CN1985927B - 一种主要用于肝脏疾病的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种新的治疗肝脏疾病的药物组合物及其制备方法，由枸杞子50～1000份、当归50～1000份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份制成，也可以由枸杞多糖2.5～50份、当归多糖1～20份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份制成。可制成任一临床上或药学上可接受的剂型，优选为口服制剂和注射剂。本发明药物组合物有效成分明确，含量确切，共同发挥病毒性肝炎、药物性肝损伤、脂肪肝、酒精肝等功效，效果显著，主要用于制备治疗肝脏疾病的药物。制备工艺简便易行，制剂质量高且稳定，适用于工业化大生产。

Description

一种主要用于肝脏疾病的药物组合物 

1、技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种主要由枸杞子或其提取物、当归或其提取物和甘草酸或其药学上可接受的盐制成的药物组合物，及其制备方法。 

肝炎是一种常见病和多发病，据不完全统计，我国肝炎患者和病毒携带者占总人口的10％。其中以病毒性肝炎为主，病毒性肝炎又可分为：急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎和胆型肝炎。肝炎是一种传染性疾病，由于其流行性广、危害性大、发病率高，是目前国内外公认的疑难病症之一。中国是乙型肝炎的高流行区，有超过40％的人受过乙型肝炎病毒(HBV)感染，有1亿多人口为慢性HBsAg携带者。乙型肝炎治愈率仅为10％，绝大部分转为慢性肝炎，严重的转化为肝腹水、肝癌。其中，肝纤维化的形成和发展是影响预后和病情转危的关键病理变化之一，也是临床慢性肝病治疗中最为复杂的疑难问题。国内外近年来治疗肝炎的药物虽然有许多，但大多疗效并不理想，治疗后病情易反复，且价格又十分昂贵。至今，市场上仍缺少抗肝炎疗效确切，副作用又较小的药物。 

枸杞子为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。味甘，性平，归肝、肾经，具有滋补肝肾、益精明目等功效。枸杞子含有枸杞多糖、多种氨基酸、微量元素、维生素、牛磺酸、生物碱、挥发油等活性成分，一般认为其主要有效成分为枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides，LBP)。现代药理试验研究表明，枸杞子具有明显抑制乙醇所致血清谷丙转氨酶(ALT)升高的作用，对大量饮酒造成的肝损伤具有保护作用；枸杞水煎剂能有效降低四氯化碳引起的小鼠的ALT升高，对醋氨酚所致的肝损伤具有保护作用；枸杞粗多糖可明显抑制四氯化碳引起的小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的升高，并能改善和恢复各病理指标；枸杞多糖可使四氯化碳所致的ALT值升高明显降低，能改善酒精性肝病模型大鼠的线粒体形态、减轻肝细胞脂肪变性和炎症坏死程度。 

当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。味甘、辛，性温，归肝、心、脾经，具有补血活血、调经止痛、润肠通便等功效。当归的化学成分可分为挥发油和水溶性物质两部分。挥发油中含藁本内酯(ligustilide)和正丁烯基内酯(n-butylidene phthalide)等30余种化合物，而以藁本内酯含量为最多(约占挥发油的45％)，正丁烯内酯则为特异香气成分。水溶性成分中含阿魏酸、当归多糖、菸酸、叶酸、亚叶酸、生物素、丁二酸、尿嘧啶和腺嘌呤等。现代药理试验研究表明，当归对四氯化碳所致小鼠肝损伤具有保护作用，可减轻四氯化碳所致肝损伤大鼠的肝纤维化程度；当归提取物对多种肝损伤有一定的保护作用；当归多糖(Angelica sinensis polysaccharides，ASP)对小鼠四氯化碳肝损伤有良好的保护作用。 

甘草酸(glycyrrbizie acid，GA)为豆科植物甘草、光果甘草、胀果甘草的根及根茎的主要有效成分之一，具有抗炎、抗病毒、保肝解毒及增强免疫功能等作用。甘草酸有糖皮质激素样药理作用，能提高肝炎病人血清氢化可的松的浓度，降低慢性肝炎患者血清及外周单个核细胞中自介素-6和肿瘤坏死因子，减轻免疫病理反应，促进肝功能恢复，清除症状，缩小肝脾肿大，降酶快，退黄疸显著。甘草酸单铵和甘草酸二铵分别为甘草酸的单铵盐和二铵盐。甘草酸单铵盐A和甘草酸单铵盐S已分别载入国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第十二册和第十三册(国家药典委员会编)，其中规定：按干燥品计算，含甘草酸单铵盐(C₄₂H₆₁O₁₆NH₄)分别不得少于67.0％和73.0％。甘草酸单铵对各型急慢性肝炎、肝纤维化、中毒性肝炎、外伤性肝炎有一定的辅助治疗作用。甘草酸二铵为20β-羧基-11氧代正齐墩果烷-12-烯-3β基-2-β-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸二铵盐，已载入国家药品标准新药转正标准第43册(国家药典委员会编)，其中规定：按干燥品计算，含C₄₂H₆₈N₂O₁₆应为97.0％～103.0％。甘草酸二铵是中药甘草有效成分的第三代提取物，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用；药理实验证明，小鼠口服能减轻因四氯化碳、硫代乙酰胺和D-氨基半乳糖引起的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶升高，还能明显减轻D-氨基半乳酸对肝脏的形态损伤和改善免疫因子对肝脏形态的慢性损伤。 

目前，利用枸杞子或其提取物、当归或其提取物和甘草酸或其药学上可接受的盐的相互作用，配伍组方，制备用于治疗肝脏疾病方面的药物，尚未见报道。 

3、发明内容

为了满足临床需要，更好的治疗肝脏疾病，延缓或减少肝炎向肝腹水或肝癌的转化，提高肝炎患者的生命质量，本发明提供了一种主要用于治疗肝脏疾病的药物组合物及其制备方法，主要由枸杞子或其提取物、当归或其提取物和甘草酸或其药学上可接受的盐制成，对四氯化碳、醋氨酚所致的小鼠急性肝损伤、四氯化碳诱导的大鼠慢性肝损伤、酒精诱导的小鼠慢性肝损伤均具有显著的保护作用，并且可显著抑制鸭乙型肝炎病毒，产生了意想不到的效果。 

本发明药物组合物主要由枸杞子、当归和甘草酸或其药学上可接受的盐制成，其重量份数为枸杞子50～1000份、当归50～1000份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份，优选为枸杞子100～500份、当归100～500份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份，进一步优选为枸杞子200份、当归200份、甘草酸或其药学上可接受的盐4～15份。 

上述药物组合物中甘草酸药学上可接受的盐可以为金属盐或有机氮盐，金属盐可以是钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐，有机氮盐可以是单铵盐、二铵盐；优选为甘草酸单铵和甘草酸二铵。枸杞子、当归、甘草酸单铵的最优重量份数为：枸杞子200份、当归200份、甘草酸单铵4份，枸杞子、当归、甘草酸二铵的最优重量份数为：枸杞子200份、当归200份、甘草酸二铵15份。 

上述药物组合物中枸杞子、当归可以用适宜的溶剂和方法单独或混合提取加工得到提取物，总提取物 再与甘草酸或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料混合制成任一临床上或药学上可接受的剂型。“单独提取”是指，枸杞子、当归每一味药材分别通过不同的工艺单独提取得到提取物，再将各提取物混合得到总提取物。“混合提取”是指，枸杞子、当归两味药材一起提取得到总提取物。所得的总提取物中所含的主要有效成分为枸杞多糖和当归多糖，主要有效成分的总含量最好不低于50％。 

上述药物组合物的制备方法中，所用的溶剂是指药学上常用的溶剂，可以是水或乙醇等；所用的方法是指中药提取的一般方法，可以是煎煮法、回流提取法、浸渍法、渗漉法或连续提取法等。例如，枸杞子可以用煎煮法、回流提取法、水提醇沉法提取制备得到枸杞多糖，当归可以用煎煮法、浸渍法、水提醇沉法提取制备得到当归多糖，枸杞子和当归可以用煎煮法、回流提取法、水提醇沉法共提制备得到总多糖。 

原料药的具体制备方法如下： 

本发明提供了一种枸杞子的优选提取工艺(以多糖为主要有效成分)，如下：

取枸杞子药材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇后弃去。药渣加水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，搅拌下加入浓盐酸调pH值至1～2，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，用4倍体积的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小时后，滤取沉淀，得粗多糖。粗多糖加适量水溶解，滤过，滤液加入2％活性炭，加热至80℃并保温20分钟，趁热滤过，滤液浓缩至相对密度1.14～1.16(60℃)，加4倍体积的乙醇沉淀，冷藏24小时后抽滤，沉淀用无水乙醇，丙酮，***各洗涤一次，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的枸杞多糖得率为5～6％，多糖的含量不低于80％。 

枸杞子还可以通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺： 

工艺一：取枸杞子药材，置索氏提取器中，依次用石油醚、***和80％的乙醇回流提取4小时，残渣挥干溶剂后，再加水回流提取4小时，减压浓缩至一半体积，加入0.1％活性炭脱色2次，抽滤，滤液加乙醇使含醇量达80％，冷藏过夜，滤过，沉淀依次用无水乙醇、***、丙酮洗涤，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的枸杞多糖得率为6～8％，多糖的含量不低于50％。 

工艺二：取枸杞子药材，加冷水浸提三次，每次1小时，第一次加水10倍量，第二、三次各加水8倍量，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.12(60℃)，放冷，加乙醇使含乙醇量为70％，静置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.12～1.14(60℃)，加3倍量水，充分搅拌，冷藏48小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.14～1.16(60℃)，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的枸杞多糖得率为7～10％，多糖的含量不低于30％。 

本发明提供了一种当归的优选提取工艺(以当归多糖为主要有效成分)，如下：

取当归药材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇后弃去。药渣加水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，搅拌下加入浓盐酸调pH值至1～2，冷藏放静置12小时，离心20分钟， 弃去沉淀，取上清液，用4倍体积的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小时后，滤取沉淀，得粗多糖。粗多糖加适量水溶解，滤过，滤液加入2％活性炭，加热至80℃并保温20分钟，趁热滤过，滤液浓缩至相对密度1.14～1.16(60℃)，加4倍体积的乙醇沉淀，冷藏24小时后抽滤，沉淀用无水乙醇、丙酮、***各洗涤一次，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的当归多糖得率为1～3％，多糖的含量不低于80％。 

当归还可通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺： 

工艺一：取当归药材，加10倍量85℃水浸提三次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，加三氯甲烷-正丁醇提取残余蛋白质及油脂，60％乙醇中放置过夜，滤出沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、***洗涤，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的当归多糖得率为3～5％，多糖的含量不低于40％。 

工艺二：取当归药材，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.12(60℃)，放冷，加乙醇使含乙醇量为65％，静置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.12～1.14(60℃)，加3倍量水，充分搅拌，冷藏48小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.14～1.16(60℃)，加乙醇使含乙醇量为85％，静置过夜，滤过，沉淀用无水乙醇，丙酮，***各洗涤一次，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的当归多糖得率为4～6％，多糖的含量不低于30％。 

本发明提供了一种枸杞子和当归共提的优选工艺(以枸杞多糖和当归多糖为主要有效成分)，如下：

取枸杞子、当归药材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇后弃去。药渣加水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，搅拌下加入浓盐酸调pH值至1～2，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，用4倍体积的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小时后，滤取沉淀，得粗多糖。粗多糖加适量水溶解，滤过，滤液加入2％活性炭，加热至80℃并保温20分钟，趁热滤过，滤液浓缩至相对密度1.14～1.16(60℃)，加4倍体积的乙醇沉淀，冷藏24小时后抽滤，沉淀用无水乙醇，丙酮，***各洗涤一次，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的枸杞子当归共提物得率为3～4％，总多糖的含量不低于80％。 

枸杞子和当归还可通过下述工艺共提，但不仅限于下述工艺： 

工艺一：取枸杞子、当归药材，置索氏提取器中，依次用石油醚、***和80％的乙醇回流提取4小时，残渣挥干溶剂后，再加水回流提取4小时，减压浓缩至一半体积，加入0.1％活性炭脱色2次，抽滤，滤液加乙醇使含醇量达85％，冷藏过夜，滤过，沉淀依次用无水乙醇、***、丙酮洗涤，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的枸杞子当归共提物得率为4～6％，总多糖的含量不低于50％。 

工艺二：取枸杞子、当归药材，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.12(60℃)，放冷，加乙醇使含乙醇量为65％，静置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.12～1.14(60℃)，放冷，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，加 乙醇使含醇量达80％，冷藏过夜，滤过，沉淀用无水乙醇，丙酮，***各洗涤一次，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备枸杞子当归共提物得率为5～7％，总多糖的含量不低于30％。 

本发明药物组合物，还可以由枸杞多糖代替枸杞子、当归多糖代替当归投料制得。按照提取物相对于药材的得率计算，本发明药物组合物的各原料药的重量份为枸杞多糖2.5～50份、当归多糖1～20份、甘草酸或其药学上可接受的盐1～50份，优选为枸杞多糖5～25份、当归多糖2～10份、甘草酸或其药学上可接受的盐2～30份，进一步优选为枸杞多糖10份、当归多糖4份、甘草酸或其药学上可接受的盐4～15份。 

上述药物组合物中甘草酸药学上可接受的盐可以为金属盐或有机氮盐，金属盐可以是钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐，有机氮盐可以是单铵盐、二铵盐；优选为甘草酸单铵和甘草酸二铵。枸杞多糖、当归多糖、甘草酸单铵的最优重量份数为杞多糖10份、当归多糖4份、甘草酸单铵4份，枸杞多糖、当归多糖、甘草酸二铵的最优重量份数为杞多糖10份、当归多糖4份、甘草酸二铵15份。 

上述药物组合物中，枸杞多糖的主要有效成分的为多糖，多糖的含量不低于30％，最好不低于50％；当归多糖的主要有效成分为多糖，多糖的含量不低于30％，最好不低于50％。枸杞多糖、当归多糖均可参照前述方法制备。按上述配比得到的总提取物中的主要有效成分为枸杞多糖和当归多糖，主要有效成分的总含量最好不低于50％。 

本发明药物组合物，药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。上述组成，若以克为单位，可以制成10～1000次用量的制剂，如作为水针或粉针，可制成10～1000支，每次用量1～10支。如作为片剂或胶囊剂，可制成10～1000片，每次服用1～10片。上述组成是按重量份作为配比的，如大规模生产可以以千克或吨为单位，小规模生产也可以以克为单位。上述重量份数对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。 

本发明药物组合物，可以制成任一临床上或药学上可接受的剂型，以口服或胃肠外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。口服给药时，可制成口服常释剂型(如片、肠溶片、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、胶囊、软胶囊、肠溶胶囊等)、缓释控释剂型(如缓释片、控释片、缓释胶囊、控释胶囊等)、口服液体剂(如口服溶液、糖浆等)、滴丸、颗粒剂等；胃肠外给药时，可将其制成注射用的溶液、注射用水或油悬浮剂等。优选剂型为注射剂和口服制剂，如粉针、水针、输液、片、胶囊、颗粒等。 

上述药物组合物，可采用现有制药领域中的常规方法生产，必要时可以添加各种药学上可接受的辅料，包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。 

上述药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶剂。输液中可以加入氯化钠、葡萄糖等用于调节渗透压的等渗调节剂。粉针中可加入甘露醇等赋形剂。 

本发明药物组合物，主要用于制备抗肝脏疾病的药物。药理药效研究表明，枸杞子或其提取物、当归或其提取物、甘草酸或其药学上可接受的盐合并用药对四氯化碳(CCl₄)和醋氨酚所致的小鼠肝损伤、四氯化碳(CCl₄)诱导的大鼠慢性肝损伤、酒精诱导的小鼠慢性肝损伤均具有显著的保护作用，并可显著抑制鸭乙型肝炎病毒(DHBV)；提示其在抗病毒性肝炎、药物性肝损伤、脂肪肝、酒精肝方面将有显著疗效。 

本发明药物组合物，具有下列优点： 

(1)提供了一种新的复方抗肝炎药物，满足临床急需。 

(2)对本发明药物组合物中药物组份的用量进行了大量摸索研究，通过不同配比制成的注射液对四氯化碳(CCl₄)致肝损伤小鼠血清ALT和AST水平的影响的研究，筛选出具有显著疗效的重量配比。 

(3)药理药效研究表明，本发明药物组合物对醋氨酚所致的小鼠肝损伤有显著保护作用，能显著降低血清ALT、GST水平和肝组织LPO水平；对四氯化碳诱导的大鼠慢性肝损伤有显著保护作用，能显著降低血清ALT和AST水平，显著升高血清ALB水平，显著减轻肝纤维化程度和降低纤维化发生率；对酒精诱导的小鼠慢性肝损伤也有显著的保护作用，能显著降低血清ALT、AST、TG水平，减轻肝组织病变；可以显著抑制鸭乙型肝炎病毒(DHBV)，高剂量组的效果与阳性对照组的效果相当，并且停药后无反跳现象。产生了意想不到的效果。 

(4)本发明药物组合物，可以以枸杞子、当归、甘草酸或其药学上可接受的盐投料，也可以以枸杞多糖、当归多糖、甘草酸或其药学上可接受的盐为原料，可制成任一临床上或药学上可接受的剂型。 

(5)对本发明药物组合物制成的制剂或所用的提取物，进行了鉴别、含量测定、稳定性研究等，有效成分明确、含量高，制剂稳定性好，便于控制产品质量，保证临床用药安全。 

(6)提供了优选的制备工艺，简便易行，且制剂质量高，适应于工业化大生产。 

以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物组合物的有益效果，这些试验例包括本发明药物组合物的药效学试验和稳定性试验。本发明药物组合物具有下列有益效果，但不应将此理解为本发明药物组合物仅具有下列有益效果。 

以下试验例中用GDG1代替以枸杞多糖、当归多糖、甘草酸单铵为主要有效成分的药物组合物，用GDG2代替以枸杞多糖、当归多糖、甘草酸二铵为主要有效成分的药物组合物。以下试验例中所用的枸杞多糖为实施例1制备所得，所用的当归多糖为实施例2制备所得，所用的枸杞子当归共提物为实施例3制备所得。试验例2～6中所用的GDG1注射液、GDG2注射液为实施例4制备所得。 

试验例1  枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对四氯化碳致小鼠肝损伤的影响

受试动物  健康小鼠，240只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为24组，每组10只。 

供试品  氯化钠注射液(正常对照组)：250ml：2.25g，山东长富洁晶药业有限公司 

    枸杞注射液：自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g) 

    当归注射液：自制，2ml，含当归多糖43mg(相当于原药材2g) 

    甘草酸单铵注射液：自制，5ml∶40mg 

    甘草酸二铵注射液：自制，10ml∶150mg 

    (枸杞子+当归+甘草酸单铵)不同配比的注射液：自制，见表1-1 

    (枸杞子+当归+甘草酸二铵)不同配比的注射液：自制，见表1-1 

给药剂量  见表1-1。 

试验方法  小鼠随机分为24组，每组10只，分别为正常对照组、模型组和各给药组。正常对照组和模型组尾静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续7天；各给药组按表1-1尾静脉注射给药，每日1次，连续7天。最后一次尾静脉注射2h后，正常对照组腹腔注射花生油10ml/kg，其余各组均腹腔注射0.12％四氯化碳(CCl₄)花生油溶液10ml/kg。16h后断头处死动物，取血，离心，取血清，测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平。断头取血后，肝组织作常规病理组织学检查。 

试验结果  见表1-1。与正常对照组相比较，模型组的血清ALT和AST水平均极显著升高(p＜0.01)，病理组织学检查发现肝组织明显受损，并出现坏死，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对CCl₄诱导的小鼠肝损伤均具有保护作用，能降低血清ALT和AST水平，减轻肝组织病变和坏死；枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对CCl₄诱导的小鼠肝损伤的具有显著的保护作用(p＜0.05)；枸杞50～1000份、当归50～1000份、甘草酸单铵或甘草酸二铵1～50份制成的注射液对CCl₄诱导的小鼠肝损伤均具有极显著的保护作用(p＜0.01，p＜0.001)，枸杞子100～500份、当归100～500份、甘草酸单铵或甘草酸二铵2～30份制成的注射液的保护作用更好，尤其以枸杞子200份、当归200份、甘草酸单铵4份或甘草酸二铵15份制成的注射液的保护作用最好。 

与枸杞注射液组相比较，各个配比的(枸杞子+当归+甘草酸单铵)注射液和(枸杞子+当归+甘草酸二铵)注射液对CCl₄诱导的小鼠肝损伤的保护作用均具有显著的保护作用(p＜0.05，p＜0.01)。与当归注射液相比较，各个配比的(枸杞子+当归+甘草酸单铵)注射液和(枸杞子+当归+甘草酸二铵)注射液对CCl₄诱导的小鼠肝损伤的保护作用均具有显著的保护作用(p＜0.05，p＜0.01)。与甘草酸单铵注射液相比较，各个配比的(枸杞子+当归+甘草酸单铵)注射液对CCl₄诱导的小鼠肝损伤的保护作用均具有显著的保护作用(p＜0.05，p＜0.01)。与甘草酸二铵注射液相比较，各个配比的(枸杞子+当归+甘草酸二铵)注射液对CCl₄诱导的小鼠肝损伤的保护作用均具有显著的保护作用(p＜0.05，p＜0.01)。 

结论  试验结果表明，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对CCl₄诱导的小鼠肝损伤具有显著的保护作用，并且，相同给药剂量下，各个配比的(枸杞子+当归+甘草酸单铵)注射液和(枸杞子+当归+甘草酸二铵)注射液对CCl₄诱导的小鼠肝损伤的保护作用均优于枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。提示，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵并用 药具有协同作用，在抗肝炎、肝损伤方面有显著作用。 

表I-1  枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对CCl₄肝损伤小鼠的影响(平均值±标准偏差，n＝10) 

与正常对照组相比较：^##p＜0.01；与模型组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001； 

与枸杞注射液组相比较：^ap＜0.05，^bp＜0.01；与当归注射液组相比较：^cp＜0.05，^dp＜0.01； 

与甘草酸单铵注射液组相比较：^ep＜0.05，^fp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较：^gp＜0.05，^hp＜0.01。 

试验例2  枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对醋氨酚致小鼠肝损伤的作用

受试动物  健康小鼠，120只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为12组，每组10只。 

供试品  氯化钠注射液(正常对照组)：250ml∶2.25g，山东长富洁晶药业有限公司 

        枸杞注射液：自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g) 

        当归注射液：自制，2ml，含当归多糖43mg(相当于原药材2g) 

        甘草酸单铵注射液：自制，5ml∶40mg 

        甘草酸二铵注射液：自制，10ml∶150mg 

        GDG1注射液：自制，5ml∶193mg，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g)、当归多糖43mg 

            (相当于原药材2g)、甘草酸单铵40mg 

GDG2注射液：自制，5ml∶293mg，含枸杞子当归共提物143mg(相当于原药材枸杞子2g、 

            当归2g)、甘草酸二铵150mg 

给药剂量  见表1-2。 

试验方法小鼠120只，随机分为12组，每组10只，分别为正常对照组、模型组和各给药组。除正常对照组外，其余各组动物均腹腔注射醋氨酚(AP)100ml/kg，禁食过夜。正常对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续10天；各给药组按表1-2尾静脉注射给药，每日1次，连续10天。最后一次尾静脉注射6h后，正常对照组腹腔注射生理盐水，其余各组均腹腔注射醋氨酚300mg/kg。16h后处死，取血和肝脏，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)和肝组织的过氧化脂质(LPO)。 

试验结果见表1-2。与正常对照组相比较，模型组的血清ALT、GST水平和肝组织LPO水平显著升高(p＜0.01)，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对醋氨酚致小鼠肝损伤均具有保护作用，降低血清ALT、GST水平和肝组织LPO水平；枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对醋氨酚致小鼠肝损伤具有显著的保护作用(p＜0.05)，各剂量GDG1注射液和GDG2注射液对醋氨酚致小鼠肝损伤具有极显著的保护作用(p＜0.01，p＜0.001)。 

表1-2  枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对醋氨酚致小鼠肝损伤的作用(平均值±标准偏差，n＝10) 

与正常对照组相比较：^##p＜0.01；与模型组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001； 

与枸杞注射液组相比较：^ap＜0.05，^bp＜0.01；与当归注射液组相比较：^cp＜0.05，^dp＜0.01； 

与甘草酸单铵注射液组相比较：^ep＜0.05，^fp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较：^gp＜0.05，^hp＜0.01。 

结论  试验结果表明，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对醋氨酚致小鼠肝损伤具有显著的保护作用，并且保护作用与给药剂量相关，高剂量组效果最好；各剂量GDG1注射液和GDG2注射液对醋氨酚致小鼠肝损伤的保护作用均优于枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注 射液单独使用的效果。提示，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗急性肝损伤、脂肪肝方面有显著作用。 

试验例3  枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵联合并用药对大鼠慢性肝损伤的作用

受试动物  健康大鼠，120只，体重180～200g，雌雄兼用，随机分为12组，每组10只。 

供试品  氯化钠注射液(正常对照组)：250ml∶2.25g，山东长富洁晶药业有限公司 

枸杞注射液：自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g) 

        当归注射液：自制，2ml，含当归多糖43mg(相当于原药材2g) 

        甘草酸单铵注射液：自制，5ml∶40mg 

        甘草酸二铵注射液：自制，5ml∶150mg 

GDG1注射液：自制，5ml∶193mg，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g)、当归多糖43mg 

            (相当于原药材2g)、甘草酸单铵40mg 

GDG2注射液：自制，5ml∶293mg，含枸杞子当归共提物143mg(相当于原药材枸杞子2g、 

            当归2g)、甘草酸二铵150mg 

给药剂量  见表1-3。 

试验方法  健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每周2次，共8周，作为正常对照组。其余大鼠，皮下注射40％四氯化碳(CCl₄)花生油溶液3ml/kg，每周2次，共8周，诱导肝纤维化；随后随机分为11组，每组10只，分别为模型组和各给药组。此后，正常对照组和模型组每日腹腔注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续10周；各给药组按表1-3腹腔注射给药，每日1次，共10周。末次给药24h后，下腔静脉采血，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和白蛋白水平(ALB)；同时，取肝组织作常规病理组织学检查。 

试验结果  见表1-3。与正常对照组相比较，模型组的血清ALT、AST水平均极显著升高(p＜0.01)，血清ALB水平极显著下降(p＜0.05)，病理组织学检查发现试验大鼠出现比较典型的肝纤维化，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对肝纤维化大鼠均具有保护作用，能降低血清ALT和AST水平，升高血清ALB水平，减轻肝纤维化程度和纤维化发生率；枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对肝纤维化大鼠具有显著的保护作用(p＜0.05)；各剂量GDG1注射液和GDG2注射液对肝纤维化大鼠具有极显著的保护作用(p＜0.01，p＜0.001)。 

结论  试验结果表明，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对肝纤维化大鼠具有显著的保护作用，并且保护作用与给药剂量相关，高剂量组效果最好；各剂量GDG1注射液和GDG2注射液对肝纤维化大鼠的保护作用均优于枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。提示，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗肝纤维化、慢性肝损伤方面有显著作用。 

表1-3枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对肝纤维化大鼠的影响(平均值±标准偏差，n＝10) 

与正常对照组相比较：^#p＜0.05，^##p＜0.01；与模型组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001； 

与枸杞注射液组相比较：^ap＜0.05，^bp＜0.01；与当归注射液组相比较：^cp＜0.05，^dp＜0.01； 

与甘草酸单铵注射液组相比较：^ep＜0.05，^fp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较：^gp＜0.05，^hp＜0.01。 

试验例4  枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵联合并用药对小鼠慢性酒精性肝损伤的作用

受试动物  健康小鼠，120只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为12组，每组10只。 

供试品  氯化钠注射液(正常对照组)：250ml：2.25g，山东长富洁晶药业有限公司 

枸杞注射液：自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g) 

当归注射液：自制，2ml，含当归多糖43mg(相当于原药材2g) 

甘草酸单铵注射液：自制，5ml：40mg 

甘草酸二铵注射液：自制，10ml：150mg 

GDG1注射液：自制，5ml：193mg，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g)、当归多糖43mg(相当于原药材2g)、甘草酸单铵40mg 

GDG2注射液：自制，5ml：293mg，含枸杞子当归共提物143mg(相当于原药材枸杞子2g、当归2g)、甘草酸二铵150mg 

给药剂量  见表1-4。 

试验方法健康小鼠10只，灌胃给予蒸馏水12ml/kg，每天1次，共5周，作为正常对照组。其余小鼠，灌胃给予50％乙醇12ml/kg，每天1次，共5周；随后随机分为11组，分别为模型组和各给药组。此后，正常对照组和模型组每日腹腔注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续8周；各给药组按表1-4腹腔注射给药，每日1次，共8周。末次给药24h后，下腔静脉采血，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平；同时，取肝组织作常规病理组织学检查。 

试验结果  见表1-4。与正常对照组相比较，模型组的血清ALT、AST、TG水平均显著升高(p＜0.01)，病理组织学检查发现肝组织明显受损，肝细胞脂肪性病变、空泡变性、凋亡等，说明造模成功。与模型组相比较，各给药组对小鼠慢性酒精性肝损伤均具有保护作用，能降低血清ALT、AST、TG水平，减轻肝组织病变；枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对小鼠慢性酒精性肝损伤具有显著的保护作用(p＜0.05)；各剂量GDG1注射液和GDG2注射液对小鼠慢性酒精性肝损伤具有极显著的保护作用(p＜0.01，p＜0.001)。 

表1-4  枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对小鼠慢性酒精性肝损伤的影响(平均值±标准偏差，n＝10) 

与正常对照组相比较：^##p＜0.01；与模型组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001； 

与枸杞注射液组相比较：^ap＜0.05，^bp＜0.01；与当归注射液组相比较：^cp＜0.05，^dp＜0.01； 

与甘草酸单铵注射液组相比较：^ep＜0.05，^fp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较：^gp＜0.05，^hp＜0.01。 

结论  试验结果表明，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对小鼠慢性酒精性肝损伤具有显著的保护作用，并且保护作用与给药剂量相关，高剂量组效果最好；各剂量GDG1注射液和GDG2注射液对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用均优于枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。提示，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗酒精性肝损伤方面有显著作用。 

试验例5枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵联合并用药抗鸭乙型肝炎病毒 的作用

受试动物  1日龄北京鸭，雌雄兼用。 

供试品  注射用阿昔洛韦(阳性对照组)：0.25mg，湖北科益药业股份有限公司 

        枸杞注射液：自制，2ml，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g) 

        当归注射液：自制，2ml，含当归多糖43mg(相当于原药材2g) 

        甘草酸单铵注射液：自制，5ml∶40mg 

        甘草酸二铵注射液：自制，10ml∶150mg 

GDG1注射液：自制，5ml：193mg，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g)、当归多糖43mg(相当于原药材2g)、甘草酸单铵40mg 

GDG2注射液：自制，5ml：293mg，含枸杞子当归共提物143mg(相当于原药材枸杞子2g、当归2g)、甘草酸二铵150mg 

给药剂量  见表1-5。 

试验方法  1日龄北京鸭足静脉注射DHBV-DNA阳性血清，每只0.2ml，感染后7天取血，分离血清，-20℃保存待检。筛选出感染成功的阳性鸭72只，随机分为12组，每组6只，分别为模型组、阳性对照组和各给药组。感染后第13天开始，模型组每日静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续2周；阳性对照组静脉注射注射用阿昔洛韦30mg/kg，每日1次，连续2周；各给药组按表1-5静脉注射给药，每日1次，连续2周。分别于给药前、给药第7天、给药第14天和停药后第3天，自鸭腿胫静脉抽血，分离血清，-20℃保存待检。用DHBV-DNA Dot Blot法检测上述鸭血清，以杂交斑点吸光度(OD)值作为标本DHBV-DNA水平值。 

试验结果  见表1-5。与模型组相比较，各给药组对鸭DHBV病毒均有显著抑制作用(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001)。阳性对照注射用阿昔洛韦对鸭DHBV病毒有极显著的抑制作用(p＜0.001)，但是停药后DHBV水平又升高；枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液对鸭DHBV病毒均有显著的抑制作用(p＜0.05)，但是停药后甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液给药组的DHBV水平又明显升高；低剂量GDG1注射液和低剂量GDG2注射液对鸭DHBV病毒均有显著的抑制作用(p＜0.05)，中、高剂量GDG1注射液和GDG2注射液有极显著的抑制作用(p＜0.01)，并且停药后DHBV水平无明显升高。 

表1-5枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对鸭DHBV-DNA的抑制作用(平均值±标准偏差，n＝6) 

与模型组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001； 

与枸杞注射液组相比较：^ap＜0.05，^bp＜0.01；与当归注射液组相比较：^cp＜0.05，^dp＜0.01； 

与甘草酸单铵注射液组相比较：^ep＜0.05，^fp＜0.01；与甘草酸二铵注射液组相比较：^gp＜0.05，^hp＜0.01。 

结论  试验结果表明，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药对鸭DHBV病毒具有显著的抑制作用，并且抑制作用与给药剂量相关，高剂量组效果最好；各剂量GDG1注射液和GDG2注射液对鸭DHBV病毒的抑制作用均优于枸杞注射液、当归注射液、甘草酸单铵注射液、甘草酸二铵注射液单独使用的效果。给药期间，高剂量组GDG1注射液和GDG2注射液对鸭DHBV病毒的抑制作用略低于阳性对照组注射用阿昔洛韦的效果，但是，停药后GDG1注射液和GDG2注射液的效果明显优于注射用阿昔洛韦的效果。提示，枸杞子、当归、甘草酸单铵或甘草酸二铵合并用药具有协同作用，在抗病毒性肝炎方面有显著作用，并且停药后无反跳现象。 

试验例6  GDG1注射液、GDG2注射液稳定性试验

供试品  GDG1注射液：自制，5ml：193mg，含枸杞多糖110mg(相当于原药材2g)、当归多糖43mg(相当于原药材2g)、甘草酸单铵40mg 

GDG2注射液：自制，5ml：293mg，含枸杞子当归共提物143mg(相当于原药材枸杞子2g、当归2g)、甘草酸二铵150mg 

考察项目  性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量。 

长期试验  置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；12个月末增加无菌和热原检查。 

试验结果  温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月，各项指标均无明显变化；长期试验12个月末，热原、无菌检查均符合规定。 

结论  上述考察结果表明，GDG1注射液、GDG2注射液的各项指标均比较稳定，可以长期储存，适应于工业大生产。 

4、具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。 

以下实施例中用GDG1代替以枸杞多糖、当归多糖、甘草酸单铵为主要有效成分的药物组合物，用GDG2代替以枸杞多糖、当归多糖、甘草酸二铵为主要有效成分的药物组合物。实施例4～10中所用的枸杞多糖为实施例1制备所得，所用的当归多糖为实施例2制备所得，所用的枸杞子当归共提物为实施例3制备所得。 

实施例1  枸杞多糖的制备以及鉴别和含量测定

枸杞多糖的制备 

取枸杞子药材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇后弃去。药渣加水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，搅拌下加入浓盐酸调pH值至1～2，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，用4倍体积的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小时后，滤取沉淀，得粗多糖。粗多糖加适量水溶解，滤过，滤液加入2％活性炭，加热至80℃并保温20分钟，趁热滤过，滤液浓缩至相对密度1.14～1.16(60℃)，加4倍体积的乙醇沉淀，冷藏24小时后抽滤，沉淀用无水乙醇，丙酮，***各洗涤一次，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的枸杞多糖得率为5～6％，多糖的含量不低于70％。 

分别制备三批枸杞多糖，得率见表2-1。 

枸杞多糖的鉴别 

取本品50mg，加水5ml溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至约1ml，制成对照药材溶液。薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸(3∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。 

分别对上述三批枸杞多糖进行鉴别试验，结果均符合要求。 

枸杞多糖的含量测定 

标准葡萄糖溶液的配制精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。 

标准曲线绘制精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成2ml，再分别加入5％苯酚溶液1ml，摇匀，然后加浓H₂SO₄5.0ml，充分摇匀，放置5分钟，在60℃水浴中加热20分钟取出，迅速冷却至室温，同时作空白对照，在490nm波长处，测定其最大吸收度，绘制标准曲线，即得。 

测定法精密称取本品40mg，加水溶解并定容到50ml容量瓶中，摇匀，备用。精确量取0.1ml，加水至2ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸收度值。并计算含量。 

分别对上述三批枸杞多糖进行含量测定，结果见表2-1。 

通过本工艺制备的枸杞多糖得率为5～6％，多糖的含量不低于80％。 

表2-1枸杞多糖的含量测定结果和得率 

实施例2  当归多糖的制备以及鉴别和含量测定

当归多糖的制备 

取当归药材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇后弃去。药渣加水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，搅拌下加入浓盐酸调pH值至1～2，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，用4倍体积的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小时后，滤取沉淀，得粗多糖。粗多糖加适量水溶解，滤过，滤液加入2％活性炭，加热至80℃并保温20分钟，趁热滤过，滤液浓缩至相对密度1.14～1.16(60℃)，加4倍体积的乙醇沉淀，冷藏24小时后抽滤，沉淀用无水乙醇，丙酮，***各洗涤一次，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的当归多糖得率为1～3％，多糖的含量不低于70％。 

分别制备三批当归多糖，得率见表2-2。 

当归多糖的鉴别 

取本品50mg，加水5ml溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材3g，加石油醚(30～60℃)30ml，浸渍并振摇约30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，制成对照药材溶液。薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。 

分别对上述三批当归多糖进行鉴别试验，结果均符合要求。 

当归多糖的含量测定 

标准葡萄糖溶液的配制精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。 

标准曲线绘制精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成2ml，再分别加入5％苯酚溶液1ml，摇匀，然后加浓H₂SO₄5.0ml，充分摇匀，放置5分钟，在60℃水浴中加热20分钟取出，迅速冷却至室温，同时作空白对照，在490nm波长处，测定其最大吸收度，绘制标准曲线，即得。 

测定法精密称取本品40mg，加水溶解并定容到50ml容量瓶中，摇匀，备用。精确量取0.1ml，加水至2ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸收度值。并计算含量。 

分别对上述三批当归多糖进行含量测定，结果见表2-2。 

通过本工艺制备的当归多糖得率为1～3％，多糖的含量不低于80％。 

表2-2当归多糖的含量测定结果和得率 

实施例3  枸杞子当归共提物的制备以及含量测定

枸杞子当归共提物的制备 

取枸杞子、当归药材，加80％乙醇回流提取二次，每次2小时，滤过，滤液回收乙醇后弃去。药渣加水煎煮三次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.12(60℃)，放冷，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，搅拌下加入浓盐酸调pH值至1～2，冷藏放静置12小时，离心20分钟，弃去沉淀，取上清液，用4倍体积的乙醇沉淀，于冰箱冷藏24小时后，滤取沉淀，得粗多糖。粗多糖加适量水溶解，滤过，滤液加入2％活性炭，加热至80℃并保温20分钟，趁热滤过，滤液浓缩至相对密度1.14～1.16(60℃)，加4倍体积的乙醇沉淀，冷藏24小时后抽滤，沉淀用无水乙醇，丙酮，***各洗涤一次，60℃以下真空干燥，即得。通过本工艺制备的枸杞子当归共提物得率为3～4％，总多糖的含量不低于80％。 

分别制备三批枸杞子当归共提物，提取物得率见表2-3。 

枸杞子当归共提物的含量测定 

标准葡萄糖溶液的配制精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。 

标准曲线绘制精确量取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置干燥试管中，分别加水使成2ml，再分别加入5％苯酚溶液1ml，摇匀，然后加浓H₂SO₄5.0ml，充分摇匀，放置5分钟，在60℃水浴中加热20分钟取出，迅速冷却至室温，同时作空白对照，在490nm波长处，测定其最大吸收度，绘制标准曲线，即得。 

测定法精密称取本品40mg，加水溶解并定容到50ml容量瓶中，摇匀，备用。精确量取0.1ml，加水至2ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸收度值。并计算含量。 

分别对上述三批枸杞子当归共提物进行含量测定，结果见表2-3。 

通过本工艺制备的枸杞子当归共提物得率为3～4％，多糖的含量不低于80％。 

表2-3枸杞子当归共提物的含量测定结果和得率 

实施例4  GDG注射液的制备

1、处方： 

GDG1注射液处方： 

枸杞多糖        110g(相当于原药材2kg) 

当归多糖        43g(相当于原药材2kg) 

甘草酸单铵      40g 

盐酸半胱氨酸    30g 

甘氨酸          400g 

聚山梨酯-80     20g 

注射用水        加至5000ml 

共制备          1000支 

注：中药总提取物中主要有效成分总含量为83.36％。 

GDG2注射液处方： 

枸杞子当归共提物    143g(相当于原药材枸杞子2kg、当归2kg) 

甘草酸二铵          150g 

注射用水            加至5000ml 

共制备              1000支 

注：中药提取物中主要有效成分的含量为82.36％。 

2、具体步骤： 

(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗； 

(2)取配液量80％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入处方量的枸杞多糖、当归多糖和甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸，加热搅拌溶解完全，补加注射用水至全量； 

或者：将处方量的枸杞子当归共提物和甘草酸二铵加入配液量40％的注射用水，加热搅拌溶解完全，补加注射用水至全量； 

(3)加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟； 

(4)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值； 

(5)经0.45μm的微孔滤膜精滤； 

(6)检查溶液的澄明度，半成品化验； 

(7)将溶液灌装、熔封于玻璃安瓿中； 

(8)100℃流通蒸汽灭菌30分钟； 

(9)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏； 

(10)灯检，成品全检，包装入库。 

实施例5  注射用GDG的制备

1、处方： 

注射用GDG1处方： 

枸杞子当归共提物    143g(相当于原药材枸杞子2kg、当归2kg) 

甘草酸单铵          40g 

盐酸半胱氨酸        30g 

甘氨酸              400g 

聚山梨酯-80         20g 

甘露醇              200g 

无菌注射用水        加至3000ml 

共制备              1000支 

注：中药提取物中主要有效成分含量为82.36％。 

注射用GDG2处方： 

枸杞多糖            110g(相当于原药材2kg) 

当归多糖            43g(相当于原药材2kg) 

甘草酸二铵          150g 

甘露醇              200g 

无菌注射用水        加至3000ml 

共制备              1000支 

注：中药总提取物中主要有效成分总含量为83.36％。 

2、具体步骤： 

(1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理； 

(2)按照处方量称取原料和辅料； 

(3)取配液量80％的无菌注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入枸杞子当归共提物和甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸，加热搅拌溶解完全，再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量； 

或者：将处方量的枸杞多糖、当归多糖和甘草酸二铵加入配液量40％的注射用水，加热搅拌溶解完全，再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量； 

(4)加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟； 

(5)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值； 

(6)经0.22μm的微孔滤膜精滤； 

(7)检查溶液的澄明度，半成品化验； 

(8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞；将样品放入冻干机中冷冻干燥；-40℃预冻4小时，低温真空干燥-40℃～0℃18小时，然后升温至20℃真空干燥4小时； 

(9)冻干结束，压塞，轧盖； 

(10)成品全检，包装入库。 

实施例6  GDG氯化钠注射液的制备

1、处方： 

GDG1氯化钠注射液处方： 

枸杞多糖        110g(相当于原药材2kg) 

当归多糖        43g(相当于原药材2kg) 

甘草酸单铵      40g 

盐酸半胱氨酸    30g 

甘氨酸          400g 

聚山梨酯-80     20g 

氯化钠          900g 

注射用水        加至100000ml

共制备          1000瓶 

注：中药总提取物中主要有效成分总含量为83.36％。 

GDG2氯化钠注射液处方： 

枸杞多糖        110g(相当于原药材2kg) 

当归多糖        43g(相当于原药材2kg) 

甘草酸二铵      150g 

氯化钠          900g 

注射用水        加至100000ml

共制备          1000瓶 

注：中药总提取物中主要有效成分总含量为83.36％。 

2、具体步骤： 

(1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗； 

(2)取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入枸杞多糖、当归多糖和甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸，加热搅拌溶解完全；将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全； 

或者：将处方量的枸杞多糖、当归多糖和甘草酸二铵加入配液量40％的注射用水，加热搅拌溶解完全；将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全； 

(3)合并上述溶液，补加注射用水至全量； 

(4)加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟； 

(5)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值； 

(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤； 

(7)检查溶液的澄明度，半成品化验； 

(8)灌装于100ml的输液瓶中； 

(9)115℃热压灭菌30分钟； 

(10)灯检，成品全检，包装入库。 

实施例7  GDG葡萄糖注射液的制备

1、处方： 

GDG1葡萄糖注射液处方： 

枸杞子当归共提物    143g(相当于原药材枸杞子2kg、当归2kg) 

甘草酸单铵          40g 

盐酸半胱氨酸        30g 

甘氨酸              400g 

聚山梨酯-80         20g 

葡萄糖              5000g 

注射用水            加至100000ml 

共制备              1000瓶 

注：中药提取物中主要有效成分的含量为82.36％。 

GDG2葡萄糖注射液处方： 

枸杞子当归共提物    143g(相当于原药材枸杞子2kg、当归2kg) 

甘草酸二铵          150g 

葡萄糖              5000g 

注射用水            加至100000ml 

共制备              1000瓶 

注：中药提取物中主要有效成分的含量为82.36％。 

2、具体步骤： 

(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗； 

(2)取配液量20％的注射用水，加入聚山梨酯-80搅拌溶解，然后加入枸杞子当归共提物和甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸，加热搅拌溶解完全；将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全； 

或者：将处方量的枸杞子当归共提物和甘草酸二铵加入配液量40％的注射用水，加热搅拌溶解完全；将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全； 

(3)合并上述溶液，补加注射用水至全量； 

(4)加入配液量0.1％的针剂用活性炭，加热搅拌15分钟； 

(5)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值； 

(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤； 

(7)检查溶液的澄明度，半成品化验； 

(8)灌装于100ml的输液瓶中； 

(9)115℃热压灭菌30分钟； 

(10)灯检，成品全检，包装入库。 

实施例8  GDG片的制备

1、处方： 

GDG1片处方： 

枸杞多糖            110g(相当于原药材2kg) 

当归多糖            43g(相当于原药材2kg) 

甘草酸单铵          40g 

蛋氨酸              40g 

甘氨酸              40g 

淀粉                50.0g 

预胶化淀粉          40.0g 

微晶纤维素          50.0g 

2％HPMC50％乙醇溶液 适量 

硬脂酸镁            2.0g 

羧甲淀粉钠          20.0g 

共制备              1000片 

注：中药总提取物中主要有效成分总含量为83.36％。 

GDG2片处方： 

枸杞多糖            110g(相当于原药材2kg) 

当归多糖            43g(相当于原药材2kg) 

甘草酸二铵          150g 

淀粉                50.0g 

预胶化淀粉          50.0g 

微晶纤维素          50.0g 

2％HPMC50％乙醇溶液 适量 

硬脂酸镁            2.0g 

羧甲淀粉钠          20.0g 

共制备              1000片 

注：中药总提取物中主要有效成分总含量为83.36％。 

2、具体步骤： 

(1)将枸杞多糖、当归多糖和甘草酸单铵(或甘草酸二铵)粉碎过100目筛备用； 

(2)按照处方量称取原料和辅料； 

(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用； 

(4)将枸杞多糖、当归多糖、甘草酸单铵(或甘草酸二铵)、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，根据处方需要加入氨基酸，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材； 

(5)过20目筛制颗粒；颗粒在60℃的条件下烘干； 

(6)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀； 

(7)取样，半成品化验； 

(8)按照化验确定的片重压片； 

(9)成品全检，包装入库。 

实施例9  GDG胶囊的制备

1、处方： 

GDG1胶囊处方： 

枸杞子当归共提物    143g(相当于原药材枸杞子2kg、当归2kg) 

甘草酸单铵          40g 

蛋氨酸              40g 

甘氨酸              40g 

淀粉                50.0g 

预胶化淀粉          40.0g 

微晶纤维素          40.0g 

2％HPMC50％乙醇溶液 适量 

硬脂酸镁            1.0g 

共制备              1000粒 

注：中药提取物中主要有效成分的含量为82.26％。 

GDG2胶囊处方： 

枸杞子当归共提物    143g(相当于原药材枸杞子2kg、当归2kg) 

甘草酸二铵          150g 

淀粉                50.0g 

预胶化淀粉          50.0g 

微晶纤维素          40.0g 

2％HPMC50％乙醇溶液 适量 

硬脂酸镁            2.0g 

共制备              1000片 

注：中药提取物中主要有效成分的含量为82.26％。 

2、具体步骤： 

(1)将枸杞子当归共提物和甘草酸单铵(或甘草酸二铵)粉碎过100目筛备用； 

(2)按照处方量称取原料和辅料； 

(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用； 

(4)将枸杞子当归共提物、甘草酸单铵(或甘草酸二铵)、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素混合均匀，根据处方需要加入氨基酸，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材； 

(5)过20目筛制颗粒； 

(6)颗粒在60℃的条件下烘干； 

(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀； 

(8)取样，半成品化验； 

(9)按照化验确定的装量装入胶囊； 

(10)成品全检，包装入库。 

实施例10  GDG颗粒的制备

1、处方： 

GDG1颗粒处方： 

枸杞子当归共提物      143g(相当于原药材枸杞子2kg、当归2kg) 

甘草酸单铵            40g 

蛋氨酸                40g 

甘氨酸                40g 

糖粉                  1250.0g 

矫味剂                适量 

2％HPMC50％乙醇溶液   适量 

共制备                1000包 

注：中药提取物中主要有效成分的含量为82.26％。 

GDG2颗粒处方： 

枸杞子当归共提物      143g(相当于原药材枸杞子2kg、当归2kg) 

甘草酸二铵            150g 

糖粉                  1200.0g 

矫味剂                适量 

2％HPMC50％乙醇溶液   适量 

共制备                1000包 

注：中药提取物中主要有效成分的含量为82.26％。 

2、具体步骤： 

(1)将蔗糖粉碎过100目筛备用，枸杞子当归共提物和甘草酸单铵(或甘草酸二铵)粉碎过100目筛备用； 

(2)按照处方量称取原料和辅料； 

(3)将枸杞子当归共提物、甘草酸单铵(或甘草酸二铵)与糖粉、矫味剂以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材； 

(4)过20目筛制颗粒； 

(5)颗粒在60℃的条件下烘干； 

(6)干颗粒过18目筛整粒； 

(7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量； 

(8)包装；成品全检，包装入库。 

Claims (6)

1.一种用于治疗肝脏疾病的药物组合物，其特征在于，该组合物由下列重量份的原料药制成：枸杞子50～1000份、当归50～1000份、药学上可接受的甘草酸盐1～50份，所述药学上可接受的甘草酸盐选自甘草酸单胺或甘草酸二胺，所述的枸杞子、当归用适宜的溶剂和方法单独或混合提取加工得到提取物，总提取物再与甘草酸或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料混合加工制成任一临床上或药学上可接受的剂型，总提取物中所含的主要有效成分为枸杞多糖和当归多糖，主要有效成分的总含量不低于50％。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，各原料药的重量份为：枸杞子100～500份、当归100～500份、药学上可接受的甘草酸盐2～30份，所述药学上可接受的甘草酸盐选自甘草酸单胺或甘草酸二胺。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，各原料药的重量份为：枸杞子200份、当归200份、药学上可接受的甘草酸盐4～15份，所述药学上可接受的甘草酸盐选择甘草酸单胺或甘草酸二胺。

4.一种用于治疗肝脏疾病的药物组合物，其特征在于，该组合物由下列重量份的原料药制成：枸杞多糖2.5～50份、当归多糖1～20份、药学上可接受的甘草酸盐1～50份，药学上可接受的甘草酸盐选自甘草酸单胺或甘草酸二胺。

5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，各原料药的重量份为：枸杞多糖5～25份、当归多糖2～10份、药学上可接受的甘草酸盐2～30份，药学上可接受的甘草酸盐选自甘草酸单胺或甘草酸二胺。

6.如权利要求4或5所述的任一药物组合物，其特征在于，所述的枸杞多糖中多糖的含量不低于30％，当归多糖中多糖的含量不低于30％。