CN202153226U - 风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种风疹病毒IgM和IgG联合检测试纸。特征在于塑料支撑板(8)一端粘贴上样垫(1)，上样垫(1)的一端紧密压接含有标记风疹病毒特异性的抗原gpE1的胶体金垫(2)，胶体金垫(2)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3)，膜上包被有相互分离的检测线T1(5)、检测线T2(6)和质控C线，检测线T1(5)为抗人IgM抗体，检测线T2(6)为抗人IgG抗体，质控C线(7)为抗风疹病毒gpE1抗体，NC膜的另一端连接吸样垫(4)形成试纸。检测时将样品加在上样垫上，15分钟内肉眼直接观察，判定检测结果。具有操作简便、快速、适合现场检测和经济实用等优点。

Description

风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸

技术领域

本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸 

背景技术

风疹是一种由风疹病毒引起的通过空气传播的急性传染病，可通过胎盘进入胎儿体内，引起胎儿畸形。而且孕妇感染风疹病毒的时间越早，致畸的可能性越大。血清学研究表明，感染过风疹病毒的育龄妇女即使再被感染，怀孕后也不会对胎儿造成危害。但是约有10％的育龄妇女属于风疹易感者，她们在怀孕的头3个月内如果是初次感染风疹病毒，胎儿致畸率高达80％以上。世界上许多发达国家已经将风疹感染的检查列为孕期常规检查项目，在优生优育方面发挥着重要作用。 

目前对风疹病毒检测的主要方法是风疹病毒特异性抗体检测。检测风疹病毒IgM判定是否为现症感染，检测IgG判定是否曾经感染过。检测两种抗体有利于对被检对象的进行全面的判定，指导优生优育。目前风疹病毒抗体的检测方法主要是ELISA等检测方法。在胶体金的检测方法中，有单独检测风疹病毒IgM或IgG的报道，但用胶体金类免疫层析技术同时检测风疹病毒IgM和IgG抗体的检测试纸尚未有相关报道。和用两种试剂分别检测IgM和IgG抗体相比，同时检测IgM和IgG抗体能减少检测人员的工作量，节约成本；同时减少采血量，减少患者的痛苦。 

免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，在抗体检测方面已得到较为广泛运用，基本原理如下：利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线，通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。 

发明内容

本实用新型的目的是提供一种风疹病毒IgM和IgG抗体检测试纸，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。 

本实用新型提供一种风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于其特征在于塑料支撑板(8)一端连接上样垫(1)，上样垫(1)的一端紧密压接含有标记风疹病毒特异性的抗原gpE1的胶体金垫(2)，胶体金垫(2)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3)，硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线T1(5)、检测线T2(6)和质控C线，检测线T1(5)为包被在NC膜上的抗人IgM抗体，检测线T2(6)为包被在NC膜上的抗人IgG抗体，质控C线(7)为包被在NC膜上的抗风疹病毒gpE1抗体，硝酸纤维素膜的另一端连接吸样垫(4)形成试纸。 

所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于所述的抗原风疹病毒特异性的抗原gpE1抗原是利用基因工程重组表达的抗原。 

所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于所述的上样垫(1)为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫(4)由吸水滤纸构成。 

所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，所述的抗原的包被方法为：以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成1-2mg/ml的溶液，以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgG抗体配制成1-2mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以1-1.5ul/cm的参数进行划线，包被T1、T2线，同时在NC膜上部包被抗风疹病毒gpE1抗体作为C线，划线后将NC膜在干燥间，温度20-25℃，湿度小于30％，干燥2-5小时。 

所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，所述的抗原标记胶体金颗粒的方法为：以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm的胶体金溶液，制备完成后取100ml胶体金液放在烧杯内，用0.2M K₂CO₃调至pH8.5，按100ml胶体金溶液加入0.5-2mg风疹病毒gpE1抗原，室温搅拌2小时，加入1％牛血清白蛋白BSA，1％聚乙二醇PEG20000封闭20min，12000r/m离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至100ml，按1ml溶 液铺20cm²的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间，温度20-25℃，湿度小于30％，干燥2-5小时，制成胶体金垫。 

所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，所述的试纸的装配方法为：在干燥室内，温度20-25℃，湿度小于40％，取塑料支撑板板，将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在NC膜T线一侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/3)粘贴，在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫，搭胶体金垫的1/5；在NC膜C线一侧搭接吸样垫，搭吸样垫的1/10；最后用裁剪机将贴好塑料板切成2-5mm宽的试纸条，切好的试纸条可以再装入塑料卡内，形成检测卡。 

所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，检测方法为：将被检血清或血浆平衡至温室，将试纸条或试剂卡平放，在上样垫上加入5-20ul被检样品，再加入50-100ul的样品稀释液，使胶体金溶解并在NC膜上层析，然后用肉眼直接观察在15分钟内C、T1、T2线的出现情况，并判定检测结果。 

本实用新型的有益效果是：提供一种利用免疫层析胶体金技术检测风疹病毒IgM和IgG抗体的新型试纸。采用胶体金标记风疹病毒特异性抗原gpE1，包被抗人IgM和IgG抗体实现对血液中抗风疹病毒抗体的检测，一次检测获得两种检测指标，节约时间和成本，减轻患者的痛苦。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。 

附图说明：

图1风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸结构示意图。 

附图符号说明： 

1：上样垫；2：胶体金垫；3：NC膜；4：吸样垫 

5：检测线T1；6：检测线T2；7：质控C线；8：塑料支撑板 

具体实施方式

实施例：制备风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸 

1主要材料 

1.1风疹病毒特异性gpE1抗原、gpE1抗体：北京中原公司产品，为重组抗原，gpE1抗原用于胶体金标记，gpE1抗体用于NC膜质控线包被；鼠 抗人IgM和IgG抗体：Arista公司产品，用于NC膜包被；氯金酸：Sigma公司产品；硝酸纤维素(NC)膜：Millipore公司产品；牛血清白蛋白(BSA)，聚乙二醇PEG20000，水解酪蛋白：Sigma产品。其它常用试剂均为分析纯试剂。 

1.2临床血清由公司在相关医院获得，其中风疹病毒IgG抗体阳性样本80份，IgM抗体阳性样本20份，其中包括两种抗体均阳性样本15份。两种抗体全为阴性正常人样本50份。 

1.3风疹病毒IgM抗体检测试剂盒(ELISA法)，风疹病毒IgG抗体检测试剂盒(ELISA法)：国内已注册的商用产品。 

2方法 

2.1风疹病毒gpE1重组抗原的胶体金标记氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，制备完成后取三份胶体金，分别用0.2M K₂CO₃将溶液调到pH7.5、pH8.5和pH9.0。然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每100ml溶液加入0.5mg、1mg、1.5mg将重组抗原将蛋白缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌2小时，再滴加入到终浓度为0.1％的PEG2000和1％的BSA进行封闭20min，标记结束后以12000r/m离心，弃上清，沉淀按原体积复溶至不同配比的胶体金工作液硼酸盐缓冲液，pH8.0，含BSA、羊血清，蔗糖和表面活性剂中。然后将标记胶体金溶液按1ml溶液铺20cm²的比例加样于无纺布上，在温度20-25℃，相对湿度在＜30％的干燥间干燥2-4小时，制成胶体金垫。 

2.2NC膜包被用0.01M pH7.2PBS将鼠抗人IgM分别稀释成0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml，鼠抗人IgG分别稀释成0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml，然后用喷膜仪在NC膜下部按1ul/cm进行分别划线包被，同时在NC膜上部包被抗gpE1抗体，用于产品的质控，包被完成后将NC膜在在温度20-25℃，相对湿度在＜30％的干燥间干燥2-5小时。 

2.3风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸的组装在干燥室内(温度20-25℃，相对湿度＜30％)取塑料支撑板，将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在NC膜T线一侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/3)粘贴，在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫(搭胶体金垫的1/5)；在NC膜C线一侧搭接吸样垫(搭吸样垫的1/10)；然后用裁剪机将贴好塑料板切成 3mm或4mm宽的试纸条。切好的试纸条可以再装入塑料卡内，形成风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试剂卡。 

2.4检测方法将被检血清或血浆平衡至温室，将制备好的试纸条或试剂卡平放，在上样垫上加入10ul被检样品，若样品中含抗风疹病毒IgM或IgG抗体，则和样品垫上的标记gpE1抗原的胶体金结合，形成复合物，并扩散到NC膜上进一步层析，当遇到包被在NC膜上T1线处的鼠抗人IgM时，复合物则又和包被抗IgM抗体结合，被捕获在包被处；当遇到包被在NC膜上T2线处IgG时，复合物则又和包被抗体结合，被捕获在包被线T2处；当被捕获的胶体金复合物达到一定数量时，则形成一条肉眼可见的T1或T2线；若血清中不含特异性抗体，则不能形成免疫复合物，亦不能形成T线，C线作为试剂的质控标准，阳性和阴性样品检测时均会出现。用肉眼直接观察在5、10、15、20、和30分钟内C、T线的出现情况，并判定检测结果。 

2.5试纸工艺参数调试将浓度不同标记、包被的试剂进行组合配对，制备小样，利用质控血清对试剂进行测试，发现最佳组合。 

2.6临床血清检测用本试剂按检测方法对所有临床血清进行检测，同时用商用检测ELISA试剂进行对照检测。 

3结果 

3.1试纸参数确定根据小样的检测结果，确定了试纸的最佳标记pH值为8.0；重组混合抗原的最佳标记量为1mg/100ml胶体金溶液；最佳的胶体金工作液为10mM硼酸酸盐缓冲液，pH8.5，含0.5％BSA、10％羊血清，2％蔗糖，0.2％Tween 20；最佳包鼠抗人IgM和IgG包被浓度均为1.5mg/ml。检测结果的最佳判定时间为5-15分钟。但以上参数在制备不同批次产品时可能需要适当调整。 

3.2临床血清检测以ELISA试剂为对照，对IgG抗体进行检测，本试剂IgG检测出阳性78份，ELISA检测出IgG阳性80份，灵敏度＝78/80＝97.5％；本试剂IgG阴性样本检测均为阴性，相对特异性100％。P＞0.05。以ELISA试剂为对照，对IgM抗体进行检测，本试剂IgM检测出阳性19份，ELISA检测出IgM阳性20份，灵敏度＝19/20＝95.0％；本试剂IgM阴性样本检测均为阴性，相对特异性100％。P＞0.05。IgM和IgG同时为阳 性的样本本试剂检测和ELISA试剂完全一致。临床检测表明本试剂的性能和ELISA试剂相比无显著性差异，适合用于临床检测。 

Claims (3)

1.一种风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于塑料支撑板(8)一端连接上样垫(1)，上样垫(1)的一端紧密压接含有标记风疹病毒特异性的抗原gpE1的胶体金垫(2)，胶体金垫(2)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3)，硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线T1(5)、检测线T2(6)和质控C线，检测线T1(5)为包被在NC膜上的抗人IgM抗体，检测线T2(6)为包被在NC膜上的抗人IgG抗体，质控C线(7)为包被在NC膜上的抗风疹病毒gpE1抗体，NC的另一端连接吸样垫(4)形成试纸。

2.根据权利要求1所述的风疹IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于所述的抗原风疹病毒特异性抗原gpE1是利用基因工程重组表达的抗原。

3.根据权利要求1所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸，其特征在于所述的上样垫(1)为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫(4)由吸水滤纸构成。 

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