CN203941168U - 蓝舌病病毒b-elisa抗体检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，包括盒体与盒盖，本实用新型盒体与盒盖采用***式结构相连；盒体内设置有与盒体尺寸大小相同的海绵托，所述的海绵托上设置有12个凹孔；凹孔内分别放置有1瓶20×浓缩洗涤液、1瓶稀释液、1瓶包被液、1瓶终止液、1瓶底物液、1管BTV单抗、1管HRP羊抗鼠二抗、1管BTV强阳性血清、1管BTV弱阳性血清、1管BTV阴性血清、1管注射用水，1瓶BTV VP7抗原。本实用新型将便携性达到极致，使得蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测可以企业化操作、规模化生产，且具有检测灵敏度高、检测时间短、稳定可靠的优点。
Description
技术领域
本实用新型属于试剂盒结构技术领域，具体涉及蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒结构技术领域。
背景技术
蓝舌病(Bluetongue，BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(BTV)引起的经媒介昆虫传播的动物传染病。BTV主要感染反刍动物牛、羊，表现为高烧、黏膜水肿和糜烂等症状，致死率为20％-30％。
蓝舌病最早的记录可追溯于18世纪南非发病的绵羊。1940年前，本病报道仅限于撒哈拉以南的非洲大陆少数几个国家。Gambles(1949)首次报道在非洲大陆以外的塞浦路斯出现本病流行，随后的30年间，该病在土耳其(1944，1946，1947)、以色列(1949)、美国(1952)、伊比利亚半岛(1956-1960)、葡萄牙(1956)、西班牙(1957)、巴勒斯坦、印度、中国等国均有爆发。
蓝舌病病毒抗体检测方法有中和试验、ELISA试验。其中ELISA方法由于实验条件要求低(不涉及病原操作、生物安全要求低)而被广泛应用。本实用新型专利中的B-ELISA抗体检测方法，主要利用昆虫细胞表达的蓝舌病病毒BTV VP7蛋白作为包被抗原，针对VP7蛋白的单克隆抗体及其他物质组成而成试剂盒。试剂盒具有生产成本低，易于规模化生产等特点。
发明内容
本实用新型的目的是提供一种简便、快速、敏感、特异的新型蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，可广泛应用于羊、等各种动物感染BTV后血清抗体的检测和相应的流行病学调查。
蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，包括盒体与盒盖，本实用新型盒体与盒盖采用***式结构相连；盒体内设置有与盒体尺寸大小相同的海绵托，所述的海绵托上设置有12个凹孔；凹孔内分别放置有1瓶20×浓缩洗涤液、1瓶稀释液、1瓶包被液、1瓶终止液、1瓶底物液、1管BTV单抗、1管HRP羊抗鼠二抗、1管BTV强阳性血清、1管BTV弱阳性血清、1管BTV阴性血清、1管注射用水，1瓶BTV VP7抗原。
本实用新型所述的20×浓缩洗涤液体积为60ml，瓶盖为蓝色；所述的稀释液体积为50ml,瓶盖为黄色；所述的包被液体积为25ml,瓶盖为紫色；所述的终止液体积为25ml，瓶盖为红色；所述的底物液体积为25ml，瓶盖为棕色；所述的BTV强阳性血清和BTV弱阳性血清体积分别为300ul，管盖均为红色；所述的BTV阴性血清体积为300ul，管盖为蓝色；所述的BTV单抗体积为300ul，管盖为绿色；所述的注射用水体积为800ul，管盖为白色；所述的HRP羊抗鼠二抗体积为300ul，管盖为黄色。
本实用新型所述海绵托上放置有2块酶标板、8张封板纸以及1份说明书。
本实用新型所述的酶标板为96孔酶标板，该酶标板由聚乙烯制成，酶标板上设置有支撑架，且可单条拆卸，由12条酶标条构成，每条酶标条上有8个微孔。
本实用新型的有益效果是：阻断ELISA方法利用ELISA***作为显示***检测抗体对抗原的中和水平。ELISA***有很多好处，如不需活病毒，因此不需要在2～3级生物安全实验室中进行，另外阻断ELISA法具有病毒抗体检测快速、敏感、重复性强、成本低的特点。本实用新型将便携性达到极致，使得蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测可以企业化操作、规模化生产，且具有检测灵敏度高、检测时间短、稳定可靠的优点。
附图说明
图1为本实用新型盒体内布置结构示意图；
图2为酶标板结构图。
图中标号为，1：两块酶标板,2：1份说明书,3：8张封板纸,4：60ml20×浓缩洗涤溶液，5：50ml稀释液,6：25ml包被液,7：25ml终止液,8：25ml底物液,9：BTV VP7抗原，10：0.3ml BTV强阳性血清，11：0.3ml BTV弱阳性血清，12：0.3ml BTV阴性血清,13：0.3ml HRP羊抗鼠二抗，14：BTV单抗，15：0.8ml注射用水(去离子水)，16：盒体。
下面结合附图和具体实施方式对本实用新型做出进一步解释。
具体实施方式
如图1和图2所示，蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，包括盒体与盒盖，本实用新型盒体与盒盖采用***式结构相连；盒体内设置有与盒体尺寸大小相同的海绵托，所述的海绵托上设置有12个凹孔；凹孔内分别放置有1瓶20×浓缩洗涤液、1瓶稀释液、1瓶包被液、1瓶终止液、1瓶底物液、1管BTV单抗、1管HRP羊抗鼠二抗、1管BTV强阳性血清、1管BTV弱阳性血清、1管BTV阴性血清、1管注射用水，1瓶BTV VP7抗原。
本实用新型所述的20×浓缩洗涤液体积为60ml，瓶盖为蓝色；所述的稀释液体积为50ml,瓶盖为黄色；所述的包被液体积为25ml,瓶盖为紫色；所述的终止液体积为25ml，瓶盖为红色；所述的底物液体积为25ml，瓶盖为棕色；所述的BTV强阳性血清和BTV弱阳性血清体积分别为300ul，管盖均为红色；所述的BTV阴性血清体积为300ul，管盖为蓝色；所述的BTV单抗体积为300ul，管盖为绿色；所述的注射用水体积为800ul，管盖为白色；所述的HRP羊抗鼠二抗体积为300ul，管盖为黄色。
本实用新型所述海绵托上放置有2块酶标板、8张封板纸以及1份说明书。
本实用新型所述的酶标板为96孔酶标板，该酶标板由聚乙烯制成，酶标板上设置有支撑架，可单条拆卸，由12条酶标条构成，每条酶标条上有8个微孔。
使用本试剂盒的操作步骤如下。
(1)在BTV VP7抗原冻干瓶中注入600ul注射用水，用包被液1:50稀释后，在所需的孔中各加100ul，37℃孵育1h；
(2)将各孔的液体弃入废液桶。每孔加300ul的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释)进行洗板，重复三次。
(3)在每孔中加入40ul稀释液；然后在A1，A2孔加入10ul稀释液；B1，B2，C1，C2中加入10ulBTV强阳性血清；D1，D2，E1，E2中加入10ulBTV弱阳性血清；F1，F2，G1，G2中加入10ul稀释液；H1，H2中加入10ulBTV阴性血清；待检样品，取10ul加入相应的孔中，并做好记录，37℃孵育1h；
(4)将BTV单抗用稀释液1:50稀释后，除了A1,A2孔外，其余各孔加入50ul,在A1，A2孔中加入50ul稀释液，37℃孵育1h；
(5)重复步骤(2)；
(6)将HRP羊抗鼠二抗用稀释液1:100稀释后，每孔中加入100ul，37℃孵育1h；
(7)重复步骤(2)；
(8)每孔加100ul底物液；
(9)37℃避光放置10-15min；
(10)每孔加100ul终止液；在15min内于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD450nm值。
(11)计算各孔的S/N值，即S/N＝(血清样品OD值/BTV阴性血清孔平均OD值)×100。结果判定当BTV强阳性对照(SP)S/N值小于或等于20；BTV弱阳性对照(WP)S/N值在50-70之间；CC(BTV羊抗鼠二抗对照即A1，A2孔)孔S/N值小于10；BTV阴性血清孔(N)OD450读数大于0.5，实验结果有效。此时检测样品S/N值≥80时判为阴性，70＜S/N值＜80时判为可疑，需用其它方法检测，S/N≤70时判为阳性。
备注：BTV VP7抗原溶解后呈乳白色或无色或有微量不溶物，不影响使用效果。溶解抗原-20℃保存，反复冻融至少30次不影响实验结果；试剂盒保存方式，2℃-8℃保存。
Claims (4)
1.蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，包括盒体与盒盖，其特征在于，盒体与盒盖采用***式结构相连；盒体内设置有与盒体尺寸大小相同的海绵托，所述的海绵托上设置有12个凹孔；凹孔内分别放置有1瓶20×浓缩洗涤液、1瓶稀释液、1瓶包被液、1瓶终止液、1瓶底物液、1管BTV单抗、1管HRP羊抗鼠二抗、1管BTV强阳性血清、1管BTV弱阳性血清、1管BTV阴性血清、1管注射用水，1瓶BTV VP7抗原。
2.根据权利要求1所述的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的20×浓缩洗涤液体积为60ml，瓶盖为蓝色；所述的稀释液体积为50ml,瓶盖为黄色；所述的包被液体积为25ml,瓶盖为紫色；所述的终止液体积为25ml，瓶盖为红色；所述的底物液体积为25ml，瓶盖为棕色；所述的BTV强阳性血清和BTV弱阳性血清体积分别为300ul，管盖均为红色；所述的BTV阴性血清体积为300ul，管盖为蓝色；所述的BTV单抗体积为300ul，管盖为绿色；所述的注射用水体积为800ul，管盖为白色；所述的HRP羊抗鼠二抗体积为300ul，管盖为黄色。
3.根据权利要求1所述的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述海绵托上放置有2块酶标板、8张封板纸以及1份说明书。
4.根据权利要求3所述的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标板为96孔酶标板，该酶标板由聚乙烯制成，酶标板上设置有支撑架，用于单条拆卸。
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Cited By (2)
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| CN110187105A (zh) * | 2019-06-25 | 2019-08-30 | 艾军 | 一种检测牛、羊***病毒o型抗体的b-elisa试剂盒及制备方法 |
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| CN105842450B (zh) * | 2016-05-13 | 2019-02-19 | 云南省畜牧兽医科学院 | 一种蓝舌病抗体竞争液及其对应的快速elisa检测方法 |
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