CN1961895B

CN1961895B - 一种新的抗癌药物组合物及其制备方法

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Publication number: CN1961895B
Application number: CN200510045068A
Authority: CN
Inventors: 黄振华
Original assignee: Shandong Xuanzhu Pharma Co Ltd
Current assignee: Haian Su Fu Technology Transfer Center Co Ltd
Priority date: 2005-11-10
Filing date: 2005-11-10
Publication date: 2010-05-12
Anticipated expiration: 2025-11-10
Also published as: CN1961895A

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种新的抗癌药物组合物及其制备方法和用途，主要由灵芝50～2000份或其提取物0.2～60份、积雪草苷1～50份制成，也可以加入人参50～2000份或以多糖为主要有效成分的提取物人参多糖0.1～40份或以皂苷为主要有效成分的提取物人参总皂苷0.1～40份制成；该药物组合物可以以原药材或提取物投料制成各种药学上可接受的剂型，优选注射剂和口服制剂；具有抗肿瘤、抗感染、解毒、抗菌和增强机体免疫力等作用。

Description

一种新的抗癌药物组合物及其制备方法

【技术领域】

本发明属于医药技术领域，涉及一种由灵芝或其提取物和积雪草苷制成的药物组合物，或由灵芝或其提取物、积雪草苷和人参或其提取物制成的药物组合物，及其制备方法和用途。

【背景技术】

癌症是一类严重威胁人类生命和健康的疾病。据统计数据显示，我国每年新发现的癌症病人约100万左右，而全球每年夺去大约600万人生命，并把1000万人置于死亡边缘，随着人类生存环境的日益恶化，癌症的发生率呈逐年上升趋势。世界卫生组织预测21世纪癌症将成为人类的“第一杀手”。目前现代医学对癌症的治疗主要是手术治疗配合放、化疗，手术虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝癌细胞的再生与繁殖；放、化疗虽能杀灭癌细胞，但同时也使大量的正常组织细胞受到损害，诱发胃肠反应、骨髓抑制和肝肾、心脏功能损害，使病人的身体更加虚弱，难以进一步治疗。而中医治疗癌症有悠久的历史，形成了自己独特的理论体系和治疗法则。近年来经过广大医疗工作者的工作已证实中医药治疗癌症具有突出的作用，特别是对癌症手术后的康复以及对放化疗的增效减毒方面发挥了重要的作用。

灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Ley-ss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子实体。性甘，平，归心、肺、肝、肾经。具有补气安神，止咳平喘之功效，主要用于眩晕不眠，心悸气短，虚劳咳嗽。灵芝是家喻户晓的中药，俗称“仙草”。始载于《神农本草经》，被认为能“益心气”“安精魂”“补肝益气”“坚筋骨”，列为上品。《本草纲目》认为灵芝有“滋补强壮”“延年益寿”“利关节”“治耳聋”等功效。灵芝的化学成分复杂，目前已知含有多糖(肽)类、三萜类、核苷类、生物碱、氨基酸及微量元素等。多糖类化合物是灵芝所含主要化学成分之一，现已证明灵芝多糖类具有抗肿瘤作用、免疫调节作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用和抗衰老作用。临床试验也证实，灵芝多糖可作为肿瘤化学治疗和放射治疗的有效辅助治疗药，减轻因手术、放、化疗带来的毒副作用，是生物治疗非常理想的药材。灵芝多糖种类很多，有水溶性多糖、酸性多糖和碱性多糖。

积雪草苷是从积雪草中提取的一种白色针状结晶，异名亚细亚皂苷，熔点为235℃-238℃，不溶于水，溶于酒精和吡啶。有文献报道积雪草苷能够抑制肿瘤细胞增殖，多药耐药肿瘤细胞对积雪草苷显出与相应非耐药细胞相似的药物敏感性，末见明显的交叉耐药性，能诱导肿瘤细胞的凋亡。积雪草苷结构式如下所示。

积雪草苷

人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，性甘、微苦，平，归脾、肺、心经，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功效。人参是长白山区盛产的道地药材之一，以其根部入药，是著名的珍贵药材。主要含有人参多糖、人参总皂苷、人参多肽及挥发油、多种氨基酸、脂肪酸及维生素、微量元素等有效成分。主要成分为人参总皂苷，量约4％，目前分离得人参总皂苷有Ra_1～6、Rb_1～3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg_1～3、Rh_1～2、Ro等20余种。人参可全面增强机体的免疫功能，其活性成分主要是皂苷和多糖。人参总皂苷对多种动物均能增强网状内皮***对碳粒、细菌、鸡红细胞等的吞噬廓清能力，人参多糖在体外可增强小鼠NK细胞活性，人参多糖和皂苷还可使环磷酰胺所致白细胞数减少，巨噬细胞及体液免疫和细胞免疫功能抑制等恢复正常；人参总皂苷和人参多糖均有抗实验性肿瘤作用，人参总皂苷的抗肿瘤作用与其诱导癌细胞的再分化作用有关，人参多糖具有直接或间接的抗肿瘤活性，体外细胞毒性试验试验证明：人参多糖致敏血清对人和鼠的肿瘤细胞株均有不同程度的杀伤和抑制作用，对体内移植肿瘤也可使其发生明显的出血性坏死，认为其抗肿瘤机制可能是诱生了肿瘤坏死因数TNF-N。

【发明内容】

为了满足临床需要，本发明提供了一种新的主要用于抗肿瘤的药物组合物，并提供了其制备方法。

本发明药物组合物主要由灵芝和积雪草苷制成，其重量份数为：灵芝50～2000份、积雪草苷1～50份；优选份数为灵芝200～1000份、积雪草苷2～15份；最佳份数为灵芝400份、积雪草苷6份。

上述药物组合物的制备方法为：将灵芝用适宜的溶剂和方法经过提取加工得到其提取物，提取物再与积雪草苷和药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。此处，适宜的溶剂是指中药提取常用的溶剂，优选水或醇，尤其是水或乙醇。提取方法可以采用中药提取的一般方法，如浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

各原料药的具体提取方法如下：

灵芝的提取加工工艺如下：取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二次2小时加水10倍量，第三次1小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15，放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，收集滤饼，加适量水使溶解，滤过，加乙醇使含醇量为85％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，收集滤饼，真空干燥，即得。通过本工艺制备的灵芝提取物中多糖的含量不低手50％，得率为0.5～3％。

除采用上述方法外，还可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法：

方法一：取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二、三次2小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.03～1.08，放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇使含醇量为80％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的灵芝提取物中多糖的含量不低于30％，得率为5～8％。

方法二：取灵芝药材，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮二次，第一次3小时加水12倍量，第二次2小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06，放冷，加乙醇使含醇量为70％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，滤过，加乙醇使含醇量为85％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，在4℃放置48小时，滤过，滤液浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得。通过本工艺制备的灵芝提取物中灵芝多糖的含量不低于40％，得率为3～6％。

积雪草苷为结构明确的化学成分，尚未见其合成报道，目前主要通过提取方法制备，也可通过购买获得，或自制。本发明提供了一种制备工艺，如下：

积雪草苷可通过下述工艺制备：取积雪草药材，粉碎成细粉，加10倍量95％乙醇浸泡过夜，次日倾出乙醇液，再用75％乙醇回流提取二次，每次2小时，加醇10倍量，滤过，合并乙醇提取液，减压浓缩至1/3体积后，加入5％的活性炭回流40分钟后过滤去活性炭，经脱色后的乙醇溶液减压浓缩至稠膏状，加5倍量温水搅拌溶解后，放冷，加入1/2倍量体积的石油醚，振摇提取2次，水液用1/2倍量体积水饱和的正丁醇振摇提取3次，合并提取液，用水洗涤1次，减压浓缩至干得棕色浸膏。将其溶于适量乙醇后，缓缓加入8倍量的无水丙酮使析出沉淀，抽滤，丙酮洗涤，真空干燥，得积雪草苷。通过本工艺制备的积雪草苷得率不低于0.1％，积雪草苷的纯度为80％以上。

上述药物组合物中，也可以灵芝提取物代替灵芝药材投料，按照提取物相对于药材的得率计算，组合物原料药的重量份数应为：灵芝提取物0.2～60份、积雪草苷1～50份；优选份数为灵芝提取物1～30份、积雪草苷2～15份；最佳份数为灵芝提取物2～15份、积雪草苷6份。其中，灵芝提取物的主要有效成分为多糖类，最好不低于30％，积雪草苷的纯度最好不低于80％。灵芝提取物和积雪草苷均可参照上述方法自制。

为达到更好的抗肿瘤效果，本发明药物组合物的原料药中还可以加入人参制成，如以药材投料，其重量份数为：灵芝50～2000份、积雪草苷1～50份、人参50～2000份；优选份数为灵芝200～1000份、积雪草苷2～15份、人参200～1000份；最佳份数为灵芝400份、积雪草苷6份、人参400份。

上述药物组合物中灵芝、人参可以用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物，总提取物再与药学上可接受的辅料混合制成任一临床上或药学上可接受的剂型。“单独提取”是指，灵芝、人参每一味药材分别通过不同的工艺单独提取得到提取物，再将各提取物混合得到总提取物。“混合提取”是指，灵芝、人参两味药材一起提取得到总提取物。此处，适宜的溶剂是指中药提取常用的溶剂，优选水或醇，尤其是水或乙醇。提取方法可以采用中药提取的一般方法，如浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。

上述组合物中，灵芝的“单独提取”方法可参照前述方法制备。

上述组合物中，因为人参多糖和人参总皂苷均有抗肿瘤活性，所以人参的“单独提取”方法因其活性成分的不同可采用不同的提取方法，分别如下：

本发明组合物中以总皂苷为主要有效成分的人参提取物(简称：人参总皂苷)的制备工艺如下：取人参药材，粉碎成细粒，乙醇回流提取二次，每次3小时，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2V～3V柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通过本工艺制备得到的人参总皂苷提取物得率为1～2％，人参总皂苷含量不低于50％，人参总皂苷Re、人参总皂苷Rg₁含量和不低于30％。

除采用上述方法外，也可通过文献方法制备，也可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法：

方法一：取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取二次，每次4小时，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水稀释至相对密度为1.15～1.20，加1/2倍量水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物得率为4～5％，人参总皂苷含量不低于35％，人参总皂苷Re、人参总皂苷Rg₁含量和不低于20％。

方法二：取人参药材，粉碎成细粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次为8、8倍量，每次2小时，合并提取液，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量，搅匀，冷藏，滤过，滤液加1/2倍量水饱和正丁醇提取3次减压浓缩，合并正丁醇液，减压回收正丁醇至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物得率为3～5％，人参总皂苷含量为不低于40％，人参总皂苷Re、人参总皂苷Rg₁含量和不少于20％。

本发明组合物中以多糖为主要有效成分的人参提取物(简称：人参多糖)的制备工艺如下：取人参，切碎，用75％乙醇，回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。通过本工艺制备的人参多糖提取物中人参多糖的含量不低于50％，提取物得率为0.5～2％。

除采用上述方法外，也可通过文献方法(如CN200410000209)制备，还可通过以下方法获得，但不仅限于下述方法：

方法一：取人参，切碎，加水回流提取3次，每次2小时，第一次加水10倍量，二、三次为8、8倍量，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.16～1.24，过大孔树脂柱，收集流出液，减压浓缩至稠膏状，真空干燥，即得。通过本工艺制备的人参提取物，得率为4～6％，人参多糖的含量不低于40％。

方法二：取人参，切碎，用80％乙醇，回流提取3小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5小时，加水10倍量，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.20，过大孔树脂，流出液减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥即得。通过本工艺制备的人参提取物，得率为2～4％，人参多糖含量不低于45％。

上述药物组合物的原料药中，可用灵芝提取物、人参提取物分别代替灵芝和人参投料制得，按照提取物相对于药材的得率计算，可以有以下两种不同配比，其重量份数分别为：

配比1：灵芝提取物0.2～60份、积雪草苷1～50份、人参多糖0.1～40份；优选份数为灵芝提取物1～30份、积雪草苷2～15份、人参多糖0.2～20份；最佳份数为灵芝提取物2～15份、积雪草苷6份、人参多糖1～10份。

配比2：灵芝提取物0.～60份、积雪草苷1～50份、人参总皂苷0.1～40份；优选份数为灵芝提取物1～30份、积雪草苷2～15份、人参总皂苷0.2～20份；最佳份数为灵芝提取物2～15份、积雪草苷6份、人参总皂苷1～10份。

上述配比中，灵芝提取物中含灵芝多糖最好不低于30％；积雪草苷纯度最好不低于80％；人参多糖最好不低于50％；人参总皂苷最好不低于50％，其中人参皂苷Re和人参皂苷Rg₁的总含量最好不低于30％。灵芝提取物、积雪草苷、人参多糖和人参总皂苷均可参照前述方法自制。

上述药物组合物，可以制成任一临床上或药学上可接受的剂型，如注射剂、口服常释剂型、缓释控释剂型、颗粒剂、丸剂、口服液体剂、滴眼剂、滴鼻剂、滴耳剂、吸入剂、栓剂、软膏剂等。本发明药物组合物优选剂型为注射剂或口服制剂。

本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

本发明在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入吐温-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸纳、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。

上述药物组合物，具有抗肿瘤、抗感染、解毒、抗菌和增强机体免疫力等作用。

本发明的优点在于：

1.提供了一种新的抗癌中药复方，满足了临床急需。

2.对本发明药物组合物进行了药理学研究，结果表明本发明组合物对放疗具有明显的增效作用；对化疗具有减毒和增效的作用，抑瘤率为50％以上，增效率可达56％；可明显延长腹水癌U₁₄小鼠的生存天数，且其作用与单用灵芝、积雪草苷和人参相比效果极为显著(p＜0.01)，表明灵芝、积雪草苷以及灵芝、积雪草苷和人参两种组合物均有协同增效的作用，提高了病人的生存质量。

3.通过本发明组合物不同配比对小鼠S₁₈₀肿瘤生长抑制作用的药效学研究，筛选出了本发明组合物的优选配比。

4.对本发明组合物提取物主要有效成分的含量进行了限定，便于控制产品的质量。

5.对本发明组合物进行了急性毒性试验，结果表明本发明组合物毒性小，安全范围大。

6.对本发明药物组合物进行的稳定性试验结果表明各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全。

7.本发明药物组合物药疗效确切，合并用药后用药量减少，具有广阔的应用前景。

以下试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括本发明药物组合物的药效学试验。以下试验例中灵芝根据实施例1制得灵芝提取物，人参根据实施例2制得人参总皂苷和和人参多糖。灵芝提取物和积雪草苷组合物简称LJ组，灵芝提取物、积雪草苷和人参多糖组合物简称LJR ₁ 组，灵芝提取物、积雪草苷和人参总皂苷组合物简称LJR ₂ 组。

试验例1 药效学试验一灵芝、积雪草苷和人参合并用药对小鼠S ₁₈₀ 肿瘤生长抑制作用

供试品对照组：氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)

人参总皂苷组：人参总皂苷注射液，自制，5ml：相当于人参药材4g。

人参多糖组：人参多糖注射液，自制，5ml：相当于人参药材4g。

灵芝组：灵芝多糖注射液5ml：相当于灵芝药材4g。

积雪草苷组：积雪草苷注射液5ml:60mg。

组合物组：

LJR₁组：自制(制备方法参见实施例5水针剂处方2的制备)；

LJR₂组：自制(制备方法参见实施例5水针剂处方3的制备)；

受试动物健康小鼠230只，体重16～20g，雌雄各半，每组10只。

瘤株小鼠S₁₈₀

方法取接种传代小鼠S₁₈₀，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠S₁₈₀瘤匀浆液，再以生理盐水1∶3稀释，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小时称重，小鼠每日灌胃给药一次，给药容积相同(0.5ml/只)，共7天。停药次日处死小鼠，称体重并细心剥离皮下瘤块，于EM50电子天平称取瘤重，并计算抑瘤率。

试验结果与结论由表1结果可以看出，与生理盐水对照组相比LJR₁(灵芝提取物+积雪草苷+人参多糖)组、LJR₂(灵芝提取物+积雪草苷+人参总皂苷)组、人参总皂苷组、人参多糖组、灵芝组、积雪草苷组对小鼠S₁₈₀瘤体均有抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)，人参总皂苷组、人参多糖组虽然对小鼠S₁₈₀瘤体也有抑制作用，但效果不明显。与灵芝组、积雪草苷组相比，当组合物的原料重量配比为：灵芝(2g～10g)+积雪草苷为(20mg～150mg)+人参(2g～10g)时作用效果极为显著(p＜0.01)，其中灵芝4g+积雪草苷60mg+人参4g时疗效最好，提示三药有协同增效的作用。

表1 灵芝、积雪草苷和人参合并用药对小鼠S₁₈₀肿瘤生长抑制作用(x±s，n＝10)

注：与生理盐水对照组相比^*p＜0.05，^**p＜0.01；与人参总皂苷组相比^&p＜0.01；与人参多糖组相比^#p＜0.01；与灵芝组相比，^$p＜0.01；与积雪草苷组相比，^ap＜0.01。

试验例2 灵芝、积雪草苷合并用药对腹水癌U14小鼠生命延长率的影响

受试动物健康小鼠，60只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为6组，每组10只。

瘤株小鼠腹水癌U₁₄。

供试品对照组：氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)

灵芝组：灵芝多糖注射液5ml：相当于灵芝药材4g。

积雪草苷组：积雪草苷注射液5ml：60mg。

组合物组：LJ组：灵芝+积雪草苷＝4g+60mg，自制(处方和制备方法参见实施例5水针剂处方1)，分为低、中、高三个剂量组。

试验方法小鼠腹腔接种腹水癌U₁₄瘤株菌悬液(悬液浓度2×10⁷/ml，接种量0.5ml/只)。接种次日，小鼠随机分组，称量体重，按表2腹腔注射给药，每日1次，连续10天。此后观察小鼠的死亡时间，结果用平均存活天数和生命延长率表示【生命延长率＝(试验组平均生存天数-对照组平均生存天数)/对照组平均生存天数×100％】。

试验结果及结论试验结果见表2。与氯化钠注射液对照组相比较，LJ注射液中、高剂量组可极显著延长U₁₄小鼠的生存天数(p＜0.01，p＜0.001)，LJ注射液低剂量组、灵芝注射液组、积雪草苷注射液组可明显延长U₁₄小鼠的生存天数(p＜0.05)。LJ注射液低剂量组与灵芝注射液组、积雪草苷注射液组相比较，腹水癌U₁₄小鼠生命延长率显著增加(p＜0.05)；LJ注射液中、高剂量组与灵芝注射液组、积雪草苷注射液组相比较，腹水癌U₁₄小鼠生命延长率极显著增加(p＜0.01)。提示，灵芝和积雪草苷合并用药具有协同增效作用，在抑制肿瘤、延长肿瘤患者存活时间方面有显著作用。

表2 灵芝、积雪草苷合并用药对腹水癌U₁₄小鼠生命延长率的影响

(平均值±标准偏差，n＝10)

与生理盐水对照组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001；

与灵芝注射液组相比较：^ap＜0.05，^bp＜0.01；

与积雪草苷注射液组相比较：^cp＜0.05，^dp＜0.01。

试验例3 灵芝、积雪草苷合并用药对放疗的增效作用

受试动物健康小鼠，50只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为5组，每组10只。

瘤株小鼠S₁₈₀肉瘤。

供试品对照组：氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)；

试验方法每只小鼠左前肢腋下皮下接种S₁₈₀瘤株细胞悬液(悬液浓度2×10⁷/ml，接种量0.2ml/只)，24h时称量体重。接种次日，随机分组，除空白对照组外，其余各组均在接种后第3天、第6天用⁶⁰Co全身照射，照射剂量为0.05Gy/min。接种次日，小鼠按表3腹腔注射给药，每天1次，连续10天。每天称量体重，观察荷瘤鼠体重变化。末次给药后24h，称量体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称取瘤体重量，计算肿瘤抑制率和增效率【增效率＝(放疗组平均瘤重-放疗与ZTJ注射液联合治疗组平均瘤重)/放疗组平均瘤重×100％】。

试验结果及结论试验结果见表3。与空白对照组相比较，⁶⁰Co照射对小鼠S₁₈₀肉瘤有显著的抑制作用(p＜0.05)；⁶⁰Co照射与低、中、高剂量LJ注射液联合治疗对小鼠S₁₈₀肉瘤有极显著的抑制作用(p＜0.01，p＜0.001)。与⁶⁰Co照射组相比较，⁶⁰Co照射与低剂量LJ注射液联合治疗对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制作用显著增强(p＜0.05)，⁶⁰Co照射与中、高剂量LJ注射液联合治疗对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制作用极显著增强(p＜0.01)。试验结果表明，LJ注射液可以显著增强⁶⁰Co照射的放疗疗效，提示，灵芝、积雪草苷合并用药具有增强放疗疗效的作用。

表3 灵芝、积雪草苷合并用药对放疗的增效作用

(平均值±标准偏差，n＝10)

与空白对照组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001；

与⁶⁰Co照射组相比较：^#p＜0.05，^##p＜0.01。

试验例4 灵芝、积雪草苷和人参合并用药对化疗(Cy)的增效和减毒作用

瘤株小鼠S₁₈₀肉瘤。

供试品对照组：氯化钠注射液(山东长富洁晶药业有限公司)

注射用环磷酰胺(阳性对照)：市购，100mg，上海华联制药有限公司

组合物组：

LJR₁组：灵芝+积雪草苷+人参＝4g+60mg+4g，自制(处方和制备方法参见实施例5水针剂处方2)，分为低、中、高三个剂量组；

LJR₂组：灵芝+积雪草苷+人参＝4g+60mg+4g，自制(处方和制备方法参见实施例5水针剂处方3)，分为低、中、高三个剂量组。

试验方法每只小鼠左前肢腋下皮下接种S₁₈₀瘤株细胞悬液(悬液浓度2×10⁷/ml，接种量0.2ml/只)。接种次日，小鼠随机分组，称量体重，按表4腹腔注射给药，隔日1次，连续10天。每天称量体重，观察荷瘤鼠体重变化。末次给药后24h，称量体重，处死动物，剥离皮下瘤块，称取瘤体重量，计算肿瘤抑制率和增效率【增效率＝(化疗组平均瘤重-化疗与LJR₁或LJR₂注射液联合用药组平均瘤重)/化疗组平均瘤重×100％】。

试验结果及结论试验结果见表4。

(1)对化疗的增效作用：与空白对照组相比较，低剂量注射用环磷酰胺单独用药对小鼠S₁₈₀肉瘤有显著的抑制作用(p＜0.05)；注射用环磷酰胺与低、中、高剂量LJR₁、LJR₂注射液联合用药对小鼠S₁₈₀肉瘤有极显著的抑制作用(p＜0.01，p＜0.001)。与环磷酰胺组相比较，注射用环磷酰胺与低剂量LJR₁、LJR₂注射液联合用药对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制作用显著增强(p＜0.05)，注射用环磷酰胺与中、高剂量LJR₁、LJR₂注射液联合用药对小鼠S₁₈₀肉瘤的抑制作用极显著增强(p＜0.01)。试验结果表明，LJR₁、LJR₂注射液可以显著增强环磷酰胺的疗效，提示，灵芝、积雪草苷和人参合并用药具有增强化疗疗效的作用。

(2)对化疗的减毒作用：与空白对照组相比较，注射用环磷酰胺单独用药时，小鼠的外周白细胞数、胸腺指数、脾指数均极显著降低(p＜0.01)。与注射用环磷酰胺组相比较，注射用环磷酰胺与LJR₁、LJR₂注射液联合用药时，LJR₁、LJR₂注射液低剂量可以显著抑制小鼠外周白细胞数、胸腺指数、脾指数的降低(p＜0.05)，LJR₁、LJR₂注射液中、高剂量可以极显著抑制小鼠外周白细胞数、胸腺指数、脾指数的降低(p＜0.01)。试验结果表明，LJR₁、LJR₂注射液可以显著降低环磷酰胺的毒性，提示，灵芝、积雪草苷和人参合并用药具有降低化疗毒性的作用。

表4 灵芝、积雪草苷和人参合并用药对化疗的增效和减毒作用(平均值±标准偏差，n＝10)

注：与空白对照组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001；与注射用环磷酰胺组相比较：^#p＜0.05，^##p＜0.01。

试验例5 小鼠注射给药急性毒性试验

(1)试验方法

供试品：LJ注射液，规格2ml，来源于实施例5水针剂处方；LJR₁、LJR₂注射液，规格5ml，来源于实施例5水针剂处方2、处方3。

受试动物：小鼠，每组雌雄各60只，雄性体重25～28g，雌性体重21～24g。

给药途径：静脉注射、腹腔注射。

观察专案：死亡数、一般状态、体重、剖检、半数致死剂量。

(2)试验结果

按照急性毒性试验要求进行预试，腹腔注射及静脉注射两给药途径皆无法测出药物的半数致死量，也未见明显的毒性反应，故进行日最大给药量试验。给药剂量：尾静脉注射0.05ml/10g，腹腔注射0.05ml/10g，一日2次。

死亡数：未出现死亡。

一般状态：未见异常变化。

体重：于给药前1天，给药日，给药后2、4、6、8、10、12、14天测量；未见异常变化。

剖检：心、肝、肺、肾等组织未见异常变化。

(3)结论

本实验中未出现死亡，LJ、LJR₁、LJR₂注射液对雌雄小鼠静脉和腹腔注射给药的最大耐受量为0.1ml/10g，相当于60kg体重人日最大用量5ml的120倍。表明本品低毒，安全性高。

试验例6 组合物注射液稳定性试验

供试品：LJ注射液，规格2ml，来源于实施例5水针剂处方1的制备；LJR₁、LJR₂注射液，规格5ml，来源于实施例5水针剂处方2、3。

考察项目：性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量；并在加速试验6个月和长期试验期末增加无菌和热原检查。

1、影响因素试验

强光照射试验：取供试品，置照度为4500Lx的光照箱内放置10天。

高温试验：取供试品，分别置于40℃、60℃条件下放置10天。

低温试验：取供试品，在4℃冰箱中放置10天。

上述试验，分别于第5、10天取样测定。比较性状后测试各项指标，并将结果与0天比较。

结果：光照4500Lx条件下放置10天，除有关物质略有升高外，其它各项指标均无明显变化。高温60℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。高温40℃、低温4℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。

2、加速试验

方法：置温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在试验期间分别于第1个月、2个月、3个月、6个月末取样，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在6个月末增加无菌和热原检查。

结果：温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，除有关物质略有增加，标示含量略有下降外，其它各项指标均无明显变化，加速试验6个月末，热原、无菌检查均符合规定。

3、长期试验

方法：置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在18个月末增加无菌和热原检查。

结果：温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月，各项指标均无明显变化，长期试验18个月末，热原、无菌检查均符合规定。

结论：由上述考察结果得出结论，各项试验中，LJ、LJR₁、LJR₂注射液均比较稳定。

综上所述，本发明提供的灵芝与积雪草苷或灵芝、积雪草苷与人参组合物具有协同增效作用，明显优于灵芝、积雪草苷或人参单独给药的药效。对LJ、LJR₁、LJR₂注射液进行的稳定性试验结果表明，本发明提供的组合物制成的注射剂的各项指标均比较稳定，可以用于放大生产。

【具体实施方式】

以下通过实施例来进一步阐述本发明药物组合物的制备方法，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。

以下实施例4～12中的灵芝提取物、积雪草苷和人参总皂苷实施例1、2、3中灵芝提取物、人参总皂苷中的第二批。以下实施例4～12中的人参多糖来源于实施例1、2、3中人参多糖中的第一批。

实施例1 灵芝提取物的制备

取灵芝药材40kg，粉碎成粗粒，加水3倍量润湿过夜，次日煎煮三次，第一次3小时加水12倍量，第二次2小时加水10倍量，第三次1小时加水10倍量，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15，放冷，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，收集滤饼，加适量水使溶解，滤过，加乙醇使含醇量为85％，搅匀，在4℃放置24小时，滤过，收集滤饼，真空干燥，即得.

分别制备三批提取物，提取物得率和含量见下表5。

表5 三批灵芝提取物得率和含量测定结果

灵芝提取物的含量测定

对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

标准曲线的制备分别静密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，静密加入硫酸蒽酮溶液(静密称取蒽酮0.1g，加80％硫酸溶液100ml使溶解，摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入水浴中冷却15分钟，以相应的溶剂为空白，在625nm下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备取本品20mg，置50ml量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得。

测定法精密吸取供试品溶液2ml，置10ml具试管中，照标准曲线下测定方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液的葡萄糖的重量，计算，即得。

灵芝提取物的鉴别

取本品50mg，加乙醇25ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例2 积雪草苷的制备

取积雪草药材，粉碎成细粉，加10倍量95％乙醇浸泡过夜，次日倾出乙醇液，再用75％乙醇回流提取二次，每次2小时，加醇10倍量，滤过，合并乙醇提取液，减压浓缩至1/3体积后，加入5％的活性炭回流40分钟后过滤去活性炭，经脱色后的乙醇溶液减压浓缩至稠膏状，加5倍量温水搅拌溶解后，放冷，加入1/2倍量体积的石油醚，振摇提取2次，水液用1/2倍量体积水饱和的正丁醇振摇提取3次，合并提取液，用水洗涤1次，减压浓缩至干得棕色浸膏。将其溶于适量乙醇后，缓缓加入8倍量的无水丙酮使析出沉淀，抽滤，丙酮洗涤，真空干燥，得积雪草苷。

分别制备三批积雪草苷，其得率和纯度见下表6。

积雪草苷的鉴别

取本品30mg，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液.另取积雪草苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液.吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰.供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点.

积雪草苷的含量测定

色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(60∶40)为流动相；监测波长为205nm；柱温30℃；0.6ml/min流速为。理论板数按积雪草苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备取积雪草苷对照品适量，加50％甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品50mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，静密加入50％甲醇30ml，称定重量，超声处理(功率100kw，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

表6 三批积雪草苷的纯度和得率

实施例3 人参提取物的制备

人参总皂苷的制备

取人参药材40kg，粉碎成细粒，加8倍量乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，冷藏，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至稠膏，加水至适量(使每1ml相当于原药材1g)，搅匀，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的大孔树脂柱上，先用2V～3V柱体积的水进行洗脱，弃去水洗液，再用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至相对密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。

分别制得三批人参总皂苷提取物，提取物得率和含量见下表7。

表7 三批人参总皂苷提取物得率和含量测定结果

人参总皂苷的含量测定

对照品溶液制备：取人参皂苷R_g1对照品约10mg，经60℃真空干燥2小时，精密称定，置100ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1ml含R_g1对照品0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液制备：精密称取本品50mg，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法精密量取供试品溶液和对照品溶液各1ml，分别置10ml具塞试管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保温15分钟，冷却至室温，加冰醋酸5ml，摇匀；同时作空白对照。照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V B)，在560nm波长处测定吸收度，计算，即得。

人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁含量测定

色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(22∶78)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参总皂苷Re峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg₁对照品、Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。

供试品溶液的制备取本品0.2g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇30ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液15ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

测定法分别精密吸取对照品和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

人参总皂苷的鉴别

取本品0.5g，加水0.5ml搅拌润湿，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Re、Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。

人参多糖的制备

取人参10kg，切碎，用75％乙醇，回流提取4小时，滤过，药渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，搅拌30分钟，静置过夜，滤过，滤液过树脂柱，收集流出液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达95％，冷藏，滤过，取沉淀用丙酮洗涤，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。

分别制得三批人参多糖提取物，提取物得滤和含量见下表8。

人参多糖的含量测定

对照品溶液的制备精密称取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸约100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备精密称取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法精密量取对照品溶液、供试品溶液和水各1ml，分别精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加热30分钟，放冷，再分别精密加入0.125％咔唑无水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加热10分钟，放冷至室温，照分光光度法试验，在530nm波长处测定吸收度，计算，即得.

人参多糖的鉴别

(1)取本品约0.2g，加水5ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液5滴，加热即产生红色沉淀，冷却，滤过，取滤液加盐酸1滴使成酸性，水浴加热10分钟，放冷，调节pH值至中性，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，水浴加热即产生红色的氧化亚铜沉淀。

(2)取本品约0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml摇匀，缓缓加入硫酸3ml，两液面交界处显***环。

表8 人参多糖提取物得率和含量测定结果

实施例4 本发明组合物粉针剂的制备

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

聚山梨酯80 50g

甘露醇 300g

无菌注射用水加至3000ml

共制备 1000支

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 50g

甘露醇 300g

无菌注射用水加至3000ml

共制备 1000支

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 50g

甘露醇 300g

无菌注射用水加至3000ml

共制备 1000支

制备工艺：

1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入处方量的积雪草苷，加热搅拌溶解完全。中药提取物加配液量30％注射用水搅拌溶解。合并上述溶液，再加入甘露醇加热搅拌溶解完全，补加无菌注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.22um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥4小时。

9)冻干结束，压塞，轧盖。

10)成品全检，包装入库

实施例5 本发明组合物水针剂的制备

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

聚山梨酯80 100g

注射用水加至2000ml

共制备 1000支

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 100g

注射用水加至5000ml

共制备 1000支

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 100g

注射用水加至5000ml

共制备 1000支

制备工艺：

1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入处方量的积雪草苷，加热搅拌溶解完全。中药提取物加配液量30％注射用水搅拌溶解。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。

9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。

10)热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。

11)灯检，成品全检，包装入库。

实施例6 本发明组合物输液的制备

氯化钠输液：

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

聚山梨酯80 50g

氯化钠 900g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 50g

氯化钠 900g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 50g

氯化钠 900g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

制备工艺：

1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。

2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入处方量的积雪草苷，加热搅拌溶解完全.中药提取物加配液量30％注射用水搅拌溶解.将氯化钠用配液量20％的注射用水溶解完全.

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)灌装于100ml的输液瓶中。

9)115℃热压灭菌30分钟。

10)灯检，成品全检，包装入库。

葡萄糖输液：

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

聚山梨酯80 50g

葡萄糖 5000g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 50g

葡萄糖 5000g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 50g

葡萄糖 5000g

注射用水加至100000ml

共制备 1000瓶

制备工艺：

2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入处方量的积雪草苷，加热搅拌溶解完全。中药提取物加配液量30％注射用水搅拌溶解。将葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全。

3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。

4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。

5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。

6)经0.45um的微孔滤膜精滤。

7)检查溶液的澄明度，半成品化验。

8)灌装于100ml的输液瓶中。

9)115℃热压灭菌30分钟。

10)灯检，成品全检，包装入库。

实施例7 本发明组合物片剂的制备

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

淀粉 150.0g

微晶纤维素 50.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 4.0g

羧甲淀粉钠 8.0g

共制备 1000片

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

淀粉 150.0g

微晶纤维素 50.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 4.0g

羧甲淀粉钠 8.0g

共制备 1000片

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

淀粉 150.0g

微晶纤维素 50.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 4.0g

羧甲淀粉钠 8.0g

共制备 1000片

制备工艺：

1)将中药提取物和积雪草苷粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

4)将中药提取物、积雪草苷、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按化验结果确定片重压片。

10)成品全检，包装入库。

实施例8 本发明组合物胶囊剂的制备

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

淀粉 80.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.0g

共制备 1000粒

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

淀粉 80.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.0g

共制备 1000粒

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

淀粉 80.0g

微晶纤维素 40.0g

2％HPMC水溶液适量

硬脂酸镁 3.0g

共制备 1000粒

制备工艺：

1)将中药提取物和积雪草苷粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。

5)过20目筛制颗粒。

6)颗粒在60℃的条件下烘干。

7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。

8)取样，半成品化验。

9)按照化验确定的装量装入胶囊。

10)成品全检，包装入库。

实施例9 本发明组合物颗粒剂的制备

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

糖粉 2000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液适量

共制备 1000包

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

糖粉 2000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液适量

共制备 1000包

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

糖粉 2000.0g

2％HPMC50％乙醇溶液适量

共制备 1000包

制备工艺：

1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将中药提取物、积雪草苷粉碎过100目筛备用。

2)按照处方量称取原料和辅料。

3)将中药提取物、积雪草苷与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材.

4)过20目筛制颗粒。

5)颗粒在60℃的条件下烘干。

6)干颗粒过18目筛整粒。

7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。

8)包装，成品全检，包装入库。

实施例10 本发明组合物软胶囊剂的制备

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

大豆油 500.0g

大豆磷脂 50g

蜂蜡 50g

共制备 1000粒

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

大豆油 500.0g

大豆磷脂 50g

蜂蜡 50g

共制备 1000粒

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

大豆油 500.0g

大豆磷脂 50g

蜂蜡 50g

共制备 1000粒

制备工艺：

将中药提取物、积雪草苷分别粉碎过100目筛，将处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷，加入中药提取物、积雪草苷研匀，压制成软胶囊即可。

实施例11 本发明组合物口服液的制备

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

聚山梨酯80 50g

苯甲酸钠 15g

甜菊甙 10g

水加至10000ml

共制备 1000支

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 50g

苯甲酸钠 15g

甜菊甙 10g

水加至10000ml

共制备 1000支

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

聚山梨酯80 50g

苯甲酸钠 15g

甜菊甙 10g

水加至10000ml

共制备 1000支

制备工艺：

1)先将聚山梨酯80用配液量30％的水溶解完全，再将积雪草苷加入加热搅拌溶解完全。中药提取物加配液量50％水加热后溶解完全。

2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量10％的水溶解完全。

3)合并上述溶液，补加水至全量。

4)过0.8um的微孔滤膜过滤。

5)半成品化验。

6)灌装。成品全检，包装入库。

实施例12 本发明组合物滴丸剂的制备

处方：

处方1

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

聚乙二醇6000 600g

处方2

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参多糖 48.4g(相当于人参药材4kg)

聚乙二醇6000 600g

处方3

灵芝提取物 61.6g(相当于灵芝药材4kg)

积雪草苷 60g

人参总皂苷 49.2g(相当于人参药材4kg)

聚乙二醇6000 600g

制备工艺：

将聚乙二醇6000在水浴中加热熔融，待全部熔融后加入人参提取物、灵芝提取物、积雪草苷，搅拌溶解，60目筛过滤，保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸。

Claims

1.一种药物组合物，其特征在于，该组合物主要由下列重量份的原料药制成：灵芝50～2000份或其提取物0.2～60份、积雪草苷1～50份，其中灵芝提取物的多糖类不低于30％。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该组合物主要由下列重量份的原料药制成：灵芝200～1000份或其提取物1～30份、积雪草苷2～15份。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该组合物主要由下列重量份的原料药制成：灵芝400份或其提取物2～15份、积雪草苷6份。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该组合物原料药还有：人参50～2000份或人参多糖0.1～40份或人参总皂苷0.1～40份。

5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于该组合物是由下列重量份的原料药制成：

灵芝200～1000份或其提取物1～30份、积雪草苷2～15份、人参200～1000份或人参多糖0.2～20份；或者为：灵芝200～1000份或其提取物1～30份、积雪草苷2～15份、人参200～1000份或人参总皂苷0.2～20份。

6.如权利要求4、5所述的任一药物组合物，其特征在于所述的人参多糖含量不低于50％；所述的人参总皂苷含量不低于50％，其中人参皂苷Re和人参皂苷Rg₁的总含量不低于30％。

7.如权利要求1～5所述的任一药物组合物，其特征在于所述的灵芝提取物含灵芝多糖不低于30％；积雪草苷纯度不低于80％。

8.如权利要求1～5所述的任一药物组合物的制备方法，其特征在于，其中的药材用适宜的溶剂和方法单提或混提制备得到提取物，总提取物再与积雪草苷和药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。

9.如权利要求8所述的药物组合物的制备方法，所述的总提取物中所含的主要有效成分为灵芝多糖，或者为：灵芝多糖和人参多糖；或者为：灵芝多糖和人参总皂苷。

10.如权利要求1～5所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。