108770A true CN86108770A (zh) 1987-08-05
CN1012499B CN1012499B (zh) 1991-05-01

Family

ID=17862758

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN86108770A Expired CN1012499B (zh) 1985-12-27 1986-12-09 抗菌素tan-749化合物的制备方法

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP0229313B1 (zh)
JP (1) JPH0816087B2 (zh)
KR (1) KR870006192A (zh)
CN (1) CN1012499B (zh)
AT (1) ATE58129T1 (zh)
CA (1) CA1337182C (zh)
DE (1) DE3675524D1 (zh)
DK (1) DK585986A (zh)
ES (1) ES2037004T3 (zh)
HU (1) HU198215B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105566149A (zh) * 2016-03-02 2016-05-11 郑州大学 具有抗菌活性的查尔酮阳离子抗菌肽模拟物及其制备方法

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4906659A (en) * 1985-06-18 1990-03-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic tan-749, its derivatives, production and use thereof
JP2605762B2 (ja) * 1986-12-10 1997-04-30 武田薬品工業株式会社 δ−ハイドロキシ−β−リジン誘導体およびその製造法
IE20010533A1 (en) * 1990-11-20 2003-03-05 Abbott Lab Intermediates for preparing retroviral protease inhibiting compounds
CA2859371C (en) 2011-12-15 2017-11-14 Northrop Grumman Guidance And Electronics Company, Inc. System and method for detection of rf signal spoofing

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105566149A (zh) * 2016-03-02 2016-05-11 郑州大学 具有抗菌活性的查尔酮阳离子抗菌肽模拟物及其制备方法
CN105566149B (zh) * 2016-03-02 2017-05-24 郑州大学 具有抗菌活性的查尔酮阳离子抗菌肽模拟物及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP0229313A3 (en) 1988-05-18
KR870006192A (ko) 1987-07-09
ES2037004T3 (es) 1993-06-16
EP0229313A2 (en) 1987-07-22
CN1012499B (zh) 1991-05-01
HUT44268A (en) 1988-02-29
JPS62228047A (ja) 1987-10-06
JPH0816087B2 (ja) 1996-02-21
ATE58129T1 (de) 1990-11-15
EP0229313B1 (en) 1990-11-07
DE3675524D1 (de) 1990-12-13
DK585986A (da) 1987-06-28
HU198215B (en) 1989-08-28
DK585986D0 (da) 1986-12-05
CA1337182C (en) 1995-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1040054A (zh) 具有生物活性的新化合物及其制备方法
CN1061095C (zh) 糖肽抗生素的制备方法
CN1080172A (zh) 纯化的四氢嘧啶衍生物及包含它们的药用组合物
CN1044299A (zh) 抗菌素bu-3608的丝氨酸类似物
CN1032426C (zh) 糖肽回收工艺
CN87106876A (zh) 新抗生素
CN1288134C (zh) 抗菌剂木替灵
CN1165547C (zh) 与阿卡加定相关的新型羊毛硫抗生素及其制备方法和用途
CN1058294C (zh) 路斯绰达克星化合物的制备方法
CN86108770A (zh) 抗菌素tan—749化合物及其制备
CN1045976A (zh) 新的取代的替考拉宁的烷基酰胺衍生物
CN1043941A (zh) 34-脱(n-乙酰葡萄糖胺基)-34-脱氧-太可普劳宁的c63酰胺衍生物
CN1013120B (zh) A-21978c衍生物生产方法改进
CN1028997C (zh) 新蒽环型药物衍生物或其药学上允许的酸加成盐的制法
CN1194006A (zh) 利用双加氧酶生物转化与化学步骤相结合的茚向无任何立体异构体的(is)－氨基－(2r)－茚满醇的转化
CN86105469A (zh) 肽抗生素
CN1025032C (zh) 制备2-甲氧基甲基-青霉烯衍生物的方法
CN1030470C (zh) 新抗生素金核霉素的制备方法
CN1043422C (zh) 多羟基环戊烷衍生物的制备方法
CN101045745A (zh) 三肽囊素的规模化制备方法及作为禽流感疫苗佐剂的应用
CN1203055C (zh) 治疗或预防细菌感染的方法和组合物
CN1066772C (zh) 通过卤过氧化物酶生物转化与化学步骤结合将茚定量转化为(1s,2r)-茚氧化物和(1s,2r)-二氢茚二醇的方法
CN1325453A (zh) 万古烯霉素、其生产方法及其作为药物的用途
CN1040593A (zh) 具有较低骨髓毒性的丝裂霉素衍生物及其制备方法和应用
CN1245418C (zh) 一组新的合成抗菌肽及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C13 Decision
GR02 Examined patent application
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C19 Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee