CN219201614U

CN219201614U - 一种大肠杆菌检测板

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Publication number: CN219201614U
Application number: CN202222558982.9U
Authority: CN
Inventors: 刘孟璐; 米朝铖; 陈延熙
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2022-09-27
Filing date: 2022-09-27
Publication date: 2023-06-16
Anticipated expiration: 2032-09-27

Abstract

一种大肠杆菌检测板，所属检测技术领域，检测板包括下板和上板，下板包括底板、纸膜、隔板和封膜，底板、纸膜、隔板和封膜从下至上依次叠放并密封；上板与下板相扣合，下板的凹槽分为若干组区域，每组区域扣合一个上板。下板用于一体承载检测抗体和捕获抗体，并用纸膜隔离，上板用于刺穿切割纸膜并承装水样和底物，使各试剂混合反应，得到可测量信号。本检测板不需要现场处理，无需封堵缓冲液封堵和洗涤后再添加检测抗体，大幅节省处理步骤，检测方便快捷。本检测板减少了繁琐的检测工序，也无需各类复杂庞大的水样检测设备，更有利于非专业检测人员即时使用，适用于公共浴室、游泳馆、水上乐园和任何对水源检测有需求的现场即时检测。

Description

一种大肠杆菌检测板

技术领域

本实用新型属于检测技术领域，具体涉及一种大肠杆菌用的检测板。

背景技术

大肠杆菌指标是水质健康的重要指标之一，目前，大肠杆菌检测方式有三种：(1)传统检测方法；(2)新型检测方法；(3)微流控芯片。

(1)传统检测方法是采用多管发酵法，通过观察产酸产气情况以及平板检测判断有无相应菌种检出，菌落总数则采用培养皿培养直接用眼睛观察或用放大镜检查，得到相应结果。传统检测方法耗时长，复杂，且要在实验室进行，无法进行现场快速分析和即时检测。

(2)新型检测方法主要为酶联免疫吸附技术(ELISA)，是利用抗原抗体能够特异结合的特性，使之产生颜色反应而进行分析，可以特异性的检测大肠杆菌。但是目前ELISA技术在大肠杆菌检测方面的应用尚停留在实验室阶段，如何将ELISA技术走出实验室，走进水质检测的现场，并使其智能化，更好的服务于人民，服务于社会，具有时代性意义。

(3)微流控芯片是把各种生化组分的制备，反应过程，分离和检测等基本过程集中到一块的芯片板上，其具有小型化，高通量和自动化的优点。现在已经广泛应用于医疗，食品安全检测，环境监测等领域。但目前微流控芯片法针对大肠杆菌的检测还需要进行现场的芯片反应区处理，步骤还是比较复杂，例如需要事先将芯片反应区的捕获抗体用封堵缓冲液(牛血清白蛋白)封堵，防止非特异性吸附；在现场检测时需要洗涤除去封堵缓冲液，再将检测抗体(HRP-2E3)放入反应区中，进行反应产生可测量的信号。该芯片板就是板面设置若干个平面或槽面的芯片反应区，如图8所示，该芯片板检测步骤操作还是比较麻烦，不方便非专业人员的现场快速检测应用。

实用新型内容

针对现有微流控芯片板检测技术在现场和即时检测大肠杆菌中还存在处理繁琐，不方便非专业人员的现场快速检测应用的问题，本实用新型提供一种大肠杆菌检测板，检测板设置有下板和上板两部分，下板用于一体承载检测抗体和捕获抗体，并用纸膜隔离，上板用于刺穿切割纸膜并承装水样和底物，使各试剂混合反应，得到可测量信号。本检测板不需要现场处理，无需封堵缓冲液封堵和洗涤后再添加检测抗体，大幅节省处理步骤，检测方便快捷。

其具体技术方案如下：

一种大肠杆菌检测板，检测板包括下板和上板，下板包括底板、纸膜、隔板和封膜，底板、纸膜、隔板和封膜从下至上依次叠放并密封。

上述技术方案中，底板设置有若干个凹槽，用于承装检测抗体试剂。

上述技术方案中，底板为纸基材质，凹槽内表面涂有防水层。

上述技术方案中，底板的上表面由纸膜密封，纸膜的下表面与凹槽对应部分涂有防水层；纸膜的上表面为吸水面，用于吸附并承载捕获抗体试剂。

上述技术方案中，隔板为纸基材质，隔板设置有若干个通孔，通孔的数量、位置和孔径与凹槽的数量、位置和孔径相同；通孔的孔内壁涂有防水层；隔板封压于纸膜的上表面。

上述技术方案中，封膜封堵隔板的上表面，封膜为防水膜。

上述技术方案中，上板设置有若干个加液针筒；加液针筒的外径小于或等于通孔的孔径。

上述技术方案中，上板与下板相扣合，下板的凹槽分为若干组区域，每组区域扣合一个上板。

上述技术方案中，当进行现场检测时，取下封膜，上板扣合于下板，加液针筒的筒壁刺穿并切割纸膜，切下的纸膜形成圆片落入凹槽中，圆片的上表面即为芯片反应区；加液针筒的下边缘贴合凹槽的槽低。

上述一种大肠杆菌检测板的制备和检测方式为：预先生产大肠杆菌检测板的各部件，将检测抗体试剂加入至下板的凹槽中，然后用纸膜封堵，密封检测抗体试剂；再封压隔板，此时隔板的通孔与纸膜的上表面形成一个二层槽，向二层槽内加入捕获抗体试剂，捕获抗体试剂被纸膜的上表面吸附；最后将隔板的上表面用封膜密封，隔离捕获抗体试剂，防止非特异性吸附。下板和上板分离储运。

在进行现场检测时，先撕揭掉封膜，然后使加液针筒对准通孔，将加液针筒***下板的凹槽内，直至凹槽底部；此时，加液针筒的筒壁刺穿并切割纸膜，切下的纸膜形成圆片落入凹槽中，并浸入检测抗体试剂中，圆片的上表面即为芯片反应区。之后依次加入水样和底物TMB，底物TMB用于促进酶-底物反应，产生可测量的信号；最后将圆片取出，根据芯片反应区的显色状态即可拍照输入计算机分析结果。

本实用新型的一种大肠杆菌检测板，与现有技术相比，有益效果为：

一、现有微流控芯片的制备材料多为硅基材料，硅材料的价格昂贵制作成本高，加工技术要求严格，本实用新型的底板和纸膜均采用纸载体，纯纤维素纸因其亲水性强、生物兼容性好、脆性低、有毛细作用等特性，其亲水表面含有大量羟基，更利于修饰或引入其他分子，检测显色效果更好，且材料成本低。

二、本实用新型检测板设计双层载体，能够节省封堵缓冲液的应用，也不用现场清洗以及稀释添加检测抗体试剂，减少了繁琐的检测工序，也无需各类复杂庞大的水样检测设备，更有利于非专业检测人员即时使用，易被公共浴室、游泳馆、水上乐园和任何对水源检测有需求的经营者青睐。

三、扣合上板后，直接滴入待测水样品和底物TMB，等待一段时间后并拍照上传经过后台分析得知到样品定性定量的数据结果，方便可靠。

四、经过实验测试和初步市场测试，一次完整的检测过程平均耗时为3-5分钟，远远比传统检测方法动辄几小时甚至是以天为单位的检测时间短，极大的缩短了检测时长，增加了检测效率。

五、本实用新型检测板的上板可反复使用，节省成本。

六、本实用新型检测板的下板，环境友好无污染，具有良好的生物相容性和可降解性，不会在使用后增加环境压力。

附图说明

图1为本实用新型实施例的一种大肠杆菌检测板的下板俯视图；

图2为图1中A处正视截面图；

图3为本实用新型实施例的一种大肠杆菌检测板的上板俯视图；

图4为本实用新型实施例的一种大肠杆菌检测板的上板B-B处正视截面图；

图5为本实用新型实施例的一种大肠杆菌检测板的上板扣合于下板的俯视图；

图6为本实用新型实施例的一种大肠杆菌检测板在检测时撕揭掉封膜后的示意图；

图7为本实用新型实施例的一种大肠杆菌检测板在检测时上板***扣合于下板后的示意图，其中切割后的纸膜落入凹槽中；

图1-7中，1-下板，1.1-底板，1.11-凹槽，1.2-纸膜，1.3-隔板，1.31-通孔，1.4-封膜；2-上板，2.1-加液针筒。

图8为现有技术打印技术生产的芯片板。

具体实施方式

下面结合具体实施案例和附图1-7对本实用新型作进一步说明，但本实用新型并不局限于这些实施例。

实施例1

一种大肠杆菌检测板，如图1-5所示，检测板包括下板1和上板2，下板1包括底板1.1、纸膜1.2、隔板1.3和封膜1.4，底板1.1、纸膜1.2、隔板1.3和封膜1.4从下至上依次叠放并密封。上板2与下板1相扣合，下板1的凹槽1.11分为8组区域，每组区域有12个凹槽1.11，共96个凹槽1.11，每组区域扣合一个上板2。

其中，底板1.1为纸基材质，凹槽1.11内表面涂有防水层，凹槽1.11用于承装检测抗体试剂。底板1.1的上表面由纸膜1.2密封，纸膜1.2的下表面与凹槽1.11对应部分涂有防水层；纸膜1.2的上表面为吸水面，用于吸附并承载捕获抗体试剂。

其中，隔板1.3为纸基材质，隔板1.3设置有96个通孔1.31，通孔1.31的位置和孔径与凹槽1.11的位置和孔径相同；通孔1.31的孔内壁涂有防水层；隔板1.3封压于纸膜1.2的上表面。封膜1.4封堵隔板1.3的上表面，封膜1.4为防水膜。

每个上板2设置有12个加液针筒2.1，共使用8个上板2；加液针筒2.1的外径小于或等于通孔1.31的孔径。当进行现场检测时，取下封膜1.4，上板2扣合于下板1，加液针筒2.1的筒壁刺穿并切割纸膜1.2，切下的纸膜1.2形成圆片落入凹槽1.11中，圆片的上表面即为芯片反应区；加液针筒2.1的下边缘贴合凹槽1.11的槽低。

本实施例的大肠杆菌检测板的制备和检测方式为：预先生产大肠杆菌检测板的各部件，将检测抗体试剂加入至凹槽1.11中，然后用纸膜1.2封堵，密封检测抗体试剂；再封压隔板1.3，此时隔板1.3的通孔1.31与纸膜1.2的上表面形成一个二层槽，向二层槽内加入捕获抗体试剂，捕获抗体试剂被纸膜1.2的上表面吸附；最后将隔板1.3的上表面用封膜1.4密封，隔离捕获抗体试剂，防止非特异性吸附。下板1和上板2分离储运。在进行现场检测时，先撕揭掉封膜1.4，如图6所示，然后使加液针筒2.1对准通孔1.31，将加液针筒2.1***下板1的凹槽1.11内，直至凹槽底部；此时，加液针筒2.1的筒壁刺穿并切割纸膜1.2，切下的纸膜1.2形成圆片落入凹槽1.11中，并浸入检测抗体试剂中，圆片的上表面即为芯片反应区，如图7所示。之后依次加入水样和底物TMB，底物TMB用于促进酶-底物反应，产生可测量的信号；最后将圆片取出，根据芯片反应区的显色状态即可拍照输入计算机分析结果。

本实施例的大肠杆菌检测板为96孔板，每个凹槽中加入5μl的检测抗体(HRP-2E3，8ng/ml)，每个二层槽内加5μl捕获抗体-2G5(50ng/ml)，固定在纸膜上；***上板后，向加液针筒内加入少量待测水样，再加5μl底物TMB以促进酶-底物反应，在黑暗中反应3-5分钟，产生可测量的信号，最后将显色结果拍照上传后台计算机经ImageJ计算即可分析结果。

Claims

1.一种大肠杆菌检测板，其特征在于，检测板包括下板(1)和上板(2)，所述下板(1)包括底板(1.1)、纸膜(1.2)、隔板(1.3)和封膜(1.4)，所述底板(1.1)、纸膜(1.2)、隔板(1.3)和封膜(1.4)从下至上依次叠放并密封。

2.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌检测板，其特征在于，所述底板(1.1)设置有若干个凹槽(1.11)，用于承装检测抗体试剂。

3.根据权利要求2所述的一种大肠杆菌检测板，其特征在于，所述底板(1.1)为纸基材质，所述凹槽(1.11)内表面涂有防水层。

4.根据权利要求3所述的一种大肠杆菌检测板，其特征在于，所述底板(1.1)的上表面由纸膜(1.2)密封，所述纸膜(1.2)的下表面与凹槽(1.11)对应部分涂有防水层；所述纸膜(1.2)的上表面为吸水面，用于吸附并承载捕获抗体试剂。

5.根据权利要求4所述的一种大肠杆菌检测板，其特征在于，所述隔板(1.3)为纸基材质，隔板(1.3)设置有若干个通孔(1.31)，所述通孔(1.31)的数量、位置和孔径与凹槽(1.11)的数量、位置和孔径相同；所述通孔(1.31)的孔内壁涂有防水层；所述隔板(1.3)封压于纸膜(1.2)的上表面。

6.根据权利要求5所述的一种大肠杆菌检测板，其特征在于，所述封膜(1.4)封堵隔板(1.3)的上表面，所述封膜(1.4)为防水膜。

7.根据权利要求5所述的一种大肠杆菌检测板，其特征在于，所述上板(2)设置有若干个加液针筒(2.1)；所述加液针筒(2.1)的外径小于或等于通孔(1.31)的孔径。

8.根据权利要求7所述的一种大肠杆菌检测板，其特征在于，所述上板(2)与下板(1)相扣合，所述下板(1)的凹槽(1.11)分为若干组区域，每组区域扣合一个上板(2)。

9.根据权利要求8所述的一种大肠杆菌检测板，其特征在于，当进行现场检测时，取下封膜(1.4)，上板(2)扣合于下板(1)，加液针筒(2.1)的筒壁刺穿并切割纸膜(1.2)，切下的纸膜(1.2)形成圆片落入凹槽(1.11)中，圆片的上表面即为芯片反应区；加液针筒(2.1)的下边缘贴合凹槽(1.11)的槽低。