CN202153226U - 风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种风疹病毒IgM和IgG联合检测试纸。特征在于塑料支撑板(8)一端粘贴上样垫(1),上样垫(1)的一端紧密压接含有标记风疹病毒特异性的抗原gpE1的胶体金垫(2),胶体金垫(2)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3),膜上包被有相互分离的检测线T1(5)、检测线T2(6)和质控C线,检测线T1(5)为抗人IgM抗体,检测线T2(6)为抗人IgG抗体,质控C线(7)为抗风疹病毒gpE1抗体,NC膜的另一端连接吸样垫(4)形成试纸。检测时将样品加在上样垫上,15分钟内肉眼直接观察,判定检测结果。具有操作简便、快速、适合现场检测和经济实用等优点。
Description
技术领域
本实用新型是涉及生物应用技术领域,特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸
背景技术
风疹是一种由风疹病毒引起的通过空气传播的急性传染病,可通过胎盘进入胎儿体内,引起胎儿畸形。而且孕妇感染风疹病毒的时间越早,致畸的可能性越大。血清学研究表明,感染过风疹病毒的育龄妇女即使再被感染,怀孕后也不会对胎儿造成危害。但是约有10%的育龄妇女属于风疹易感者,她们在怀孕的头3个月内如果是初次感染风疹病毒,胎儿致畸率高达80%以上。世界上许多发达国家已经将风疹感染的检查列为孕期常规检查项目,在优生优育方面发挥着重要作用。
目前对风疹病毒检测的主要方法是风疹病毒特异性抗体检测。检测风疹病毒IgM判定是否为现症感染,检测IgG判定是否曾经感染过。检测两种抗体有利于对被检对象的进行全面的判定,指导优生优育。目前风疹病毒抗体的检测方法主要是ELISA等检测方法。在胶体金的检测方法中,有单独检测风疹病毒IgM或IgG的报道,但用胶体金类免疫层析技术同时检测风疹病毒IgM和IgG抗体的检测试纸尚未有相关报道。和用两种试剂分别检测IgM和IgG抗体相比,同时检测IgM和IgG抗体能减少检测人员的工作量,节约成本;同时减少采血量,减少患者的痛苦。
免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术,在抗体检测方面已得到较为广泛运用,基本原理如下:利用胶体金标记一种抗原或抗体,在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体,检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时,胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物,然后在NC膜上层析,再被包被抗原或抗体捕获,形成肉眼可见的检测T线,通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
发明内容
本实用新型的目的是提供一种风疹病毒IgM和IgG抗体检测试纸,具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
本实用新型提供一种风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,其特征在于其特征在于塑料支撑板(8)一端连接上样垫(1),上样垫(1)的一端紧密压接含有标记风疹病毒特异性的抗原gpE1的胶体金垫(2),胶体金垫(2)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3),硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线T1(5)、检测线T2(6)和质控C线,检测线T1(5)为包被在NC膜上的抗人IgM抗体,检测线T2(6)为包被在NC膜上的抗人IgG抗体,质控C线(7)为包被在NC膜上的抗风疹病毒gpE1抗体,硝酸纤维素膜的另一端连接吸样垫(4)形成试纸。
所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,其特征在于所述的抗原风疹病毒特异性的抗原gpE1抗原是利用基因工程重组表达的抗原。
所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,其特征在于所述的上样垫(1)为玻璃纤维膜或无纺布,吸样垫(4)由吸水滤纸构成。
所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,所述的抗原的包被方法为:以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成1-2mg/ml的溶液,以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgG抗体配制成1-2mg/ml的溶液,用喷膜仪在NC膜下部以1-1.5ul/cm的参数进行划线,包被T1、T2线,同时在NC膜上部包被抗风疹病毒gpE1抗体作为C线,划线后将NC膜在干燥间,温度20-25℃,湿度小于30%,干燥2-5小时。
所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,所述的抗原标记胶体金颗粒的方法为:以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30-50nm的胶体金溶液,制备完成后取100ml胶体金液放在烧杯内,用0.2M K2CO3调至pH8.5,按100ml胶体金溶液加入0.5-2mg风疹病毒gpE1抗原,室温搅拌2小时,加入1%牛血清白蛋白BSA,1%聚乙二醇PEG20000封闭20min,12000r/m离心30分钟,弃上清,用胶体金工作液复溶至100ml,按1ml溶 液铺20cm2的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上,再置干燥间,温度20-25℃,湿度小于30%,干燥2-5小时,制成胶体金垫。
所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,所述的试纸的装配方法为:在干燥室内,温度20-25℃,湿度小于40%,取塑料支撑板板,将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴,在NC膜T线一侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/3)粘贴,在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫,搭胶体金垫的1/5;在NC膜C线一侧搭接吸样垫,搭吸样垫的1/10;最后用裁剪机将贴好塑料板切成2-5mm宽的试纸条,切好的试纸条可以再装入塑料卡内,形成检测卡。
所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,检测方法为:将被检血清或血浆平衡至温室,将试纸条或试剂卡平放,在上样垫上加入5-20ul被检样品,再加入50-100ul的样品稀释液,使胶体金溶解并在NC膜上层析,然后用肉眼直接观察在15分钟内C、T1、T2线的出现情况,并判定检测结果。
本实用新型的有益效果是:提供一种利用免疫层析胶体金技术检测风疹病毒IgM和IgG抗体的新型试纸。采用胶体金标记风疹病毒特异性抗原gpE1,包被抗人IgM和IgG抗体实现对血液中抗风疹病毒抗体的检测,一次检测获得两种检测指标,节约时间和成本,减轻患者的痛苦。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
附图说明:
图1风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸结构示意图。
附图符号说明:
1:上样垫;2:胶体金垫;3:NC膜;4:吸样垫
5:检测线T1;6:检测线T2;7:质控C线;8:塑料支撑板
具体实施方式
实施例:制备风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸
1主要材料
1.1风疹病毒特异性gpE1抗原、gpE1抗体:北京中原公司产品,为重组抗原,gpE1抗原用于胶体金标记,gpE1抗体用于NC膜质控线包被;鼠 抗人IgM和IgG抗体:Arista公司产品,用于NC膜包被;氯金酸:Sigma公司产品;硝酸纤维素(NC)膜:Millipore公司产品;牛血清白蛋白(BSA),聚乙二醇PEG20000,水解酪蛋白:Sigma产品。其它常用试剂均为分析纯试剂。
1.2临床血清由公司在相关医院获得,其中风疹病毒IgG抗体阳性样本80份,IgM抗体阳性样本20份,其中包括两种抗体均阳性样本15份。两种抗体全为阴性正常人样本50份。
1.3风疹病毒IgM抗体检测试剂盒(ELISA法),风疹病毒IgG抗体检测试剂盒(ELISA法):国内已注册的商用产品。
2方法
2.1风疹病毒gpE1重组抗原的胶体金标记氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液,制备完成后取三份胶体金,分别用0.2M K2CO3将溶液调到pH7.5、pH8.5和pH9.0。然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌,按每100ml溶液加入0.5mg、1mg、1.5mg将重组抗原将蛋白缓慢滴加到胶体金溶液中,继续搅拌2小时,再滴加入到终浓度为0.1%的PEG2000和1%的BSA进行封闭20min,标记结束后以12000r/m离心,弃上清,沉淀按原体积复溶至不同配比的胶体金工作液硼酸盐缓冲液,pH8.0,含BSA、羊血清,蔗糖和表面活性剂中。然后将标记胶体金溶液按1ml溶液铺20cm2的比例加样于无纺布上,在温度20-25℃,相对湿度在<30%的干燥间干燥2-4小时,制成胶体金垫。
2.2NC膜包被用0.01M pH7.2PBS将鼠抗人IgM分别稀释成0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml,鼠抗人IgG分别稀释成0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml,然后用喷膜仪在NC膜下部按1ul/cm进行分别划线包被,同时在NC膜上部包被抗gpE1抗体,用于产品的质控,包被完成后将NC膜在在温度20-25℃,相对湿度在<30%的干燥间干燥2-5小时。
2.3风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸的组装在干燥室内(温度20-25℃,相对湿度<30%)取塑料支撑板,将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴,在NC膜T线一侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/3)粘贴,在胶体金垫另一侧搭接粘贴上样垫(搭胶体金垫的1/5);在NC膜C线一侧搭接吸样垫(搭吸样垫的1/10);然后用裁剪机将贴好塑料板切成 3mm或4mm宽的试纸条。切好的试纸条可以再装入塑料卡内,形成风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试剂卡。
2.4检测方法将被检血清或血浆平衡至温室,将制备好的试纸条或试剂卡平放,在上样垫上加入10ul被检样品,若样品中含抗风疹病毒IgM或IgG抗体,则和样品垫上的标记gpE1抗原的胶体金结合,形成复合物,并扩散到NC膜上进一步层析,当遇到包被在NC膜上T1线处的鼠抗人IgM时,复合物则又和包被抗IgM抗体结合,被捕获在包被处;当遇到包被在NC膜上T2线处IgG时,复合物则又和包被抗体结合,被捕获在包被线T2处;当被捕获的胶体金复合物达到一定数量时,则形成一条肉眼可见的T1或T2线;若血清中不含特异性抗体,则不能形成免疫复合物,亦不能形成T线,C线作为试剂的质控标准,阳性和阴性样品检测时均会出现。用肉眼直接观察在5、10、15、20、和30分钟内C、T线的出现情况,并判定检测结果。
2.5试纸工艺参数调试将浓度不同标记、包被的试剂进行组合配对,制备小样,利用质控血清对试剂进行测试,发现最佳组合。
2.6临床血清检测用本试剂按检测方法对所有临床血清进行检测,同时用商用检测ELISA试剂进行对照检测。
3结果
3.1试纸参数确定根据小样的检测结果,确定了试纸的最佳标记pH值为8.0;重组混合抗原的最佳标记量为1mg/100ml胶体金溶液;最佳的胶体金工作液为10mM硼酸酸盐缓冲液,pH8.5,含0.5%BSA、10%羊血清,2%蔗糖,0.2%Tween 20;最佳包鼠抗人IgM和IgG包被浓度均为1.5mg/ml。检测结果的最佳判定时间为5-15分钟。但以上参数在制备不同批次产品时可能需要适当调整。
3.2临床血清检测以ELISA试剂为对照,对IgG抗体进行检测,本试剂IgG检测出阳性78份,ELISA检测出IgG阳性80份,灵敏度=78/80=97.5%;本试剂IgG阴性样本检测均为阴性,相对特异性100%。P>0.05。以ELISA试剂为对照,对IgM抗体进行检测,本试剂IgM检测出阳性19份,ELISA检测出IgM阳性20份,灵敏度=19/20=95.0%;本试剂IgM阴性样本检测均为阴性,相对特异性100%。P>0.05。IgM和IgG同时为阳 性的样本本试剂检测和ELISA试剂完全一致。临床检测表明本试剂的性能和ELISA试剂相比无显著性差异,适合用于临床检测。
Claims (3)
1.一种风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,其特征在于塑料支撑板(8)一端连接上样垫(1),上样垫(1)的一端紧密压接含有标记风疹病毒特异性的抗原gpE1的胶体金垫(2),胶体金垫(2)一端紧密压接硝酸纤维素NC膜(3),硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线T1(5)、检测线T2(6)和质控C线,检测线T1(5)为包被在NC膜上的抗人IgM抗体,检测线T2(6)为包被在NC膜上的抗人IgG抗体,质控C线(7)为包被在NC膜上的抗风疹病毒gpE1抗体,NC的另一端连接吸样垫(4)形成试纸。
2.根据权利要求1所述的风疹IgM和IgG抗体联合检测试纸,其特征在于所述的抗原风疹病毒特异性抗原gpE1是利用基因工程重组表达的抗原。
3.根据权利要求1所述的风疹病毒IgM和IgG抗体联合检测试纸,其特征在于所述的上样垫(1)为玻璃纤维膜或无纺布,吸样垫(4)由吸水滤纸构成。
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