CN1974601A - 一种新型Fc融合蛋白及其生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种新型Fc融合蛋白，及稳定生产该新型Fc融合蛋白的方法，以及有关的表达载体与工程细胞构建、表达和纯化的工艺。构建的新型Fc融合蛋白基因在毕赤酵母中分泌表达非常稳定，表达和纯化得率高，具有稳定性好、表达水平高、生产工艺简便的优点。获得的新型Fc融合蛋白活性高、半衰期延长。本发明可高效、简便、低成本的获得半衰期延长的新型Fc融合蛋白。
Description
技术领域
本发明涉及以基因工程技术领域。更具体地，本发明提供了一种新型Fc融合蛋白及其表达方法，以及有关的工程细胞的构建、新型Fc融合蛋白的表达和纯化工艺。
背景
许多具有药用意义的生物分子，包括细胞因子在内，只在体内产生瞬间及局部的生物作用，其循环周期相对很短，例如，人血清中的干扰素的半衰期就只有2-8小时(Roche labs.Referon A.Schering Intron A.Physicians’desk Referece，47th edition，pp.2006-2008，2194-2201)。治疗疾病时，需要长期频繁给药，治疗周期长，不仅给患者带来痛苦，同时也会增加药物的毒副作用，而且治疗费用高，限制了其进一步应用和推广。为了克服这些缺点，就需要修饰该药物分子，使其在不减少药物效力的前提下增加它在血液中的循环周期时间。
目前，长效细胞因子的研究途径主要有三种：PEG修饰、脂质体包封和融合蛋白Fc技术。PEG修饰是用大分子水溶性聚合物聚乙二醇(PEG)修饰细胞因子，使其自身稳定和减少它们在体内的新陈代谢速率，其技术简单，但是产率低，价格昂贵，而且由于长链聚合物空间位阻效应，影响了蛋白与受体的结合而降低活性；脂质体包封是用脂质技术包封细胞因子，细胞因子是从脂质体内以缓释的形式进入血液，从而延长其在体内的滞留时间；此技术复杂，脂质体的包封率低，包封过程中易失活，脂质体到达体内靶区或受体时，无法出现高浓度的富集，影响治疗效果。Fc融合蛋白技术是利用基因工程和蛋白质工程技术，融合表达细胞因子-Fc片段(IgG4)。IgG4通过Fc片段与其受体结合，配体-受体复合物在体内维持20天之久不被分解。此技术虽然构建复杂，但纯化简单，产率高，半衰期长。Fc融合技术大大增加融合蛋白的半衰期，应用前景好，是长效药物的发展方向。
美国Immunex公司和American Home Products公司研制的药物Enbrel，就是用CHO细胞表达的重组人P75肿瘤坏死因子受体与人IgG1 Fc融合蛋白二具体。该药于1998年申请上市，在1999年被FDA批准用于减轻4岁以上中毒到重度的活动性类风湿性关节炎患者症状的治疗。于2002年被FDA批准用于减轻银屑病性关节炎患者的症状。
本发明提供了一种新型Fc融合蛋白及其生产方法，采用CHO哺乳动物表达***分泌表达该新型Fc融合蛋白，通过优化发酵与纯化工艺，整个过程稳定、快速、简便，获得活性高、半衰期延长的Fc融合蛋白。
发明内容
本发明的目的就是提供一种新型Fc融合蛋白。
本发明的另一目的就是提供该新型Fc融合蛋白的生产方法，包括用于该方法的表达载体及工程细胞。
在本发明的第一方面，就是提供了一种新型Fc融合蛋白的氨基酸序列，其特征在于，其序列为A-B-C或C-B-A，其中A为免疫球蛋白Fc区，来自人免疫球蛋白gamma-4(IgG4)(见SEQ ID NO：1)，具有在人体血液中稳定、高效分泌表达以及避免诸如补体反应及ADCC等优势，B为连接链(Linker)(见SEQ ID NO：2)，有助于保留蛋白的天然构型和生物活性，C为目的蛋白，可以但不仅限于细胞因子。
在本发明的第二方面，提供了几种表达载体，这些表达载体可以是酵母表达载体或哺乳动物表达载体，其特征在于，所述的表达载体含有上文所述的新型Fc融合蛋白的编码序列。
在另一优选例中，所述的表达载体是pPIC9k/新型Fc融合蛋白。
在本发明的第三方面，提供了几种工程细胞，可以是酵母、哺乳动物细胞和昆虫细胞等，其特征在于，它整合有权利要求3所述的表达载体。
在另一优选例中，所述的工程细胞是毕赤酵母。
在本发明的第四方面，提供了一种生产重组新型Fc融合蛋白的方法，该方法包括步骤：
c)在适合的表达条件下，培养如权利要求5所述的宿主细胞，从而表达出新型Fc融合蛋白；
d)分离纯化新型Fc融合蛋白。
附图说明
图1是重组质粒pPIC9K/Fc-IFNa-2b构建示意图。
具体实施方式
本发明人通过深入而广泛的研究，将人免疫球蛋白gamma-4(IgG4)Fc区通过连接链与目的蛋白相连，构建出新型Fc融合蛋白，并以干扰素a-2b为例，通过蛋白表达研究，获得了新型Fc融合蛋白Fc-IFNa-2b。在此基础上完成了本发明。
将免疫球蛋白Fc区，来自人免疫球蛋白gamma-4(IgG4)Fc区(见SEQ IDNO：1)，具有在人体血液中稳定、高效分泌表达以及避免诸如补体反应及ADCC等优势，通过连接链(Linker)(见SEQ ID NO：2)，有助于保留蛋白的天然构型和生物活性，与目的蛋白连接，获得新型Fc融合蛋白。
根据表达的宿主细胞，对新型Fc融合蛋白的编码序列进行优化，然后采用常规分子生物学方法或全序列合成的办法获得所需的序列，然后构建到相应的表达载体。转化相应的宿主细胞。通过抗性筛选获得高表达工程细胞。
在获得工程细胞后，便可在适合的条件下培养工程细胞。在本发明中，工程细胞表达的新型Fc融合蛋白表达条件没有特别限制。可以采用本领域常规的培养条件。
为大规模获得新型Fc融合蛋白，需要进行优化培养。本发明研究了中试优化工艺，优化后的表达水平可达到500mg/L。
在表达新型Fc融合蛋白后，对表达的新型Fc融合蛋白进行分离纯化。
通常，培养先以离心、过滤等方式获得培养上清。上清可通过盐析、超滤等方法进行初步纯化后再进行层析纯化，也可直接进行层析纯化。
适用于本发明的层析技术包括疏水层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。
经过2-3步纯化，可得到新型Fc融合蛋白纯品，纯化得率30％以上，纯度95％以上，纯品得率约150mg/L上清液。
纯化后新型Fc融合蛋白再经活性测定，其比活不低于未融合的目的蛋白活性。
在本发明的一个实例中，以干扰素a-2b为例，提供了新型Fc融合蛋白及其表达质粒的构建。
在本发明的另一个实例中，通过筛选获得了稳定高效表达新型Fc融合蛋白的菌株。
在本发明的另一个实例中，经过纯化工艺优化，可得到纯品150mg/L。
中试研究表明，产品制造工艺稳定，操作简单，周期短，成本低，每升发酵上清液可获得新型Fc融合蛋白纯品150mg。适合产业化生产。
本发明的优点在于：
(1)延长半衰期。将目的蛋白编码序列免疫球蛋白Fc区的N端或C端连接，并在真核宿主细胞中表达，使生成的目的蛋白半衰期增加；
2)生物活性不丧失。蛋白的天然构型及其立体灵活性与生物活性关系密切，连接体有利于保留各自的天然构型及其立体灵活性，从而保留其生物活性；
(2)通过控制关键的表达工艺条件，使表达水平进一步提高。
(3)纯化工艺简便，回收率高。由于是分泌蛋白，因此简化了纯化工序，使纯化回收率大大提高，使大规模生产新型Fc融合蛋白成为可能。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人的“分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)”中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1融合蛋白基因获得及表达质粒的构建
将人免疫球蛋白gamma-4(IgG4)Fc区通过连接链与目的蛋白干扰素a-2b相连，构建出新型Fc融合蛋白Fc-IFNa-2b，根据酵母密码子偏爱性，对新型Fc融合蛋白Fc-IFNa-2b的编码序列进行优化，然后采用全序列合成的办法获得所需的序列，PCR扩增IFN-a-2b，在其5’端引入了xhoI酶切位点及α-factor前导肽信号裂解位点前的AAAGGA序列，3’端引入EcoRI酶切位点。将pfu酶扩增得到的IFN-a-2b基因产物和质粒pPIC9(购自Invitrogen公司)分别用XhoI+EcoRI进行双酶切(MBI，2*TangoTM，37℃)，回收大片段。将两个片段用T4 DNA连接酶进行连接，连接产物转化进入大肠杆菌DH5α(购自Promega公司)，在含有氨苄青霉素的LB平板上挑选克隆，小量制备质粒，通过双酶切/PCR鉴定筛选出阳性克隆。
大量扩增确证的pPIC9/Fc-IFN-a-2b质粒，用BamHI+EcoRI双酶切(MBI，1*TangoTM，37℃)，回收小片段；质粒pPIC9K(购自Invitrogen公司)用相同的酶处理，回收大片段。将两个片段用T4 DNA连接酶进行连接，连接产物转化进入大肠杆菌DH5α，在含有氨苄青霉素的LB平板上挑选阳性克隆并进行质粒酶切鉴定，小量制备质粒，通过双酶切/PCR鉴定筛选出阳性克隆。
构建线路图如图1所示。
实施例2高稳定表达新型Fc融合蛋白的菌株的筛选
将构建好的重组质粒pPIC9K/Fc-IFN-a-2b大量制备，线性化，电穿孔转化宿主细胞P.pastoris GS115，涂布含有不同浓度抗生素Zeocin的YPDS平板筛选高抗的阳性克隆，并进行小摇表达实验，筛选得到高稳定表达的工程酵母菌株，分析获得的高稳定表达的工程细胞，工程酵母菌株含有编码SEQ ID NO：3氨基酸序列的核苷酸序列。
实施例3纯化工艺优化
对发酵液进行超滤浓缩，将发酵液的缓冲体系替换为磷酸盐溶液(PB)。使用Millipore超滤器，超滤膜截流分子量为10KD，超滤时留取浓缩液，加入PB，继续超滤；反复此程序，直至样品的电导水平与pH和PB缓冲液相同。
层析1：离子交换层析
层析介质：SP-Sepharose FF
方法：将超滤后的含Fc-IFN-a-2b发酵液过柱。上样后用磷酸盐缓冲液洗涤层析柱，至OD280＜0.05。用0-1M NaCl梯度将目的蛋白洗脱。
层析2：分子筛层析
层析介质：Sephacryl S200
缓冲液：磷酸盐缓冲液
离子交换得到的Fc-IFN-a-2b样品峰上样后，用PB溶液恒速过层析柱，收集含活性的蛋白峰。
样品经过此三步纯化，即超滤，阴离子交换层析、凝胶过滤层析以后，纯度提高至95％以上，可得纯品150mg/L。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110>上海新生源医药研究有限公司
<120>一种新型Fc融合蛋白及其生产方法
<160>4
<210>1
<211>250
<212>PRT
<213>智人
<223>人免疫球蛋白IgG4的Fc片段的氨基酸序列
<400>1
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys
20 25 30
Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
35 40 45
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
50 55 60
Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
65 70 75 80
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
85 90 95
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
100 105 110
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
115 120 125
Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
130 135 140
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu
145 150 155 160
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
165 170 175
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
180 185 190
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
195 200 205
Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
210 215 220
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
225 230 235 240
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
245 250
<210>2
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<223>连接肽
<400>2
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210>3
<211>431
<212>PRT
<213>人工序列
<223>Fc-IFN-a-2b融合蛋白氨基酸序列
<400>3
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys
20 25 30
Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
35 40 45
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
50 55 60
Val Val Vsl Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
65 70 75 80
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Als Thr Ths Pro Arg Glu
85 90 95
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Thr Tvr Arg Val Ser sel Leu Thr Val Leu
100 105 110
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Gls Glu Tvr Lvs Cys Lvs Val Ser Asn
115 120 125
Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
130 135 140
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu
145 150 155 160
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
165 170 175
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
180 185 190
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
195 200 205
Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
210 215 220
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
225 230 235 240
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Ser Gly Gly Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Asp Leu Pro Gln Thr
260 265 270
His Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg
275 280 285
Arg Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Les Asp Arg His Asp Phe Gly Phe
290 295 300
Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro
305 310 315 320
Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys
325 330 335
Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr
340 345 350
Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly
355 360 365
Val Gly Val Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala
370 375 380
Va1 Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu TTr Leu lys Glu Lys Lys
385 390 395 400
Tyt Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser
405 410 415
Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu
420 425 430 431
Claims (7)
1.一种新型Fc融合蛋白氨基酸序列，其特征在于，其氨基酸序列为A-B-C或C-B-A，其中，
A为免疫球蛋白，来自人免疫球蛋白gamma-4(IgG4)Fc片段；
B为连接链(Linker)，序列为GGSGGSGGGGSGGGGS；
C为目的表达蛋白，可以但不仅限于细胞因子。
2.一种表达载体，其特征在于，它含有编码权利要求1所述氨基酸序列的核苷酸序列。
3.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，它是一种酵母或真核表达载体。
4.一种工程细胞，其特征在于，它整合有权利要求3所述的表达载体。
5.如权利要求4所述的工程细胞，其特征在于，它是酵母或真核细胞。
6.一种新型Fc融合蛋白的生产方法，其特征在于，该方法包括步骤：
a)在适合的表达条件下，培养如权利要求5所述的工程细胞，从而表达出新型Fc融合蛋白；
b)分离纯化出表达的新型Fc融合蛋白。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(b)所示的表达条件为：
(1).发酵或培养液通过简单离心或超滤获得含有目的蛋白的上清液；
(2).通过简单的离子交换层析、分子筛层析等简单步骤，即可获得纯度在95％以上的纯品。
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|---|---|
| CN (1) | CN1974601A (zh) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101633933A (zh) * | 2008-12-03 | 2010-01-27 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 | 表达抗体或抗体类似物的重组克鲁维酵母菌及其构建方法与应用 |
| CN102369291A (zh) * | 2009-01-23 | 2012-03-07 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 效应子功能降低的稳定Fc多肽及使用方法 |
| CN101607984B (zh) * | 2008-06-18 | 2012-04-25 | 北京中天康泰生物科技有限公司 | 一种多拷贝多肽及其应用 |
| CN102838668A (zh) * | 2012-09-13 | 2012-12-26 | 兰州生物制品研究所有限责任公司 | 一种恶性疟原虫pfs25蛋白二聚体衍生物及其用途 |
| WO2014119956A1 (en) | 2013-01-31 | 2014-08-07 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Recombinant yeast transformant and process for preparing immunoglobulin fc fragment employing the same |
| TWI648401B (zh) * | 2013-07-31 | 2019-01-21 | 安美基公司 | 生長分化因子１５（ｇｄｆ－１５）構築體 |
| US10336798B2 (en) | 2012-01-26 | 2019-07-02 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 (GDF-15) polypeptides |
| US10752664B2 (en) | 2011-04-08 | 2020-08-25 | Amgen Inc. | Method of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (GDF-15) |
| CN112646044A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-04-13 | 山东晶辉生物技术有限公司 | TFF2-Fc融合蛋白及其高效表达生产方法 |
| US11161889B2 (en) | 2018-04-09 | 2021-11-02 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 fusion proteins |
-
2005
- 2005-11-28 CN CN 200510110813 patent/CN1974601A/zh active Pending
Cited By (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101607984B (zh) * | 2008-06-18 | 2012-04-25 | 北京中天康泰生物科技有限公司 | 一种多拷贝多肽及其应用 |
| CN101633933A (zh) * | 2008-12-03 | 2010-01-27 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 | 表达抗体或抗体类似物的重组克鲁维酵母菌及其构建方法与应用 |
| CN102369291A (zh) * | 2009-01-23 | 2012-03-07 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 效应子功能降低的稳定Fc多肽及使用方法 |
| US10752664B2 (en) | 2011-04-08 | 2020-08-25 | Amgen Inc. | Method of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (GDF-15) |
| US10336798B2 (en) | 2012-01-26 | 2019-07-02 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 (GDF-15) polypeptides |
| US11739131B2 (en) | 2012-01-26 | 2023-08-29 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 (GDF-15) polypeptides |
| CN102838668A (zh) * | 2012-09-13 | 2012-12-26 | 兰州生物制品研究所有限责任公司 | 一种恶性疟原虫pfs25蛋白二聚体衍生物及其用途 |
| KR20140098607A (ko) * | 2013-01-31 | 2014-08-08 | 한미약품 주식회사 | 재조합 효모 형질전환체 및 이를 이용하여 면역글로불린 단편을 생산하는 방법 |
| WO2014119956A1 (en) | 2013-01-31 | 2014-08-07 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Recombinant yeast transformant and process for preparing immunoglobulin fc fragment employing the same |
| TWI628279B (zh) * | 2013-01-31 | 2018-07-01 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | 重組酵母菌轉形株及使用該轉形株製備免疫球蛋白ｆｃ片段之方法 |
| RU2664862C2 (ru) * | 2013-01-31 | 2018-08-23 | Ханми Фарм. Ко., Лтд. | Рекомбинантный дрожжевой трансформант и способ получения с его использованием Fc-фрагмента иммуноглобулина |
| EP2951284A4 (en) * | 2013-01-31 | 2016-08-17 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | RECOMBINANT HEAT-RETURNFORMANT AND METHOD FOR PRODUCING IMMUNOGLOBULIN-FC-FRAGMENT THEREWITH |
| JP2016505277A (ja) * | 2013-01-31 | 2016-02-25 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 組換え酵母形質転換体及びこれを用いた免疫グロブリンＦｃ断片の生産方法 |
| AU2014213134B2 (en) * | 2013-01-31 | 2020-01-23 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Recombinant yeast transformant and process for preparing immunoglobulin Fc fragment employing the same |
| KR102073748B1 (ko) | 2013-01-31 | 2020-02-05 | 한미약품 주식회사 | 재조합 효모 형질전환체 및 이를 이용하여 면역글로불린 단편을 생산하는 방법 |
| CN105073977A (zh) * | 2013-01-31 | 2015-11-18 | 韩美药品株式会社 | 重组酵母转化体和用其制备免疫球蛋白Fc片段的方法 |
| CN105073977B (zh) * | 2013-01-31 | 2020-11-10 | 韩美药品株式会社 | 重组酵母转化体和用其制备免疫球蛋白Fc片段的方法 |
| TWI648401B (zh) * | 2013-07-31 | 2019-01-21 | 安美基公司 | 生長分化因子１５（ｇｄｆ－１５）構築體 |
| US10894814B2 (en) | 2013-07-31 | 2021-01-19 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 (GDF-15) constructs |
| US11161889B2 (en) | 2018-04-09 | 2021-11-02 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 fusion proteins |
| CN112646044A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-04-13 | 山东晶辉生物技术有限公司 | TFF2-Fc融合蛋白及其高效表达生产方法 |
| CN112646044B (zh) * | 2020-12-25 | 2022-12-27 | 山东睿鹰制药集团有限公司 | TFF2-Fc融合蛋白及其高效表达生产方法 |
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