CN2798089Y - 一种用于膜片钳胞内透析的装置 - Google Patents

Abstract

本实用新型一种用于膜片钳胞内透析的装置的目的是：提供一种取材方便、操作简便、结果可靠的膜片钳玻璃微电极内微插管胞内透析装置。本实用新型一种用于膜片钳胞内透析的装置是由微电极夹持器等构成；其特征在于在微电极夹持器的负压侧管上方，***密封固定一外径2mm细钢管。将拉制出的微插管末端经塑料导管沿45°细钢管***微电极夹持器的电极尖端，其大头口端经三通阈连接1ml注射器。本实用新型的有益效果是：在不破坏细胞封接的情况下，能方便、稳定、可靠的进行胞内透析，实验效果及成功率较二次钳压技术明显提高。

Description

一种用于膜片钳胞内透析的装置

技术领域

本实用新型一种用于膜片钳胞内透析的装置涉及一种膜片钳实验中不破坏封接的状态下实现胞内透析的装置。

背景技术

膜片钳技术创建于上世纪70年代末，此项技术使人们得以从分子水平对膜离子通道及受体进行深入的研究，因而很快得到普遍的应用和推广。用膜片钳技术对膜蛋白，如离子通道的性质和动力学、受体的功能等能作深入的分析。为了实现人为改变细胞内成份，在全细胞模式下利用膜片钳技术手段达到研究胞内信号转导途径、机制及有关功能调制的目的。人们在膜片钳技术的基础上，发展出两种胞内灌流或透析(intracellular perfusion or dialysis)的方法：一是玻璃微电极内插管法；二是二次钳压技术(repatch technique)。应用二次钳压技术时，虽然也可在同一细胞上比较胞内有或无药物存在时对通道或受体功能调制的影响，但由于二次钳压实验操作难度大、成功率低，且即使二次钳压成功，前后二次封接(seal)记录的通道电流幅值往往不一致，常导致二次钳压技术在实际应用中效果不理想。膜片钳玻璃微电极内微插管进行胞内灌流技术，早在上世纪90年代初就已被提出，但这一方法或者因为微电极夹持器设计复杂，或者因为抽液和注药的附加控制装置操作不便，而未能得到推广和被普遍接受，且国内没有此类产品。

发明内容

本实用新型一种用于膜片钳胞内透析的装置的目的是：提供一种取材方便、操作简便、结果可靠的膜片钳玻璃微电极内微插管胞内透析装置。本实用新型一种用于膜片钳胞内透析的装置是由微电极夹持器等构成；其特征在于在微电极夹持器的负压侧管上方用2mm钻头钻一45°侧孔，***密封固定一外径2mm细钢管。取通用的20μl微量移液器移液管头加热手工拉制50cm长的外径约100μm内径约50μm的微插管。将拉制出的微插管末端经塑料导管沿45°细钢管***微电极夹持器的电极尖端，所述微插管的另一端可以经三通阈连接lml注射器，改变电极内液成份，实现胞内透析。本实用新型的有益效果是：在不破坏细胞封接的情况下，能方便、稳定、可靠的进行胞内透析，实验效果及成功率较二次钳压技术明显提高，结构及成本较国外的胞内灌流装置大大降低，操作更简便。

附图说明

图1为本实用新型的剖面结构示意图。

具体实施方式

根据图1所示，膜片钳微电极夹持器的改装：取通常所用膜片钳微电极夹持器(patch clamp pipette holder)，在抽吸负压的侧管1(与夹持器纵轴呈90°角)的上方，用2mm钻头呈45°角钻通夹持器管壁直通中央管腔。***一外径为2mm细钢管2(可利用一段20号注射针头，约2cm长)，密封、固定，以备***微插管(microcatheter)用。

微插管的拉制：***玻璃微电极内的微插管，外径约100μm，内径约50μm。本实验室利用微量移液管(取液器，adjustable pipetter)通用的20μl移液管头(universal pipette tip)，在酒精灯火焰上加热手工拉制而成。选用移液管头是由于：(1)其延展性很强，可以很容易拉出长达1米以上通畅的微插管(50cm长就能满足使用要求)；(2)20μl的移液管头的大头口端通过三通7或直接与注射器嘴连接配套，便于抽吸玻璃微电极内液及药物灌注；(3)移液管头价格低廉，且属实验室常备耗材，因而是一种很理想的材料。拉好后可用装有蒸馏水的注射器注水检查是否通畅。

用塑料导管3加固微插管4：拉制好的微插管细长而柔软，为了便于微插管***电极夹持器和固定起见，应在45°侧管2内先***一塑料导管3(此塑料导管外径等于或略小于20号注射针头的内径，可用硬脊膜外麻醉导管)，具体操作如下：(1)将塑料导管轻轻***侧管内，拐过135°角后继续送入3～5mm，在侧管的细钢管外，以一段约1.5cm长的细硅胶管(如小儿头皮针管)将细钢管和塑料导管之间密封；(2)在塑料导管的另一端也套上一段约1.5cm长的硅胶管，将拉制好的微插管4顺着塑料导管腔3缓慢送入，微插管4前端经过135°侧管转角而与Ag-AgCl电极丝5平行由夹持器出口端6出来；(3)将微插管前端多余的部分剪去，使微插管末端4比Ag-AgCl电极末端5约长出5mm。

从玻璃微电极内抽出内液及灌注药液：微插管***玻璃微电极内时，应注意尽可能地插到微电极的最尖端，从而能尽量完全地抽吸电极内液，以减少对所灌注药物的稀释。需注意的是：(1)在将玻璃微电极固定在电极夹持器之前，应先行将微插管注满内液；(2)细胞封接后当注药时，须先将负压吸管的三通打开与大气相通，以免在抽出内液及灌注药液时玻璃微电极腔内压急剧变化，从而导致已建立的细胞封接遭到破坏；(3)抽出内液及灌注药液时应缓慢而匀速，切忌过快过猛。

Claims (3)

1、本实用新型一种用于膜片钳胞内透析的装置是由微电极夹持器等构成；其特征在于在微电极夹持器的负压侧管上方45°侧孔***密封固定一外径2mm细钢管，将微插管末端沿45°细钢管***微电极夹持器的电极尖端，所述微插管的另一端可以经三通阈连接1ml注射器。

2、根据权利要求1所述一种用于膜片钳胞内透析的装置的微插管末端；其特征在于，微插管末端可以是20μl移液管的加热拉长后的管头。

3、根据权利要求1所述一种用于膜片钳胞内透析的装置的微电极夹持器的侧管；其特征在于，可以在侧管上方45°细钢管内***一个外径等于或略小于20号注射针头内径的塑料导管，所述微插管***塑料导管腔。

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