CN204369906U - 一种提取及保存核酸的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供了一种用于提取及保存核酸的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：一个或多个储存容器，所述的储存容器中包括：核酸结合相，所述的核酸结合相用于吸附和/或结合待纯化的核酸；裂解-结合液，所述的裂解-结合液用于裂解细胞膜，释放待纯化核酸，并促使待纯化的核酸结合于所述的核酸结合相；且所述的核酸结合相具有：(1)内核；(2)位于所述内核上的氧化硅层；(3)位于所述氧化硅层表面的羧基修饰层。本实用新型的试剂盒可以用于非实验室条件下的采样和核酸提取，以及核酸样品保存。
Description
技术领域
本实用新型涉及生物检测领域，具体地，本实用新型提供了一种能够用于提取和保存核酸的试剂盒。
背景技术
基因是所有生物体内的信息贮存物质，这些信息包括生物体的基本特征、生物体的组成成分和组成方式等。由于生物体的生命活动是组成生物体的各种物质相互作用的结果，因此，基因信息也包含了生物体生命活动形式和方式的信息。基因检测就是通过实验显示出基因的信息，通过基因检测可进行引起疾病的微生物种类分析、身份鉴定、临床病理诊断、生理病理特征分析。
基因检测的质量和水平主要由样品处理、信息量及分析技术来决定，检测的样品可以是血液、唾液、口腔黏膜、体液、头发根部、组织等，对这些生物样本进行样本处理分离核酸是分子生物学、医学检验中的必经步骤。
采集的血液或其他生物样本通常会送到实验室中进行核酸提取，由于这些生物样本是潜在的病毒及细菌感染源，转运或处理这些生物样品给操作人员生命健康带来威胁；同时，样本通常需要在低温存储及运输，不正确的生物样本采集、转运及处理过程常常导致核酸物质降解、从而导致假阴性结果。
磁珠核酸纯化方法将DNA结合到氧化硅等磁性载体上，而杂质被选择性洗脱掉正在实验室中得到了广泛应用。然而，现有的磁珠核酸分离技术仍存在一些不足：如复杂的样品处理过程：需进行蛋白酶消化过程、需要温度控制等，；这些问题对快速核酸样本处理带来不利影响，特别是阻碍了其在大量核酸样本安全采集及检测中的应用。
因此，需要一种能结合、保存及转运生物样本中核酸，同时安全便捷地进行后续基因检测的方法和试剂。
实用新型内容
本实用新型的目的是提供一种能结合、保存及转运生物样本中核酸，同时安全便捷地进行后续基因检测的核酸提取试剂盒。
本实用新型的第一方面，提供了一种用于提取及保存核酸的试剂盒，所述的试剂盒包括：
一个或多个储存容器，所述的储存容器中包括：
核酸结合相，所述的核酸结合相用于吸附和/或结合待纯化的核酸；
裂解-结合液，所述的裂解-结合液用于裂解细胞膜，释放待纯化核酸，并促使待纯化的核酸结合于所述的核酸结合相；
且所述的核酸结合相具有：(1)磁性内核；(2)位于所述内核上的氧化硅层；(3)位于所述氧化硅层表面的羧基修饰层。
在另一优选例中，所述的细胞裂解结合液含有以下组分：(i)chaotropic盐，浓度为3-6M；(ii)盐溶液(包括一价盐、二价盐)，浓度为0.1-1.5M；(iii)表面活性剂，浓度为2-5％(v/v)；(iv)螯合剂，浓度为0-100mM；和(v)醇，浓度为20-60％(v/v)。
在另一优选例中，所述核酸结合相的磁性内核选自下组：聚合物材料内核、多糖类材料内核、无机载体材料内核，或其组合。
在另一优选例中，所述的裂解结合液中含高浓度盐溶液，且所述的盐为单价盐、二价盐、铵盐，或其组合，其浓度为0.1-1.5M。
在另一优选例中，所述的储存容器选自下组：试管、离心管、eppendorf管、培养瓶。
在另一优选例中，所述的储存容器为一次性容器。
在另一优选例中，所述的储存容器为带刻度塑料容器。
在另一优选例中，所述的储存容器为预先装有定量液体的塑料容器。
在另一优选例中，所述的储存容器还具有一密封盖，且所述的密封盖可以被注射器或毛细管扎入。
在另一优选例中，所述的密封盖为塑料密封盖或橡胶密封盖。
在另一优选例中，所述的密封盖用于防止氧气和/或水进入储存容器。
在另一优选例中，所述的储存容器具有一内管部分和一采样管部分，且所述的内管部分位于采样管部分内。
在另一优选例中，所述的内管含磁性内核和裂解结合液，且所述的内管下部可以被塑料物体、注射器或毛细管扎入或穿刺。
在另一优选例中，所述的内管为塑料内管或橡胶内管。
在另一优选例中，所述的内管具有一可穿刺下部，所述的可穿刺下部可通过穿刺破坏其结构完整性。
在另一优选例中，所述的采样管还具有一穿刺部分，且所述的穿刺部分用于扎入或穿刺所述的内管，从而破坏所述内管的完整性。
在另一优选例中，所述的储存容器的容量为1.5-15ml。
在另一优选例中，所述的核酸结合相为磁性微球。
在另一优选例中，所述的磁性微球的粒径为50纳米-2微米，较佳地为300-1000纳米。
在另一优选例中，单个所述储存容器中的所述核酸结合相为0.1-5mg。
在另一优选例中，所述的试剂盒还包括样本采集装置。
在另一优选例中，所述的样本采集装置是微量样本采集装置。
在另一优选例中，所述的微量指样本的采集量为10ul-5ml液体样本。
在另一优选例中，所述的微量指样本的采集量≤2ml，较佳地为≤1ml，更佳地为≤0.5ml。
在另一优选例中，所述的样本采集装置与所述储存容器相连。
在另一优选例中，所述的样本采集装置与所述的密封盖相连。
在另一优选例中，所述的样本采集装置为采血装置。
在另一优选例中，所述的试剂盒还包括抗凝血剂。
在另一优选例中，所述的采血装置为指尖采血装置，较佳地，所述的指尖采血装置选自下组：指尖采血针、拭子、吸水纸、涂片、毛细管、滴管。
在另一优选例中，所述的样本采集装置为采集口腔黏膜细胞的刮棒或唾液收集器。
在另一优选例中，所述的试剂盒还包括洗涤液：所述的洗涤液用于从核酸结合相上洗去非特异吸附组分；和/或
所述的试剂盒还包括DNA洗脱液，所述的DNA洗脱液用于使核酸与所述核酸结合相发生解离。
在另一优选例中，所述的非特异吸附组分选自下组：蛋白、多糖、脂类，或其组合。
在另一优选例中，所述的洗涤液位于第二储存容器内。
在另一优选例中，所述的DNA洗脱液选自下组：水、弱碱性溶液、生物缓冲液，或其组合。
在另一优选例中，所述弱碱性溶液的pH值为7.5-9。
在另一优选例中，所述的DNA洗脱液位于第三储存容器内。
应理解，在本实用新型范围内中，本实用新型的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1是本实用新型的一个优选例中容器的示意图；
图2是本实用新型的一个优选例中试剂盒的示意图；
图3是本实用新型的一个优选例中试剂盒的示意图；
图中，1为储存容器、2为裂解结合液、3为核酸结合相、4为密封盖、5为内管、6为采样管。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，研制了一种能够用于样本采集、DNA提取以及保存的试剂盒。所述的试剂盒不仅可以用于提取生物样本中的DNA，还能够稳定保存提取完毕的DNA样品，因此适合用于大规模生物样本采集及保存，例如普通实验室或野外样本采集等。
磁性微球
如本文所用，术语“磁性微球”、“磁珠”、“磁性颗粒”可互换使用，均指用于本实用新型核酸分离的一种优选核酸结合相。
在本实用新型中，磁性微球的尺寸没有特别限制，一般其粒径为50纳米-2微米，较佳地为300-1000纳米。
在本实用新型中，磁性微球的材料没有特别限制，可以含有或由各种磁性材料构成。
在本实用新型中，作为核酸结合相的磁性微球为表面经羧基修饰的或表面经末端羧基化氧化硅修饰的磁性微球。一种优选的核酸结合相为末端羧基化氧化硅磁性微球。
一种优选的核酸结合相为可通过磁场进行分离的顺磁性微球或颗粒。
各种不同的磁性微球(包括经修饰的磁性微球)，可通过本领域常规的方法制备，或可通过市售途径购得。代表性的例子包括(但不限于)：无机微球、生物高分子微球、高分子微球。
裂解结合液
在本实用新型中，术语“裂解结合液”指既用于裂解细胞膜，释放待纯化核酸,也用于促使待纯化的核酸结合于所述的核酸结合相的溶液。
细胞裂解液用于裂解细胞膜，释放待纯化核酸，DNA结合液用于提供适合结合的环境，使得核酸与核酸结合相发生结合，而且杂质(包括蛋白质、糖类、RNA等)则不结合于核酸结合相。
在本实用新型中，细胞裂解和DNA结合过程在同一溶液中进行，有助于快速、简便地提取核酸。
核酸结合相
在本实用新型中，核酸结合相用于吸附和/或结合待纯化的核酸，并且所述核酸结合相具有：(1)磁性内核；(2)位于所述内核上的氧化硅层；(3)位于所述氧化硅层表面的羧基修饰层。
较佳地，所述的核酸结合相可以是末端羧基化氧化硅磁性微球，或末端羧基化氧化硅板。
表面带有羧基修饰层的磁性微球是一种在DNA提取纯化过程中常用的固相材料,在适宜的DNA吸附条件下(如高分子量的聚乙二醇和高浓度氯化钠作用下),DNA可从水溶液中析出并吸附到羧基化固相材料上。
核酸提取试剂盒
本实用新型提供了一种用于提取及保存核酸的试剂盒，所述的试剂盒包括：
一个或多个储存容器，所述的储存容器中包括：
核酸结合相，所述的核酸结合相用于吸附和/或结合待纯化的核酸；
裂解-结合液，所述的裂解-结合液用于裂解细胞膜，释放待纯化核酸，并促使待纯化的核酸结合于所述的核酸结合相；
且所述的核酸结合相具有：(1)磁性内核；(2)位于所述内核上的氧化硅层；(3)位于所述氧化硅层表面的羧基修饰层。
较佳地，所述核酸结合相的内核选自下组：聚合物材料内核、多糖类材料内核、无机载体材料内核，或其组合。所述的各种内核均可以通过市售途径获得，或者参考现有技术制备得到。
在另一优选例中，所述聚合物材料选自下组：聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯、纤维素、多元醇如聚乙烯醇及聚乙烯醇缩丁醛及这些材料的共聚物，或其组合。
在另一优选例中，所述多糖类化合物包括葡聚糖、琼脂糖、纤维素及上述任一材料的衍生物，或其组合。
在另一优选例中，所述无机载体包括金属、玻璃、金属氧化物及非金属氧化物、具有金属表面的载体、磁性微球、管、膜、多孔板、芯片及微阵列等，或其组合。
在本实用新型中，采用特定的表面具有羧基修饰层的磁性微球，可通过磁性微球法提取DNA(尤其是基因组DNA)。
在另一优选例中，所述的细胞裂解结合液不含蛋白酶(如蛋白酶K)。
在另一优选例中，所述的细胞裂解结合液使得杂质(包括蛋白质、糖类、RNA等)不结合于或基本不结合于核酸结合相。
在另一优选例中，所述的细胞裂解结合液含有以下组分：
(i)chaotropic盐，通常浓度为3-6M；
(ii)金属盐，通常浓度为0.1-1.5M；
(iii)表面活性剂，通常浓度为2-5％(v/v)；
(iv)螯合剂，通常浓度为0.5mM-100mM；和
(v)醇，通常浓度为20-60％(v/v)。
在另一优选例中，所述的chaotropic盐包括胍盐(如盐酸胍)。
在另一优选例中，所述的金属盐包括钾盐、钠盐、锂盐、镁盐、铵盐或其组合。
在另一优选例中，所述的表面活性剂包括Triton X-100，Tween20或其他非离子型表面活性剂。
在另一优选例中，所述的螯合剂包括EDTA、EGTA、CDTA、柠檬酸盐，或其组合。
在另一优选例中，所述的醇包括乙醇或异丙醇。
在另一优选例中，所述核酸结合相为末端修饰羧基基团的氧化硅磁性微球或末端修饰羧基基团的氧化硅板。
在另一优选例中，所述的裂解结合液中含金属盐，包括一价盐、二价盐，且所述的盐为钠盐、锂盐、钾盐，镁盐或其组合。
在另一优选例中，所述的碱金属盐为氯化锂或氯化钠。
在另一优选例中，盐浓度为0.1-3.0M，较佳地为0.2-2.5M。
本实用新型的一个优选实施例中，所述的储存容器是如图1所示的离心管1，裂解结合液2和核酸结合相位于离心管1中。用本实用新型试剂盒提取核酸时，将含有核酸的样本加入储存容器，裂解结合液即开始裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异地吸附到核酸结合相表面，蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。然后，在磁场作用下分离磁性微球后，用洗脱液洗脱磁性微球即可以得到高纯度的DNA。
本实用新型的另一个优选实施例中，所述的储存容器是如图2所示的培养瓶1，裂解结合液2和核酸结合相位于离心管1中；特别地，所述的储存容器还有一密封盖4，所述的密封盖用于将所述储存容器密封，从而使得所述储存容器的内部环境与储存容器外部环境不发生物质交换(例如，水、氧扩散等)，且所述的密封盖可以被注射器或毛细管扎入。在使用时，通过注射器扎入或刺入密封盖，从而将所采集的样品加入所述储存容器中，进行DNA提取和保存。
本实用新型的另一个优选实施例中，所述的储存容器是如图3所示，产品由两部分组成：
内管5，所述的内管5为储存磁珠内核及裂解结合液的容器、为裂解结合液2以及核酸结合相3位于所述内管5中。所述内管5的下部为薄膜或橡胶部分，可被注射器或其他穿刺的薄膜密封。采样管6为带刻度的样本收集管，用于采集血液、唾液及其他生物样本，采样管底部固定薄膜穿刺部分，样本采集后，将密封盖旋转固定于采样管，采样管底穿刺部分破坏薄膜完整性，使磁珠内核及裂解结合液与采集样本混合，达到裂解细胞，结合核酸的效果。
特别地，本实用新型的试剂盒还可以稳定储存核酸，在使用中，可以将样品加入储存容器中，使裂解结合液与样品反应并使游离核酸分子被吸附到核酸结合相表面。同时，可以将已采集样本的试剂盒作为一个整体，进行运输或储存。在本实用新型的一个优选例中，所述已采集样本的试剂盒可以在常温下储存一年。
在本实用新型的一种优选实施例中，用所述试剂盒采集样本后，将试剂盒作为一个整体运输至有条件检测的实验室中进行高通量核酸检测。所述的试剂盒可以用于医院常规采血，或野外样本收集等需要检测核酸的情况。较佳地，当所述的试剂盒用于采集血样时，所述的试剂盒中还包括抗凝血剂。所述的抗凝血剂可以添加于储存容器中，或位于其他容器中，当进行采样时按需添加。
本实用新型试剂盒可以检测的生物材料(如细胞)没有特别限制，代表性例子包括(但并不限于)：病毒、衣原体、细菌、放线菌、酵母、真菌、植物细胞、和动物细胞(如哺乳动物的细胞)等。所述的试剂盒特别适用于病毒、人类及动物的核酸提取，如，本实用新型的一个优选实施例是从血细胞中提取基因组DNA。
在另一个优选实施方式中，当所述的样本是含细胞壁成分的生物材料时，还可先对生物材料进行适当的处理(破壁)，然后加入所述试剂盒中。
由于所述试剂盒的提取效率高，因此不仅适合从多种样本，如全血、细胞、血浆及组织等中提取核酸，还特别适合从少量细胞中提取基因组DNA。在本实用新型中，少量细胞一般指单个或2-1000个细胞(较佳地1-100个细胞，更佳地(如1-20个细胞)。
用于本实用新型方法纯化的核酸可以存在于体液如血液、尿液、粪便、唾液、痰液，或存在于组织及器官样本。核酸样本可从棉签、涂片标本等载体材料上获得，也可以从其他液体样本中获得。
使用本实用新型的裂解结合液，可用于纯化核酸(包括DNA)。代表性的例子包括(但并不限于)基因组DNA，cDNA，总RNA等。
在一优选例中，本实用新型采用上述的试剂盒，无需蛋白酶K消化过程，细胞膜裂解、核酸及核酸结合相结合使用同一溶液，从而快速、高效、简便地从多种样本中提取核酸，且可以稳定储存核酸样本。
应理解，本实用新型的试剂盒也可包含其他的任选的通用组分，其中包括(但并不限于)：洗涤试剂、缓冲液、细胞壁裂解液等。
本实用新型的主要优点包括：
(1)本实用新型的试剂盒提取快速、操作简便。采用本实用新型的试剂盒，细胞裂解结合液一步裂解细胞并特异性的将核酸吸附于核酸结合相，水溶液亦可直接进行核酸与核酸结合相的解离洗脱过程，无需蛋白酶K处理，仅需简单的漂洗步骤后即可将核酸结合相上结合的核酸洗脱下来，方法步骤简单。
(2)条件温和。本实用新型中，核酸在温和的条件下(pH6.5-8.0)与核酸结合相结合，并在水或弱碱性(pH7.5-8.5)条件下进行洗脱，操作在室温下进行。
(3)核酸的收率高。1mg磁性微球可结合高达10ug的基因组DNA，或提取高达90％以上的人全血基因组总DNA。
(4)提取的核酸纯度高。与目前的核酸提取试剂盒及操作方法相比，本试剂盒提取核酸具有纯度高、杂质低等优点，提取的核酸适用于PCR检测、核酸杂交等多种下游实验，无需进一步纯化。
(5)自动化程度高。
(6)本实用新型的试剂盒可以在样品加入时即开始提取过程，在试剂盒进行运输或保存的过程中即可完成核酸提取，且保存过程中核酸不易变质，因而可以用于大量样本的采集工作。
下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1不同表面修饰磁性微球的制备
1)氨基化氧化硅磁性微球的制备：称取市售硅醇基氧化硅磁性微球适量，加入无水乙醇、水、浓氨水，最后加入3’-氨丙基三乙氧基硅烷，混合后常温搅拌反应3h，将产物依次用无水乙醇和蒸馏水洗涤，得表面键合氨基的磁性微球。
2)羧基化氧化硅磁性微球的制备：称取市售硅醇基氧化硅磁性微球适量，加入无水乙醇、水、浓氨水，最后加入3’-缩水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷，混合后常温搅拌反应3h，将产物依次用无水乙醇和蒸馏水洗涤，得表面键合环氧基的磁性微球。将4-氨基丁酸与表面键合环氧基的磁性微球反应，即得表面羧基化的氧化硅微球。
实施例2用试剂盒纯化核酸
本试剂盒所述提取DNA的试剂盒具体配置实例包括:
磁性微球:上述自制羧基化氧化硅磁性微球
裂解结合液：4M盐酸胍，2％Triton X-100,0.1％SDS，0.01％巯基乙醇，0.1MNaCl，0.6M LiCl，10mM Tris-HCl(pH5.5)，1mM EDTA，25％异丙醇
洗涤液I：200mM NaCl溶液，0.8M LiCl，70％乙醇，50mM Tris缓冲液(pH6.5)
洗涤液II：70％乙醇
洗脱液：1mM EDTA，10mM Tris-HCl(pH8.0)
纯化步骤:
1)取200μL抗凝血于1.5ml离心管中，加入750μL裂解吸附液振荡混和均匀裂解细胞,静置5min；
2)加入1mg磁性微球，温和摇匀10min；
3)用磁分离架吸附磁性微球,弃上清；
4)用850μL洗涤液I洗涤2次，温和摇匀2min,吸附磁性微球,弃上清；
5)用850μL洗涤液II洗涤2次，温和摇匀2min,吸附磁性微球,弃上清；
6)静置5min使残留的乙醇挥发；
7)加入100μL洗脱液，混和均匀后于室温放置5min；
8)磁场吸附磁性微球，回收洗脱液至离心管内，进行DNA检测及后续实验。
实施例3几种表面修饰磁性微球纯化全血基因组DNA的比较
样本:肝素钠处理的小鼠抗凝血
材料:
裂解结合液：4M盐酸胍，2％Triton X-100,0.1％SDS，0.01％巯基乙醇，0.1MNaCl，0.6M LiCl，10mM Tris-HCl(pH5.5)，1mM EGTA，25％异丙醇
洗涤液I：100mM NaCl溶液，0.8M LiCl，70％乙醇，50mM Tris缓冲液(pH6.5)
洗涤液II：70％乙醇
洗脱液：1mM EDTA，10mM Tris-HCl(pH8.0)
磁性微球:
磁性微球A:市售硅醇基氧化硅磁性微球
磁性微球B:氨基化氧化硅磁性微球
磁性微球C:羧基化氧化硅磁性微球
使用实施例2中实验步骤纯化基因组DNA，结果如下表：
A260/A280的比值更接近于1.80，表明提取使用羧基化氧化硅磁性微球提取的DNA纯度更高，更少蛋白质及RNA的污染；使用的羧基化氧化硅磁性微球提取的DNA所测A260/A230的比值在1.50左右，比值高表明提取出的DNA残盐含量相对较少。
上述结果提示，使用的羧基化氧化硅磁性微球时，所提取的核酸总量显著优于硅醇基磁性微球及氨基化磁性微球。
实施例4核酸纯化试剂盒提取小鼠血基因组DNA的结果
样本：肝素抗凝处理的小鼠抗凝血
材料：
磁性微球:末端羧基化氧化硅磁性微球
裂解结合液：4M盐酸胍，2％Triton X-100,0.1％SDS，0.01％巯基乙醇，0.1MNaCl，0.6M LiCl，10mM Tris-HCl(pH5.5)，1mM CDTA，25％异丙醇
洗涤液I：100mM NaCl溶液，0.8M LiCl，70％乙醇，50mM Tris缓冲液(pH6.5)
洗涤液II：70％乙醇
洗脱液：水
实验步骤：
1、使用实施例2中实验步骤纯化基因组DNA：分别取25、50、100、200、300、400μL抗凝血于1.5ml离心管中，加入750μL裂解吸附液振荡混和均匀裂解细胞,静置5min；加入1mg磁性微球，温和摇匀10min；磁场吸附磁性微球,弃上清；850μL洗涤液I洗涤磁性微球两次，吸附磁性微球,弃上清；用850μL洗涤液II洗涤2次，吸附磁性微球,弃上清，室温放置5min挥发乙醇；加入100μL洗脱液，混和均匀后于室温放置5min；磁场吸附磁性微球，回收洗脱液至离心管内，进行DNA含量及纯度检测及核酸电泳检测。
2、纯化后样品的PCR检测：PCR反应体系为：1ul纯化后小鼠基因组DNA，2X PCR master buffer，200I，50pM的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)上、下游引物，最后补加灭菌超纯水至终体积为50uL。上下游引物序列分别为5’-AGAGTCCATGCCATCACTGCC-3’、5’-GCCTGCTTCACCACCTTCTTG-3’。PCR反应条件为：94℃预变性4min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃伸1min，循环30次，72℃延伸10min，反应结束后取PCR产物进行电泳检测。
结果如图1所示，在使用不同体积的血液作为原料时，本实用新型所述的试剂盒均能以较好的收率提取DNA；使用本实用新型的试剂盒，1mg磁性微球可结合高达15ug的小鼠基因组DNA。
实施例5核酸纯化试剂盒提取人血基因组DNA的结果
材料：
样本：EDTA抗凝处理的全血样本
磁性微球:末端羧基化氧化硅磁性微球
裂解结合液：4M盐酸胍，2％Triton X-100,0.1％SDS，0.01％巯基乙醇，0.1MNaCl，0.6M LiCl，10mM Tris-HCl(pH5.5)，1mM柠檬酸钠，25％异丙醇
洗涤液I：100mM NaCl溶液，0.8M LiCl，70％乙醇，50mM Tris缓冲液(pH6.5)
洗涤液II：70％乙醇
洗脱液：1mM EDTA，10mM Tris-HCl(pH8.0)
通过白血球细胞计数测得gDNA理论初始值(每个白细胞含6.6pgDNA)。
纯化步骤：
使用实施例2中实验步骤纯化基因组DNA：分别取50、100、200、300、400μL抗凝血于1.5ml离心管中，加入750μL裂解吸附液振荡混和均匀裂解细胞,静置5min；加入1mg磁性微球，温和摇匀10min；磁场吸附磁性微球,弃上清；850μL洗涤液I洗涤磁性微球两次，吸附磁性微球,弃上清；用850μL洗涤液II洗涤2次，吸附磁性微球,弃上清，室温放置5min挥发乙醇；加入100μL洗脱液，混和均匀后于室温放置5min；磁场吸附磁性微球，回收洗脱液至离心管内，进行DNA含量及纯度检测。
核酸纯化试剂盒纯化DNA的提取效果如图3所示，结果显示，使用该实用新型的试剂盒可提取高达90％以上的基因组总DNA。
实施例6核酸提取试剂盒长期保存基因组DNA的结果
样本：EDTA抗凝处理的人抗凝血
材料：
磁珠:末端羧基化氧化硅磁性微球
磁珠-裂解结合液：配制4M盐酸胍，2％Triton X-100,0.1％SDS，0.01％巯基乙醇，0.1M NaCl，0.6M LiCl，10mM Tris-HCl(pH7.5)，45％异丙醇至总体积1L，加入上述1g末端羧基化氧化硅磁性微球。
洗涤液I：100mM NaCl溶液，0.8M LiCl，70％乙醇，50mM Tris缓冲液(pH7.5)
洗涤液II：70％乙醇
洗脱液：TE洗脱液(pH8.0)
实验步骤：
1、取200μL抗凝血于1.5ml离心管中，加入含磁珠的750μL裂解吸附液，颠倒混和5min，室温存储；
2、不同时间取样(0天，1天，3天，10天，1月，3月，6月，9月，12月)，使用旋转混合仪混匀20min，磁场吸附磁性微球,弃上清；
3、850μL洗涤液I洗涤磁性微球两次，吸附磁性微球,弃上清；
4、用850μL洗涤液II洗涤2次，吸附磁性微球,弃上清，室温放置5min挥发乙醇；
5、加入100μL洗脱液，混和均匀后于室温放置5min；磁场吸附磁性微球，回收洗脱液至离心管内，进行DNA含量检测。
表：DNA长期稳定性试验
5份全血样本加入含羧基磁珠的裂解结合液，室温存储后，不同时间取样洗涤、100μl洗脱液洗脱DNA，使用nanodrop2000进行含量测定，核酸浓度单位为ng/μl,检测结果如下：
从以上实验结果可知，使用本实用新型的试剂盒处理样品，样品的保存时间可以长达一年。
在本实用新型提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (8)
1.一种用于提取及保存核酸的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：
一个或多个储存容器，所述的储存容器具有一用于储存磁珠内核及裂解结合液的内管部分和一采样管部分，且所述的内管部分位于采样管部分内。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述且的储存容器选自下组：试管、离心管、eppendorf管、培养瓶；且
所述的内管下部可以被塑料物体、注射器或毛细管扎入或穿刺。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的采样管还具有一穿刺部分，且所述的穿刺部分用于扎入或穿刺所述的内管，从而破坏所述内管的完整性。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的储存容器的容量为1.5-15ml。
5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的储存容器由两部分组成：
内管(5)，所述的内管(5)为储存磁珠内核及裂解结合液的容器、裂解结合液(3)以及核酸结合相(3)位于所述内管(5)中；所述内管(5)的下部为薄膜或橡胶部分；
采样管(6)，所述的采样管为带刻度的样本收集管，且底部固定薄膜穿刺部分。
6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括样本采集装置。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的样本采集装置为采血装置。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的样本采集装置为采集口腔黏膜细胞的刮棒或唾液收集器。
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