CN1955173B - 高纯度秦皮甲素及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种秦皮甲素的制备方法，所述方法包括提取、柱层析、浓缩和结晶步骤，其中柱层析步骤如下：a)离心或过滤提取步骤中所得提取液，将滤液或上清液直接加入大孔吸附树脂柱，其中秦皮药材和树脂的重量比为1∶2～1∶3；b)待提取液全部通过树脂柱后，用洗脱剂洗脱，待洗脱液澄清后，开始收集洗脱液，直到收集完10-15倍柱体积的洗脱液后停止收集。本发明制备秦皮甲素的方法操作简单，产率高，并且生成的秦皮甲素纯度非常高。

Description

高纯度秦皮甲素及其制备方法

技术领域

本发明涉及高纯度秦皮甲素及其制备方法。

背景技术

秦皮为常用中药，通常来源于木犀科植物苦枥白蜡树FraxinusrhynchophyllaHanee、白蜡树Fraxinus chinensis Roxb、尖叶白蜡树Fraxinusszaboana Lingelsh.或宿柱白蜡树Fraxinus stylosaLing的干燥枝皮或干皮。中医理论认为，秦皮具有清热燥湿、收涩、明目等功效，常用于治疗热痢、泄泻、赤白带下、目赤肿痛、目生翳膜等症。现代研究表明，秦皮具有抗病原微生物、抗炎、利尿、抗凝和抗过敏等作用。秦皮的主要成分为香豆素类，包括秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素等，其中秦皮甲素含量最高，约1％。

目前，秦皮甲素的制备采用95％的乙醇回流提取方法，该包括将提取液浓缩至无醇味后，用乙酸乙酯进行萃取，以除去秦皮乙素。所得溶液再进行浓缩析出秦皮甲素晶体。在该方法，要使用95％的乙醇和乙酸乙酯，成本高，并且萃取过程容易乳化，操作较麻烦。而且，浓缩步骤存在很大困难，因为溶液体积过小时，粘度太大，很难析出晶体。另外，而且得到的秦皮甲素晶体中含大量秦皮素，纯度不理想。

另外，在现有的提取秦皮甲素的方法，通常使用乙酸乙酯来进萃取，如果操作人员在工作工程中长期接触乙酸乙酯会对人体造成伤害，例如肝脏受损等，而且也会对环境造成一定的污染。

因此，本领域急需一种提取高纯度秦皮甲素的简便方法，它对环境和人体无害。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高纯度秦皮甲素的制备方法，该方法操作简便、成本低、产率高，可用于工业化生产，而且本发明的方法对于环境和人体无害。

本发明提供了一种秦皮甲素的制备方法，所述方法包括从秦皮中提取秦皮甲素、分离、浓缩和结晶步骤，其中分离步骤是如下的柱层析步骤：

a)离心或过滤提取步骤中所得提取液，将滤液或上清液直接加入大孔吸附树脂柱，其中秦皮原料和树脂的重量比为1∶2～1∶3；b)待提取液全部通过树脂柱后，用洗脱剂洗脱，待洗脱液澄清后，开始收集洗脱液，直到收集完10-15倍柱体积的洗脱液后停止收集。

本发明还提供了一种秦皮甲素组合物，它包含90-100重量％的秦皮甲素。

本发明制备秦皮甲素的方法操作简单，产率高，并且生成的秦皮甲素纯度非常高。另外，本发明使用水代替乙酸乙酯可以避免操作过程中对人体和环境的伤害。

具体实施方式

本发明提供了一种秦皮甲素的制备方法，所述方法包括从秦皮中提取秦皮甲素、分离、浓缩和结晶步骤，其中分离步骤是如下的柱层析步骤：

a)离心或过滤提取步骤中所得提取液，将滤液或上清液直接加入大孔吸附树脂柱，其中秦皮原料和树脂的重量体积比为1∶2～1∶3；b)待提取液全部通过树脂柱后，用洗脱剂洗脱，待洗脱液澄清后，开始收集洗脱液，直到收集完10-15倍柱体积的洗脱液后停止收集。

在本发明的方法中，所述提取步骤在本领域中是常规的。例如，所述提取步骤的具体过程可如下进行：

1)将中药秦皮粉碎成粗粉(例如10～40目的粉末)，然后将秦皮粗粉置于常压回流装置中；2)在所述回流装置中加入5-10倍量(以所述中药秦皮的重量计)的水；3)加热回流60-90分钟，得到提取液；4)步骤2和3重复进行2～4次，然后合并提取液。

在本发明中，所用原料为常规的中药秦皮，例如产地为陕西或甘肃的中药秦皮。

在本发明的柱层析步骤中，所述洗脱剂是常规的。在本发明的一个优选实例中，所述洗脱剂选自去离子水。

在本发明的柱层析步骤中，所述大孔吸附树脂是常规的，它通过市售得到。在本发明的一个优选实例中，所述大孔吸附树脂选自非极性或弱极性大孔吸附树脂中的一种或几种。在本发明的另一个实例中，所述大孔吸附树脂选自D101(天津农药厂生产，苯乙烯型)、HZ-802、DM130(山东鲁抗医药集团生产)、AB-8(天津南开大学化工厂生产，苯乙烯型)、Diaion HP-20(日本三菱公司生产，苯乙烯型)中一种或几种。

在本发明的方法中，所述浓缩步骤是常规的。例如所述浓缩步骤的具体过程可如下进行：

1)将柱层析步骤所得洗脱液浓缩到0.5～1倍柱体积；2)将步骤1中所得溶液置于4～15℃冷藏12～24小时，然后离心或过滤。

在本发明的方法中，所述结晶步骤是常规的。例如，所述结晶步骤的具体过程可如下进行：

1)将浓缩步骤所得的浓缩物液置于4～10℃冰箱中析晶，12～24小时后进行过滤或离心；2)将所得晶体加热溶于水中，所述水的用量使所得溶液的体积与析晶前相同，然后将所得溶液置于4～10℃的冰箱中进行重结晶；3)次日过滤得到晶体，即为秦皮甲素，纯度90％～100％。

本发明还提供了一种秦皮甲素组合物，它包括90-100重量％的秦皮甲素。

在本发明中，所述秦皮甲素组合物较好包含92-99重量％、更好94-99重量％、最好98-99重量％的秦皮甲素。

本发明利用大孔吸附树脂将秦皮素、秦皮乙素及大量色素吸附，而且柱层析前提取液不需浓缩，从而省去了萃取的步骤。在本发明的方法中，可以直接用水进行提取、分离等步骤。因此，相对于现有技术来说，本发明的方法操作简便、成本低。另外，由本发明所得的秦皮甲素色泽好，纯度高。

下面结合实施例细说明本发明，这些实施例只是用于举例说明的目的，并没有限制本发明的范围。

秦皮甲素的鉴定方法：根据药典2005版一部中药秦皮的含量测定方法鉴定秦皮甲素以及测定秦皮甲素的纯度，对照品购自中国药品生物制品检验所。

实施例1

在秦皮粗粉(产地：甘肃)(20目)1公斤中加水10升，并加热回流提取1小时。然后将残渣再加水提取两遍，每次加水8升，回流时间为1小时。合并提取液，并将所得提取液直接加入1公斤的2000ml的AB-8树脂柱(天津南开大学化工厂，苯乙烯型)中，以每小时3个柱体积上样。上样完毕后，用30升水洗脱，待洗脱液澄清后，开始收集洗脱液，直到收集20升洗脱液后停止收集。将所收集的20升洗脱液浓缩至1升，然后置于冰箱中过夜。次日，过滤冷藏的浓缩液，并用少量水洗涤滤饼。然后，用1升水加热溶解后滤饼后将所得溶液置于冰箱中重结晶。次日过滤得到沉淀物，即为秦皮甲素(8g，纯度97％)。

实施例2

将秦皮粗粉(产地：甘肃)(20目)1公斤中加水10升，并加热回流提取1.5小时。然后将残渣再加水提取三遍，每次加水8升，回流为1小时。合并提取液，并将所得提取液直接加入3000ml的Diaion HP-20树脂(日本三菱公司产，苯乙烯型)中，以每小时3个柱体积上样。上样完毕后，用60升水洗脱，待洗脱液澄清后，开始收集洗脱液，直到收集40升洗脱液后停止收集。将所收集的40升洗脱液浓缩至1升，将所述浓缩液置于冰箱中过夜。次日，过滤冷藏的浓缩液，并用少量水洗涤滤饼。然后，用1升水加热溶解后滤饼后将所得溶液置于冰箱中重结晶。次日过滤得到沉淀物，即为秦皮甲素(15g，纯度98.6％)

实施例3

传统工艺采用5倍量(以秦皮粗粉的重量计)的95％的乙醇回流提取秦皮粗粉12小时。将提取液浓缩至无醇味后，加一倍量(以浓缩液的体积计)温水溶解，并用等量(以温水的体积计)乙酸乙酯萃取3遍。将水层浓缩至小体积后，将浓缩液置于冰箱中析晶。析出晶体后过滤，晶体用水和甲醇反复重结晶，得秦皮甲素。

传统工艺与本发明的比较

	实施例1	实施例2	传统工艺
				提取时间(天)	2-3	2-3	≥4
产率(‰)	7	15	5
				纯度(％)	96	97	82

Claims (5)

1.一种秦皮甲素的制备方法，所述方法包括从秦皮中提取秦皮甲素、分离、浓缩和结晶步骤，其中部分步骤是如下的柱层析步骤：

a)离心或过滤提取步骤中所得秦皮甲素提取液，将滤液或上清液直接加入大孔吸附树脂柱，其中秦皮原料和树脂的重量比为1∶2～1∶3；b)待提取液全部通过树脂柱后，用洗脱剂洗脱，待洗脱液澄清后，开始收集洗脱液，直到收集完10-15倍柱体积的洗脱液后停止收集。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述洗脱剂是去离子水。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述大孔树脂选自非极性或弱极性大孔吸附树脂中的一种或几种。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于提取步骤的具体过程可如下进行：

1)将中药秦皮粉碎成粗粉，然后将秦皮粉置于常压回流装置中；2)在所述回流装置中加入5-10倍量的水，以所述中药秦皮的重量计；3)加热回流60-90分钟，得到提取液；4)步骤2和3重复进行2～4次，然后合并提取液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于浓缩步骤的具体过程可如下进行：

1)将柱层析步骤所得洗脱液浓缩到0.5～1倍柱体积2)将步骤1中所得溶液置于4～15℃冷藏12～24小时，然后离心或过滤。